Dr. Mircea Leabu, Dr.

Laura Cristina Ceafalan Reticulul endoplasmic, curs pentru studenii n medicin

1
RETICULUL ENDOPLASMIC

Organizarea cursului:

1. Definirea organitului;
2. Structura i ultrastructura reticulului endoplasmic; etimologia denumirii;
3. Abordarea experimental a organitului;
4. Funciile reticulului endoplasmic;
a. Funciile reticulului endoplasmic neted;
b. Funciile reticulului endoplasmic rugos;
5. Consideraii asupra biogenezei membranelor.

Definiia

Reticulul endoplasmic (RE) este un organit delimitat de endomembran, structurat sub forma
unor cisterne i/sau tubuli, cu numeroase anastomoze, a cror fa citoplasmatic prezint, sau nu,
rugoziti i a crui funcie de baz este aceea de a produce molecule i macromolecule eseniale
organizrii i funcionrii celulelor. RE face parte din grupul organitelor implicate n biogeneza i
traficul intracelular al membranelor, alturi de aparatul Golgi, lizosomi i sistemul endosomal,
reprezentat de o multitudine de vezicule i/sau vacuole facilitnd fie schimbul de substan ntre
organitele enumerate mai sus, fie ntre ele i membrana celular asigurnd exocitoza i endocitoza.
RE este primul organit din serie, adic cel care iniiaz procesele celulare care se desfoar n
aceste organite. Reticulul endoplasmic reprezint cea mai abundent structur delimitat de
endomembrane din celul, coninnd mai mult de jumtate din sistemul de membrane ale acesteia.

Structura i ultrastructura RE

Prezena RE n celule a fost dovedit de ctre citologi datorit bazofilei sale, primind la
nceput denumiri diferite n funcie de tipul celular n care a fost descris, ca i de numele celui care l-
a evideniat. De exemplu: (i) n neuroni, prin coloraia Nissl, au fost descrise structuri granulare
bazofile, care au fost denumite corpi Nissl; (ii) n hepatocite a fost descris ca o structur bazofil cu
aspect reticulo-granular care a primit denumirea de corpusculi Berg; (iii) n celulele acinare
pancreatice, prezena RE se evideniaz n coloraia hemalaun-eozin ca o zon puternic bazofil n
treimea bazal a celulei, avnd uneori capacitatea de a estompa conturul nucleului. n celulele
pancreasului endocrin, denumirea utilizat pentru structur a fost aceea de ergastoplasm (plasm
lucrtoare). Timpul a dovedit c toate aceste structuri bazofile din citoplasm reprezint acelai
organit: reticulul endoplasmic.
Denumirea de reticul endoplasmic are la baz caracteristicile morfologice evideniate de
citologi: aspectul de reea (reticul) i localizarea preferenial n profunzimea citoplasmei (n
endoplasm) i nu n ectoplasm, adic periplasmalemal, ctre periferia celulelor.
Detaliile structurale asupra organizrii reticulului endoplasmic au fost ns obinute prin
microscopie electronic. Preparatele standard de microscopie electronic de transmisie i
examniarea de seciuni seriate au dezvluit ultrastructura RE. Informaiile astfel obinute au fost
confirmate i prin microscopie electronic de baleiaj pe preparate de ngheare/fracturare/ sublimare.
Organitul este structurat pe baza unor endomembrane sub form de cisterne ce prezint numeroare
anastomoze i/sau tubuli nreelai. Spaiul din interiorul membranelor (echivalent exteriorului
celular din punct de vedere topologic) este denumit lumen i are o grosime (diametru) de 30-60 nm,
putnd fi mai mare n stri de activitate crescut a organitului. Lumenul RE este continuu ntre
cisterne i tubuli, iar la nivelul cisternelor se realizeaz anastomoze i cu anvelopa nuclear. Se
realizeaz astfel o continuitate ntre lumenul RE i lumenul anvelopei nucleare. De regul zonele
Dr. Mircea Leabu, Dr. Laura Cristina Ceafalan Reticulul endoplasmic, curs pentru studenii n medicin
2
structurate sub form de cisterne prezint ribosomi ataai pe faa citoplasmatic a membranei
organitului, care dau aspectul rugos acestor arii; ele structureaz ceea ce a fost denumit reticul
endoplasmic rugos (RER). De notat c ribosomii sunt prezeni i pe faa citoplasmatic a
membranei externe a anvelopei nucleare. Zonele structurate sub form de tubuli, care sunt ca nite
prelungiri ale cisternelor RER, nu prezint rugoziti i au fost denumite reticul endoplasmic neted
(REN). Facem specificarea c RER i REN nu reprezint dou organite independente ci sunt zone
diferit organizate la nivel ultrastructural ale aceluiai organit: reticulul endoplasmic. n ceea ce
privete raportul RER/REN, acesta este diferit la diverse tipuri celulare, corespunznd funciilor
respectivelor celule (vezi la Abundena i localizarea intracelular a RE).

Abordarea experimental n studiul RE

n deceniul nou al secolului XX (s fi fost prin 1983-1984), la una dintre conferinele inute
la Institutul de Biologie i Patologie Celular din Bucureti, profesorul George Emil Palade i-a
nceput prelegerea fcnd urmtoarea afirmaie: Functions must be understood in terms of
structures; structures must be understood in terms of chemistry. Aa stnd lucrurile, iar acest cerc
voluptos al corespondenelor biunivoce ntre structuri, biochimie i funcii opernd la nivelul
oricror structuri biologice, este de ateptat ca partea rugoas a RE s aib, cel puin n parte, funcii
diferite de partea sa neted. Se pune problema: cum putem separa, pentru abordarea studiului
funciilor lor, cele dou zone de reticul endoplasmic?
ansa (?!) face ca la omogenizarea celular reticulul endoplasmic s se dezintegreze n
structuri veziculare (alturi de membrana celular i de complexul Golgi), formnd ceea ce este
cunoscut sub numele de fraciune microsomal. Aceasta poate fi separat de celelalte fraciuni
celulare (nuclear, mitocondrial-lizosomal) prin centrifugare diferenial. Fraciunea microsomal
conine microsomi (vezicule) rugoi (cu ribosomi ataai), i netezi. Cele dou tipuri de vezicule din
fraciunea microsomal pot fi, ulterior, separate prin centrifugare n gradient de densitate, cu un bun
randament al puritii. innd cont de faptul c, n funcie de tipul de reticul endoplasmic pe care
dorim s-l studiem, putem alege celule bogate n unul dintre acestea, rezult c putem obine un
preparat biologic de puritate ridicat, astfel nct informaiile artefactuale s fie sub limitele de
detecie ce caracterizeaz metodele i tehnicile biochimice de investigare a funciilor.
Rezolvat fiind problema obinerii eantioanelor de material biologic n cantitate i de
puritate corespunztoare, se poate trece la studiul bagajului molecular al acestora, pentru a detecta i
apoi dovedi funciile structurilor celulare de interes, n spe funciile REN, respectiv RER, mai
bine-zis funciile prii netede, respectiv prii rugoase ale organitului celular denumit reticul
endoplasmic.

Funciile REN

n momentul de fa sunt destul de bine descrise urmtoarele fincii pentru partea neted a
RE:

1. Metabolismul lipidelor
a. biosinteza lipidelor membranare
b. metabolismul hormonilor steroizi
c. sinteza lipoproteinelor
d. sinteza trigliceridelor
e. desaturarea acizilor grai
2. Detoxificarea celular;
3. Funcii speciale (depozit dinamic de ioni de calciu).

Dr. Mircea Leabu, Dr. Laura Cristina Ceafalan Reticulul endoplasmic, curs pentru studenii n medicin
3
Biosinteza lipidelor membranare
RE particip practic la biosinteza tuturor lipidelor membranare direct n forma final, sau
prin precursori ce sunt apoi prelucrai n aparatul Golgi.
Componenta lipidic membranar este format n principal din glicerofosfatide (~70%).
Vom exemplifica biosinteza glicerofosfatidelor alegnd producerea fosfatidilcolinelor (PC), caz care
ne va permite s punctm diversitatea de fenomene legate de producerea bistratului lipidic cu
caracteristicile sale (vezi la Lipidele membranare).
Fosfatidilcolinele sunt biosintetizate la nivelul foiei citosolice (interne) a membranei RE
(lucru valabil i pentru celelalte glicerofosfatide) plecndu-se de la acil-CoA i glicerol-3-fosfat,
printr-o secven de 3 reacii:

1. Primul pas l constituie obinerea acidului fosfatidic din precursorii amintii sub aciunea
acil-tansferazelor. Acidul fosfatidic astfel format rmne inserat n foia intern a
bistratului.
2. Pasul al doilea l constituie eliminarea fosfatului din acidul fosfatidic sub aciunea
fosfatidil-fosfatazei, cu formarea diacilglicerolului, la nivelul foiei interne a bistratului.
3. Ultimul pas l reprezint adugarea fosfo-colinei la hidroxilul diacilglicerolului, prin
aciunea colinfosfo-transferazei, ce folosete citidil-difosfo-colina ca substrat.

