ESCUELA ACADMICO PROFESIONAL DE MEDICINA VETERINARIA
Valores hematolgicos de referencia en caninos (Canis lupus familiaris) de la Ciudad de Cajamarca 2012
T E S I S
Para optar el Ttulo Profesional de
MDICO VETERINARIO
Presentada por la bachiller:
BEATRIZ MILAGROS SNCHEZ RODRGUEZ
Asesor: M.V. M. Sc. Fernando Alberto Oblitas Guayn
Cajamarca Per 2013
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Dedicatoria:
A Dios, por darme la oportunidad de cumplir la anhelada meta de ser Mdico Veterinario. A la paciencia y el apoyo constante de mis padres, Santos Rodrguez y Teodoro Snchez en todas las decisiones que he tomado. A mi hermanita, por su paciencia. A ti.
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Agradecimientos
Un especial agradecimiento al Dr. Fernando Oblitas Guayn por su gua constante en la realizacin de esta Tesis, desde su formulacin como proyecto hasta su culminacin.
A todas las mascotas y sus propietarios que colaboraron para que este trabajo de investigacin se realice.
A mis amigas que se permitieron un tiempo en sus laborares para ayudarme en el trabajo de laboratorio.
Milly
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RESUMEN Se realiz en la provincia y distrito de Cajamarca a 2650 msnm, entre los meses de setiembre a diciembre del ao 2012; donde se muestrearon 120 canes clnicamente sanos, los cuales fueron separados en hembras y machos que a su vez se subdividieron en 4 subgrupos por edades (cachorros, jvenes, adultos y geritricos), obteniendo de ellos 3 ml de sangre recolectados mediante venopuncin ceflica por sistema al vacio en tubos con EDTA, con el objetivo de establecer valores hematolgicos referenciales. Los resultados de los valores sanguneos son, sin distincin de sexo y sin diferenciar edad; nmero de eritrocitos (5,0 - 8,6 10 6 /l), hematocrito (40 - 58%), dosaje de hemoglobina (14,5 - 23,5 gr/dl), ndices hematimtricos: VCM (59,7 - 85,9 fl), HCM (21,4 - 34,8 pg.), CHCM (31,1 - 46,3 g/dl), leucocitos (6,4 - 11,2 10 3 /l); los recuentos de las formas celulares de leucocitos en valores diferenciales de neutrfilos segmentados (62 - 71%), neutrfilos abastonados (0 - 4%), eosinfilos (1 - 5%), monocitos (0 - 3%), linfocitos (23 - 32%) y basfilos (0 - 0%); para los valores absolutos, neutrfilos segmentados (4,3 7,5 10 3 /l), neutrfilos abastonados (0 - 0,3 10 3 /l), eosinfilos (0 0,4 10 3 /l), monocitos (0 0,3 10 3 /l), linfocitos (1,6 - 3,2 10 3 /l) y basfilos (0,0 - 0,0 10 3 /l). Velocidad de sedimentacin (0,3 - 2,7 mm/h) y plaquetas (130 - 200 10 5 /l). Los resultados obtenidos en serie roja, serie blanca, velocidad de sedimentacin, nmero de plaquetas son diferentes a los reportados por Gmez (1988).
This research was taken in Cajamarca city located on 2650 asl, between the months September to December 2012; where was take 120 clinically healthy dogs, were separated in males and females, and subdivided each one in 4 groups by age: puppies, young, adult and geriatrics, colleting 3 ml of blood from cephalic vein using vacutainer system with EDTA tubes, to establisher normal ranges and made references limits to blood values for Cajamarca city, including parameters of reference, for both sex and four ages. The results for erythrocytes (5,0 - 8,6 10 6 /l), hematocrit (40 - 58%), hemoglobin (14,5 - 23,5 gr/dl), MCV (59,7 - 85,9 fl), MCH (21,4 34,8 pg), MCHC (31,146,3 g/dl), leukocytes (6,4 11,210 3 /l), leukocytes shape: segmenter neutrophils (62 - 71%), band neutrophils (0 - 4%), eosinophils (1 - 5%), monocytes (0 - 3%), lymphocytes (23 - 32%) y basophils (0 - 0%); absolutes values: segmenter neutrophils (4.3 - 7.5 10 3 /l), band neutrophils (0 - 0.3 10 3 /l), eosinophils (0 - 0.4 10 3 /l), monocytes (0 0,3 10 3 /l), lymphocytes (1,6 3,2 10 3 /l) y basophils (0,0 0,0 10 3 /l). Erythrocyte sedimentation rate (0,3 2,7 mm/h) and platelets (130 200 10 3 /l). The results obtained for erythrocytes, leukocytes, erythrocyte sedimentation rate and platelets are different to the reported by Gmez (1988). Keywords: Cajamarca, erythrocytes, leukocytes.
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NDICE
DEDICATORIA AGRADECIMIENTO RESUMEN ABSTRACT
CAPITULO I Pgina INTRODUCCIN 1 OBJETIVOS 3 1. Objetivo General 3 2. Objetivos especfico 3 HIPTESIS 3 CAPITULO II 4 MARCO TERICO 4 1. Eritrocitos 4 1.1 Morfologa. 5 1.2 Metabolismo de los eritrocitos 7 1.2.1 Reticulocitos: 8 1.3 Eritropoyesis 8 1.4 Destruccin eritrocitaria 10 2. Volumen globular aglomerado o hematocrito (VGA) 10 2.1 Microhematocrito 11 3. Hemoglobina 12 4. Valores corpusculares medios: 13 4.1 Concentracin media de hemoglobina corpuscular (CMHC) 13 4.2 Hemoglobina corpuscular media (HCM) 14 4.3 Volumen corpuscular medio (VCM) 14 5. Leucocitos 14 5.1 Neutrfilos 16 5.1.1 Funcin 16 5.1.2 Morfologa 17 5.1.3 Variaciones de la morfologa normal 17 7
a. Neutrfilos en banda. 17 b. Cantidad 18 5.2 Linfocitos 18 5.3 Monocitos 19 6.3.1 Funcin 20 6.3.2 Morfologa 20 5.4 Eosinfilos 21 6.4.1 Funcin 21 6.4.2 Cantidad 21 6.4.3 Morfologa 21 5.5 Basfilos 22 6.5.1 Funcin 23 6.5.2 Cantidad 23 6.5.3 Morfologa 23 6. Plaquetas 23 7. Velocidad de sedimentacin 25 8. Cuadros de valores de referencia 27 8.1 Valores de Referencia para Cajamarca 27 Tabla N 01 27 Tabla N 02 28 Tabla N 03 29 Tabla N 04 30 Tabla N 05 31 Tabla N 06 31 8.2 Valores de Referencia de otros autores: 32 Tabla N 07 32 Tabla N 08 33 Tabla N 09 34 Tabla N 10 35 Tabla N 11 35
CAPITULO III 36 MATERIALES Y MTODOS 36 1. Localizacin 36 1.1 Datos Meteorolgicos. 36 8
2. Materiales 37 2.1 Material biolgico 37 2.2 Material de campo 37 2.3 Material de escritorio 37 2.4 Material de laboratorio 37 2.5 Reactivos 38 3. Metodologa 38 3.1 Seleccin de muestras: 38 3.2 Obtencin de muestras: 39 3.3 Del Nmero de Muestras 39 3.4 Parmetros hematolgicos por analizar. 39 3.5 Anlisis estadstico: 40
CAPITULO IV RESULTADOS 41
CAPITULO V DISCUSIN 68
CAPITULO VI CONCLUSIONES 78
CAPITULO VII BIBLIOGRAFA 82 ANEXOS 85
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CAPITULO I
INTRODUCCIN
La hematologa veterinaria se ha convertido en los ltimos aos en una ciencia que interesa cada da ms a los mdicos veterinarios en nuestro pas. Esto se debe por una parte al inters de los profesionales veterinarios por aprender, y poder valerse de una herramienta diagnstica tan prctica como es la hematologa y su aplicacin en la patologa clnica. Es el hemograma, el examen complementario ms solicitado por los veterinarios como mtodo de ayuda para resolver casos clnicos, realizar prequirrgicos, monitorear quimioterapias, entre otros. Gmez (1988), reporta un estudio cuyo objetivo principal era establecer los valores de referencia para caninos segn el sexo (50 hembras y 50 machos) sin distincin de edad en la ciudad de Cajamarca. Esta informacin ha venido siendo usada por los profesionales Mdicos Veterinarios durante sus prcticas clnicas y en el diagnstico de diferentes alteraciones en los caninos de la ciudad de Cajamarca. La presente investigacin, pretende proporcionar una herramienta de ayuda actualizada a los Mdicos Veterinarios dedicados a la prctica de animales de compaa, en el campo de la Hematologa Veterinaria, hacindose para este fin un nuevo estudio hematolgico en los caninos de la ciudad de Cajamarca y usando mtodos estudiados tradicionales, entendindose por anlisis tradicional a los mtodos manuales que usan cmaras de conteo como la Neubauer y pipetas de dilucin. Donde los valores de referencia 2
hematolgicos obtenidos en caninos de diferentes edades y sexo en el detallado de la siguiente investigacin difieren de los obtenidos en la investigacin hecha en el ao 1988, los cuales presentan elevados coeficientes de variacin.
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OBJETIVOS Objetivo General Determinar los valores hematolgicos de referencia en caninos (Canis lupus familiaris) de la ciudad de Cajamarca 2012.
Objetivos Especficos Determinar los valores de referencia hematolgicos: recuento de eritrocitos, hemoglobina, hematocrito, ndices eritrocitarios: volumen corpuscular medio (VCM), hemoglobina corpuscular media (HCM), concentracin de hemoglobina corpuscular media (CHCM), recuento de leucocitos, frmula leucocitaria relativa y absoluta, velocidad de sedimentacin y recuento de plaquetas, de acuerdo al sexo de los caninos.
Determinar los valores de referencia hematolgicos: recuento de eritrocitos, hemoglobina, hematocrito, ndices eritrocitarios: volumen corpuscular medio (VCM), hemoglobina corpuscular media (HCM), concentracin de hemoglobina corpuscular media (CHCM), recuento de leucocitos, frmula leucocitaria relativa y absoluta, velocidad de sedimentacin y recuento de plaquetas, de acuerdo a la edad, tomando en cuenta la clasificacin dada por De Lima (2001): Cachorros (3 meses 1 ao), jvenes (1 ao 3 aos) , adultos (3 7 aos) y geritricos (7 aos ms).
HIPTESIS Los valores de referencia hematolgicos obtenidos en caninos de diferentes edades y sexo en el presente proyecto son diferentes a los obtenidos en la investigacin hecha en el ao 1988, los cuales presentan elevados coeficientes de variacin.
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CAPITULO II
MARCO TERICO
1. Eritrocitos Su funcin es transportar oxigeno, la cual est mediada por la presencia de hemoglobina dentro de sta. Cuya membrana, citoesqueleto y proceso metablico asegura la supervivencia de la clula, contra la presin de la circulacin (Latimer, Mahaffey y Prasse, 2003). Los eritrocitos tambin disponen de vas metablicas (comunicacin de la monofosfato hexosa y metahemoglobina reductasa) que protegen a la hemoglobina de la oxidacin. La oxidacin de la hemoglobina da lugar a la metahemoglobina y/o formacin de corpsculos de Heinz (Rebar, 2000). A medida que la clula envejece, disminuye la actividad glucoltica y la clula se hace esfrica. Los eritrocitos maduros pueden no tener completa dotacin de hemoglobina y teirse ligeramente por deficiencia de hierro o de protenas (hipocroma) (Medway, 1973). El eritrocito puede contener cuerpos Howell-Jolly, que son fragmentos de ADN nuclear redondos, picnticos, intensamente basfilos y se producen en la cariorrexis de extrusin de los fragmentos. Se ven con frecuencia en caninos, cerdos y gatos (Medway, 1973). El nmero de eritrocitos circulantes se ve afectado por cambios en el volumen plasmtico, ritmo de eliminacin o prdida de eritrocitos, 5
contraccin esplnica, secrecin de eritropoyetina (EPO), y ritmo de produccin de la mdula sea (Rebar, 2000). Entre los factores que afectan al recuento eritrocitario, as como la concentracin de hemoglobina y de otros constituyentes hemticos, estn: la edad, el sexo, el ejercicio, estado nutricional, lactacin, gestacin, volumen sanguneo, estadio del ciclo estral, raza (en los caninos de raza Akita los eritrocitos son siempre microcticos), horas del da, temperatura ambiente, altitud y factores climticos. (Kirk, 1997; Garca, 1995) El mtodo ms empleado es el recuento en cmara cuenta glbulos o de Neubauer, ste mtodo tiene como limitacin un alto porcentaje de error (8%), producido por variaciones de pipetas, cmaras y la distribucin de los eritrocitos en ella (Wittwer y Bhmwald, 1987). 1.1 Morfologa. Los eritrocitos tienen forma de disco bicncavo con una marcada zona central plida y un tamao de 6,07,0 m (Latimer et al., 2003). Los eritrocitos de los caninos sanos son de alrededor de 7m de dimetro (ligeramente ms grandes que los felinos que tienen de 5,5 a 6 m de dimetro) (Cowell, 2009). Los eritrocitos maduros en los mamferos no contienen ADN ni ARN. Se compone de 65% de agua, 33% de hemoglobina y contiene enzimas, coenzimas, carbohidratos, y diversos minerales como son: P, S, Zn, K, Sr, Mn, Al, Ag, U, Na, Ca, Mg, Co, HCO3, PO4, adems de ADP, ATP, vitaminas, urea, acido rico, creatina y creatinina. El estroma es un complejo de lipoprotenas que mantiene la forma de disco bicncavo en la mayora de los casos (Nez y Bouda; 2007). Los eritrocitos nucleados pueden ser ms numerosos en cachorros, pero el nmero empieza a decrecer rpidamente dentro de la primera semana de vida y alcanzar los niveles adultos en aproximadamente uno a dos meses de edad (Feldman, 2006). 6
Los cambios en las caractersticas morfolgicas de los eritrocitos, se llevan a cabo durante la maduracin desde rubiblasto hasta eritrocito maduro. Las clulas se hacen ms pequeas. El ncleo se hace ms pequeo y su cromatina es ms agregada (Latimer et al., 2003). En mamferos, los reticulocitos y eritrocitos migran dentro del seno venoso de la medula sea a travs del trnsito en el citoplasma de las clulas endoteliales (Latimer et al., 2003). Varias hormonas desempean un papel fisiolgico en la regulacin del tamao del eritrocito. Esto se comprueba con lo siguiente: tanto en el hombre como en la rata, se ha observado que la extirpacin de las gnadas modifica el nmero de eritrocitos circulantes. Su nmero aumenta en caninos hembras despus de la extirpacin de los ovarios y disminuye en los machos castrados. La administracin parenteral de la hormona respectiva al individuo castrado produce el regreso del nmero de eritrocitos a los niveles normales del sexo de que se trate (Schalm, 1964). Durante el examen microscpico, la morfologa de los eritrocitos se evala principalmente dentro de la monocapa, donde la distorsin por artefactos producidos durante la preparacin y las diferencias en grosor influyen menos en la apariencia celular. Casi todas las anormalidades morfolgicas significativas de los eritrocitos se pueden detectar con aumento de 40x o 50x, aunque algunas alteraciones pueden necesitar un examen adicional a mayor aumento. Tanto en canes como en gatos presentan una leve anisocitosis de eritrocitos y pueden mostrar ocasionalmente clulas inmaduras policromatfilas en las extensiones de sangre perifrica (Cowell, 2009). 1.2 Metabolismo de los eritrocitos El metabolismo es limitado despus de la etapa de reticulocitos porque los eritrocitos maduros carecen de mitocondrias para la oxidacin del metabolismo (Latimer et al., 2003). 7
