FERMENTACION DE GLUCOSA OBJETIVO: Determinar algunos de los productos formados en la fermentacin de la glucosa por accin de la levadura y de lactobacillus. FUNDAMENTO TEORICO: La glucosa por accin de la levadura de panificacin (habitualmente saccharomyces cerevisiae) es capaz, en el proceso conocido como fermentacin alcohlica, de degradarse, en condiciones anaerobias, hasta etanol. La misma glucosa por accin de lactobacillus del yoghourt, se transforma en acido lctico en un proceso conocido como fermentacin lctica. En ambos casos hay una serie de reacciones comunes a ambos procesos, que van desde la glucosa hasta el acido pirvico. Por tal razn el acido pirvico se va a encontrar en muy baja concentracin como metabolto intermediario. Igual cosa sucede con el acetaldehdo, un metabolto intermediario en la fermentacin alcohlica. Identificando la presencia de piruvato, acetaldehdo y etanol se comprueba entonces, que se est realizando una fermentacin alcohlica. De igual manera, al identificar la presencia de cido pirvico y acido lctico se puede comprobar que se ha presentado la fermentacin lctica.
MATERIALES Y REACTIVOS
Dos esferas de cristal Bao maria Termometro Embudo de vidrio Papel filtro Pipeta graduado de 1 o 2 ml Levadura de panificacin Suspensin de Lactobacillus 10 ml de suspensin de levadura al 10 % en agua destilada 15 ml de glucosa al 10% 15 ml de galactosa al 10% 15 ml de fructosa al 10% 15 ml de sacarosa al 10% 15 ml de maltosa al 10% 15 ml de manosa al 10% 25 ml de cido tricloroacetico al 10% 10 g de sulfato de amonio solido 20 ml de nitroprusiato de sodio al 5 % (recin preparado) 20 ml de amoniaco concentrado 10 ml de solucin saturada de 2,4 dinitrofenilhidrazina 20 ml de hidrxido de sodio al 10 % 20 ml de piperidina al 3 % 10 ml de ter etilico 5 g de carbonato de sodio finamente pulverizado 25 ml de solucin de yodo-yoduro: 4 g de yoduro de potasio y 2 g de yodo en 50 ml de agua destilada 5 ml de acido piruvico al 2% 5 ml de acido lctico al 2 % 5 ml de acetaldehdo al 5% 5 ml de etanol al 10% 20 ml de solucin sulfocromica diluida 25 ml de solucin de cloruro ferrico al 0,3%
PROCEDIMIENTO En dos tubos de ensayo pipetee 10 ml del carbohidrato que le asigne el profesor. A un tubo aada 5 ml de la suspensin de levadura y en el otro 5 ml de la suspensin de lactobacillus. Tape los tubos con una esfera de cristal y colquelos en un bao mara entre 35-40 C durante una hora. Luego aada a cada tubo 2 ml de la solucin de cido tricloroacetico, mezcle bien y filtre. Con el filtrado haga las siguientes pruebas.
Determinacin de piruvato con nitroprusiato de sodio: En un tubo de ensayo caliente hasta ebullicin 2 ml del filtrado y agrguele 1 g de sulfato de amonio solido. Adicione dos gotas de solucin de nitroprusiato de sodio mezcle vigorosamente y deje deslizar por la paredes del tubo, amoniaco concentrado hasta que se formen dos capas. Si hay piruvato se forma un anillo verde o azul en la interfaz de los dos lquidos. La formacin de un anillo rosado transitorio en la interfaz indica la presencia de grupos tioles y con frecuencia se observa antes de la coloracin azul o verdosa caracterstica de la reaccin con piruvato.
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Determinacin de acetaldehdo A 2 ml de filtrado agregue 0,5 ml de solucin fresca de nitroprusiato de sodio y 2 ml de piperidina acuosa y agite. Si hay acetaldehdo presente se observa una coloracin azul. Determinacin de etanol mediante su oxidacin con cido sulfocromico a acetaldehdo. A 1 ml del filtrado se le aaden 0,5 ml de solucin sulfocromica diluida. Tras mezclar bien el conjunto se calienta en un bao de agua hirviente; aparece un intenso color verde, percibindose el olor caracterstico del acetaldehdo. Determinacin de Acido Lctico A 1 ml de filtrado agregue 1 ml de ter etlico y agite intensamente el conjunto; al separarse las fases se recoge la fase etrea (parte superior) y se le aade un volumen igual de solucin de cloruro frrico. El lactato frrico que se forma confiere al conjunto un intenso color verde amarillento.
Resultados
Registre los resultados obtenidos en la siguiente tabla:
Carbohidrato con que trabajo: ___________
PRUEBAS Tubo con levadura Tubo con lactobacillus Prueba de piruvato con nitroprusiato Determinacin de etanol Determinacin de acetaldehdo Determinacin de acido lctico
Analice coherentemente a la luz de la teora del metabolismo de carbohidratos los resultados obtenidos, si su resultado no coincide con lo esperado explique lo sucedido.
Realice toda la secuencia de reacciones para la fermentacin alcohlica y lctica del carbohidrato con el que trabajo.