Procesul descris mai sus ar trebui s ne strneasc cel puin dou ntrebri: (i) de ce este
nevoie de scoaterea fosfatului de pe acidul fosfatidic, dac tot apare n final n structura PC? i (ii)
de ce este produs fosfatidilcolina n foia intern a bistratului lipidic, atta timp ct trebuie s
ajung acolo unde se afl preferenial, adic n foia extern? Altfel spus: dac PC este produs de
novo n foia citosolic a bistratului lipidic, cum ajunge ea eficient n foia extern, tiut fiind c
pentru aceasta trebuie s sufere micare de flip-flop, a crei frecven este aproape nul?
Rspunsul la prima ntrebare implic aspecte concrete, dar ne permite s facem i afirmaii
de principiu referitor la importana complexitii proceselor celulare.
n primul rnd, ntruct unul din precursorii primei reacii din procesul de obinere a
fosfatidilcolinei este glicerol-3-fosfatul, este firesc s se obin ca produs de reacie acidul fosfatidic.
Folosirea ca precursori a acil-CoA i glicerinei fosforilate este motivat att de considerente
energetice (este favorizat reacia enzimatic, substratele fiind activate n comparaie cu acizii grai
necuplai la coenzima A, sau glicerina nefosforilat), ct i de aspecte legate de eficiena
fenomenelor anterioare etapelor descrise: att acizii grai ct i glicerina sunt molecule care n form
nativ pot difuza prin membran i pot fi pierdute de celul. Pentru a contracara acest lucru, i
pentru a pstra moleculele eliberate din depozitele de trigliceride, sau produse prin consum energetic
n celul, acestea trebuie s fie meninute n complexe moleculare care le modific proprietile
fizico-chimice. Att CoA, ct i fosfatul transform moleculele n discuie n compui pentru care
membrana celular nu este permeabil.
Pe de alt parte, trebuie menionat c o regul de eficientizare a proceselor celulare este
aceea c ele cu ct sunt mai complicate (cu ct au mai multe etape biochimice) cu att pot fi mai
riguros controlate. Mai mult, adesea un evantai de procese celulare au ci iniiale comune, astfel
nct aceste etape iniiale s se petreac frecvent, iar celula s poat decide pe parcurs ncotro le
direcioneaz. Decizia ine de nevoile n permanent schimbare ale celulei, ca rspuns la semnale
interne sau externe, semnale receptate, analizate i prelucrate prin fenomene complicate, numite
procese de semnalizare. n felul acesta, procese deja declanate din anumite considerente, nu vor
rmne suspendate sau anulate, ci conduse n direciile n care apar noi nevoi celulare. Astfel, celula
va evita risipa de energie i mijloace.
Ct privete cel de-al doilea aspect referitor la corecta distribuie a fosfatidilcolinei n
membrana plasmatic, redistribuirea ei se face prin complexe macromoleculare de translocare
numite generic flipaze.
Dr. Mircea Leabu, Dr. Laura Cristina Ceafalan Reticulul endoplasmic, curs pentru studenii n medicin
4
Exist, n membrane, trei categorii de flipaze: (i) flopaze, care transfer fosfolipidele din
foia intern n cea extern, (ii) flipaze, care translocheaz fosfolipidele din foia extern n cea
inten i (iii) scramblaze, care transfer lipidele membranare n ambele sensuri. Astfel, pentru
fosfolipide exist, n membrana RE, o scramblaz care le translocheaz din foia intern a bistratului
lipidic, unde sunt produse, n cea extern pe cele care trebuie s se gseasc n aceasta.
Scramblazele, din cte cunoatem pn n prezent, sunt lipsite de specificitate i opereaz fr
consum energetic. Ele mresc de ~100.000 de ori frecvena micrii de flip-flop la nivelul
membranei RE
Flipazele i flopazele sunt principalele responsabile de crearea i asigurarea meninerii
eficiente a asimetriei de distribuie a lipidelor membranare la nivelul membranei plasmatice. Acestea
se caracterizeaz prin specificitate pentru structura capului hidrofil al fosfolipidelor i acioneaz cu
consum de energie.
Cum este reglat activitatea acestei diversiti de translocaze pentru lipidele membranare,
translocaze care se ntlnesc la nivelul tuturor membranelor, dar acioneaz diferit de la o membran
la alta, este o problem n studiu. Se cunosc mai multe lucruri legate de procesele n care ele se
activeaz. Spre exemplu, scramblazele de la nivelul membranei celulare sunt cele care duc la
fliparea fosfatidilserinelor (PS) i apariia lor n foia extern a bistratului lipidic n apoptoz, ca i n
plachetele sanguine activate. Acest fenomen este nsoit de sporirea adeziunii celulare, a tendinei de
agregare (inducerea proprietilor procoagulante la plachete), ca i de recunoaterea de ctre celulele
fagocitare (fagocitarea corpilor apoptotici). Fliparea PS a fost evideniat i n situaii patologice cu
risc crescut cardiovascular, cum ar fi n diabet.
Un aspect interesant, care merit punctat este faptul c celula nu este nevoit s sintetizeze
fosfolipidele de novo, atunci cnd proporia dintre diferitele tipuri trebuie s se schimbe la nivelul
bistratului. Fosfopilidele pot suferi reacii de disproporionare, adic acele reacii prin care ele pot
trece dintr-una n alta. Posibilitile de disproporionare nu sunt nici universale (adic oricare dintre
ele s poat trece n oricare dintre celelalte), nici ntotdeauna bidirecionale. Astfel sunt cunoscute
urmtoarele posibiliti de disproporionare:

a) La nivelul RE:
1. fosfatidiletanolamina poate trece n fosfatidilcolin (conversia implic reacii de
metilare pentru care exist enzima adecvat: fosfatidiletanolamin-N-metil-
transferaza);
2. exist posibiliti de conversie n ambele sensuri ntre fosfatidilcolin, respectiv
fosfatidiletanolamin i fosfatidilserin (prin reacii de schimb la nivelul capului
hidrofil: colina, sau etanolamina sunt schimbate cu serin, sub aciunea unor PS
sintaze); de menionat c PS se produce numai prin acest mecanism de schimb n
celulele de mamifere.
b) La nivelul mitocondriei
1. fosfatidilserina poate trece n fosfatidiletanolamin (prin decarboxilare sub
aciunea fosfatidilserin-decarboxilazei)

