BIOQUMICA

PRACTICA N 2
Enzimas






Alumnos:
Cintya Araya Barraza
Claudia Leyton Rojas
Javiera Rodrguez
Grupo N 1
Copiap, 24 de abril del 2014
INTRODUCCIN

Una enzima es una protena que acta como catalizador de una reaccin qumica acelerndola. Estas son
protagonistas esenciales en los procesos del metabolismo celular y unen su sustrato en el centro reactivo
o cataltico, que suele estar protegido del agua para evitar interacciones no deseadas.
Las enzimas son selectivas en relacin a los sustratos que modifican, suelen ser mucho ms grandes que
sus sustratos y, en muchas ocasiones, requieren de la participacin de otras molculas como las
coenzimas o los cofactores.
En este laboratorio se aprender el funcionamiento de la enzima catalasa (que acta descomponiendo
agua oxigenada en agua y oxgeno) en una serie de organismos manipulando papa, hgado, championes
y espinaca.
Asimismo se experimentar el efecto de la temperatura y del pH sobre el funcionamiento de las enzimas,
puesto que estos son los factores que tienen ms influencia en la actividad enzimtica.

Objetivos:
- Explicar que es una enzima y como estas actan en reacciones intracelulares.
- Identificar factores que afectan la actividad enzimtica.
- Distinguir entre inhibicin competitiva e inhibicin no competitiva.
- Observar el efecto de la temperatura sobre la actividad enzimtica.












Marco terico


Las enzimas son protenas presentes en la clula y son las encargadas de catalizar las reacciones
qumicas que ocurren en ella, son sintetizadas por organismos vivos. A lo que llamamos catalizar es
cuando una sustancia disminuye la energa de activacin de una reaccin qumica cuando esta energa
disminuye la velocidad se incrementa, la funcin de la enzima es acelerar el proceso pero no son
consumidas en el proceso y tampoco alteran su equilibrio qumico.
Por lo tanto las funciones de las enzimas son facilitar y acelerar el proceso de las reacciones qumicas
para que estas puedan realizar sus procesos bioqumicos dentro de los organismos
Liberar la energa acumulada en las sustancias para que el organismo las utilice cuando sea necesario.
Descomponen molculas complejas en otras ms sencillas para que as por medio de difusin puedan
entrar o salir de la clula

Estructura enzima:
Las enzimas estn determinadas por su estructura tridimensional, poseen un centro activo que es la zona
de la molcula a la que se une el sustrato y donde se realiza la catlisis. Otro centro regulador al que se
unirn las sustancias que regulan la actividad de la enzima.

Proceso de una reaccin enzimtica:
Primero se forma un complejo enzima-sustrato (ES) inmediatamente la enzima induce cambios en la
molcula de sustrato que hacen disminuir la energa de activacin y conducen a la formacin del
producto final (P) y queda liberada la enzima (E) intacta que puede volver a utilizarse.



Comportamiento de una enzima:
- Actan como un catalizador
- Disminuyen la energa de activacin
- No cambian el signo ni la cantidad variacin de energa libre
- No cambian el equilibrio de la reaccin
- Aceleran el proceso
- Quedan libres al finalizar la reaccin y pueden volver a reutilizarse

Grupo de clasificacin de las enzimas segn el tipo de reaccin que catalizan:

1- Oxido-Reductasas (Reacciones de xido-reduccin)
Enzimas relacionadas con las oxidaciones y reducciones biolgicas e intervienen en los procesos de
respiracin y fermentacin. Las oxidoreductasas son importantes en algunas cadenas metablicas como
lo es la ruptura de la glucosa para fabricar ATP. Las deshidrogenasas y oxidasas son las principales
subclases pertenecientes a esta categora.


