Instituto de Biologia Programa de Ps-Graduao em Ecologia
Maro de 2014
Variaes na histria de vida de peixes na Reserva de Desenvolvimento Sustentvel Aman (AM) e suas implicaes na morfologia e estruturao gnica das populaes
Henrique Lazzarotto de Almeida
Tese apresentada ao Programa de Ps-Graduao em Ecologia do Instituto de Biologia da Universidade Federal do Rio de Janeiro, como parte dos requisitos necessrios obteno do ttulo de Doutor em Cincias Biolgicas (Ecologia).
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Universidade Federal do Rio de Janeiro Centro de Cincias da Sade Instituto de Biologia Programa de Ps-Graduao em Ecologia
Henrique Lazzarotto de Almeida
Variao na histria de vida de peixes na Reserva de Desenvolvimentos Sustentvel Aman (AM) e suas implicaes na morfologia e estruturao gnica das populaes
Tese apresentada ao Programa de Ps-Graduao em Ecologia do Instituto de Biologia da Universidade Federal do Rio de Janeiro, como parte dos requisitos necessrios obteno do ttulo de Doutor em Cincias Biolgicas (Ecologia).
Orientadora: Prof. Dra. rica Pellegrini Caramaschi Laboratrio de Ecologia de Peixes / Instituto de Biologia / Universidade Federal do Rio de Janeiro (UFRJ) Coorientador: Prof. Dr. Jansen Zuanon Programa de Ps-Graduao em Biologia de gua Doce e Pesca Insterior / Instituto Nacional de Pesquisa da Amaznia (INPA) Coorientador: Prof. Dr. Srgio Maia Queiroz Lima Programa de Ps-Graduao Sistemtica e Evoluo / Centro de Biocincias / Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN)
Rio de Janeiro 2014
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Variao na histria de vida de peixes na Reserva de Desenvolvimentos Sustentvel Aman (AM) e suas implicaes na morfologia e estruturao gnica das populaes
Henrique Lazzarotto de Almeida
Tese apresentada ao Programa de Ps-Graduao em Ecologia do Instituto de Biologia da Universidade Federal do Rio de Janeiro, como parte dos requisitos necessrios obteno do ttulo de Doutor em Cincias Biolgicas (Ecologia).
Banca Examinadora
Prof. Dra. rica Pellegrini Caramaschi (Orientadora Presidente da Banca) Programa de Ps-Graduao em Ecologia - UFRJ
Prof. Dr. Paulo Cesar Paiva Programa de Ps-Graduao em Ecologia - UFRJ
Prof. Dr. Ricardo Iglesias-Rios Programa de Ps-Graduao em Ecologia - UFRJ
Prof. Dr. Jorge Ivan Rebelo Porto Instituto Nacional de NPA
Prof. Dr. Marcio Silva Arajo UNESP Rio Claro
Suplentes
Prof. Dr. Carlos Eduardo Viveiros Grele PPGE - UFRJ
Prof. Dr. Marcelo Ribeiro de Britto Museu Nacional do Rio de Janeiro
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Ficha Catalogrfica
Almeida, Henrique Lazzarotto de Variaes na histria de vida de peixes na Reserva de Desenvolvimento Sustentvel Aman (AM) e suas implicaes na morfologia e estruturao gnica das populaes, UFRJ, 2014. i - xxiii, 1 154, 153 p.; 54 figuras, 33 tabelas. Tese de Doutorado. Programa de Ps-Graduao em Ecologia / Instituto de Biologia - Universidade Federal do Rio de Janeiro. Palavras chave: 1 - ictiofauna, 2 - Amaznia, 3 - biodiversidade, 4 - gentica de populaes, 5 - plasticidade fenotpica, 6 Carnegiella, 7 Hemigrammus, 8 Nannostomus, 9 Hypoptopomatinae, 10 Rineloricaria.
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In memoriam Dedico este trabalho minha me, Rosa Maria Lazzarotto de Almeida, pelo amor e dedicao famlia e minha formao como pessoa e como bilogo, durante toda a sua vida. Saudades eternas.
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Institucional O presente estudo fez parte do subprojeto Diagnstico e Monitoramento da Biodiversidade Aqutica na rea Subsidiria da Reserva de Desenvolvimento Sustentvel Aman, que visa conhecer a ictiofauna da bacia do Rio Unini e a intensidade de uso desta pelas populaes locais na rea da RDS Aman, executado pelo Instituto de Desenvolvimento Sustentvel Mamirau (IDSM) em parceria com o Instituto Chico Mendes de Conservao da Biodiversidade, no mbito do Projeto Corredores Ecolgicos (MMA). O trabalho foi executado com o apoio do Programa de Ps-Graduao em Biologia de gua Doce e Pesca Interior do Instituto Nacional de Pesquisas da Amaznia (BADPI- INPA) atravs da parceria estabelecida por meio do PROCAD (Programa Nacional de Cooperao Acadmica Ao Novas Fronteiras). As coletas e o transporte do material utilizado na tese foram autorizadas pelo IBAMA atravs das licenas #14666-1 e #22402-1.
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Apresentao
A presente tese est dividida em uma breve introduo geral, um captulo inicial descritivo, dois captulos de desenvolvimento e as consideraes finais. A seo inicial contm a Introduo geral que apresenta o trabalho dentro do contexto conservao da biodiversidade e destaca sua relevncia e os Objetivos da tese. O Captulo 1, rea de estudo e aspectos metodolgicos gerais, consiste de uma descrio geral da rea de estudo, do desenho das amostragens em campo e da biologia das espcies escolhidas, reunindo informaes que sero resgatadas em diversos momentos nos captulos de desenvolvimento da tese. O Captulo 2, Padres de estruturao populacional em peixes das bacias do rio Unini e lago Aman (AM), apresenta dados de gentica de populaes de trs espcies de peixes amaznicos e discute aspectos ecolgicos e geomorfolgicos que explicam a distribuio observada. O Captulo 3, Variaes populacionais na morfologia de cinco espcies de peixes amaznicos de pequeno porte, trata do estudo da plasticidade fenotpica obervada atravs da variao no formato do corpo de cinco espcies de peixes amaznicos, discutindo os padres em funo de aspectos genticos e ecolgicos. Por fim, a seo Consideraes finais avalia as perspectivas levantadas pelas informaes apresentadas para estudos de gentica de populaes, variao morfolgica e da origem da biodiversidade amaznica.
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Agradecimentos Por mais que seja dito que o doutorado um processo de construo individual, onde o doutorando constantemente se encontrar com uma sensao de solido (e foi o caso deste), a tese resultado de um processo que tem a contribuio de dezenas de pessoas, que remontam formao do aluno desde o nvel mais bsico. No meu caso, eu precisaria agradecer a uma infinidade de pessoas que me incentivaram, em primeiro lugar, a aceitar uma bolsa DTI no IDSM, para trabalhar em um projeto de uso sustentvel de peixes ornamentais, saindo, assim, do Rio de Janeiro para morar em Tef. No entanto, para ser um pouco mais breve (sim, essas pginas todas de agradecimentos so de fato apenas um pedao), os agradecimentos formais aqui na tese sero apenas s pessoas que contriburam para o trabalho de pesquisa que resultou diretamente na confeco desta tese.
Primeiramente, tenho que agradecer ao meu pai, Srgio, pelo apoio emocional incondicional em todos os momentos nesses cinco anos de doutorado, pelas crticas, sempre construtivas, e, at, pelo apoio financeiro. No o caso de que, sem o apoio do meu pai, este trabalho no estaria se concretizando, mas sim, teria se interrompido no meio do caminho ou sequer comeado. Ao meu irmo, lvaro, pela amizade, pelas conversas, pelos sobrinhos, e pelo telefonema salvador na noite de um sbado ps-carnaval. professora, orientadora, amiga, Dra. rica P. Caramaschi, que me deu boas vindas de volta ao LABECO Peixes UFRJ, e a oportunidade de trabalharmos juntos neste projeto de abordagem ainda no realizada no laboratrio, dando o toque de ecologia inicial para a concepo do mesmo. Por toda a compreenso e o apoio durante os momentos difceis Ao grande amigo, coorientador, Dr. Sergio Maia Queiroz Lima, ou simplesmente Serginho, a pessoa que esteve envolvida neste projeto, como amigo, desde sua elaborao para o pedido de financiamento, e enfim como coorientador. Esse no nosso primeiro trabalho e certamente no ser o ltimo. Ao professor, coorientador, Dr. Jansen Zuanon, no s por todo o conhecimento passado, pelas crticas sempre construtivas e didticas, pelo apoio institucional e pela construo de uma parceria mais direta entre nossos laboratrios no Rio de Janeiro e no Amazonas. Acabou criando um porto seguro em Manaus durante toda a correria na poca das expedies a campo. Tenho a convico de que este o primeiro trabalho em conjunto de muitos que viro. Ao Programa de Ps-Graduao em Ecologia (PPGE-UFRJ), pela oportunidade de ser, novamente, estudante do programa, cursando o doutorado, e pela compreenso dos obstculos que levaram ao atraso na concluso da tese. Ao Instituto de Desenvolvimento Sustentvel Mamirau (IDSM), por ter sido a instituio executora de parte do projeto, fornecendo apoio logstico e administrativo durante o decorrer dos trabalhos de campo.
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Ao ICMBio, pela parceria formada durante a execuo das pesquisas. Ao Ministrio do Meio Ambiente pelo financiamento das pesquisas do subprojeto Diagnstico e Monitoramento da Biodiversidade Aqutica da rea subsidiria da RDS Aman, AM, dentro do escopo do Projeto Corredores Ecolgicos (PCE/MMA/CAIXA ECONMICA FEDERAL), com o apoio da Cooperao da Repblica Federal da Alemanha atravs do KfW. Ao CNPq pela bolsa de doutorado e a taxa de bancada. Ao PROCAD, pelo auxlio na formalizao da parceria entre o PPGE-UFRJ e o BADPI-INPA e pelo apoio financeiro fundamental para os deslocamentos entre Rio e Janeiro e Manaus. em parte das expedies Fundao Vitria Amaznica (FVA), pelo auxlio na integrao com os moradores da regio do rio Unini, pelas informaes e mosaico de imagens de satlite disponibilizadas, e pelo emprstimo do telefone por satlite, fundamental para garantir a segurana durante as expedies. RESEX do rio Unini, pela parceria na execuo do projeto e pelo apoio em campo, inclusive com o emprstimo da voadeira durante duas expedies. AMORU pela receptividade dos pesquisadores do projeto durante as expedies de campo. Espero que esta tese possa fornecer auxlio s belas iniciativas de manejo e conservao dos recursos naturais tocadas pelos comunitrios do rio Unini. Ao Exrcito Brasileiro, por estar atenta nossa segurana durante os trabalhos de campo, inclusive fornecendo um programa de instruo de sobrevivncia na selva, e pelo emprstimo das redes de selva. Ao IBAMA pelas licenas de coleta. Ao Laboratrio de Poliqueta da UFRJ, por toda a infraestrutura cedida na realizao das anlises genticas desta tese. Ao Laboratrio de Biodiversidade Molecular da UFRJ, pelo emprstimo e esterilizao de material, e pelo uso da centrfuga a vcuo. Ao amigo, Dr. Jos Louvise, por nos ter apresentado uma ferramenta maravilhosa de estudo, e por todo o envolvimento nos trabalhos com morfometria geomtrica. Valeu Z! Ao Thiago Barros pelo auxlio imprescindvel em laboratrio, seja nas triagens, nas anlises de histria de vida de Hemigrammus coeruleus, nas anlises morfomtricas, na organizao de material, pela ajuda na elaborao das figuras, e pela disposio e iniciativa. Este trabalho tem uma mozinha enorme do Thiago. Ao Bruno Althoff, por seu trabalho com reproduo de Nannostomus que forneceu as bases do conhecimento sobre a biologia da espcie e por todo o auxlio em laboratrio. Milena Cerqueira (Mel), pelos ajuda com os trabalhos de reproduo e morfometria de Carnegiella.
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Helosa Barreto pela ajuda com as triagens, organizao de material e a parte laboratorial das anlises morfomtricas. Eurizngela Dary, pela ajuda na triagem e organizao do material coletado no INPA e pelo envio das amostrads. Ao Andr Galuch e Rafael Leito pela ajuda nas triagens em Manaus. Ao professor Dr. Jorge Porto, pelo interesse no trabalho e a ajuda na definio dos primers utilizados nas anlises genticas. amiga Stella Mendes (Stellinha), por todo o auxlio com as informaes de geologia e geomorfologia da regio de estudo. Vanessa Reis (Vanessinha), por toda a ajuda na primeira campanha de coleta. Ao Mariano Andrade Silva, pela ajuda na segunda e lima expedies de coleta no rio Unini, e pela companhia nas pescarias dos grandes tucunars! A Carioca! Ao Gabriel Cardoso, pela ajuda na terceira expedio de coleta. A Jonas Oliveira, Francinei Oliveira, os melhores tcnicos/assistentes de campo e barqueiros do Amazonas, e provavelmente do Brasil, pelos ensinamentos sobre os peixes amaznicos, pelos assados na beira do rio, pelas pescarias de tucunars, pela amizade, enfim, pela grande ajuda em todos os momentos. Aos excelentes barqueiros, Afonso Jos Tavares (Ferro) e Antnio da Costa Cordeiro (Prego) que tornaram mais seguras as expedies no rio Unini. Fundamental a ajuda de vocs! Ao Francisco Nunes da Silva Filho da comunidade da Vila Nunes, pelo prazer da convivncia, amizade, parceria nas pescarias, disposio nos trabalhos e fora deles tambm, e pelo enorme conhecimento sobre a regio, fundamental para o sucesso das pesquisas. Grande Chico! Ao Jos Raimundo dos Reis (Z Ariranha), pela companhia, pela parceria nas pescarias e nos assados de piranha e tucunars na beira do rio, sempre disposto em ajudar, mesmo no fazendo parte do grupo de pesquisa em biodiversidade de peixes. A Jerri, Moiss Viana e Elsivan (Carimb), excelentes assistentes de campo no lago Aman. A Frank Jhones (Roxo), Everton da Silva Soares (Pequeno) e Sandro Eliseu Brito, pela grande ajuda como assistentes de campo durante as expedies no rio Unini. A Antonio Nunes e Edivan Fernandes da Vila Nunes, Seu Pedro do Patau e Seu Pedro do Lago das Pombas pela ajuda nos trabalhos de campo. Ao Antnio da Silva Pimentel, pela ajuda, companhia e pelas histrias contadas. A Neri e Zezinho da Vila Nunes, Julio Gonalves Montenegro (Julinho) do Lago das Pedras, Jos Raimundo Nris (Z Raimundo) do Aman e Lalton Felipe de Tef, que, mesmo no fazendo parte do grupo de pesquisa em biodiversidade de peixes, estavam sempre dispostos a ajudar.
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Ao Seu Luis Nunes e Seu Luciano Brito pelo aluguel e conduo das embarcaes na segunda e na ltima expedies no rio Unini e pelo conhecimento transmitido sobre este rio maravilhoso. Grandes pessoas! A Neguinho e Di, pelo prazer da companhia, pela disponibilidade e iniciativa e pela conduo segura dos barcos nas quatro ltimas expedies ao Unini. A Andr Bastos, Augusto Boaviagem e Vnia Fonseca, pela companhia durante as expedies ao Unini. A Miriam Marmontel e Kelven Lopes, pela parceria na concepo do projeto e em alguns momentos de sua realizao. Ao Seu Miguel, pelo aluguel das embarcaes utilizadas nas expedies ao Unini. A Ana Flvia Zingra (Faf) e Josngela Jesus da RESEX do Rio Unini, por todo o apoio institucional e na logstica das expedies ao Unini. A Mariana Leito e Iasmina Freire do PARNA Ja, pelo apoio institucional. Virgnia Bernardes e Camila Fagundes pela breve ajuda na quarta expedio de coleta no rio Unini. A Maria Lene, Nely Pereira da Silva (Branca) e Vanusa Pantoja, pelas maravilhosas refeies nos trabalho de campo ao longo de todo o perodo de pesquisas. Aos numerosos amigos de Manaus, Rafa e Dani, Henrique Cachaa, Ana Helena, Rada e Flvia, Faf e Jussa, Felipe Ximbinha, Marcelino e Burns, Tlio, Minhoca, Chuleta e Brasa, Renata Frederico, Pati Torres, Stya e Fabiano, Pimentinha, Danete e Carol, JB e toda a galera da casa da piscina, pela hospedagem e acolhidas em incontveis ocasies. Aos amigos Emiliano, Isaura, Rachel, Gabi, Ana Luiza e Tati, Samantha e Lorena, Paulinho e Daniel pela receptividade da hospedagem em Tef entre 2009 e 2011. Ao pessoal do Labeco Peixes UFRJ, pela compreenso nos momentos difceis, ajuda na triagem e organizao do material, debates cientficos, e outras pequenas coisas em incontveis ocasies. Fabola Vieira, pelo auxlio na triagem do material em Manaus. Ao Pedro Hollanda Carvalho e Anderson Vilasboas pela ajuda com as anlises genticas. Ao Pablo Fernandez, pela amizade e ajuda com as planilhas de excell. Ao pessoal da coleo de ictiologia do INPA, em especial, Lucia Rapp Py-Daniel, Marcelo Rocha, Renildo Oliveira, e Andr Belaco, pelo apoio institucional, ajuda na organizao do material e parceria nas descries das novas espcies encontradas no Unini. A Pablo Lehmann, Roberto E. Reis e Maria Laura Delapieve, pelas informaes sobre a distribuio e relaes filogenticas da espcie de Hypoptopomatinae objeto de estudo desta tese.
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Ao pessoal do laboratrio de Limnologia da UFRJ, em especial, Mario Ribeiro Neto e Claudio Cardoso Marinho por fornecerem o material e o conhecimento para as medies de oxignio por titulao. Marcinha do PPGE, pela ajuda em conseguir desburocratizar os momentos mais burocrticos. A Soninha e Rosi, pela ajuda na organizao do LABECO Peixes UFRJ. Ao Professor Carlos Eduardo Grele, pelas consideraes feitas na pr-banca. Aos professores Jorge Ivan Porto, Mrcio Arajo, Paulo Paiva e Ricardo Iglesias-Rios, pela participao na banca de defesa da tese, pelas crticas, sugestes e discusses que ajudaram a melhorar este trabalho e a abrir novas perspectivas. Ao pessoal da pesquisa, da informtica e da logstica do IDSM em Tef, Joo Valsechi, Cesar Hoeflich, Francisco Jnior, Audrin Gomes, Martinelli Souza e Josivaldo Modesto (Csar). Ao pessoal do setor administrativo do IDSM em Tef, Selma Freitas, Joyce, Maura, e Estefany, por todo o esforo durante a realizao deste complicado projeto que foi o PCE. Dona Maria Nunes, por toda a hospitalidade em sua comunidade maravilhosa s margens do igarap Solimezinho. Ao Cesrio, pela amizade e pela parceria nos sambas e pagodes realizados no meio do mato. Ao pessoal do samba de Manaus, JB, D, Ximbinha, Henrique Cachaa, Davi, Alemo, Gui, Saba, Junior Rodrigues, Paj e muitos mais, por terem feito minha estadia em Manaus ser mais prazerosa. A Caio, Amaro e Marcellinho, pelo enorme apoio que me deram no momento mais difcil. A minha namorada, companheira mais linda, maravilhosa, Luana, pela compreenso e apoio durante esta fase interminvel de confeco da tese. Por fim, a todos os comunitrios do rio Unini, pela amizade, companheirismo, apoio, por compartilhar o conhecimento e por ajudar a humanidade na busca por novas maneiras de desenvolvimento, com o homem convivendo harmoniosamente com a natureza.
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Resumo Os padres de distribuio gnica e de variao morfolgica de populaes de cinco espcies de peixes de pequeno porte das bacias do rio Unini e lago Aman foram avaliados e relacionados a aspectos da histria de vida de cada espcie. Para cumprir esses objetivos, foram utilizados anlises genticas com marcadores moleculares mitocondriais em Carnegiella marthae, Hypoptopomatinae gen.sp.nov e Rineloricaria lanceolata e anlises de morfometria geomtrica com essas trs espcies e tambm com Hemigrammus coeruleus e Nannostomus trifasciatus. Foi observado que Hypoptopomatinae sp., uma espcie com baixa capacidade de disperso, apresentou populaes estruturadas, mesmo entre tributrios da mesma bacia, porm com distncias genticas entre algumas populaes da bacia do lago Aman e do rio Unini menores do que entre algumas populaes de tributrios do rio Unini. Isso um forte indicativo de que houve uma conexo hidrolgica entre as duas bacias atravs de pequenos corpos dgua nas suas cabeceiras. J C. marthae e R. lanceolata, duas espcies que possuem caractersticas de sua histria de vida que, teoricamente, conferem uma capacidade de disperso maior do que Hypoptopomatinae sp., apresentaram ausncia de estruturao, ou estruturao em baixa intensidade, entre as populaes dentro da bacia do rio Unini. As populaes de C. marthae e R. lanceolata, no entanto, pertencem a linhagens evolutivas correspondentes a cada bacia cujas distncias genticas mdias so, respectivamente, 8,5% e 1,5%. Esses resultados indicam que os exemplares tratados como C. marthae compem, na realidade, duas espcies distintas muito similares morfologicamente. Apesar de possurem uma capacidade de disperso maior, C. marthae e R. lanceolata no foram capazes de utilizar a conexo hidrolgica pelas cabeceiras das duas bacias, possivelmente por serem espcies que no colonizam pequenos corpos dgua. Os padres observados da variao na morfologia indicam que as diferenas entre as populaes podem ser explicadas tanto pelas divergncias genticas (no caso das populaes de R. lanceolata e Carnegiella do Aman e do Unini), como tambm por plasticidade fenotpica desencadeada por presses ambientais divergentes sobre a populao de cada tributrio.
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Abstract Patterns of haplotypic distribution and morphological variation in populations of five small-sized fishes from Unini River and Aman Lake basins were assessed and related to each species life-history traits. In order to fulfill these goals, genetic analyses using mithocondrial molecular markers were performed in specimens of Carnegiella marthae, Hypoptopomatinae sp. and Rineloricaria lanceolata, and geometric morphometric tools with these species in addition to Hemigrammus coeruleus and Nannostomus trifasciatus. Hypoptopomatinae sp., a species characterized by its small size and low dispersal abitlity, presented highly structured populations, even among tributaries within the same basin. Genetic distances between populations of Aman lake and two tributaries of Unini river basin were smaller than between populations from tributaries within the Unini river basin, strongly indicating that a historical hydrological connection between these two basins through streams located on their headwaters has occurred. In both C. marthae and R. lanceolata, two species with life-history features that theoretically impair greater dispersal capability than Hypoptopomatinae sp., presented non-structured populations within Unini river basin. However, C. marthae and R. lanceolata populations from each basin belonged to distinct evolutionary lineages whose average genetic distances were 8,5% and 1,5%, respectively. These results indicate that specimens identified as C. marthae are, in fact, from two species morphologically very similar. Although they present a better dispersal capabitlity, C. marthae and R. lanceolata were not able to disperse from or to Aman lake and Unini river basins through the hydrological connection in their headwaters, possibly because these species do not colonize small-sized waterbodies as the one found in the headwaters areas. The observed patterns of morphological variation indicate that the differences between populations can be explained either by genetical differences (in the case of differences in morphology of Carneciella and R. lanceolata from Aman and Unini basins), as well as by phenotypic plasticity changes triggered by divergent environmental pressures on the population from each tributary.
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Sumrio
Introduo Geral .......................................................................................................... 1 Objetivos ........................................................................................................................ 4 Captulo 1 rea de estudo e aspectos metodolgicos gerais .................................. 5 Descrio geral da rea de estudo ...................................................................... 6 Geomorfologia ...................................................................................................... 6 Clima e pluviosidade ........................................................................................... 15 Regime fluvial ...................................................................................................... 16 Tipos de vegetao ............................................................................................... 20 Presena humana ................................................................................................. 21 Aspectos da ictiofauna da regio ........................................................................ 22 Coleta dos exemplares ......................................................................................... 25 Locais de coleta .................................................................................................... 27 Seleo das espcies para o estudo ..................................................................... 32 Aspectos da histria de vida das espcies alvo .................................................. 34 Carnegiella marthae ............................................................................................. 34 Hemigrammus coeruleus ..................................................................................... 37 Nannostomus trifasciatus ..................................................................................... 40 Hypoptopomatinae sp. ........................................................................................ 43 Rineloricaria lanceolata ....................................................................................... 46 Classificao das estratgias de vida das espcies alvo .................................... 49
Captulo 2 - Padres de estruturao populacional em peixes das bacias do rio Unini e lago Aman (AM) ............................................................................................ 51 Introduo ..................................................................................................................... 51 Objetivo geral ................................................................................................................ 54 Objetivos especficos ..................................................................................................... 54 Cenrios e hipteses ..................................................................................................... 55 Material e mtodos ....................................................................................................... 57 Coleta e fixao das amostras ............................................................................. 57 Extrao de DNA ................................................................................................. 57 Amplificao e sequenciamento de DNA ........................................................... 58 Anlise dos dados ................................................................................................. 59
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Edio e alinhamento das sequncias ................................................................ 59 Anlise filogentica .............................................................................................. 60 Estimativa da variabilidade e estruturao gnica .......................................... 60 Anlise da Varincia Molecular ......................................................................... 60 Rede de hapltipos ............................................................................................... 61 Testes de neutralidade ......................................................................................... 61 Resultados ..................................................................................................................... 62 Carnegiella marthae ...................................................................................................... 62 Anlise filogentica .............................................................................................. 62 Estruturao populacional ................................................................................. 68 Anlises filogeogrficas ....................................................................................... 70 Hypoptopomatinae sp. ................................................................................................. 73 Anlise filogentica .............................................................................................. 73 Estruturao populacional ................................................................................. 78 Anlises filogeogrficas ....................................................................................... 80 Rineloricaria lanceolata ................................................................................................ 83 Anlise filogentica .............................................................................................. 83 Estruturao populacional ................................................................................. 88 Anlises filogeogrficas ....................................................................................... 90 Discusso ....................................................................................................................... 93 Populaes ou espcies ................................................................................................. 93 Estruturao populacional ...................................................................................... 96 Carnegiella marthae clado Aman ...................................................................... 96 Carnegiella marthae clado Unini ........................................................................ 97
Rineloricaria lanceolata ....................................................................................... 99 Comparao dos padres de distribuio dos hapltipos luz dos cenrios de conexo hidrolgica e capacidade de disperso propostos nos objetivos ................ 101
Captulo 3 - Variaes populacionais na morfologia de cinco espcies de peixes amaznicos de pequeno porte ...................................................................................... 103 Introduo ..................................................................................................................... 103 O que plasticidade fenotpica ........................................................................... 104 Benefcios e limites da plasticidade fenotpica .................................................. 105
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Plasticidade fenotpica em peixes amaznicos .................................................. 107 Objetivo geral ................................................................................................................ 108 Objetivos especficos ..................................................................................................... 108 Cenrios e hipteses ..................................................................................................... 109 Material e mtodos ....................................................................................................... 112 Resultados ..................................................................................................................... 114 Carnegiella marthae ............................................................................................. 114 Hemigrammus coeruleus ..................................................................................... 117 Nannostomus trifasciatus ..................................................................................... 121 Hypoptopomatinae sp. ........................................................................................ 125 Rineloricaria lanceolata ....................................................................................... 129 Discusso ....................................................................................................................... 132 Comparao dos padres de variao morfolgica luz dos cenrios de conexo hidrolgica e capacidade de disperso propostos nos objetivos ....... 137 Consideraes finais ..................................................................................................... 138 Literatura Citada ......................................................................................................... 142
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ndice das figuras Captulo 1 rea de estudo e aspectos metodolgicos gerais Fig. 1.1. Regio de estudo destacando a localizao das bacias do rio Unini e do lago Aman, Amaznia Central, Estado do Amazonas, Brasil, e as unidades de conservao da rea ................................................................................................... 7 Fig. 1.2. Mapa das formaes geolgicas das bacias do rio Unini e lago Aman ..... 8 Fig. 1.3 Corredeiras do rio Unini na estao seca ..................................................... 9 Fig. 1.4 Imagem de satlite de radar JERS mostrando o alinhamento das corredeiras das bacias dos rios Caurs, Unini, Ja, Carabinani e Puduari, durante o perodo de cheia ......................................................................................................... 9 Fig. 1.5. Diferena nas medies de extenso fluvial atravs do canal principal e das vrzeas alagveis ................................................................................................. 10 Fig. 1.6A. Mapa mostrando as sub-bacias amostradas nas bacias do rio Unini e lago Aman, Amazonas, Brasil .................................................................................. 11 Fig. 1.6B. Mapa com os principais corpos dgua das bacias do rio Unini e lago Aman (AM), mostrando as localidades de amostragem .......................................... 12 Fig. 1.7 Mapa com os principais corpos dgua da bacia do lago Aman. Detalhe da ligao com o rio Japur atravs do igarap Jauacaca .......................................... 13 Fig. 1.8 Mapa da regio de estudo com detalhe de uma imagem da banda-L de radar JERS, mostrando as cabeceiras das bacias do lago Aman e rio Unini ............ 14 Fig. 1.9 Pluviosidade mdia mensal nas estaes do Manapana (A) e da Vista Alegre (B), no rio Unini e na estao de Tef (C), localizada a 75 Km do lago Aman, estado do Amazonas ..................................................................................... 16 Fig. 1.10. Variao diria do nvel gua na sada do lago Aman (AM) entre 2001 e 2003 ......................................................................................................................... 16 Fig. 1.11. Nvel da gua na Casa do Bar, base de pesquisas do IDSM, durante o perodo de cheia (a) e seca (b) no ano de 2007........................................................... 17 Fig. 1.12 Imagem de satlite JERS banda-L mostrando a Lago Aman e reas adjacentes no perodo da seca (a) e da cheia (b). A poro de colorao clara s margens dos rios indica as reas alagadas ................................................................. 18 Fig. 1.13 Nvel da gua na foz do rio Unini na cheia, julho de 2009, e seca, janeiro de 2010, mostrando uma variao de 9,1 m .............................................................. 19 Fig. 1.14. Variaes mensais mdia, mdia das mximas e mdia das mnimas, do nvel da gua nas estaes de (a) Moura, na margem direita do baixo rio Negro, e (b) Manapana, no mdio rio Unini, entre os anos de 2005 e 2012; e (c) variaes dirias no nvel da gua do rio Unini na estao de Manapana durante o perodo de coletas deste estudo .................................................................................................... 20 Fig. 1.15. Floresta de Terra Firme (a), floresta de igap (b) durante o perodo de cheias e floresta alagada de vrzea de rios de gua branca (c) .................................. 21 Fig. 1.16 Diferentes ambientes e tipos de corpos dgua amostrados nas bacias do lago Aman e rio Unini entre 2009 e 2011. (A) igaraps de terra firme; (B) igaraps de grande porte; (C) praias em rios principais; (D) margem com 26
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vegetao em rios principais; (E) lagos ..................................................................... Fig. 1.17. Fotografias ilustrativas das coletas dos exemplares durante nas bacias do rio Unini e lago Aman entre 2009 e 2011. (A) rapich utilizado nas coletas; (B) coleta com redinha; (C) coleta com arrasto de praia ................................................. 27 Fig. 1.18. Grfico resultante de anlise de componentes principais (PCA) utilizando parmetros fsico-qumicos da gua medidos nas localidades de coleta .. 30 Fig. 1.19. Fotografias em aqurio de indivduos recm-coletados de Carnegiella marthae da bacia do Aman e da bacia do rio Unini ................................................. 34 Fig. 1.20. Fotografia em aqurio de indivduo recm-coletado de Hemigrammus coeruleus da bacia do rio Unini ................................................................................. 37 Fig. 1.21. Fotografias em aqurio de indivduos recm-coletados de Nannostomus trifasciatus da bacia do Aman e da bacia do rio Unini ............................................ 40 Fig. 1.22. Fotografias em aqurio de indivduos recm-coletados de Hypoptopomatinae sp. da bacia do Aman e da bacia do rio Unini .......................... 43 Fig. 1.23. Fotografias em aqurio de indivduos recm-coletados de Rineloricaria lanceolata da bacia do Aman e da bacia do rio Unini ............................................. 46
Captulo 2 - Padres de estruturao populacional em peixes das bacias do rio Unini e lago Aman (AM) Figs. 2.1.1 (A) rvore resultante de anlises de Neighbour-joining para os genes ATPase 6/8 de Carnegiella marthae das bacias do lago Aman e do rio Unini ....... 63 Figs. 2.1.1. (B) Topologia da rvore de Neighbour-joining para os genes ATPase 6/8 de Carnegiella marthae das bacias do lago Aman e do rio Unini ..................... 64 Figs. 2.1.2. rvore resultante de anlise de Mxima Verossimilhanca para hapltipos dos genes ATPase 6/8 de Carnegiella marthae das bacias do lago Aman e do rio Unini ................................................................................................ 65 Fig 2.1.3. Rede de hapltipos dos genes ATPase 6/8 de Carnegiella marthae das bacias do lago Aman e do rio Unini ......................................................................... 71 Fig. 2.1.4. Anlise de distribuio de diferenas dos genes ATPase 6/8 de Carnegiella marthae das bacias do lago Aman e do rio Unini ................................ 72 Figs. 2.2.1. (A) rvore resultante de anlises de Neighbour-joining para o gene citocromo b de Hypoptopomatinae sp. das bacias do lago Aman e do rio Unini .... 74 Figs. 2.2.1 (B) Topologia da rvore de Neighbour-joining para o gene citocromo b de Hypoptopomatinae sp. das bacias do lago Aman e do rio Unini ......................... 75 Figs. 2.2.2. rvore resultante de anlise de Mxima Verossimilhanca para hapltipos do gene citocromo b de Hypoptopomatinae sp. das bacias do lago Aman e do rio Unini ................................................................................................ 76 Fig 2.2.3. Rede de hapltipos do gene citocromo b de Hypoptopomatinae sp. das bacias do lago Aman e do rio Unini ......................................................................... 81 Fig. 2.2.4. Anlise de distribuio de diferenas do gene citocromo b de Hypoptpomatinae sp. das bacias do lago Aman e do rio Unini ............................... 82