Distribuirea lipidelor nou sintetizate ctre celelalte membrane din celul este considerat a se
face prin difuzie lateral pentru anvelopa nuclear, sau constitutiv (adic de la sine) pentru
organitele implicate n traficul intracelular al membranelor (aparat Golgi, lizosomi, endosomi,
membran celular). Pentru organitele din afara acestui trafic, aa-numitele organite
(semi)autonome (mitocondrie, peroxisomi) exist prerea c distribuia se face prin transportori de
schimb fosfolipidic. Aceti transportori ar avea specificitate pentru structura capului hidrofil i ar
extrage fosfolipidele din membrana RE, le-ar transporta prin citosol, ascunznd coada hidrofob a
acestora, cedndu-le membranelor int. Obieciunile referitor la acest model sunt legate de
eficien. n ceea ce privete peroxisomul ns, studii recente, legate de biogeneza organitului,
Dr. Mircea Leabu, Dr. Laura Cristina Ceafalan Reticulul endoplasmic, curs pentru studenii n medicin
5
dovedesc elegant prezena unor structuri microveziculare care fac transport de la RE ctre acesta
[transport de lipide i pentru cteva (puine) proteine, care la peroxisom se numesc peroxine].
Probabil curnd vom cunoate dac aceste observaii se vor confirma i dac peroxisomul trece de la
categoria de organit autonom, la organit semiautonom. De menionat c cea mai mare parte a
peroxinelor este preluat de peroxisom din citosol prin mecanisme dovedite, dar n curs de
descifrare a detaliilor.
Colesterolul este produs n RE n orice tip de celul animal printr-un proces biologic
complex, bine elaborat i atent reglat. Anumite celule au o rata de sintez mai ridicat, cum ar fi
hepatocitele, celulele intestinale, celulele glandei suprarenale, ovarului sau testiculului. Materia
prim este acetil-CoA (CoA coenzima A) rezultat n urma oxidrii mitocondriale a acizilor grai
sau oxidarea citoplasmatic a etanolului. n citoplasm, din acetil-CoA se formeaz HMG-CoA
(HMG 3-hidroxi-3-metil-glutaril) care va fi preluat n lumenul RE unde, sub aciunea HMG CoA
reductazei se formeaz intermediarul de baz - acidul mevalonic. Aceasta este etapa limitant a
procesului de sintez a colesterolului, activitatea HMG CoA reductazei fiind reglat att prin feed-
back negativ de ctre nivelul de colesterol (accelereaz turn-over-ul enzimei) ct i prin aciunea
anumitor hormoni (insulin/glucagon induc modificri covalente prin fosforilare/defosforilare). n
etapele urmtoare, prin intermediul farnezil-fosfatului se produce scualenul, sub aciunea scualen-
sintazei, care apoi sufer, sub aciunea scualen-oxidociclazei, ciclizrile ce duc la obinerea
intermediarului coninnd nucleul tetraciclic, lanosterolul. Transformarea lanosterolului la colesterol
implic multe faze mai puin elucidate. Enzimele menionate mai sus fac toate parte din bagajul
molecular al RE.
Colesterolul rezultat n urma sintezei endogene (precum i cel care provine din alimentaie)
va fi folosit n orice celul pentru biosinteza unor noi suprafee membranare, n anumite glande
endocrine pentru sinteza de hormoni steroizi i, n cea mai mare proporie, pentru sinteza de acizi
biliari n ficat.
Colesterolul poate fi depozitat n celul sub form de colesterol esterificat n incluziuni
lipidice, sau transportat prin snge de ctre lipoproteine. Alturi de colesterolul esterificat sunt
depozitate, respectiv transportate i trigliceridele.
Reticulul endoplasmatic neted deine enzimele corespunztoare sintezei trigliceridelor prin
esterificarea unei molecule de glicerol cu trei lanuri de acizi grai. Tot la nivelul reticului
endoplasmatic se gsesc enzimele necesare hidrolizei trigliceridelor cu eliberarea acizilor grai i a
glicerinei. Acest lucru se ntmpl atunci cnd celula are nevoie de produii din compoziia
trigliceridelor, iar eliberarea se face sub forma unor compui activai: gricerol-3-fosfat, respectiv
acil-coenzim A, compusi amintii mai sus la seciunea Biosinteza fosfolipidelor membranare.
Prezena bagajelor enzimatice necesare metabolismului lipidic poate fi sugestiv sugerat i
prin preparate de microscopie electronic pentru celule care prezint incluziuni lipidice. De regul,
acestea ne arat c incluziunile lipidice sunt n strns corelaie cu structuri ale REN, ceea ce
sugereaz rolul organitului n producerea, respectiv hidroliza trigliceridelor.
Incluziunile lipidice se formeaz prin acumularea lipidelor neutre (trigliceride, colesterol
esterificat) ntre cele dou foie ale membranei reticulului endoplasmatic neted. Pe msur ce
volumul crete, aceasta se va desprinde de reticulul endoplasmatic pentru a deveni un organit
independent. Aadar incluziunea lipidic va fi delimitat de monostrat de fosfolipide provenite din
membrana reticulului, asociate cu o serie de proteine implicate n stabilizarea acestora.
Lipoproteinele sunt complexe macromoleculare formate dintr-un miez ce conine trigliceride
i colesterol esterificat i un nveli format dintr-o foi de fosfolipide i apoproteine (apoproteina B
apo B, fiind cea mai important). Componenta proteic este sintetizat n compartimentul rugos al
reticulul endoplasmatic, dar restul componentelor sunt sintetizate n compartimentul neted. Tot n
lumenul reticulului endoplasmatic neted exist enzimele necesare asamblrii complexului
trigliceride-apo B, ns maturarea particulelor lipoproteinelor se va definitiva n aparatul Golgi.
Dr. Mircea Leabu, Dr. Laura Cristina Ceafalan Reticulul endoplasmic, curs pentru studenii n medicin
6
n anumite glande endocrine, colesterol depozitat sub forma picturilor lipidice va fi utilizat
pentru sinteza hormonilor steroizi (progesteron, androgeni, estrogen, glucocorticoiz,
mineralocorticoizi). Steroidogeneza este un proces care presupune cooperarea strns ntre reticulul
endoplasmatic neted i mitocondrie. Dei prima etap n prelucrarea colesterolului se desfoar n
mitocondrie, reticulul endoplasmatic neted deine n bagajul su enzimatic majoritatea enzimelor
implicate n acest proces, precum i pe cele implicate n degradarea hormonilor steroizi. Acesta este
motivul pentru care n astfel de celule componenta neted a reticulului endoplasmatic este foarte
bine reprezentat, ocupnd cea mai mare parte din volumul citoplasmei.
Tot la nivelul RE sunt produse ceramidele, precursorii sfingomielinelor i glicolipidelor.
Ceramidele se obin prin amidarea sfinganinei, un aminodiol alifatic, precursor al sfingozinei obinut
din L-serin i palmitil-CoA. Dihidro-ceramidele astfel obinute sunt dehidrogenate. Ceramidele
sunt transformate n sfingomieline, sau glicolipide (cerebrozide) la nivelul complexului Golgi.
Un alt proces care implic metabolismul lipidic, cu importan n capacitatea celulelor de a
modula proprietile fizico-chimice ale membranelor, este desaturarea acizilor grai. Aceasta se
face prin aciunea unui complex enzimatic ce conine citocrom b
5
, NADH-citocrom b
5
-reductaz
i acid gras desaturaze. Procesul are loc adesea cu alungirea lanului alifatic. Nu exist dovezi c
aceste procese s-ar petrece direct pe fosfolipide, ci doar pe acizii grai esterificai, ca tioesteri, cu
CoA. Modularea cantitii de acizi grai nesaturai n fosfolipidele membranare permite celulelor s-
i regleze fluiditatea membranelor, n conformitate cu nevoile de moment. Faptul c desaturarea se
face pe acizi grai n afara lipidelor membranare ar nsemna c modularea fluiditii se face prin
sinteza de novo a fosfolipidelor. O problem care se ridic este legat de eficiena rspunsurilor n
modularea fluiditii pe aceast cale.

Detoxificarea celular
Procesele care rezolv aceast problem implic metabolizarea, pentru eliminarea din celul,
a compuilor liposolubili (unele medicamente, insecticide, carcinogeni etc.), care s-ar putea acumula
n bistratul lipidic, afectndu-i fluiditatea ntr-un mod necontrolat de celul. Mai mult, acumularea
unor asemenea produi n bistratul membranar, afecteaz interaciunile dintre lipide i proteinele
integrale ce se exercit n zona hidrofob a structurii membranare. Aceste interaciuni controleaz,
de exemplu, conformaia domeniilor transmembranare i prin aceasta funcionalitatea proteinelor
transmembranare. Afectarea lor de ctre compui care nu trebuie s se afle acolo nseamn pierderea
controlului celular asupra funcionalitii proteinelor integrale. Aceti produi, pe care celula trebuie
s-i elimine din bistratul lipidic, pot fi fiziologici, patologici, sau farmacologici. La nivelul RE aceti
produi hidrofobi sunt mai nti hidroxilai prin aciunea unui complex enzimatic bazat pe citocrom
P
450
/NADPH-citocrom P
450
-reductaz. Ei sunt astfel transformai n structuri hidrofile, uor de
eliminat din celul. Dac este cazul, aceste prime modificri sunt urmate de grefarea, la gruprile
hidroxil astfel obinute, a unor structuri glucidice sau grupri sulfat, care mresc hidrofilicitatea
produilor rezultai.
Rolul n detoxificarea celular este spectaculos sugerat i de fenomenul de hiperplazie
(creterea cantitii, sau numrului de structuri) a REN n hepatocitele indivizilor medicai, pentru o
perioad mai ndelungat, cu barbiturice. La scurt timp dup nceperea perioadei de tratament, crete
semnificativ cantitatea de REN n celulele ficatului. Hiperplazia este reversibil, cantitatea de REN
revenind la normal la scurt timp dup ncetarea medicaiei. De remarcat faptul c, n hepatocitele
normale, structurile de RE prezint o proporie de echilibru (~1:1) ntre RER i REN, astfel nct
modificrile acestui raport sunt uor de observat.