2- Transferasas (transferencia de grupos funcionales)
Enzimas que catalizan el transporte de algn grupo de un sustrato a otro, es decir de una porcin de la
molcula dadora a otra aceptora.
3- Hidrolasas (Reacciones de hidrolisis)
Esta clase de enzimas catalizan el rompimiento de uniones mediante la introduccin de una molcula de
agua (hidrolisis). Desempean un papel fundamental en los procesos digestivos ya que hidrolizan
estricos, peptdicos y glucosdicos.
4- Liasas (adiccin a los dobles enlaces)
Enzimas que catalizan la ruptura de reacciones qumicas en compuestos orgnicos por mecanismos no
hidrolticos, el resultado de esta separacin es la formacin de nuevos dobles enlaces o nuevas
estructuras en forma de anillo.
5- Isomerasas (reacciones de isomerizacin)
Enzimas que transforman sustancias en otras ismeras, es decir que tienen las misma frmula molecular
pero con distinta funcin qumica.
6- Ligasas (formacin de enlaces, con aporte de ATP)
Enzimas que con la degradacin de ATP se libera energa para la unin de 2 molculas.


Propiedades de las enzimas:
- Solubles en agua
- Ph optimo entre 6 y 7.5
- Temperaturas ideales para funcionar es entre 37C y 41C esto hace que su actividad se
incremente
- Las bajas temperaturas la inactivan pero no sufren destruccin
- Las altas temperaturas (65C y ms) se destruyen (desnaturalizan)

Enzima catalasa
La catalasa es una enzima que pertenece a la clasificacin de las oxido-reductasas, cataliza la
descomposicin del perxido de hidrogeno (H2O2) convirtindola en oxgeno y agua mediante la
siguiente reaccin qumica:
2 H2O2 -----------> 2 H20 + O2
Esta enzima se encuentre en las clulas de todos los organismo vivos ya sea vegetales o animales y su
funcin es mantener las clulas funcionando correctamente descomponiendo compuestos dainos que se
producen frecuentemente

Perxido de hidrogeno
El perxido de hidrogeno (H2O2) es un compuesto de alta toxicidad producido en las clulas durante el
metabolismo celular

Para el efecto del pH en el funcionamiento de las enzimas debemos ocupar los siguientes
materiales:

HCl: compuesto formado por un tomo de hidrogeno unido a uno de cloro, es un cido fuerte y toxico.
NaOH: Hidrxido de Sodio, es slido de color blanco, inoloro



















Hiptesis

Experiencia 1: Funcionamiento de la enzima catalasa en varios organismos
Basndonos en lo expuesto en el marco terico esperamos que todos los homogenados reaccionen
ya que estamos en presencia de materiales orgnicos que presentan catalasa en su estructura, pero de
los 4 elementos que ocupamos ( papa, espinaca, hgado, championes ) deberamos tener una
reaccin ms rpida en el homogeneado de hgado ya que este por ser un rgano de animal se espera
mayor actividad catalasica, ya que producen ms toxinas para eliminar, con lo cual tendrn que actuar
ms catalasas y por otro lado al estar troceado , producir mayor superficie de contacto, ayudando a
tener una mayor reaccin.

Experiencia n 2: se comporta la catalasa de igual manera en todos los organismos
Se espera que catalasa no se comporte igual en todos los materiales orgnicos en que realizamos el
experimento, por lo que hemos sealamos anteriormente el hgado debera ser el que produzca mayor
cantidad de burbujas ya que es el alimento que presenta mayor cantidad de catalasa, ya que La
concentracin de catalasa en distintos tejidos y organismos es directamente proporcional a la rapidez e
intensidad del burbujeo con perxido de hidrgeno
Experiencia n3
Se espera que a temperatura ambiente se produzca una reaccin rpida y altas temperaturas no se
produzcan reaccin ya que la catalasa al ser una protena a altas temperatura se desnaturalizara,
adems a bajas temperaturas esperamos que la catalasa se mantenga en un estado inerte por lo tanto al
pasar a una temperatura adecuada reaccionaria.
Experiencia n 4
Esperamos que el pH constituya un factor de regulacin enzimtico, ya que las enzimas posen un pH
caracterstico donde su actividad es mxima, es decir que a un pH encima o debajo, la actividad
enzimtica disminuye. Por lo expuesto nuestra hiptesis es que con HCL siendo un acido fuerte
desnaturalizara la protena es asi que no habr reaccin y con NaOH provocara abundantes burbujas,
ya que La sal se separara del OH formando este agua y oxigeno.




