TEMA 3.

LA TRASDUCCIN DE LA ENERGA LUMNICA POR LAS CLULAS: LA FASE LUMINOSA

DE LA FOTOSNTESIS.
3.1. Conceptos bsicos en fotosntesis.
3.2. Migracin fotnica y electrnica: centros de reaccin fotosintticos.
3.3. Generacin de un gradiente de protones y ADPH por los fotosistemas I y II en la
fotosntesis productora de O2. Herbicidas.
3.4. Acoplamiento del gradiente de protones a la sntesis de ATP: ATP sintasa de los
cloroplastos y fotofosforilacin cclica.
3.5. Estructura molecular y funciones de los sistemas antena de luz asociados a los centros de
reaccin fotosintticos.

3.1. Conceptos bsicos en fotosntesis.




























Ecuacin fotosinttica neta con:
1) H
2
S como donador de electrones:
Luz
CO
2
+ 2 H
2
S (CH
2
O) + 2 S + H
2
O
2) H2O como donador de electrones:
Luz
CO
2
+ H
2
O (CH
2
O) + O
2

Anualmente la Tierra fija en carbohidratos y otras materias orgnicas ms de 1010 toneladas
de C.
Si toda la materia orgnica obtenida por fotosntesis en un ao se expresase como azcar de
caa y este se compactase en cubos de 1,25 cm de lado se podra formar una fila cuya longitud
sera aprox. igual a la distancia de la Tierra al ex-planeta Plutn (2,6 x 10
10
km).
Si cesase la fotosntesis todos los seres vivos superiores se extinguiran de la Tierra en unos
25 aos. La extincin de los dinosaurios se racionaliza en trminos de una versin suavizada de
tipo catstrofe fotosinttica.


























3.2. Migracin fotnica y electrnica:
centros de reaccin fotosintticos.
Estructura del fotosistema II: Al menos 10
cadenas polipeptdicas, ms de 30 molculas
de clorofila, un in hierro no-hemo y cuatro
iones manganeso.
Las subunidades D1 y D2 se representan en rojo y en azul y las numerosas molculas de
clorofila unidas, en verde. El par especial y el centro de manganeso (sitio de liberacin del
oxigeno) estn situados hacia el lado luminal de la membrana del tilacoide.
FOTOSISTEMA II
El fotosistema II, una enorme asociacin transmembrana de mas de 20 subunidades, cataliza la
transferencia de electrones inducida por la luz desde el agua hasta la plastoquinona. Este
aceptor de electrones es muy similar a la ubiquinona, un componente de la cadena
mitocondrial de transporte de electrones. La plastoquinona pasa cclicamente de una forma
oxidada (Q) a una reducida (QH
2
, plastiquinol). La reaccin global catalizada por el fotosistema
II es:
2Q+2 H
2
O O
2
+ 2 QH
2

Los electrones de QH
2
estan a un potencial redox ms alto que el del agua.
El fotosistema II conduce la reaccin en una direccin termodinmicamente desfavorable,
porque utiliza la energa libre de la luz.
Esta reaccin es similar a otra que cataliza el sistema bacteriano, donde una quinona se
convierte desde su forma oxidada a su forma reducida. El fotosistema II es bastante parecido
al centro de reaccin bacteriano.
El nucleo del fotosistema II lo constituyen D1 y D2, un par de subunidades semejantes de 32 kd
que atraviesan la membrana tilacoidal. Estas subunidades son homologas a las cadenas L y M
del centro de reaccin bacteriano. A diferencia del sistema bacteriano, el fotosistema II
contiene un gran numero de subunidades adicionales que se unen a otras clorofilas e
incrementan la eficacia de la absorcin de la energa de la luz y su transferencia al centro de
reaccin.
La fotoqumica del fotosistema II comienza con la excitacin de un par especial de dos
molculas de clorofila unidas a las subunidades D1 y D2
Debido a que las molculas de clorofila a del par especial absorben la luz a 680 nm,
normalmente a este par se le conoce como P680.
Al ser excitado, el P680 transfiere rpidamente un electron a la feofitina que se encuentra en
su proximidad. Desde esta, el electron transfiere primero a la plastoquinona unida
permanentemente al centro Q
A
y de aqu a la plastoquinona desplazable dentro del centro Q
B
.
Este flujo electrnico es totalmente anlogo al que ocurre en el sistema bacteriano. Con la
llegada de un nuevo electron y la captura de dos protones, se reduce a QH
2
la plastoquinona
de intercambio. En este momento la energa de dos fotones se ha almacenado con seguridad y
eficacia en el potencial reductor de QH
2
.
La principal diferencia entre el sistema bacteriano y el fotosistema II radica en el origen de los
electrones necesarios para neutralizar la carga positiva que se genera en el par especial. El
P680+ es un oxidante muy fuerte que extrae electrones de las molculas de agua unidas al
centro de manganeso. Aparentemente la seleccin evoluntiva del manganeso se debe a su
multiplicidad respecto a sus estados de oxidacin ( Mn
(2,3,4,5,+)
y a que forma enlaces fuertes
con los compuestos que







cada molecula de plastoquinona proceden del estroma y los cuatro protones generados en la
oxidacin del agua se liberan en el lumen. Esta distribucin de protones ocasiona un gradiente
de protones a travs de la membrana del tilacoide que se caracteriza por la existencia de mas
protones en el lumen del tilacoide que en el estroma.
El fotosistema II y el fotosistema I estn conectados mediante el citocromo bf, un complejo
anlogo al complejo Q-citocromo c oxidorreductasa mitocondrial.
Se liberan 4 protones en el lumen del
tilacoide.