El aumento primario en la produccin de eritrocitos es raro (policitemia vera) pero en animales en gran altitud puede ocurrir una policitemia secundaria (Medway, 1973). A grandes altitudes, cuando la cantidad de oxgeno del aire se encuentra muy reducida, y no hay suficiente transporte de oxgeno a los tejidos y los eritrocitos se producen tan rpidamente que su nmero en sangre aumenta. Lo cual hace evidente que no es la concentracin de eritrocitos de la sangre lo que controla el ritmo de produccin de stos, sino su capacidad funcional para transportar oxgeno a los tejidos en relacin con las demandas tisulares de este elemento (Garca, 1995). 1.2.1 Reticulocitos: Los reticulocitos de la mayora de las especies permanecen en la mdula sea por 2 a 3 das antes de liberarse, y por ltimo maduran en la sangre perifrica o en el bazo (Latimer et al., 2003). Los reticulocitos son eritrocitos inmaduros sin ncleo cuya malla reticular no es visible con coloracin de Romanovsky. El can y el gato pueden tener normalmente un promedio de 0,5 a 1 % de clulas reticuladas en la sangre perifrica (Medway, 1973). Los reticulocitos se pueden contar hasta en 10% en canes durante los dos primeros meses de vida. Este nmero decrece en los niveles de sangre de canes adultos aproximadamente a partir de los 5 a 6 meses de edad (Feldman, 2000). 1.3 Eritropoyesis: En mamferos, la eritropoyesis ocurre de manera extravascular en la medula sea de los huesos; la cual tiene la capacidad de incrementar la eritropoyesis y la produccin de eritrocitos hasta siete veces, lo cual es normal en humanos; se provee sta estimulacin si es necesaria y si los nutrientes estn presentes. Esta capacidad para 8
incrementar la produccin vara con la especie animal. Esto es mayor en aves y caninos; y menor en caballos (Latimer et al., 2003). El principal factor que estimula la produccin de eritrocitos es la eritropoyetina, una hormona glucoproteica circulante cuyo peso molecular es del orden de 34000 Daltons. En ausencia de eritropoyetina, la hipoxia o bien no tiene efecto estimulante de la produccin de eritrocitos, o bien su efecto es muy pequeo. Por otra parte, cuando funciona bien el sistema de la eritropoyetina la hipoxia induce un gran aumento de la produccin de esta hormona que, a su vez, eleva la produccin de eritrocitos hasta que desaparece la hipoxia. (Guyton, 1991; Langley 1973). La hematopoyesis se inicia en el saco vitelino, en el hgado, en el bazo y en la mdula sea; en sta ltima se va incrementando gradualmente su actividad, y al nacimiento es el principal rgano hematopoytico. Durante la vida postnatal, en la mayora de los mamferos, la hematopoyesis se restringe a la mdula sea, mientras que el hgado y el bazo son usualmente inactivos, pero mantienen su potencial hematopoytico, el mismo que se activa al incrementarse las necesidades de las clulas sanguneas. La mdula sea roja activa es reemplazada por la mdula amarilla en animales adultos, pero la hematopoyesis activa contina a lo largo de la vida en los huesos planos y en las epfisis de los huesos largos (Nez y Bouda, 2007). En edad temprana, toda la cavidad medular es activa, pero en el adulto solamente en los extremos de los huesos largos, esternn, pelvis, costillas y cresta del ilion conservan tejido proliferante, mientras que el resto de la mdula se llena con clulas adiposas y clulas reticulares en reposo (Medway, 1973). En general los elementos sanguneos son de mayor tamao cuanto ms jvenes son los animales y se vuelven ms pequeos cuando van envejeciendo, prueba de ello es la macrocitosis del feto y de los recin nacidos hasta el primer o segundo mes de edad (Schalm, 1964) 9
Los factores que afectan el hematocrito, la concentracin de hemoglobina y el nmero de eritrocitos (Latimer et al., 2003): a. El cambio en el aumento de eritrocitos en la circulacin afecta a los tres parmetros: - Bajos valores pueden ocurrir en anemia. Disminucin en los tres parmetros pueden ser desproporcionados si el tamao de la clula o contenido de hemoglobina por clula tambin est alterado. - Incremento excesivo de eritrocitos (policitemia absoluta) causa altos valores. - Falsos valores elevados del hematocrito ocurren con deshidratacin y excitacin inducida por contraccin esplnica. b. Cambios en el volumen del plasma afecta los tres parmetros, entonces, la interpretacin debe ser siempre hecha con conocimiento de el estado de deshidratacin del paciente: - Deshidratacin o transito de fluidos a los rganos viscerales pueden incrementar los valores. - Sobrerehidratacin con fluidos parenterales pueden causar una reduccin en valores, simulando anemia. 1.4 Destruccin eritrocitaria El promedio de la vida del eritrocito en la circulacin vara con la especie, en el caso del canino es de ciento diez das. A su vez, el envejecimiento de los eritrocitos est acompaado por los cambios en contenido enzimtico y la estructura de la membrana celular que hace a las clulas menos capaces para sobrevivir y por ende sujetos a removerlos al bazo. Los eritrocitos viejos de un animal clnicamente sano son removidos desde la circulacin por dos formas. Fagocitados por los macrfagos que es la va principal. Y la otra 10
forma es la lisis intravascular con liberacin de hemoglobina en el plasma, lo cual es de menor ocurrencia (Latimer et al., 2003).
2. Volumen globular aglomerado o hematocrito (VGA) Los eritrocitos por tener una densidad especfica ms elevada, se puede determinar su volumen por el mtodo del microhematocrito, cuyo principio de centrifugar es el de obtener la mxima aglomeracin de los eritrocitos y que lo mnimo de plasma permanezca entre los ellos; con un pequeo error inherente (+1%) (Benjamin, 1990; Schalm 1964). Observando desde la parte superior hasta el fondo el siguiente orden (Benjamn, 1990): a) Plasma: capa amarillenta que se separa de las que contienen clulas. b) Costra flogstica: capa blanca o gris, en ocasiones gris rojiza, en la que estn contenidos trombocitos (la capa gris ms superior de color crema), leucocitos (capa gris), eritrocitos nucleados (cuando se encuentran presentes, producen un tinte rojizo en la capa flogstica, donde pueden atraparse debido a su densidad especfica, la cual es menor que la de los eritrocitos maduros). c) Eritrocitos: capa de color rojo oscuro que se separa de la capa flogstica por medio de una lnea oscura producida por la reduccin de la hemoglobina al contacto con los leucocitos. Los animales muy jvenes, debido al rpido crecimiento de su espacio vascular, tienen valores relativamente bajos de hematocrito. Debido a que los eritrocitos fetales son sustituidos por eritrocitos adultos, los animales en periodo de crecimiento inicial tienen mayor anisocitosis, policromasia y eritrocitos nucleados comparados con animales maduros (Cowell, 2009). 11
El valor de hematocrito vara ampliamente entre las especies y se halla tambin sujeto a variaciones en cuanto a la edad y sexo; tambin se observan variaciones del hematocrito entre las diferentes razas con el caso del rango de referencia del Greyhound es ms alto que para otras razas 49 a 65 % y otros canes han sido determinados con incrementos fisiolgicos del hematocrito como el Caniche, Boxer, Dachshund y Chihuahua (Kraft y Drr, 2000). El hematocrito en cachorros que se encuentra dentro de los intervalos de referencia o bajo es por una persistente reticulocitosis. Por esta razn, se podra respaldar que los canes jvenes tengan menos porcentaje de hematocrito (Latimer 2003). 2.1 Microhematocrito Las ventajas del microhematocrito sobre el mtodo de Wintrobe son: 1) Valores de volumen globular ms exactos y constantes; 2) El tiempo necesario para todo el procedimiento es inferior a cinco minutos, y 3) La cantidad de sangre requerida es mnima, lo cual permite el empleo del mtodo con sangre extrada por puncin aun en la vena marginal de la oreja (Schalm, 1964). La obtencin del volumen globular aglomerado (VGA) mediante la prueba del microhematocrito constituye la prueba aislada ms til en hematologa por la informacin que entrega, su facilidad, costo y exactitud. Con ste examen adems del valor del VGA se obtiene una apreciacin del nmero de leucocitos, considerando el grosor de la costra flogstica; adems se aprecia el ndice ictrico o lipemia en el color del plasma (Wittwer y Bhmwald, 1987). Adems, el plasma obtenido por el mtodo del microhematocrito puede ser usado para otros anlisis rutinarios: concentracin de protena en plasma usando refractometra. Refiriendo que el plasma en caninos es claro, as como la fibrina plasmtica tambin medida por refractometra. (Latimer et al., 2003). 12
3. Hemoglobina La hemoglobina absorbe oxgeno contenido en el aire de los pulmones con el que, forma oxihemoglobina, sustancia que con facilidad cede su oxgeno a los tejidos con los que entra en contacto. Y su mayor formacin ocurre en la fase del eritrocito denominada normablasto ortocromtico antes de la formacin de reticulocito. (Kraft y Drr, 2000). La molcula de hemoglobina consta de protoporfirina, globina natural y hierro ferroso. Su contenido en hierro es de 0,335% o 3,35 mg/gr de hemoglobina. La capacidad de oxgeno es de 1,36 c.c. por gramo de hemoglobina (Schalm, 1964). La hemoglobina del gato es ms susceptible a la oxidacin que la del canino ya que contiene un alto porcentaje de aminocidos con sulfuros que se oxidan ms fcilmente. As, la formacin de cuerpos de Heinz y la anemia hemoltica por cuerpos de Heinz se presenta con mayor facilidad en gatos que en canes (Rebar, 2000). En el canino, el valor normal de hemoglobina generalmente aceptado es de 12 a 17 gr/l de sangre (Schalm, 1964). El dosaje de hemoglobina determina la cantidad de hemoglobina en gramos, presentes en un decilitro de sangre (g/dl), existen variaciones del dosaje de hemoglobina en relacin al sexo y edad ya que en el canino estos valores comienzan a disminuir a partir del nacimiento, seguidas de un incremento gradual hasta los cuatro meses (Kraft y Drr, 2000). La absorcin del hierro, sustancia importante para la formacin de hemoglobina, se realiza desde la dieta, lo cual depende de la edad, especie, reservas de hierro, capacidad de eritropoyesis, inflamaciones y preez, como tambin la cantidad y la forma qumica ingerida. Un pequeo porcentaje de hierro en la dieta es absorbido en animales adultos normales. La absorcin del hierro ocurre a travs de los enterocitos del duodeno y el yeyuno proximal. El hierro puede ser 13
tomado por los enterocitos como iones libre o como grupo heme por diferentes caminos (Harvey, 2012).
4. Valores corpusculares medios: 4.1 Concentracin media de hemoglobina corpuscular (CMHC): Representa la concentracin media de hemoglobina en los eritrocitos (Aguil, 2001). Sus valores son afectados por el tamao de los eritrocitos, de suerte que es posible hallar valores normales de HCM en los macrocitos hipocrmicos. Por eso la concentracin media de hemoglobina corpuscular es una mejor medida de hipocroma (Medway, 1973). La CMHC y la HCM, deben compararse con la morfologa expuesta por un buen frotis de la misma sangre, el cual mostrar macrocitos, microcitos o hipocroma. El eritrocito no puede contener ms de 36% de hemoglobina, pero puede parecer hipercrmico en un frotis si se ha convertido en esferocito y ha perdido la ordinaria palidez central producida por su biconcavidad (Medway, 1973). 4.2 Hemoglobina corpuscular media (HCM): Expresa el peso promedio de hemoglobina en los eritrocitos. Se obtiene dividiendo la hemoglobina por el nmero de eritrocitos (en millones) y se multiplica por 10 expresndose en picogramos (Aguil, 2001). 4.3 Volumen corpuscular medio (VCM): Expresa el volumen promedio del eritrocito individual, es una forma de calcular el tamao del eritrocito (Benjamin, 1990). El VCM nos puede indicar la presencia de macrocitosis y microcitosis, se puede apreciar a partir del examen microscpico de una extensin en lmina porta. Tambin se puede calcular a partir del hematocrito y el recuento de eritrocitos (Aguil, 2001). 14
5. Leucocitos Son unidades mviles del sistema retculo endotelial, se forman en parte en la mdula sea (granulocitos), y en parte en los diversos rganos linfgenos, incluyendo ganglios linfticos, bazo, timo, amgdalas y diversos restos linfticos del intestino (linfocitos y monocitos), pero despus de producidos son transportados por la sangre a diferentes partes de la anatoma, donde ejercern sus funciones. El valor fundamental de los leucocitos consiste en que, son transportados especficamente a zonas donde hay inflamacin intensa, proporcionando as una defensa rpida y enrgica contra cualquier posible agente infeccioso (Guyton, 1991). Para los caninos, suelen presentarse grandes fluctuaciones en el recuento de leucocitos, como en el caso de la edad ya que el recuento de leucocitos en el cachorro recin nacido tiene una cuenta leucoctica relativamente alta (16.5 10 3 /l) que disminuye rpidamente durante los primeros das de vida y comienza a incrementarse a partir de la primera semana despus del nacimiento, y hasta aproximadamente los sesenta das de vida, para despus estabilizarse, siendo el incremento en base a los linfocitos, lo que se cree que est relacionado con la formacin de anticuerpos. Disminuye en la segunda semana de edad, posterior presenta un incremento gradual, la cuenta leucoctica disminuye con la edad a una media de 13 10 3 /l a los sesenta das hasta una media de 10 10 3 /l a los cuatro aos y medio de edad. En lo que respecta a la raza, en el canino se describen variaciones, como la neutropenia cclica del Collie Gris plateado, la eosinofilia del Pastor Alemn y la basofilia en el Basenji joven. En cuanto al sexo y estado fisiolgico se encuentra una eosinofilia de la perra en celo y una leucocitosis marcada durante la preez y una gran variedad de otras condiciones. Por tanto, los recuentos totales de leucocitos para que sean significativos clnicamente, deben desviarse considerablemente de los valores normales al objeto de que un clnico pueda valorar un proceso de enfermedad (Wittwer y Bhmwald, 1987; Benjamin, 1990; Serrano, 2011). 15
Para el recuento se ha empleado el mtodo de la cmara de Neubauer, mtodo simple, pero que tiene un coeficiente de variacin muy amplio (12%) (Wittwer y Bhmwald, 1987). En caninos, gatos y caballos usualmente tienen ms neutrfilos que linfocitos en sangre. A diferencia que, los linfocitos son usualmente ms numerosos en cerdos, cabras y ovejas, roedores. El nmero de neutrfilos y linfocitos cambian con la edad despus del nacimiento. El nmero de neutrfilos a linfocitos tienen a ser ms alto al nacimiento que luego, en parte por el incremento de cortisol en sangre al nacimiento. El cortisol causa en la circulacin el incremento de neutrfilos y la disminucin del nmero de linfocitos. Dentro de una semana, el nmero de neutrfilos disminuye y el nmero de linfocitos son iguales. Y a las tres semanas el nmero de linfocitos es superior a los neutrfilos (Harvey, 2012). El nmero bajo de monocitos, eosinfilos y basfilos estn presentes en mamferos normales. El nmero de basfilos son especialmente bajos en caninos y gatos, incluso no son vistos en animales sanos (Harvey, 2012). A diferencia de los eritrocitos, los leucocitos no estn expuestos a un promedio de vida en sangre, sino que responden en forma aleatoria de acuerdo a una estimulacin quimiotctica. A excepcin de de los linfocitos que recirculan, esto hizo pensar que los leucocitos no retornan a la circulacin despus de la migracin a los tejidos. Pero existe evidencia que algunos eosinfilos regresan a la circulacin va linftica y que, en ausencia de inflamacin, algunos monocitos pueden retornar de la mdula sea (Harvey, 2012). 5.1 Neutrfilos Los neutrfilos son producidos en la medula sea, se liberan a la sangre, circulan brevemente (vida media de 5 a 10 horas), y migran a los espacios tisulares o a las superficies epiteliales como las que existen en el sistema respiratorio, digestivo o urogenital. La 16
