EL LABORAROTIO DE BIOLOGIA MOLECULAR

INTRODUCCION
El desarrollo tecnolgico ha impactado directamente en el quehacer cientfico bsico, adecuando
innovaciones tcnicas a la prctica mdica actual, sobre todo al considerar que las enfermedades
humanas son el resultado de una interaccin entre la constitucin gentica de un individuo y el
ambiente. Partiendo de este concepto, la individualidad gentica de cada persona resulta
trascendental, no slo para las enfermedades bsicamente de origen gentico, como en los casos
de enfermedades mendelianas clsicas, sino que tambin en enfermedades multifactoriales con
alta frecuencia poblacional, como las enfermedades crnicas del adulto o trastornos peditricos y
las enfermedades de carcter infeccioso. Estas ltimas han cobrado una gran importancia debido a
su capacidad de contagio y propagacin a travs de grandes distancias y con el potencial de
producir una pandemia.
El Laboratorio de biologa molecular tiene por objetivo principal, el ofrecer una infraestructura
completa, altamente especializada, que permita conjuntar el conocimiento biomdico y el anlisis
molecular, con el fin de proporcionar un diagnstico basado en evidencia, confiable, rpido y a
gran escala, con el cual impactar en las diferentes especialidades de la medicina actual.
En el laboratorio de Biologa Molecular la combinacin de distintas tcnicas moleculares (PCR
punto final, PCR en tiempo Real, microarreglos, hibridacin de cido nuclicos, secuenciacin),
permite desarrollar y aplicar tcnicas cuyo flujo de trabajo es relativamente simple, con un alto
grado de confiabilidad, aplicables a gran escala y de forma automatizada. Al contar con este tipo
de pruebas es posible convertir a un laboratorio de diagnstico molecular en un laboratorio
referencial.
Esto exige de parte de un laboratorio de Diagnstico Molecular, la experiencia tanto a nivel de
investigacin bsica, como el conocimiento clnico y mdico, de tal forma que sea capaz de
instrumentar los controles de calidad que respalden la informacin derivada de estudios gentico-
moleculares, ya que a diferencia de otro tipo de estudios de laboratorio no slo tienen un valor
predictivo, diagnstico o de historial de la salud de una persona. En forma adicional, el
conocimiento del genotipo de una persona por medio de un anlisis molecular, automticamente
proporciona informacin de sus familiares, con o sin su consentimiento o participacin activa. Por
estas razones, la informacin gentica de un individuo deber ser mantenida bajo mxima
confidencialidad.
De esta forma, un laboratorio dedicado al diagnstico molecular, no slo debe de tener la
capacidad de emitir un resultado clnicamente til, si no tambin ser capaz de impactar
directamente en el conocimiento cientfico que permita avanzar hacia una mejor comprensin de
la enfermedad, permitiendo de esta forma una retroalimentacin que permita llevarlo a
convertirse en un centro referencial.

OBJETIVOS
Reconocer los diferentes equipos e instrumentos utilizados en el laboratorio de biologa
molecular, asi como su uso y cuidado
Conocer y aplicar las medidas de bioseguridad dentro del laboratorio de biologa molecular

ACTIVIDADES
Se indico el : nombre, uso y tipos de los diferentes equipos y materiales del laboratorio de
biologa molecular.


NOMBRE : TERMOCICLADOR
Un termociclador, tambin conocido como mquina de PCR o reciclador trmico de PCR es un
aparato usado en Biologa Molecular que permite realizar los ciclos de temperaturas necesarios
para una reaccin en cadena de la polimerasa de amplificacin de ADN o para reacciones de
secuencia con el mtodo de Sanger. El modelo ms comn consiste en un bloque de resistencia
elctrica que distribuye a travs de una placa una temperatura homognea durante tiempos que
pueden ser programables, normalmente con rangos de temperatura de 4 C a 96 C. Dado que las
reacciones incubadas en el aparato son en soluciones acuosas, suelen incluir una placa de tapa
calentada constantemente a 103 C para evitar la condensacin de agua en las tapas de los tubos
donde ocurre la reaccin, y as evitar que los solutos se concentren, lo que modificara las
condiciones ptimas para la enzima polimerizante y la termodinmica del apareamiento de los
iniciadores. Tambin existen otras tecnologas menos populares utilizando distribucin de aire
caliente en tubos suspendidos, logrando el mismo objetivo de transferir calor eficientemente a la
reaccin para que cambien los ciclos de temperaturas