Material y sustancias
Materiales Materiales orgnicos materiales qumicos
Tubos de ensayos hgado perxido de hidrogeno
Gradilla championes agua
placas de porcelana espinaca NaOH
gasa papa HCl
mortero


Procedimiento
Actividad n1: Funcionamiento de la enzima catalasa en varios organismos:
En este ejercicio se prepararan varios homogenados para obtener partculas pequeas y uniformes al
mezclarlas con el agua.
1. Para preparar los homogenados, corte en pedazos por separados las muestras de papa, hgado,
championes y espinaca.
2. Utilizando un mortero moler el material con un poco de agua hasta diluir parte de la muestra; no
moler demasiado para que no queden pequeos pedazos del material.
3. De ser necesario, filtrar el macerado con una gasa.
4. Colocar cada homogenado en su tubo de ensayo.
5. Usando un gotero, agregar cinco gotas de cada homogenado en las placas de porcelana y aadir 3
gotas de agua oxigenada.

Actividad n2: Se comporta la catalasa de igual manera en todos los organismos?
1. Rotular 5 tubos de ensayo con las letras desde la A a la E.
2. Ponga 3ml de cada homogenado en los tubos en el siguiente orden:
A) Hgado; B) Papa; C) Championes D) Espinaca; E) agua.
3. Marque el nivel hasta donde llega cada homogenado.
4. Agregar 3ml de perxido de hidrogeno en cada tubo de ensayo.
5. Observar la reaccin que sucede en cada tubo y marcar el cambio en el nivel del lquido.





Actividad n3: Efectos de la temperatura sobre el funcionamiento de las enzimas
1. Rotular 4 tubos de ensayo del 1 al 4 y calentar un bao de agua hasta los 37 C.
2. Aada 3ml de hgado homogenado a cada tubo
3. Mantener los tubos a las siguientes temperaturas:
Tubo n1 -- 37 C por 15 min
Tubo n2 -- temperatura ambiental
Tubo n3 -- Hielo por 30 min.
Tubo n4 -- Congelador a 4 C por 30 min.
4. Aadir 2ml de perxido de hidrogeno al tubo n1
5. Medir el tiempo transcurrido desde que se aadi el perxido hasta que se comienzan a producir
burbujas y anotarlo en la tabla.
6. Repetir con los dems tubos
7. Comparar los resultados en trmino de tiempo de reaccin vs. Temperatura

Actividad n4: El efecto del pH sobre el funcionamiento de las enzimas.
1. Rotular 3 tubos de ensayo A, B
2. Aadir 3 ml de homogenado de hgado a cada tubo
3. Aadir soluciones 3M de HCL y 3M de NaOH a los tubos como sigue y agitar suavemente hasta
mezclar.
Tubo A 3 ml de 3M HCL
Tubo B -- 3 ml de 3M NaOH








Observaciones y resultados
Actividad n1:
RESULTADOS HOMOGENADO CON PERXIDO DE HIDRGENO
HOMOGENADO REACCIN AL AADIR GOTAS DE PERXIDO.
Papas Reaccion de muy rpida y se observa un abundante
burbujeo.
Championes Reaccion de forma moderada, hubo poco burbujeo, sin
embargo las burbujas son de gran tamao.
Hgado Reaccion de ms lenta y hubo pocas burbujas
Espinaca Reaccion de forma moderada y hubo abundante burbujeo.

Actividad n2:
TUBO CANTIDAD DE BURBUJAS CANTIDAD DE HOMOGENADO
CONSUMIDO
A- Hgado Abundante. 1 CM
B- Papa Genera burbujas pero aumenta
lentamente.
1CM
C- Championes Abundante (llega al tope del tubo de
ensayo).
1CM
D- Espinaca Abundante (llega al tope del tubo de
ensayo y las burbujas se generan en
forma de espuma).
1CM
E- Agua No hay reaccin, no se generan burbujas. 1CM




Actividad n3:
RESULTADOS DEL EFECTO DE LA TEMPERATURA.
TUBO TEMPERATURA TIEMPO QUE TARD EN COMENZAR LA
REACCIN
OBSERVACIONES
1 37C Reaccin inmediata Se produjeron burbujas abundantes y
de gran tamao sobrepasando el tubo
de ensayo.
2 Ambiente Reaccin ms rpida y inmediata Se produjeron burbujas abundantes
pero ms pequeas en relacin al tubo
de ensayo anterior.
3 Hielo Reaccin inmediata Se produjo una gran cantidad de
burbujas pero en menor relacin que
los tubos anterior
4 Congelador (4C) Reaccin inmediata Se descongel y el homogeneizado
quedo abajo, hubo presencia de
abundantes burbujas.