produccin es continua para abastecer la constante demanda de neutrfilos en los tejidos y para mantener un compartimiento (pool) circulante en la sangre (Rebar, 2000; Harvey, 2012). La medula sea precisa aproximadamente de 4 a 6 das para la formacin de nuevos neutrfilos, y es capaz de mantener en reserva el aporte de neutrfilos maduros para cinco das (Rebar, 2000). 5.1.1 Funcin Los neutrfilos constituyen la principal defensa contra la invasin de los tejidos por microorganismos. Los neutrfilos eliminan bacterias pero tambin pueden daar o participar en la destruccin de hongos o virus (Rebar, 2000). Los neutrfilos se congregan en los puntos donde se produce inflamacin o infeccin bacteriana por un proceso de migracin direccional o quimiotaxis (Rebar, 2000). 5.1.2 Morfologa Los neutrfilos circulantes normales presentan las siguientes caractersticas (Rebar, 2000): Tamao: 12 - 15 m en dimetro. Ncleo lobulado o parcialmente segmentado con cromatina densa de coloracin purpura oscuro. Citoplasma rosa plido o azul claro, finamente granular, liso. 5.1.3 Variaciones de la morfologa normal Si la sangre est un tiempo excesivo en EDTA antes de realizar las extensiones se pueden producir artefactos en el citoplasma, como la presencia de algunas vacuolas pequeas y plidas. Los neutrfilos presentan 2 a 4 lobulaciones nucleares. La presencia de cinco o ms lobulaciones indican hipersegmentacin, un cambio de 17
envejecimiento, que se produce tras una exposicin prolongada a EDTA, terapia con glucocorticoides, hiperadrenocorticismo, o neutrofilias asociadas con infecciones crnicas (Rebar, 2000). a. Neutrfilos en banda Los Neutrfilos en banda, que se pueden ver en bajo nmero de sangre perifrica de caninos y gatos sanos, tienen un ncleo alargado o ligeramente retorcido con formas en U o J y con menos condensacin de cromatina que los Neutrfilos maduros. La lobulacin nuclear est ausente o pobremente definida (Cowell, 2009). 5.1.4 Cantidad El nmero de neutrfilos cuantificados en el hemograma depende de los cambios en la produccin y liberacin por la medula sea, el intercambio entre el compartimiento marginal y circulante, y/o el ritmo de migracin tisular (Rebar, 2000). 5.2 Linfocitos Los linfocitos circulantes son muy numerosos en animales jvenes y declinan al aumentar la edad. El linfocito de vida larga es la principal clula de los ganglios linfticos (Medway, 1973). Varan de tamao en sangre perifrica de canes y gatos, con predominio de clulas pequeas. Algunos linfocitos tienen unos pocos grnulos citoplasmticos variables en tamao que suelen estar concentrados dentro de una nica rea celular perinuclear (Cowell, 2009). A la vista microscpica se distinguen los pequeos linfocitos y los grandes linfocitos. Un ncleo de cromatina obscura en forma de grumos que se tien de azul (Medway, 1973). La designacin de linfocitos pequeos, de tamao medio y grande, carecen de significado biolgico. La mayora de los linfocitos de la corriente sangunea son del tipo pequeo, generalmente de unos 6 a 18
9 m de dimetro, con un ncleo grande y denso rodeado por un ribete de citoplasma azul plido. Frecuentemente el ncleo presenta una pequea hendidura en uno de los lados. Los grandes linfocitos (de 12 a 15 m de dimetro), tienen mucho ms citoplasma y el ncleo es menos denso que el de los pequeos linfocitos; y pueden existir grnulos azurfilos en la hendidura nuclear (Delman, 1993). El citoplasma forma un ribete azul alrededor del ncleo y puede estar restringido a un lado. En la sangre perifrica pueden aparecer formas ms jvenes de la serie linfoctica, semejantes en tamao a los grandes linfocitos (Medway, 1973). El recuento de linfocitos relativamente elevados tambin es comn en animales jvenes y hay que sospechar de linfopenia en gatitos y cachorros menores de 6 meses de edad cuando el recuento est por debajo de 2000 clulas/l. Las elevaciones transitorias de los linfocitos por encima de los rangos de referencia son normales en animales excitados o que han hecho ejercicio intenso, sobre todo si son jvenes. Esta respuesta inducida por la adrenalina tambin puede resultar en un incremento temporal en sangre perifrica de otros tipos de leucocitos en pacientes sanos. Al menos en una raza canina, el galgo, los valores hematolgicos se salen ligeramente de los rangos de referencia usados normalmente para la especie. Aunque esto es una situacin habitualmente fisiolgica que hay que considerar, explica menos del 5% de los valores fuera de rango para un solo parmetro hematolgico (Cowell R., 2009). 5.3 Monocitos Se originan en la medula sea. A diferencia de los granulocitos, se liberan a la circulacin perifrica todava como clulas inmaduras y se transportan a los tejidos en donde pueden diferenciarse en macrfagos, clulas epiteloides, o clulas inflamatorias gigantes multinucleadas (Rebar, 2000). 19
No existe un compartimento de almacenamiento medular para los monocitos. Los monocitos y sus precursores (monoblastos, promonocitos) se encuentran en un nmero bajo y puede llegar a ser difcil identificarlos (Rebar, 2000). 5.3.1 Funcin La evolucin continua de monocito a macrfago representa la segunda lnea de defensa del sistema fagoctico circulante (los neutrfilos constituyen la primera). Las funciones especficas del macrfago incluyen: fagocitosis, regulacin de la respuesta inflamatoria por medio de la liberacin de mediadores inflamatorios (factores quimiotcticos, prostaglandinas, complemento, etc.) (Rebar, 2000). 5.3.2 Morfologa Los monocitos caninos y felinos son ms grandes que los neutrfilos y de tamao similar a los eosinfilos y basfilos. El ncleo vara enormemente en morfologa, adoptando desde formas alargadas en U, que recuerdan a los neutrfilos en banda, a formas multilobuladas irregulares. La cromatina nuclear de los monocitos es generalmente distinta tanto de granulocitos maduros como inmaduros, y tienen forma de cordn, con solo unos pocos agregados aislados de heterocromatina (Cowell, 2009). De acuerdo a su tamao, relativamente grande, los monocitos se pueden concentrar a lo largo del borde difuminado, y su proporcin en el recuento diferencial de leucocitos en la extensin sangunea puede ser infraestimado (Cowell, 2009). Los monocitos circulantes presentan las siguientes caractersticas: de un tamao de 15 - 20 m, con ncleo en forma irregular, cromatina ligeramente reticulada, citoplasma abundante, de gris a azul grisceo. Debido al manejo de la 20
muestra pueden producirse variaciones en la morfologa normal. Los monocitos de extensiones realizadas a partir de la sangre fresca sin anticoagulante suelen ser redondos y no contienen vacuolas citoplasmticas (Cowell, 2009). Los monocitos, de extensiones realizadas a partir de sangre con EDTA suelen presentar los mrgenes regulares con pseudpodos y contienen vacuolas citoplasmticas (Rebar, 2000). 5.4 Eosinfilos Los eosinfilos se producen en la medula sea de una forma similar a los neutrfilos. Son reconocibles en el estadio de mielocitos por la presencia de grnulos eosinfilos especficos (Rebar, 2000). 5.4.1 Funcin Constituyen el principal componente de las reacciones de hipersensibilidad sistmicas. Cuando los antgenos de parsitos o alrgenos se unen a las IgE especficas de los mastocitos, estimulan la degranulacin de stos y se libera as histamina que atrae a los eosinfilos. Son los principales responsables en eliminar trematodos y nematodos que presenten IgG o complemento unido a su superficie. Tienen tambin una capacidad fagoctica o bactericida limitada y pueden desempear cierto papel en la destruccin de clulas neoplsicas (Rebar, 2000). 5.4.2 Cantidad El nmero de eosinfilos presentes en la circulacin refleja el equilibrio existente entre produccin medular y demanda o consumo tisular. Una amplia variedad de enfermedades se caracterizan por una marcada respuesta inflamatoria eosinoflica en el tejido. Existe una considerable variacin de los intervalos de normalidad para eosinfilos segn el rea 21
geogrfica. Siempre que sea posible es preferible emplear los valores de referencia generados de animales residentes en la regin (Rebar, 2000). 5.4.3 Morfologa Los eosinfilos, son ligeramente ms grandes con un tamao de 12-20 m de dimetro, parecido o ligeramente mayor que un neutrfilo, se encuentran normalmente en nmeros muy bajo en las extensiones sanguneas de caninos y gatos sanos. Existiendo diferencias morfolgicas marcadas entre los eosinfilos de las diferentes especies (Rebar, 2000). Su ncleo es segmentado, pero suele ser menos lobulado que el de los neutrfilos y normalmente se divide nicamente en dos lbulos bien diferenciados. El citoplasma de los eosinfilos contiene grnulos prominentes de color naranja a rosa. Y, en ocasiones, el eosinfilo canino puede contener un nico grnulo grande y redondo que recuerda en tamao y color a un eritrocito. Aunque tambin los grnulos son de tamao y nmero variable (Rebar, 2000, Cowell, 2009). 5.5 Basfilos Los basfilos se producen en la medula sea y comparten con los mastocitos una clula progenitora comn. Los basfilos no se desarrollan hasta formar un mastocito, pero los dos tipos celulares presentan funciones similares (Rebar, 2000). Los basfilos inmaduros pueden reconocerse en el estadio de mielocito por sus caractersticos grnulos secundarios. stos circulan durante unas pocas horas en la sangre y migran hacia los tejidos donde pueden permanecer durante varias semanas (Rebar, 2000). Son las ms grandes clulas granulocticas maduras y son infrecuentes en la sangre perifrica de caninos y gatos; raramente se encuentran en 22
frotices sanguneos de caninos normales. Los basfilos caninos pueden carecer ocasionalmente de grnulos visibles, pero se reconocen por su tamao, su morfologa celular y su tincin citoplasmtica (Feldman, 2000; Cowell, 2009). 5.5.1 Funcin Los grnulos de los basfilos contienen histamina y heparina. La histamina liberada por los basfilos y los mastocitos juegan un papel primordial en la reaccin de hipersensibilidad inmediata como la que ocurre en la urticaria, anafilaxis y alergia aguda. La heparina inhibe la coagulacin, con una importante funcin en la inflamacin (Rebar, 2000). 5.5.2 Cantidad Los basfilos constituyen un porcentaje muy bajo en la poblacin total de leucocitos circulantes. En muchos caninos y gatos, raramente se llegan a observar basfilos en un recuento diferencia manual de leucocitos (Rebar, 2000). 5.5.3 Morfologa El basfilo canino, tiene un tamao de 12 20 m en dimetro, similar o ligeramente mayor que un neutrfilo (Rebar, 2000). El ncleo de los basfilos aparece en el examen microscpico menos densamente teido y tiene menos lobulaciones y ms alargadas, con apariencia de cinta. El citoplasma es moderadamente azul grisceo a ligeramente morado y normalmente contiene grnulos. En los caninos, los grnulos basfilos son menores en nmero y con tincin de azul oscuro a metacromtica. (Cowell, 2009)
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6. Plaquetas Las plaquetas se constituyen a partir del citoplasma de los megacariocitos mediante la formacin de una estructura conocida como proplaqueta, esta estructura se fragmenta en mltiples plaquetas. Las plaquetas resultantes son clulas pequeas de forma discoide que no tienen ncleo y poseen citoplasma rosado con presencia ocasional de grnulos prpura. (Nuez y Bouda, 2007) Las plaquetas aparecen en gatos y caninos de forma oval, redonda o con forma de bacilo en las preparaciones de sangre perifrica. Su citoplasma, va de color gris claro a plido, habitualmente ante la coloracin tienen un agregado central de grnulos eosinoflicos a metacromticos. Las plaquetas varan en tamao desde alrededor de un cuarto a dos tercios de dimetro de un hemate en la sangre canina y en la sangre felina, pueden ser incluso ms grandes en algunas ocasiones. Las plaquetas parcialmente activadas tienen una apariencia como de araa con unos finos procesos citoplasmticos que se extienden desde un pequeo cuerpo celular esfrico. Las plaquetas tambin pueden aparecer agregadas o aglutinadas en una masa amorfa en las preparaciones, un hallazgo particularmente comn en las extensiones de sangre felina. Las plaquetas agregadas y aglutinadas suelen ser empujadas hacia el borde difuminado, lo que puede resultar en una falsa impresin de trombocitopenia si solo se examina la monocapa de la preparacin (Cowell, 2009). Las plaquetas son totalmente funcionales desde el nacimiento y su nmero es similar al de los adultos (Serrano, 2001). La reserva de trombocitos es muy limitada en los caninos. La extraccin de todos los trombocitos de dos a tres volmenes totales de sangre termina en grave trombocitopenia. Dos o tres das despus de la deplecin se nota aumento progresivo en los trombocitos y este contina hasta que se alcanzan los niveles normales seis o siete das despus. 24