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Figs. 2.3.1 (A) rvore resultante de anlises de Neighbour-joining para o gene citocromo b de Rineloricaria lanceolata das bacias do lago Aman e do rio Unini . 84 Figs. 2.3.1 (B) Topologia da rvore de Neighbour-joining para o gene citocromo b de Rineloricaria lanceolata das bacias do lago Aman e do rio Unini ..................... 85 Figs. 2.3.2. rvore resultante de anlise de Mxima Verossimilhanca para hapltipos do gene citocromo b de Rineloricaria lanceolata das bacias do lago Aman e do rio Unini ................................................................................................ 86 Fig 2.3.3 Rede de hapltipos do gene citocromo b de Rineloricaria lanceolata das bacias do lago Aman e do rio Unini ......................................................................... 91 Fig. 2.3.4. Anlises de distribuio de diferenas do gene citocromo b de Rineloricaria lanceolata das bacias do lago Aman e do rio Unini .......................... 92
Captulo 3 - Variaes populacionais na morfologia de cinco espcies de peixes amaznicos de pequeno porte Fig. 3.1.1 - Marcos (vermelho) e semi-marcos (azul) anatmicos digitalizados em Carnegiella marthae .................................................................................................. 114 Fig. 3.1.2. Grfico box-plot mostrando os valores mximo, mnimo e mediana do tamanho do centroide de C. marthae de quatro tributrios do rio Unini e do igarap do Bar no lago Aman ................................................................................. 115 Fig. 3.1.3. Eixos de variao morfolgica resultantes de anlise de variveis cannicas e grades de deformao para os dados populacionais de C. marthae ....... 116 Fig. 3.2.1. Marcos anatmicos digitalizados em exemplares de Hemigrammus coeruleus .................................................................................................................... 117 Fig. 3.2.2. Resultados de anlise de componentes principais (PCA) de diferenas na forma corporal em H. coeruleus, categorizado por sexo ...................................... 118 Fig. 3.2.3. Grfico box-plot mostrando os valores mximo, mnimo e mediana do tamanho do centroide de H. coeruleus de quatro tributrios do rio Unini ................. 119 Fig. 3.2.4. Eixos de variao morfolgica resultantes de anlise de variveis cannicas e grades de deformao para os dados populacionais de H. coeruleus ..... 120 Fig. 3.3.1. Marcos anatmicos digitalizados em exemplares de Nannostomus trifasciatus ................................................................................................................. 121 Fig. 3.3.2. Resultados de anlise de componentes principais (PCA) de diferenas na forma corporal em N, trifasciatus, categorizado por sexo .................................... 122 Fig. 3.3.3. Grfico box-plot mostrando os valores mximo, mnimo e mediana do tamanho do centroide de N. trifasciatus de seis tributrios do rio Unini e do igarap do Bar no lago Aman ................................................................................. 123 Fig. 3.3.4. Eixos de variao morfolgica resultantes de anlise de variveis cannicas e grades de deformao para os dados populacionais de N. trifasciatus .. 124 Fig. 3.4.1. Marcos anatmicos digitalizados em exemplares de Hypoptopomatinae sp. ............................................................................................................................... 125 Fig. 3.4.2. Resultados de anlise de componentes principais (PCA) de diferenas na forma corporal em Hypoptopomatinae sp., categorizado por sexo ....................... 126
xx
Fig. 3.4.3. Grfico box-plot mostrando os valores mximo, mnimo e mediana do tamanho do centroide de Hypoptopomatinae sp. de quatro tributrios do rio Unini e do lago Aman .................................................................................................... 127 Fig. 3.4.4. Eixos de variao morfolgica resultantes de anlise de variveis cannicas e grades de deformao para os dados populacionais de Hypoptopomatinae sp. ............................................................................................... 128 Fig. 3.5.1. Marcos anatmicos digitalizados em exemplares de Rineloricaria lanceolata ..................................................................................................................... 129 Fig. 3.5.2. Resultados de anlise de componentes principais (PCA) de diferenas na forma corporal em R. lanceolata, categorizado por sexo, evidenciando as ausncia de dimorfismo sexual relacionado forma corporal ................................... 130 Fig. 3.5.3. Grfico box-plot mostrando os valores mximo, mnimo e mediana do tamanho do centroide de R. lanceolata de cinco tributrios do rio Unini e do lago Aman ........................................................................................................................ 130 Fig. 3.5.4. Eixos de variao morfolgica resultantes de anlise de variveis cannicas e grades de deformao para os dados populacionais de R. lanceolata .... 131
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ndice de Tabelas
Captulo 1 rea de estudo e aspectos metodolgicos gerais Tabela 1.1. Distncias geogrficas aproximadas em quilmetros entre as localidades mais prximas de cada tributrio, atravs da foz dos rios ou atravs das cabeceiras de cada drenagem ...................................................................................... 15 Tabela. 1.2. Parmetros fsico-qumicos da gua em cada sub-bacia da rea de estudo, de acordo com o tipo de corpo dgua amostrado. Os dados apresentados consistem do valor mdio e da amplitude encontrada ................................................ 29 Tabela 1.3. Aspectos geomorfolgicos das sub-bacias amostradas no presente estudo .......................................................................................................................... 31 Tabela. 1.4 Classificao das estratgias de vida de espcies de peixes neotropicais e respectivas caractersticas biolgicas ....................................................................... 49
Captulo 2 - Padres de estruturao populacional em peixes das bacias do rio Unini e lago Aman (AM)
Tabela 2.0.1. Resultados esperados para estruturao gentica das populaes da bacia do rio Unini e lago Aman de acordo com os cenrios de conexo hidrolgica entre as bacias e aspectos da ecologia das espcies .................................................... 56 Tabela 2.1.1. Localidades das amostras e nmero de exemplares utilizados nas anlises de marcadores moleculares de C. marthae nas bacias do lago Aman e rio Unini (AM) ................................................................................................................. 66 Tabela 2.1.2. Espcies utilizadas como grupo externo de C. marthae, localidade da amostra, e seus respectivos nmeros de acesso do Genbank ...................................... 66 Tabela 2.1.3. Distribuio dos hapltipos dos genes ATPase 6/8 de C. marthae das bacias do lago Aman e do rio Unini organizados por sub-bacia ............................... 67 Tabela 2.1.4. Matriz de distncias genticas (distncia p) entre populaes de C. marthae das bacias do lago Aman e do rio Unini para os genes ATPase 6/8 ........... 68 Tabela 2.1.5. ndices de diversidade e estatstica dos testes de neutralidade para os genes ATPase 6/8 de C. marthae das bacias do lago Aman e do rio Unini .............. 69 Tabela 2.1.6. Valores par-a-par de F ST para os genes ATPase 6/8 entre populaes de C. marthae das bacias do lago Aman e do rio Unini ........................................... 70 Tabela 2.1.7. Resultados da anlise de varincia molecular (AMOVA) avaliando hipteses biogeogrficas para os genes ATPase 6/8 em C. marthae das bacias do lago Aman e do rio Unini .......................................................................................... 70 Tabela 2.2.1. Localidades das amostras e nmero de exemplares utilizados nas anlises de marcadores moleculares de Hypoptopomatinae sp. nas bacias do lago Aman e rio Unini (AM) ............................................................................................ 73 Tabela 2.2.2. Espcies utilizadas como grupo externo de Hypoptopomatinae sp., localidade da amostra, e seus respectivos nmeros de acesso do Genbank ............... 77 Tabela 2.2.3. Distribuio dos hapltipos do gene citocromo b de Hypoptopomatinae sp. das bacias do lago Aman e do rio Unini organizados por 77
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sub-bacia ..................................................................................................................... Tabela 2.2.4. Matriz de distncias genticas (distncia p) entre populaes de Hypoptopomatinae sp. das bacias do lago Aman e do rio Unini para o gene citocromo b ................................................................................................................. 78 Tabela 2.2.5. ndices de diversidade e estatstica dos testes de neutralidade para o gene citocromo b de Hypoptopomatinae sp. ............................................................... 79 Tabela 2.2.6. Valores par-a-par de F ST para os gene citocromo b entre populaes de Hypoptopomatinae sp. das bacias do lago Aman e do rio Unini ......................... 79 Tabela 2.2.7. Resultados da anlise de varincia molecular (AMOVA) avaliando hipteses biogeogrficas para o gene citocromo b em Hypoptopomatinae sp. das bacias do lago Aman e do rio Unini .......................................................................... 80 Tabela 2.3.1. Localidades das amostras e nmero de exemplares utilizados nas anlises de marcadores moleculares de R. lanceolata nas bacias do lago Aman e rio Unini (AM) ............................................................................................................ 83 Tabela 2.3.2. Espcies utilizadas como grupo externo de R. lanceolata, localidade da amostra, e seus respectivos nmeros de acesso do Genbank ................................. 87 Tabela 2.3.3. Distribuio dos hapltipos do gene citocromo b de R. lanceolata organizados por sub-bacia .......................................................................................... 87 Tabela 2.3.4. Matriz de distncias genticas (distncia p) entre populaes de R. lanceolata das bacias do lago Aman e do rio Unini para o gene citocromo b .......... 88 Tabela 2.3.5. ndices de diversidade e estatstica dos testes de neutralidade para o gene citocromo b de R. lanceolata das bacias do lago Aman e do rio Unini ........... 89 Tabela 2.3.6. Valores par-a-par de F ST para o gene citocromo b entre populaes de R. lanceolata das bacias do lago Aman e do rio Unini ............................................. 90 Tabela 2.3.7. Resultados da anlise de varincia molecular (AMOVA) avaliando hipteses biogeogrficas para o gene citocromo b em R. lanceolata das bacias do lago Aman e do rio Unini .......................................................................................... 90
Captulo 3 - Variaes populacionais na morfologia de cinco espcies de peixes amaznicos de pequeno porte
Tabela 3.0.1. Situaes que selecionam organismos plsticos (plasticidade) ou especializados (respostas fixas) (adaptado de Kingsolver et al., 2002 e Schlichting & Smith, 2002) ........................................................................................................... 106 Tabela 3.0.2. Resultados esperados para variao morfolgica da bacia do rio Unini e lago Aman de acordo com cada situao de ambiente e estruturao gentica ..... 111 Tabela 3.0.3. Nmero de exemplares utilizados nas anlises de morfometria geomtrica de acordo com a espcie e a sub-bacia onde foram coletados ................. 113 Tabela 3.1.1. Valores do teste Tukey e respectivos valores de significncia referidos ANOVA comparando o tamanho do centroide de exemplares de C. marthae das bacias do rio Unini e lago Aman ............................................................................... 115 Tabela 3.2.1. Valores do teste Tukey e respectivos valores de significncia referidos ANOVA comparando o tamanho do centroide de exemplares de H. coeruleus da bacia do rio Unini ....................................................................................................... 118
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Tabela 3.3.1. Valores do teste Tukey respectivos valores de significncia referidos ANOVA comparando o tamanho do centroide de exemplares de N. trifasciatus das bacias do rio Unini e lago Aman ............................................................................... 122 Tabela 3.4.1. Valores do teste Tukey e respectivos valores de significncia referidos ANOVA comparando o tamanho do centroide de exemplares de Hypoptopomatinae gen.sp.nov das bacias do rio Unini e lago Aman ....................... 125
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Introduo Geral
O desafio de conservar a biodiversidade amaznica em um perodo de rpido crescimento das populaes e economias humanas requer no apenas inventrios precisos de espcies e habitats, mas tambm um entendimento dos mecanismos que criam e mantm os padres de biodiversidade (Winemiller et al., 2008). Esses mecanismos, ou processos, que geram a grande diversidade da ictiofauna e tambm a segregao de populaes, tm sido amplamente abordados na ecologia atual (e.g. Burrige et al., 2006; McDowall, 2004). Na linha de pensamento biogeogrfico, o entendimento dos padres de distribuio da biodiversidade atual costuma embasar-se na reconstruo de cenrios histricos baseados em padres geogrficos ou filogenticos. Nessas discusses, os processos fundamentais para explicar a distribuio das espcies so os de vicarincia e disperso (McDowall, 2004), promovendo o isolamento de populaes ou a expanso de suas reas de distribuio (Brown & Lomolino, 2006). Apesar de amplamente discutidos para vrios grupos e ambientes, processos vicariantes afetando peixes de gua doce na escala microevolutiva so ainda pobremente entendidos (Burrige et al., 2006). Embora a Amaznia apresente a maior riqueza de espcies de peixes de gua doce do mundo, sua ictiofauna muito pouco estudada no nvel de populaes (Beheregaray, 2008). Um processo geolgico reconhecido por sua importncia em promover a expanso da rea de distribuio e, ao mesmo tempo, o isolamento vicariante, o de captura de rios (Ribeiro et al., 2006; Lima & Ribeiro, 2011). A disperso de peixes entre bacias distintas um processo que ocorre atualmente em vrios pontos da Amaznia (Winemiller et al., 2008) em locais com conexo permanente, sazonal, ou espordica durante grandes cheias, mesmo que, s vezes, a disperso possa no ser possvel para toda as espcies. Para que reconstrues confiveis de cenrios biogeogrficos sejam feitas, no entanto, no se deve considerar somente os processos de vicarincia e disperso atravs de barreiras geogrficas, mas tambm fatores ambientais passados e presentes influenciando as distribuies (Tuomisto, 2007). Deve-se ainda levar em considerao que a capacidade de disperso varia entre grupos taxonmicos distintos (Brown & Lomolino, 2006). Complementarmente, aspectos ecolgicos de vrias espcies so usados para explicar a
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distribuio de populaes, espcies ou comunidades de peixes. Por exemplo, Barthem et al. (1991) discutem aspectos da reproduo, alimentao e migrao de grandes bagres amaznicos em relao a suas reas de distribuio. Ainda, Vila-Gispert et al. (2005) investigaram quais fatores da histria de vida de espcies exticas ajudaram-nas a ocupar com sucesso novos ambientes. Variaes em caractersticas morfolgicas e comportamentais podem ser fruto de deriva gnica (Moyaho et al., 2004) ou de presses seletivas divergentes causadas por processos histricos e/ou atuais (Langerhans et al., 2003). Normalmente atribuda ao resultado de processos histricos de longa durao, apenas recentemente a interao entre ambiente e indivduo desencadeando diferenciao fenotpica por plasticidade tem sido reconhecida como um aspecto importante na gerao e evoluo da diversidade biolgica (DeWitt & Scheiner, 2004; West-Eberhard, 2005). Uma abordagem eficiente para a avaliao dos padres e processos mencionados o uso de estudos de gentica de populaes (Avise, 2004). No entanto, apesar de comuns, esses estudos costumam focar a histria de um determinado grupo taxonmico ou espcie ou regio, mas raramente possuem uma abordagem integrada da histria de vida das espcies com o padro de distribuio de populaes (Winemiller et al., 2008). Uma boa oportunidade para um estudo enfocando padres recentes de gentica de populaes, disperso e variao da histria de vida de peixes encontrada na rea da Reserva de Desenvolvimento Sustentvel (RDS) Aman, que possui caractersticas ambientais peculiares. A RDS Aman compreende partes de duas grandes bacias hidrogrficas da Amaznia: a bacia do rio Solimes (lago Aman) e a bacia do rio Negro (rio Unini). A situao geogrfica da bacia do Unini, cujas cabeceiras avanam em direo s cabeceiras dos formadores do lago Aman, indica que pode haver, ou ter havido, uma conexo entre essas bacias, com possvel troca de elementos faunsticos e fluxo gnico entre populaes. A presena de reas alagveis e terras baixas nas cabeceiras dos formadores do rio Unini e dos igaraps tributrios do lago Aman um indcio de que essa conexo exista, ao menos eventual ou sazonalmente, na poca da cheia. Uma conexo atual entre as drenagens pode permitir a passagem de indivduos, acarretando em fluxo gnico. No entanto, possvel que as caractersticas estruturais e/ou fsico-qumicas dessas reas de cabeceira no sejam propcias a determinadas espcies que no habitam, colonizam ou se adaptam a essas condies, fazendo com que atuem como um filtro ecolgico (Winemiller et al., 2008). Da mesma forma, espcies que possuem estratgias de vida
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distintas possivelmente tm diferentes capacidades de disperso e colonizao, o que gera, em alguns casos, populaes panmticas e, em outros, populaes estruturadas, mesmo em reas bem conectadas hidrologicamente (e.g. dentro de uma mesma bacia ou sub-bacia hidrogrfica). Isso pode implicar diretamente no tamanho de algumas das populaes de peixes, fato que influi na abordagem a ser usada em planos de uso e conservao dessas espcies (Allendorf & Luikart, 2007). Assim, estudos de gentica de populaes de espcies compartilhadas pelas duas drenagens podem contribuir enormemente na elucidao de questes evolutivas, biogeogrficas e ecolgicas, e constituir uma base slida para planos de manejo e conservao da biodiversidade amaznica.
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Objetivos
O objetivo principal desta tese foi verificar como a estruturao gnica e a morfologia variam em cinco espcies de peixes amaznicos de pequeno porte, em decorrncia de suas estratgias de vida e consequente capacidade de disperso, com o intuito de compreender os processos evolutivos e fornecer suporte para o manejo e conservao da ictiofauna amaznica. Secundariamente, foi testado se uma possvel conexo (atual ou pretrita) entre as bacias do lago Aman e do rio Unini em suas reas de cabeceiras funciona como filtro seletivo para a disperso entre indivduos das populaes de trs espcies de peixes amaznicos de pequeno porte. Partindo do pressuposto de que populaes isoladas tendem a ser geneticamente estruturadas, acredita-se que espcies com atributos da histria de vida que acarretem baixa capacidade de disperso produziro populaes com alta estruturao gnica, enquanto aquelas com atributos que acarretem alta capacidade de disperso tero o pool gnico homogeneamente distribudo dentro de cada bacia. Da mesma forma, espcies que apresentam populaes distintas, mas ligadas atravs da disperso de indivduos costumam apresentar plasticidade fenotpica com maior amplitude nos traos variveis, enquanto que populaes isoladas costumam apresentar caractersticas menos variveis, indicando uma possvel especializao s condies locais. Contudo, em espcies sujeitas aos mesmos processos histricos, como, por exemplo, vicarincia causada por um evento geolgico, provvel que sejam encontrados padres semelhantes de estruturao gentica e/ou de diferenciao morfolgica. Portanto, possvel esperar resultados distintos em relao estruturao gentica das populaes de acordo com a magnitude de influncia de processos histricos compartilhados pelas espcies ou de seus padres ecolgicos (aspectos da histria de vida). Os resultados esperados para cada cenrio encontram-se descritos na seo Objetivos do segundo e terceiro captulos da presente tese.
Captulo 1
rea de estudo e aspectos metodolgicos gerais
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Descrio geral da rea de estudo O estudo foi realizado nas bacias do rio Unini, um tributrio da margem direita do baixo curso do Rio Negro, e em igaraps da bacia do lago Aman, na drenagem do Japur-Solimes, ambos no interflvio dos rios Negro e Solimes, na Amaznia Central, Estado do Amazonas, Brasil (Fig. 1.1). A rea de estudo est inserida em trs unidades de conservao (Fig. 1.1): a Reserva de Desenvolvimento Sustentvel (RDS) Aman, com 2.313.000 ha (S 135' e 316'; W 6244' e 6523'); o Parque Nacional (PARNA) do Ja, com 2.367.333 ha (S 133' e 258; W 6121 e 6359); e a Reserva Extrativista (RESEX) do Rio Unini, com 883.352 ha (S 122 e 200; W 6131 e 6459). Contguas RDS Aman e ao PARNA Ja encontram-se, respectivamente, a RDS Mamirau, com 1.124.000 ha e o Parque Estadual do Rio Negro Setor Norte, com 146.028 ha. Essas unidades de conservao formam, em seu conjunto, o maior bloco de floresta tropical protegido do Brasil, com 6.900.713 ha. Todas essas unidades de conservao esto contidas na rea definida como o Corredor Central da Amaznia.
. Geomorfologia A imensa extenso da rea das bacias do rio Unini e do lago Aman inclui uma grande diversidade geolgica, de solos e vegetao que afeta consideravelmente a distribuio da biodiversidade local. A rea de estudo includa em sua quase totalidade no domnio geolgico da formao I (FVA, 2011). Apenas uma pequena poro do trecho inferior do rio Unini, que se estende das corredeiras at sua desembocadura no rio Negro, pertence formao Prosperana e ao complexo Jauaperi, mais antigas, do Paleozico e Paleoproterozico (Fig. 1.2) (FVA, 2011). Uma caracterstica importante do terreno da bacia do rio Unini a presena de uma falha geolgica que se situa na sua poro inferior, a cerca de 30 km da foz, exatamente onde esto localizadas as duas nicas corredeiras da bacia (localmente conhecidas como cachoeiras de baixo e de cima) (Fig. 1.3). A presena de corredeiras comum em outras bacias da margem direita do baixo rio Negro e desempenha um papel importante na formao das florestas de inundao. As plancies de inundao ocupam extenses maiores na poro oeste dessas falhas (montante) do que na poro leste (Fig. 1.4), sugerindo que as corredeiras controlam o fluxo da gua e, consequentemente, a distribuio das plancies de inundao (Forsberg et al., 2000).
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Fig. 1.1. Regio de estudo destacando a localizao das bacias do rio Unini e do lago Aman, Amaznia Central, Estado do Amazonas, Brasil, e as unidades de conservao da rea.
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Fig. 1.2 Mapa das formaes geolgicas das bacias do rio Unini e lago Aman (AM), retirado de FVA (2011).
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Fig. 1.3 Corredeiras do rio Unini na estao seca. (A) cachoeira de baixo e (B) cachoeira de cima.
Fig. 1.4 Imagem de satlite de radar JERS mostrando o alinhamento das corredeiras das bacias dos rios Caurs, Unini, Ja, Carabinani e Puduari, durante o perodo de cheia de (AM). possvel notar a presena de reas de plancie de inundao (em cinza claro) mais extensas a oeste das corredeiras.
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O rio Unini um dos maiores tributrios do baixo curso do Rio Negro. Sua bacia possui 2.689.644 ha e est inclusa, em quase sua totalidade, em trs unidades de conservao (RDS Aman, PARNA do Ja e RESEX do Rio Unini) (FVA, 2009). Sua calha principal se estende por cerca de 720 km, contudo, se sua extenso for medida considerando as menores distncias percorridas atravs de suas vrzeas alagveis, o rio Unini possui cerca de 430 km (Fig. 1.5). Sua malha hidrogrfica possui cerca de 1.500 nascentes e mais de 1.000 lagos de meandros abandonados (FVA, 2011). Os principais corpos dgua da bacia do Unini so os rios Preto, Pauini, Arara, Papagaio e o prprio rio Unini. Um igarap de grande porte contribuinte direto do rio Unini que tambm pode ser destacado o igarap Solimezinho (Fig. 1.6). Fig. 1.5. Ilustrao mostrando as diferenas nas medies de extenso fluvial atravs do canal principal e das vrzeas alagveis.
O rio Unini, assim como a maior parte dos rios da regio, um rio de gua preta (Forsberg et al., 2001). Isso se deve ao alto contedo de carbono orgnico dissolvido e/ou presena de solutos orgnicos hmicos, originrios da decomposio da matria orgnica em solos podzlicos, algo comum em rios que se originam na floresta da prpria plancie amaznica e que torna o pH das guas bastante cido (Sioli, 1985). Durante o estudo, no entanto, foram encontrados alguns igaraps com caractersticas limnolgicas distintas, apresentando gua clara ou levemente turva/barrenta (ver adiante, seo locais de coleta).
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Fig. 1.6 (A) Imagem de satlite evidenciando as sub-bacias amostradas nas bacias do rio Unini e do lago Aman, Amaznia Central, AM, Brasil.
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Fig. 1.6 (B) Imagem de satlite com os principais corpos dgua da bacia do rio Unini mostrando as localidades de amostragem, Amaznia Central, AM, Brasil. A legenda destaca o tipo de corpo dgua que representa cada local de coleta.
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O lago Aman apresenta caractersticas limnolgicas bastante distintas, pois sua poro inferior influenciada pelas guas brancas dos parans da plancie do rio Japur (Silva-Jr, 2004). O terreno onde so encontrados alguns contribuintes do Aman formado por aluvies (FVA, 2011). Um dos igaraps contribuintes, o igarap Jauacaca, possui, inclusive, uma ligao com o prprio rio Japur (Fig. 1.7). No entanto, a maior parte dos igaraps formada em reas de floresta, possuindo gua preta. Mesmo assim, o lago e a poro inferior dos igaraps contribuintes possui, de forma geral, o pH levemente cido, s vezes neutro. A situao geogrfica da bacia do rio Unini, cujas cabeceiras avanam em direo a reas baixas e sazonalmente alagveis das cabeceiras de igaraps contribuintes do lago Aman e tambm da bacia do rio Piorini (afluente do rio Solimes), peculiar, pois possvel que haja uma ligao fsica atual (ao menos sazonal) ou recente entre as duas bacias (Fig. 1.8), o que diminuiria a distncia entre os tributrios amostrados (Tabela 1.1).
Fig. 1.7 Mapa com os principais corpos dgua da bacia do lago Aman, Amaznia Central, AM, Brasil. Detalhe da ligao com o rio Japur atravs do igarap Jauacaca.
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Fig. 1.8. Mapa da regio de estudo destacando as bacias do lago Aman (laranja) e do rio Unini (roxo), Amaznia Central, AM, Brasil. A imagem em detalhe, oriunda de banda-L de radar JERS, indica as cabeceiras das bacias do lago Aman e rio Unini, e da bacia adjacente do rio Piorini (afluente do rio Solimes). As setas azuis no detalhe indicam a direo do fluxo da gua.
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Tabela 1.1. Distncias geogrficas aproximadas (em quilmetros) entre as localidades mais prximas de cada tributrio, atravs da foz dos rios (diagonal superior) ou atravs das cabeceiras de cada drenagem (diagonal inferior). Tributrio 1 2 3 4 5 6 7 8 1. Ig. Bar (AM1) - 30 1155 1145 1100 1040 1020 990 2. Ig. Ubim (AM2) 30 - 1125 1115 1080 1010 990 960 3. Alto rio Unini (UN1) 160 190 - 10 45 115 135 165 4. Preto (UN2) 60 90 10 - 35 105 145 155 5. Arara (UN3) 185 210 45 35 - 70 90 120 6. Solimezinho (UN4) 255 285 115 105 70 - 20 50 7. Pauini (UN5) 270 300 135 145 90 20 - 30 8. Papagaio (UN6) 300 330 165 155 120 50 30 -
. Clima e pluviosidade O clima na regio quente constantemente mido, com umidade relativa variando entre 85% e 95% e temperaturas mdias anuais variando entre 26,0 o C e 26,7 C (FVA, 2009). Os aspectos hidrolgicos relativos quantidade de chuvas e variao do nvel do rio Unini foram analisados com base em dados fornecidos pelo CPRM (Servio Geolgico do Brasil) nas estaes de monitoramento hidrometeorlogico das comunidades do Manapana e da Vista Alegre, ambas localizadas no PARNA do Ja, s margens do rio Unini. A pluviosidade mdia na regio de cerca de 2.590 mm anuais, com duas estaes bem marcadas (Fig. 1.9a e I.9b). Na estao seca, que vai de julho/agosto a outubro/novembro, as chuvas no costumam ultrapassar 200 mm/ms, sendo setembro o ms que apresenta as menores precipitaes, com cerca de 120 mm em mdia. Na estao chuvosa, que pode variar de novembro/janeiro a junho, o perodo com as maiores pluviosidades mdias vai de maro a maio, quando, em muitas ocasies, as precipitaes ultrapassam 300 mm/ms. Na rea do lago Aman, o clima e o padro de pluviosidade so bastante similares aos descritos acima para a bacia do rio Unini. As temperaturas so altas durante o ano inteiro, com mdia anual de cerca de 27 C (Hercos et al., 2009). Em uma consulta aos dados de pluviosidade da rea do lago Aman, no foi possvel obter uma srie anual completa, sendo utilizados nesta caracterizao os dados de precipitao da cidade de Tef, localizada a 75 km do lago Aman. A precipitao mdia de cerca de 2.350 mm anuais, tambm com duas estaes bem marcadas (Fig. 1.9c). A estao seca vai de junho a outubro, com os menores ndices de precipitao encontrados no ms de agosto, com uma mdia pouco superior a 100 mm/ms. J a estao chuvosa se inicia em novembro/dezembro e se estende at maio, sendo os meses de maro e abril os mais chuvosos, com mdias superiores a 280 mm/ms.
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Fig. 1.9 Pluviosidade mdia mensal no perodo de 2005 a 2012 nas estaes do Manapana (a) e da Vista Alegre (b), no rio Unini, e na estao de Tef (c), localizada a 75 Km do lago Aman, estado do Amazonas.
. Regime fluvial O regime fluvial encontrado no lago Aman regido basicamente pelo pulso de inundao dos rios Japur e Solimes, ou seja, os nveis mximo e mnimo esto mais relacionados ao nvel desses rios do que s chuvas locais. A amplitude mdia anual do nvel da gua encontrada em rea adjacente ao lago Aman (lago Mamirau, localizado a 50 km do lago Aman) foi de 10,6 m, com mxima de 13,47 m (Ramalho et al., 2009). Medidas da cota da gua tomadas em alguns anos no lago Aman mostram que o pulso de inundao na rea similar ao encontrado em Mamirau, com variao em torno de 10 m (Fig. 1.10), sendo o pico da cheia (Fig. 1.11a) nos meses de junho e julho e o menor nvel (Fig. 1.11b) encontrado em outubro (Hercos et al., 2009). Durante o perodo das cheias, grandes reas florestadas nas margens do lago Aman e igaraps contribuintes so inundadas (Fig. 1.12), provendo novos habitats e disponibilizando recursos para a biota aqutica. Os igaraps contribuintes do lago Aman, no entanto, seguem um regime influenciado em parte pelo pulso de inundao do
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lago Aman. medida que se segue na direo de terras mais altas e de suas cabeceiras, a vazo e o nvel dos igaraps passam a refletir as chuvas locais. Por exemplo, no incio do perodo das chuvas nos meses de novembro a janeiro, a poro alta dos igaraps j se encontra com as margens inundadas e grande vazo, enquanto que nas partes mais prximas ao lago, ainda possvel encontrar praias nas suas margens (observao pessoal).
Fig. 1.10. Variao diria do nvel gua na desembocadura do lago Aman (AM) entre 2001 e 2003. Fonte: Dados do Grupo de Pesquisa em Mamferos Aquticos Amaznicos do IDSM.
Fig. 1.11. Variao sazonal no nvel da gua na Casa do Bar, base de pesquisas do IDSM, no lago Aman, Amaznia Central (AM, Brasil), durante o perodo de cheia (a) e seca (b) de 2007.
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Fig. 1.12. Mosaico de imagens de satlite JERS banda-L mostrando a Lago Aman e reas adjacentes no perodo da cheia (A) e da seca (B) no perodo de setembro de 1995 a maro de 1997. A poro de colorao clara s margens dos rios indica as reas alagadas. Fonte das imagens de satlite JERS banda-L: http://wetlands.jpl.nasa.gov/products/GRFM_data/sar_ortho_high/sar_high_ortho.html.
O regime fluvial do rio Unini apresenta um padro de variao que depende da poro considerada da bacia. Em razo das duas corredeiras (cachoeira de baixo e cachoeira de cima, como so conhecidas na regio) localizadas a 33 km e 40 km da foz, respectivamente, o rio Unini, a jusante das corredeiras, completamente influenciado pelo nvel do rio Negro, apresentando uma maior amplitude de variao do que locais a montante das corredeiras (Fig. 1.13). De acordo com os dados da estao de Moura, situada na margem direita do rio Negro, 30 km a montante da foz do Unini, o nvel da gua varia em mdia pouco menos de 11 metros entre a cheia e a seca de cada ano, podendo chegar a 13 metros. As menores vazes ocorrem entre outubro e dezembro e as maiores em junho e julho (Fig. 1.14a). A montante das corredeiras, o rio Unini apresenta um regime fluvial independente de outras regies, com seu pulso respondendo s chuvas locais. O nvel da gua pode variar em at 8,4 m, com amplitude mdia de 7,07 m. Os meses de maior vazo so junho e julho, o que corresponde ao final da estao chuvosa, e o menor nvel normalmente observado no ms de outubro (Fig. 1.14b). Em funo da grande extenso da calha principal do Unini e da grande rea da bacia, o pulso de inundao tambm apresenta alguma variao de acordo com o gradiente longitudinal. Por
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exemplo, durante as expedies de coleta no rio Unini, foi observado que a amplitude de nvel na desembocadura do rio Preto, a cerca de 400 km da foz do rio Unini, no alcana seis metros. A rea de estudo totalmente coberta com uma densa rede de pequenos riachos, conhecidos como igaraps de terra firme, cuja dinmica do nvel da gua no apresenta, necessariamente, o mesmo padro dos rios principais, mas sim variaes em escalas temporais muito menores e com uma frequncia muito maior. As vazes desses corpos dgua respondem de forma rpida s chuvas dirias. Igaraps de terra firme so conhecidos por no apresentarem uma plancie de inundao e um pulso previsvel (J. Zuanon, comunicao pessoal), contudo, na bacia do rio Unini, durante o perodo de estudo, alguns igaraps apresentaram grandes reas alagadas em suas margens, que assim permaneceram por um perodo de pelo menos um ms sem interrupes.
Fig. 1.13 Nvel da gua na foz do rio Unini na cheia, julho de 2009, e seca, janeiro de 2010, mostrando uma variao de 9,1 m. Vale destacar que, no pico da cheia, o nvel atingiu cerca de 1 m a mais no incio julho de 2009 e 1,5 m a menos em dezembro de 2009 do que o registrado nas fotografias.
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Fig. 1.14. Variaes mensais mdia, mdia das mximas e mdia das mnimas, do nvel da gua nas estaes de (a) Moura, na margem direita do baixo rio Negro, e (b) Manapana, no mdio rio Unini, entre os anos de 2005 e 2012, e (c) variaes dirias no nvel da gua do rio Unini na estao de Manapana durante o perodo de coletas deste estudo, Amaznia Central, AM, Brasil. As barras no grfico inferior correspondem aos perodos de cada coleta.
. Tipos de vegetao A rea de estudo apresenta um alto grau de conservao, com a predominncia de matas primrias, rios, lagos e nascentes praticamente intocados. Na bacia do rio Unini, so encontrados quatro tipos principais de vegetao (FVA, 2011). As florestas ombrfilas densas (Fig. 1.15a) so as mais extensas, cobrindo pouco mais da metade da rea da bacia, seguidas pelas florestas de contato terra firme/campinarana (cerca de 30%), florestas de igap (11%) (Fig. 1.15b) e campinaranas (5%). A distribuio dessas formaes fitofisionmicas segue um gradiente desde a beira dos rios ou igaraps, onde so encontradas as florestas de igap, at as reas mais elevadas onde ocorrem as campinaranas e as florestas de contato terra firme/campinarana (FVA, 2011). Nas cabeceiras do lago Aman so encontradas, principalmente, florestas ombrfilas densas, florestas de contato terra firme/campinara e, nas
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margens dos igaraps e do lago Aman, florestas de igap. No entanto, as reas da vrzea prximas desembocadura do lago Aman, ao rio Japur e seus parans apresentam vegetao de floresta ombrfila densa aluvial e florestas de restinga alta e restinga baixa (Fig. 1.15c) (Hercos et al., 2009), semelhantes s encontradas nas vrzeas do rio Solimes e outros rios de gua branca. Os ambientes de floresta alagada so particularmente importantes para a biodiversidade aqutica, visto que a produtividade primria nas reas alagveis a principal fonte de carbono para peixes na Amaznia Central (Forsberg et al., 1993). Os igaps tambm servem como fonte de proteo contra predadores e como corredor para disperso de formas jovens ou espcies de peixes especialistas de floresta alagada (Piggot et al. 2011)
Fig. 1.15. Fotografias ilustrativas de (A) floresta de terra firme, no rio Trombetas (PA), (B) floresta de igap no rio Solimes em Tef (AM), durante o perodo de cheias e (C) floresta alagada de vrzea de rios de gua branca no rio Japur (AM).