Actividad n4:

RESULTADOS DEL EFECTO DEL PH SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA
TUBO TIEMPO QUE TOMA LA REACCIN EN COMPLETARSE
A con HCL No hubo reaccin
B con NaOH Hubo una reaccin inmediata con burbujas abundantes pero pequeas.




Conclusin
Actividad n 1 funcionamiento de la enzima catalasa
Podemos concluir que nuestra hiptesis no se confirma pues el hgado no fue el que tuvo mayor
cantidad burbujas y se demoro ms tiempo que los dems homogenado, podemos deducir que esto se
debi que el homogeneado del hgado lo tuvimos demasiados das en el congelador lo que produjo una
pequea prdida de las funciones de la catalasa, ya que para que mantenga su actividad mxima debe
ser mantenida en un ambiente 2-4C.Por otro lado la papa y espinaca reacciono rpidamente ya que son
producto que estaba al natural, y por ltimo los championes reaccionan lentamente, pues estos al
distribuirlos son resecados.
Actividad n 2 comportamiento de la catalasa
En conclusin nuestra hiptesis no se corrobora ya que el hgado no reacciona como se ha esperado
ya que parcialmente a perdido la funcin la catalasa ya que no fue almacenado en forma correcta a
pesar que tuvo abundantes burbujas se esperaba que superara a los dems materiales orgnicos siendo
en este caso igualado por el champin .

Actividad N 3 Efecto de la temperatura
Nuestra hiptesis estara correcta ya que el Efecto de la temperatura sobre la velocidad de reaccin son
generalmente sensibles a la temperatura, esta acta de dos maneras en una reaccin enzimtica, dentro
de los lmites permitidos 35 a 37 centgrados la reaccin enzimtica es favorable, por arriba de la
numeracin las enzimas se desnaturalizan parcial o totalmente , y por debajo de la temperatura
nombrada, ocurre un efecto contrario, es decir, son inhibidas en cuanto a su accin, dicho de otras
maneras, son mantenidas como catalizadores inertes.

Actividad N 4 efecto del pH
La Catalasa tiene una optima actividad de alrededor de un pH 3 - 9 y por encima de un pH 7.0. La
actividad decrece, sin embargo un PH 10, ms del 50 % de actividad sobra. Es asi que HCL al ser un
acido fuerte hace una variacin del Ph del hgado provocando que no all reaccin, por la prdida de
funcin de la catalasa (desnaturalizacin).
En el NaOH al ser una base fuerte hace se separe el OH de la sal formando agua y oxigeno por eso se
observa abundantes burbujas.


Cuestionario por cada actividad realizada
Actividad n1
1. Ocurri lo mismo en todas las muestras?
No, en algunas muestras fue ms rpido el tiempo de reaccin y en otras ms lento
2. Por qu se forman burbujas?
La catalasa es una enzima encargada de romper la molcula de perxido de hidrogeno formando agua y
oxigeno, es asi que liberando oxigeno se observan burbujas en los homogenados
3. Qu otros organismos podran usarse para esta prueba?
En todos los organismos vivos que contienen la enzima catalasa, esta se encuentra en clulas vegetales y
animales, tambin esta enzima protege contra microorganismos patgenos preferentemente anaerobios
pues estos al estar en contacto con el oxigeno mueren entonces la catalasa ejerce efecto bactericida con
ellos.
4 Por qu se prepararon los homogenados? Por qu no se aadi el perxido directamente a los
tejidos sin macerarlos?
Para comprobar la presencia de la enzima catalasa en las clulas animales y vegetales, para poder
realizar esto se tuvo que macerar los materiales y hacer homogenados y asi las enzimas quedan ms
expuestas cuando se les aada el perxido de hidrogeno

5.-Explique por qu la gran mayora de las especies de plantas y de animales producen la enzima
catalasa
Durante el metabolismo celular se forma una molcula toxica que es el perxido de hidrogeno (H2 O2)
que es un radical libre el cual presenta un electrn desapareado y es muy reactiva, est implicado en el
dao celular, la funcin de la catalasa es proteger las clulas del efecto del perxido de hidrogeno y
descompone esta molcula en agua y oxigeno
La reaccin de la catalasa sobre el H
2
O
2
, es la que detallamos a continuacin:
2H
2
O
2
2H
2
O + O
2