Estructura del fotosistema II
Al menos 10 cadenas polipeptdicas, ms de
30 molculas de clorofila, un in hierro no-
hemo y cuatro iones manganeso.




FOTOSISTEMA I
Es un complejo transmembrana constituido por 14 cadenas polipeptidicas, multiples protenas
asociadas y cofactores, cataliza la etapa final de las reducciones de la fase luminosa.
13 cadenas polipeptdicas, ms de 60 molculas de clorofila, una quinona (vitamina K1) y tres
complejos Fe-S. (>800 kDa)


Los pigmentos auxiliares absorben luz que se desplaza al centro de reaccin por FRET
(transferencia de energa de resonancia electrnica) [Migracin fotnica NO electrnica]: D,
donador (h) A, aceptor.
Separacin de cargas fotoinducida:
El proceso qumico clave en los centros de reaccin fotosintticos.











Para que se produzca FRET son necesarias dos condiciones:
1) Que la molcula que absorbe fotones (donador) tenga un espectro de emisin que solape
con el espectro de absorcin de la molcula a la que transfiere la energa (aceptor).
2) Que ambas molculas se encuentren muy prximas entre s, como mximo a una distancia
de 2MR
0
(R
0
suele ser menor o igual a 6 nm).
La eficiencia de FRET (E) mide la fraccin de fotones absorbidos por el donador que son
transferidos al aceptor: E = r
-6
/(R
0
-6
+r
-6
)
Donde: r es la distancia entre donador y aceptor y R
0
es la distancia a la que la eficiencia de
FRET es del 50%.
- La absorcin de luz por la clorofila induce la transferencia de electrones.
Estructura de la clorofila a Absorbida en calor







































Para evitar la recombinacin de cargas, los tres factores en la estructura del centro de reaccin
operan conjuntamente para suprimir casi por completo esta recombinacin de cargas.
Primero, el prximo aceptor de electrones Q
A
se encuentra a menos de 10 de distancia de
BPh
-
, de modo que el electron se transfiere rpidamente lejos del par especial.
Segundo, uno de los hemos de la subunidad citocromo se encuentra a menos de 10 del par
especial y asi, la carga positiva de P960 queda neutralizada por la transferencia del electron
procedente del citocromo reducido..
Por ultimo la transferencia del electron desde BPh
-
al par especial es notablemente lenta; la
transferencia es tan favorable termodinmicamente que tiene lugar en la regin inversa donde
las volcidades de transferencia de electrones resultan mas lentas .
Asi pues, la transferencia del electron desde BPh
-
a Q
A
ocurre de modo eficiente.
Un par especial de clorofilas inicia la separacin de cargas y migracin electrnica (transporte
de electrones) a las quinonas.
La absorcin de la luz por el par especial (P960) provoca la rpida transferencia de un electron
desde este par hacia la bacteriofeofitina (BPh), produciendo una separacin de carga
fotoinducida (pasos 1 y 2). El asterisco de P960 significa que est excitado.
El posible retorno del elecron desde la feofitina al par especial oxidado se evita al rellenar el
hueco en el par especial con un electron procedente de la subunidad citocromo y transfirendo
el electron de la feofitina a una quinona QA alejada del par especial (pasos 3 y 4).
QA pasa el electron a QB. La reduccin de la quinona QB del lado periplasmico de la membrana
ocasiona la captura de dos protones del espacio periplasmico (pasos 5 y 6). La quinona
reducida se puede desplazar a la reserva de quinonas de la membrana (paso 7).

La quinona reducida (QH2) se reoxida a Q mediante el Complejo III de la cadena de transporte
de electrones respiratoria (Q-citocromo c oxidorreductasa).
Un citocromo c del espacio periplsmico transfiere los electrones de la quinona reducida al
citocromo del centro de reaccin.
La quinona se protona pues desde el lado citoplasmtico y libera los protones hacia el espacio
periplsmico.
Este ciclo Q genera un gradiente de protones que se acopla a la sntesis de ATP por la ATP
sintasa.

3.3. Generacin de un gradiente de protones y ADPH por los fotosistemas I y II en la
fotosntesis productora de O2. Herbicidas.

Flujo de los electrones a travs del
fotosistema II
La absorcin de la luz induce la
transferencia de electrnica desde
P680 hacia la plastoquinona
intercambiable por una via de
transferencia de electrones. La carga
positiva de P680 queda neutralizada
por el flujo electronico desde las
molculas de agua unidas al centro
de manganeso.

