. Presena humana A poro da RDS Aman que se situa na regio do Mdio Solimes, ou seja, as reas do Lago Aman e entorno (rea da vrzea de guas brancas adjacente ao Rio Japur), possui uma
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populao de cerca de 3.500 habitantes, distribudos em 84 comunidades ou localidades (78 assentamentos residentes) (IDSM, 2011). Desses assentamentos, apenas as comunidades localizadas s margens do prprio lago Aman encontram-se em reas de terra firme, as demais esto em reas de vrzea, muitas delas em locais passveis de alagamento temporrio durante o perodo das cheias. Nas reas de terra firme, a principal atividade a agricultura da mandioca, com a pesca sendo desenvolvida majoritariamente para subsistncia, com pouca ou nenhuma importncia na renda das famlias (Mendona, 2007). A populao que reside na bacia do rio Unini possui pouco mais de 600 habitantes distribudos em nove comunidades (dados atualizados de FVA, 2011), sendo uma localizada na RDS Aman, duas na RESEX do Rio Unini e seis no PARNA Ja. As atividades econmicas de maior representatividade na renda das famlias so a agricultura da mandioca e o extrativismo de espcies vegetais como a colheita da castanha, a extrao dos cips titica, amb e timb-au. A contribuio na renda gerada com a venda de artesanato, criao animal e pesca complementar e varivel (FVA, 2011). A atividade de guia turstico de pesca esportiva, at o ano de 2008, quando a atividade foi judicialmente suspensa at regularizao, tambm apresentava uma grande importncia sazonal para algumas famlias residentes. A pesca de peixes ornamentais concentrada basicamente em uma nica espcie, o acar-disco Symphysodon discus, mas at recentemente, moradores declararam ter realizado a pesca do aruan Osteoglossum ferreirai tambm para finalidades ornamentais.
. Aspectos da ictiofauna da regio Os rios que pertencem bacia amaznica abrigam a ictiofauna de gua doce mais diversificada no mundo (Lowe-McConnell, 1999), com estimativas que alcanam 5.000 espcies (Santos & Ferreira, 1999). Uma grande poro dessa diversidade composta de espcies de pequeno porte que habitam pequenos rios de plancie de inundao e igaraps, tal como aqueles encontrados na bacia do rio Negro e seus tributrios. Essas espcies se beneficiam do pulso de inundao, que promove variaes sazonais no nvel dos corpos dgua em at 16 m, inundando grandes reas de floresta nas plancies marginais (Goulding, 1997), provendo abrigo, fontes de alimento e a possibilidade da mistura de populaes dessas espcies, conhecidas como especialistas na floresta de inundao (Piggot et al., 2011). A ictiofauna Amaznica tem sido alvo de estudos e levantamentos desde o incio das exploraes na Amaznia, como aquelas dos naturalistas britnicos Wallace e Bates (Wallace,
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2002) na dcada de 1850. No entanto, nem os mais de 150 anos de estudo ou mesmo o elevado nmero de espcies registrado at o presente so indicativos de que o conhecimento atual a respeito da ictiofauna da regio esteja satisfatoriamente consolidado. A vastido da regio com grandes reas bem preservadas e de acesso complicado tornam difcil a tarefa de estudar os rios amaznicos. Existem, ainda, muitas espcies espera de descrio formal e outras tantas a serem descobertas (FVA, 2011). A regio do presente estudo inclui rios de duas ecorregies distintas. A bacia do lago Aman est includa na ecorregio do Amazonas ocidental enquanto o rio Unini situa-se na ecorregio do Rio Negro (Albert et al., 2011), ambas esto includas entre aquelas que apresentam a ictiofauna mais diversa. De acordo com dados compilados em 2008 e organizados por Albert et al. (2011), o Amazonas ocidental apresenta 910 espcies, sendo 203 exclusivas dessa ecorregio, enquanto o Rio Negro e seus tributrios apresentam 668 espcies, das quais 91 so endmicas. Apesar de serem ecorregies adjacentes (e conectadas na confluncia dos rios Negro e Solimes) e do grau de endemismo baixo comparado s outras ecorregies da Amrica do Sul (Albert et al., 2011), pode-se esperar que a composio da ictiofauna seja de certa forma distinta por conta das caractersticas ambientais de cada ecorregio. O Rio Negro, principal afluente da margem esquerda do rio Amazonas e segundo maior tributrio da bacia em volume dgua (Goulding et al., 2003), um dos poucos tributrios do Amazonas razoavelmente bem estudado (Goulding et al., 1988; Garcia 1995). Mesmo assim, seus nicos afluentes razoavelmente amostrados at recentemente eram o rio Ja, um tributrio de seu baixo curso onde foram registradas pouco mais de 300 espcies de peixes (FVA, 2009), e o rio Branco, onde foram registradas cerca de 540 espcies de peixes (Ferreira et al., 2007). J para a bacia do rio Unini, at o momento, s havia o registro de trs estudos sobre peixes. Um quarto estudo (Geisler & Annibal, 1986) menciona o rio Unini como possvel, mas improvvel, limite sul da rea de ocorrncia do cardinal Paracheirodon axelrodi (Characidae), fato no corroborado durante as coletas do presente trabalho. Willis et al. (2007; 2010) utilizaram amostras de tucunars Cichla monoculus, C. orinocensis e C. temensis coletados no rio Unini para um estudo de filogenia molecular e filogeografia do gnero utilizando marcadores mitocondriais (D-loop, citocromo b e ATPase 6/8). Schneider et al. (2012) utilizaram espcimes de um igarap tributrio do baixo Unini em um estudo de filogeografia de Carnegiella strigata utilizando ATPase 6/8. No ano de 2004, a Fundao Vitria Amaznica organizou uma expedio de levantamento na bacia do rio Unini, onde foram
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realizadas coletas de ictiofauna em algumas localidades prximas ao igarap Solimezinho (UN4) (FVA, 2009). Antes das coletas do presente estudo, os dados dessa expedio consistiam no nico inventrio da ictiofauna da bacia. Nessa expedio, foram registradas 124 espcies pertencentes a 33 famlias de sete ordens. A composio de espcies foi similar esperada para a bacia amaznica (Lowe-McConnell, 1999). A ordem com mais espcies foi Characiformes (49%), seguida dos Siluriformes com 28% da riqueza total (FVA, 2009). A comparao dos dados de FVA (2009) com os registros da ictiofauna do rio Ja j dava a indicao de que essas bacias possuem conjuntos faunsticos diferenciados, com 49 espcies do rio Unini no encontradas no rio Ja. O registro de espcies tpicas ou muito comuns em ambientes de guas brancas foi sugerido como indcio de uma possvel conexo histrica entre as bacias do Japur- Solimes e o rio Unini (FVA, 2009). As espcies mencionadas so: o acar-vinagre Hypselecara coryphaenoides e o papa-terra Geophagus proximus (Cichlidae), as piabas Hemigrammus analis, H. bellottii e H. ocellifer e a piaba-dentuda Agoniates halecinus (Characidae), o peixe-lpis Nannostomus trifasciatus (Lebiasinidae), o bagre banjo Pterobunocephalus cf. dolichurus (Aspredinidae) e Rivulus ornatus (Rivulidae). Nas coletas realizadas no presente estudo em diversos corpos dgua na bacia do Unini, onde se registraram cerca de 410 espcies pertencentes a 49 famlias e 11 ordens, foram encontradas outras espcies conhecidas at ento apenas para tributrios do Solimes e alto Amazonas, como o neon Paracheirodon innesi (Characidae) e o sarap Steatogenys ocellatus (Hypopomidae) e outras espcies ainda no descritas tambm encontradas em igaraps tributrios do lago Aman. A composio foi prxima esperada para a bacia Amaznica, com as ordens Characiformes, Siluriformes e Perciformes representando 47,9%, 27,6% e 12,9%, respectivamente, das espcies registradas. A bacia do lago Aman possui um histrico de pesquisas enfocando sua ictiofauna, e sua biodiversidade como um todo, muito mais extenso do que o dos tributrios do Rio Negro, em especial o rio Unini. So bastante numerosos os estudos de taxonomia de peixes que se utilizaram de exemplares coletados na rea, especialmente a partir do ano 2000, quando as pesquisas no Aman comearam a ser apoiadas pela Sociedade Civil Mamirau e Instituto de Desenvolvimento Sustentvel Mamirau (e.g. Kullander, 1986; Crampton et al., 2004a; 2004b; Sousa et al., 2005; Barata & Lazzarotto, 2008; Costa & Lazzarotto, 2008). O primeiro inventrio completo, porm, s foi publicado oficialmente no ano de 2009 em um livro enfocando a ictiofauna ornamental da RDS Aman (Hercos et al., 2009). Hercos et al. (2009) compilam as informaes de diversos projetos de pesquisa realizados no lago Aman e
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adjacncias incluindo trs levantamentos que se utilizaram de metodologias distintas, chegando a um total de 330 espcies, pertencentes a 43 famlias e 12 ordens. Mesmo com dados de mais de 10 anos de amostragens, Queiroz & Hercos (2011) destacam que a diversidade da ictiofauna da bacia do lago Aman no foi acessada por completo. de se ressaltar que a maior parte dos ambientes estudados apresentam guas pretas, sendo poucos os parans e lagos de guas brancas amostrados. Os igaraps de terra firme e as cabeceiras dos igaraps maiores tambm no foram foco de nenhuma pesquisa at o momento. As diversas pesquisas realizadas na rea, contudo, j renem informaes sobre a biologia e ecologia de peixes que permitiram a elaborao de um plano de manejo para pesca ornamental no lago Aman e seus tributrios incluindo 19 espcies (Queiroz & Hercos, 2011), das quais 14 tm ocorrncia registrada tambm no rio Unini.
Coleta dos exemplares Os peixes foram coletados em diversos corpos dgua (Figs. 1.6 e 1.16), incluindo a calha principal dos rios, lagos, igaraps de grande porte e igaraps de terra firme contribuintes dos principais formadores do rio Unini (Alto Rio Unini UN1, Rio Preto UN2, , Rio Arara UN3, Igarap Solimeszinho UN4, Rio Pauini UN5 e Rio Papagaio UN6) e do lago Aman. Para isso, foram utilizados diversos apetrechos de coleta (Fig. 1.17), em especial rapichs (pu quadrado de 50 cm de lado com cabo, malha <1 mm), redinhas (10 m x 3 m, malha <1 mm) e arrasto manual (24 m x 4 m, malha 5 mm). Foram realizadas coletas complementares com redes de espera, mas as espcies registradas no compem o foco desta tese. Com exceo de espcimes selecionados para anlises genticas, os quais foram fixados em lcool 96%, os peixes foram fixados em formol 10% e, em laboratrio, transferidos para recipientes contendo lcool 70%. As amostragens foram feitas em ocasies separadas para as drenagens do rio Unini e do lago Aman. No rio Unini, foram realizadas cinco expedies de cerca de 30 dias cada, sendo uma expedio exploratria (piloto) em julho/agosto de 2009 e quatro expedies sazonais no ano de 2010: Enchente (Jan-Fev), Cheia (Abr-Mai), Vazante (Ago-Set) e Seca (Nov-Dez) (Fig. 1.14). No total, foram amostradas 167 localidades (Fig. 1.6B), sendo 11 fixas (coletas nas quatro campanhas sazonais) e mais 10 localidades com amostragens em trs ocasies. Os exemplares foram coletados, em sua maioria, durante amostragens desenhadas para a descrio da comunidade de peixes das localidades. No lago Aman, foram realizadas duas expedies de curta durao (janeiro de 2010 e agosto de 2011) com coletas direcionadas apenas para as espcies-alvo, totalizando 16 localidades de
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amostragem (Figs. 1.6 e 1.7). Apesar das duas expedies no Aman terem sido planejadas para ocorrerem no perodo de guas baixas, em ambas as ocasies o nvel da gua estava bem acima do esperado para a estao, prejudicando a coleta, sobretudo nos igaraps contribuintes da parte baixa do lago. Sendo assim, no foi possvel coletar exemplares suficientes para uma anlise entre populaes distintas de diferentes localidades dentro da bacia do lago Aman.
Fig. 1.16 Diferentes ambientes e tipos de corpos dgua amostrados nas bacias do lago Aman e rio Unini entre 2009 e 2011. (A) igaraps de terra firme; (B) igaraps de grande porte; (C) praias em rios principais; (D) margem com vegetao em rios principais; (E e F) lagos.
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Locais de coleta Das 167 localidades de coleta, 16 foram localizadas na bacia do lago Aman e 151 na bacia do rio Unini (Fig. 1.6). Na ocasio de cada coleta, foram registrados os seguintes parmetros limnolgicos: temperatura, oxignio dissolvido (OD), pH e condutividade, e, em igaraps de terra firme, parmetros de estrutura do habitat. A partir da 2 expedio no rio Unini, os parmetros ambientais da gua foram medidos com auxlio do medidor multiparmetros YSI 556 (Yellow Springs Instruments), com exceo do pH, medido com o medidor porttil de pH 200A (Analyser). Na expedio piloto, a temperatura foi medida com auxlio de um termmetro de mercrio, o oxignio dissolvido na gua medido atravs de titulao qumica pelo protocolo de Winckler (Golterman, 1969) e o pH com pHmetro de bolso pHep+. Nessa ocasio, no foi possvel realizar medies de condutividade da gua. Os dados das medies so apresentados resumidamente na Tabela 1.2.
Fig. 1.17 Fotografias ilustrativas dos apetrechos utilizados na coleta dos exemplares nas bacias do rio Unini e lago Aman entre 2009 e 2011. (A) rapich utilizado nas coletas; (B) coleta com redinha; (C) coleta com arrasto de praia.
No foram observadas diferenas significantes entre os parmetros fsico-qumicos mensurados em sub-bacias distintas (Tabela 1.2; Fig. 1.18a e 1.18b), com exceo de trs localidades no Aman que apresentaram valores de condutividade bastante elevados, possivelmente em virtude da influncia do terreno da bacia do rio Japur ou das prprias
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guas desse rio. Pode-se perceber, no entanto, que os diferentes tipos de corpo dgua apresentaram caractersticas fsico-qumicas particulares e a maioria das localidades se agrupa de forma gradual relacionada ao porte dos mesmos (Fig. 1.18a). Os igaraps de terra firme, os menores corpos dgua aqui estudados, encontravam-se sempre sombreados. Por conta disso, so os ambientes que apresentaram as menores temperaturas e pouca variao ao longo do ano, mesmo considerando as variaes na vazo entre as estaes seca e chuvosa. Provavelmente por conta do pequeno porte, os igaraps de terra firme apresentaram grande variao no pH, oxignio dissolvido e condutividade (Tabela 1.2). A variao desses parmetros no foi da mesma magnitude nos outros corpos dgua amostrados, provavelmente em decorrncia do volume de gua que acaba produzindo um efeito de tamponamento, diminuindo a velocidade das mudanas na qualidade da gua. Ao contrrio, os corpos dgua maiores encontram-se bem mais expostos luz solar, o que acarreta em uma maior amplitude na temperatura da gua. Estruturalmente, as sub-bacias amostradas apresentaram diferenas particulares em alguns aspectos importantes como o tamanho, sinuosidade, vegetao nas margens, e at a colorao da gua em determinadas estaes do ano. Dentro da bacia do rio Unini, os tributrios que englobam as maiores reas de drenagem so o alto rio Unini (UN1) e o rio Pauini (UN5), com cerca de 480.000 e 560.000 ha, respectivamente, seguidos pelo rio Preto (UN2) e rio Papagaio (UN6) (Tabela 1.3). Os menores tributrios amostrados so o rio Arara que, apesar de possuir mais de 130km de extenso, tratado por igarap por alguns moradores locais, e o igarap Solimezinho (Tabela 1.3). O alto rio Unini (UN1) e o rio Pauini (UN5) so rios mais largos, que apresentam alternncia entre trechos bem sinuosos e trechos retilneos, esses ausentes ou raros nos demais tributrios. Em ambos podemos encontrar palmeiras joari Astrocaryum jauari (Arecaceae) em abundncia nas margens e uma grande quantidade de lagos ao longo de toda a sua calha, formados tanto por meandros como braos de rio abandonados. O trecho inferior do rio Preto (UN2) prximo de sua foz no rio Unini tambm apresenta uma grande quantidade de lagos, algo que no ocorre a partir de cerca de 50 km a montante. Por razes desconhecidas, possivelmente em funo de particularidades do solo, a vegetao em cada tributrio diferente. O rio Arara (UN3) que apresenta a vegetao mais particular, com uma grande quantidade de palmeiras buritiranas Mauritiella armata (Arecaceae). Os frutos das buritiranas so muito apreciados pelas araras avistada em grande bandos ao longo de suas margens, o que torna o nome deste rio bastante adequado.
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Tabela 1.2. Parmetros fsico-qumicos da gua em cada sub-bacia da rea de estudo, de acordo com o tipo de corpo dgua amostrado. Os dados apresentados consistem do valor mdio e da amplitude encontrada. Tributrio
N Temp. [C] pH Condutividade [S/cm 2 ] Oxignio Dissolvido [mg/L] Ig. Bar (AM1)
Igarap de terra firme 2 No medido No medido No medido No medido Igarap de grande porte 6 25,9 (25,6-26,2) 6,33 (6,24-6,41) 56,9 (55,2-58,6) 6,23 (6,01-6,44)
Ig. Ubim (AM2) Igarap de terra firme 1 24,8 5,87 27,4 5,88 Igarap de grande porte 3 No medido No medido No medido No medido
Alto rio Unini (UN1) Rio principal 13 28,1 (26,2-30,6) 5,67 (4,61-6,46) 19,5 (11,0-23,0) 2,07 (0,59-4,60) Lago 2 29,7 (25,6-33,9) 6,05 (5,46-6,64) 26,0 (11,0-35,0) 1,79 (0,63-4,24) Igarap de terra firme 4 25,2 (24,0-26,0) 6,08 (5,51-6,81) 19,06 (8,0-33,0) 3,85 (5,92-0,78) Igarap de grande porte 5 25,7 (25,1-27,2) 5,8 (4,5-6,6) 14,7 (12,0-18,0) 2,22 (1,22-4,16)
Rio Preto (UN2) Rio principal 19 27,1 (24,9-29,8) 5,58 (4,90-6,50) 22,3 (15,5-35,0) 1,81 (1,03-2,81) Lago 1 30,6 (29,8-31,3) 5,72 (5,69-5,75) 20,0 (18,0-22,0) 2,44 (1,08-4,01) Igarap de terra firme 10 25,2 (24,55-26,9) 5,23 (4,30-6,19) 11,4 (7,50-16,30) 3,44 (0,71-5,59)
Rio Arara (UN3) Rio principal 10 27,68 (26,0-29,6) 5,2 (3,2-6,54) 20,33 (16,0-26,0) 2,28 (1,70-2,93) Igarap de terra firme 4 25,41 (24,80-26,1) 5,88 (5,2-6,61) 15,88 (8,80-23,0) 4,03 (1,51-6,68)
Ig. Solimezinho (UN4) Igarap de terra firme 2 25,3 (25,0-25,5) 5,82 (5,41-6,30) 12,13 (16,0-9,4) 4,39 (1,03-6,79) Igarap de grande porte 10 25,7 (25,0-26,2) 5,92 (5,4-6,52) 11,28 (18,0-8,0) 3,22 (0,91-5,98)
Rio Pauini (UN5) Rio principal 13 27,5 (25,5-29,6) 5,81 (5,45-6,50) 14,38 (9,4-19,0) 1,70 (0,85-3,32) Lago 3 28,15 (25,3-30,5) 5,80 (5,26-6,21) 15,3 (10,6-21,0) 1,52 (0,70-2,53) Igarap de terra firme 3 24,9 (24,0-25,7) 5,54 (4,60-6,73) 13,2 (9,2-19,0) 3,40 (0,65-5,90) Igarap de grande porte 4 25,8 (26,7-25,0) 5,47 (3,48-6,57) 10,55 (9,2-12,0) 2,86 (1,78-4,26)
Rio Papagaio (UN6) Rio principal 2 No medido No medido No medido No medido Igarap de terra firme 1 No medido No medido No medido No medido
Mdio/Baixo rio Unini Rio principal 12 30,12 (28,7-31,04) 5,85 (5,34-6,57) 17,7 (12,0-20,0) 2,17 (0,97-5,24) Lago 2 29,06 5,40 38,0 2,17 Igarap de terra firme 1 25,24 No medido 7,0 5,49 Igarap de grande porte 1 27,35 5,68 14,0 1,64
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Fig. 1.18. Grfico resultante de anlise de componentes principais (PCA) utilizando parmetros fsico-qumicos da gua medidos nas localidades de coleta. Na figura superior (A), as cores indicam o tipo de corpo dgua, e na figura inferior (B), as cores indicam a campanha de coleta.
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O igarap Solimezinho (UN4) possui uma caracterstica particular que justifica seu nome. Durante os meses de seca, suas guas carregam sedimentos que tornam suas guas barrentas, bastante contrastante com a colorao do rio Unini. Por alguma razo, esse fato no se refletiu nos parmetros fsico-qumicos medidos nesse tributrio. De acordo com informaes dos moradores locais, outros igaraps da bacia do rio Unini apresentam dinmica similar em relao colorao da gua. So conhecidos pelo menos trs igaraps que recebem o nome de igarap Branquinho por conta da colorao barrenta das guas no perodo de seca. Os igaraps que drenam para o lago Aman apresentam caractersticas bastante distintas dos tributrios do rio Unini que so reflexo no apenas do seu porte reduzido. Em funo da grande amplitude do nvel da gua no lago Aman, praticamente todo o trecho inferior dos igaraps acaba sendo represado pelas guas do lago durante a cheia, reduzindo drasticamente a velocidade da correnteza. As guas do lago Aman (bacia do rio Japur) acabam tambm influenciando a qualidade fsico-qumica dos trechos inferiores dos igaraps que, ao contrrio do que caracterstico para ambientes de gua preta na Amaznia (Sioli, 1985), apresentam valores de condutividade da gua elevados.
Tabela 1.3. Aspectos geomorfolgicos das sub-bacias amostradas no presente estudo, bacias do lago Aman e do rio Unini, Amaznia Central, AM, Brasil. Sub-bacia
rea aproximada (ha.) Extenso (km) Sinuosidade Largura (m) canal principal Nmero de lagos Ig. Bar (AM1) 70.000 70,4 1,819 40 71 Ig. Ubim (AM2) 45.000 38,1 1,920 28 23 Alto rio Unini (UN1) 490.000 268,1 2,078 95 518 Rio Preto (UN2) 370.000 223,9 2,102 55 324 Rio Arara (UN3) 150.000 132,2 1,708 33 91 Ig. Solimezinho (UN4) 50.000 57,6 1,800 20 5 Rio Pauini (UN5) 570.000 291 1,996 80 478 Rio Papagaio (UN6) 270.000 174,6 1,799 45 197
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Seleo das espcies para o estudo Para atingir os objetivos desta tese, foi necessrio comparar padres de distribuio de hapltipos e de diferenciao morfolgica em populaes de peixes com diferentes estratgias de vida. Alm disso, foi necessrio verificar se a possvel conexo entre as bacias do rio Unini e lago Aman atravs de suas cabeceiras ou foi efetiva para a disperso da ictiofauna. Para tanto, as espcies utilizadas foram selecionadas de forma a atender alguns critrios: 1. Distribuio e abundncia. As espcies devem ter distribuio ampla na rea estudada e estar presentes tanto na bacia do lago Aman como na do rio Unini. A abundncia (de espcies e indivduos) deve ser suficiente para permitir as anlises (com quatro populaes ou mais e pelo menos 20 indivduos adultos por populao). 2. Estratgias de vida distintas. Para essa definio, foram considerados o meso-habitat ocupado e rea de distribuio, alm de aspectos relacionados histria de vida de cada espcie. Foram considerados, assim, os dados de abundncia (CPUE) e frequncia de ocorrncia das espcies e o tipo de corpo dgua onde foram coletados, definidos simplesmente dentro das seguintes categorias: igarap de terra firme, igarap de grande porte, rio principal ou lago. Para se conhecer aspectos da histria de vida de cada espcie, foram consultados dados de estudos realizados com as prprias espcies ou com espcies filogeneticamente prximas. Foram considerados aspectos destacados por Winemiller (1989) como importantes para a classificao das estratgias de vida, tais como: tamanho mximo da espcie (obtido pela medio dos exemplares coletados durante o presente estudo), sazonalidade reprodutiva, fecundidade, durao da estao reprodutiva, tipo de desova, tamanho de ovcito e ocorrncia de cuidado parental. 3. Grupos taxonmicos distintos. A comparao de espcies com estratgias de vida diferentes pertencentes a um mesmo grupo taxonmico poderia indicar padres que refletissem, na verdade, um sinal filogentico. Para se reduzir ou evitar o vis filogentico, duas abordagens distintas, mas no excludentes nem conflitantes, foram consideradas. A primeira seria utilizar apenas espcies com estratgias de vida distintas dentro do mesmo grupo taxonmico (e.g. famlia ou ordem). A segunda abordagem consistiria em utilizar espcies de mais de um grupo taxonmico, mas com estratgias de vida comparveis (semelhantes). 4. Identidade taxonmica confivel. Dada a incerteza taxonmica associada a grupos complexos, foi importante a escolha de espcies cuja identificao baseada na morfologia
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externa fosse menos problemtica. Procurou-se, dessa maneira, evitar que espcies diferentes fossem tratadas como uma nica unidade taxonmica. Mesmo assim, desde o incio do estudo, no foi descartada a possibilidade de que os resultados das anlises pudessem indicar que as populaes utilizadas pertencessem a espcies distintas dentro de um complexo. Os diversos projetos de pesquisa conduzidos na regio antes do presente estudo permitiam conhecer apenas a diversidade e abundncia das espcies da bacia do lago Aman. A definio das espcies do estudo foi realizada somente aps a primeira expedio (piloto) deste trabalho na bacia do rio Unini. Das 243 espcies coletadas na expedio piloto, cerca de 150 tambm tm ocorrncia registrada para o Aman. A partir desse conjunto, foi obtida uma lista de 12 espcies candidatas que teriam exemplares fixados tanto para anlises morfolgicas ou biolgicas, como para anlises genticas (Curimatopsis macrolepis, Carnegiella marthae, Nannostomus marginatus, N. trifasciatus, Hemigrammus coeruleus, Iguanodectes geisleri, Microsternarchus bilineatus, Apistogramma hippolytae, Anablepsoides micropus, Hypoptopomatinae sp. e Rineloricaria lanceolata). Com o aprofundamento na identificao das espcies, a continuidade das coletas no rio Unini, e com coletas direcionadas para as espcies-alvo no Aman, essa lista foi reduzida para cinco espcies, sendo trs Characiformes e duas Siluriformes. As espcies escolhidas foram:
. Aspectos da histria de vida das espcies-alvo Carnegiella marthae Myers, 1927 (Fig. 1.19). Characiformes: Gasteropelecidae.
Fig. 1.19. Fotografias em aqurio de indivduos recm-coletados de Carnegiella marthae da bacia do Aman (A) e da bacia do rio Unini (B).
Conhecida popularmente como peixe-borboleta, ou borboleta-branca, C. marthae uma das quatro espcies vlidas do gnero. De pequeno porte, alcana um comprimento padro (CP) mximo de trs centmetros. Apresenta importncia no mercado de aquariofilia, estando liberada para explotao comercial para fins ornamentais (Brasil, 2012), porm menos valorizada do que sua congnere C. strigata. Segundo Weitzman & Palmer (2003), C. A B
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marthae teria ocorrncia apenas para nas bacias do rio Negro e no alto rio Orinoco, mas h registros da espcie em igaraps contribuintes do rio Trombetas (Reis, 2011), rio Madeira (Gery, 1977), tributrios do rio Solimes (Hercos et al., 2009) at a Amaznia colombiana e peruana (Gery, 1977). Assim como todas as espcies da famlia Gasteropelecidae, C. marthae possui a regio torcica modificada em forma de uma grande e afilada quilha formada pela cintura peitoral (Gery, 1977) que sustenta msculos usados principalmente para escapar de predadores saltando para fora da gua (Wiest, 1995). Possui o corpo claro e brilhante, mais escuro no dorso, com uma linha negra na parte abdominal que vai da base do pednculo caudal at o focinho. As nadadeiras peitorais so enegrecidas, caracterstica que confere seu nome na lngua inglesa (black-winged-hatchetfish). De acordo com Gery (1977), a espcie apresenta uma grande variabilidade no nmero de raios na nadadeira anal, variando entre 22- 25 para populaes na fronteira do Brasil com o Peru e 26-30 raios em exemplares da bacia do rio Negro. Piggot et al. (2011) identificaram duas populaes sintpicas na bacia do rio Negro que apresentavam, respectivamente, 23-24 e 27-30 raios na nadadeira anal, cada uma correspondendo, inclusive, a linhagens genticas distintas, possivelmente espcies crpticas. Durante o presente estudo, as populaes tanto da bacia do lago Aman como do rio Unini apresentaram modalmente 27 raios na anal, com variaes entre 26-29. Carnegiella marthae uma espcie que nada prximo superfcie da gua, normalmente em reas de remanso de igaraps de mdio e grande porte ou nos rios principais ou em lagos marginais. Carnegiella marthae comumente encontrada em cardumes de dezenas de indivduos, especialmente prximo s margens, em meio vegetao. Hercos et al. (2009) reportam que a espcie habita o alto e mdio curso de igaraps em locais com condutividades que vo desde 9,9 a 95,0 S/cm 2 . Seu micro-habitat preferencial so razes submersas nas margens dos igaraps. uma espcie bastante frequente e abundante. Nos trabalhos de campo do presente estudo na bacia do rio Unini, foram coletados mais de 700 exemplares em 23 localidades, em todas as sub-bacias amostradas, com CP mximo de 37,60 mm, e mdio de 21,98 mm. Seu ambiente preferencial foram as ressacas (reentrncias) nas curvas dos rios principais ou igaraps de grande porte, especialmente em locais com vegetao marginal. Foram encontradas em abundncia em algumas ocasies em lagos marginais. Do total, apenas trs exemplares foram capturados em igaraps de terra firme em uma ocasio durante o perodo das cheias, em um local alagado muito prximo sua desembocadura no rio principal, que mais se assemelhava a um ambiente lntico. As condies ambientais nessas
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localidades foram bem diversas, com o registro de temperaturas entre 24,8 e 31,3 C, condutividade entre 9,0 e 58,6 S/cm 2 , oxignio dissolvido (OD) entre 0,70 e 6,44 mg/L, e pH entre 4,46 e 5,67. Na RDS Aman, C. marthae comea a se reproduzir com cerca de 2,3 cm CP e apresenta um pico de reproduo no final da estao seca, com as fmeas apresentando, em mdia, 72 ovcitos maduros prontos para liberao (Hercos et al., 2009; Queiroz & Hercos, 2011). Durante o presente estudo na bacia do rio Unini, foram encontrados tanto indivduos adultos como juvenis em todas as estaes do ano, o que sugere uma estao reprodutiva ampla. Apesar do pequeno nmero de exemplares dissecados (44 indivduos), a razo sexual no foi diferente de 1:1. Fmeas reprodutivas ou desovadas tambm foram encontradas no perodo de vazante. Os dados e o comportamento de desova so desconhecidos para C. marthae. J sua congnere C. strigata conhecida, em condies de aqurio, por depositar ovos na vegetao flutuante ou razes submersas prximas superfcie da gua aps um longo processo de corte (Riehl & Baensch, 2004; Alderton, 2005). Os ovos normalmente se depositam no fundo e eclodem cerca de 30 horas depois e as larvas nadam livremente a partir do 5 dia. Riehl & Baensch (2004) recomendam a retirada dos pais do tanque aps a desova, o que pode ser assumido como ausncia de cuidado parental. Carnegiella marthae includa nesta tese tanto nos estudos de morfologia como de gentica de populaes.
Fig. 1.20. Fotografia em aqurio de indivduo recm-coletado de Hemigrammus coeruleus da bacia do rio Unini.
O gnero Hemigrammus apresenta um grande nmero de espcies conhecidas e, recentemente, algumas espcies desse gnero foram agrupadas filogeneticamente com diversas espcies do gnero Hyphessobrycon, indicando tanto a proximidade de parentesco entre os gneros como tambm no monofiletismo dos mesmos (Mirande, 2009). A piaba H. coeruleus uma espcie de pequeno porte que alcana um comprimento total (CT) mximo de 5,8 cm (Lima et al., 2003). Sua importncia no mercado de aquariofilia ainda pequena, mas a espcie foi recentemente liberada para explotao comercial para fins ornamentais (Brasil, 2012). A principais bases de dados sobre peixes neotropicais definem sua rea de ocorrncia apenas para o rio Solimes e o baixo Rio Negro (Lima et al., 2003; Buckup et al., 2007), apesar da espcie ter sido encontrada em igaraps do baixo rio Nhamund e Trombetas (Reis, 2011). De qualquer maneira, a espcie restrita bacia Amaznica. Assim como a maior parte das espcies do gnero Hemigrammus, H. coeruleus possui o corpo comprimido coberto de escamas, linha lateral incompleta, apresenta escamas sobre a base dos raios da nadadeira caudal e duas fileiras de dentes multicuspidados no pr-maxilar (Gery, 1977). A espcie caracterizada por uma colorao rseo-avermelhada, com duas faixas longitudinais
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no corpo, sendo uma larga de colorao rsea que vai desde o olho (incluindo a poro superior do olho) at a base dos raios da caudal, e a outra negra e mais estreita, adjacente poro inferior da primeira. Possui uma mancha humeral alongada verticalmente, nadadeira anal com 20-22 raios, com sua poro distal caracteristicamente enegrecida e uma faixa negra na base da mesma. Hemigrammus coeruleus uma espcie que nada solitariamente ou em grupos de poucos indivduos nas reas de remanso de igaraps (observao pessoal). De acordo com Hercos et al. (2009), o habitat onde a espcie mais comumente encontrada o mdio e alto curso de igaraps, tanto em gua branca como gua preta ou mista, em locais com condutividade desde 12,95 a 72,60 S/cm 2 , sendo capturadas no meio do canal dos igaraps durante a seca ou no igap, durante a cheia. As coletas do presente estudo, contudo, observaram a espcie em corpos dgua de diversos tipos, incluindo lagos marginais, rios principais, igaraps de mdio porte e igaraps de terra firme. Nestes ltimos, a espcie foi encontra prximo suas desembocaduras no corpo dgua principal. Na bacia do rio Unini, foram coletados mais de 750 exemplares de H. coeruleus com tamanhos mdio, mnimo e mximo de 23,00 mm, 12,40 mm e 40,16 mm CP, respectivamente. A espcie foi registrada em 49 localidades de todas as sub-bacias amostradas, mas em pequeno nmero no rio Papagaio e ao longo do leito principal do rio Unini. As condies ambientais nessas localidades foram bem diversas, com o registro de temperaturas entre 24,8 e 29,8 C, condutividade entre 8,5 e 37,6 S/cm 2 , OD entre 0,78 e 6,68 mg/L, e pH entre 3,48 e 6,6. At o momento, no h publicaes sobre os aspectos reprodutivos de H. coeruleus. Estudos do Laboratrio de Ecologia de Peixes da UFRJ a partir do material coletado no rio Unini durante os trabalhos de campo desta tese (Barros et al., 2013) mostram que a espcie se reproduz durante o ano todo, com um pico reprodutivo no incio da enchente. Indivduos com gnadas maduras foram encontrados em todas as estaes do ano, mas em maior frequncia no final da seca/incio da enchente (jan/fev de 2010). Juvenis tambm foram encontrados em todas as estaes do ano, mas com maior frequncia durante a cheia (abr/mai de 2010). O tamanho do menor indivduo reprodutivo foi de 27,6 mm CP para machos e 26,7 mm CP para fmeas. Os dados e o comportamento de desova so desconhecidos para H. coeruleus, mas relatados na literatura de aquariofilia para diversas espcies congneres e de gneros aparentados, em
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especial, o gnero Hyphessobrycon (Riehl & Baensch, 2004). Para diversas espcies de ambos os gneros, relatada a desova em casais ou pequenos grupos, com os ovos sendo liberados livremente tanto na coluna dgua como na vegetao. Para algumas espcies, os ovos eclodem aps cerca de 24 horas e as larvas nadam livremente a partir do 6 dia. Riehl & Baensch (2004) recomendam a retirada dos pais do tanque aps a desova e destacam que assim como a maioria das espcies de caracdeos de pequeno porte (espcies popularmente conhecidas como tetras), as espcies de Hyphessobrycon no apresentam cuidado parental. Por conta da falta de sucesso de adequao dos primers disponveis durante as anlises laboratoriais e o pequeno nmero de exemplares coletados nos igaraps da bacia do lago Aman, H. coeruleus foi includa nesta tese apenas nos estudos de morfologia, a partir de amostras de localidades da bacia do rio Unini.