Los trombocitos son extrados de la circulacin por las clulas reticuloendoteliales. Mantienen la integridad capilar ocluyendo pequeas rupturas en las paredes vasculares (Medway, 1973). A veces las plaquetas aparecen en masas. Si se sobreponen a un eritrocito pueden confundirse con un parsito del glbulo rojo. Como estas partculas de citoplasma son fragmentos desprendidos por gemacin del megacariocito, se presentan con gran variacin en forma y tamao (Medway, 1973). En los extendidos sanguneos de la mayora de los animales domsticos normalmente tienen un promedio entre 10 a 30 plaquetas bajo el objetivo de 100X. El nmero de plaquetas puede estimarse multiplicando el promedio por 15,000 o 20,000 para conseguir el nmero aproximado de plaquetas por microlitro de sangre. (Harvey, 2012) El recuento indirecto de plaquetas en un frotis teido, se considera una tcnica inexacta, pero ms prctica y til en clnica. Puesto que normalmente se requiere de una estimacin, lo que se puede hacer al mirar el frotis cuando se realiza la frmula diferencial de leucocitos, apreciando si las plaquetas estn normales, aumentadas y disminuidas. (Benjamin, 1990) 7. Velocidad de sedimentacin eritrocitaria: La rapidez con que los eritrocitos se precipitan y forman una masa de eritrocitos sedimentados, dejando sobre ellos un plasma transparente, depende de la especie animal estudiada (Medway, 1973). La propensin de las clulas a formar agregados aumenta la velocidad de sedimentacin. Esta tendencia se ve cuando hay infeccin aguda generalizada o considerable destruccin de tejido por la inflamacin o por neoplasma. La aglomeracin de las clulas hemticas reduce el rea superficial de la masa celular. A la vez aumenta la cantidad de fibringeno y de globulinas. En la hipercolesterolemia y en la preez es 25
donde se encuentra aumentada la velocidad de sedimentacin. Los eritrocitos pequeos (microcitos) tienen menor velocidad de sedimentacin que los macrocitos. Se ha observado que los macrocitos son con frecuencia reticulocitos y que stos y los eritrocitos nucleados no se aglomeran (Medway, 1973). El ndice de sedimentacin debe interpretarse junto con el volumen de eritrocitos conglomerados (VGA). La sedimentacin lenta es de esperar cuando es grande la masa de eritrocitos, porque el exceso de clulas dificulta el movimiento del plasma. Las grandes velocidades de sedimentacin se ven en las anemias, que tambin pueden mostrar sedimentacin difsica. Y la determinacin de la velocidad de sedimentacin no es especfica y tiene aplicacin clnica al caballo, al canino y al gato. Cuando la sedimentacin de los eritrocitos es rpida, indica un proceso patolgico y el valor de la velocidad de sedimentacin es en cierto grado una medida de la gravedad de la enfermedad (Medway, 1973). El nmero de eritrocitos por unidad de volumen de sangre, as tambin cuando el hematocrito est aumentado tienen influencia sobre la velocidad de sedimentacin. Esta es inversamente proporcional al nmero de eritrocitos. Por lo tanto, cuanto menor sea el nmero de eritrocitos en condiciones de salud varan mucho, y en un mismo animal el nmero de clulas por unidad de volumen sanguneo es diferente de un da a otro, segn el estado del equilibrio hdrico, es importante comparar la velocidad de sedimentacin observada con la que corresponde al volumen globular del caso correspondiente (Schalm, 1964; Benjamin, 1990). Cuando hay numerosos reticulocitos o formas inmaduras de eritrocitos se advierte en la prueba de la sedimentacin. Los reticulocitos no entran en la formacin de pilas globulares y, por lo tanto, se distribuyen en la zona plasmtica (Schalm, 1964). 26
8. Cuadros de valores de referencia
8.1 Valores de Referencia para Cajamarca Tabla N 01: Valores hematolgicos de la serie roja encontrados en 50 caninos hembras de la ciudad de Cajamarca (Gmez, 1988)
Donde: VEE = Volumen de eritrocitos empaquetados D.S.: Desviacin estndar C.V.: Coeficiente de variabilidad V.C.M.: Volumen corpuscular medio H.C.M.: Hemoglobina corpuscular media C.H.C.M.: Concentracin de hemoglobina corpuscular media 27
Tabla N 02: Valores hematolgicos de la serie roja encontrados en 50 caninos machos de la ciudad de Cajamarca (Gmez, 1988) CONSTANTES HEMATOLGICAS PROMEDIO D.S. C.V. % VALORES EXTREMOS Eritrocitos (10 6 /uL) 6,7 1,01 15,18 5,2 8,6 Hemoglobina (g/dl) 15,38 2,97 19,32 11,0 18,8 VEE. (lt/lt) 0,44 0,05 12,43 0,36 0,52 VELOCIDAD DE SEDIMENTACIN (mm/30 minutos) 1,22 1,32 108,6 0,0 4,0 (mm/60 minutos) 4,75 4,73 99,77 1,0 20,0 VALORES HEMATIMTRICOS V.C.M. (fl.) 67,13 4,04 6,02 60,0 76,9 H.C.M (pg.) 23,3 1,37 5,8 20,8 26,6 C.H.C.M. (g/dl. de ery.) 34,78 1,77 5,10 30,55 36,6
Donde: VEE = Volumen de eritrocitos empaquetados D.S.: Desviacin estndar C.V.: Coeficiente de variabilidad V.C.M.: Volumen corpuscular medio H.C.M.: Hemoglobina corpuscular media C.H.C.M.: Concentracin de hemoglobina corpuscular media
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Tabla N 03: Valores hematolgicos de la serie roja encontrados en 100 caninos de ambos sexos de la ciudad de Cajamarca (Gmez, 1988) CONSTANTES HEMATOLGICAS PROMEDIO D.S. C.V. % VALORES EXTREMOS Eritrocitos (10 6 /uL) 6,5 0,94 14,47 4,89 8,69 Hemoglobina (g/dl) 15,29 2,15 14,12 9,65 18,8 VEE. (lt/lt) 0,44 0,05 11,78 0,36 0,54 VELOCIDAD DE SEDIMENTACIN (mm/30 minutos) 1,69 1,94 115,23 0,36 0,54 (mm/60 minutos) 5,00 4,46 89,25 1,00 20,0 VALORES HEMATIMTRICOS V.C.M. (fl.) 67,47 13,16 19,50 60,0 76,9 H.C.M (pg.) 23,3 1,38 5,97 20,8 26,6 C.H.C.M. (g/dl. De ery.) 34,71 1,37 3,95 30,55 36,6
Donde: VEE = Volumen de eritrocitos empaquetados D.S.: Desviacin estndar C.V.: Coeficiente de variabilidad V.C.M.: Volumen corpuscular medio H.C.M.: Hemoglobina corpuscular media C.H.C.M.: Concentracin de hemoglobina corpuscular media
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Tabla N 04: Valores de las constantes hematolgicas de la serie blanca en 50 caninos hembras de la ciudad de Cajamarca. (Gmez, 1988) CONSTANTES HEMATOLGICAS PROMEDIO D.S. C.V. % VALORES EXTREMOS Leucocitos (mil/l) 16,53 3,85 23,20 9,65 24,15 Neutrfilos abastonados 0,88 1,00 113,96 0,00 4,0 Neutrfilos segmentados 59,18 1,98 3,35 53,0 63,0 Eosinfilos 17,18 2,63 15,31 14.0 23,0 Basfilos 0,02 0,14 707,10 0,0 1,0 Monocitos 3,46 0,50 14,45 2,0 4,0 Linfocitos 19,26 2,10 10,24 16,0 23,0
Donde: D.S.: Desviacin estndar C.V.: Coeficiente de variabilidad
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Tabla N 05: Valores de las constantes hematolgicas de la serie blanca en 50 caninos machos de la ciudad de Cajamarca. (Gmez, 1988) CONSTANTES HEMATOLGICAS PROMEDIO D.S. C.V. % VALORES EXTREMOS Leucocitos (mil/l) 16,15 3,89 24,09 8,7 23,45 Neutrfilos abastonados 0,96 0,75 78,63 0,00 3,0 Neutrfilos segmentados 59,34 1,67 2,82 36,0 62,0 Eosinfilos 17,4 2,11 12,17 14.0 21,0 Basfilos 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 Monocitos 3,38 0,48 14,36 3,0 4,0 Linfocitos 18,88 1,59 8,46 16,0 22,0
Tabla N 06: Valores de las constantes hematolgicas de la serie blanca de los caninos muestreados en la ciudad de Cajamarca (Gmez, 1988). CONSTANTES HEMATOLGICAS PROMEDIO D.S. C.V. % VALORES EXTREMOS Leucocitos (mil/l) 16,34 3,84 23,52 8,7 24,15 Neutrfilos abastonados 0,92 0,89 97,31 0,0 4,0 Neutrfilos segmentados 59,25
Donde: D.S.: Desviacin estndar C.V.: Coeficiente de variabilidad
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8.2 Valores de Referencia de otros autores: Tabla N 07: Valores hematolgicos promedio y valores de referencia de la poblacin total del perro sin pelo del Per y segn sexo, tamao y edad en las provincias de Piura, Sullana Y Talara (Choquehuanca, 2008)
Tabla N 08: Valores relativos de referencia y promedio de la formula leucocitaria diferencial de la poblacin total del perro sin pelo del Per y segn sexo, tamao y edad en las provincias de Piura, Sullana Y Talara (Choquehuanca, 2008)
Tabla N 09: Valores absolutos de referencia y promedio de la formula leucocitaria diferencial de la poblacin total del perro sin pelo del Per y segn sexo, tamao y edad en las provincias de Piura, Sullana Y Talara (Choquehuanca, 2008)
1. Localizacin El presente Proyecto de investigacin se realizar en el distrito, provincia y regin de Cajamarca, ciudad de Cajamarca ubicada en la sierra norte del Per; y ser ejecutado en el laboratorio de Fisiologa Veterinaria de la Facultad de Ciencias Veterinarias de la Universidad Nacional de Cajamarca.
1.1 Datos Meteorolgicos. La ciudad de Cajamarca en donde se realizar el muestreo para el trabajo de investigacin, tiene dos pocas bien diferenciadas; una poca de lluvias y una seca. Teniendo las siguientes caractersticas climatolgicas 1 : Altitud : 2650 msnm Latitud : 7 10 03 Longitud : 78 29 35 Clima : Templado seco Precipitacin pluvial : 801 mm 3 (Promedio anual) Humedad relativa : 68.92% (Promedio anual) Temperatura promedio : 14,5 C Humedad relativa promedio : 66,7%
1 Servicio Nacional de Meteorologa e Hidrologa (SENAMHI Cajamarca 2012). 36
2. Materiales 2.1 Material biolgico El presente estudio se realizar en ciento veinte (120) muestras de sangre entera (EDTA + sangre), las que sern obtenidas de caninos clnicamente sanos y de crianza domstica. 2.2 Material de campo Hoja de identificacin del canino. Etiqueta para la identificacin de las muestras. Guantes. Lapicero. Plumn (para rotular las muestras). Libreta (para anotaciones). Caja trmica 2.3 Material de escritorio Papel bond A4. Flderes Lapiceros. Lpices. CDs. Impresora. Computadora 2.4 Material de laboratorio Los materiales utilizados para la obtencin de cada uno de los parmetros hematolgicos se describen en sus respectivos anexos. Tubos de ensayo de 10 ml. Tubos de ensayo para recolectar sangre con EDTA Lminas porta y cubre objetos. Tubos capilares 37
Gradilla portatubos Centrfuga para hematocrito TRIAC Centrifuge. Microscopio (YUJIE Optics). Espectrofotmetro Pipetas de 10 l a 100 l., Pipeta de Thoma Colorante Wright Tubo de goma y boquilla de caucho Cmara de Neubauer Merenfield Plastilina Escala de lectura para microhematocrito 2.5 Reactivos Solucin de Gower Diluyente original Kit de tincin Hemacolor 2
Solucin Drabkin 3
Solucin Buffer 6.5
3. Metodologa 3.1 Seleccin de muestras: Se seleccionaran caninos que no pertenezcan a ninguna raza, clnicamente sanos definidos por inspeccin clnica, sin ningn tipo de signo o sntoma que indique que el animal padeca de alguna enfermedad, libre de antecedentes recientes de enfermedad, temperatura normal y hembras en anestro. No se incluirn hembras
2 Merck. Hemacolor Rapid staining of blood smear staining set for microscopy. 3 VALTEK Diagnosis. Chile 38
preadas o en lactancia, ni caninos bajo tratamiento mdico o recibiendo suplementacin mineral. (Pedrozo, 2010) 3.2 Obtencin de muestras: De cada uno de los caninos se obtendrn 3 ml de sangre con anticoagulante EDTA, mediante venopuncin ceflica, empleado el sistema de tubos al vaco 4 . Las muestras sern mantenidas a 4C y transportadas de inmediato al Laboratorio de Fisiologa Veterinaria de la Facultad de Ciencias Veterinarias de la Universidad Nacional de Cajamarca, para los respectivos anlisis. 3.3 Del Nmero de Muestras a) Muestra: 120 muestras de sangre con anticoagulante. b) Nmero: 120 muestras tomadas del mismo nmero de caninos los que sern clasificados de la siguiente manera: De acuerdo al sexo: machos = 60 y hembras = 60 De acuerdo a la edad: Cachorros (3 meses1 ao) = 15 hembras y 15 machos. Jvenes (1 3 aos) = 15 hembras y 15 machos Adultos (3 7 aos) = 15 hembras y 15 machos Geritricos (7 16 aos) = 15 hembras y 15 machos 3.4 Parmetros hematolgicos por analizar. Los parmetros a analizar sern los siguientes: Recuento de eritrocitos: Mtodo de la cmara de cuentaglbulos.
4 Vacutainer 39
Recuento de leucocitos: Mtodo de la cmara de cuentaglbulos. Dosaje de Hemoglobina: Mtodo de la Cianometahemoglobina y hemacolor. Volumen globular aglomerado (VGA): Mtodo del Microhematocrito. Recuento Leucocitario Diferencial Relativo y Absoluto: Mtodo de coloracin Wright y por clculo. Clculo de los ndices Hematimtricos: Mediante frmulas establecidas. Caractersticas Morfolgicas de Eritrocitos: Frotis sanguneo coloreado. Plaquetas: Mtodo directo. Velocidad de sedimentacin eritroctica: Mtodo Wintrobe.
3.5 Anlisis estadstico: Los valores referenciales de cada variable hematolgica, se estableci la normalidad de la distribucin de los datos y se determin su promedio y desviacin estndar, luego se calcul los valores de referencia de cada parmetro segn el mtodo de los promedios (X + 1.96 D.E.). Los valores que se obtuvieron fueron tambin sometidos a la prueba de significacin de Tukey (P=0,05) para establecer el nivel de diferencia significativa existente entre ellos.
40
CAPITULO IV
RESULTADOS
Muestra los valores promedio y de referencia, obtenidos mediante el promedio 1,96 D.E. de eritrocitos, hematocrito, hemoglobina, VCM, CHCM, HCM de una poblacin total de 120 caninos mestizos de la ciudad de Cajamarca.
Cuadro N 01: Valores hematolgicos de referencia (X+1,96 DE) para la serie roja de caninos de la ciudad de Cajamarca.
Muestra los valores hematolgicos promedio y los valores de referencia, obtenido mediante el promedio 1,96 D.E. de leucocitos, divididos en las formas celulares de neutrfilos segmentados, neutrfilos en banda, eosinfilos, linfocitos, monocitos y basfilos de una poblacin total de 120 caninos mestizos de la ciudad de Cajamarca.
Cuadro N 02: Valores Hematolgicos De Referencia (X+1,96 DE) para la serie blanca de caninos de la ciudad de Cajamarca.
Muestra los valores hematolgicos promedio y los valores de referencia, obtenidos mediante el promedio 1,96 D.E. de velocidad de sedimentacin y plaquetas, de una poblacin total de 120 caninos mestizos de la ciudad de Cajamarca.
Cuadro N 03: Valores hematolgicos de referencia (x+1,96 DE) en velocidad de sedimentacin y plaquetas de caninos de la ciudad de Cajamarca
VARIABLES HEMATOLGICAS UNID. X +/- DE VALORES DE REFERENCIA Velocidad Sedimentacin mm/h 1,5 +/- 0,6 0,3 - 2,7 Plaquetas 10 3 /l 165 +/- 1,8 130 - 200
43
Muestra los valores hematolgicos promedio y los valores de referencia, obtenidos mediante el promedio 1,96 D.E. de eritrocitos, hematocrito, hemoglobina, VCM, CHCM, HCM de 60 caninos mestizos hembras de la ciudad de Cajamarca, de los grupos de edades: cachorros, jvenes, adultos y geritricos.
Cuadro N 04: Valores hematolgicos de referencia (x+1,96 DE) para la serie roja de caninos hembras de la ciudad de Cajamarca
Muestran los valores hematolgicos promedio y los valores de referencia, obtenidos mediante el promedio 1,96 D.E. de leucocitos, divididos en las formas celulares de neutrfilos segmentados, neutrfilos en banda, eosinfilos, linfocitos, monocitos y basfilos de 60 caninos mestizos hembras de la ciudad de Cajamarca, de los grupos de edades: cachorros, jvenes, adultos y geritricos.
Cuadro N 05: Valores hematolgicos de referencia (x+1,96 DE) para la serie blanca de caninos hembras de la ciudad de Cajamarca.
Se muestran los valores hematolgicos promedio y los valores de referencia, obtenidos mediante el promedio 1,96 D.E de velocidad de sedimentacin y plaquetas de 60 caninos mestizos hembras de la ciudad de Cajamarca, de los grupos de edades: cachorros, jvenes, adultos y geritricos
Cuadro N 06: Valores hematolgicos de referencia (x + 1,96 DE) en velocidad de sedimentacin y plaquetas de caninos hembras de la ciudad de Cajamarca.