Reticulul endoplasmic depozit dinamic de Ca
2+

Aceast funcie este pregnant manifest la celulele musculare striate. La aceste celule, la care
reticulul endoplasmic este denumit reticul sarcoplasmic (RS), funcia i dinamica celular sunt
realizate prin cooperarea mai multor componente moleculare. O prim component este
Dr. Mircea Leabu, Dr. Laura Cristina Ceafalan Reticulul endoplasmic, curs pentru studenii n medicin
7
calsechestrina, protein cu mare afinitate pentru ionii de calciu, aflat n cantitate mare n lumenul
organitului. Prezena calsechestrinei contribuie (conform constantei sale de afinitate) la controlul
cantitii de Ca
2+
liber din lumenul RS, n condiiile unei concentraii totale de Ca
2+
crescute. La
stimularea celulelor, se deschid n membrana RS canale de calciu controlate chimic (prin inozitol
tris-fosfat IP
3
, vezi la Transport membranar i la Semanlizarea celular), prin care ionii de
calciu, aflai liberi n lumen, ptrund n citosol i declanaz contracia. Trecerea Ca
2+
din lumenul
RS n citosol are loc atta timp ct canalele sunt deschise, pe baza deplasrii echilibrului din lumen
dinspre calciul legat pe calsechestrin, spre calciul liber, determinnd n permanen o concentraie
de calciu liber n RS mai ridicat dect n citosol. Ciclul se nchide prin aciunea unor pompe de
calciu din membrana RS, care reintroduc Ca
2+
n lumenul RS, unde calsechestrina l complexeaz,
pentru a pstra constant concentraia de ioni liberi. Detalii asupra acestor fenomenele vei studia la
cursul de esut muscular de la disciplina Histologie general.

Funciile RER

Funciile prii rugoase a RE au strnit mai mare interes pentru comunitatea biologilor
celulari, astfel nct multe dintre ele sunt cunoscute n detaliu, chiar dac nu pe deplin. Vom cuta,
n cele ce urmeaz, s le prezentm n attea detalii cte s ne ajute s le nelegem corect i s ne
permit s realizm complexitatea lor i importana acestei pri a organitului pentru organizarea i
funcionarea celulei ca sistem integrat. Iat despre ce vom discuta:
1. Biosinteza unor proteine: (i) proteine membranare, (ii) proteine destinate a funciona n
RE, n aparatul Golgi, sau lizosomi, (iii) proteine destinate exportului;
2. Prelucrarea proteinelor sintetizate n RE;
3. Sortarea i transportul ctre aparatul Golgi.

Biosinteza proteic al nivelul RE
Biosinteza tuturor proteinelor ntr-o celul se iniiaz n citosol. Excepie fac proteinele
codificate de ADN-ul mitocondrial (puine; nu mai mult de 10% dintre proteinele necesare
funcionrii mitocondriei). Aa stnd lucrurile, se pune problema: cum tie RE care dintre
complexele de biosintez proteic (poliribosomi) trebuie s fie preluate la nivelul membranei sale?
Ei bine, informaia prin care se face selecia se afl n nsui lanul polipeptidic n formare.
Ea este o secven compact de 15-30 aminoacizi hidrofobi (sau preponderent hidrofobi) denumit
peptid semnal, sau secven semnal. De regul peptida semnal este localizat foarte aproape de
captul amino-terminal al proteinelor n cauz, sau se identific cu acesta. Prezena peptidei semnal
dei este necesar, nu este suficient. Peptida semnal nu are un receptor corespunztor n membrana
RE. n procesul de recrutare a poliribosomilor, care au produs peptida semnal n proteina a crei
sintez o desfoar, intervine un alt complex macromolecular ribonucleoproteic, care a fost
denumit particul de recunoatere a semnalului (prescurtat SRP de la Signal Recognition
Particle). Particula de recunoatere a semnalului conine o molecul mic de ARN (7S constant de
sedimentare), complexat cu 6 subuniti polipeptidice, adoptnd forma unui bastona cu lungimea
de ~25nm i grosimea de ~5nm. Acest complex structureaz la un capt un sit de interaciune cu
peptida semnal din lanul polipeptidic n curs de sintez, iar la cellalt capt un domeniu de legare la
situl A al ribosomului. Adiacent sitului de interaciune cu peptida semnal, dup aceast interaciune
i legarea pe ribosom, SRP expune un sit de legare la un receptor specific din membrana RE,
receptorul la SRP (SRPR). n aceast conjunctur poliribosomul (la nivelul cruia alungirea
lanului este blocat prin legarea domeniului specific al SRP la situl A) este recrutat de membrana
RE. Dup legarea complexului ribosom operaional + lan polipeptidic n sintez + particul de
recunoatere a semnalului, receptorul pred ntreaga mainrie unui alt complex macromolecular
transmembranar din membrana RE, constituit din mai multe proteine, care rezolv translocarea
Dr. Mircea Leabu, Dr. Laura Cristina Ceafalan Reticulul endoplasmic, curs pentru studenii n medicin
8
lanului polipeptidic pe msura alungirii. Acest complex de translocare este denumit translocon.
Transloconul este astfel organizat nct structureaz pe de o parte un sit de acomodare a peptidei
semnal hidrofobe, iar pe de alt parte, un canal hidrofil (mai bine-zis un por hidrofil, deoarece
diametrul su n conformaie deschis, activ n translocare este de 4-6 nm; diametrul su n stare
neocupat este de 0,9-1,5 nm). Prin acest por hidrofil este translocat lanul polipeptidic n lumenul
RE, pe msura alungirii sale. Din momentul n care transloconul preia ribosomul, SRP este eliberat
n citosol, iar sinteza poate continua, deoarece situl A devine disponibil i poate fi ocupat cu ARNt,
corespunztor codonului ce urmeaz n ARNm tradus. Acestea sunt fenomemnele ce se petrec
pentru selecia poliribosomilor corespunztori la membrana RE i iniierea translocrii prin aceasta.
Pe scurt, etapele descrise ar fi:
1. Iniierea sintezei proteice n citosol;
2. Apariia peptidei semnal;
3. Recunoaterea peptidei semnal de SRP (aflat ntotdeauna n exces n citosol),
interacinunea dintre ele i blocarea sintezei prin ocuparea sitului A;
4. Legarea complexului macromolecular astfel format la SRPR din membrana RE;
5. Interaciunea dintre SRPR i translocon urmat de transferul complexului, legarea
ribosomului i deblocarea sintezei proteice prin eliberarea SRP n citosol;
6. Translocarea lanului polipeptidic, pe msur ce se alungete, prin membrana RE.
Ceea ce se ntmpl mai departe depinde de tipul de protein care este sintetizat. Proteinele
destinate exportului (proteinele de secreie), sau cele care trebuie s funcioneze ca proteine solubile
n lumenul RE, al cisternelor golgiene, sau al lizosomilor, conin adiacent peptidei semnal (ctre
captul carboxi-terminal) o secven consens recunoscut de o hidrolaz, numit semnal-peptidaz,
care elimin peptida semnal hidrofob (ce ar ine altfel proteina inserat n bistratul lipidic, ca
protein transmembranar unipas de tip II) i elibereaz proteina n lumenul RE.
Pentru proteinele transmembranare, procesele se nuaneaz semnificativ. O serie de proteine
transmembranare unipas conin peptide semnal dispuse mult mai profund n lungimea lanului
polipeptidic, nu ctre captul extrem amino-terminal. n aceast situaie, dei etapele de iniiere a
translocrii sunt aceleai, caracteristicile fizico-chimice ale lanului polipeptidic, n zonele adiacente
peptidei semnal, influeneaz sensul n care are loc inserarea n translocon i translocarea. S
specificm mai nti c ntotdeauna (din cte cunoatem pn n prezent) inserarea n translocon se
face cu sarcinile pozitive din lanul polipeptidic ctre faa citoplasmatic a membranei RE. Asta
nseamn c, atunci cnd poriunea dinspre peptida semnal ctre captul amino-terminal conine
aminoacizi cu sarcini pozitive (lizin, arginin), inserarea n translocon se face n sens direct, captul
aminoterminal al proteinei rmne n citosol (n endodomeniu), iar proteina rezultat va fi
transmembranar, unipas, tip II. Dac ns poriunea dinspre peptida semnal ctre captul carboxi-
terminal al proteinei conine aminoacizi pozitivi, atunci inserarea n translocon se face n sens
invers, captul amino-terminal deja format al lanului polipeptidic va fi translocat n lumenul RE, iar
sinteza va continua cu eliberarea captul carboxi-terminal n citosol. Proteina integral rezultat va
fi transmembranar, unipas, de tip I (captul amino-terminal n ectodomeniu).
Proteinele transmembranare multipas conin mai multe secvene cu aminoacizi hidrofobi
(sau preponderent hidrofobi) care vor rmne inserate n bistratul lipidic strbtndu-l. Selectarea i
iniierea translocrii urmeaz aceleai etape descrise mai sus. Pentru nelegerea secvenei de etape
ce urmeaz n sinteza i inserarea n membran a proteinelor n aceste cazuri, vom defini noiunile
de secven start transfer, respectiv secven stop transfer. Astfel, secvenele hidrofobe, care n
ordinea apariiei n cusul sintezei proteinei au numr fr so, vor opera ca secvene start transfer.
Apariia acestora iniiaz procesul de translocare a lanului ce se formeaz ctre lumenul RE i de
aceea sunt denumite secvene start transfer. Secvenele hidrofobe care au numr cu so (n funcie de
ordinea n care apar n cursul biosintezei) acioneaz ca secvene stop transfer. Iat, ntr-o ncercare
Dr. Mircea Leabu, Dr. Laura Cristina Ceafalan Reticulul endoplasmic, curs pentru studenii n medicin
9
de sistematizare pe puncte, cum trebuie nelese fenomenele n aceast situaie, dei ele nu sunt
elucidate n toate detaliile:
1. Pe msur ce secvenele stop transfer (hidrofobe) cu numr par se formeaz i ptrund n
porul hidrofil al transloconului, este determinat nchiderea acestuia (datorit tensiunilor de
acomodare care apar), lanul polipeptidic se deplaseaz lateral, etaneitatea interaciunii ribosom-
translocon dispare, iar lanul polipeptidic n curs de alungire iese n citosol. De menionat c a fost
evideniat experimental faptul c nchiderea i deschiderea porului de translocare se face la captul
luminal al transloconului, iar interaciunea ribosom-translocon asigur etaneitatea canalului fa de
citosol, n cursul translocrii.
2. Urmtoarea secven hidrofob (numr impar, secven start transfer) restabilete
etaneitatea interaciunii ribosom-translocon, redeschide porul, iar lanul polipeptidic ce rezult din
etapa de alungire a biosintezei este translocat din nou ctre lumenul RE.
Aceste fenomene se repet de cte ori apare o nou secven hidrofob, pn proteina este
sintetizat n toat lungimea ei.
Dintre cele ce nu se cunosc cu certitudine, n momentul de fa, referitor la aceste procese
amintim: (i) cum este reglat nchiderea i deschiderea porului transloconului, (ii) cum are loc
migrarea lateral a secvenelor hidrofobe i dac ele prsesc transloconul inserndu-se chiar atunci
n bistratul lipidic, (iii) cum se moduleaz interaciunea dintre ribosom i translocon, sau dac
ribosomul se desprinde de translocon sub aciunea secvenei stop transfer, (iv) ce se ntmpl concret
la reluarea translocrii.
Numrul de treceri prin planul membranei, care formeaz domeniul transmembranar al
proteinelor multipas astfel formate, depinde de numrul de secvene hidrofobe codificate de ARNm,
dar i de prezena sau absena, dup prima secven start transfer a secvenei consens hidrolizat de
semnal-peptidaz. Dac proteinele transmembranare multipas care rezult vor fi de tip I, sau tip II
depinde de mai multe aspecte, printre care modul direct, sau invers de inserare a primei secvene
start transfer (vezi mai sus importana proprietilor electrice ale poriunilor adiacente primei
scevene start transfer), sau prezena, respectiv absena secvenei de clivare prin semnal-peptidaz.