Fig. 1.21. Fotografias em aqurio de indivduos recm-coletados de Nannostomus trifasciatus da bacia do Aman (A) e da bacia do rio Unini (B).
Conhecido popularmente como peixe-lpis, N. trifasciatus uma das 18 espcies vlidas do gnero (Weitzman & Weitzman, 2003; Zarske, 2013). uma espcie de pequeno porte que pode alcanar at 3,3 cm CP e possui ampla distribuio na bacia amaznica, incluindo pases como Bolvia, Brasil, Peru e Colmbia, rios da Guiana (Weitzman & Weitzman, 2003) e na bacia do rio Orinoco (Gil & Martinez, 2001). A espcie bastante apreciada no mercado da aquariofilia, sendo atualmente liberada para explotao comercial com fins ornamentais (Brasil, 2012). Nannostomus trifasciatus caracterizado por apresentar trs faixas
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longitudinais, sendo a faixa abdominal terminando na base dos raios posteriores da nadadeira anal, e as faixas laterais terminando na base dos raios da caudal. Apresenta manchas avermelhadas nas nadadeiras dorsal, anal, caudal e plvicas, e, s vezes, na poro lateral do corpo entre as faixas longitudinais superior e mediana. Normalmente apresenta nadadeira adiposa. muito semelhante morfologicamente a N. nigrotaeniatus e a N. marilynae (esta ltima tambm ocorrente no rio Unini), apresentando um padro similar de colorao diurna. Nannostomus trifasciatus uma espcie social (Riehl & Baensch, 2004), sendo normalmente encontrada em pequenos grupos, nadando prximo superfcie dgua ou entre a vegetao, onde ser alimentam de perifton e microinvertebrados associados a esse (Gil & Martinez, 2001). De acordo com Hercos et al. (2009), na bacia do lago Aman, a espcie apresenta abundncia moderada, mas pode ser encontrada com frequncia ao longo de todo o ciclo sazonal. comum no alto e mdio curso de igaraps de gua preta, ocorrendo em menor abundncia na poro inferior dos mesmos, prximo ao lago Aman. encontrada comumente associada vegetao aqutica, e pode ser observada no igap durante as cheias. Foi observada em localidades com condutividade entre 8,9 e 57,1 S/cm 2 (Hercos et al., 2009). As coletas do presente estudo registraram a espcie amplamente distribuda na bacia do rio Unini, em corpos dgua de diversos tipos, incluindo lagos marginais, rios principais, igaraps de mdio porte e igaraps de terra firme. No entanto, a grande maioria (77%) dos mais de 2000 exemplares de N. trifasciatus coletados na bacia do rio Unini durante o presente estudo foi observada nos rios principais, alm de 19% em igaraps de grande porte. Isso indica que a espcie ocupa preferencialmente ambientes lticos de porte mdio a grande. A espcie foi registrada em 48 localidades de todas as sub-bacias amostradas, mas ausente no baixo rio Unini. Na bacia do lago Aman, a espcie foi registrada em diversas localidades nos igaraps do Ubim e Bar, ambos de mdio porte. As condies ambientais nessas localidades foram bem diversas, com o registro de temperaturas entre 25,57 e 29,6 C, condutividade entre 9,2 e 21,2 S/cm 2 , OD entre 1,7 e 6,68 mg/L, e pH entre 4,46 e 6,57. Os exemplares apresentaram tamanhos mdio, mnimo e mximo de 23,8 mm, 14,4 mm e 33,2 mm CP, respectivamente. At o momento, as nicas informaes sobre a reproduo da espcie em ambiente natural esto resumidas em Gil & Martinez (2001), que destacam que, na bacia do rio Orinoco, N. trifasciatus apresentou uma maior incidncia de exemplares maduros no ms de incio da temporada das chuvas, e o tamanho mnimo de maturao gonadal foi de 27 mm CP para
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fmeas e 29 mm CP para machos. Ainda segundo Gil & Martinez (2001), N. trifasciatus possui desova total, com as fmeas podendo fazer a postura de at 280 ovcitos. Alm dessas informaes, no foram encontradas publicaes em peridicos cientficos sobre os aspectos reprodutivos de N. trifasciatus ou outras espcies do gnero. No entanto, estudos do Laboratrio de Ecologia de Peixes da UFRJ com o material coletado no rio Unini durante os trabalhos de campo desta tese (Althoff et al., 2011) produziram dados consistentes sobre a reproduo da espcie. Na bacia do rio Unini, indivduos maduros de N. trifasciatus foram encontrados exclusivamente no final da seca e incio da enchente indicando que a espcie se reproduz apenas nesse perodo. Os dados sobre a estrutura de tamanho da populao refora esse hiptese, j que indivduos juvenis foram encontrados apenas na estao cheia. Em contraste com o indicado por Gil & Martinez (2001), o tamanho do menor indivduo reprodutivo foi de 24,0 mm CP para fmeas e 20,3 mm para machos. A fecundidade variou entre 123 e 219 ovcitos, com mdia foi de 171. Riehl & Baensch (2004) sugerem para a reproduo de espcies do gnero Nannostomus o uso de apenas um casal por vez. Dependendo da espcie, os ovos podem se aderir a plantas ou serem depositados no fundo, mas nenhuma espcie do gnero apresenta cuidado parental. Por conta da falta de sucesso de adequao dos primers disponveis durante as anlises laboratoriais, N. trifasciatus foi includa nesta tese apenas nos estudos de morfologia.
Fig. 1.22. Fotografias em aqurio de indivduos recm-coletados de Hypoptopomatinae sp. das bacias do lago Aman (A) e do rio Unini (B).
Os cascudinhos aqui referidos como Hypoptopomatinae sp. pertencem a uma espcie nova de um gnero tambm no descrito, includa no clado formado pelos gneros Hypoptopoma e Nannoptopoma e grupo irmo do gnero Oxyropsis. Aparentemente, apresenta ampla ocorrncia dentro das ecorregies do Amazonas ocidental e Rio Negro (P. Lehman, comunicao pessoal). Sua rea de distribuio ainda desconhecida, j que outras formas aparentemente pertencentes a esse novo gnero foram encontradas em outras localidades da
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Amaznia central (P. Lehmann, comunicao pessoal). Hypoptopomatinae sp. uma espcie de pequeno porte que atinge cerca de 3,0 cm CP. A espcie caracterizada pela cabea deprimida com os olhos na poro lateral da cabea que, ao contrrio de Hypoptopoma, no podem ser observados em vista ventral. Com colorao basal marrom relativamente uniforme, possui uma faixa clara no dorso da cabea que vai desde o focinho at a regio interorbital e uma faixa escura lateral posterior rbita que pode alcanar a borda posterior do ptertico- supracleitro. Possui uma concentrao de melanforos na base dos raios medianos da caudal, o que, s vezes, causa a impresso de possuir uma mcula caudal. Possui duas sries de placas abdominais separadas pela poro mediana do ventre sem placas. So poucas as informaes sobre Hypoptopomatinae sp. na rea de estudo anteriores aos trabalhos desta tese, j que o primeiro registro da espcie na bacia do lago Aman foi realizado em 2007. A ausncia de informaes, no entanto, no reflete a raridade da espcie, pois ela pode ser encontrada em abundncia no igarap do Bar (Almeida, 2009), mas possivelmente pela especificidade de seu micro-habitat, tamanho reduzido e/ou pela dificuldade inerente identificao precisa das espcies da subfamlia Hypoptopomatinae. Os exemplares da espcie foram registrados exclusivamente em locais com correnteza moderada a forte, nas folhas da vegetao submersa ou galhos submersos (Almeida, 2009). As coletas do presente estudo registraram a espcie em abundncia moderada (pouco mais de 300 exemplares coletados), distribuda em apenas quatro tributrios do rio Unini, mas no no leito principal desse. A maior parte dos exemplares (79,9%) foi coletada em igaraps de mdio porte, seguida pelos rios principais com cerca de 15% e, por fim, igaraps de terra firme com cerca de 5%. Vale destacar que as localidades onde Hypoptopomatinae sp. foram coletadas que so classificadas como rio principal so locais nos leito principal dos rios Preto (UN2) e Arara (UN3), ou seja, rios estreitos e sinuosos, de porte bem inferior ao leito principal do rio Unini ou de outros afluentes como os rios Pauini (UN5) ou Papagaio (UN6). Assim como relatado em Almeida (2009), todos os exemplares foram coletados associados vegetao submersa em reas com correnteza moderada a forte, inclusive aqueles coletados em igaraps de terra firme. As condies ambientais nessas localidades foram bem diversas, com o registro de temperaturas entre 24,8 e 29,8 C, condutividade entre 8,0 e 58,6 S/cm 2 , OD entre 1,36 e 6,68 mg/L, e pH entre 4,46 e 6,57. Na bacia do lago Aman, a espcie foi registrada em diversas localidades ao longo do igarap do Bar, e em baixa abundncia no
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igarap Ubim. Os exemplares apresentaram tamanhos mdio, mnimo e mximo de 25,8 mm, 14,4 mm e 34,2 mm CP, respectivamente. Apesar da ausncia de informaes acerca de sua biologia, diversos aspectos reprodutivos so comuns aos trs gneros do clado onde Hypoptopomatinae sp. se encontra e possvel assumir que essas caractersticas sejam semelhantes s da espcie em questo. Evers & Seidel (2005) relatam que, em condies de aqurio, machos de Hypoptopoma sp. reivindicam pequenos territrios de desova, geralmente em locais expostos a correnteza moderadamente forte. Vegetao ou galhos so aceitos como substrato para desova, e as fmeas procuram os machos em seu territrio para desovar. Os ovos so adesivos e o macho cuida dos ovos aps a fecundao. Esse comportamento tambm relatado para Nannoptopoma spectabilis. Evers & Seidel (2005) relatam que uma fmea de N. spectabilis pode colocar at cerca de 60 ovos, que levam de 60 a 80 horas para eclodir. As larvas apresentam um grande saco vitelnico. O cuidado parental realizado pelo macho relatado dentro de Loricariidae tambm para Oxyropsis carinata (Evers & Seidel, 2005), algumas espcies de Rineloricaria (Brito, 2007) e Ancistrus (Sabaj et al., 1999), dentre outras. Hypoptopomatinae sp. includa nesta tese tanto nos estudos de morfologia como de gentica de populaes.
Fig. 1.23. Fotografias em aqurio de indivduos recm-coletados de Rineloricaria lanceolata da bacia do Aman (A) e da bacia do rio Unini (B).
O cascudo R. lanceolata, ao contrrio das demais espcies includas nesta tese, uma espcie de mdio para pequeno porte, que pode alcanar cerca de 12 cm CP (Hercos et al., 2009). Ferraris-Jr. (2003; 2006) aponta apenas o alto Amazonas no Peru como rea de distribuio da espcie. No entanto, diversas formas identificadas como R. lanceolata so conhecidas das
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bacias do Paran-Paraguai, na Argentina, Brasil e Paraguai (Eschmeyer & Fong, 2014) alm de diversas localidades da bacia Amaznica, incluindo rios na Bolvia, Brasil, Colmbia, Equador e Peru (Evers & Seidel, 2005). Dessa forma, a espcie possuiria a maior distribuio geogrfica dentre as espcies do gnero Rineloricaria. No entanto, Silva (2013), analisando as relaes filogenticas entre exemplares de R. lanceolata, baseado em dados moleculares, sugere que este txon consiste em um complexo de espcies, mesmo se considerando apenas os exemplares oriundos da bacia Amaznica. De qualquer forma, os peixes identificados como R. lanceolata so facilmente diagnosticados baseado em seu padro de colorao, pois apresenta colorao base marrom-escura com uma faixa longitudinal mais escura paralela aos raios indivisos em todas as nadadeiras e uma faixa marrom escura com odontdeos desde o focinho at a base da nadadeira dorsal (Vera-Alcaraz et al., 2012; Silva, 2013). A espcie bastante apreciada no mercado de aquariofilia, sendo atualmente liberada para explotao comercial com fins ornamentais (Brasil, 2012). Indivduos de R. lanceolata so encontrados basicamente em ambientes lticos (Evers & Seidel, 2005), sempre associados vegetao, predominantemente sobre as folhas submersas das rvores e arbustos das margens (Silva, 2013). Hercos et al. (2009) destacam que a espcie encontrada em locais especficos do mdio curso de igaraps, onde apresenta uma abundncia moderada. Hercos et al. (2009) destacam, ainda que, na RDS Aman, R. lanceolata encontrada apenas nos igaraps de gua preta, ao contrrio do destacado por Evers & Seidel (2005) que relatam a espcie em bitopos lticos de gua branca ou clara. Almeida (2009) destaca que no igarap do Bar (tributrio do lago Aman), a espcie pode ser coletada com certa facilidade entre folhas submersas nas reas com correnteza moderada a forte, em especial, em folhas grandes como a da palmeira jauari (Astrocaryum jauari). De fato, durante as coletas do presente estudo, os espcimes coletados na bacia do rio Unini foram quase que exclusivamente coletados em locais com correnteza forte, sob as folhas de palmeiras jauari cadas no rio, especialmente aquelas j em processo de decomposio. Na RDS Aman, foi observada em localidades com condutividade entre 18,0 e 43,9 S/cm 2
(Hercos et al., 2009). As coletas do presente estudo registraram a espcie amplamente distribuda na bacia do rio Unini, mas exclusivamente nos rios principais ou nos igaraps de mdio porte. Dos cerca de 200 exemplares coletados na bacia do rio Unini, 73% foram observados nos rios principais e o restante nos igaraps de grande porte. Isso indica que a espcie ocupa somente ambientes
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lticos, preferencialmente de porte grande. A espcie foi registrada em 21 localidades de todas as sub-bacias amostradas, mas ausente no baixo rio Unini. Na bacia do lago Aman, a espcie foi registrada em diversas localidades no igarap do Bar, um igarap de mdio porte, mas o segundo maior igarap contribuinte do lago Aman. As condies ambientais nessas localidades foram bem diversas, com o registro de temperaturas entre 24,9 e 29,8 C, condutividade entre 8,5 e 58,6 S/cm 2 , OD entre 2,02 e 6,44 mg/L, e pH entre 5,04 e 6,54. Os exemplares apresentaram tamanhos mximo e mnimo de 119,5 mm, 45,4 mm CP, respectivamente. At o momento, no foram encontradas informaes sobre a reproduo de R. lanceolata em ambiente natural, nem de nenhuma outra espcie congnere na bacia amaznica. Aspectos reprodutivos de espcies de Rineloricaria ocorrentes em rios de corredeiras com substrato rochoso do sudeste do Brasil so descritos por Barbieri (1994) e Brito (2007), contrastando em alguns aspectos. Por exemplo, Brito (2007), trabalhando com duas espcies no descritas observa para ambas uma estao reprodutiva curta e relata cuidado parental em uma delas. J Barbieri (1994), sugere uma estao reprodutiva longa e ausncia de cuidado parental. A grande diversidade de espcies e estratgias de vida no gnero tornam difcil a extrapolao de padres especficos entre espcies distintas. No entanto, ambos autores, assim como Evers & Seidel (2005), concordam com a desova de ovos adesivos e uma fecundidade baixa. Utilizando observaes em aqurio, Evers & Seidel (2005) relatam que R. lanceolata possui cuidado parental, com o macho guardando os ovos por ele fecundados e depositados por vrias fmeas na mesma cavidade. Esse comportamento de formao de harm relatado tambm para espcies de Ancistrus por Sabaj et al. (1999). Os cerca de 100 ou mais ovos colocados por uma fmea de R. lanceolata podem demorar at 12 dias para eclodir (Evers & Seidel, 2005). Rineloricaria lanceolata includa nesta tese tanto nos estudos de morfologia como de gentica de populaes.
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. Classificao das estratgias de vida das espcies-alvo Como alternativa para o modelo linear de seleo r e K (MacArthur & Wilson, 1967) que comumente utilizado para classificar as estratgias de vida de diversos organismos (e.g. Adams, 1980; Schfers & Nagels, 1991; Jimenez et al., 2013), Winemiller (1989) props a classificao das espcies de peixes dos lhanos venezuelanos em trs grupos distintos (Tabela 1.4) equilbrio, oportunista e sazonal que, apesar das particularidades inerentes ao ambiente peculiar do lhanos, pode ser utilizada como referncia para os objetivos do presente trabalho.
Tabela 1.4. Classificao das estratgias de vida das espcies de peixes e respectivas caractersticas biolgicas. Adaptado de Winemiller (1989). Estratgia de Vida Equilbrio Oportunista Sazonal
cuidado parental bem desenvolvido pouco ou nenhum cuidado parental pouco ou nenhum cuidado parental perodo de reproduo prolongado perodo de reproduo prolongado curto perodo de reproduo reproduo repetida em uma mesma estao reprodutiva mltiplos eventos reprodutivos com pouco investimento poucos eventos reprodutivos classes de tamanho com distribuio uniforme ao longo do ano distribuio de tamanho uniforme no perodo da cheia reproduo migratria em locais alagados na cheia longo tempo de gerao curto tempo de gerao populao predominantemente adulta na seca, e juvenis na cheia baixa fecundidade baixa fecundidade longo tempo de gerao ovcitos grandes ovcitos pequenos fecundidade intermediria a alta tamanho do corpo grande tamanho do corpo pequeno ovcitos pequenos pouca flutuao na densidade populacional local ao longo do ano flutuao populacional intermediria tamanho do corpo intermedirio ou grande grande flutuao populacional local
Infelizmente, no possvel saber com preciso alguns aspectos da biologia das espcies- alvo. Algumas delas, no entanto, apresentam caractersticas que permitem sua insero em determinada estratgia ou em algum ponto entre duas estratgias especficas. Carnegiella marthae, por exemplo, pode ser enquadrada com uma estratgia sazonal (ausncia de cuidado parental, perodo de reproduo restrito, aparentemente desova total, populao predominante de adultos na seca e jovens na cheia), com alguns aspectos caratersticos de espcie
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oportunista (tamanho corporal pequeno e baixa fecundidade). J H. coeruleus possui diversas caractersticas que podem enquadrar a espcie na estratgia oportunista (ausncia de cuidado parental, longa durao do perodo reprodutivo e flutuao populacional intermediria). Nannostomus trifasciatus possui muitas caractersticas que a enquadra como espcie sazonal (ausncia de cuidado parental, perodo de reproduo restrito, aparentemente desova total, populao predominante de adultos na seca e jovens na cheia, fecundidade intermediria considerando seu tamanho corporal). Essas trs espcies no aparentam ter grandes restries de habitat e possivelmente possuem populaes ligadas continuamente atravs do leito dos rios principais. Rineloricaria laceolata e Hypoptopomatinae sp., por sua vez, possuem caractersticas que as enquadram na estratgia de equilbrio (cuidado parental, baixa fecundidade, ovcitos grandes), mas diferem bastante quanto ao tamanho corporal e, em algum grau, quanto ao meso-habitat preferencial. Ambas so espcies caractersticas de ambientes lticos, mas R. lanceolata parece no ser capaz de colonizar pequenos corpos dgua, ou reas de cabeceiras, enquanto que os corpos dgua de grande porte parecem ser uma restrio para Hypoptopomatinae sp..
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Captulo 2
Padres de estruturao populacional em trs espcies de peixes das bacias do rio Unini e lago Aman (AM)
Introduo Com mais de 2500 espcies descritas (Albert & Reis, 2011) e muitas outras espcies j detectadas e ainda espera de descrio formal, a diversidade de peixes da Amaznia ainda pouco conhecida tanto em termos taxonmicos, mas, principalmente, em relao biologia, ecologia e aspectos evolutivos. Mesmo com a falta de conhecimento, um grande nmero de espcies explorado economicamente ou como forma de subsistncia (Queiroz & Crampton, 1999). A bacia do rio Negro destaca-se dentre as demais em funo do uso intenso de inmeras espcies de pequeno porte, explotadas com fins ornamentais. Prang (2001) estima que, de todo o volume de peixes ornamentais exportados a partir do Brasil, mais da metade seja oriunda do rio Negro e seus tributrios. Das mais de 300 espcies comercializadas legalmente at 2008, cerca de 70% era originria da bacia do rio Negro (Anjos et al., 2007; MMA, 2008). Um dos problemas tanto para o estudo como para a realizao de planos de manejo voltados ao uso racional da ictiofauna amaznica a dificuldade de se diagnosticar espcies e delimitar populaes ou unidades de manejo adequadas. Um padro comum que vem sendo cada vez mais observado em estudos moleculares com foco na ictiofauna neotropical, em especial a ictiofauna amaznica, que existe uma grande diversidade de txons e linhagens evolutivas oculta, representada por complexos de espcies (Terncio, 2009). Abe et al. (2013), em uma filogenia molecular da famlia Gasteropelecidae, demonstraram haver mais de um txon dentro do que hoje conhecido como Thoracocharax stellatus. Da mesma forma, Cooke et al. (2012a) estudando Centromochlus existimatus (Siluriformes: Auchenipteridae), demostraram que este txon compe, na realidade, um complexo com pelo menos cinco linhagens distintas separadas h 4-8 milho de anos. Cooke et al. (2012b e 2012c) demonstraram que h uma correspondncia entre a natureza qumica da gua de tributrios do rio Amazonas e linhagens
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evolutivas de Triportheus albus (Characiformes: Characidae) e Colomesus aselus (Tetraodontiformes: Tetraodontidae), com linhagens possivelmente correspondendo a espcies de um complexo taxonmico. Esse padro tambm foi encontrado por Frederico et al. (2012) para a raia Paratrygon aiereba, onde foi observado haver forte estruturao entre as populaes da espcie em diferentes tributrios do rio Amazonas, com fluxo gnico virtualmente ausente. A existncia dessa diversidade crptica tambm ocorre quando se avalia peixes dentro de uma mesma bacia. Por exemplo, Piggot et al. (2012), Schneider et al. (2012) e Terncio et al. (2012) encontraram dentro da bacia do rio Negro linhagens evolutivas distintas correspondentes a provveis novas espcies em Carnegiella marthae, Carnegiella strigata e Nannostomus eques, respectivamente. Schmitt (2005), trabalhando com a regio controle do DNA mitocondrial de Hypopygus lepturus da bacia do rio Negro, encontrou cinco linhagens sugerindo que essa espcie est passando por um processo atual de especiao. Em uma reviso taxonmica detalhada do gnero Hypopygus com base em caracteres morfolgicos, Santana & Crampton (2011), contudo, no conseguiram detectar nenhum txon novo dentro H. lepturus, o que refora a importncia dos estudos moleculares para se diagnosticar linhagens evolutivas e espcies da ictiofauna amaznica. A existncia dessa diversidade crptica causa preocupao, pois a explorao de estoques, sem o conhecimento prvio de sua variabilidade gentica e do nmero real de espcies existentes pode acarretar na perda de linhagens genticas ou at de espcies (Frankham et al., 2008). Os processos que atuaram e atuam na separao de populaes so ainda muito pouco estudados, sendo raros os trabalhos com abordagens que permitam inferncias sobre os processos que geraram a diversidade atual. Um desses trabalhos o de Cooke et al. (2012b), que demonstra que as linhagens de Triportheus albus de tributrios de gua preta so mais aparentadas entre si do que com as populaes da calha principal do Amazonas (de gua branca), independente da distncia que separa os tributrios. Esses mesmos autores sugerem que a colorao da gua atua como fator de seleo, favorecendo determinados hapltipos em cada tipo de rio. Lovejoy & Araujo (2000) demonstraram haver uma relao prxima entre as populaes de Potamorrhaphis guianensis (Belonidae, Beloniformes) das bacias dos rios Orinoco e Amazonas sugerindo a expanso da rea de distribuio da espcie atravs do canal do Cassiquiare. Willis et al. (2010) tambm sugerem que a conexo entre as bacias dos rios
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Orinoco e Amazonas atravs do canal do Cassiquiare facilita o fluxo gnico para trs espcies de tucunar (Cichla spp., Cichlidae, Perciformes). Winemiller et al. (2008), no entanto, demonstram que mesmo promovendo a conexo hidrolgica entre as essas duas bacias, o canal do Cassiquiare age como um filtro ecolgico, facilitando a disperso de algumas espcies, mas dificultando ou impedindo a de outras. As caractersticas fsico-qumicas da gua e aspectos estruturais, como a presena de corredeiras, do canal do Cassiquiare so sugeridas por Winemiller et al. (2008) como os principais fatores que restringem a passagem de peixes de uma regio para a outra. O rio Unini e o lago Aman so os corpos dgua principais de duas bacias adjacentes. Apesar de se situarem em drenagens distintas, de grandes rios com composies fsico-qumicas diferentes, compartilham um grande nmero de espcies, algumas das quais, a princpio, no ocorrentes nas bacias adjacentes dentro de suas prprias drenagens. O entendimento dos processos histricos que levaram estruturao das comunidades de peixes em cada bacia pode ajudar a compreender aspectos gerais da origem da biodiversidade amaznica. Torna-se importante, portanto, a realizao de estudos capazes de gerar informaes sobre como aspectos intrnsecos ou extrnsecos de cada espcie ajudaram a formar as distribuies atuais de suas populaes. Alm disso, tendo em vista que tanto no rio Unini como no lago Aman h iniciativas de explorao dos estoques de espcies com finalidade ornamental, fundamental o conhecimento das relaes entre as populaes de cada bacia para fornecer as bases para a elaborao de planos de manejo das espcies locais.
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Objetivo Geral O objetivo principal deste captulo foi investigar, usando marcadores moleculares mitocondriais (sequncias do gene citocromo b ou genes ATPase 6/8), a influncia de caractersticas estruturais ou hidrolgicas na distribuio disjunta das populaes e possveis espcies crpticas de Rineloricaria lanceolata, Hypoptopomatinae sp. (ambas Loricariidae) e Carnegiella marthae nas bacias do lago Aman e rio Unini (AM).
Objetivos Especficos 1. Comparar populaes de R. lanceolata, Hypoptopomatinae sp. e C. marthae e determinar se cada uma compe uma nica espcie com populaes bem estruturadas, ou um complexo de espcies, dentro e entre as bacias estudadas; 2. Verificar se h padres comuns de diferenciao das linhagens evolutivas entre R. lanceolata, Hypoptopomatinae sp. e C. marthae. 3. Testar a hiptese de conexo histrica ou atual das bacias do lago Aman e rio Unini atravs de suas cabeceiras.
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Cenrios e hipteses Para se entender as diferenas ou similaridades genticas que podem ser observadas entre as populaes, deve-se considerar o isolamento ou a conexo reprodutiva dessas. Assim, possvel gerar alguns cenrios histricos ou biolgicos que possam ter facilitado ou dificultado a disperso de genes promovendo a mistura ou estruturao gentica entre populaes. Os cenrios conjecturados vo desde a ausncia total de barreiras reprodutivas entre as localidades at o completo isolamento entre elas, podendo levar, inclusive, especiao. Para cada cenrio, pode-se esperar encontrar alguns resultados em particular. Abaixo, esto listados esses cenrios, com uma explicao e uma sntese (Tabela 2.0.1) para cada situao, levando-se em considerao que sero testados por meio de marcadores genticos mitocondriais. De forma geral, os padres e modelos descritos abaixo podem ser encontrados em Avise et al. (1987). Histrico geogrfico das bacias do Aman e Unini. 1. inexistncia atual e histrica de conexo hidrolgica pelas cabeceiras do Aman e Unini; 2. conexo hidrolgica entre as bacias do Aman e Unini pelas cabeceiras ocorrida em passado recente, mas ausente atualmente; 3. conexo hidrolgica atual entre as bacias do Aman e Unini pelas cabeceiras. Importncia da ecologia das espcies para conexo reprodutiva das populaes A. espcies com baixa capacidade de disperso; B. espcies com alta capacidade de disperso;
1A. inexistncia atual e histrica de conexo hidrolgica pelas cabeceiras do Aman e Unini + espcies com baixa capacidade de disperso. Espera-se encontrar forte estruturao gentica entre todas as populaes, com as populaes de cada bacia mais relacionadas entre si e, possivelmente, existncia de espcies crpticas. Situao conhecida como fragmentao aloptrica. 1B. inexistncia atual e histrica de conexo hidrolgica pelas cabeceiras do Aman e Unini + espcies com alta capacidade de disperso. Espera-se encontrar forte estruturao gentica entre as bacias e ausncia de estruturao entre as populaes dentro de cada bacia. 2A. conexo hidrolgica entre as bacias do Aman e Unini pelas cabeceiras ocorrida em passado recente, mas ausente atualmente + espcies com baixa capacidade de disperso. Espera-se encontrar forte estruturao gentica entre todas as populaes, com as populaes
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de localidades mais prximas mais aparentadas entre si, independentemente da bacia onde estejam localizadas. Modelo conhecido como disperso por stepping-stone ou passo-a-passo. 2B. conexo hidrolgica entre as bacias do Aman e Unini pelas cabeceiras ocorrida em passado recente, mas ausente atualmente + espcies com alta capacidade de disperso. Espera-se encontrar ausncia de estruturao dentro de cada bacia e estruturao entre as duas bacias. Os hapltipos mais recentes sero compartilhados apenas entre as populaes dentro de cada bacia. Hapltipos ancestrais podero ou no ser compartilhados entre as bacias. 3A. conexo hidrolgica atual entre as bacias do Aman e Unini pelas cabeceiras + espcies com baixa capacidade de disperso. Espera-se encontrar forte estruturao gentica entre todas as populaes, com as populaes de localidades mais prximas mais aparentadas entre si, independentemente da bacia onde estejam localizadas. Padro conhecido como isolamento por distncia. 3B. conexo hidrolgica atual entre as bacias do Aman e Unini pelas cabeceiras + espcies com alta capacidade de disperso. Espera-se encontrar ausncia de estruturao gentica entre todas as populaes, alm de hapltipos ancestrais e recentes compartilhados entre as duas bacias, caracterizando uma situao de panmixia. Tabela 2.0.1. Resultados esperados para estruturao gentica das populaes da bacia do rio Unini e lago Aman de acordo com cada situao de conexo hidrolgica entre as bacias e ecologia das espcies.
ASPECTOS ECOLGICOS DA ESPCIE RELEVANTES PARA A CONEXO REPRODUTIVA ENTRE POPULAES Cenrio A. baixa capacidade de disperso B. alta capacidade de disperso 1. inexistncia atual e histrica de conexo hidrolgica pelas cabeceiras do Aman e Unini 1A. estruturao gentica entre todas as populaes, com as populaes de cada bacia mais relacionadas entre si. 1B. forte estruturao gentica entre as bacias e ausncia de estruturao entre as populaes dentro de cada bacia. 2. conexo hidrolgica entre as bacias do Aman e Unini pelas cabeceiras ocorrida em passado recente, mas ausente atualmente 2A. forte estruturao gentica entre todas as populaes, com as populaes de localidades mais prximas mais aparentadas entre si, independente da bacia. 2B. ausncia de estruturao dentro de cada bacia e estruturao entre as duas bacias. 3. conexo hidrolgica atual entre as bacias do Aman e Unini pelas cabeceiras 3A. forte estruturao gentica entre todas as populaes, com as populaes de localidades mais prximas mais aparentadas entre si, independente da bacia. 3B. ausncia de estruturao gentica entre todas as populaes, alm de hapltipos ancestrais e recentes compartilhados entre as duas bacias.
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Todos os cenrios apresentados mostram diferenas em relao ao que se espera para a distribuio e estruturao das populaes de espcies com caractersticas ecolgicas distintas. No entanto, pode-se pensar em mais um cenrio possvel no qual as espcies de ambos os grupos ecolgicos o mesmo padro de distribuio e/ou estruturao das populaes observadas. Nesse caso, provvel que as caractersticas ecolgicas de cada uma das espcies no sejam relevantes para os processos de fluxo gnico ou isolamento reprodutivo na escala espacial ou temporal em particular analisada neste estudo.
Material e mtodos . Coleta e fixao das amostras Amostras de tecido muscular fresco de Rineloricaria lanceolata ou indivduos inteiros recm coletados de Carnegiella marthae e Hypoptopomatinae sp. foram fixados em lcool etlico 96% em tubos criognicos de 2,0 ml. Cerca de uma semana aps a fixao o contedo lquido foi drenado, sendo imediatamente substitudo por novo contedo de lcool etlico 96%. Esse procedimento foi seguido, pois os tecidos fixados em lcool liberam gua em um primeiro momento, diminuindo a concentrao do lcool por diluio. Para reduzir possvel atividade metablica e a evaporao do lcool, os tubos criognicos com as amostras foram mantidos em freezer a temperatura de -20 C.