VARIABLES HEMATOLGICAS UNID. X +/- DE VALORES DE REFERENCIA Velocidad Sedimentacin mm/h 1,5 +/- 0,5 0,5 - 2,5 Plaquetas 10 3 /l 170 +/- 1,8 166,5 - 173,5
46
Muestra los valores hematolgicos promedio y los valores de referencia, obtenidos mediante el promedio 1,96 D.E de eritrocitos, hematocrito, hemoglobina, VCM, CHCM, HCM de 60 caninos mestizos machos de la ciudad de Cajamarca, entre los grupos de edades: cachorros, jvenes, adultos y geritricos.
Cuadro N 07: Valores hematolgicos de referencia (x+1,96 DE) para la serie roja de caninos machos de la ciudad de Cajamarca.
Se muestran los valores hematolgicos promedio y los valores de referencia, obtenidos mediante el promedio 1,96 D.E de leucocitos, divididos en las formas celulares de neutrfilos segmentados, neutrfilos en banda, eosinfilos, linfocitos, monocitos y basfilos de 60 caninos mestizos machos de la ciudad de Cajamarca, entre los grupos de edades: cachorros, jvenes, adultos y geritricos.
Cuadro N 08: Valores hematolgicos de referencia (x+1,96 DE) para la serie blanca de caninos machos de la ciudad de Cajamarca
Se muestra los valores hematolgicos promedio y los valores de referencia, obtenido mediante el promedio 1,96 D.E de velocidad de sedimentacin y plaquetas de 60 caninos mestizos machos de la ciudad de Cajamarca, de los grupos de edades: cachorros, jvenes, adultos y geritricos.
Cuadro N 09: Valores hematolgicos de referencia (x + 1,96 DE) en velocidad de sedimentacin y plaquetas de caninos machos de la ciudad de Cajamarca.
VARIABLES HEMATOLGICAS UNID. X +/- DE VALORES DE REFERENCIA Velocidad Sedimentacin mm/h 1,5 +/- 0,7 0,1 - 2,9 Plaquetas 10 3 /l 160 +/- 1,8 156,5 - 163,5
49
Se muestran los valores hematolgicos de la serie roja promedio, obtenidos mediante la prueba estadstica de Tukey para los 120 caninos mestizos de la ciudad de Cajamarca.
Cuadro N 10: Valores hematolgicos de referencia en caninos de la serie roja entre sexos (Canis lupus familiaris) de la ciudad de Cajamarca - 2012.
Variable Hematolgica Unid. Hembras Machos Eritrocitos 10 6 /l 6,89 0,9 a 6,73 0,9 a Hematocrito % 49,33 5 a 48,95 4,3 a Hemoglobina g/dl 18,43 2,4 b 19,53 2 a VCM fl 72,04 6,6 a 73,66 6,8 a CHCM g/dl 37,42 3,80 b 40,00 3,5 a HCM pg. 26,91 3,2 b 29,31 3,2 a
Letras diferentes en una misma fila indican diferencia (P < 0,05)
50
Se muestran los promedios valores hematolgicos de la serie blanca, obtenidos mediante la prueba estadstica de Tukey para los 120 caninos mestizos de la ciudad de Cajamarca.
Cuadro N 11: Valores hematolgicos de referencia hematolgicos de referencia en caninos de la serie blanca entre sexos (Canis lupus familiaris) de la ciudad de Cajamarca 2012. Variable Hematolgica Unid. Hembra Macho Leucocitos 10 3 /l 8,94 1,3 a 8,73 1 a Neutrfilos Segmentados % 66,48 2,7 a 66,9 2,1 a 10 3 /l 5,94 0,95 a 5,84 0,7 a Neutrfilos abastonados % 1,78 1 a 1,52 0,9 a 10 3 /l 0,16 0,1 a 0,13 0,1 a Eosinfilos % 2,93 1,2 a 2,5 1 b 10 3 /l 0,26 0,11 a 0,21 0,1 b Monocitos % 1,4 0,9 a 1,4 0,9 a 10 3 /l 0,12 0,1 a 0,12 0,1 Linfocitos % 27,4 2,3 a 27,7 2 a 10 3 /l 2,45 0,4 a 2,42 0,3 a Basfilos % 0 0 10 3 /l 0 0
Letras diferentes en una misma fila indican diferencia (P<0,05 Tukey).
51
Se muestran los valores hematolgicos de velocidad de sedimentacin y nmero de plaquetas, obtenidos mediante la prueba estadstica de Tukey para los 120 caninos mestizos de la ciudad de Cajamarca, divididos por sexo.
Cuadro N 12: Valores hematolgicos de referencia hematolgicos en caninos de la velocidad de sedimentacin y Plaquetas entre sexos (Canis lupus familiaris) de la ciudad de Cajamarca 2012.
Variable Hematolgica Hembras Machos Promedio Promedio Velocidad Sedimentacin (mm/h) 1,45 0,5 a 1,49 0,6 a Plaquetas (10 3 /l) 16,97 1,78 a 16,02 1,8 b
Letras diferentes en una misma fila indican diferencia (P<0,05 Tukey)
52
Se muestra los valores hematolgicos promedio y los valores de referencia, obtenidos mediante el promedio 1.96 D.E de eritrocitos, hematocrito, hemoglobina, VCM, CHCM, HCM de 60 caninos mestizos machos y 60 hembras entre los 3 meses y 1 ao de edad de la ciudad de Cajamarca.
Cuadro N 13: Valores hematolgicos de referencia (x+1,96 DE) para la serie roja de caninos de 3 meses a 1 ao (cachorros)
Se muestran los valores hematolgicos promedio y los valores de referencia, obtenido mediante el promedio 1,96 D.E de leucocitos, divididos en las formas celulares de neutrfilos segmentados, neutrfilos en banda, eosinfilos, linfocitos, monocitos y basfilos; de de 60 caninos mestizos machos y 60 hembras entre los 3 meses y 1 ao de edad de la ciudad de Cajamarca.
Cuadro N 14: Valores hematolgicos de referencia (x + 1,96 DE) para la serie blanca de caninos de 3 meses a 1 ao (cachorros)
Se muestran los valores hematolgicos promedio y los valores de referencia, obtenido mediante el promedio 1,96 D.E de velocidad de sedimentacin y plaquetas de de 60 caninos mestizos machos y 60 hembras de la ciudad de Cajamarca.
Cuadro N 15: Valores hematolgicos de referencia (x+1,96 DE) en velocidad de sedimentacin y plaquetas de caninos de 3 meses a 1 ao (cachorros)
VARIABLES HEMATOLGICAS UNID. X +/- DE VALORES DE REFERENCIA Velocidad Sedimentacin mm/h 0,9 +/- 0,2 0,5 - 1,3 Plaquetas 10 3 /l 163 +/- 2 159,1 - 166,9
55
Se muestran los valores hematolgicos promedio y los valores de referencia, obtenido mediante el promedio 1,96 D.E de eritrocitos, hematocrito, hemoglobina, VCM, CHCM, HCM de de 60 caninos mestizos machos y 60 hembras entre 1 y 3 aos de edad de la ciudad de Cajamarca.
Cuadro N 16: Valores hematolgicos de referencia (x + 1,96 DE) para la serie roja de caninos de 1 a 3 aos (Jvenes)
Muestra los valores hematolgicos promedio y los valores de referencia, obtenido mediante el promedio 1,96 D.E de leucocitos, divididos en las formas celulares de neutrfilos segmentados, neutrfilos en banda, eosinfilos, linfocitos, monocitos y basfilos; de de 60 caninos mestizos machos y 60 hembras entre 1 y 3 aos de edad de la ciudad de Cajamarca.
Cuadro N 17: Valores hematolgicos de referencia (x+1,96 DE) para la serie blanca de caninos de 1 a 3 aos (jvenes)
Muestra los valores hematolgicos promedio y los valores de referencia, obtenido mediante el promedio 1,96 D.E de la velocidad de sedimentacin y el nmero de plaquetas; de de 60 caninos mestizos machos y 60 hembras entre 1 y 3 aos de edad de la ciudad de Cajamarca.
Cuadro N 18: Valores hematolgicos de referencia (x + 1,96 DE) en velocidad de sedimentacin y plaquetas de caninos de 1 a 3 aos (jvenes)
VARIABLES HEMATOLGICAS UNID. X +/- DE VALORES DE REFERENCIA Velocidad Sedimentacin mm/h 1,5 +/- 0,5 0,5 - 2,5 Plaquetas 10 3 /l 170 +/- 1,8 166,5 - 173,5
58
Muestra los valores hematolgicos promedio y los valores de referencia, obtenido mediante el promedio 1,96 D.E de eritrocitos, hematocrito, hemoglobina, VCM, CHCM, HCM de 60 caninos mestizos machos y 60 hembras entre 3 a 7 aos de edad de la ciudad de Cajamarca.
Cuadro N 19: Valores hematolgicos de referencia (x+1,96 DE) para la serie roja de caninos de 3 a 7 aos (adultos)
Muestra los valores hematolgicos promedio y los valores de referencia, obtenido mediante el promedio 1,96 D.E de leucocitos, divididos en las formas celulares de neutrfilos segmentados, neutrfilos en banda, eosinfilos, linfocitos, monocitos y basfilos; de 60 caninos mestizos machos y 60 hembras entre 3 a 7 aos de edad de la ciudad de Cajamarca.
Cuadro N 20: Valores hematolgicos de referencia (x+1,96 DE) para la serie blanca de caninos de 3 a 7 aos (adultos)
Muestra los valores hematolgicos promedio y los valores de referencia, obtenido mediante el promedio 1,96 D.E de la velocidad de sedimentacin y el nmero de plaquetas; de de 60 caninos mestizos machos y 60 hembras entre 3 a 7 aos de edad de la ciudad de Cajamarca.
Cuadro N 21: Valores hematolgicos de referencia (x+1,96 DE) en velocidad de sedimentacin y plaquetas de caninos de 3 a 7 aos (adultos)
VARIABLES HEMATOLGICAS UNID. X +/- DE VALORES DE REFERENCIA Velocidad Sedimentacin mm/h 1,5 +/- 0,5 0,5 - 2,5 Plaquetas 10 3 /l 163 +/- 1,7 159,7 - 166,3
61
Muestra los valores hematolgicos promedio y los valores de referencia, obtenido mediante el promedio 1,96 D.E. de eritrocitos, hematocrito, hemoglobina, VCM, CHCM, HCM de de 60 caninos mestizos machos y 60 hembras desde los 7 aos en adelante de la ciudad de Cajamarca.
Cuadro N 22: Valores hematolgicos de referencia (x + 1,96 DE) para la serie roja de caninos de 7 aos a ms (geritricos)
Se muestra los valores hematolgicos promedio y los valores de referencia, obtenido mediante el promedio 1,96 D.E. de leucocitos, divididos en las formas celulares de neutrfilos segmentados, neutrfilos en banda, eosinfilos, linfocitos, monocitos y basfilos; de 60 caninos mestizos machos y 60 hembras desde 7 aos en adelante de la ciudad de Cajamarca.
Cuadro N 23: Valores hematolgicos de referencia (x + 1,96 DE) para la serie blanca de caninos de 7 aos a ms (geritricos)
Muestra los valores hematolgicos promedio y los valores de referencia, obtenido mediante el promedio 1,96 D.E. de la velocidad de sedimentacin y el nmero de plaquetas; de 60 caninos mestizos machos y 60 hembras desde 7 aos a ms edad de la ciudad de Cajamarca.
Cuadro N 24: Valores hematolgicos de referencia (x+1,96 DE) en velocidad de sedimentacin y plaquetas de caninos de 7 aos a ms (geritricos)
VARIABLES HEMATOLGICAS UNID. X +/- DE VALORES DE REFERENCIA Velocidad Sedimentacin mm/h 2,1 +/- 0,6 0,9 - 3,3 Plaquetas 10 3 /l 163 +/- 1,8 159,5 - 166,5
64
Se muestran los valores hematolgicos de la serie roja promedio, obtenidos mediante la prueba estadstica de Tukey para los 120 caninos mestizos de la ciudad de Cajamarca, divididos por edades.
Cuadro N 25: Valores hematolgicos de referencia hematolgicos de referencia en caninos de la serie roja entre edades (Canis lupus familiaris) de la ciudad de Cajamarca 2012. Variable Hematolgica Edades 3 m a <1ao 1 a <3 aos 3 a <7 aos > de 7 aos Eritrocitos 10 6 /l 6,05 0,5 b 6,94 0,7 a 7,23 0,9 a 7,02 0,9 a Hematocrito % 44,13 3,6 b 50,03 3 a 51,53 3,2 a 50,87 4 a Hemoglobina g/dl 16,93 2 c 19,63 1,9 ab 20,37 1,9 a 19,00 1,7 b VCM fl 73,55 6,6 a 72,66 7 a 72,23 7,2 a 72,96 6 a CHCM g/dl 38,42 4 a 39,25 3,2 a 39,63 4 a 37,54 4 a HCM pg. 28,13 3,7 a 28,5 1,9 a 28,39 2,8 a 27,42 3,8 a
Letras diferentes en una misma fila indican diferencia (P<0,05 Tukey)
65
Se muestran los promedios de valores hematolgicos para la serie blanca, obtenidos mediante la prueba estadstica de Tukey para los 120 caninos mestizos de la ciudad de Cajamarca, divididos por edades.
Cuadro N 26: Valores hematolgicos de referencia hematolgicos de referencia en caninos de la serie roja entre edades (Canis lupus familiaris) de la ciudad de Cajamarca 2012.
Variable Hematolgica Edades 3 m a < 1 ao 1 a < 3 aos 3 a <7 aos > de 7 aos Eritrocitos 10 6 /l 6,05 0,5 b 6,94 0,7 a 7,23 0,9 a 7,02 0,9 a Hematocrito % 44,13 3,6 b 50,03 3 a 51,53 3,2 a 50,87 4 a Hemoglobina g/dL 16,93 2 c 19,63 1,9 ab 20,37 1,9 a 19,00 1,7 b VCM fl 73,55 6,6 a 72,66 7 a 72,23 7,2 a 72,96 6 a CHCM g/dl 38,42 4 a 39,25 3,2 a 39,63 4 a 37,54 4 a HCM pg. 28,13 3,7 a 28,5 1,9 a 28,39 2,8 a 27,42 3,8 a
Letras diferentes en una misma fila indican diferencia (P<0,05 Tukey)
66
Se muestran los valores promedios hematolgicos de velocidad de sedimentacin y plaquetas, obtenidos mediante la prueba estadstica de Tukey para los 120 caninos mestizos de la ciudad de Cajamarca, divididos por edades.