Prelucrarea proteinelor sintetizate n RE
Preocuparea RE pentru proteinele care fac interesul su nu se rezum doar la biosinteza
lanului polipeptidic i eliberarea sa n lumen, sau inserarea n membran. RE i asum mai departe
i prelucrarea lanurilor polipeptidice, prelucrare care nseamn pe de o parte modificarea chimic la
unele resturi ale aminoacizilor, iar pe de alt parte asistarea proteinelor pentru o crect mpachetare,
adic pentru adoptarea unei conformaii corecte, funcionale. La nivelul RE se petrec o serie de
transformri asupra proteinelor care au loc concomitent cu traducerea (modificri co-traducere),
sau dup terminarea acesteia (modificri post-traducere). O modificare co-traducere despre care
am vorbit deja este aciunea semnal-peptidazei i clivarea peptidei semnal n cazurile existenei
secvenei consens specifice activitii enzimei.
Modificrile co-/post-traducere constituie etape ale fenomenului pe care l numim
maturarea proteinelor. Rolul maturrii proteinelor este att acela de a le aducere n stare
funcional i pentru a asigura sortarea ct i acela de a le direciona ctre locurile din celul crora
le sunt destinate. Procesele de maturare, care ncep la nivelul RE, vor fi continuate i finalizate n
complexul golgian. n cele ce urmeaz, vom prezenta o parte dintre modificrile co-, respectiv post-
traducere, a cror semnificaie este mai bine cunoscut. De menionat c repartizarea proceselor n
una sau alta dintre cele dou categorii nu este pentru toate complet justificat, dovezile fiind uneori
echivoce. Autorul accept riscul ca viitorul s impun revizuirea clasificrilor. Mai mult, sunt unele
procese (cum ar fi formarea punilor disulfurice corecte) care se pot petrece att simultan cu
traducerea, ct i dup terminarea acesteia.

Modificri co-traducere ale lanului polipeptidic
Dr. Mircea Leabu, Dr. Laura Cristina Ceafalan Reticulul endoplasmic, curs pentru studenii n medicin
10
Modificrile co-traducere sunt realizate, dup cum este uor de intuit, la nivelul
transloconului, de regul prin proteine accesorii. Rmne de stabilit n ce msur aceste proteine
sunt doar accesorii, sau particip la nsi structurarea transloconului.
Dintre modificrile co-traducere prima detaliat n cele ce urmeaz este una dintre cele mai
frecvente, care presupune o pregtire laborioas i are efecte majore asupra proprietilor i
comportamentului produsului final, proteina matur.

a) I niierea glicozilrii proteinelor. n RE este iniiat formarea structurilor N-glicozidice,
adic acele structuri glucidice purtate de azotul amidic al asparaginei. Acest lucru se petrece numai
atunci cnd asparagina se afl ntr-o secven consens, cu structura AsnXSer(Thr)
(considerat dinspre captul amino), unde X poate fi oricare dintre aminoacizii uzuali, cu excepia
prolinei. Glicozilarea este realizat de o oligozaharid-transferaz, care citete lanul polipeptidic n
curs de formare pe msur ce acesta iese din porul transloconului. Cnd afl o asparagin n
ambiana menionat, enzima i grefeaz la azotul amidic un oligozaharid (ce reprezint o poriune
dintr-un substrat al ei), cu structura global (GlcNAc)
2
Man
9
Glc
3
i cu o geometrie triantenar, dou
dintre antene fiind terminate cu manoze, cea de a treia cu cele trei glucoze legate una de alta.
Substratul de pe care enzima transfer acest oligozaharid complex este dolicil-difosfo-oligozaharid
(dolPPoligozaharid), inserat prin dolicil n bistratul lipidic. Dac asparagina nu se afl ntr-o
secven consens, oligozaharid-transferaza rmne indiferent. Trebuie menionat c dolPP
oligozaharidul este sintetizat de celul la nivelul membranei RE, cu mare consum energetic, prin
adugarea pas cu pas a glucidelor (adic unul dup altul) ncepnd cu GlcNAc. Acest lucru justific
afirmaia facut mai sus i anume ca acest proces de glicozilare este unul cu o pregtire laborioas.
Iniial glucidele se adaug la dolicil-difosfat pe faa citoplasmatic a membranei, pn la primele
cinci manoze, dup care compusul intermediar este flopat, iar sinteza continu secvenial pe faa
luminal a membranei RE, unde, apoi, are loc i transferul oligozaharidului la asparagin. Spun c
trebuie menionat acest lucru deoarece, n ciuda efortului depus n producerea structurii
oligozaharidice, celula pare a se deda la risip, ncepnd s tund parte din glucide, dup ce acestea
ajung pe protein, eliminndu-se n RE cele trei glucoze i o manoz. Tunderea va continua ulterior
n complexul Golgi, unde vor avea loc i glicozilrile finale ale structurilor N-glicozidice, care se
termin de regul cu acizi sialici. Nu se cunoate, n momentul de fa, cu certitudine cte dintre
aceste procese de tundere reprezint modificri co-traducere i cte post-traducere. Dar astzi
cunoatem c aceast paradoxal risip are o nsemntate funcional (vezi mai jos la Asistarea
proteinelor pentru mpachetarea corect).
b) Hidroxilri la nivelul lanului polipeptidic. Au fost evideniate, la unele proteine,
hidroxilri n poziia 4 a unor proline, sau n poziia 5 a unor lizine. Prolil-4-hidroxilaza este este
un heterotetramer
2