. Extrao de DNA A extrao de DNA das amostras de msculo foi feita atravs do protocolo de extrao salina adaptado de (Miller et al., 1988), consistindo nas seguintes etapas: (1) etapa de lise e desproteinizao do tecido consistindo de: aliquotar aproximadamente 20mg de tecido de cada amostra em tubo Eppendorf com 500 l de tampo de lise adicionado de 1l de RNAse (4mg/mL), incubar a 55C por 15 minutos e, aps, adicionar 3l de proteinase K (10mg/mL) e incubar a 55C por mais 45 minutos; macerar o tecido com estacas plsticas estreis e incubar a 55C por mais 1 hora; (2) etapa de separao e precipitao dos restos celulares consistindo de: centrifugar a aproximadamente 14000 rpm por 15 minutos e transferir 500L do sobrenadante para outro tubo Eppendorf, ento adicionar 300L de soluo de NaCl
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5M seguido de centrifugao a aproximadamente 14000 rpm por 15 minutos e uma ltima transferncia de 500L do sobrenadante para outro tubo Eppendorf; (3) etapa de precipitao do DNA consistindo de: adicionar 500L de isopropanol (gelado) e homogeneizar suavemente por inverso repetidas vezes, seguido por incubao a -20C por um perodo mnimo de 2 horas e, ento, uma nova centrifugao a aproximadamente 14000rpm por 15 minutos para formar o pellet do DNA; (4) etapa de lavagem consistindo de: verter o sobrenadante suavemente, adicionar 500L de etanol a 70% (gelado) e centrifugar a aproximadamente 14000rpm por 15 minutos, seguido do descarte do sobrenadante;
Aps a secagem em temperatura ambiente (ou em centrfuga a vcuo), o DNA foi ressuspendido em 50 L de gua miliQ. A presena de bandas de alto peso molecular (DNA) foi ento verificada atravs eletroforese em gel de agarose (0,8%) em tampo 0,5X TBE (0,05 M Tris Base; 0,05 M cido Brico; 1 mM EDTA), corado com brometo de etdio e visualizado em transiluminador sob luz ultravioleta. Posteriormente, os extratos que continham DNA foram armazenados em freezer a -20 C.
. Amplificao e sequenciamento de DNA As amplificaes por PCR e sequenciamento dos genes ATPase subunidades 6 e 8 e citocromo b, ambos do DNA mitocondrial, foram feitas em reaes de 30 L em tubos Eppendorf estreis de 0,2 ml, com 1 L de Taq polimerase, 0,2 mM dNTPs, 2 mM MgCl2, e 0,5 M de cada um dos iniciadores: 1) CytbSiluF (5 CCA CCG TTG TAA TTC AAC TA 3) e CytbSiluR (5 GAT TAC AAG ACC GGC GCT TT 3), desenvolvidos por Lima (2009), que amplificam um fragmento de cerca de 1.071 pb em R. lanceolata e 1092 pb em Hypoptopomatinae sp.1 , correspondendo ao gene citocromo b quase completo; 2) ATP8.2-L8331 (5 AAA GCR TYR GCC TTT TAA GC 3) e CO3.2-H9236 (5 GTT AGT GGT CAK GGG CTT GGR TC 3) descritos por Lovette et al. (1998), que amplificam um fragmento 803 pb, correspondendo aos genes ATPase 6/8 quase completos.
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Para R. lanceolata e Hypoptopomatinae sp., as amplificaes por PCR foram feitas em termocicladores Veriti Dx (Applied Biosystems) programados para uma etapa de desnaturao inicial de 4 min a 94 C, seguida de 15 ciclos de amplificao (desnaturao de 45 s a 93 C; anelamento de 45 s a 62 C (-0,5 C a cada ciclo); e extenso de 45 s a 72 C), seguido por 20 ciclos de amplificao (desnaturao de 45 s a 93 C; anelamento de 45 s a 55 C; e extenso de 45 s a 72 C), e uma etapa de extenso final de 5 min a 72 C. Para C. marthae, as amplificaes por PCR foram feitas em termocicladores Veriti Dx (Applied Biosystems) programados para uma etapa de desnaturao inicial de 2 min a 94 C, seguida de 35 ciclos de amplificao (desnaturao de 1 min a 92 C; anelamento de 1 min a 55 C; e extenso de 1 min a 72 C) e uma etapa de extenso final de 5 min a 72 C. Foram includos controles negativos em todas as reaes de amplificao, que consistiam em reaes sem adio de DNA. A presena de bandas correspondentes ao peso molecular esperado para o fragmento amplificado foi verificada atravs de eletroforeses (a 5V/cm) em gel de agarose (1%) em tampo TBE 0,5X, corado com brometo de etdio e visualizado em transiluminador sob luz ultravioleta, utilizando um padro de peso molecular 100 pb DNA ladder (Promega). As reaes de PCR foram purificadas e sequenciadas atravs do mtodo da terminao de cadeia amplificada por dideoxinucleotdeos (Sanger et al. 1977), usando sequenciadores capilares ABI 3730xl pela empresa coreana Macrogen (http://www.macrogen.com). O envio das reaes de sequenciamento para a Macrogen foi feito de acordo com a Resoluo n 15 CGEN/MMA. Os sequenciamentos foram feitos nos dois sentidos (cadeia leve e cadeia pesada do DNA mitocondrial) a fim de garantir maior qualidade e confiabilidade das sequncias.
Anlise dos dados O nmero total de exemplares utilizados nas anlises para cada espcie encontra-se nas Tabelas 2.1.1, 2.2.1 e 2.3.1. . Edio e alinhamento das sequncias Os eletroferogramas foram inspecionados visualmente e editados manualmente, quando necessrio, com o programa Seqman II v. 4.0 (http://www.dnastar.com) e as sequncias alinhadas no ClustalW atravs do programa Mega 5 (Tamura et al., 2011). Todas as sequncias obtidas neste estudo sero posteriormente depositadas no Genbank.
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. Anlise filogentica As anlises filogenticas baseadas em distncias gnicas foram estimadas atravs do algoritmo de neighbour-joining (NJ) que agrupa progressivamente os pares de sequncias mais relacionados, utilizando o modelo de substituio de nucleotdeos Jukes-Cantor, com bootstrap de 100 rplicas, e usando a opo de deleo completa, com o programa Mega 5. As anlises filogenticas de mxima verossimilhana (ML), que identifica as rvores com maior probabilidade a partir de um modelo de substituio de nucleotdeos, foram feitas com o programa PhyML v 3.0 (Guindon et al., 2010), utilizando o modelo evolutivo selecionado pelo programa Modeltest v. 3.7 (Posada & Crandall, 1998) atravs do programa HyPhy (Kosakovski Pond et al., 2005). Para C. marthae, o modelo de substituio de nucleotdeos utilizado foi GTR+I, para Hypoptopomatinae sp., GTR+G, e para R. lanceolata, TIM+G+I. Para o enraizamento das rvores, foram utilizadas, como grupo externo, sequncias de espcies relacionadas obtidas atravs do Genbank (NLM, 2013). Os nmeros de acesso do Genbank de todas as sequncias utilizadas como grupo externo so apresentados separadamente para cada espcie nos resultados. . Estimativa da variabilidade e estruturao gentica Os ndices de fixao (F ST ) (Wright, 1978), que indicam o nvel de diferenciao populacional e esto relacionados, sob alguns pressupostos, com o nvel de fluxo gnico entre as populaes foram calculados par-a-par entre as populaes no programa Arlequin v. 3.11 (Excoffier et al., 2006), assim como os ndices de diversidade haplotpica (h) e nucleotdica () (Nei, 1987). O nmero de hapltipos (H) e o nmero de stios polimrficos (S) foram obtidos com auxlio do programa DNAsp 5.10 (Librado & Rozas, 2009). O clculo da divergncia entre as sequncias (distncia p) foi feito com o programa Mega 5. . Anlise da varincia molecular A anlise da varincia molecular (AMOVA) (Excoffier et al., 1992) foi feita com o programa Arlequin v. 3.11 a fim de testar as diferentes hipteses de estruturao geogrfica inter/intrapopulacionais. Esses testes so feitos a partir de um algoritmo que calcula as estatsticas , anlogas s estatsticas F (Wright, 1978) que utiliza uma matriz de distncia entre os hapltipos para separar a varincia molecular em nveis hierrquicos. Para testar a significncia dos ndices de fixao, foram feitas 1.000 permutaes de hapltipos, indivduos ou populaes entre indivduos, populaes ou grupos de populaes. Aps cada permutao, os ndices foram recalculados para obteno das distribuies nulas (Excoffier et al., 2006).
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. Rede de hapltipos As anlises filogeogrficas foram feitas a partir das redes de hapltipos geradas pelo programa TCS v. 1.18 (Clement et al., 2000), usando o mtodo de 95% de parcimnia (Templeton et al., 1992). As ambiguidades nas redes foram resolvidas de acordo com o critrio estabelecido por Crandall & Templeton (1993). As conexes ambguas foram resolvidas utilizando-se primariamente as informaes das rvores filogenticas e, no caso das rvores no serem informativas, agrupando-se com o hapltipo mais central. . Testes de neutralidade Os testes de neutralidade D de Tajima (Tajima, 1989) e Fs de Fu (Fu, 1997) foram feitos com o programa Arlequin v. 3.11 para detectar se houve desvios em relao neutralidade, que poderiam ser interpretados como resultado da seleo no DNA mitocondrial ou, assumindo-se a neutralidade, como resultados de expanso ou retrao populacional. Sempre que a hiptese de neutralidade foi rejeitada, as hipteses de seleo e expanso demogrfica e espacial foram testadas atravs de uma anlise da distribuio das diferenas (mismatch distribution analysis) (Rogers & Harpending, 1992) no programa DNAsp5 (Rozas et al. 2009). De acordo com esse modelo, a distribuio do nmero de diferenas par-a-par entre as sequncias apresenta formas distintas para populaes com diferentes histricos demogrficos. Assim, populaes estveis apresentam distribuies geomtricas, enquanto populaes que sofreram uma sbita reduo populacional produzem uma distribuio prxima de zero ou bimodal. J populaes que passaram por uma expanso populacional recente ou uma expanso da distribuio geogrfica apresentam uma distribuio unimodal (Rogers & Harpending, 1992; Frankham et al., 2008). Caso as hipteses nulas de expanso demogrfica e espacial no sejam rejeitadas, provvel que a populao tenha sofrido uma expanso populacional na regio.
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Resultados 2.1 Carnegiella marthae . Anlise filogentica Para enraizamento da rvore filogentica e identificao de possveis espcies crpticas de C. marthae, foram utilizadas, alm das amostras das seis sub-bacias diagnosticadas morfologicamente como C. marthae, mais sete hapltipos correspondentes a amostras da espcie congnere C. strigata um hapltipo de Hoplias malabaricus (Erythrinidae), um hapltipo de Piabucina astrigata (Lebiasinidae) e um hapltipo de Chalceus macrolepidotus (Alestidae), todos obtidos a partir do Genbank (NML, 2013) com os nmeros de acesso apresentados na Tabela 2.1.2., abaixo. Nas duas anlises filogenticas (de distncia, Fig. 2.1.1, e mxima verossimilhana, Fig. 2.1.2) todos os 31 hapltipos de C. marthae ficaram agrupados em um mesmo clado (sustentado por um alto valor de bootstrap, acima de 99%), irmo de Carnegiella strigata. Entre os hapltipos identificados como C. marthae ambas as rvores recuperaram duas linhagens, monofilticas correspondentes, cada uma delas, aos hapltipos do Unini e do Aman, sustentados por valores de bootstrap superiores a 98% e 97%, respectivamente. Dentro do clado de C. marthae do Unini, ambas as anlises recuperaram apenas trs clados com valores de bootstrap acima de 50%, respectivamente (CM07+CM11+CM25), (CM24+CM27) e (CM15+CM19). Nenhum desses clados corresponde a uma nica sub-bacia ou a um conjunto de sub-bacias geograficamente prximas, tendo distribuio ampla entre os tributrios (Tab. 2,1.3). As relaes filogenticas dos demais hapltipos do Unini no ficaram claramente resolvidas, tanto entre si como entre eles e os trs agrupamentos formados. Da mesma forma, dentro do conjunto de hapltipos da bacia do lago Aman, ambas as anlises recuperaram rvores com a mesma topologia para os seis hapltipos dessa populao, formando um clado mais derivado com os hapltipos CM01, CM02, CM03 e CM05, com valor de bootstrap superior a 60%. Os dois hapltipos restantes ficaram situados em uma tricotomia basal, mas com valores de bootstrap abaixo de 50%.
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Figs. 2.1.1A rvore resultante de anlises de Neighbour-joining para os genes ATPase 6/8 de Carnegiella marthae das bacias do lago Aman e do rio Unini, AM.
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Fig. 2.1.1B. Topologia da rvore resultante de anlise de Neighbour Joining (NJ) entre hapltipos dos genes ATPase 6/8 de Carnegiella marthae das bacias do lago Aman e do rio Unini, AM. Os valores de bootstrap abaixo de 50% foram omitidos da figura.
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Figs. 2.1.2 - rvore resultante de anlise de Mxima Verossimilhana (ML) entre hapltipos dos genes ATPase 6/8 de Carnegiella marthae das bacias do lago Aman e do rio Unini, AM.
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Tabela 2.1.1. Localidades das amostras e nmero de exemplares utilizados nas anlises de ATPase 6/8 de C. marthae nas bacias do lago Aman e rio Unini (AM). Espcie Localidade Coordenadas Sub-bacia Drenagem N Carnegiella marthae P-202 S2 16.666 W64 40.611 Ig. Bar (AM1) Aman 18 Tr. Capoeirinha S2 21.006 W64 43.329 Ig. Bar (AM1) Aman 4 P-206 S2 29.890 W64 36.967 Ig. Ubim (AM2) Aman 1 Ubinzinho S2 28.423 W64 37.541 Ig. Ubim (AM2) Aman 5 P-143 S1 50.513 W64 08.946 Rio Preto (UN2) Unini 10 P-160 S1 45.813 W63 52.638 Rio Preto (UN2) Unini 10 P-226 S1 39.388 W62 58.827 Ig. Solimezinho (UN4) Unini 9 P-227 S1 39.295 W62 58.250 Ig. Solimezinho (UN4) Unini 2 P-044 S1 52.762 W63 14.670 Pauini (UN5) Unini 4 P-065 S1 48.754 W63 01.384 Pauini (UN5) Unini 15 P-381 S2 03.294 W62 46.900 Papagaio (UN6) Unini 19 TOTAL 97
Tabela 2.1.2. Espcies utilizadas como grupo externo de Carnegiella marthae, localidades de origem das amostras, e seus respectivos nmeros de acesso do Genbank. spcie Localidade da amostra Nmero de acesso do Genbank Carnegiella strigata Rio Negro GQ260023.1, GQ260019.1, GQ260014.1, GQ260013.1, GQ260009.1, GQ260006.1 e GQ260005.1 Carnegiella strigata Rio Uatum GQ260021.1 Carnegiella strigata No especificada AP011983.1 Hoplias malabaricus No especificada AP011992.1 Piabucina astrigata No especificada NC_015750.1 Chalceus macrolepidotus No especificada AB054130.1
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Tabela 2.1.3. Distribuio dos hapltipos dos genes ATPase 6/8 de Carnegiella marthae das bacias do lago Aman e do rio Unini, AM organizados por sub-bacia. Os valores da matriz identificam o nmero de exemplares de cada populao com o hapltipo em particular. Hapltipo # Sub-bacia N
. Estruturao populacional As 97 sequncias de 804 pb de ATPase 6/8 de Carnegiella marthae apresentaram 86 stios polimrficos dispostos em 31 hapltipos. A divergncia (distncias p) entre os hapltipos das duas populaes do Aman e das populaes do Unini foi bastante elevada, variando entre 0,0852 e 0,0862 (Tab. 2.1.4). A distncia entre os hapltipos encontrados em AM1 e AM2 foi de 0,19%, sendo que dois dos trs hapltipos encontrados em AM2 tambm foram observados em AM1 (Tab. 2.1.3). Entre as populaes do rio Unini, a maior distncia foi de 0,3% entre os hapltipos do rio Papagaio (UN6) e dos rios Preto (UN2) e Pauini (UN5). A maior distncia geogrfica entre as localidades com amostras de C. marthae na bacia do rio Unini justamente entre as bacias dos rios Preto e Papagaio. Dentro do Unini, a menor distncia p foi de 0,24% entre a populao do Ig. Solimezinho (UN4) e do rio Pauini (UN5) (Tab. 2.1.4).
Tabela 2.1.4. Matriz de distncias genticas (distncia p) entre populaes de Carnegiella marthae das bacias do lago Aman e do rio Unini, AM para os genes ATPase 6/8. Populao 1 2 3 4 5 6 1. Ig. Bar (AM1) - 0,0019 0,0859 0,0862 0,0861 0,0862 2. Ig. Ubim (AM2) - 0,0852 0,0854 0,0854 0,0854 3. Preto (UN2) - 0,0028 0,0026 0,0030 4. Solimezinho (UN4) - 0,0024 0,0027 5. Pauini (UN5) - 0,0030 6. Papagaio (UN6) -
As diversidades haplotpica e nucleotdica totais foram h=0,744 e =0,00081 (Tabela 2.1.5), mas em funo da grande divergncia entre as sequncias de cada bacia, daqui em diante, cada linhagem ser tratada separadamente (ver detalhes na seo Discusso). Considerando as drenagens separadamente, as diversidades haplotpica e nucleotdica foram h=0,880 e =0,0027 para o conjunto de hapltipos do Unini e h=0,775 e =0,0018 para os conjuntos do Aman. Dentro das populaes, a diversidade haplotpica apresentou valores elevados, sendo os menores deles h=0,600 e h=0,758 em AM2 e AM1, respectivamente. Nas populaes do rio Unini, a diversidade haplotpica variou entre 0,853, em UN2, e 0,909, em UN4. J a diversidade nucleotdica variou de =0,0011 e =0,0018 nas amostras de AM2 e AM1, at =0,0029 e =0,0031 nas amostras de UN2 e UN6, respectivamente (Tabela 2.1.5). O menor nmero de
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hapltipos por sub-bacia foi de trs, nas amostras do ig. Ubim (AM2). No entanto, apenas seis indivduos desse tributrio foram sequenciados. Entre as populaes com maior nmero de exemplares sequenciados, AM1 foi a que apresentou o menor nmero, com cinco hapltipos entre 22 indivduos sequenciados. Trs sub-bacias do rio Unini apresentaram 10 hapltipos, com um mnimo de 19 exemplares sequenciados em cada local. A populao do Ig. Solimezinho (UN4) apresentou o menor nmero de hapltipos entre as populaes do Unini, sete hapltipos, mas deve-se levar em considerao que apenas 11 exemplares foram sequenciados (Tabelas 2.1.3 e 2.1.5). Dos 25 hapltipos encontrados na bacia do rio Unini, trs foram registrados em todas as sub-bacias (CM09, CM10 e CM11), um em trs sub-bacias (CM06) e um em duas sub-bacias (CM19). Os 20 hapltipos restantes foram encontrados em uma nica sub-bacia, cada (Tabela 2.1.3).
Tabela 2.1.5. ndices de diversidade e estatstica dos testes de neutralidade para os genes ATPase 6/8 de Carngeialla marthae das bacias do lago Aman e do rio Unini, AM. Nmero de hapltipos (H), nmero de stios polimrficos (S), diversidade haplotpica (h) e nucleotdica (). ndices de diversidade populacional Testes de equilbrio Sub-bacia N H S h F S de Fu
A anlise dos valores de FST demonstra uma estruturao forte entre as duas populaes do Aman e todas as populaes do rio Unini, com valores significativos tendendo a 1,0 (sempre superiores a 0,96), o que corrobora uma ausncia de fluxo gnico e consiste em uma indicao de se tratarem de espcies diferentes (Tabela 2.1.6). J entre as populaes do rio Unini, os valores de F ST indicam ausncia de estruturao. As populaes apresentaram alta variabilidade haplotpica e, ao mesmo tempo, baixa nucleotdica (h > 0,5, < 0,005, Tabela 2.1.5), caractersticas que podem indicar terem
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passado efeito de gargalo, em um passado remoto, seguido de um rpido crescimento populacional e acmulo de mutaes sobre os hapltipos remanescentes (Grant & Bowen, 1998).
Tabela 2.1.6. Valores par-a-par de F ST para os genes ATPase 6/8 (diagonal inferior) entre populaes de Carnegiella marthae das bacias do lago Aman e do rio Unini, AM. Populao 1 2 3 4 5 6 1. Ig. Bar (AM1) - 2. Ig. Ubim (AM2) 0,194* - 3. Preto (UN2) 0,971* 0,968* - 4. Solimezinho (UN4) 0,974* 0,974* 0,037 - 5. Pauini (UN5) 0,974* 0,974* 0,005 -0,027 - 6. Papagaio (UN6) 0,970* 0,967* -0,001 -0,038 -0,029 - * P < 0,05
Para a AMOVA, foram testadas hipteses de agrupamentos definidos a priori levando em considerao o arranjo atual das drenagens e, cada sub-bacia do rio Unini separadamente, excluindo-se as amostras da bacia do lago Aman. (Tabela 2.1.7). Nenhum agrupamento da AMOVA foi estatisticamente significativo.
Tabela 2.1.7. Resultados da anlise de varincia molecular (AMOVA) avaliando hipteses biogeogrficas para os genes ATPase 6/8 em Carnegiella marthae das bacias do lago Aman e do rio Unini, AM. Hiptese (nmero de grupos) Entre grupos Entre populaes de cada grupo Dentro das populaes Drenagens (2) AMAN/UNINI 96,89 0,006 3,05 Sub-bacias do UNINI AM/UN2/UN4/UN5/UN6 93,60 0,73 5,67
. Anlises filogeogrficas Os dois clados que representam variao geogrfica na anlise filogentica corresponderam aos dois conjuntos de hapltipos das bacias do lago Aman e do rio Unini (Fig. 2.1.3). A distncia entre os clados foi de 62 passos mutacionais, ou seja, 61 hapltipos extintos ou no amostrados entre as populaes das duas bacias. Dessa forma, os agrupamentos so avaliados separadamente.
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Fig 2.1.3. Rede de hapltipos dos genes ATPase 6/8 de Carnegiella marthae das bacias do lago Aman e do rio Unini, AM. esquerda esto os hapltipos coletados na bacia do lago Aman (AM1 e AM2) (n=28) e direita esto os hapltipos coletados na bacia do rio Unini (UN2, UN4, UN5 e UN6) (n=69). Os pequenos pontos pretos correspondem aos hapltipos no amostrados.
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Duas anlises da distribuio das diferenas (mismatch distribution analysis) foram realizadas utilizando os clados formados pelos hapltipos do Aman e do Unini, separadamente (Fig. 2.1.4). Para as populaes do Unini, a inferncia indicaria um cenrio intermedirio entre uma populao estvel e a ocorrncia de gargalo populacional recente na populao. J no Aman, foi sugerida a ocorrncia de um gargalo populacional recente. No entanto, as hipteses nulas de expanso populacional e geogrfica no puderam ser rejeitadas. O teste D de Tajima mostrou valores significativamente diferentes de zero para a hiptese de desvio da neutralidade apenas para o conjunto das populaes do Unini (Tabela 2.1.5). O valor obtido negativo pode estar refletindo o excesso de alelos raros para essa bacia, indicando haver expanso populacional. Para o teste Fs de Fu, foram detectados desvios de neutralidade significativos em todas as populaes da bacia do rio Unini, tanto separadamente ou como conjunto. (Tabela 2.1.5). Valores negativos de Fs em regies seletivamente neutras geralmente esto associados ao excesso de alelos raros em uma populao, o que pode indicar uma expanso populacional recente (Rogers & Harpending, 1992). No caso das populaes do Unini, foram encontrados 19 hapltipos exclusivos de cada sub-bacia representados por apenas um nico exemplar cada.
Fig. 2.1.4 Anlises de distribuio de diferenas para os genes ATPase 6/8 de Carnegiella marthae das bacias do lago Aman e do rio Unini.
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2.2 Hypoptopomatinae sp. . Anlise filogentica Para enraizamento da rvore filogentica e identificao de possveis espcies crpticas de Hypoptopomatinae sp., foram utilizadas, alm das amostras das seis sub-bacias, mais cinco hapltipos correspondentes a amostras das espcies Hypoptopoma inexspectatum, Hypoptopoma sp., Oxyropsis carinata e Otocinclus vestitus, obtidas a partir do Genbank (NML, 2013) (com os nmeros de acesso indicados na Tabela 2.2.2), alm de dois hapltipos de Rineloricaria lanceolata de cada drenagem da rea estudo. Nas anlises, o nico exemplar de Hypoptopomatinae sp. coletado no igarap Ubim (AM2) foi agrupado com as amostras do igarap do Bar (AM1). Nas duas anlises filogenticas (de distncia, Figs. 2.2.1A e 2.2.1B, e mxima verossimilhana, Fig. 2.2.2) todos os hapltipos de Hypoptopomatinae sp. ficaram agrupados dentro do mesmo clado (sustentado pelo valor mximo de bootstrap) como grupo irmo de Hypoptopoma inexspectatum. Dentro do clado que engloba somente hapltipos de Hypoptopomatinae sp., cada agrupamento correspondeu a exemplares coletados em uma nica sub-bacia, com exceo dos trs hapltipos do lago Aman que no formaram um clado monofiltico. Mesmo assim, a anlise de neighbour-joining indica que os hapltipos da sub-bacia do rio Preto (UN2) so mais aparentados aos hapltipos do lago Aman do que aos hapltipos das outras sub-bacias do rio Unini. Os valores de bootstrap para esse agrupamento, no entanto, so muito baixos. Tabela 2.2.1. Localidades das amostras e nmero de exemplares utilizados nas anlises de citocromo b de Hypoptopomatinae sp. nas bacias do lago Aman e rio Unini (AM). Espcie Localidade Coordenadas Sub-bacia Drenagem N Hypoptopomatinae sp. P-202 S2 16.666 W64 40.611 Ig. Bar (AM1) Aman 5 P-204 S2 17.104 W64 40.597 Ig. Bar (AM1) Aman 5 Ubinzinho S2 28.423 W64 37.541 Ig. Ubim (AM2) Aman 1 P-136 S1 50.135 W64 03.121 Rio Preto (UN2) Unini 2 P-320 S1 49.709 W64 09.172 Rio Preto (UN2) Unini 3 P-240 S1 42.079 W63 33.957 Arara (UN3) Unini 1 P-247 S1 39.942 W63 32.865 Arara (UN3) Unini 1 P-226 S1 39.388 W62 58.827 Ig. Solimezinho (UN4) Unini 9 P-227 S1 39.295 W62 58.250 Ig. Solimezinho (UN4) Unini 4 P-278 S1 40.570 W63 03.600 Ig. Solimezinho (UN4) Unini 3 P-044 S1 52.762 W63 14.670 Pauini (UN5) Unini 1 P-047 S1 52.808 W63 14.388 Pauini (UN5) Unini 4 P-370 S1 53.695 W63 14.164 Pauini (UN5) Unini 5 TOTAL 44
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Fig. 2.2.1A rvore resultante de anlises de Neighbour-joining para o gene citocromo b de Hypoptopomatinae sp. das bacias do lago Aman e do rio Unini.
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Fig. 2.2.1B Topologia da rvore resultante de anlise de Neighbour-joining (NJ) entre hapltipos do gene citocromo b de Hypoptopomatinae sp. das bacias do lago Aman e do rio Unini. Os valores de bootstrap abaixo de 50% foram omitidos da figura.
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Fig. 2.2.2 - rvore resultante de anlise de Mxima Verossimilhana (ML) entre hapltipos do gene citocromo b de Hypoptpomatinae gen.sp.nov. das bacias do lago Aman e do rio Unini (AM). Os valores de bootstrap menores que 50% foram omitidos da figura.
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Tabela 2.2.2. Espcies utilizadas como grupo externo de Hypoptopomatinae sp., localidade da amostra, e seus respectivos nmeros de acesso do Genbank. spcie Localidade da amostra Nmero de acesso do Genbank Hypoptopoma inexspectatum Rio Paran, Santa F, Argentina FJ965508.1 Hypoptopoma sp. No especificada DQ133748.1 Oxyropsis carinata No especificada DQ119354.1 Otocinclus vestitus No especificada DQ133749.1 Otocinclus vestitus No especificada DQ119487.1 Rineloricaria lanceolata Ig. Bar (AM1), bacia do lago Aman. Hapltipos #RL e #RL Rineloricaria lanceolata Rio Arara (UN3), bacia do rio Unini Hapltipos #RL e #RL
Tabela 2.2.3. Distribuio dos hapltipos do gene citocromo b de Hypoptopomatinae sp. das bacias do lago Aman e do rio Unini (AM)organizados por sub-bacia. Os valores na matriz identificam o nmero de exemplares de cada populao com o hapltipo em particular. Hapltipo # Sub-bacia N
. Estruturao populacional Dos cerca de 70 exemplares com DNA extrado das amostras de tecido e amplificado, apenas 44 tiveram o sequenciamento bem-sucedido. As 44 sequncias de 1.092 pb de citocromo b de Hypoptopomatinae sp. apresentaram 29 stios polimrficos dispostos em 18 hapltipos. No foi encontrada nenhuma distncia p superior a 1%. As maiores distncias p encontradas foram de 0,92% e 0,91% entre a populao de UN4 e de UN5, e entre a populao de UN4 e UN2 (Tab. 2.2.4). A menor distncia p foi de 0,54% entre a populao do rio Preto (UN2) e do Aman (AM1+ AM2), menor entre tributrios de bacias diferentes do que dentro da bacia do rio Unini.
Tabela 2.2.4. Matriz de distncias genticas (distncia p) entre populaes de Hypoptopomatinae sp. para o gene citocromo b. Populao 1 2 3 4 5 1. Bar +Ubim (AM1+AM2) - 0,0054 0,0061 0,0065 0,0055 2. Preto (UN2) - 0,0085 0,0091 0,0077 3. Arara (UN3) - 0,0059 0,0088 4. Solimezinho (UN4) - 0,0092 5. Pauini (UN5) -
As diversidades haplotpica e nucleotdica totais foram h=0,895 e =0,0056 (Tab. 2.2.5). Considerando as drenagens separadamente, as diversidades haplotpica e nucleotdica foram h=0,867 e =0,0018 para o conjunto de hapltipos do Unini e h=0,473 e =0,0011 para a populao do Aman. Dentro das populaes, a diversidade haplotpica variou de h=0,473 nas amostras do Ig. Bar (AM1) que apresentaram apenas trs hapltipos, at h=1,00 na amostra do rio Arara (UN3). No entanto apenas dois exemplares do rio Arara foram sequenciados de maneira bem-sucedida. No rio Preto (UN2), foi encontrada a segunda mais alta diversidade haplotpica com h=0,700. J a diversidade nucleotdica variou de =0,0007 nas amostras do rio Preto (UN2) e do Ig. Solimezinho (UN4) a =0,0011 e =0,0018 nas amostras do rio Papagaio e alto rio Unini, respectivamente (Tabela 2.2.5). O nmero de hapltipos por bacia variou de dois, nas amostras do rio Arara a seis, nas amostras do Ig. Solimezinho (Tabelas 2.2.3 e 2.2.5). Com exceo do hapltipo HY02, que foi registrado em AM1 e AM2, todos os outros hapltipos foram encontrados em uma nica sub-bacia (Tabela 2.2.3). Entre os 18 hapltipos encontrados no total, 12 foram representados por apenas um indivduo.
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Tabela 2.2.5. ndices de diversidade e estatstica dos testes de neutralidade para o gene citocromo b de Hypoptopomatinae sp.. Nmero de hapltipos (H), nmero de stios polimrficos (S), diversidade haplotpica (h) e nucleotdica (). ndices de diversidade populacional Testes de equilbrio Sub-bacia N H S h F S de Fu
D de Tajima 1. Ig. Bar+Ubim (AM1+AM2) 11 3 6 0,473 0,0011 1,023 -1,569 2. Preto (UN2) 5 3 2 0,700 0,0007 -0,829 -0,973 3. Arara (UN3) 2 2 2 1 0,0018 0,693 0 4. Solimezinho (UN4) 16 6 4 0,617 0,0007 -3,398 -1,052 5. Pauini (UN5) 10 4 4 0,533 0,0009 -0,971* -1,245 6. UNINI (UN2+UN3+UN4+UN5) 33 15 24 0,867 0,0018 -1,570 0,189 Total 44 18 29 0,895 0,0056 -2,585 -0,344 * P < 0,05 As populaes do Aman (AM1+AM2) apresentaram baixa variabilidade haplotpica e nucleotdica (h < 0,5, < 0,005, Tabela 2.2.5), fato que pode estar refletindo um vis amostral, visto que apenas 11 exemplares do Aman foram sequenciados de maneira bem-sucedida. Por outro lado, as demais populaes (UN2, UN3, UN4 e UN5) apresentam uma diversidade haplotpica mais elevada, ao mesmo tempo em que a diversidade nucleotdica foi baixa (h > 0,5, < 0,005, Tabela 2.2.5), caractersticas que poderiam indicar terem passado efeito gargalo antigo, seguido de um rpido crescimento populacional e acmulo de mutaes sobre os hapltipos remanescentes (Grant & Bowen, 1998). Porm isso no corroborado pelo MD e tampouco pelos testes de neutralidade. A anlise da estruturao populacional a partir dos valores de FST demonstra uma estruturao forte entre todas as populaes amostradas, sempre com valores significativos. O menor valor foi de 0,799 entre as populaes do rio Arara (UN3) e do Aman (AM1+AM2) (Tab. 2.2.6) e o maior de 0,919 entre o rio Preto UN2 e o igarap Solimezinho (UN4). Tabela 2.2.6. Valores par-a-par de F ST para o gene citocromo b entre populaes de Hypoptopomatinae sp. nas bacias do lago Aman e rio Unini. Populao 1 2 3 4 5 1. Bar +Ubim (AM1+AM2) - 2. Preto (UN2) 0,812* - 3. Arara (UN3) 0,799* 0,885* - 4. Solimezinho (UN4) 0,862* 0,919* 0,885* - 5. Pauini (UN5) 0,814* 0,891* 0,886* 0,913* - * P < 0,05
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Para a AMOVA foram testadas hipteses de agrupamentos definidos a priori levando em considerao a arranjo atual das drenagens, e as relaes indicadas nas anlises filogenticas que colocam UN3 junto de UN5 em um clado irmo a UN4, alm de sugerir (Fig. 2.2.1) a proximidade entre os hapltipos de UN2 e AM1. O primeiro agrupamento testado na AMOVA no foi estatisticamente significativo (P > 0,05). O segundo agrupamento testado apresentou resultados significativos, mas apenas pouco mais de 13% do total da variao encontrada correspondeu variao entre os grupos (Tab. 2.2.7).