Desde hace algunos aos varias compaas que fabrican y comercializan estos aparatos han
cambiado la resistencia elctrica por la tecnologa Peltier aprovechando las propiedades de los
semiconductores. Este material ofrece mejor uniformidad en la temperatura y rampas de
incremento y decremento de la temperatura mucho ms pronunciadas, obteniendo mejores
resultados en los procesos del PCR. En la bsqueda de mejorar la precisin, exactitud y
homogeneidad de la temperatura tambin se han introducido metales como el oro, la plata y otras
aleaciones en los bloques de los pozos, logrando estabilidad y reproducibilidad en los ensayos.



NOMBRE : TERMOCICLADOR A GRADIENTE

Hoy da, se ha implementado en los laboratorios un Termociclador en Gradiente. La PCR de
gradiente es actualmente el mtodo que se utiliza para seleccionar las condiciones trmicas
ptimas de la reaccin. Un gradiente de temperaturas programado libremente hasta 20C no slo
permite optimizar la temperatura de renaturalizacin, sino tambin todos los pasos de
temperatura de un protocolo de la PCR en las aplicaciones ms complejas. Gracias a la tecnologa
de pendiente constante, siempre se utilizan ndices de calentamiento y refrigeracin constantes,
de forma que los resultados del experimento gradiente se pueden realizar con sencillez y precisin
en aplicaciones rutinarias. En la bsqueda de mejorar la precisin, exactitud y homogeneidad de la
temperatura tambin se han introducido metales como el oro, la plata y otras aleaciones en los
bloques de los pozos, logrando estabilidad y reproducibilidad en los ensayos.



NOMBRE : MICROPIPETAS
La micropipeta es un instrumento de laboratorio empleado para succionar y transferir pequeos
volmenes de lquidos y permitir su manejo en las distintas tcnicas analticas.
Los volmenes captables por estos instrumentos varan segn el modelo: los ms habituales,
denominados p20, p200 y p1000, admiten un mximo de 20, 200 y 1000 l, respectivamente.
Es de destacar que el uso de micropipetas permite emplear distintos lquidos sin tener que lavar el
aparato: para ello, se emplean puntas desechables, de plstico, que habitualmente son estriles.
Existen varios tipos de puntas: por ejemplo, las amarillas para pipetear volmenes pequeos (por
ejemplo, 10 l), y las azules para pipetear volmenes grandes (por ejemplo, 800 l).



NOMBRE : CAMARA DE ELECTROFORESIS
La electroforesis es un mtodo bsico en el campo de la biologa molecular para el anlisis (
Separacin, purificacin, preparacin) de los cidos nucleicos y protenas. As como el microscopio
permite visualizar microorganismos y estructuras similares, la electroforesis nos ayuda a observar
los cidos nucleicos y protenas. El principio de la electroforesis consiste en la migracin de las
molculas a travs de un gel u otro tipo de matriz de naturaleza porosa, en el cual, por accin de
un campo elctrico, sern separadas de acuerdo a su tamao o peso molecular, en la
electroforesis horizontal generalmente se trabaja con ADN o ARN.



NOMBRE : CAMARA DE ELECTROFORESIS DEL TIPO VERTICAL
USO : En la electroforesis de tipo vertical, se analizan tanto molculas de ADN como protenas,
mientras que en la electroforesis horizontal generalmente se trabaja con ADN o ARN.

NOMBRE : FUENTE DE PODER
La fuente de poder, por lo tanto, puede describirse como una fuente de tipo elctrico que logra
transmitir corriente elctrica por la generacin de una diferencia de potencial entre sus bornes. Se
desarrolla en base a una fuente ideal, un concepto contemplado por la teora de circuitos que
permite describir y entender el comportamiento de las piezas electrnicas y los circuitos reales.

NOMBRE : TRANSILUMINADOR
Prctico transiluminador que le permitir la visualizacin de las bandas de DNA en geles de
agarosa teidos con bromuro de etidio. Equipado con 8 tubos fluorescentes de 312 nm (UV-B) y un
amplio filtro UV. Sobre su base, dispone de una campana de observacin que hace de cmara
oscura ofreciendo proteccin frente a los rayos UV y eliminando interferencias y aumentando el
contraste. Dicha campana de observacin est equipada con una puerta frontal para manipular el
gel cmodamente y una amplia ventana de observacin que reduce la fatiga ocular. Adems,
dispone tambin de lmparas de luz blanca para iluminacin del recinto interior.
El transiluminador presenta la posibilidad de acoplar cmaras digitales con los adaptadores
adecuados (no incluidos en el equipo) para fotografiar y documentar los geles y la utilizacin de
lmparas de otras longitudes de onda como 245 nm (UV-C) y 365 nm (UV-A).