2
, n care sunbunitatea este identic cu protein disulfur izomeraza (vezi
mai jos la Asistarea proteinelor pentru mpachetarea corect). Hidroxilrile prolinei i lizinei se
petrec n proteine ale matricei extracelulare (de exemplu n colagen, sau elastin), aceste modificri
asigurnd asamblarea lor sub form fibrilar i n fascicule de fibre pentru corecta structurare a
esuturilor conjunctive. Exist controverse referitor la caracterul co-, sau post-traducere al acestor
hidroxilri.
c) Carboxilarea acidului glutamic n poziia Aceasta modificare este operat de o
protein transmembranar (carboxilaz) al crei sit de activitate este expus pe faa luminal a
membranei RE. Modificarea a fost evideniat la proteine ce particip la coagularea sngelui (de
exemplu la protrombin, fatorii VII, IX i X) i, se pare, n unele proteine ale matricei osoase,
ajutnd la mineralizare.

Modificri post-traducere ale proteinelor
Dr. Mircea Leabu, Dr. Laura Cristina Ceafalan Reticulul endoplasmic, curs pentru studenii n medicin
11
a) Glipiarea este procesul prin care unele ectoproteine sunt ataate mai ferm la bistratul
lipidic prin ceea ce se numete ancor glicofosfatidilinozitolic. Procesul implic o clivare a
peptidei semnal din unele proteine a cror inserare n traslocon a fost n sens invers, cu ataarea
concomitent a captului carboxil nou format la gruparea amino a unei etanolamine aflate n captul
lanului oligozaharidic din glicozil-fosfatidilinozitol. Aadar, ancorarea se face printr-o legtur
amidic. A fost evideniat un mare numr de proteine membranare (ectoproteine) modificate astfel i
faptul c distribuirea lor se face preferenial la nivelul plutelor lipidice. Unul din rolurile acestei
modificri este n direcionarea proteinelor astfel ancorate ctre domeniul apical al membranei n
celulele polarizate. Dei nu exist dovezi n acest sens, se poate specula c ancorarea prin
glicofosfolipid ar putea permite eliberarea acestor proteine prin activarea de fosfolipaze, ca rspuns
la diverse semnale. De altfel, primele evidenieri ale acestor tipuri de modificri au fost fcute la
proteine cu rol n adeziunea celular (NCAM, de la termenul englez Neural Cell Adhesion
Molecule), care apar la nivelul crestei neurale n dezvoltarea embrionar, ceea ce poate susine o
asemenea ipotez. Eliberarea NCAM din legtura la ancor ar putea permite celulelor s-i schimbe
partenerul de contact (celulele cu care se asociaz), ceea ce este de ateptat s se ntmple n
dezvoltarea embrionar.

Asistarea proteinelor pentru mpachetarea corect
Ca i tunderea structurilor oligozaharidice (amintit mai sus i descris detaliat mai jos),
apartenena acestor procese de asistare la prelucrrile co-, sau post-traducere este n dezbatere, cel
mai probabil avnd loc i concomitent cu i dup terminarea traducerii. Asistarea este realizat de
proteine numite aperone (chaperone). Aadar, aperonele sunt proteine specializate n a asista
lanurile polipeptidice nou sintetizate pentru adoptarea conformaiei corecte, acea conformaie care
asigur funcionalitatea macromoleculelor. Dei mecanismele lor de aciune sunt departe de a ne fi
cunoscute, pentru unele modul de principiu al operrii este cvasi-unanim recunoscut. O prim
aperon pe care o discutm este calnexina. Calnexina este o protein integral, transmembranar,
unipas, tip I din membrana RE, cu o mas molecular de 90kD i un endodomeniu (domeniul
carboxi-terminal al lanului polipeptidic, expus pe faa citosolic a membranei) mic format din 90 de
aminoacizi. Ectodomeniul ei, abundent (50kD), are un domeniu ce leag calciu i prezint activitate
de tip lectinic, cu determinant al secificitii glucoza. Dovedirea activitii ei aperonice ne-a fcut
s nelegem de ce tunderea parial a glucidelor de pe structurile inserate pe asparagin iese de sub
spectrul risipei. Calnexina, prin ativitatea ei de tip lectinic, leag structurile N-glicozidice rmase cu
o singur glucoz prin tunderea efectuat de glucozidazele I i II aflate n lumenul RE. Prin aceast
interaciune, calnexina menine precursorul de glicoprotein legat, asistndu-l n adoptarea unei
conformaii corecte pentru stadiul n care se afl. Desprinderea din interaciunea cu calnexina nu se
face dect dup realizarea acestui scop, prin aciunea unei glucozidaze aflate n lumenul RE. Mai
mult, n cazul n care accidental glucoza este clivat (fenomen catalizat tot de glucozidaza II) nainte
de terminarea rolului calnexinei, macromolecula nu poate prsi RE ctre complexul Golgi, ci este
reglucozilat de o glucozil-transferaz (UDP-glucoz:glicoprotein glucozil-transferaz), care
transfer glucoza de pe substratul uridil-difosfo-glucoz i asigur reataarea glicoproteinei la
calnexin pentru definitivarea procesului de asistare. De menionat c activitatea calnexinei este
dependent att de Ca
2+
, ct i de ATP, adic este consumatoare de energie. Nu ne sunt cunoscute
nc mecanismele prin care celula (n spe RE) controleaz calitatea mpachetrii, lucru valabil i
pentru celelalte activiti aperonice evideniate n lumenul RE.
Am menionat, cnd am descries ultrastructura RE, c lumenul organitului este echivalentul
spaiului extracelular. Asta nseamn c n lumenul RE sunt condiii oxidante, ceea ce favorizeaz
realizarea de puni disulfurice. ntruct n structura cuaternar a proteinelor punile disulfurice nu se
stabilesc neaprat ntre dou cisteine n succesiunea n care ele apar n secvena primar (uneori,
dimpotriv, ele trebuie s se formeze ntre cisteine din zonele amino-terminale i cisteine din zonele
Dr. Mircea Leabu, Dr. Laura Cristina Ceafalan Reticulul endoplasmic, curs pentru studenii n medicin
12
carboxi-terminale), realizarea acestor legturi trebuie bine controlat. Acest lucru se face prin
asistarea printr-o enzim numit protein disulfur izomeraz. Aceast enzim leag tranzitoriu
cisteinele din proteina nscnd, sau desface punile incorecte din proteinele a cror traducere s-a
terminat i ajut la realizarea punilor SS corecte.
Paradoxal este faptul c pentru aperona cu cea mai larg sfer de aciune nu cunoatem
aproape nimic din detaliile aciunii sale (sau poate aceast situaie se datoreaz tocmai sferei prea
largi de aciune). Este vorba de aperona numit protein de legare (prescurtare BiP, de la
Binding Protein). Aceast protein, care se pare c este responsabil i pentru controlul
deschiderii i nchiderii porului transloconului, complexeaz noile proteinele translocate i nu le
elibereaz dect atunci cnd mpachetarea lor este corect definitivat. Mai mult, dac proteina
eueaz n adoptarea conformaiei corecte, BiP o menine la translocon, care, prin asocierea cu
proteine accesorii diferite de cele de internalizare, expulzeaz lanul polipeptidic ratat n citosol,
unde este poliubiquitinat i intr ntr-un proces de degradare proteolitic n proteasom, organit de
degradare a proteinelor citosolice devenite inutile.
Deoarece procesele de asistare a mpachetrii corecte a proteinelor sunt eseniale pentru
producerea de macromolecule funcionale (cu structur cuaternar corect), celula i-a creat
mecanismele de control necesare desfurrii eficiente a acestora.