Tabela 2.2.7. Resultados da anlise de varincia molecular (AMOVA) avaliando hipteses biogeogrficas para o gene citocromo b em Hypoptopomatinae sp.. Hiptese (nmero de grupos) Entre grupos Entre populaes de cada grupo Dentro das populaes Drenagens (2) AMAN/UNINI -45,55 130,35* 15,20* Cabeceiras (4) (AM1+UN2)/UN3/UN4/UN5 27,9 59,95* 12,15* Filogenia (2) (AM1+UN2+ UN5)/(UN3+UN4) 26,30 62,41* 11,28* * P < 0,05
. Anlises filogeogrficas A rede de hapltipos formou cinco clados, cada um correspondendo a uma sub-bacia amostrada (Fig. 2.2.3). Um dos clados, que corresponde aos hapltipos do Aman (AM1+AM2) foi o que apresentou o menor nmero de passos mutacionais para os demais agrupamentos. Quatro hapltipos no amostrados separam a populao do Aman e as populaes do rio Preto (UN2) e rio Pauini (UN4). Essa a mesma distncia que separa o hapltipo HY02 do hapltipo HY03, ambos coletados na mesma localidade. A maior distncia entre clados foi de 12 passos mutacionais entre o hapltipo mais comum, supostamente ancestral, do Ig. Solimezinho (UN4) e o hapltipo mais comum tanto do rio Pauini (UN5) como do rio Preto (UN2).
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Fig 2.2.3. Rede de hapltipos de citocromo b de Hypoptopomatinae sp.. Os pequenos pontos pretos correspondem aos hapltipos no amostrados.
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Uma anlise da distribuio das diferenas (mismatch distribution analysis) foi realizada utilizando todos os exemplares amostrados (Fig. 2.2.4). A anlise apresentou uma distribuio bimodal das diferenas entre os hapltipos amostrados, sugerindo ter ocorrido contato secundrio entre as populaes. Os dados das populaes do rio Unini e do Aman foram submetidos a anlises da distribuio das diferenas (mismatch distribution analysis) para testar as hipteses de expanso populacional e expanso espacial da distribuio. As hipteses nulas de expanso populacional e geogrfica no puderam ser rejeitadas. No entanto, a no rejeio dessas hipteses no necessariamente indica que as populaes tenham sofrido uma expanso populacional. Quando no se rejeita a hiptese nula, no h sinal de desvios significantes que configurem uma retrao ou expanso populacional. Ou seja, no quer dizer que no tenha havido expanso populacional ou espacial, mas sim que o n amostral e as diferenas no so conclusivas para rejeitar a hiptese de estabilidade. O teste D de Tajima no apresentou valores significativamente diferente de zero para a hiptese de desvio da neutralidade para nenhuma populao separadamente ou em conjunto (Tab. 2.2.5). Para o teste Fs de Fu, foram detectados desvios de neutralidade significativos na populao do rio Pauini (UN5) (Tab. 2.3.5).
Fig. 2.2.4 Anlise da distribuio de diferenas entre os hapltipos do gene citocromo b de Hypoptopomatinae sp. das bacias do lago Aman e rio Unini.
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2.3 Rineloricaria lanceolata . Anlise filogentica Para enraizamento da rvore filogentica e identificao de possveis espcies crpticas de R. lanceolata, foram utilizadas, alm das amostras das sete sub-bacias diagnosticadas morfologicamente como R. lanceolata, mais oito hapltipos correspondentes a amostras das espcies Rineloricaria fallax, R. jaraguensis, R. uracantha, Spatuloricaria puganensis, Spatuloricaria sp., Dasyloricaria filamentosae e Oxyropsis carinata obtidas a partir do Genbank (NML, 2013) com os nmeros de acesso indicados na tabela 2.3.2, alm de um hapltipo de Hypoptopomatinae sp. obtido no presente estudo. Nas duas anlises filogenticas (de distncia, Fig. 2.3.1, e mxima verossimilhana, Fig. 2.3.2) todos os hapltipos de Rineloricaria lanceolata ficaram agrupados dentro do mesmo clado (sustentado pelo valor mximo de bootstrap), irmo de Spatuloricaria puganensis. A topologia das rvores de cada anlise diferiu apenas nas relaes desse clado R. lanceolata S. puganensis com as demais espcies, sem diferir nas relaes entre os hapltipos de R. lanceolata. Para esses hapltipos, clara a existncia de duas linhagens, uma que inclui os exemplares da bacia do lago Aman e outra que inclui aqueles da bacia do rio Unini, mas sem definio de clados relacionados s sub-bacias amostradas. Embora ambos os clados principais tenham sido recuperados em ambas as anlises, em alguns casos no foi possvel resolver as relaes entre hapltipos proximamente relacionados dentro da populao do rio Unini.
Tabela 2.3.1. Localidades das amostras e nmero de exemplares utilizados nas anlises citocromo b de R. lanceolata nas bacias do lago Aman e rio Unini (AM). Espcie Localidade Coordenadas Sub-bacia Drenagem N Rineloricaria lanecolata
Fig. 2.3.1A rvore resultante de anlise de Neigbour Joining (NJ) entre hapltipos do gene citocromo de Rineloricaria lanceolata.
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Fig. 2.3.1B Topologia da rvore resultante de anlise de Neigbour Joining (NJ) entre hapltipos do gene citocromo de Rineloricaria lanceolata. Os valores de bootstrap abaixo de 50% foram omitidos da figura.
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Fig. 2.3.2 - rvore resultante de anlise de Mxima Verossimilhana (ML) entre hapltipos do gene citocromo b de Rineloricaria lanceolata. Os valores de bootstrap menores do que 45% foram omitidos da figura.
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Tabela 2.3.2. Espcies utilizadas como grupo externo de Rineloricaria lanceolata, localidade da amostra, e seus respectivos nmeros de acesso do Genbank. spcie Localidade da amostra Nmero de acesso do Genbank Rineloricaria fallax No especficada DQ133780.1 Rineloricaria fallax No especificada DQ119389.1 Rineloricaria jaraguensis, No especificada JN089797.1 Rineloricaria uracantha No especificada DQ119462.1 Spatuloricaria puganensis No especificada DQ133781.1 Spatuloricaria sp., No especificada DQ119444.1 Dasyloricaria filamentosa No especificada DQ119400.1 Oxyropsis carinata No especificada DQ119354.1 Hypoptopomatinae sp. Rio Arara (UN3), bacia do rio Unini. Hapltipo HY17
Tabela 2.3.3. Distribuio dos hapltipos do gene citocromo b de Rineloricaria lanceolata organizados por sub-bacia. Os valores na matriz identificam o nmero de exemplares de cada populao com o hapltipo em particular. Hapltipo # Sub-bacia N
. Estruturao populacional As 84 sequncias de 1.070 pb de citocromo b de Rineloricaria lanceolata apresentaram 32 stios polimrficos dispostos em 14 hapltipos. As maiores distncias p foram encontradas entre a populao do Aman e as demais populaes, variando entre 1,46% e 1,55% (Tab. 2.3.4). Entre as populaes do rio Unini, a maior distncia foi de 0,0015 entre os hapltipos do rio Papagaio (UN6) e do alto rio Unini (UN1), as localidades mais distantes geograficamente uma da outra. As demais populaes do rio Unini apresentaram distncias p normalmente inferiores a 0,1% (Tab. 2.3.4). A menor distncia p foi de 0,02% entre a populao do rio Preto (UN2) e do rio Pauini (UN5), pois RL02, o nico hapltipo encontrado em UN2, foi encontrado em alta frequncia em UN5 (Tab. 2.3.3).
Tabela 2.3.4. Matriz de distncias genticas (distncia p) entre populaes de Rineloricaria lanceolata para o gene citocromo b. Populao 1 2 3 4 5 6 7 1. Ig. Bar (AM1) - 0,0154 0,0146 0,0150 0,0152 0,0148 0,0155 2. Alto rio Unini (UN1) - 0,0009 0,0009 0,0008 0,0010 0,0015 3. Preto (UN2) - 0,0006 0,0007 0,0002 0,0009 4. Arara (UN3) - 0,0005 0,0007 0,0012 5. Solimezinho (UN4) - 0,0008 0,0012 6. Pauini (UN5) - 0,0010 7. Papagaio (UN6) -
As diversidades haplotpica e nucleotdica totais foram h=0,744 e =0,00081 (Tabela 2.3.5). Considerando as drenagens separadamente, as diversidades haplotpica e nucleotdica foram h=0,633 e =0,00077 para o conjunto de hapltipos do Unini e h=0,194 e =0,0008 para a populao do Aman. Dentro das populaes, a diversidade haplotpica variou de zero nas amostras do rio Preto (UN2), que apresentaram um nico hapltipo, at h=1,0 na amostra do rio Papagaio (UN6). No entanto apenas trs exemplares do rio Papagaio foram sequenciados. No alto rio Unini (UN1), foi encontrada a segunda mais alta diversidade haplotpica com h=0,800. J a diversidade nucleotdica variou de zero nas amostras do rio Preto (UN2) a =0,0019 e =0,0012 nas amostras do rio Papagaio e alto rio Unini, respectivamente (Tabela 2.3.5). O nmero de hapltipos por bacia variou de um, nas amostras do rio Preto a sete, nas amostras do alto rio Unini (Tabelas2.3.3 e 2.3.5). Dentro do conjunto amostrado no rio Unini, oito hapltipos foram restritos a uma nica localidade, e dois hapltipos (RL01 e RL02) encontrados em cinco localidades e um hapltipo (RL07) compartilhado por duas
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localidades. Os hapltipos RL01, RL02 e RL04 foram tambm os mais comuns, sendo encontrados em 21, 33 e 18 indivduos, respectivamente (Tabela 2.3.3).
Tabela 2.3.5. ndices de diversidade e estatstica dos testes de neutralidade para o gene citocromo b de Rineloricaria lanceolata. Nmero de hapltipos (H), nmero de stios polimrficos (S), diversidade haplotpica (h) e nucleotdica ().
ndices de diversidade populacional Testes de equilbrio Sub-bacia N H S H F S de Fu
D de Tajima 1. Bar (AM1) 20 3 8 0,194 0,0008 0,723 -2,174* 2. Alto rio Unini (UN1) 15 7 7 0,800 0,0012 -3,223* -0,598 3. Preto (UN2) 9 1 0 0 0 0 0 4. Arara (UN3) 13 3 2 0,615 0,0007 0,049 0,208 5. Solimezinho (UN4) 10 2 1 0,466 0,0004 0,818 -1,370 6. Pauini (UN5) 14 4 3 0,395 0,0004 -2,288* -1670* 7. Papagaio (UN6) 3 3 3 1 0,0019 -0,693 0 UNINI (UN1+UN2+UN3+UN4+UN5+UN6) 64 11 11 0,633 0,00077 -7,506* -1,809* Total 84 14 32 0,744 0,00081 2,003 -0,0179* * P < 0,05 A anlise da estruturao populacional a partir dos valores de FST demonstra uma estruturao forte entre a populao do Aman e todas as populaes do rio Unini, com valores significativos sempre superiores a 0,937 (Tabela 2.3.6). Entre as populaes do rio Unini, os valores de F ST indicam estruturao entre o UN2 e todas as outras populaes com exceo de UN5. Vale ressaltar que apenas nove exemplares de UN2 foram sequenciados de forma bem sucedida, todos apresentando o mesmo hapltipo RL02, o que pode refletir um efeito fundador nessa populao. O mesmo aconteceu com UN5, que apresentou valores significativos e elevados de Fst quando relacionado s demais populaes do rio Unini, com exceo de UN2. As populaes do rio Preto (UN2), Ig. Solimezinho (UN4) e rio Pauini (UN5) apresentaram baixa variabilidade haplotpica e nucleotdica (h < 0,5, < 0,005, Tabela 2.3.5). Por outro lado, as demais populaes (AM1, UN1, UN3 e UN6) apresentam uma diversidade haplotpica mais elevada, ao mesmo tempo em que a diversidade nucleotdica foi baixa (h > 0,5, < 0,005, Tabela 2.3.5), caractersticas que podem indicar terem passado efeito gargalo antigo, seguido de um rpido crescimento populacional e acmulo de mutaes sobre os hapltipos remanescentes (Grant & Bowen, 1998).
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Para a AMOVA foram testadas hipteses de agrupamentos definidos a priori levando em considerao a arranjo atual das drenagens, a proximidade geogrfica das bacias e os conjunto de localidades que apresentaram valores de Fst significativos entre si na anlise par-a-par (Tabela 2.3.7). Nenhum agrupamento da AMOVA foi estatisticamente significativo.
Tabela 2.3.6. Valores par-a-par de F ST para o gene citocromo b entre populaes de Rineloricaria lanceolata nas bacias do lago Aman e rio Unini. Populao 1 2 3 4 5 6 7 1. Ig. Bar (AM1) - 2. Alto rio Unini (UN1) 0,937* - 3. Preto (UN2) 0,964* 0,217* - 4. Arara (UN3) 0,952* -0,042 0,382* - 5. Solimezinho (UN4) 0,957* -0,029 0,653* -0,036 - 6. Pauini (UN5) 0,959* 0,173* -0,035 0,258* 0,453* - 7. Papagaio (UN6) 0,943* 0,004 0,379* 0,093 0,207 0,163 - * P < 0,05
Tabela 2.3.7. Resultados da anlise de varincia molecular (AMOVA) avaliando hipteses biogeogrficas para o gene citocromo b em Rineloricaria lanceolata. Hiptese (nmero de grupos) Entre grupos Entre populaes de cada grupo Dentro das populaes Drenagens (2) AMAN/UNINI 94,55 0,88* 4,57*
Agrupamento pela tabela 2.3.6. (UN1+UN3+UN4+UN6)/(UN2+UN5) 26,41 -0,00076 73,75* *p<0,05
. Anlises filogeogrficas Os dois clados que representam variao geogrfica na anlise filogentica corresponderam aos dois conjuntos de hapltipos das bacias do lago Aman e do rio Unini (Fig. 2.3.3). A distncia entre os clados de 15 passos mutacionais, ou seja, 14 hapltipos no amostrados entre as populaes das duas bacias. Dentro da populao do Aman, o hapltipo RL05, representado por um nico indivduo, apresentou uma
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diferena de oito passos mutacionais para o hapltipo RL04, o mais comum no Aman com 18 exemplares amostrados.
Fig 2.3.3. Rede de hapltipos de citocromo b de Rineloricaria lanceolata. esquerda, os hapltipos da sub-bacia do igarap do Bar (AM1), no lago Aman (n=20). direita, os hapltipos do rio Unini (n=64). Os pequenos pontos pretos correspondem aos hapltipos no amostrados.
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Duas anlises da distribuio das diferenas (mismatch distribution analysis) foram realizadas utilizando os clados formados pelos hapltipos do Aman e do Unini, separadamente (Fig. 2.3.4). A inferncia indicou a ocorrncia de uma populao estvel do Unini e gargalo populacional com contato secundrio na populao do Aman. Os dados das populaes do rio Unini e do Aman foram submetidos a anlises da distribuio das diferenas (mismatch distribution analysis) para testar as hipteses de expanso populacional e expanso espacial da distribuio. As hipteses nulas de expanso populacional e geogrfica no puderam ser rejeitadas para ambas as populaes do rio Unini e do lago Aman. Quando, ao contrrio, h rejeio das hipteses nulas, pode-se dizer que as populaes no sofreram expanso populacional e/ou espacial. Portanto, a no rejeio dessas hipteses sugere que as populaes tenham sofrido uma expanso populacional. O teste D de Tajima mostrou valores significativamente diferentes de zero para a hiptese de desvio da neutralidade apenas para as populaes AM1 e UN5, ou para as populaes do Unini em conjunto (Tab. 2.3.5). Em ambos os casos, os valores obtidos foram negativos, indicando expanso populacional. Para o teste Fs de Fu, foram detectados desvios de neutralidade significativos nas populaes do alto rio Unini (UN1), rio Pauini (UN5) e no conjunto de populaes do rio Unini (Tab. 2.3.5). Valores negativos de Fs em regies seletivamente neutras geralmente esto associados ao excesso de alelos raros em uma populao, o que pode indicar uma expanso populacional recente (Rogers & Harpending, 1992). No caso da populao de UN1, foram cinco hapltipos exclusivos com um nico exemplar para cada hapltipo.
Fig. 2.3.4 Anlises de distribuio de diferenas do gene citocromo b de Rineloricaria lanceolata das bacias dos lago Aman e do rio Unini.
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Discusso Cada vez mais, os estudos que utilizam uma abordagem molecular para resgatar o histrico de populaes ou espcies vm empregando mais de um marcador (e.g. Piggot et al., 2011; Cooke et al., 2012a, 2012b; Abe et al., 2013). Preferencialmente, so utilizados marcadores com modos de herana distintos (Avise, 2004). No entanto, para atingir os objetivos do presente trabalho seria necessrio trabalhar com um nmero elevado de exemplares e mais de uma espcie. Assim, por questes logsticas e restries financeiras, utilizou-se apenas um marcador molecular em cada espcie. Considerando que os objetivos especficos do presente estudo incluem (1) a comparao de populaes para verificar se os taxa estudados compem, cada um, uma nica espcie ou um complexo com mais de uma espcie; (2) a verificao de padres de diferenciao das linhagens evolutivas; e (3) o teste da conexo das bacias estudadas atravs de suas cabeceiras; os marcadores escolhidos deveriam apresentar uma taxa de evoluo rpida o suficiente para uma abordagem comparativa dentro e entre populaes, mas no to acelerada de modo a impedir uma comparao entre espcies distintas. Assim, para todas as espcies foram escolhidos marcadores do DNA mitocondrial. Segundo Avise (2004), genes mitocondriais apresentam uma taxa de mutao mdia cerca de 10 vezes maior do que genes nucleares, o que significa que apresentam nveis elevados de polimorfismo com potencial para revelar mltiplas linhagens genticas dentro ou entre populaes. Por conta disso, o tempo de coalescncia de linhagens de genes mitocondriais reduzido, o que os tornam mais sensveis a eventos demogrficos (Turcheto-Zolet et al., 2013). Ainda, sua herana exclusivamente materna e a ausncia de recombinao em genes mitocondriais significa que as linhagens desses genes podem ser identificadas de maneira mais direta do que genes nucleares (Freeland, 2005). No entanto, uma das desvantagens do uso de marcadores mitocondriais est justamente relacionada herana uniparental, j que marcadores uniparentais podem no ser representativos de uma populao como um todo (Freeland, 2005).
. Populaes ou espcies Ao analisarmos a filogenia das espcies estudadas, possvel verificar dois padres diferentes. O primeiro, (Figs. 2.2.1 e 2.2.2), observado em Hypoptopomatinae sp., mostra um grupo monofiltico composto por todos os hapltipos, alta similaridade entre as sequncias (>99%) e as populaes do rio Unini, que perfazem quatro das cinco
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populaes utilizadas, formando, cada uma, grupos monofilticos. Os valores de bootstrap dos clados formados pelos tributrios sempre menores do que 78% e a ausncia de um grupo monofiltico para a populao do Aman indicam que o monofiletismo inclusivo, esperado para espcies distintas, ainda no foi atingido, condio necessria para que as populaes pudessem ser consideradas espcies distintas. Complementando a anlise filogentica com as distncias genticas entre as populaes (Tabela 2.2.4), fica evidente que as populaes de Hypoptopomatinae sp. pertencem a uma mesma espcie. O segundo padro, observado em Carnegiella e Rineloricaria, caracterizado por duas linhagens evolutivas monofilticas correspondentes s bacias do lago Aman e do rio Unini, respectivamente (Figs. 2.1.1, 2.1.2, 2.3.1 e 2.3.2). Em ambas as espcies, tanto o clado que sustenta todas as sequncias do presente estudo como os clados de cada drenagem so suportados por altos valores de bootstrap, o que indica, com alto grau de confiabilidade, que as linhagens so evolutivamente distintas e monofilticas inclusivas. Considerando que os clados observados apresentam distribuies geogrficas distintas, a definio do nmero de espcies sendo trabalhadas no depende apenas do nmero de linhagens monofilticas observadas, mas tambm de parmetros estruturais das populaes analisadas (Beheregaray & Caccone, 2007). Segundo Frankham et al. (2008), em espcies aloptricas, ao invs de usar uma distncia gentica arbitrria para resolver incertezas taxonmicas no nvel de espcie, mais razovel estimar a diferenciao gentica entre espcies nominais vlidas congneres e usar aquele valor como um marco emprico para auxiliar decises taxonmicas acerca do txon estudado. Se as distncias genticas entre as espcies nominais vlidas forem similares ou menores do que as observadas entre as linhagens do txon considerado, este ltimo deve ser considerado uma espcie distinta (Frankham et al., 2008). Sendo assim, temos situaes distintas para Carnegiella e Rineloricaria. Os hapltipos de Carnegiella do rio Unini apresentaram uma distncia gentica de cerca de 8,5% em relao s populaes do lago Aman (Tabela 2.1.4), correspondendo a 62 mutaes entre as linhagens (Fig. 2.1.3). Dentro de cada drenagem, as distncias genticas entre as populaes no foram superiores a 0,3%. Schneider et al. (2012), estudando populaes de C. strigata, encontraram duas linhagens distintas separadas por distncias genticas variando entre 10 e 12%, inclusive encontradas em simpatria em uma localidade, indicando fazerem parte de um complexo de espcies. Reforando a ideia, Piggot et al. (2011), trabalhando com exemplares do rio Negro do complexo C.
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marthae, tambm atriburam o status de espcie para cada uma das trs linhagens observadas. Nesse caso, as distncias genticas variaram entre 9 e 15%. Assim como relatado em Schneider et al. (2012) para C. strigata, Pigott et al. (2011) tambm registraram hapltipos de distintas linhagens em simpatria. Piggot et al. (2011) reconheceram, ainda, caractersticas morfolgicas diagnsticas para duas das linhagens como, por exemplo, a diferena no nmero de raios da nadadeira anal. No presente estudo, ao contrrio, o nmero de raios da anal das linhagens do Aman e do Unini no diferiu, variando entre 26 e 29 raios em ambas as populaes. Considerando uma taxa de mutao para o gene ATPase 6/8 de 1,3% por milho de anos (M.a.) (Bermingham et al., 1997), Piggot et al. (2011) calcularam o tempo de divergncia das linhagens entre 7 e 15 milhes de anos. Utilizando essa mesma taxa, estima-se que as duas linhagens encontradas no presente estudo estejam separadas h cerca de 6,6 milhes de anos. Apesar das divergncias genticas entre as linhagens serem um pouco menores entre as linhagens de Carnegiella marthae do presente estudo do que o encontrado tanto por Piggot et al. (2011) e Schneider et al. (2012), e de no terem sido encontrados indivduos das duas linhagens em simpatria, h fortes indicaes de que as duas linhagens sejam pertencentes a espcies distintas. A topologia da rvore dos hapltipos de R. lanceolata tambm apresentou dois clados separados correspondentes s bacias do rio Unini e do lago Aman. As distncias genticas entre as populaes de cada drenagem, porm, foram muito menores do que as encontradas entre os hapltipos de Carnegiella, com um valor mximo de 1,55% de divergncia (Tabela 2.3.4). Os dois clados divergiram em 15 passos mutacionais, mas deve-se considerar que dentro da populao do Aman foi encontrada uma sequncia com oito mutaes de diferena para o hapltipo mais abundante. Silva (2013) cita que populaes identificadas como R. lanceolata oriundas de diferentes bacias hidrogrficas brasileiras apresentaram divergncias de at 8% nas sequncias do gene citocromo C oxidase I (COI), propondo que este grupo represente um complexo de espcies. No mesmo trabalho, algumas espcies nominais vlidas de Rineloricaria apresentaram divergncia de cerca de 1% nas sequncias de COI. Carvalho (2011) encontrou diversas espcies vlidas do loricarideo do grupo Hypostomus ancistroides que apresentaram distncias p menores do que 1,6% entre sequncias do gene ATPase 6/8. Se for considerado simplesmente esse valor de distncia p, as duas linhagens de R. lanceolata deveriam ser aqui tratadas como espcies distintas. Lima (2009) encontrou uma taxa evolutiva de 2,2% por milho de anos para sequncias de citocromo b em populaes de
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Trichomycterus zonatus (Trichomycteridae: Loricarioidea) em rios costeiros do sudeste do Brasil. J Roxo et al. (2012), trabalhando com quatro genes mitocondriais (incluindo citocromo b) e um gene nuclear, sugerem uma taxa evolutiva mdia de 0,8% por milho de anos para espcies de Loricariidae das sub-famlias Neoplecostominae e Hypoptopomatinae. Com base nessas taxas evolutivas, as linhagens de R. lanceolata do Unini e do Aman estariam separadas por um intervalo de tempo entre 0,6 e 1,9 milho de anos. De acordo com Avise et al. (1998) o tempo mdio de especiao para peixes de 1,7 M.a. a 2,3 M.a., portanto as populaes de R. lanceolata estariam nesse limite, mesmo assumindo uma taxa de mutao de 2,2% por milho de anos. No entanto, a falta de populaes representantes do grande espao geogrfico entre as bacias do rio Unini e do rio Solimes, considerando o leito principal dos rios Negro e Solimes (Tabela 1.1), pode estar escondendo populaes intermedirias que talvez possuam fluxo gnico apenas com as populaes adjacentes. Esse processo evolutivo conhecido como modelo de fluxo gnico por stepping-stone (Avise, 2004). Em funo dessas incertezas, embora tambm haja indicaes de que as populaes de R. lanceolata de cada drenagem constituem duas espcies distintas, as mesmas foram aqui tratadas como duas linhagens bem diferenciadas da mesma espcie.
. Estruturao populacional Carnegiella marthae do clado Aman As relaes observadas entre os hapltipos do clado Aman foram concordantes em ambas as anlises filogenticas (Figs. 2.1.1 e 2.1.2) e na rede de hapltipos (Fig. 2.1.3). De acordo com a teoria de coalescncia, hapltipos mais antigos tendem a ser mais frequentes, ter distribuies geogrficas mais amplas e a se apresentar nas partes mais centrais das redes de hapltipos. Em casos de expanso populacional, esses hapltipos acabam formando topologias em forma de estrela, com diversos hapltipos de origem mais recente, conectados a estes por poucos passos mutacionais (Freeland, 2005). Atravs da rede de hapltipos (Fig. 2.1.3), pode-se observar que o hapltipo CM03, encontrado nas duas sub-bacias, pode ser considerado o hapltipo ancestral, pois se encontra separado dos todos os demais hapltipos pelo menor nmero de passos mutacionais entre eles. O valor de Fst de 0,194 (Tabela 2.1.6) entre as populaes de AM1 e AM2, apesar de significativo, sugere ausncia de estruturao entre as duas sub- bacias, o que condizente com os hbitos da espcie, que pode ser encontrada em
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abundncia tanto em ambientes lticos como lnticos, e pela pequena distncia separando as bacias (Tabela 1.1).
Carnegiella marthae do clado Unini As relaes observadas entre os hapltipos do clado Unini foram parcialmente concordantes nas anlises filogenticas (Figs. 2.1.1 e 2.1.2) e na rede de hapltipos (Fig. 2.1.3). Dos quatro grupos obtidos na rede de hapltipos, apenas trs formaram clados monofilticos nas rvores filogenticas. Os clados recuperados em ambas as anlises so formados pelos hapltipos CM07+CM11+CM25 (81,5% de bootstrap), CM15+CM19 (97,8% de bootstrap) e CM24+CM27 (93,3% de bootstrap). O grupo formado pelos hapltipos CM06+CM08+CM17 no formou um clado nas anlises filogenticas. Mais evidente ainda do que em C. marthae do Aman, a rede de hapltipos de C. marthae do Unini em forma de estrela caracterstica de um caso de expanso populacional, com o hapltipo central (CM10) sendo o mais frequente, amplamente distribudo nas sub-bacias, e com diversos hapltipos, provavelmente mais recentes, conectados por uma diferena de apenas uma mutao. Os valores negativos e significativos dos testes de neutralidade de Fs de Fu e D de Tajima para as populaes de todos os tributrios do Unini, tanto separadamente ou em conjunto, reforam o cenrio de expanso populacional. Os valores de Fst entre as populaes do rio Unini (Tabela 2.1.6) no foram significativos, assim como as hipteses de estruturao testadas com a AMOVA (Tabela 2.1.7). De qualquer maneira, h uma indicao de ausncia de estruturao entre as populaes dos diferentes tributrios do rio Unini, o que, como j discutido anteriormente, condiz com os hbitos da espcie, que, exceo dos pequenos igaraps de terra firme, pode ser encontrada em abundncia em todos os corpos dgua de maior porte na bacia do rio Unini, tanto em ambientes lticos como lnticos, e, provavelmente possui uma distribuio contnua entre os tributrios, ao longo do leito do rio Unini.
Hypoptopomatinae sp. As relaes observadas entre os hapltipos foram parcialmente concordantes nas anlises filogenticas (Figs. 2.2.1 e 2.2.2) e na rede de hapltipos (Fig. 2.2.3). Dois agrupamentos principais foram recuperados em todas as anlises: o primeiro contendo os clados do Aman, rio Preto (UN2) e rio Pauini (UN5) e o segundo com os hapltipos do Ig. Solimezinho (UN4) e do rio Arara (UN3). No entanto, dos cinco grupos
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formados na rede de hapltipos, apenas quatro formaram clados monofilticos nas rvores filogenticas. Os clados recuperados em ambas as anlises so formados pelos hapltipos de Hypoptopomatinae sp. das quatro sub-bacias do rio Unini representadas nessas anlises (UN2, UN3, UN4 e UN5). A anlise de Neighbour-joining recuperou maiores valores de bootstrap para esses grupos do que a anlise de mxima verossimilhana. O menor valor foi 80% (Fig. 2.2.2) versus 65,4% na anlise de mxima verossimilhana (Fig. 2.2.3), obtidos para o clado formado pelos hapltipos do rio Arara. Para os hapltipos HY01 e HY02, do Aman, a anlise de Neighbour-joining recuperou um agrupamento com valor de bootstrap de 66%, mas esse clado no foi recuperado na anlise de mxima verossimilhana. De qualquer maneira, ambas as rvores filogenticas indicam uma proximidade maior dos hapltipos do Aman com os hapltipos do rio Preto (UN2), a sub-bacia mais prxima ao Aman, considerando a ligao pelas cabeceiras das drenagens. Vale ressaltar que a menor distncia gentica entre todas as populaes de Hypoptopomatinae sp. amostradas ocorreu entre essas duas sub-bacias (Tabela 2.2.4). Pela rede de hapltipos, a populao do Aman ocupa uma posio central (Fig. 2.2.3), estando separada por cinco passos mutacionais tanto da populao do rio Preto (UN2) como do rio Pauini (UN5), e a seis passos da populao do Ig. Solimezinho (UN4) e dos hapltipos do rio Arara (UN3). De certa forma, observada uma topologia de estrela em relao s demais com o hapltipo HY03 sendo possivelmente o ancestral. Na anlise de mxima verossimilhana, este hapltipo grupo irmo de todos os demais, o que refora seu carter basal. Foram obtidos valores significativos de Fst na comparao par a par entre todas as populaes amostradas (Tabela 2.2.6), com valores variando entre 0,799 e 0,919. Mesmo levando em considerao que para a interpretao do valor do Fst entre populaes deve-se levar em considerao outros ndices, como a diversidade gnica (Meirmans & Hendrik, 2011), normalmente valores de Fst acima de 0,25 so considerados como uma divergncia muito grande entre populaes (Hartl, 2008). A anlise da estruturao a partir do Fst das populaes de Hypoptpomatinae indicou fortes restries de fluxo gnico entre todas as sub-bacias (Tab. 2.2.6). Os testes de neutralidade apresentaram apenas um caso com valor significativo, para Fs de Fu da populao do rio Pauini (UN5). Este teste, contudo, muito sensvel e pode estar mostrando um falso positivo, visto que o n amostral muito baixo. Para as outras populaes no foram observados sinais de desvios significantes configurando uma expanso populacional ou gargalo. Os testes realizados atravs da AMOVA s
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obtiveram valores significativos para a variao dentro de cada populao ou entre as populaes individualmente (Tabela 2.2.7). Nenhum agrupamento testado apresentou valor significativo, o que pode sugerir que o isolamento entre as populaes ocorreu simultaneamente para todos os grupos. Levando isso em considerao, em um cenrio biogeogrfico, pode-se aventar duas hipteses plausveis. Na primeira, possvel que indivduos tenham migrado para a bacia do rio Unini a partir do Aman, atravs de suas cabeceiras, colonizando os tributrios do rio Unini em uma ocasio, mantendo, hoje, um isolamento de todas as populaes. Esse isolamento, porm, no deve ser muito antigo, j que as populaes ainda no atingiram o monofiletismo recproco. Pode-se considerar tambm uma hiptese alternativa, onde teria havido um fluxo contnuo de migrantes atravs no s das cabeceiras compartilhadas entre Aman e Unini, mas tambm atravs do rio Piorini, cujas cabeceiras esto entre as cabeceiras do Aman, rio Preto e rio Pauini. Essa hiptese explicaria a maior similaridade entre as populaes dos rios Preto e Pauini (UN2 e UN5) (Figs. 2.2.1, 2.2.2 e 2.2.3 e Tabela 2.2.4), separadas por uma grande distncia fluvial pelo leito principal do rio Unini (Tabela 1.1). Como Hypoptopomatinae sp. encontrado exclusivamente em ambientes lticos de igaraps de mdio porte ou de terra firme, o fluxo de indivduos pelos corpos dgua de pequeno porte da cabeceiras uma hiptese plausvel.
Rineloricaria lanceolata As relaes observadas entre os hapltipos foram concordantes em ambas as anlises filogenticas (Figs. 2.3.1 e 2.3.2) e na rede de hapltipos (Fig. 2.3.3). Os dois agrupamentos principais, consistindo das populaes do Unini e da populao do Aman, foram recuperados em todas as anlises. Dentro da populao do Aman, o hapltipo RL05 foi o mais distante do hapltipo RL04, o mais abundante entre eles. A divergncia dessas duas sequncias em oito passos mutacionais (metade das diferenas que separam a populao da bacia do Aman das populaes do Unini) pode, inclusive, indicar contato secundrio entre a populao da bacia do Aman e outra populao no amostrada, situao indicada na anlise de distribuio de diferenas como uma distribuio bimodal (Rogers & Harpending, 1992). Entre os hapltipos da bacia do Unini, as relaes filogenticas no ficaram evidentes, com apenas um grupo monofiltico sendo recuperado na anlise de mxima verossimilhana. Este clado engloba os hapltipos RL01, RL03, RL10 e RL13, sendo RL01 o mais abundante e o
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mais bem distribudo, ocorrendo em todas as sub-bacias do rio Unini. Este grupo consiste dos hapltipos do rio Unini situados na poro inferior da rede de hapltipos (Fig. 2.3.3). Os valores de bootstrap para esse clado, contudo, foram de apenas 59,3%. Na anlise de Neighbour-joining, o hapltipo RL03 formou um grupo irmo de um clado englobando todos os outros hapltipos do Unini, cujo valor de bootstrap foi de apenas 54%. Apesar de haver um agrupamento formado na rede de hapltipos de hapltipos do rio Unini separados por apenas um passo mutacional (ou dois passos no caso de RL02 e RL12), nenhum outro agrupamento foi recuperado nas rvores filogenticas. Observando os agrupamentos da rede de hapltipos e os valores de distncia p (Tabela 2.3.4) e Fst (Tabela 2.3.6), nenhum padro geogrfico fica evidente. H, porm, trs populaes (UN1, UN3 e UN4) que formam um ncleo ao longo do canal do rio Unini (Fig. 6a) e que possuem distncias genticas bem pequenas e valores de Fst no significativos. Isso indicaria que h fluxo gnico entre essas populaes (Hartl, 2008). No entanto, as populaes do rio Preto (UN2) e rio Pauini, tambm no apresentaram Fst significativo. Alm disso, so as populaes que apresentam a menor distncia gentica (Tab. 2.3.4). Como as bacias de UN4 e UN3 situam-se, ao longo do leito principal do Unini, entre UN2 e UN5, mais parcimonioso considerar que essa relao estreita entre o rio Preto (UN2) e rio Pauini (UN5) seja fruto de um vis amostral do que considerar que h fluxo gnico entre essas populaes, mas no entre elas e as respectivas sub-bacias adjacentes. Esse agrupamento foi testado com uma AMOVA, mas a variao entre os dois grupos no foi significativa (Tabela 2.3.7). Dentro da bacia do Unini, foram encontrados valores de Fst significativos na comparao de algumas sub-bacias, mas a distncia entre elas no foi necessariamente o fator indicativo da estruturao. Pode-se sugerir, contudo, que o fluxo gnico entre as populaes de R. lanceolata reduzido. O fato dos testes realizados atravs da AMOVA no terem obtido resultados significativos na comparao entre a bacia do Aman e o conjunto de populaes da bacia do rio Unini pode estar relacionado grande distncia gnica entre as populaes das duas drenagens. Essas distncias gnicas de cerca de 1,5% e os valores elevados e significativos de Fst entre as populaes do Unini e do Aman indicam a ausncia de fluxo gnico. A no rejeio da hiptese de expanso populacional, associada aos valores negativos significativos dos testes de neutralidade (Tabela 2.3.5), indicativa de que a populao do Unini est sofrendo expanso. A topologia em estrela da rede de hapltipos com
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RL02, o mais abundante e amplamente distribudo, no centro sugere que esta expanso tenha ocorrido a partir desse hapltipo.