Cuadro N 27: Valores hematolgicos de referencia hematolgicos de referencia en caninos de la velocidad de la velocidad de sedimentacin y Plaquetas en relacin a la edad (Canis lupus familiaris) de la ciudad de Cajamarca 2012. Variable Hematolgica Edad 3 m. a< 1ao 1 a <3 aos 3 a <7 aos > de 7 aos Velocidad de Sedimentacin mm/h 0,93 0,29 c 1,47 0,5 b 1,47 0,5 b 2,02 0,6 a Plaquetas 10 3 /l 16,3 1,97 a 17,03 1,8 a 16,33 1,7a 16,3 1,8 a
Letras diferentes en una misma fila indican diferencia (P<0,05 Tukey)
67
CAPITULO V
DISCUSIN
DE LA POBLACIN TOTAL El recuento de eritrocitos para los caninos mestizos de la ciudad de Cajamarca presentan un promedio de 6,8 10 6 /l (Cuadro N 01) resultados ligeramente superiores a los obtenidos por Gmez (1988) con 6,5 10 6 /l (Tabla N 03) quien realiz su investigacin en la misma ciudad, pero con un nmero inferior de muestra (n=100); difiere tambin con lo reportado por Choquehuanca (2008) cuyos valores son inferiores (5,9 10 6 /l) (Tabla N 09) y cuya investigacin fue ejecutada con la raza de perros sin pelo del Per, a nivel del mar y utilizando el mtodo del contador automatizado Coulter; tambin difiere en menor proporcin con los resultados obtenidos por Chu (2010) que fueron 6,6 10 6 /l (Tabla N 12), investigacin realizada al igual que Choquehuanca a nivel del mar. En el caso de los promedios obtenidos en este estudio para hematocrito y hemoglobina fueron de 49,1% y 19 g/dl respectivamente (Cuadro N 01), los cuales tambin son superiores a los encontrados por Gmez (1988) 43% de hematocrito y 15 g/dl de hemoglobina; a lo encontrado por Choquehuanca (2008) con 43,2% hematocrito y 14,9 g/dl hemoglobina; y a los resultados encontrados por Chu (2010) con 40% y 13,2 g/dl para ambas variables. Adems, se difiere con Schalm (1979) quien propone que en el canino, el valor normal de hemoglobina aceptado es de 12 a 17 gr/dl de sangre. Sin embargo no se conoce el grupo de estudio de Schalm, y tampoco el lugar donde se realiz. Se debe manifestar adems que, en algunos casos el error en altos valores de hemoglobina segn Latimer (2003) pueden ocurrir con la presencia 68
de cuerpos de Heinz, hemolisis, lipemia y tratamientos con oxiglobina que pueden causar altos valores de hemoglobina. Sin embargo, los animales de este estudio que presentaron en el suero lipemia, ictericia o hemolisis, fueron descartados del grupo, as como no se observaron en los extendidos eritrocitos con Cuerpos de Heinz, lo que descarta la probabilidad de que se atribuya a estas inclusiones citoplasmticas los altos valores de hemoglobina en los caninos mestizos de la ciudad de Cajamarca. Los promedios obtenidos para los ndices eritrocitarios: VCM 72,8 fl., CHCM son 38,7 g/dl y HCM 28,1 pg., son mayores que los trabajos reportados. Los resultados de sta investigacin, como se aprecian son superiores a los de los autores consultados, sta mayor variacin se debera a que el trabajo fue realizado a una altura de 2 650 msnm y donde la concentracin de oxigeno es menor a la concentracin del mismo a nivel del mar. Esta situacin se corrobora con los manifestado con Kirk (1997), Garca (1995) y Latimer et al. (2003) quienes mencionan que, entre los factores que afectan al recuento eritrocitario, as como a la concentracin de hemoglobina y concentracin de otros constituyentes hemticos, est la altitud, entre otros. Estos valores referenciales superiores en cuanto a nmero de eritrocitos, hematocrito y hemoglobina, son adems sustentados por Latimer (2003) quien menciona que la concentracin de hemoglobina nos provee una indicacin ms directa de la capacidad de la sangre para el transporte de oxigeno. Concordando tambin con Garca (1995) quien indica que, a grandes altitudes, cuando la cantidad de oxgeno del aire se encuentra muy reducida, y no hay suficiente transporte de oxgeno a los tejidos los eritrocitos se producen tan rpidamente que su nmero en sangre aumenta, por lo tanto a mayor nmero de eritrocitos, mayor presencia de hemoglobina, tenindose una relacin directa entre ellos. Adems que, Guyton (1991) y Langley (1973) indican que la disminucin de oxigeno (hipoxia) estimula la produccin de eritropoyetina la que a su vez eleva la produccin de eritrocitos hasta que desaparece la hipoxia. 69
Con respecto a Gmez (1988) se encontr una menor diferencia, ste autor no menciona en su trabajo la raza, edad, condiciones de manejo y sanidad de los animales con los cuales trabaj, a pesar de que las condiciones de altitud son iguales a esta investigacin, por lo que no podemos establecer las causales de diferencia entre ambos estudios. El recuento de leucocitos para caninos mestizos de la ciudad de Cajamarca presenta un promedio de de 8,810 3 /l (Cuadro N 02) resultados inferiores a los obtenidos por Gmez (1988) con 16,34 10 3 /l (Tabla N 03) quien realiz su investigacin en la misma ciudad; difiere tambin con lo reportado por Choquehuanca (2008) cuyos valores son superiores (13,510 6 /l) (Tabla N 09); tambin difiere en menor proporcin con los resultados obtenidos por Chu (2010) que fueron 9,610 6 /l (Tabla N 13). Segn, Wittwer y Bhmwald (1987), mencionan que para los caninos, suelen presentarse grandes fluctuaciones en el recuento de leucocitos. Por otro lado tambin se debera a factor predominante de raza, manejo y alimentacin y salud. Los resultados para los valores promedios obtenidos en la frmula leucocitaria relativa (Cuadro N 02), indica que se obtuvo un mayor porcentaje en el caso de neutrfilos segmentados y abastonados, linfocitos y disminuidos en eosinfilos y monocitos respecto a lo reportado por Gmez (1988), pero es posible que la frmula leucocitaria absoluta sea mayor a lo obtenido por Gmez (1988) debido a que l reporta una cantidad de leucocitos totales que casi duplica a lo obtenido en este trabajo, sin embargo no se ha podido establecer una comparacin exacta dado que Gmez (1988) no reporta la frmula leucocitaria absoluta. Con respecto a los otros autores de la revisin bibliogrfica se puede apreciar que hay diferencias mnimas tanto en la frmula leucocitaria relativa como absoluta. Choquehuanca (2008) presente un nmero superior en la cuenta de monocitos, pues cita datos del Kennel Club del Per (2008) que los perros sin pelo del Per, poseen el defecto gentico conocido como el sndrome de hipoplasia ectodrmica. Coincidiendo con Rebar (2000) quien menciona que los 70
monocitos son los responsables de funciones especficas del macrfago como: fagocitosis y regulacin de la respuesta inflamatoria por medio de la liberacin de mediadores inflamatorios (factores quimiotcticos, prostaglandinas, complemento, etc.); y por otro lado Harvey (2012) precisa que el nmero bajo de monocitos se presenta en mamferos normales. Con respecto a los eosinfilos, Harvey (2012) menciona que el nmero de stos es bajo en mamferos normales. La estimacin de Gmez (1988), pudo a la presencia de animales con alguna enfermedad de tipo hipersensibilidad, incluso de tipo parasitaria, como no se conoce la poblacin pudieron haber sido tomados caninos callejeros sin ningn control antiparasitario o de permanencia en el campo. As, Rebar (2000) nos menciona que los eosinfilos constituyen el principal componente de las reacciones de hipersensibilidad sistmicas. Cuando los antgenos de parsitos o alrgenos se unen a las IgE especficas de los mastocitos y estimulan la degranulacin de stos y se libera as histamina que atrae a los eosinfilos. Son los principales responsables en eliminar trematodos y nematodos que presenten IgG o complemento unido a su superficie. Tienen tambin una capacidad fagoctica o bactericida limitada y pueden desempear cierto papel en la destruccin de clulas neoplsicas. La presencia de basfilos en el recuento realizado por Gmez (1988) es 0% igual a lo reportado en ste trabajo. Esto se explicara tomando en cuenta a lo manifestado por Feldman (2000) y Cowell (2009); concuerdan que stas clulas granulocticas maduras son infrecuentes en la sangre perifrica de caninos y gatos. Por lo que raramente se encuentran en frotices sanguneos de caninos normales. Y, Rebar (2000) menciona que su presentacin en sangre perifrica es porque los basfilos juegan un papel primordial en la reaccin de hipersensibilidad inmediata como la que ocurre en la urticaria, anafilaxias y alergia aguda. La heparina que se encuentra dentro de los basfilos inhibe la coagulacin, con una importante funcin en la inflamacin. Los basfilos constituyen un porcentaje muy bajo en la poblacin total de leucocitos circulantes. En muchos caninos y gatos, raramente se llegan a observar basfilos en un recuento diferencial manual de leucocitos. 71
Con respecto a los valores de referencia de plaquetas de los caninos de la ciudad de Cajamarca el valor promedio general de 16510 3 /l los cuales no pueden ser comparados con Gmez (1988), pues l no realiz la cuenta de stas clulas; sin embargo Choquehuanca (2008) arroja un resultado promedio de 22810 3 /l para los perros sin pelo del Per, los cuales son superiores a los encontrados para los caninos mestizos de la ciudad de Cajamarca. Y Chu (2010) arroja 305,6 10 9 /L de plaquetas. Tomando en cuenta que Choquehuanca (2008) hizo el conteo mediante el sistema automatizado Coulter, el cual es ms exacto que el mtodo manual que se hizo en la presente investigacin. Sin embargo, el procedimiento realizado en este estudio coincide con la metodologa descrita por Harvey (2012) quien menciona que en los extendidos sanguneos de la mayora de los animales domsticos normalmente tienen un promedio entre 10 a 30 plaquetas bajo el objetivo de 100X. El nmero de plaquetas puede estimarse multiplicando el promedio por 15,000 o 20,000 para conseguir el nmero aproximado de plaquetas por microlitro de sangre. Benjamin (1990), menciona que el recuento directo de plaquetas en un frotis teido, utilizado en esta investigacin, se considera una tcnica inexacta, pero ms prctica y til en clnica. Puesto que normalmente se requiere de una estimacin, lo que se puede hacer al mirar el frotis cuando se realiza la frmula diferencial de leucocitos, apreciando si las plaquetas estn normales, aumentadas y disminuidas. Con respecto a los valores de referencia para la velocidad de sedimentacin de los caninos de la ciudad de Cajamarca presentan un valor promedio general de 1,5 mm/h que es menor a los comparados con Gmez (1988) cuyo resultado en promedio de la segunda lectura en 60 minutos (Cuadro N 03) fue de 5 mm/h. Esta menor velocidad de sedimentacin se debera a que en ste trabajo se obtuvo un mayor hematocrito. Medway (1973) considera que el ndice de sedimentacin debe interpretarse junto con el volumen de eritrocitos conglomerados (VGA). La sedimentacin lenta es de esperar cuando es grande la masa de eritrocitos, porque el exceso de clulas dificulta el movimiento del plasma. Las grandes velocidades de sedimentacin se ven en las anemias, que 72
tambin pueden mostrar sedimentacin difsica. No se establece comparacin con Choquehuanca (2008) y Chu (2010) por no haber estimado este parmetro. SEGN SEXO: En el Cuadro N 10, los promedios obtenidos de acuerdo al sexo se puede apreciar que no existe diferencia significativa (P>0,05) entre machos y hembras en cuanto a eritrocitos, hematocrito y VCM, y hay diferencia significativa (P<0,05) en hemoglobina, CHCM, y HCM. Las diferencias en stos se deben principalmente a que se tiene la concentracin de hemoglobina es mayor en machos y esto se refleja en la relacin con respecto a hematocrito y al nmero de eritrocitos que nos da una relacin en gr/dl mayor para el CHCM y un peso en pg. en el caso de HCM. Los valores encontrados en este trabajo son similares a los reportados por Gmez (1988), Choquehuanca (2008) y Chu (2010) para ambos sexos. Los resultados obtenidos, estn sustentados, tambin por lo manifestado por Kraft y Dir (2000), quienes sealan una diferencia en la cantidad de hemoglobina segn el sexo. En el Cuadro N 11, los promedios obtenidos de acuerdo al sexo en el recuento de leucocitos no presentan diferencia significativa (P>0,05), en el nmero de leucocitos, tipos celulares: neutrfilos segmentados, neutrfilos abastonados, monocitos y linfocitos; sin embargo se observa diferencia en el recuento de eosinfilos tanto en formula relativa y absoluta (P<0,05), siendo mayor en el caso de las hembras que en los machos. En el caso de Gmez (1988), no se observa diferencia significativa en ninguna de las formas celulares, Choquehuanca (2008) y Chu (2010) no tienen resultados estadsticos que permitan conocer si hay diferencia entre sexos estadsticamente significativa. Wittwer y Bhmwald (1987), mencionan que en cuanto al sexo y estado fisiolgico se encuentra una eosinofilia de la perra en celo y una leucocitosis marcada durante la preez y una gran variedad de otras condiciones. En este estudio se observa una mayor cantidad de eosinfilos en hembras (P<0,05) con respecto a los machos; sin embargo, no se puede hablar de eosinofilia por no 73
ser los resultados elevados con respecto a otros autores, adems de que no se tomaron en consideracin para el estudio perras en celo y/o estado o sospecha de gestacin. Referente a la velocidad de sedimentacin (Cuadro N 12) para ambos sexos no existe diferencia significativa en los resultados (P>0,05). Comparados con Gmez (1988) son inferiores, donde las hembras presentan mayor velocidad de sedimentacin eritroctica con respecto a los machos. En el Cuadro N 12, con respecto a las plaquetas, se observa una diferencia significativa (P<0,05) entre el nmero de plaquetas de hembras con las de machos, teniendo las hembras un mayor nmero de plaquetas que los machos. SEGN EDAD En el Cuadro N 13, se observa que los valores promedio de eritrocitos, hemoglobina y hematocrito en el grupo de canes de 3 meses a 1 ao es menor y diferente significativamente (P<0,05), con respecto a los otros tres grupos. No se observa diferencia significativa (P>0,05) en cuanto a los ndices hematimtricos como VCM, CHCM y HCM entre grupos. En el caso de Gmez (1988) no se hizo la comparacin entre edades. Se concuerda con Choquehuanca (2008) que presenta tambin un nmero inferior en eritrocitos, hematocrito y hemoglobina, en el grupo de edad menores a un ao, mientras que Chu (2010) no tiene diferencia en sus variables hematolgicas de eritrocitos, hematocrito y hemoglobina. Segn Kraft y Drr (2000), se coincide que existen variaciones del dosaje de hemoglobina en relacin al sexo y edad ya que en el can estos valores comienzan a disminuir a partir del nacimiento, seguidas de un incremento gradual desde los cuatro meses. As tambin (Harvey, 2012) menciona que la absorcin del hierro, sustancia importante para la formacin de hemoglobina, se realiza desde la dieta, lo cual depende de la edad, especie, reservas de hierro, capacidad de eritropoyesis, inflamaciones y preez, como tambin la cantidad y la forma qumica ingerida. Un pequeo porcentaje de hierro en la dieta es absorbido en animales adultos normales. 74
Valores disminuidos para hematocrito obtenidos en canes menores a un ao se sustenta en lo mencionado por Latimer (2003), que el hematocrito en cachorros que se encuentra dentro de los intervalos de referencia o bajo es por una persistente reticulocitosis. Por esta razn, se podra respaldar que los caninos jvenes tengan menos porcentaje de hematocrito. Y lo que es sustentado por Feldman (2000) quien menciona que los reticulocitos se pueden contar hasta en 10% en caninos durante los dos primeros meses de vida. Este nmero decrece en los niveles de sangre de caninos adultos aproximadamente a partir de los 5 a 6 meses de edad. Y, Cowell (2009) indica que los animales muy jvenes, debido al rpido crecimiento de su espacio vascular, tienen valores relativamente bajos de hematocrito. Debido a que los eritrocitos fetales son sustituidos por eritrocitos adultos, los animales en periodo de crecimiento inicial tienen mayor anisocitosis, policromasia y eritrocitos nucleados comparados con animales maduros. De acuerdo a los resultados anteriores se sugiere cambiar la divisin de grupos etarios para prximas investigaciones, y formar grupos de cachorros dividindoles desde neonatos hasta cachorros juveniles, por considerarse que estas edades tienen parmetros diferentes, como lo menciona Serrano (2001), quien considera en cachorros, a los neonatos durante sus dos primeras semanas de vida y son pacientes peditricos entre las dos semanas y los seis meses. En cuanto al conteo de las plaquetas (Cuadro N 15), no se observa diferencia significativa (P>0,05) en los cuatro grupos etarios, estos resultados son inferiores a los obtenidos por Choquehuanca (2008) quien obtuvo valores superiores en el grupo de cachorros con respecto a sus dos otros grupos, y Chu (2010) sus valor ms alto est en el grupo de jvenes. Sin embargo coincide con Serrano (2011) quien menciona que las plaquetas son totalmente funcionales desde el nacimiento y su nmero es similar al de los adultos. En el Cuadro N 15, la velocidad de sedimentacin se observa que los valores promedio van aumentando de acuerdo al avance de la edad, el grupo de 3 75
meses a 1 ao es menor; en los grupos de 1 a 3 aos y 3 a 7 aos se mantienen constante; mientras que se observa un aumento en los caninos de 7 aos a ms edad. Estos rangos no se pueden comparar con Gmez (1988) porque no se ubica en sus tablas, la diferenciacin por edades de ste parmetro. De acuerdo a Medway (1979), la velocidad de sedimentacin est supeditada a la cantidad de eritrocitos pequeos (microcitos) que tienen menor velocidad de sedimentacin que los macrocitos. Se ha observado que los macrocitos son con frecuencia reticulocitos y que stos y los eritrocitos nucleados no se aglomeran. En el Cuadro N 14 se observa que los valores promedio en la cuenta leucocitaria son diferentes significativamente (P<0,05) en nmero de leucocitos y todos los tipos celulares leucocitarios, exceptuando a los basfilos. Gmez (1988) no nos muestra tabla de valores por edad en diferenciacin de stos grupos celulares leucocitarios. Choquehuanca (2008), se observa tambin diferencia entre leucocitos y sus formas celulares. As como Chu (2010) tambin muestra ciertas diferencias en la frmula de blancos. En el caso de los linfocitos, se observa una importante presencia de stos en el grupo de cachorros (3 meses y 1 ao) y el grupo de jvenes (1 3 aos) As tambin, lo obtenido por Choquehuanca (2008) el grupo de edad menores de un ao tienen mayor presencia de linfocitos. Los datos obtenidos por Chu (2010) tambin muestran valores de linfocitos elevados en los cachorros con respecto a las edades de jvenes y adultos. Wittwer y Bhmwald (1987) y Serrano (2011), mencionan que como en el caso de la edad el recuento de leucocitos en el cachorro recin nacido es relativamente alta (16,5 10 3 /l) y disminuye rpidamente durante los primeros das de vida y comienza a incrementarse a partir de la primera semana despus del nacimiento, hasta aproximadamente los 60 das de vida, para despus estabilizarse, siendo el incremento en base a los linfocitos, lo que se cree que est relacionado con la formacin de anticuerpos. Concordando a su vez con Latimer (2003), quien menciona el origen de los linfocitos T y B son embriolgicamente derivados del timo y la mdula sea respectivamente. Y los linfocitos en mamferos adultos, se originan en tejidos linfoides secundarios 76
como las tonsilas, ndulos linfticos, bazo, tejidos linfoides bronquiales, cuya presencia se encuentra elevada en edades temprana de vida. En el grupo geritrico (7 aos a ms edad) se observa una mayor cantidad de neutrfilos abastonados que lo diferencia significativamente de los grupos (P<0,05). Se coincide con Choquehuanca (2008), quien encuentra mayor nmero de neutrfilos abastonados en el grupo de adultos mayores de 7 aos. El grupo celular de eosinfilos presenta ligero aumento no significativo de acuerdo al avance de la edad, observndose una diferencia significativa (P<0,05) entre el grupo de 3 meses a 1 ao con los otros grupos. Choquehuanca (2008) presenta un valor absoluto mayor en el grupo de 1 a 7 aos, siendo un grupo de edad similar al rango de sta investigacin, con 0,510 3 /l absoluto y 3% relativo. Y, Chu (2010), en la cuenta absoluta permanecen igual para los tres grupos de edades 0,210 3 /l, mientras que en la parte relativa se encuentra un alto porcentaje en el grupo de cachorros 2.6% sobre los grupos de jvenes y adultos.