NOMBRE : CABINA DE BIOSEGURIDAD
as cabinas de bioseguridad (CBS), comnmente conocidas como cabinas de seguridad biolgica,
son equipos proyectados para ofrecer proteccin al usuario y al ambiente de los riesgos asociados
al manejo de material infeccioso y otros materiales biolgicos peligrosos, excluyendo materiales
radiactivos, txicos y corrosivos, mejorando las condiciones generales bajo las cuales se realizan
una gran variedad de actividades en los laboratorios clnicos y de investigacin en el rea de salud
pblica.
Estos equipos garantizan la existencia de ambientes controlados, indispensables para realizar
actividades que por sus caractersticas resultan potencialmente peligrosas para la salud del
hombre y del ambiente.
Existen tres Clases de CBS: Clase I, Clase II, Clase III
Las CBS Clase II, se clasifican en 4 tipos A1, A2, B1, B2.


NOMBRE : MICROCENTRIFUGA
Microcentrfuga es una mquina centrfuga especializada utilizada en el laboratorio clnico. sta
pone en rotacin una muestra ms pequea para separar por fuerza rotatoria sus componentes o
fases (generalmente una slida y una lquida), en funcin de su densidad. Esta es de uso para los
tubos capilares.
El tubo capilar consiste en un tubo de plstico transparente cerrado por su extremo inferior con un
tapn. Perpendicularmente al tubo de plstico y en su parte inferior, se perfora y se introduce un
tubo de vidrio de pequeo dimetro, que hace de capilar a travs del cual se descarga la columna
de fluido viscoso. Una regla colocada en su parte exterior o marcas sobre el tubo permiten medir
la altura de la columna de fluido en funcin de tiempo.


NOMBRE : SHAKER
Es un dispositivo que se utiliza en los laboratorios de qumica y biologa para mezclar lquidos o
preparar disoluciones y suspensiones
Un agitador tpico tiene una placa o superficie que oscila horizontalmente, propulsado por un
motor elctrico. Los lquidos que van a ser agitados estn contenidos en vasos, .l.tubos o matraces
Erlenmeyer que se colocan sobre la superficie vibrante o, a veces, en tubos de ensayo o viales que
se insertan en los agujeros de la placa.


NOMBRE : VORTEX
es un dispositivo simple que se usa comnmente en los laboratorios para agitar pequeos tubos o
frascos de lquido. Se compone de un motor elctrico con el eje de transmisin orientado
verticalmente y unido a un trozo de goma o caucho montado en forma de copa, ligeramente
excntrico. A medida que el motor gira la pieza de caucho oscila rpidamente en un movimiento
circular. Cuando un tubo de ensayo o recipiente adecuado se coloca en el soporte de goma (o toca
su borde) el movimiento se transmite al lquido en su interior y se crea un vrtice. La mayora de
los mezcladores de vrtice tienen una configuracin de velocidad variable y pueden ser
configurado para ejecutarse de forma continua, o para que funcione slo cuando una dbil presin
se aplica a la goma. Poseen unos pies de ventosa en la base para evitar desplazamientos.
Los agitadores tipo vortex son bastante comunes en los laboratorios de ciencias biolgicas. En los
laboratorios de cultivos celulares y de microbiologa se pueden utilizar para suspender las clulas.
En un laboratorio de bioqumica o de anlisis puede ser utilizado para mezclar los reactivos de un
ensayo o para mezclar una muestra experimental y un diluyente.