Comparao dos padres de distribuio dos hapltipos luz dos cenrios de conexo hidrolgica e capacidade de disperso das espcie. Os padres distintos na distribuio dos hapltipos e relao das populaes entre as bacias do rio Unini e lago Aman podem trazer indicaes conflitantes. Por um lado, os dados de Carnegiella marthae e Rineloricaria lanceolata indicam no haver conexo entre as populaes de cada bacia. Ao contrrio, os resultados discutidos para as populaes de Hypoptopomatinae sp. indicam uma relao estreita entre a populao do igarap do Bar (AM1), no Aman, e duas populaes do Unini (UN2 e UN5), mas com ausncia atual de fluxo gnico entre todas as populaes (Tabela 2.2.6). Apesar de poder haver variao na histria das populaes estudadas, os eventos que constituem o histrico geogrfico da rea sugerem uma trajetria comum partilhada pelas populaes que habitam a regio, mas que pode ter tido influncias distintas nas espcies, dependendo das caractersticas da biologia e ecologia de cada uma. A relao entre as populaes do Aman e Unini observadas em Hypoptopomatinae sp. (Figs. 2.2.1, 2.2.2 e 2.2.3) so um claro indicador da conexo hidrolgica dessas bacias seja por (1) j terem apresentado uma ligao pelas reas alagveis nas cabeceiras ou (2) pela ocorrncia de mudana na direo do fluxo de alguns igaraps em suas cabeceiras, um fenmeno geolgico conhecido por captura fluvial (MacNight & Hess, 2005). Os resultados de Hypoptopomatinae sp. apontam para os cenrios 2 e 3 em relao aos possveis eventos histrico-geogrficos apontados nos objetivos. A forte estruturao evidenciada pelos valores de Fst entre todas as populaes, independente da bacia hidrogrfica, indica que a espcie possui uma baixa capacidade de disperso, conforme previsto observando-se caractersticas de sua biologia e ecologia como, cuidado parental, tamanho corporal reduzido, territorialidade, ovos adesivos, boca em forma de ventosa mesmo em larvas recm-eclodidas etc. Edelaar & Bolnick (2012) ressaltam a importncia da disperso passiva para o fluxo gnico e para a colonizao de novos ambientes e o estabelecimento de novas populaes. Apesar do pequeno tamanho, Hypoptopomatinae sp. possui caractersticas que, ao contrrio, facilitam a permanncia dos indivduos nos locais onde foram concebidos.
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J a ausncia de estruturao entre as populaes de Carnegiella marthae da bacia do rio Unini, indica que essa espcie possui uma alta capacidade de disperso em relao a Hypoptopomatinae sp.. Rineloricaria lanceolata tambm compartilha boa parte das caractersticas mencionadas acima, mas suas populaes dentro do rio Unini no apresentaram o mesmo padro de estruturao de Hypoptopomatinae sp. H, contudo, diferenas evidentes entre as histrias de vida das duas espcies, sobretudo no que diz respeito ao tamanho mximo corporal at quatro vezes maior em R. lanceolata e no meso-habitat preferencial de cada espcie. Winemiller (1989) destacou que o tamanho corporal foi umas das caractersticas mais importantes na determinao dos agrupamentos de cada tipo de estratgia de vida (sazonal, oportunista e equilbrio). J em relao ao habitat, enquanto R. lanceolata ocorre em corpos dgua de mdio e grande porte, incluindo os rios principais nas duas bacias, Hypoptopomatinae sp. encontrada em igaraps de mdio porte ou em pequenos igaraps de terra firme. Os rios principais so as vias que ligam as sub-bacias dos tributrios do Unini, e a ocorrncia de R. lanceolata nesse ambiente pode justificar a ausncia de estruturao entre suas populaes. Com a mesma linha de raciocnio, possvel compreender o porqu da relao entre as populaes de Hypoptopomatinae sp. de cada bacia quando, ao mesmo tempo, as populaes de R. lanceolata e Carnegiella constituem a linhagens evolutivas distintas. Dentre essas trs espcies, apenas Hypoptopomatinae sp. encontrada em corpos dagua de pequeno porte, e possvel que a conexo hidrolgica entre essas bacias tenha ocorrido justamente atravs desses igaraps, seja por captura de drenagem, seja por conexes sazonais ou episdicas durante grandes cheias. Apesar de C. marthae e R. lanceolata apresentarem uma capacidade de disperso maior em relao a Hypoptopomatinae sp., as duas primeiras espcies no dispersaram entre as duas bacias, pois no colonizam os ambientes que promovem ou promoveram a conexo entre elas. As reas de cabeceira so, portanto, uma barreira para a disperso dessas espcies. Ao contrrio, como Hypoptopomatinae sp. so encontrados exclusivamente em corpos dgua de mdio e pequeno porte, os rios maiores parecem constituir uma barreira para sua disperso, promovendo o isolamento e a divergncia de suas populaes por deriva gnica.
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Captulo 3
Variaes populacionais na morfologia de cinco espcies de peixes amaznicos de pequeno porte
Introduo A diversificao entre populaes e subsequentes processos de especiao so frequentemente produzidos e mantidos por regimes de seleo divergente (e.g., Langerhans et al., 2003) que se expressam na forma de plasticidade fenotpica (Pfennig & McGee 2010) alm da fixao diferencial de alelos nas populaes por conta das presses seletivas (Langerhans et al., 2004). As consequncias de presses ambientais sobre a variao da frequncia allica em populaes, ou seja, o modo como a seleo molda o pool gnico dentro de uma populao, receberam muita ateno nas pesquisas de biologia evolutiva desde a criao dos conceitos de adaptao. Da mesma forma, o papel do pool gnico na gerao e manuteno da biodiversidade foi objeto central de numerosos estudos que embasaram a sntese moderna de biologia evolutiva (West-Eberhard, 2003). Apesar das espcies poderem ser consideradas como o produto final de um processo de seleo natural, j que elas correspondem ao ambiente em que habitam (Puebla, 2009), uma ampla variao fenotpica tem sido encontrada entre e dentro de populaes de diversos txons, e.g. plantas (Clausen et al., 1948), lagartos (Losos et al., 2006), peixes (Domingues et al., 2007), mamferos (Kageyama et al., 2009) e aves (Tomassen et al., 2010). As alteraes fenotpicas podem, portanto, ser fruto da seleo natural ficando restritas pela quantidade e distribuio de variaes genticas expressas no fentipo (Pavlicev et al., 2009). Reforando a ideia, a seleo natural o processo natural que leva reproduo diferencial de indivduos ou gentipos distintos em uma populao (Li, 1997) e seus efeitos podem ser a manuteno ou alterao da frequncia de genes dentro de uma populao (Freeland, 2005). Entretanto, a seleo natural age, de fato, dentro
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das manifestaes perceptveis do gentipo, ou seja, seu fentipo (Dawkins, 2004). Ademais, a hiptese de especiao ecolgica ou evoluo de populaes, que foi primeiramente elaborada atravs da teoria da seleo natural (Darwin, 1859) e posteriormente refinada por outros bilogos evolucionistas (e.g., Dobzhansky, 1937; Mayr, 1942; Simpson, 1953) envolve mais do que uma correlao entre o fentipo e o ambiente (Puebla, 2009). Ela especificamente relacionada a trs componentes fundamentais: (1) uma fonte de seleo natural disruptiva, ou divergente, resultante de processos ecolgicos; (2) um mecanismo que promova o isolamento reprodutivo; e (3) uma ligao gentica entre os dois (Rundle & Nosil, 2005).
Plasticidade fenotpica Os organismos, de uma forma geral, vivem boa parte de sua vida em ambientes variveis, portanto devem ser capazes de manifestar respostas adequadas aos distintos estmulos ambientais que recebem (Windig et al., 2004). Sejam essas manifestaes morfolgicas, fisiolgicas ou comportamentais, todas constituem expresses do gentipo individual de cada organismo, ou seja, seu fentipo. A essa capacidade de um determinado gentipo produzir diferentes fentipos em resposta a condies ambientais que variam dado o nome de plasticidade fenotpica (Pigliucci, 2001). Tais efeitos ambientais na expresso de traos podem variar de pequenos ajustes na taxa de crescimento em resposta a determinados nveis de recursos at a mudanas polifnicas dramticas, atravs das quais um nico gentipo pode produzir fentipos radicalmente alternativos (Moczek et al., 2011). Apesar dessa definio relativamente simples, o conceito de plasticidade apresenta desdobramentos complexos, o que s vezes causa um entendimento diferente de seus aspectos, especialmente em matrias relativas biologia evolutiva (Schlichting & Smith, 2002). Windig et al. (2004) destacam dois tipos de processos envolvidos na plasticidade, nos quais o aspecto em comum a influncia do ambiente na formao do fentipo. No primeiro processo, conhecido por modulao fenotpica, o ambiente influencia diretamente o fentipo sem envolvimento ativo do organismo. Ou seja, o ambiente simplesmente fora o fentipo atravs de propriedades fsicas (Smith-Gill, 1983). J no segundo processo, o mais utilizado quando nos referimos ao termo plasticidade fenotpica (e.g. Weeks, 1993; DeWitt & Scheiner, 2004), o organismo ativamente envolvido na produo do fentipo (Smith-Gill, 1983), e etapas como a recepo do sinal ambiental, a ativao do gene e, por ltimo, a produo do fentipo em si, so
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fundamentais para o desencadeamento da resposta do organismo (West-Eberhard, 2003; DeWitt & Scheiner, 2004; Windig et al., 2004). Dessa forma, a plasticidade fenotpica uma caracterstica de um gentipo individual, onde a extenso e a magnitude da plasticidade dos seus traos determinada pelo gentipo em particular (Schlichting & Smith, 2002). Ao contrrio, a variabilidade gentica pode ser detectada apenas entre mais de um gentipo (normalmente um conjunto ou mais de indivduos) e, por essa razo, um aspecto caracterstico de uma populao. A variao nas respostas plsticas de gentipos especficos estar sujeita a seleo individual. J a manuteno da variabilidade gentica em uma populao como uma adaptao para o sucesso da mesma estar sujeita seleo de grupo (Schlichting, 2004). Entretanto, preciso compreender que, apesar da variabilidade gentica em uma populao poder ser mantida tambm atravs da seleo dependente de frequncia, ela, na realidade, o resultado de uma seleo baseada no indivduo ou de deriva gnica. Ou seja, a variabilidade mantida por conta do valor adaptativo dos gentipos individuais e no em benefcio da populao (Schlichting & Smith, 2002).
Benefcios e limites da plasticidade fenotpica Os benefcios da plasticidade so amplamente compreendidos e relatados em trabalhos cientficos tanto tericos como empricos (e.g. DeWitt et al., 1998; Kingsolver et al., 2002; Langerhans et al., 2003; Webster et al., 2011). Atravs da plasticidade, um indivduo possui a capacidade de produzir uma melhor correspondncia fentipo- ambiente em um maior nmero de ambientes do que seria possvel produzindo apenas um fentipo para todos eles (DeWitt et al., 1998). A direo e a extenso da resposta plstica so componentes primrios do organismo e, portanto, esto sujeitas a forte seleo natural. Segundo Schlichting & Smith (2002), a razo de existir da plasticidade , claramente, a adaptao a condies ambientais variveis. Portanto, espera-se que um gentipo perfeitamente plstico, isto , aquele que consegue converter imediatamente ao fentipo timo quando as condies mudam, seja favorecido a se desenvolver sempre que as condies ambientais forem heterogneas (Schlichting & Smith, 2002). De fato, isso seria o esperado caso no existissem restries para que organismos desenvolvessem uma plasticidade perfeita ou infinita, produzindo um fentipo timo para qualquer ambiente sem nenhum custo por ter essa capacidade (DeWitt et al., 1998). Limitaes e custos, no entanto, existem e devem ser considerados para a
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compreenso de quando e onde gentipos plsticos ou especializados sero favorecidos pela seleo. Diversas situaes, no entanto, acabam favorecendo o desenvolvimento da plasticidade em detrimento da especializao (Tabela 3.0.1).
Tabela 3.0.1. Situaes que selecionam organismos plsticos (plasticidade) ou especializados (respostas fixas) (adaptado de Kingsolver et al., 2002 e Schlichting & Smith, 2002). Plasticidade Respostas fixas (1) a mudana ambiental frequente. (1) a mudana ambiental rara. (2) os sinais ambientais so confiveis. (2) faltam sinais ambientais confiveis. (3) a variao ambiental finamente granulada, tanto temporalmente ou espacialmente. (3) a variao ambiental flutua mais rapidamente do que o tempo de resposta do organismo. (4) a variao ambiental temporalmente grosseiramente granulada com dicas previsveis (polifenismo). (4) um nico fentipo timo em ambientes diferentes. (5) a variao ambiental temporalmente finamente granulada em uma sequncia previsvel (heteroblastia). (5) o ambiente espacialmente grosseiramente granulado e o organismo pode escolher um habitat. (6) migrao entre populaes (6) ausncia de migrao entre populaes
Os fatores de (1) a (5) descritos na Tabela 1, acima, so relacionados heterogeneidade ambiental experimentada por um organismo, tanto em uma escala espacial como temporal, e previsibilidade dos sinais do ambiente que favoreceriam organismos plsticos. O fator (6), relacionado ao fluxo tanto de indivduos como de genes entre populaes de uma espcie, pode parecer de natureza diferente; entretanto, na prtica, esse fluxo faz com que os organismos experimentem situaes ambientais distintas, ou seja, heterogeneidade, o que novamente favorece organismos plsticos. importante levar em considerao que os efeitos das variaes tanto temporais como espaciais sobre um organismo dependero do porte e do tamanho do ciclo de vida deste. Exemplificando, um mosaico de ambientes finamente granulados para um organismo de pequeno porte pode ser considerado um ambiente homogneo para um de grande porte, ou, ento, um mosaico de ambientes grosseiramente granulados para um organismo de pequeno porte pode ser sentido como um ambiente finamente granulado para um de grande porte.
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Plasticidade fenotpica em peixes amaznicos Peixes de gua doce so modelos adequados para estudar diferenas no tamanho e formato do corpo por conta de sua capacidade de rapidamente modificarem traos para melhor se adaptar s condies e presses ambientais oriundas de interaes biticas (Langerhans et al., 2003; Langerhans et al., 2004; Sidlauskas et al., 2006; Burns et al., 2009; Wagner et al., 2009; van Rijssel & Witte, 2012). Variaes morfolgicas intraespecficas em peixes de gua doce foram associadas com diversos aspectos ecolgicos, tais como capacidade ou comportamento de forrageamento (Svanback & Eklv, 2004), capacidade de digesto (Wagner et al., 2009), presso de predao (Langerhans & DeWitt, 2004; Hendry et al., 2006), caractersticas ambientais e composio da comunidade (Gomes-Jr. & Monteiro, 2008; Webster et al., 2011), correnteza e fluxo dgua (Langerhans et al., 2003; Sidlauskas et al., 2006; Langerhans, 2008), temperatura (Sidlauskas et al., 2006), interferncia antropognica (van Rijssel & Witte, 2012), condies de rio aberto ou cavernas (Secutti et al., 2011), e mudanas nas concentraes de oxignio dissolvido (Scarabotti et al., 2009). Alm dos estmulos ambientais, caracteres relacionados ao desenvolvimento, tais como dimorfismo sexual (Cox-Fernandes, 1998; Kitano et al., 2007) e alometria ontogentica (Sidlauskas et al., 2006; Garca-Alzate et al., 2010) tambm podem afetar a variao morfolgica em populaes. Apesar de um grande nmero de estudos ter documentado a variao morfolgica devido a causas ambientais em diversas espcies de peixes, poucos foram aqueles que investigaram espcies neotropicais, e.g. Cichlasoma minckleyi (Trapani, 2003), Bryconops caudomaculatus e Biotodoma wawrini (Langerhans et al., 2003), Poecilia vivipara (Neves & Monteiro, 2003; Monteiro & Gomes-Jr., 2005; Gomes-Jr. & Monteiro, 2008), Poecilia reticulata (Langerhans & DeWitt, 2004; Hendry et al., 2006, Burns et al., 2009), Bryconops sp. cf. melanurus (Sidlauskas et al., 2006), Hyphessobrycon gr. heterorhabdus (Garca-Alzate et al., 2010), e Aspidoras albater (Secutti et al., 2011). Ainda mais raros so os trabalhos que estudaram a variao morfolgica em relao ao tamanho e formato do corpo em populaes de peixes amaznicos (e.g., Cox-Fernandes, 1998). O pulso de inundao faz com que corpos dgua amaznicos apresentem uma grande variabilidade sazonal, com mudanas radicais na estrutura do habitat e, s vezes, na composio fsico-qumica da gua. Dessa forma, as presses de seleo so bastante distintas ao longo do ano. O ambiente heterogneo, a grande extenso da rea e a
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possibilidade de fluxo de indivduos entre populaes isoladas, aliados razovel previsibilidade das mudanas sazonais, favorecem a ampliao de respostas plsticas das espcies s mudanas ambientais (Schlichting & Smith, 2002). A presente tese investiga os padres de variao morfolgica relativas forma e tamanho corporal de indivduos e populaes de cinco espcies de peixes de pequeno porte, procurando explicar a natureza das divergncias observadas. Alm disso, so discutidas as relaes entre as diferenas morfolgicas observadas com fatores ambientais e fatores intrnsecos de cada espcie ou grupo taxonmico luz dos conceitos de biologia evolutiva apresentados acima.
Objetivo geral O objetivo principal deste captulo foi verificar a existncia de variao morfolgica entre e dentro de populaes de cinco espcies de peixes amaznicos de pequeno porte nas bacias do lago Aman e do rio Unini, duas drenagens contguas com possvel conexo hidrolgica atual e/ou histrica, discutindo a influncia de processos histricos ou intrnsecos a cada espcie relacionados aos padres observados.
Objetivos especficos 1) Verificar se h variao no formato associado ao tamanho corporal e/ou ao dimorfismo sexual nas espcies Carnegiella marthae, Hemigrammus coeruleus, Nannostomus trifasciatus, Hypoptopomatinae sp. e Rineloricaria lanceolata. 2) Relacionar as possveis diferenas morfolgicas na forma do corpo de populaes das espcies C. marthae, H. coeruleus, N. trifasciatus, R. lanceolata e Hypoptopomatinae gen.sp.nov com aspectos da sua ecologia e biologia associando os grupos formados a caractersticas ambientais ou geogrficas. 3) Verificar se h padres comuns nos grupos de variao formados pelas anlises morfomtricas entre as espcies estudadas e se esses so mais relacionados com fatores atuais (ecolgicos) ou histricos (genticos).
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Cenrios e hipteses De maneira simplificada, para se entender as diferenas ou similaridades morfolgicas entre as populaes, possvel imaginar alguns cenrios ambientais ou de estruturao gentica que vo desde a homogeneidade total do ambiente e ausncia de estruturao em todas as populaes at a ambientes diferentes e estruturao entre todas as populaes. Para cada cenrio possvel, pode-se esperar encontrar alguns resultados em particular. Abaixo, esto listados esses cenrios, acompanhados de uma explicao e uma sntese (Tabela 3.0.2) para cada situao.
Ambiente: 1. ambiente homogneo em toda regio; 2. ambiente diferente entre Aman e Unini, mas homogneo dentro de cada bacia; 3. ambientes diferentes em cada localidade (dentro e entre bacias).
Estruturao gentica: A. ausncia total de estruturao gentica; B. estruturao entre as populaes do Aman e do Unini, mas ausncia de estruturao dentro de cada bacia; C. todas as populaes geneticamente estruturadas (dentro e entre bacias).
1A. ambiente homogneo em toda regio + ausncia total de estruturao gentica. No so esperadas diferenas morfolgicas entre populaes. Possveis variaes morfolgicas observadas provavelmente refletem diferenas individuais (no populacionais) causadas, sobretudo, por idiossincrasias no desenvolvimento ou na histria de vida de cada indivduo. 1B. ambiente homogneo em toda regio + estruturao entre as populaes do Aman e do Unini, mas ausncia de estruturao dentro de cada bacia. Pode-se esperar encontrar diferenas na morfologia entre as populaes do Aman e do Unini ou ausncia de diferenas por conta de ausncia de plasticidade nas caractersticas morfolgicas avaliadas. Dentro de cada bacia, as possveis variaes morfolgicas observadas provavelmente refletiro diferenas individuais (no populacionais) causadas, sobretudo, por idiossincrasias no desenvolvimento ou na histria de vida de cada indivduo.
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1C. ambientes homogneos em toda regio + todas as populaes geneticamente estruturadas. Pode-se esperar tanto divergncia morfolgica entre todas as populaes (indivduos de cada populao sejam morfologicamente mais assemelhados entre si do que com os indivduos de outras populaes) ou convergncia na morfologia entre todas as populaes causada por ausncia de plasticidade nas caractersticas morfolgicas avaliadas. 2A. ambiente diferente entre Aman e Unini, mas homogneo dentro de cada bacia + ausncia total de estruturao gentica. Pode-se esperar encontrar tanto ausncia de diferenas morfolgicas entre populaes ou diferenas na morfologia entre as populaes do Aman e do Unini. Dentro de cada bacia, as possveis variaes morfolgicas observadas provavelmente refletiro diferenas individuais (no populacionais) causadas, sobretudo por idiossincrasias no desenvolvimento ou na histria de vida de cada indivduo. 2B. ambiente diferente entre Aman e Unini, mas homogneo dentro de cada bacia + estruturao entre as populaes do Aman e do Unini, mas ausncia de estruturao dentro de cada bacia. esperado encontrar diferenas na morfologia entre as populaes do Aman e do Unini. Dentro de cada bacia, as possveis variaes morfolgicas observadas provavelmente refletiro diferenas individuais (no populacionais) causadas, sobretudo por rudo no desenvolvimento. Possveis convergncias na morfologia entre Aman e Unini provavelmente so causadas por ausncia de correlao da morfologia com os genes fixados diferenciadamente em cada populao e ausncia de plasticidade nas caractersticas morfolgicas avaliadas. 2C. ambiente diferente entre Aman e Unini, mas homogneo dentro de cada bacia + todas as populaes geneticamente estruturadas. Pode-se esperar encontrar divergncia morfolgica entre todas as populaes (indivduos de cada populao sejam morfologicamente mais assemelhados entre si do que com os indivduos de outras populaes) ou diferenas na morfologia entre as populaes do Aman e do Unini. Possveis convergncias na morfologia entre Aman e Unini podem ser causadas por ausncia de correlao da morfologia com os genes fixados diferenciadamente em cada populao e ausncia de plasticidade nas caractersticas morfolgicas avaliadas. 3A. ambientes diferentes em cada localidade + ausncia total de estruturao gentica. Pode-se esperar tanto divergncia morfolgica entre todas as populaes (indivduos de cada populao sejam morfologicamente mais assemelhados entre si do que com os indivduos de outras populaes) ou convergncia na morfologia entre todas
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as populaes causadas por resposta plstica ao mesmo estmulo ambiental. A possvel observao de semelhanas entre populaes especficas deve significar que apenas alguns gentipos em particular apresentam a mesma resposta ao estmulo ambiental. 3B. ambientes diferentes em cada localidade + estruturao entre as populaes do Aman e do Unini, mas ausncia de estruturao dentro de cada bacia. Pode-se esperar tanto divergncia morfolgica entre todas as populaes (indivduos de cada populao sejam morfologicamente mais assemelhados entre si do que com os indivduos de outras populaes) ou uma convergncia na morfologia apenas entre as populaes dentro de cada bacia. Possveis convergncias na morfologia entre Aman e Unini podem ser causadas por ausncia de correlao da morfologia com os genes fixados diferenciadamente em cada populao e ausncia de plasticidade nas caractersticas morfolgicas avaliadas. 3C. ambientes diferentes em cada localidade + todas as populaes geneticamente estruturadas. esperado que indivduos de cada populao sejam morfologicamente mais assemelhados entre si do que com os indivduos de outras populaes. Possveis convergncias na morfologia podem ser causadas por ausncia de plasticidade nas caractersticas morfolgicas avaliadas.
Tabela 3.0.2. Resultados esperados para variao morfolgica em populaes de peixes da bacia do rio Unini e lago Aman, de acordo com cada situao de ambiente e estruturao gentica. Cenrios A. Ausncia de estruturao gentica entre todas as populaes B. Estruturao entre as populaes do Unini e do Aman, mas ausncia de estruturao dentro de cada bacia C. Todas as populaes geneticamente estruturadas 1. Ambiente homogneo em toda regio 1A. Ausncia de diferena entre as populaes. 1B. Aman = Aman Unini = Unini; ou ausncia de diferena entre as populaes. 1C. Todas as populaes diferentes; ou ausncia de diferena entre as populaes. 2. Ambiente diferente entre Aman e Unini, mas homogneo dentro de cada bacia 2A. Ausncia de diferenas entre as populaes; ou Aman = Aman Unini = Unini. 2B. Aman = Aman Unini = Unini 2C. Todas as populaes diferentes; ou Aman = Aman Unini = Unini. 3. Ambientes diferentes em cada localidade 3A. Ausncia de diferena entre as populaes; ou todas as populaes diferentes. 3B. Todas populaes diferentes; ou Aman = Aman Unini = Unini 3C. Todas as populaes diferentes.
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Material e mtodos Os peixes utilizados nas anlises morfolgicas foram fixados em formol 10% no campo, imediatamente aps a coleta, e, posteriormente, transferidos para lcool 70% em laboratrio. Mtodos de morfometria geomtrica foram utilizados para estimar a variao morfolgica e determinar a presena de dimorfismo sexual em cincos espcies de peixes (trs Characiformes, Carnegiella marthae, Hemigrammus coeruleus e Nannostomus trifasciatus; e dois Siluriformes, Rineloricaria lanceolata e Hypoptopomatinae sp.). O nmero total de exemplares utilizados nas anlises para cada espcie encontra-se na Tabela 3.0.3. Os peixes foram colocados sobre uma folha de papel milimetrado e o lado esquerdo de cada um foi fotografado usando uma cmera digital GE X5 ou Sony HX200 no modo close-up. As coordenadas foram obtidas atravs da digitalizao de marcos anatmicos usando o software TpsDig (Rohlf, 2004a) para se obter o formato de cada exemplar. Marcos anatmicos foram estabelecidos com base em estudos prvios com peixes neotropicais (Langerhans & DeWitt, 2004; Gomes-Jr & Monteiro, 2008; Garca-Alzate et al., 2010) e variaram para cada espcie (Figs. 3.1.1, 3.2.1, 3.3.1, 3.4.1 e 3.5.1). Uma vez que observado que a forma do corpo e da cabea mudam durante o crescimento dos peixes (Garcia-Alzate et al., 2010), houve uma preocupao com a maneira de avaliar a divergncia fenotpica entre as populaes que apresentaram diferenas significativas no tamanho corporal. O tamanho do centroide (raiz quadrada da soma das distncias ao quadrado entre cada marco anatmico e a configurao centroide, a qual corresponde a uma mdia de todos os marcos) foi utilizado como a medida do tamanho do indivduo em todas as anlises. As configuraes dos marcos anatmicos foram superpostas pelo ajuste de Procrustes (Rohlf & Slice, 1990) usando o programa MorphoJ verso 1.04a (Sun Microsystems Inc.) para se obter o formato de cada exemplar. Esse mtodo consegue remover o efeito do tamanho colocando o centroide dos espcimes na origem do eixo cartesiano (0,0). A superposio de Procrustes tambm ajusta o tamanho do centroide para um (1,0) e gira a configurao at que a soma dos quadrados da distncia entre os marcos anatmicos correspondentes seja a menor possvel permitida para a estimativa de uma mdia no formato (Bookstein, 1991; Monteiro & Reis, 1999), eliminando, assim, o efeito de rotao da imagem. A variao morfolgica entre os sexos foi avaliada comparando-se as coordenadas de Procrustes de exemplares machos e fmeas (identificados posteriormente por disseco) atravs de uma anlise de componentes principais (PCA). O nmero de exemplares
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dissecados est apresentado na tabela 1. Testes t de Student foram realizados usando os escores dos quatro primeiros eixos de componentes principais e do tamanho do centroide para se verificar diferenas no formato e tamanho do corpo em funo do sexo dos exemplares. Para analisar a divergncia morfolgica entre as sub-bacias do rio Unini e lago Aman, foram utilizados exemplares adultos para cada sub-bacia. Procurou-se utilizar um nmero entre 20 e 30 exemplares por sub-bacia, contudo, em alguns casos, em funo de deformaes por conta da fixao ou pouca abundncia de exemplares adultos, o nmero de exemplares foi inferior. Para cada espcie, o nmero de exemplares apresentado na Tabela 3.0.3. Diferenas em tamanho entre as populaes foram analisadas atravs de uma ANOVA unifatorial. As diferenas significativas entre cada populao foram determinadas a posteriori atravs de um teste de Tukey.
Tabela 3.0.3. Nmero de exemplares utilizados nas anlises de morfometria geomtrica de acordo com a espcie e a sub-bacia onde foram coletados. AM=Aman; UN=Unini. Sub-bacia Espcie AM1 UN1 UN2 UN3 UN4 UN5 UN6 Total Carnegiella marthae 26 - 30 30 30 30 - 146 Hemigrammus coeruleus - - 20 20 20 20 - 80 Nannostomus trifasciatus 30 29 30 29 25 28 30 200 Hypoptopomatinae sp. 9 - 8 23 30 30 - 100 Rineloricaria lanecolata 28 31 18 14 5 13 - 109
Para avaliar as variaes na forma do corpo entre as sub-bacias, as coordenadas dos marcos anatmicos superpostas pelo ajuste de Procrustes foram submetidas a uma anlise de variveis cannicas (CVA), usando o programa MorphoJ v.1.05f. As diferenas na forma corporal entre as populaes foram visualizadas atravs das grades de deformao geradas pelo programa TPSRegr (Rohlf, 2004b), usando as coordenadas e escores obtidos a partir da CVA. Uma anlise de regresso linear entre o Log10 do tamanho do centroide e os escores da CVA foi realizada para avaliar a influncia da alometria na variao de forma. Os modelos lineares e grficos foram gerados usando o pacote estatstico R 2.13.1 (R Development Core Team, 2011) ou o programa STATISTICA 7.0 (StatSoft Inc.).
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Resultados
Carnegiella marthae As anlises de variao fenotpica utilizaram indivduos de uma populao do lago Aman (Ig. Bar) e quatro no rio Unini (Rio Preto, Rio Arara, Ig. Solimezinho e Rio Pauini). Foram utilizados 20 indivduos de cada populao (Tabela 3.0.3), sendo digitalizados 17 marcos e semi-marcos anatmicos (Fig. 3.1.1). Desses, 15 exemplares foram dissecados posteriormente para a averiguao do sexo, mas no foram encontradas diferenas na morfologia relativa ao sexo de cada indivduo. Fig. 3.1.1. Marcos (vermelho) e semi-marcos (azul) anatmicos digitalizados em Carnegiella marthae: 1- Focinho; 2- Extremidade posterior da maxila; 3- Centro do olho; 4- Extremidade postero-dorsal da cabea; 5- Insero anterior da nadadeira dorsal; 6- Insero posterior da nadadeira dorsal; 7- Insero dorsal da nadadeira caudal; 8- Insero ventral da nadadeira caudal; 9- Insero anterior da nadadeira anal; 10- Meio da nadadeira anal; 11,12,13- Contorno do ventre; 14- Insero do oprculo; 15- Insero anterior da nadadeira peitoral; 16- Poro posterior do pr-oprculo; 17- Poro posterior do oprculo.
Uma ANOVA evidenciou diferenas significativas no tamanho corporal dos exemplares das diferentes sub-bacias (Tabela 3.1.1). Os maiores tamanhos corporais dos exemplares utilizados foram encontrados na sub-bacia do igarap do Bar (AM1), seguido pelo igarap Solimezinho (UN4) e os menores nas outras trs sub-bacias utilizadas (UN2, UN3 e UN5) (Fig. 3.1.2).
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Tabela 3.1.1. Valores do teste Tukey (Erro: entre MS = 0,2065 df = 95,00) e respectivos valores de significncia referidos ANOVA (F = 16,44; P< 0,0001) comparando o tamanho do centroide de exemplares de Carnegiella marthae das bacias do rio Unini e lago Aman (AM). Tributario AM1 UN2 UN3 UN4 Rio Preto - UN2
0,0000
Rio Arara - UN3
0,0000 0,9994
Ig. Solimezinho - UN4
0,0171 0,0000 0,0000
Rio Pauini - UN5
0,0000 0,3352 0,2229 0,0038 * diferenas significativas esto destacadas em negrito.
Fig. 3.1.2. Grfico box-plot mostrando os valores mximo, mnimo e mediana do tamanho do centroide de C. marthae de quatro tributrios do rio Unini e do igarap do Bar no lago Aman (AM). Os quarts inferior e superior correspondem a 25% e 75% dos valores.