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CAPITULO VI
CONCLUSIONES
Para los caninos mestizos de la ciudad de Cajamarca, en las condiciones de ste estudio se obtuvo las siguientes conclusiones: 1. El recuento de eritrocitos para la poblacin presentan un promedio de 6,8 10 6 /l, y referenciales entre de 5,0 8,6 10 6 /l, hematocrito 49,1% promedio y sus valores referenciales entre 40 - 58%, hemoglobina promedio de 19 g/dl y los valores referenciales 14,5 - 23,5 g/dl. En cuanto los ndices eritrocitarios VCM promedio de 72,8 fl., y referenciales entre 59,7 - 85,9 fl.; CHCM promedio 38,7 g/dl y sus lmites 31,1 - 46,3 g/dl, HCM en promedio 28,1 pg. y las referencias 21,4 - 34,8 pg. Los valores de referencia de leucocitos presentan un valor promedio de 8,8 10 3 /l y los valores referenciales entre 6,4 - 11,2 10 3 /l, en cuanto a las formas celulares, los neutrfilos segmentados en valor absoluto promedio es de 5,9 10 3 /l y valor relativo 66,7% y sus valores de referencia absoluto fueron de 4,3 - 7,5 10 3 /l y relativo entre 62 - 71%, los neutrfilos abastonados en promedio para valor absoluto fue de 0,1 10 3 /l y el valor relativo fue 1,7%, los valores de referencia estn entre 0 - 0,3 10 3 /l absoluto y 0 4% relativo, en linfocitos el promedio absoluto fue de 2,4 10 3 /l y en valor relativo 27,6%, los valores de referencia absoluto entre 1,6 - 3,2 10 3 /l y en valor relativo 23 32%, los monocitos en promedio de valor absoluto 0,1 10 3 /l y 1,4% valor relativo, los valores de referencia de valor absoluto fueron de 0,0 - 0,3 10 3 /l y en valor relativo 0 3%, finalmente los basfilos se encuentran en promedio 0% y 0 10 3 /l. Los valores de referencia para la velocidad de sedimentacin presentan promedio general de 1,5 mm/h, y rangos referenciales entre 0,3 2,7 mm/h. 78
Los valores de referencia de plaquetas promedio fue de 165 10 3 /l y los rangos referenciales estn entre 130 - 200 10 3 /l.
2. Los valores referenciales para caninos hembras: en eritrocitos promedio de 6,9 10 6 /l y los valores referenciales entre 5,1 - 8,7 10 6 /l, el hematocrito promedio fue de 49% y los valores referenciales entre 40 - 59%, la hemoglobina promedio de 18,4 g/dl y sus referenciales entre 13,7 23,1 g/dl., en cuanto a los ndices eritrocitarios como VCM el promedio de 72 fl. y sus referenciales 59,1 84,9 fl.; CHCM en promedio 37,4 g/dl y sus referenciales entre 30,0 - 44,8 g/dl, HCM, en promedio 26,9 pg. y los valores referenciales 20,6 33,2 pg. El recuento de leucocitos promedio en hembras fue de 8,9 10 3 /l, y los valores referenciales entre 6,2 - 11,6 10 3 /l, en el caso de formas celulares los neutrfilos segmentados en promedio para valor absoluto fue de 5,9 10 3 /l y de 66.5% para valor relativo, los valores referenciales absolutos fueron 4,1 - 7,7 10 3 /l y en valores relativos de 61 72%, el valor promedio de neutrfilos abastonados 0,2 10 3 /l absoluto y 1,8% relativo, los valores referenciales fueron de 0 - 0,4 10 3 /l y 0 - 4% respectivamente, eosinfilos tienen un promedio absoluto de 0,3 10 3 /l, y 2,9% relativo, con los valores referenciales entre 0,1 - 0,5 10 3 /l y 1 - 5%, los linfocitos con promedio absoluto 2,5 10 3 /l y 27,4% relativo, los valores referenciales fueron 1,7 - 3,3 10 3 /l y 23 - 32%, los monocitos en promedio absoluto fue de 0,1 10 3 /l y 1,5% en relativo, los referenciales estn entre 0 - 0,3 10 3 /l y 0 - 3%. Los valores promedio de la velocidad de sedimentacin fue de 1,5 mm/h, y los valores referenciales estn entre 0,3 2,7 mm/h. Los valores de referencia de plaquetas promedio fue de 170 10 3 /l y los rangos referenciales estn entre 166,5 173,5 10 3 /l.
3. Los valores referenciales para caninos machos: en eritrocitos promedio de 6,7 10 6 /l y los valores referenciales entre 4,9 - 8,5 10 6 /l, el hematocrito promedio fue de 49% y los valores referenciales entre 41 - 57%, la hemoglobina promedio de 19,5 g/dl y sus referenciales entre 15,6 23,4 g/dl., en cuanto a los ndices eritrocitarios como VCM el promedio de 73,7 fl. 79
y sus referenciales 60,4 - 87 fl.; CHCM en promedio 40 g/dl y sus referenciales entre 33,1 - 46,9 g/dl, HCM en promedio 29,3 pg. y los valores referenciales 23,2 35,4 pg. El promedio de leucocitos 8,7 10 3 /l y valores referenciales fueron 6,7 - 10,7 10 3 /l, los neutrfilos segmentados tienen promedio absoluto de 5,810 3 /l y relativo 66,9%, los referenciales fueron 4,4 - 7,2 10 3 /l y 63 - 71%, los neutrfilos abastonados en promedio 0,1 10 3 /l y 1,5%, los valores referenciales estn entre 0 - 0,3 10 3 /l y 0 - 3%, el valor promedio de eosinfilos fue de 0,2 10 3 /l y 2,5%, los valores referenciales fueron de 0,0 - 0,4 10 3 /l y 0 - 5%, promedio de linfocitos fue de 2,4 10 3 /l absoluto y 27,7% relativo, los referenciales fueron de 1,8 - 3,0 10 3 /l y 24 - 32%, finalmente, los basfilos se encuentran en promedio 0% y 0 10 3 /l. Los valores promedio de la velocidad de sedimentacin fue de 1,5 mm/h, y los valores referenciales estn entre 0,1 - 2,9 mm/h. Los valores de referencia de plaquetas promedio fue de 160 10 3 /l y los rangos referenciales estn entre 156,5 163,5 10 3 /l.
4. Los valores referenciales de acuerdo a la edad fueron los siguientes: eritrocitos, hematocrito, hemoglobina respectivamente, de 3 meses a 1 ao (5,1 7,1 10 6 /l), (37 51%), (13 20,8 gr/dl); de 1 a 3 aos (5,5 8,3 10 6 /l), (44 56%), (15,9 23,3 gr/dl); de 3 a 7 aos (5,4 9,0 10 6 /l) (45 58%), (16,7 24,1 gr/dl) y el grupo de 7 aos a ms (5,2 8,8 10 6 /l), (43 59%), (15,7 22,3 gr/dl) Los valores de referencia del nmero de leucocitos para las edades 3 meses a 1 ao son 7,3 - 10,9 10 3 /l , de 1 a 3 aos 6,5 - 11,9 10 3 /l; y los grupos de 3 a 7 aos 6,2 - 10,6 10 3 /l y de 7 a ms aos 6,5 - 10,9 10 3 /l. Los valores de referencia para neutrfilos segmentados, neutrfilos abastonados, eosinfilos, monocitos, linfocitos y basfilos en valor absoluto y relativo respectivamente fueron, entre edades 3 meses a 1 ao fue de 4,9 7,3 10 3 /l ; 64 - 70%, de 1 a 3 aos 4,2 8,2 10 3 /l y 62 a 70%; de 3 a 7 aos tienen de 4,0 a 7,2 10 3 /l y 62 72%, y de 7 a ms aos fue de 4,1 a 7,3 10 3 /l y 60 72%. 80
Neutrfilos abastonados de 3 meses a 1 ao fue de 0 0,3 10 3 /l, 0 - 3%, de 1 a 3 aos de 0 - 0,3 10 3 /l y 0 - 3%; de 3 a 7 aos con 0 - 0,3 10 3 /l y 0 3%, y de 7 a ms aos fue de 0 - 0,4 10 3 /l y 0 4%. Eosinfilos, de 3 meses a 1 ao fueron de 0 0,4 10 3 /l y 0 a 4%, grupo de 1 a 3 aos de 0,1 0,5 10 3 /l y de 1 a 5%, grupo de 3 a 7 aos de 0,1 - 0,5 10 3 /l y de 1 5%; mientras en el grupo de 7 a ms aos de 0,1 - 0,5 10 3 /l y de 0 6%. Monocitos, de 3 meses a 1 ao fueron de 0 0,3 10 3 /l y 0 a 3%, grupo de 1 a 3 aos desde 0 0,3 10 3 /l y de 0 a 3%, grupo de 3 a 7 aos de 0 - 0,3 10 3 /l y de 1 3%; mientras en el grupo de 7 a ms aos de 0 - 0,4 10 3 /l y de 0 4%. Linfocitos, de 3 meses a 1 ao fueron de 2 3,2 10 3 /l y 25 a 33%, grupo de 1 a 3 aos desde 2 3,3 10 3 /l y de 23 a 32%, grupo de 3 a 7 aos de 2 - 2,8 10 3 /l y de 23 31%; mientras en el grupo de 7 a ms aos de 2 - 2,9 10 3 /l y de 23 31%. Basfilos, los valores de referencia son iguales en todos los grupos de edades de: 0,0 a 0,0 10 3 /l y 0% La velocidad de sedimentacin se obtuvieron los valores de referencia de los grupos: 3 meses a 1 ao presenta un rango de 0,5 1,3 mm/h; el grupo de 1 a 3 aos y 3 a 7 aos mantienen el mismo rango 0,5 2,5 mm/h; mientras los 7 aos a ms edad con rango de 0,9 3,3 mm/h. Las plaquetas tuvieron valores de referencia para el grupo de 3 meses a 1 ao de 159,1 - 166,9 10 3 /l, de 1 a 3 aos 166,5 173,5 10 3 /l, el grupo de 3 a 7 aos 159.7 166.3 10 3 /l; y el de 7 aos a ms 159.5 166.5 10 3 /l.
5. Por otro lado, el referente de Gmez, B. como gua paraclnica realizada en Cajamarca en el ao 1988, se encontraron diferencias en el mtodo para determinar los valores referenciales, los valores de serie roja son mayores. En cuanto a leucocitos el nmero obtenido fue menor en este trabajo, en la frmula relativa los resultados fueron mayores, no presenta frmula leucocitaria absoluta. Y su trabajo no considera divisin entre edades.
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CAPITULO VII
BIBLIOGRAFA
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ANEXO
ANEXO N 01 1. Recuento de eritrocitos: Benjamn (1990), describe el siguiente procedimiento: Mtodo: Mtodo del Hemocitmetro Muestra: Sangre con anticoagulante Reactivos: Solucin de Gower a base de: - Sulfato de sodio 15.63 gr. - Acido actico 41.65 ml - Agua destilada 250 ml Material: Pipeta de Thoma, pieza de caucho, cmara de Neubauer, gradillas portatubos. Tcnica: 1. Colocar la pieza de caucho a la pipeta cuenta glbulos de Thoma, la que se identifica con la marca 101 por encima del bulbo. 2. Homogenizar la muestra de sangre, aspirar suavemente muestra de sangre hasta la marca 0.5 de la pipeta. Limpiar las paredes exteriores con papel absorbente. 3. Aspirar el diluyente (Solucin de Gower), hasta la marca 101. Poner la pipeta en forma horizontal y tapar la punta con el dedo antes de retirar la pieza de caucho. Agitarla por lo menos 2 a 3 minutos con un simple movimiento de mueca. 4. Descartar las 3 a 4 primeras gotas, limpiar el rea graduada de la cmara de Neubauer. Llenar el espacio comprendido entre la cmara y el cubreobjetos anteriormente colocado. 85
5. Observar al microscopio con el objetivo de 40X, se cuentan todos los eritrocitos de 5 a 25 cuadrados del rea central.
Clculo: Clulas contadas X 10 (0.1 mm. de profundidad) X 5 (1/5 de mm 2 ) X 200 (dilucin 1:200) = eritrocitos/microlitro. Se puede efectuar la suma de las clulas en los 5 cuadrados pequeos X 10000 = eritrocitos/microlitro.