Actividad n2

1.- Fue igual la produccin de catalasa en todas las muestras?
No, en algunas muestras hubo mayor cantidad de produccin
2.- Qu indican los resultados sobre la fisiologa de estos organismos?
Nos indican que especies reactivas del oxgeno estn implicadas en el dao celular. Sin embargo en el
organismo existe un sistema de proteccin formado por compuestos y enzimas antioxidantes que
participan en las transformaciones de dichas especies. la catalasa es una de las enzimas involucradas en
la destruccin del perxido de hidrgeno generado durante el metabolismo celular. (1)

Actividad n3
1.- Compare sus resultados en trmino de tiempo de reaccin vs. Temperatura
Mientras se eleva la temperatura en una reaccin se incrementa la reaccin, cuando la temperatura es
baja se observa lo contrario
2-Cmo se relacionan la temperatura y la actividad enzimtica?
La velocidad de una actividad enzimtica aumentan con la temperatura, por cada 10C de aumento de
temperatura se duplica la velocidad de reaccin, un gran aumento de temperatura har que las enzimas
pierdan su funcin. Las bajas temperaturas producirn que la reaccin disminuya o se detenga. Entre 35
y 37 una reaccin enzimtica es favorable
3.- Qu le sucede a las enzimas cuando se exponen a temperaturas extremas (muy fras o muy
calientes)?
A temperaturas altas las enzimas se desnaturalizan, si se expone a bajas temperatura se inactiva y trabaja
a menor reaccin que lo normal incluso dejando de trabajar.

Actividad n 4

1.-Como se relaciona el pH y la actividad enzimtica
Compone un elemento de regulacin intracelular de la actividad enzimtica. Estas poseen un pH
caracterstico donde su actividad es mxima; si aumenta o disminuye ese pH la actividad de la enzima
disminuir
2.-Las enzimas del estmago funcionan ptimamente a un pH de 2. Cmo se afectara la digestin
si el pH aumenta a 4?
Ya que las enzimas son especficas y funcionan ptimamente a un pH determinado ocurrira que si lo
aumentamos el pH disminuir su actividad enzimtica.
3.--De qu otras maneras se podran explorar el funcionamiento de las enzimas estudiadas en el
laboratorio?
Las podras estudiar la enzima catalasa como es capaz de alargar la vida til en los alimentos que
contienen antioxidantes ejemplos sumos de ctricos, cervezas y vinos, ya que al degradar el agua
oxigenada en sustancias no reactivas se inhiben las reacciones oxidativas sin problemas secundarios.

4.-Puede mencionar otras enzimas que actan en nuestro cuerpo
Amilasa, pepsina, lipasa, proteasas, sacarasa.

5.- Qu efecto podra tener una fiebre alta prolongada sobre el funcionamiento de las enzimas?
Cuando tenemos fiebre nos aumenta la temperatura, al haber un aumento de esta, las protenas
(enzimas) se desnaturalizan y como su funcin es catalizar las reacciones qumicas de nuestro organismo
eso conlleva a que gastemos ms energa para que los procesos se lleven a cabo, es as como nos
sentiremos cansados y dbiles.

6.- conoce alguna condicin mdica que se deba al mal funcionamiento de una enzima?
La galactosemia: enfermedad que se inicia desde el recin nacido que consiste en la incapacidad de la
degradacin de la azcar simple, por aun mal funcionamiento de la enzima "galactosa-1-fosfato
tranzferaza












Bibliografa

(1) Dra. Ela M. Cspedes Miranda, Dra. Ingrid Hernndez Lantigua y Dra. Niurka Llpiz Janer (1996);
Enzimas que participan como barreras fisiolgicas para eliminar los radicales libres: II. Catalasa;
Revista Scielo; Cuba.

Donald Voet, Judith G. Voet (2006); Bioqumica 3era edicin; Medica Panamericana; Buenos Aires.

Thomas M.Devlin (2004); Bioqumica: libro de texto con aplicaciones clnicas; Editorial Reverte S.A;
Espaa.