Stresul reticulului endoplasmic
Acumularea de proteine incorect mpachetate, nefuncionale n lumenul reticulul
endoplasmatic perturb homeostazia organitului. n faa unei astfel de situaii de stres, RE
reacioneaz printr-o cascad de evenimente cunoscute sub denumirea de rspuns al proteinelor
eronat mpachetate (unfolding protein response = UPR) n ncercarea de a se adapta la noile
condiii prin restabilirea homeostaziei. Prima reacie const n reprimarea translaiei urmat de
activarea unor ci de semnalizare care conduc la creterea produciei de aperone. Mecanismele de
semnalizare sunt iniiate n lumenul RE prin activarea unor proteine transmembranare cu rol n
controlul mpachetrii. Prin ectodomeniu (domeniul luminal) aceste proteine semnalizeaz i induc
fosforilarea endodomeniului, care i activeaz un sit enzimatic endonucleazic. Activitatea
endonucleazic astfel indus prelucreaz un pre-ARNm existent n citoplasm i, prin eliminarea
intronului, produce un ARNm funcional. Acest ARNm este tradus n proteine de activare a genelor
specifice aperonelor ce ajung i funcioneaz n lumenul RE. Genele sunt transcrise la ARNm
corespunztor, care va fi folosit pentru producerea de aperone, prin mecanismele descrise mai sus
(specifice biosintezei proteinelor la nivelul RE). Noile aperone astfel sintetizate, asigur nevoia
crescut de molecule de asistare a mpachetrii proteinelor n lumenul RE, eficientiznd procesele.
n situaia n care RE este ns supus unui stres cronic, sunt activate mecanismele de alarm i n
final de moarte celular programat (apoptoz).
Stresul reticulului endoplasmic a fost intens studiat ntruct se pare c el poate contribui, cel puin
parial, la dezvoltarea unor boli grave cum sunt bolile neurodegenerative (boala Alzheimer), diabetul
zaharat de tip II sau diferite forme de cancer. Studii recente au demonstrat ca stresul reticulului
endoplasmic poate conduce i la alterarea metabolismului lipidic i inducerea steatozei hepatice
ntruct anumite componente ale sistemului de semnalizare prin UPR intervin i n reglarea
metabolismului lipidic prin creterea sintezei anumitor enzime implicate n lipogenez. Datele
obinute pn n prezent sugereaz existena unei asoceri strnse ntre stresul RE i dislipidemii sau
obezitate.
Aadar, atenuarea stersului RE reprezint la ora acual una dintre potenialele inte terapeutice
pentru o serie de boli pentru care, pn n momentul de fa, nu au fost identificate posibiliti
terapeutice eficiente.

Sortarea i transportul ctre aparatul Golgi
Dr. Mircea Leabu, Dr. Laura Cristina Ceafalan Reticulul endoplasmic, curs pentru studenii n medicin
13
Aa cum am menionat mai sus, procesele prin care proteinele nou formate sunt prelucrate
fac parte din fenomenul denumit maturare. Maturarea ncepe la nivelul RE, dar este continuat i,
eventual, definitivat la nivelul complexului Golgi. Spun eventual, deoarece n unele cazuri, pentru
anumite proteine de secreie, completa maturare se realizeaz n momentul secreiei, sau chiar dup
aceea, n spaiul extracelular, de regul prin clivri proteolitice. Procese de maturare se petrec i
pentru sfingolipide; transformarea ceramidelor n sfingomielin, sau n glicolipide are loc tot n
aparatul Golgi.
Pentru realizarea acestor procese, este necesar un trafic de (macro)molecule ntre RE i
complexul golgian. Traficul nu se face pentru macro(molecule) individuale ci pentru structuri care
aglomereaz componentele ce trebuie tranzitate. Acest trafic se face prin vezicule. Intermedierea
implic existena unor structuri veziculo-tubulare (prescurtat VTC, de la Vesicular Tubular
Clusters), cunoscute i sub numele ERGIC (de la Endoplasmic Reticulum-Golgi Intermediate
Compartment). Prezena acestor structuri a fost evideniat n preparatele de microscopie
electronic. n acest paragraf vom descrie ceea ce se cunoate referitor la acest proces de transport.
Transportul ntre RE i Golgi respect un mecanism tip suveic. Prin acest mecanism se
rezolv pe de o parte exportul de substan destinat a ajunge n alte locaii din celul (calea
anterograd), iar pe de alt parte reciclarea componentelor necesare relurii procesului, ca i
returnarea componentelor rezidente n RE (calea retrograd), adic a acelor componente care scap
accidental n microveziculele de transport n timpul selectrii i segregrii materialului exportat,
nmuguririi i desprinderii structurilor de transport din membrana RE. Acest mecanism a fost
elegant evideniat prin tratamenul celulelor cu metabolitul fungic brefeldin A. Brefeldina A are ca
efect disiparea aparatului Golgi n celul. Explicaia const n capacitatea acestei substane de a
inhiba specific transportul anterograd dintre RE i Golgi, n timp ce transportul retrograd este
neafectat. Acest lucru conduce la vrsarea cisternelor golgiene n RE, ceea ce nu s-ar putea
ntmpla, dac nu ar exista transportul retrograd dinspre Golgi, nspre RE.
Selectarea i segregarea materialului destinat exportului ctre aparatul Golgi se face la
nivelul unor cisterne ale RE cu o structur specific. Aceste cisterne sunt denumite elemente de
tranziie, sau reticul endoplasmic tranziional i se caracterizeaz prin faptul c, de regul, pe
unul din versante prezint ribozomi ataai, iar pe cellalt vezicule ce nmuguresc. Aceti muguri
veziculari prezint pe faa citoplasmatic a membranelor lor un nveli proteic format din proteine
de nveli II, sau coatomeri II (prescurtare COP II, COP de la COat Proteins; II de la faptul c
au fost identificate dup COP I, alte specii proteice ce structureaz nveliuri la membrane, despre
care vom vorbi puin mai jos). COP II opereaz att n selecia i segregarea componentelor de
transportat n zonele supuse nmuguririi, ct i n procesele de desprindere a veziculelor de transport.
Procesele de transport anterograd, facilitate de COP II, sunt reglate de Sar1 protein cu rol de
comutator molecular din clasa proteinelor G mici, denumite i proteine G monomerice (vezi la
Semnalizare celular). Proteinele G mici sunt cele care controleaz i intirea corect a
membranelor de destinaie de ctre veziculele de transport. Veziculele odat desprinse i pierd
nveliul i fuzioneaz unele cu altele, sau cu VTC (sistemul veziculo-tubular) adiacent. Fuzionarea
este mediat de proteine numite SNARE (de la Soluble N-ethylmaleimide-sensitive Attachment
protein REceptor): v-SNARE (v de la vesicle) din membrana viziculelor, respectiv partenerul de
interaciune din membrana de destinaie t-SNARE (t de la target = int). Aceste dou forme de
protein SNARE sunt eseniale n asamblarea aparatului de fuziune a microveziculelor cu
membranele int.
Procesele de selecie i segregare sunt continuate n VTC unde se formeaz i mugurii
nvelii n COP I, care prin desprindere dau natere veziculelor de transport retrograd. Acest
transport este reglat de Arf1, alt protein G monomeric. Tehnicile de imunocitochimie
ultrastructural au evideniat c n mugurii nvelii n COP I sunt selectate proteinele care trebuie
reciclate la RE, n timp ce proteinele solubile ce trebuie direcionate ctre Golgi sunt absente.
Dr. Mircea Leabu, Dr. Laura Cristina Ceafalan Reticulul endoplasmic, curs pentru studenii n medicin
14
Mecanismele prin care se face sortarea n VTC nu ne sunt deocamdat cunoscute. Ct privete
selecia proteinelor ce trebuie returnate la RE, aceasta are la baz motive de aminoacizi cu rol de
semnal. Au fost, pn n momentul de fa, descoperite urmtorele motive semnal de reinere, sau
returnare n RE: (i) -Lys-Asp-Glu-Leu-COO
-
, deci KDEL (evident n captul carboxi-terminal, dup
cum rezult din descriere) pentru proteinele solubile n lumen, (ii) motivul di-lizin (KK) pentru
proteinele transmembranare tip I (aflat n endodomeniul carboxi-terminal) i (iii) motivul di-
arginin (RR) pentru proteinele transmembranare tip II (aflat n endodomeniul amino-terminal de
aceast dat). Aceste motive opereaz pe de o parte n meninerea n RE a proteinelor rezidente,
neimplicate n transportul ctre Golgi, dar i, pe de alt parte, n returnarea proteinelor ce asigur
selecia, segregarea i transportul n cauz, sau a celor care pot scpa accidental n microveziculele
de transport.
Mai departe, modul n care se face transportul ntre VTC i reeaua cis-golgian nu este
elucidat. Dac acesta se face prin vezicule ce se desprind din VTC, sau dac acest sistem nsui se
transform n reeaua cis-golgian i, apoi n prima cistern a feei cis-Golgi, rmne o problem n
studiu.
La nivelul cisternelor Golgi au fost evideniate structuri nvelite n COP I a cror micare
este reglat de Rab6, o alt protein G monomeric. Aceste structuri pot fi o a doua cale de
transport retrograd Golgi-RE, sau o cale de transport ntre cisternele acestui organit. Aceasta este
ns o problem ce trebuie abordat la discuia de acolo.