NOMBRE : TICKS/RACK
Las puntas micro cortas tienen un rango de 0.2-10ul
- Las puntas micro con punta extendida son ideales para obtencin total de la muestra del fondo
de los microtubos
- Las puntas serie 1-4032 son ideales para usarse con las pipetas Eppendorf por su compatibilidad
exacta.
- Las puntas serie 1-4034 estn graduadas y pueden usarse con pipetas multicanal por su diseo
exacto y ajuste preciso.
- Disponibles en bolsa, gradillas no estril y gradillas estril



NOMBRE : TUBO EPENTOF
Un tubo de microcentrfuga (comnmente apodados "eppendorf", en referencia al mayor
manufacturador de estos tubos, la casa Eppendorf) es un pequeo contenedor cilndrico de
plstico, con un fondo cnico y tpicamente una tapa unida al cuerpo del tubo para evitar su
desprendimiento. Son empleados profusamente en biologa molecular y bioqumica no slo para
la centrifugacin, sino que, dado su bajo costo, se emplean a menudo como simples viales
contenedores de sustancias qumicas.
Los tubos estn fabricados de polipropileno,1 y pueden emplearse a temperaturas muy bajas (-20
C) o con disolventes orgnicos como el cloroformo. Su tamao oscila entre los 200 L y los 2 mL.
La capacidad ms comnmente usada es de 1,5 mL, siendo por otra parte los de 200 l los ms
empleados para PCR. La desinfeccin de los tubos es posible (1 atm, 120 C, 20 minutos), pero
dado su bajo costo y la dificultad de limpieza de la superficie de plstico, los tubos de
microcentrfuga son usualmente desechados despus de su uso.

CUESTIONARIO
1.- Mencione cuales son las soluciones mas importantes en un laboratorio de biologa
molecular>> Solucion molar y normal
IPTG es un inductor de actividad -galactosidasa en E. coli. Se usa comunmente con X-Gal para
deteccin de expresin de lac en aplicaciones de clonacin permitiendo deteccin de moleculas
recominantes.
X-Gal es usado como indicador para expresar -galactosidasa codificada en el lacZ operon lac.
El cloroformo es un componente primario en la extraccin de cidos nucleicos para eliminar
completamente el fenol en muestras acuosas.
El fenol slido en forma cristalina se usa para purificacin de cidos nucleicos.
El fenol/cloroformo en solucin se ofrece con un pH de 6.5-6.9 para purificacin de DNA a una
proporcin de 1:1.
El fenol saturado se ofrece con un pH de 6.6 +/-0.1 para uso en purificacin de DNA. Incluye un
buffer para aplicaciones que requieren un pH de 8.0.
El fenol saturado con pH 4.3 +/-0.2 es para uso en purifaciones de RNA.
La proteinasa K es una enzima estable (>50mg/ml) y altamente activa purificada de album del
hongo Engyodontium.
La guanidina HCL es un degradante ionico que desnaturaliza la mayoria de las proteinas.
Tambin se usa en el asilamiento de RNA.
El Tiocianato de guanidinio se usa en el aislamiento de RNA.
La formamida se usa como desnaturalizador en aplicaciones de electroforesis e hibridacin.
Degrada el DNA y el RNA para separar las bandas de doble hlice
El cloruro de cesio de grado ptico sirve para purificacin de DNA por centrifugacin de densidad
de gradiente.
El glicerol se usa para prevenir congelacion durante la preparacin de enzimas y bacterias.

2.- Enumere 4 equipos o instrumentos den utilidad en el laboratorio de biologa
molecular que no estn mencionados anterior
-Fraccionamiento Offgel
-Microarrays
-Nanodrop
-PCR
Termocicladores tiempo final
Termocicladores tiempo real
-Bioanalizador

3.- Indique 5 normas de bioseguridad que se deben seguir en el laboratorio de biologa
molecular
Es recomendable almacenar los reactivos especficos (enzimas, primeros, nucletidos) en un
congelador propio para evitar contaminacin
Separar zonas de trabajo para evitar contaminaciones cruzadas y degradacin de las muestras:
de preparacin de material, de extraccin de cidos nucleicos
Usar bata distinta a la de uso general y guantes especiales con cambios frecuentes.
Usar guantes especiales para manipulacin de ciertas sustancias nocivas
Modificaciones fsicas de estaciones de trabajo

4.- Proponga que normas de bioseguridad seben seguir cuando se manipula material
gentico humano, virus y bacterias.
No usar maquillaje en el area de trabajo
No ingerir alimentos
Utilizar ropa adecuada ( pantaln zapatos cerrados)
Sujetarse el cabello y usar gorro de preferencia
Manipular de forma cuidadosa los qumicos de zona roja

CONCLUCIONES
Se puede concluir que se aprendi de manera eficaz los distintos equipos usados en este
laboratorio y su utilidad y diferenciacin adems de reconocer que las normas de bioseguridad
deben ser seguidas para evitar accidentes.