Estructura de la ferredoxina (centro 2Fe-2S):
La ferredoxina reducida transfiere los electrones (uno a uno) a la flavina (FAD) de la
ferredoxina-ADP+ reductasa para generar ADPH: Estructura de la Reductasa

























Flujo electrnico desde el fotosistema I a la
ferredoxina.
La absorcin de la luz induce la transferencia
electronica desde el P700 a travs de una via de
transferencia electrnica formada por una molecula
de clorofila, una molecula de quinona y tres
agregados 4Fe4S para finalizar en la ferredoxina. La
carga positiva del P700 se neutraliza mediante la
transferencia de un electron desde la plastocianina.

Herbicidas:
Muchos de los herbicidas comerciales son inhibidores de la fotosntesis a nivel de los
fotosistemas I o II.
Los inhibidores del fotosistema II bloquean el flujo de electrones.
Por ejemplo, diurn y atrazina se unen a la QB de la subunidad D1 y bloquean la formacin del
plastoquinol.
Los inhibidores del fotosistema I producen un desvio anmalo de los electrones.
Por ejemplo, paraquat que captura los electrones y genera ROS.

3.4. Acoplamiento del gradiente de protones a la sntesis de ATP: ATP sintasa de los
cloroplastos y fotofosforilacin cclica.
Localizacin de los componentes de la fase lumnica de la fotosntesis en las membranas
tilacoidales:




















Experimento de A.
Jagendorf, 1966.
Demostracin de la produccin de ATP acoplado a un gradiente de H
+
a travs de la membrana
tilacoidal.







La ATP sintasa de los cloroplastos
(complejo CF
1
-CF
0
) es muy
parecida a la mitocondrial y a la
de procariotas. CF
0
= canal de H
+
;
CF
1
= sntesis de ATP. La secuencia
de aminocidos de la subunidad
de la CF
1
de cloroplastos de maiz
tiene ms del 60% de homologa
con la mitocondrial humana.



- Comparacion de la fotosntesis con la
fosforilacion oxidativa.

La transferencia electrnica inducida por la luz
hace penetrar a los protones en el lumen del
tilacoide. El exceso de protones fluye al
exterior del lumen a travs de la ATP sintasa
generando ATP en el estroma.
En la fosforilacion oxidativa, el flujo de los
electrones por la cadena de transporte
electrnico bombea los protones hacia el
exterior de la matriz mitocondrial. El exceso
de protones que se acumula en el espacio
entre las membranas regresa a la matriz
mitocondrial a travs de la ATP sintasa
generando ATP en la matriz.








Balance global de las reacciones de la fase luminosa de la fotosntesis:
Fotosistema II: absorcin de 4 fotones, 1 molcula de O
2
, 2 de QH
2
y liberacin de 4 H
+
en el
lumen del tilacoide.
Ciclo Q del complejo bf: oxidacin de 2 molculas de plastoquinol (QH
2
) y liberacin de 8 H
+
en
el lumen.
Fotosistema I: absorcin de 4 fotones y generacin de 4 molculas de ferredoxina reducida.
Ferredoxina-ADP
+
reductasa: 2 molculas de NADPH/4 molculas de ferredoxina reducida.
Reaccin neta:
2 H
2
O + 2 NADP+ + 10 H
+
estroma
O
2
+ 2 NADPH + 12 H
+
lumen

[+ 3 molculas de ATP/12 H
+
lumen
]

Fotofosforilacin cclica:
1 molcula de ATP/2 fotones absorbidos. No se produce ADPH.

3.5. Estructura molecular y funciones de los sistemas antena de luz asociados a los centros de
reaccin fotosintticos.
Los pigmentos auxiliares absorben luz que se desplaza al centro de reaccin por FRET
(transferencia de energa de resonancia electrnico) [Migracin fotnica O electrnica]:

Diferencias entre clorofilas.

Los complejos captadores de luz de los cloroplastos contienen clorofilas y carotenoides
auxiliares con el objetivo de aumentar la eficiencia de captacin de fotones en el visible (zona
de mayor tasa de irradiacin en la Tierra: 450-650 nm).
La clorofila b se diferencia de la clorofila a en que tiene un grupo formilo en lugar de un metilo.
Esta diferencia desplaza los dos
picos de absorcin mxima
hacia el centro de la regin
visible. La clorofila b absorbe
con mas eficacia la luz con
longitudes de onda entre 450 y
500 nm.










Los
ficobilis
omas de
cianoba
cterias (algas verde-azuladas) y de algas rojas son unos sistemas antena luminca ms
sofisticados y eficientes en todo el intervalo del visible:
Estructura y espectro de la ficoeritrina (subunidad del ficobilisoma) que tiene un pigmento de
ficoeritrobilina unido a una Cys. Los ficobilisomas son polmeros de ficobiliproteinas.


Los ficobilisomas contienen cientos de bilinas.
La ficocianobilina y la ficoeritrina son dos de las ms frecuentes.
La eficiencia de la transferencia de energa luminca en los ficobilisomas es superior al 95%
debido a la ordenacin de los pigmentos en la estructura 3D del ficobilisoma:




Esquema de un ficobilisoma de (A).
PE: ficoeritrina; PC: ficocianina; AP y
APB: aloficocianinas.