Consideraii asupra biogenezei membranelor

Am afirmat, cnd am definit RE, c principala lui menire este aceea de a biosintetiza
molecule i macromolecule eseniale pentru organizarea i funcionarea celulei. Este acum
momentul s justificm, n mai mare cunotin de cauz, aceast afirmaie.
Am vzut c RE sintetizeaz lipide membranare i are mecanismele de a le distribui ntr-un
bistrat asimetric i heterogen. Am vzut, de asemenea, c RE produce, ntre alte proteine, pe cele
transmembranare, n toat diversitatea lor (vezi la Proteinele membranare). Asta nseamn, de
fapt, c la nivelul RE se pun bazele structurrii unor noi suprafee de membran. Din parcurgerea
aspectelor pe care le cunoatem despre RE, am remarcat c nu la toate componentele noilor
membrane, a cror biogenez este astfel iniiat, structurile sunt definitivate la nivelul RE.
Maturarea acestora continu n aparatul Golgi (definitivarea glicozilrii structurilor N-glicozidice,
formarea structurilor O-glicozidice, transformarea ceramidelor n sfingomieline, sau glicolipide,
producerea glicozaminoglicanilor din structura proteoglicanilor membranari i altele), astfel nct
traficul dintre RE i complexul Golgi este parte component din procesul de biogenez a
membranelor. ns membranele trebuie s ajung acolo unde sunt menite s funcioneze (adic la
diversele organite, sau n membrana celular. Ei bine, pentru aceasta este nevoie de continuarea
aventurii turistice a noilor membrane ntr-un mod direcionat i riguros controlat de celul, ceea ce
se i ntmpl. Numai dup ce membranele produse de novo ajung la destinaie, procesul biogenezei
lor se poate considera ncheiat, ncepnd un altul, acela de reciclare.
Aadar, prin biogeneza membranelor trebuie s nelegem totalitatea proceselor de biosintez
i maturare a componentelor acestora, de asamblare corect a lor n noua structur i de transportare
a lor n locurile corespunztoare din celul. Aceste procese nu se petrec neaprat secvenial ci
amalgamat, astfel nct ultimile retuuri se pot petrece chiar n momentele, sau dup ajungerea
noilor structuri la destinaie.

Abundena i distribuia intracelular a RE

Reticulul endoplasmic este un organit ubicuitar. Rolul su n biogeneza membranelor l face
indispensabil organizrii i funcionrii celulelor. Chiar i n cazul eritrocitului (lipsit de organite),
Dr. Mircea Leabu, Dr. Laura Cristina Ceafalan Reticulul endoplasmic, curs pentru studenii n medicin
15
reticulul endoplasmic a fost prezent i a activat n timpul diferenierii precursorilor, pn n
momentul maturrii elementului circulant. Dac, de regul, RE conine cel puin jumtate din
membranele dintr-o celul, raportul dintre componenta rugoas i cea neted variaz n funcie de
tipul de celul. Exist celule n care RER este preponderent (celule specializate n sinteza i secreia
de proteine; exemplul tipic l formeaz celulele acinare pancreatice), sau celule n care REN este
preponderant (celule specializate n sinteza i secreia de hormoni steroidici; de exemplu celulele
zonei corticale a glandei suprarenale, sau celulele Leydig din testicul). Un alt caz (reprezentat prin
hepatocite de exemplu) este acela al celulelor n care raportul RER/REN este aproximativ unitar. Ct
privete distribuia intracelular a RE aceasta poate fi difuz, cum ar fi n hepatocite, enterocite, sau
polarizat, cum este n cazul celulelor acinare pancreatice, unde RER este localizat n jumatatea
bazal a celulelor, polul apical al acestora fiind ocupat de vacuolele de secreie.

Rezumat

Reticulul endoplasmic este un organit delimitat de endomembrane cu o dubl structurare de
reticul endoplasmic rugos, respectiv reticul endoplasmic neted. El este implicat n biosinteza
propriilor componente, a componentelor membranare (lipide, proteine, componenta glucidic), dar
i a componentelor celorlalte organite neautonome (aparat Golgi, lizosomi, sistem endosomal) i a
componentelor destinate exportului din celul. n ndeplinirea funciilor sale coopereaz cu
ribosomul (n amonte) i complexul Golgi (n aval) ntr-un mod eficient, prin mecanisme bine
elaborate i controlate. n colaborarea din aval este necesar un permanent schimb de substan, ce se
face printr-un transport vesicular despre care multe detalii ateapt s fie elucidate. Dealtfel n
fiecare din procesele n care reticulul endoplasmic este implicat mai exist i pete albe, care ateapt
s fie eboate, sau crochiuri care ateapt s fie finalizate (mecanismul de integrare a proteinelor
transmembranare n bistratul lipidic la nivelul transloconului, mecanismele de selectare i segregare
a componentelor de transportat ctre Golgi, pentru a le denumi doar pe cele mai actuale sub aspectul
interesului comunitii stiinifice).

Bibliografie specific

Vance JE, Vance DE. (2004) Phospholipid biosynthesis in mammalian cells. Biochem Cell Biol 82, 113-128.

Daleke DL. (2003) Regulation of transbilayer plasma membrane phospholipid asymmetry. J lipid Res 44, 233-242.

Johnson AE, van Waes MA. (1999) The translocon: a dynamic gateway at the ER membrane. Annu Rev Cell Dev Biol
15, 799-842.

Nikonov AV, Kreibich G. (2003) Organization of translocon complexes in ER membranes. Biochem Soc Trans 31,
1253-1256.

Martin S, Parton RG. (2006) Lipid droplets: a unified view of a dynamic organelle. Nat Rev Mol Cell Biol. 7, 373-378.

Hammond C, Braakman I, Helenius A. (1994) Role of N-linked oligosaccharide recognition, glucose trimming, and
calnexin in glycoprotein folding and quality control. Proc Natl Acad Sci USA. 91, 913-917.

Lippincott-Schwartz J, Yuan LC, Bonifacino JS, Klausner RD. (1989) Rapid redistribution of Golgi proteins into the
ER in cells treated with brefeldin A: evidence for membrane cycling from Golgi to ER. Cell. 56, 801-813.

Leabu M. (2006) Membrane fusion in cells: Molecular machinery and mechanisms. J Cell Mol Med. 10, 423-427.

Basseri S, Austin RC (2011) Endoplasmic Reticulum Stress and LipidMetabolism: Mechanisms and Therapeutic
Potential. Biochemistry Research International 2012: doi:10.1155/2012/841362

Dr. Mircea Leabu, Dr. Laura Cristina Ceafalan Reticulul endoplasmic, curs pentru studenii n medicin
16
Xu C, Bailly-Maitre B, Reed JC (2005) Endoplasmic reticulum stress: cell life and death decisions J Clin Invest.
115(10):26562664.

Eizirik DL, Cardozo AK, Cnop M (2008) The Role for Endoplasmic Reticulum Stress in Diabetes Mellitus Endocrine
Reviews 29(1):4261

Martin S, Parton RG. (2006) Lipid droplets: a unified view of a dynamic organelle. Nat Rev Mol Cell Biol. 7(5):373-8.

Bibliografie general

Alberts B, Johnson A, Lewis J, et al. Molecular Biology of the Cell. 4
th
edition. New York: Garland Science; 2002.