2. Recuento de leucocitos: Gua de Laboratorio Diagnstico Clnico de la Facultad de Ciencias Veterinarias de la Universidad Nacional de Cajamarca (1990), describe el siguiente procedimiento para el recuento de leucocitos.
Mtodo: Mtodo del Hemocitmetro Muestra: Sangre con anticoagulante Reactivos: Diluyente original, elaborado con: - Acido actico glacial 1 ml - Solucin alcohlica de violeta de genciana: 2.5 ml - Agua destilada 100 ml Material: Pipeta de Thoma, pieza de caucho, cmara de Neubauer, gradillas portatubos. Tcnica: 1. Colocar la pieza de caucho a la pipeta cuenta glbulos de Thoma, la que a diferencia de la utilizada para recuento de eritrocitos se identifica con la marca 11 por encima del bulbo. 2. Homogenizar la sangre y llenar la pipeta hasta la marca 0,5 con la sangre, luego secar la parte externa y aspirar uniformemente el diluyente original hasta la marca 11, esto proporciona una dilucin de 1:20. 3. Agitar por unos 3 minutos para que se mezcle bien. Se descarta de 2 a 3 gotas de la pipeta antes de llenar la cmara contadora. Se deja 86
por lo menos 1 minuto para que los eritrocitos se lisen y que los leucocitos se sedimenten. 4. Con el objetivo de poco aumento (10 x), se cuentan las clulas de cada uno de los 4 cuadrados grandes de las esquinas. 5. El conteo se realiza de izquierda a derecha, se debe tener cuidado de no contar dos veces la misma clula, pues al final se reflejar con una diferencia enorme de lo que tiene en realidad el animal. 6. Se requiere contar las clulas que estn sobre la lnea izquierda y la lnea superior para incluirlas, o por el contrario, se cuentan las clulas que se encuentran sobre la lnea derecha o la inferior del cuadro no se incluyen en la cuenta. 7. Ya que se tiene la cuenta final (en la cual no debe haber una diferencia superior de 25% entre cada cuadro de las esquinas). Clculo: Clulas contadas X 20(dilucin 1:20) X 10(profundidad 0.1 mm) = Leucocitos/microlitro 4 (numero de mm 2 contados)
O la suma de las clulas de las cuatro esquinas de los cuatro cuadros X 50 = leucocitos/microlitro.
3. Dosaje de hemoglobina Laboratorio Valtek (1999), describe en su gua de reactivos el siguiente procedimiento para la cuantificacin de hemoglobina en la sangre. Mtodo: Mtodo de la cianometahemoglobina Fundamento: Los eritrocitos son lisados por un agente tensioactivo, liberando la hemoglobina en la solucin. Esta es oxidada a metahemoglobina por el ferricianuro, siendo esta ultima convertida a cianometahemoglobina por la presencia del cianuro. La absorbancia de la cianometahemoglobina es medida a 540 nm, siendo la intensidad del color obtenido, directamente proporcional a la concentraron de hemoglobina en la sangre. Reactivos: Ferricianuro de potasio 0.6 mM Cianuro de potasio 0.7 nM 87
Sterox SE Buffer y estabilizadores no reactivos c.s.p. Estndar de hemoglobina (18 g/dl) Material: Pipeta de capacidad de 10 a 100 ul, espectrofotometro, gradillas. Tcnica: 1. Colocar 3 ml de reactivo para hemoglobina en los tubos de ensayo. 2. Invertir y homogenizar la sangre. Pipetear 12 ul de sangre, limpiar y secar las paredes exteriores de la pipeta. 3. Introducir la pipeta en los tubos con el reactivo para hemoglobina. 4. Mezclar e incubar 3 minutos a temperatura ambiente. Leer las absorbencias llevando a cero el equipo con el blanco. Clculos: Factor = 18 / Absorbancia del estndar. Hemoglobina (g/dl) = Factor X Absorbancia desconocida.
4. Determinacin del volumen globular aglomerado (VGA) 1. Se utiliza el mtodo del microhematocrito con los capilares no heparinizados. 2. Se homogeniza la sangre en el tubo con EDTA, y se coloca por un extremo el capilar para que la sangre con una determinada cantidad. 3. Se tapona uno de los extremos con plastilina. 4. Se coloca el capilar en la centrfuga por 3 minutos a 15000 rpm. 5. Una vez obtenido el capilar se mide en el escalmetro especial para medir el hematocrito o VGA y obtener la lectura en porcentaje.
5. Determinacin de la velocidad de sedimentacin: Oblitas (2010), describen el siguiente mtodo para la obtencin de velocidad de sedimentacin. Mtodo: Mtodo del Microhematocrito con tubo milimtrico Fundamento: El principio de medir la distancia recorrida por los eritrocitos en el plasma por unidad de tiempo, prducida por 88
sedimentacin de los eritrocitos al dejar la sangre en un tubo en posicin vertical. El valor numrico en milmetros se obtiene midiendo la distancia que hay entre el punto ms bajo del menisco de la superficie y el lmite superior del sedimento de eritrocitos. Muestra: Sangre con anticoagulante o entera. Material: Tubo milimtrico, cronmetro, pipeta Pasteur. Tcnica: 1. Tomar con la pipeta Pasteur sangre, y llenar la pipeta milimtrica desde el fondo hasta la marca 0. 2. Colocar el tubo de forma perpendicular y en un lugar fijo y sin interferencia de movimiento. 3. Realizar la toma de la medida en milmetros en tiempo de 30 minutos y luego en 60 minutos. Clculos: Las lecturas obtenidas se dan mm/hora.
4. Recuento leucocitario diferencial Benjamn (1990), describen el siguiente procedimiento: A. Frotis sanguneo 1. Colocar una pequea gota de sangre en uno de los extremos del portaobjetos, el cual debe estar en una superficie slida y plana. 2. Se coloca el extremo de un segundo portaobjetos o cubreobjetos (para extender), contra la superficie del primeo en un ngulo de 30. 3. El segundo portaobjetos o cubreobjetos se desliza suavemente para extender la gota de sangre, cuando sta se haya extendido sobre aproximadamente dos tercios del ancho del portaobjetos, por accin capilar, se mueve hacia delante con un movimiento firme y uniforme. La sangre correr formando una pelcula delgada. 4. Secar rpidamente ondendola en el aire o usando un ventilador.
89
B. Preparacin del frotis y tincin Hemacolor y examen
B.1 Preparacin del frotis: Carr y Rodak (2010). 1. Se coloca una gota de sangre con EDTA de aproximadamente 3 mm en un extremo de la lmina portaobjetos de 75 x 25 mm que ser para el soporte del extendido y con otra lmina de bordes y esquinas biselados denominada extensor, la lmina extensora se coloca por delante de la gota de sangre ngulo de 35 - 45 con respecto a la lmina porta, el extensor se desliza hacia atrs hasta tener contacto con la gota de y se la sostiene hasta que la sangre cubra todo el ancho del portaobjetos. A continuacin el extensor se desliza con rapidez y suavidad hacia el otro extremo del portaobjetos que sirve de soporte para el extendido, con lo que se crea extendido en forma de cua. 2. El secado debe ser lo ms rpido posible, utilizando para esto agitaciones rpidas en el aire.
B.2 Tincin con Hemacolor Fundamento: Esta preparacin de tincin policromtica, donde el azul de metileno libre es bsico tiendo los grupos cidos de color azul como el RNA, modificndose a color prpura que tie los grnulos de los basfilos y el ADN nuclear; la eosina es el componente cido y tie de rojo los grupos bsicos se tien de rojo a anaranjado en el caso de protenas, hemoglobina y grnulos de eosinfilos (Merck, Sharp, Dhome, 2002; Carr, Rodak, 2010) 1. El frotis seco se sumerge en la solucin fijadora 6 veces con un intervalo dentro de la solucin de un segundo. 2. Luego se sumerge tres veces por un segundo cada uno en la solucin de eosina. 3. Se retira el excedente con un papel absorbente, y se sumerge en la tincin de azul de metileno por 6 veces y un segundo de tiempo en ella. 90
4. Finalmente se enjuaga con agua destilada de un pH de 7.0 para eliminar el excedente de la tincin. 5. Se deja en un plano inclinado para secar.
B.3 Observacin: Se realiz la observacin de acuerdo a los pasos que describen Carr y Rodak (2010), describen lo siguiente: 1. El frotis sanguneo se comienza con el anlisis del frotis con un barrido del portaobjetos con el objetivo de 10X o de bajo aumento, que determinara la calidad general del frotis, incluida la distribucin de los eritrocitos que sugiere la presencia de rouleaux o la de un nmero desproporcionado de grandes clulas nucleadas en los bordes del extendido. Luego se emplea el objetivo 40X, con el que se busca los eritrocitos que se encuentren uniformemente distribuidos y en donde apenas se toquen unos con otros. Se multiplica el nmero promedio de leucocitos por campo de gran aumento por 1000 para obtener una aproximacin del total de leucocitos contados 10 3 /l. El paso siguiente es la evaluacin del frotis con el objetivo de 100X, el cual es realizar el estimado del recuento de leucocitos, pero utilizando el objetivo de inmersin en aceite 100X. Cuando se analiza el rea correcta de un frotis de un paciente con el recuento normal de eritrocitos, se observan alrededor de 200 a 250 eritrocitos por campo de 100X. Por lo general, el recuento diferencial incluye el conteo y la clasificacin de 100 leucocitos consecutivos y el informe de estas clases como porcentajes. El recuento diferencial se realiza de modo sistemtico; para ello se utiliza un recorrido en patrn de guarda griega, que minimiza los errores de distribucin de los leucocitos. Los resultados se informan como porcentajes de cada tipo de leucocito observado durante el recuento. 91
2. El recuento del nmero de plaquetas, en la que se utiliza el objetivo de inmersin en aceite 100X. se realiza el recuento del nmero de plaquetas en 10 campos que correspondan a un rea del frotis donde los eritrocitos apenas se toquen. El nmero promedio de plaquetas se multiplica por 20000 para obtener un nmero estimativo del total de plaquetas presentes en la muestra.
5. ndices hematimtricos Benjamn (1990), manifiesta que los ndices eritrocticos definen el tamao y el contenido de hemoglobina del eritrocito de valores obtenidos por la cuenta eritroctica, la concentracin de hemoglobina y el hematocrito; estos ndices son obtenidos mediante clculos matemticos y son los siguientes: A. Volumen Corpuscular Medio (VCM): expresa el volumen promedio del eritrocito individual, es una forma de calcular el tamao del eritrocito, y se calcula con la siguiente frmula:
VCM = VGA X 10 N eritrocitos (millones/microlitro)
El resultado expresa el volumen medio del eritrocito en fentolitros (fl.) B. Concentracin de Hemoglobina Corpuscular Media (CHCM): Es la concentracin de hemoglobina en el eritrocito promedio o la proporcin del peso de la hemoglobina y el volumen en el cual est contenido; se calcula con la siguiente frmula:
CHCM = Hemoglobina (g/dl) X 100 VGA El resultado se expresa en gramos por decilitro (g/dl)
C. Hemoglobina Corpuscular Media (HCM): es la cantidad de hemoglobina, por peso, en el eritrocito promedio; se calcula con la siguiente frmula: HCM = Hemoglobina g/dl X 10 N eritrocitos (millones/microlitro) 92
ANEXO N 02
FICHA DE REGISTRO PARA CANINOS
Fecha de muestreo: ________________ N ___________
Datos Generales: Nombre del propietario: Direccin: Telfono:. Nombre de la mascota: Fecha de nacimiento: Tipo de alimentacin:
Signos clnicos: Sexo: Peso:.. T: Mucosas: Ciclo sexual: Lat./min:. (En caso de hembras) T/LLc:.
93
ANEXO N 03 Anexo 3.1: Anlisis de Factorial de Eritrocitos entre sexos Fuente de variacin GL SC CM F P Sexo 1 0,7971 0,79707 1,36 0,2467 Edad 3 24,4389 8,14629 13,86 0,0000 Sexo*Edad 3 4,9618 1,65395 2,81 0,0425 Error 112 65,834 0,5878
Total 119 96,0318
CV: 11,26% Promedio: 6,81
Anexo 3.2: Anlisis de Factorial de Hematocrito entre sexos Fuente de variacin GL SC CM F P Sexo 1 4,41 4,408 0,41 0,5231 Edad 3 1037,23 345,742 32,18 0,0000 Sexo*Edad 3 191,76 63,919 5,95 0,0008 Error 112 1203,2 10,743
Total 119 2436,59
CV: 6,67 % Promedio: 49,14
Anexo 1.3: Anlisis de Factorial de Hemoglobina entre sexos Fuente de variacin GL SC CM F P Sexo 1 36,3 36,3 13,53 0,0004 Edad 3 196,167 65,3889 24,38 0,0000 Sexo*Edad 3 75,1 25,0333 9,33 0,0000 Error 112 300,4 2,6821
Total 119 607,967
CV: 8,63% Promedio: 18,98
Anexo 3.4: Anlisis de Factorial de VCM entre sexos Fuente de variacin GL SC CM F P Sexo 1 79,19 79,189 1,76 0,1876 Edad 3 27,98 9,3254 0,21 0,8914 Sexo*Edad 3 189,19 63,0637 1,4 0,2466 Error 112 5045,12 45,0457
Total 119 5341,48
CV: 9,91% Promedio: 72,85
94
Anexo 3.2: Anlisis de Factorial de CHCM entre sexos Fuente de variacin GL SC CM F P Sexo 1 199,42 199,425 20,21 0,0000 Edad 3 77,73 25,909 2,63 0,0539 Sexo*Edad 3 403,74 134,579 13,64 0,0000 Error 112 1104,94 9,866
Total 119 1785,83
CV: 8,11% Promedio: 38,709
Anexo 3.3: Anlisis de Factorial de CHCM entre sexos Fuente de variacin GL SC CM F P Sexo 1 173,36 173,357 23,02 0,0000 Edad 3 21,23 7,078 0,94 0,4241 Sexo*Edad 3 319,97 106,656 14,16 0,0000 Error 112 843,6 7,532
Total 119 1785,83
CV: 9,76% Promedio: 28,112
Anexo 3.4: Anlisis de Factorial de Leucocitos entre sexo y edad Fuente de variacin GL SC CM F P Sexo 1 1,37 1,3696 1,28 0,2597 Edad 3 13,589 4,5295 4,24 0,007 Sexo*Edad 3 30,332 10,1106 9,47 0,000 Error 112 119,515 1,0671 Total 119 164,805 CV: 11,69% Gran Media: 8,84,
Anexo 3.8: Anlisis de Factorial de VEL Fuente de variacin GL SC CM F P Sexo 1 0,0333 0,03333 0,16 0,6863 Edad 3 17,6062 5,86875 28,87 0,0000 Sexo*Edad 3 0,6167 0,20556 1,01 0,3906 Error 112 22,7667 0,20327