As amostras das quatro sub-bacias foram ordenadas por variveis cannicas, e os dois primeiros eixos cannicos retratam 72,68% da variao entre as sub-bacias. Foi observada uma separao em trs conjuntos: um primeiro com os exemplares do lago Aman (AM1), um segundo com os exemplares do rio Arara (UN3) e um terceiro conjunto, intermedirio, com os exemplares das demais populaes (UN2, UN4 e UN5). Vale destacar que dentro desse conjunto intermedirio, apesar da grande interseo entre as trs populaes, foram formados trs agrupamentos com os exemplares de cada
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populao mais semelhantes entre si (Fig. 3.1.3). Analisando separadamente, o primeiro eixo cannico (responsvel por 39,09% da variao) separa a populao do Aman (escores positivos) das demais populaes nos escores negativos (Fig. 3.1.3). Este eixo possui uma fraca correlao com tamanho dos indivduos (20,45%). O 2 eixo, responsvel por 30,59% da variao, separa o conjunto de populaes de lago Aman/rio Pauini (UN5) e rio Arara das demais populaes (Fig. 3.1.3), com uma correlao de apenas 3,11% com o tamanho dos indivduos. A principal variao na forma entre as populaes ao longo do primeiro eixo foi relacionada ao comprimento do pednculo caudal e altura do corpo. As amostras do igarap do Bar (AM1) apresentaram o pednculo caudal mais curto e corpo mais alto, enquanto que as demais populaes apresentaram pednculo caudal longo e corpo mais baixo (Fig. 3.1.3). A diferena na forma associada ao 2 eixo foi correlacionada com o perfil dorsal da cabea e altura do pednculo caudal, com os escores negativos representando um pednculo caudal mais alto e curto.
Fig. 3.1.3. Eixos de variao morfolgica resultantes de anlise de variveis cannicas para os dados populacionais de C. marthae. As grades de deformao mostram a variao no formato associada aos escores positivos e negativos para ambos os eixos; N=100.
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Hemigrammus coeruleus Foram utilizados, no total, 80 exemplares oriundos de quatro sub-bacias do rio Unini (Tabela 3.0.3), sendo digitalizados 14 marcos anatmicos (Fig. 3.2.1). Desse total, 72 exemplares foram posteriormente dissecados para a verificao do sexo. Fig. 3.2.1. Marcos anatmicos digitalizados em exemplares de Hemigrammus coeruleus: 1 extremidade do focinho; 2 articulao da maxila inferior; 3 insero dorsal da nadadeira peitoral; 4 insero anterior da nadadeira plvica; 5 insero anterior da nadadeira anal; 6 insero ventral da nadadeia caudal; 7 insero dorsal da nadadeira caudal; 8 insero anterior da nadadeira adiposa; 9 insero anterior da nadadeira dorsal; 10 supraocipital; 11 extremidade posterior do oprculo; 12 extremidade posterior do olho; 13 ponto central do olho; 14 extremidade anterior do olho.
No foram observadas evidncia de variaes morfolgicas entre os sexos em relao ao formato do corpo (Fig. 3.2.2). Na anlise de componentes principais, os quatro primeiros componentes de variao representam 60,04% das variaes (21,69%, 14,37%, 12,15% e 11,85%, respectivamente) na forma do corpo para machos e fmeas. O teste T de Student feito utilizando esses componentes no apresentou diferenas significativas entre machos e fmeas. (p=0,98 e p=0,94 para o PC1 e PC2). O tamanho do corpo tambm no apresentou diferena entre os sexos (p=0,98). A ANOVA mostrou diferenas significativas no tamanho do corpo entre populaes de diferentes locais (F=15,076; p<0,0001). A populao que apresentou os maiores tamanhos corporais foi a da sub-bacia do rio Pauini (UN5), e os menores exemplares foram encontrados no rio Preto (UN2), na sub-bacia mais prxima das cabeceiras da bacia (Fig. 3.2.3). Diferenas significativas entre as populaes so apresentadas na Tabela 3.2.1.
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Fig. 3.2.2. Resultados de anlise de componentes principais (PCA) de diferenas na forma corporal em H. coeruleus da bacia do rio Unini (AM), categorizado por sexo, evidenciando as ausncia de dimorfismo sexual relacionado forma corporal. N=72, machos 25, fmeas 47.
Tabela 3.2.1. Valores do teste Tukey (Erro: entre MS = 0,30610, df = 76,000) e respectivos valores de significncia referidos ANOVA (F = 15.076; P< 0.0001) comparando o tamanho do centroide de exemplares de H. coeruleus da bacia do rio Unini. Tributrio Arara (UN3) Pauini (UN5) Preto (UN2) Pauini UN5 0,0000 Preto UN2 0,6048 0,0000 Solimezinho - UN4 0,0321 0,1789 0,0007 * as relaes significativas esto destacadas em negrito.
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Fig. 3.2.3. Grfico box-plot mostrando os valores mximo, mnimo e mediana do tamanho do centroide de H. coeruleus de quatro tributrios do rio Unini (AM). Os quarts inferior e superior correspondem a 25% e 75% dos valores.
As amostras das quatro sub-bacias foram ordenadas por variveis cannicas, e os dois primeiros eixos cannicos retratam 79,97% da variao entre as sub-bacias. O primeiro eixo cannico (44,06%) correlaciona a amostra do igarap Solimezinho (UN4) com valores negativos e as amostras dos rios Arara (UN3) e Pauini (UN5) com valores positivos. A principal variao na forma entre as populaes ao longo do primeiro eixo foi relacionada altura do corpo. Amostras dos rios Pauini e Arara apresentaram corpos mais longos do que a amostra do igarap Solimezinho (Fig. 3.2.4). O segundo eixo cannico (35,91%) correlaciona amostras do igarap Solimezinho (UN4), Arara (UN3) e Pauini (UN5) com valores negativos e o rio Preto (UN2) com valores positivos. A diferena na forma associada ao eixo foi correlacionada com o tamanho da cabea, orientao da boca e posio da extremidade posterior do oprculo. A amostra do rio Preto apresentou uma cabea mais larga e mais um oprculo posicionado mais ventralmente do que as amostras com pontuaes positivas (Fig. 3.2.4). Os resultados da regresso (P<0,0001) indicaram que o tamanho representou somente 9,92% da variao representada pelo primeiro eixo cannico.
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Fig. 3.2.4. Eixos de variao morfolgica resultantes de anlise de variveis cannicas para as caractersticas morfomtricas populacionais de H. coeruleus da bacia do rio Unini (AM). As grades de deformao mostram a variao no formato associada aos escores positivos e negativos para ambos os eixos; N=80.
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Nannostomus trifasciatus Foram analisados 201 espcimes de todos os tributrios amostrados no rio Unini (sub- bacias do alto rio Unini, rio Preto, rio Arara, Ig. Solimezinho, rio Pauini e rio Papagaio) e da sub-bacia do igarap do Bar (AM1), no lago Aman (Tabela 3.0.3), sendo digitalizados 12 marcos anatmicos. Desse peixes, 55 exemplares foram posteriormente dissecados para a verificao do sexo. Fig. 3.3.1. Marcos anatmicos digitalizados em exemplares de Nannostomus trifasciatus: 1 extremidade anterior da boca, 2 - articulao da mandbula, 3 - ponto central do olho, 4 incio da abertura do oprculo, 5 - extremidade posterodorsal do supraoccipital, 6 insero dorsal da nadadeira peitoral, 7 insero da nadadeira dorsal, 8 insero da nadadeira anal, 9 insero ventral da nadadeira caudal, 10 insero dorsal da nadadeira caudal, 11 insero anterior da nadadeira dorsal, 12 insero anterior da nadadeira adiposa.
As diferenas no formato do corpo correspondentes a cada sexo no ficaram muito evidentes na anlise de componentes principais (Fig. 3.3.2). Nessa anlise, os quatro primeiros componentes de variao representaram 66,04% das variaes (31,08%, 17,28%, 9,89% e 8,54%, respectivamente) na forma do corpo para machos e fmeas. Foi observada uma correlao significativa entre o 1 componente e o tamanho do centroide (R 2 =0,2302, p=0,0002). O tamanho do corpo tambm apresentou diferena entre os sexos (T=2,69; p=0,009), com as fmeas maiores que os machos. Possivelmente em funo do tamanho corporal, o teste T de Student feito comparando os escores de machos e fmeas apresentou diferenas significativas para o primeiro componente (T=-2,32; p=0,02).
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Fig. 3.3.2. Resultados de anlise de componentes principais (PCA) de diferenas na forma corporal de exemplares de Nannostomus trifasciatus da bacia do rio Unini (AM), categorizado por sexo, evidenciando a ausncia de dimorfismo sexual relacionado forma corporal. N=55, fmeas = 36 (x), machos = 19 (o).
As populaes variaram significativamente em relao ao tamanho corporal (F=22,689; P<0,001) com os maiores exemplares na populao do Aman e os menores no rio Papagaio (Fig. 3.3.3) (Tabela 3.3.1).
Tabela 3.3.1. Valores do teste Tukey (Erro: entre MS = 0,18470, df = 193,00) e respectivos valores de significncia referidos ANOVA (F = 22,689; P< 0.0001) comparando o tamanho do centroide de exemplares de N. trifasciatus das bacias do rio Unini e lago Aman (AM). Tributrio AM1 UN1 UN2 UN3 UN4 UN5 Alto Unini - UN1 0,001
Rio Preto - UN2 0,000 0,462
Rio Arara - UN3 0,000 0,998 0,719
Ig. Solimezinho - UN4 0,000 0,003 0,432 0,011
Rio Pauini - UN5 0,085 0,815 0,017 0,599 0,000
Rio Papagaio - UN6 0,000 0,000 0,001 0,000 0,442 0,000 * Os valores significativos esto destacados em negrito.
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Fig. 3.3.3. Grfico box-plot mostrando os valores mximo, mnimo e mediana do tamanho do centroide de N. trifasciatus de seis tributrios do rio Unini e do igarap do Bar no lago Aman (AM). Os quarts inferior e superior correspondem a 25% e 75% dos valores.
Os quatro primeiros eixos cannicos explicaram 48,19%, 20,54%, 12,5% e 10,68% da variao morfolgica, respectivamente. No conjunto, houve sobreposio entre as populaes das diferentes sub-bacias, mas os exemplares de cada tributrio apresentaram mais similaridade entre si do que com exemplares das outras sub-bacias (Fig. 3.3.4). Observa-se, no entanto, as populaes do igarap do Bar (AM1) e do igarap Solimezinho (UN4) mais destacadas das demais. Analisando separadamente, o primeiro eixo separa basicamente a populao do lago Aman (AM1), na poro negativa do eixo, de todas as populaes do Unini, com exceo da populao do rio Papagaio (UN6), que possui uma posio intermediria entre esses dois conjuntos. Essas populaes diferem basicamente no tamanho da cabea, maior nos peixes do rio Preto, Unini e Arara, e na forma corporal mais fusiforme nessas mesmas populaes em relao populao do Lago Aman (Fig. 3.3.4).
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A regresso entre o tamanho do centride e os eixos cannicos mostrou uma fraca correlao entre a forma e tamanho do corpo nos exemplares de N. trifasciatus utilizados na anlise. Para os dois primeiros eixos cannicos, o tamanho do corpo representou 3,70% e 7,36% da variao, respectivamente.
Fig. 3.3.4. Eixos de variao morfolgica resultantes de anlise de variveis cannicas para as medidas morfomtricas populacionais de Nannostomus trifasciatus. As grades de deformao mostram a variao no formato associada aos escores positivos e negativos para ambos os eixos; N=201.
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Hypoptopomatinae sp. Foram utilizados, no total, 100 exemplares oriundos de quatro sub-bacias do rio Unini e do igarap do Bar no lago Aman (Tabela 3.0.3), sendo digitalizados 14 marcos anatmicos (Fig. 3.4.1). Fig. 3.4.1. Marcos anatmicos digitalizados em exemplares de Hypoptopomatinae sp.: 1 - Focinho; 2 - Parte anterior do olho; 3 - Parte posterior do olho; 4 - ngulo na margem inferior do pr-oprculo; 5 - Margem posterior do oprculo; 6 - Insero anterior da peitoral; 7- Insero posterior da plvica; 8 - Insero inferior da caudal; 9 - Insero superior da caudal, 10 - Insero do espinho da dorsal; 11 - Margem posterior da primeira placa pr-dorsal; 12 - Dorso na reta da insero anterior da peitoral; 13 - Dorso na reta da parte posterior do olho; 14 - Dorso na reta da parte anterior do olho.
A ANOVA mostrou diferenas significativas no tamanho corporal, entre os tributrios (F=3,1036, p=0,0189), mas apenas entre a populao com os maiores exemplares (AM1) e os menores exemplares (UN2). (Fig. 3.4.2). Diferenas significativas entre as populaes so apresentadas na Tabela 3.4.1.
Tabela 3.4.1. Valores do teste Tukey (Erro: entre MS = 0,483, df = 95,00) e respectivos valores de significncia referidos ANOVA (F = 3,1036, p=0,0189) comparando o tamanho do centroide de exemplares de Hypoptopomatinae gen.sp.nov das bacias do rio Unini e lago Aman (AM). Tributario AM1 UN2 UN3 UN4 Ig. Bar - AM1
Rio Preto - UN2
0,0253
Rio Arara - UN3
0,1281 0,6874
Ig. Solimezinho - UN4
0,7102 0,1008 0,4736
Rio Pauini - UN5
0,6333 0,1312 0,5817 0,9997
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Apesar da razo sexual encontrada ser distorcida em favor das fmeas, no foram observadas evidncia de variaes morfolgicas significativas entre os sexos em relao ao formato do corpo, como envidenciado pela Figura 3.2.2, ou ao tamanho corporal.
Fig. 3.4.2. Resultados de anlise de componentes principais (PCA) de diferenas na forma corporal em Hypoptopomatinae sp., categorizado por sexo. Fmeas=33; Machos=11.
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Fig. 3.4.3. Grfico box-plot mostrando os valores mximo, mnimo e mediana do tamanho do centroide de Hypoptopomatinae sp. de quatro tributrios do rio Unini e do lago Aman (AM). Os quarts inferior e superior correspondem a 25% e 75% dos valores.
As amostras das cinco sub-bacias foram ordenadas por variveis cannicas e no foi possvel observar nenhum agrupamento consistente com uma populao ou conjuntos de populaes. Entretanto, os exemplares do igarap Solimezinho (UN4) e rio Pauini (UN5) ficaram mais prximos de exemplares de seu prprio tributrio do que com o de outras sub-bacias. Os primeiros dois eixos cannicos corresponderam a 73,19% da variao entre as sub-bacias. O primeiro eixo (49,28%) correlaciona a amostra do igarap Solimezinho (UN4) com valores positivos e a amostra do igarap do Bar (AM1) e dos rios Preto (UN2) e Pauini (UN5) valores negativos. A populao do rio Arara (UN3) ficou posicionada prximo interseo dos eixos (Fig. 3.4.3) com grande interseo com as demais populaes. O segundo eixo cannico (23,90%) separa apenas a populao do rio Preto (UN2), com escores positivos, das demais populaes. Os resultados da regresso entre o tamanho corporal e os escores de cada eixo indicaram que o tamanho corporal est associado significativamente apenas ao 2 eixo cannico, representando 25,25% da variao deste.
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Fig. 3.4.4. Eixos de variao morfolgica resultantes de anlise de variveis cannicas para os dados populacionais de Hypoptopomatinae sp. das bacias do lago Aman e do rio Unini (AM); N=100.
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Rineloricaria lanceolata Foram utilizados, no total, 109 exemplares oriundos de cinco sub-bacias do rio Unini e do igarap do Bar, no lago Aman (Tabela 3.0.3), sendo digitalizados 14 marcos anatmicos. Do total, 59 exemplares tiveram seu sexo definido posteriormente a partir de caractersticas da morfologia externa como odontdeos hipertrofiados na cabea e nos espinhos das nadadeiras peitorais e plvicas (Evers & Seidel, 2005; Covain & Fisch-Muller, 2007) e pela morfologia da papila urogenital (Brito, 2007). Fig. 3.5.1. Marcos anatmicos digitalizados em exemplares de Rineloricaria lanceolata: 1 extremidade do focinho; 2 extremidade anterior da rbita; 3 extremidade posterior do olho; 4 extremidade posterior da cavidade ps-orbital; 5 margem inferior do pr-oprculo; 6 margem posterior do oprculo; 7 - insero anterior da nadadeira peitoral; 8 insero anterior da nadadeira plvica; 9 insero anterior da nadadeira anal; 10 insero inferior da nadadeira caudal; 11 insero superior da nadadeira caudal; 12 extremidade anterior da placa do mecanismo de trava da nadadeira dorsal; 13 extremidade posterior da primeira placa pr-dorsal; 14 margem superior da cabea na linha reta da extremidade posterior da cavidade ps-orbital.
No foi observada evidncia de dimorfismo sexual associado ao formato do corpo em R. lanceolata (Fig. 3.5.2) com a configurao de marcos anatmicos utilizada. Os quatro primeiros componentes de variao representam 69,70% das variaes (32,99%, 17,59%, 10,11% e 8,99%, respectivamente) na forma do corpo para machos e fmeas. O teste T de Student feito utilizando os escores de cada um desses componentes no apresentou diferenas significativas entre machos e fmeas. (p>0,61). O tamanho do corpo tambm no apresentou diferena entre os sexos (p=0,34).
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Fig. 3.5.2. Resultados de anlise de componentes principais (PCA) de diferenas na forma corporal em R. lanceolata, das bacias do lago Aman e do rio Unini (AM), categorizado por sexo, evidenciando as ausncia de dimorfismo sexual relacionado forma corporal. N=67, jovens 8; machos 24; fmeas 35.
Fig. 3.5.3. Grfico box-plot mostrando os valores mximo, mnimo e mediana do tamanho do centroide de R. lanceolata de cinco tributrios do rio Unini e do lago Aman (AM). Os quarts inferior e superior correspondem a 25% e 75% dos valores.
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A ANOVA indicou que no h diferenas estatisticamente significativas entre o tamanho corporal das populaes dos tributrios amostrados (F=0,8346; p=0,52802) (Fig. 3.5.3). As amostras das seis sub-bacias foram ordenadas por variveis cannicas, e os primeiros trs eixos cannicos retratam 86,68% da variao entre as sub-bacias. O primeiro eixo cannico (44,49%) posiciona basicamente a amostra do lago Aman (AM1) nos escores negativos e as amostras de todas as sub-bacias do rio Unini com escores positivos. O segundo eixo cannico (24,85%) no apresentou uma ordenao muito evidente, no entanto as amostras do alto rio Unini (UN1) e do rio Arara (UN3) ficaram dispostas concentradamente na poro negativa enquanto as amostras do rio Preto (UN2), rio Pauini (UN5) e igarap Solimezinho (UN4) ficaram concentradas na poro positiva do eixo (Fig. 3.5.4). Os resultados da regresso (P<0,0001) indicaram que alometria ontogentica representou somente 0,42% e 3,59% do primeiro e segundo eixos cannicos, respectivamente.
Fig. 3.5.4. Eixos de variao morfolgica resultantes de anlise de variveis cannicas para os dados populacionais de R. lanceolata das bacias do lago Aman e do rio Unini (AM); N=109.
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Discusso De acordo com Clark (1976), polimorfismos conhecidos como divergncias morfolgicas observadas em indivduos no mesmo estgio de desenvolvimento podem ser uma consequncia da influncia do ambiente, podem estar inteiramente sob controle gentico ou podem ser resultado de uma interao dos genes com o ambiente. Polimorfismos em populaes naturais podem oferecer sistemas para estudar a forma com a qual o gentipo e o ambiente interagem para produzir o fentipo (Trapani, 2003). O formato do corpo uma importante caracteristica para detectar adaptao ao local, uma vez que pode ser relacionado locomoo eficiente (Webb, 1984; Langerhans et al., 2004) e comportamento de forrageamento (Svanbck & Eklv, 2004). Em todas as espcies analisadas no presente estudo, foram encontradas diferenas consistentes no formato do corpo em funo da localidade de origem dos exemplares. Em quatro das cinco espcies analisadas, foram utilizados exemplares das duas drenagens (Aman e Unini). J em uma espcie, Hemigrammus coeruleus, apenas exemplares de tributrios do rio Unini. Dentro do primeiro conjunto de espcies, observou-se um padro comum a Carnegiella marthae, Nannostomus trifasciatus e Rineloricaria lanceolata, onde a populao mais divergente foi a do igarap do Bar (AM1), representante do lago Aman (Figs. 3.1.3, 3.3.4 e 3.5.4). Hypoptopomatinae sp. foi a nica espcie em que os exemplares do igarap do Bar (AM1) no sesepararam das demais, situando-se em posies intermedirias entre as populaes do rio Unini (Fig. 3.4.3). Analisando apenas o conjunto de populaes da bacia do rio Unini, a populao do igarap Solimezinho (UN4) foi a mais divergente em trs das cinco espcies (H. coeruleus, N. trifastiacus e Hypoptopomatinae sp.). Em R. lanceolata, foi possvel utilizar apenas cinco exemplares do igarap Solimezinho. Apesar de no formarem um agrupamento evidente, esses cinco exemplares se destacaram com os maiores escores do 2 eixo cannico (Fig. 3.5.4). Como as divergncias populacionais nas anlises no podem ser creditadas ao tamanho dos indivduos ou ao dimorfismo sexual, as variaes provavelmente se devem a diferenas genticas entre as populaes e/ou, ento, a plasticidade fenotpica induzida por presses ambientais divergentes atuando nos tributrios do rio Unini e do lago Aman. Langerhans (2008), estudando padres fenotpicos associados a diferentes regimes de fluxo de gua, indicou que, no nvel intra-especfico, tanto a divergncia
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gentica quanto a plasticidade fenotpica desempenham papis importantes na diferenciao morfolgica observada. Avaliando os padres detectados no presente estudo, percebe-se que h um sinal forte que pode ser resultante de duas causas no excludentes: (1) h estruturao gentica entre as populaes do lago Aman e do rio Unini, ou (2) os ambientes de Aman e Unini so muito distintos a ponto de produzir diferenas oriundas de respostas plsticas diferenciadas na maioria das espcies testadas. Os resultados do captulo anterior do presente estudo sobre estruturao gnica indicam que h uma grande divergncia gentica entre as populaes de R. lanceolata e de Carnegiella marthae de Aman e Unini, com evidncias de que os exemplares de Carnegiella constituem, inclusive, espcies diferentes em cada bacia. Nessas duas espcies, os agrupamentos morfolgicos formados na anlise de variveis cannicas separaram de forma ntida os exemplares do Aman em relao queles dos tributrios do rio Unini. As divergncias morfolgicas ficam evidentes nas anlises morfomtricas, por mais difcil que seja seu diagnstico baseado em caracteres morfolgicos tradicionalmente usados na taxonomia dessas espcies. Para Hypoptopomatinae sp. tambm foi encontrada estruturao gentica entre as populaes do Aman e do Unini, porm, com divergncias muito menores do que nas espcies anteriores. Duas populaes do Unini (UN2 e UN4) foram mais aparentadas com a populao do Aman (AM1) do que com as demais populaes do prprio Unini (Figs. 2.2.1, 2.2.2 e 2.2.3). Nesse caso, porm, os indivduos da bacia do Aman no formaram um agrupamento destacado dos exemplares das demais bacias do rio Unini (Fig. 3.4.3). A pouca divergncia gentica entre as populaes do Aman e Unini em Hypoptopomatinae sp. no foram suficientes para ter um reflexo na morfologia de cada populao. Por outro lado, grandes diferenas genticas e longos tempos de divergncia entre as linhagens do Aman e do Unini, como no caso de R. lanceolata e de Carnegiella, parecem apresentar uma forte influncia na morfologia dessas espcies, com divergncias na forma do corpo claramente observadas atravs das anlises morfomtricas. Observando as divergncias morfolgicas entre as vrias populaes da bacia do rio Unini, a ausncia de estruturao gentica em C. marthae sugere ser pouco provvel que o fator gentico seja responsvel pelas divergncias fenotpicas entre as populaes. A estruturao gentica em algumas populaes de R. lanceolata dentro da bacia do rio Unini (e.g. UN2+UN5UN1) no condiz com os agrupamentos gerados nas anlises
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morfomtricas, o que leva a concluso de que, quando comparamos populaes com diferenas genticas pequenas, podemos atribuir as divergncias morfolgicas plasticidade fenotpica influenciada pelas diferenas ambientais entre cada localidade. Nannostomus trifasciatus uma espcie amplamente distribuda na rea de estudo, encontrada nos mais variados ambientes lticos, sendo bastante abundante na calha principal dos rios e virtualmente ausente nos pequenos igaraps de cabeceira. Essas caractersticas, aliadas a aspectos reprodutivos, como ausncia de cuidado parental e ovos no adesivos que afundam, so sugestivos de que o padro de distribuio dos hapltipos de N. trifasciatus seja similar ao encontrado em C. marthae. Ou seja, ausncia de estruturao dentro da bacia do rio Unini e forte divergncia gentica entre as populaes do rio Unini e lago Aman. Como j mencionado anteriormente para N. trifasciatus, o padro de diferenciao das populaes mais evidente foi similar ao observado para as populaes de C. marthae e R. lanceolata. Os dois principais agrupamentos, Aman versus tributrios do Rio Unini (Fig. 3.3.4), podem estar relacionados estruturao gentica das populaes. No entanto, h a formao de agrupamentos de indivduos de cada sub-bacia, porm, com muita sobreposio entre cada populao. Com exceo da ntida separao da populao do igarap Solimezinho (UN4), as sub-bacias mais prximas geograficamente apresentaram um grau de interseo mais forte do que as sub-bacias distantes. As diferenas observadas entre as populaes da bacia do Unini sugerem que N. trifasciatus apresenta uma alta variabilidade fenotpica que pode responder s presses seletivas divergentes. J, para H. coeruleus, no foi possvel obter as informaes das populaes do Aman. Os resultados da CVA utilizando somente os exemplares de quatro tributrios do rio Unini (Fig. 3.2.4), contudo, so bastante semelhantes aos observados em N. trifasciatus (Fig. 3.3.4). Nesta anlise, claramente indicado um grupo composto por espcimes do igarap Solimeszinho (UN4) e uma separao menos evidente das amostras do rio Preto (Fig. 3.2.4). Da mesma forma que N. trifasciatus, a ampla distribuio da espcie (que inclui os corpos dgua principais), e as caractersticas reprodutivas, como ausncia de cuidado parental, ovos no adesivos que afundam e desova ao longo de todo o ano, so sugestivos de que o padro de distribuio dos hapltipos de H. coeruleus seja similar ao encontrado em C. marthae. Reforando esse argumento, embora o estudo atual use amostras de localidades distantes, os indivduos foram observados e coletados em locais entre afluentes localizados no leito principal do rio Unini, sugerindo que a
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espcie esteja distribuda ao longo de toda sua extenso. As amostras coletadas foram em pequeno nmero com predominncia de exemplares de tamanho reduzido, portanto, no adequadas para uso na anlise atual. Alm disso, os rios Arara (UN3) e Pauini (UN5) mostraram um alto grau de semelhanas morfolgicas (Fig. 3.2.4). Essas populaes, no entanto, so intercaladas pelo igarap Solimezinho (UN4), onde as amostragens foram realizadas bem prximas da confluncia deste igarap com o rio Unini (a rota obrigatria a partir do rio Arara at rio Pauini), e que continha a populao mais divergente. Se as divergncias no formato do corpo fossem realmente relacionadas com a estruturao gentica, a populao do Solimezinho (UN4) provavelmente apresentaria, em relao s suas populaes vizinhas, maior similaridade ao invs de maior divergncia. A floresta sazonalmente inundada no perodo de chuvas da Amaznia facilita o movimento de indivduos entre drenagens de tributrios (Piggot et al. 2011), o que pode promover e melhorar o fluxo gnico entre populaes de espcies capazes de ocupar esse tipo de ambiente, como H. coeruleus e N. trifasciatus. No entanto, para confirmar a ausncia de estruturao gentica entre populaes dessas espcies, estudos moleculares devem ser conduzidos, incluindo populaes intermedirias. A ocorrncia de populaes claramente diferenciadas no igarap Solimezinho (UN4) em trs das cinco espcies sugere que esse tributrio apresente caractersticas que levam seleo divergente de fentipos ou ao desencadeamento de fortes respostas plsticas ao longo do desenvolvimento dos indivduos. Praticamente no foram encontradas diferenas caractersticas limnolgicas e estruturais dos tributrios das duas sub-bacias (Tabelas 1.2 e 1.3), no entanto, apenas o igarap Solimezinho apresentou guas barrentas ao longo do ciclo sazonal de inundao. Esta caracterstica aparentemente no implica em alteraes nas propriedades qumicas da gua, como seria esperado (normalmente quanto mais sedimentos inorgnicoa em suspenso, maior a condutividade elctrica e pH). No entanto, ela pode desempenhar um papel importante no comportamento dos indivduos, especialmente em respostas de evitao e fuga de predadores e no comportamento de forrageamento (Rodriguez & Lewis, 2007), uma vez que a transparncia cai para apenas alguns centmetros (em comparao com 1,4 m nos rios de gua preta livre de sedimentos). Bartels et al. (2012) mostraram que a transparncia da gua pode ser o fator fundamental para a variao morfolgica entre populaes de Perca fluviatilis (Perciformes: Percidae). Diversos estudos destacam o papel desempenhado por interaes ecolgicas na seleo
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de fentipos e no desencadeamento de respostas relacionadas plasticidade fenotpica (e.g. Langerhans et al., 2004; Rundle & Nosil, 2005; Gomes-Jr & Monteiro, 2008). A predao tem recebido muita ateno nos estudos morfomtricos com peixes de gua doce, tanto em estudos realizados na natureza quanto em laboratrio, com diversos autores demonstrando seu papel como uma importante fonte de presso seletiva para a forma do corpo (e.g. Langerhans et al., 2004;. Gomes-Jr & Monteiro, 2008; Burns, et al., 2009;. Webster et al., 2011;. van Rijssel & Witte, 2013). Em H. coeruleus, os peixes dos rios Preto, Arara e Pauini (UN2, UN3 e UN5) possuem corpos mais alongados em relao populao do igarap Solimeszinho (UN4) (Fig. 3.2.4), e possvel que isso represente uma resposta a uma maior presso de predao. Essa caracterstica pode melhorar o desempenho de natao, til para escapar de predadores. Langerhans et al. (2004) demonstraram que peixes de localidades com maior presso de predao apresentavam o corpo mais alongado com pednculo caudal mais robusto do que os exemplares de localidades com menor presso de predao. Por conta de suas caractersticas estruturais e limnolgicas (o igarap Solimezinho apresenta gua turva na maior parte do ano), as composio de espcies predadoras pode ser distinta nesse corpo dgua. Por exemplo, ao contrrio dos demais tributrios, no so encontrados predadores do gnero Cichla no igarap Solimezinho. A morfologia da cabea da populao igarap Solimezinho (Fig. 3.2.4) tambm pode ser afetada pela menor transparncia do igarap mais diretamente, especialmente considerando que a maioria dos caracdeos de pequeno porte e de hbitos alimentares oportunistas, tais como H. coeruleus, que so peixes de alimentao visualmente orientada. Divergncias fenotpicas influenciadas por diferenas ambientais foram encontradas no formato dos corpos de outros caracdeos de pequeno porte (e.g., Langerhans et al., 2003; Sidlauskas et al., 2006). Em zonas tropicais, especialmente nos rios amaznicos, a maioria das variaes acontecem sazonalmente e de forma previsvel, quando a temperatura da gua, condutividade, transparncia, estrutura do habitat e densidade dos peixes (influenciando o nvel de presso de predao) mudam drasticamente (Sioli, 1985). Esse conjunto de condies ambientais previsveis e divergentes experimentadas durante o ciclo de vida dos peixes, associado a uma grande rea disponvel para colonizao, e a facilitao do processo de disperso propiciada pelo alagamento sazonal das florestas, favorecem o fluxo gnico e a seleo de organismos com elevada
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plasticidade fenotpica (Sultan & Spencer, 2002; Schlichting & Smith, 2002). Uma discusso mais aprofundada sobre a variao morfolgica em peixes na Amaznia deve trazer novas perspectivas para a avaliao de padres gerais de plasticidade fenotpica em organismos aquticos presentes em ambientes fortemente afetados por mudanas sazonais.
Comparao dos padres de variao morfolgica luz dos cenrios de conexo hidrolgica e capacidade de disperso. Os diferentes resultados obtidos no presente estudo mostram que as populaes de diferentes espcies de peixes nas sub-bacias UN2, UN3 e UN4 foram as que apresentaram maiores divergncias dentre as demais. Considerando que as espcies analisadas apresentam diferentes graus de estruturao entre suas populaes, esses resultados so um indicativo de que h diferenas ambientais significativas entre a maioria das sub-bacias trabalhadas. Isso se enquadra no cenrio C proposto nos objetivos, onde so encontrados ambientes diferentes em cada localidade (dentro e entre bacias) (pgina 109). Todas as espcies avaliadas apresentaram variaes que podem ser atribudas plasticidade fenotpica. A heterogeneidade ambiental e a escala temporal e espacial com que os organismos experimentam esta so fatores que incentivam a seleo de organismos com grande amplitude de plasticidade fenotpica (Kingsolver et al., 2002; Schlichting , & Smith, 2002). Assim, as variaes morfolgicas encontradas so esperadas, considerando as presses divergentes que um peixe amaznico vivencia nos perodos de seca e de cheia. Os padres, no entanto, nem sempre convergiram com os resultados esperados indicados na Tabela 3.0.2. Por exemplo, Hypoptopomatinae sp., que apresenta todas as populaes estruturadas, se enquadraria no cenrio 3C (ambientes diferentes + estruturao entre todas as populaes). Ao contrrio do previsto, as anlises morfomtricas no revelaram a existncia de diferenas significativas entre todas as populaes, mas apenas dois conjuntos correspondentes s bacias UN4 e UN5, com os indivduos das outras populaes sem formar nenhum agrupamento evidente. Essa falta de correspondncia entre o previsto e o observado pode estar relacionada maneira distinta com que os estmulos ambientais afetam cada espcie.
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Consideraes finais
Os resultados da presente tese mostram fortes evidncias da relao direta entre a ecologia das espcies e o padro de estruturao gentica de suas populaes. Em contraste, as relaes entre a histria de vida das espcies e os padres de diferenciao morfolgica no so to diretas, pois, de fato, os padres fenotpicos so influenciados basicamente por fatores que so, s vezes, independentes um do outro: as condies ambientais locais, as interaes biolgicas e a estruturao gentica das populaes. Da mesma forma, foi possvel concluir que o fluxo gnico atravs das cabeceiras das bacias do lago Aman e do rio Unini ocorreu pelo menos para uma das espcies estudadas (Hypoptopomatinae sp.). Esse evento provavelmente mais associado ao habitat da espcie do que capacidade de disperso propriamente dita, j que as demais espcies analisadas, que possuem atributos biolgicos que permitiriam maior capacidade de disperso do que Hypoptopomatinae sp., no tiveram populaes geneticamente prximas nas duas vertentes. No foi possvel, no entanto, concluir se a conexo entre as bacias do lago Aman e do rio Unini atravs de suas cabeceiras ocorreu apenas em um passado recente ou se essas duas bacias so at hoje interligadas. A utilizao de uma espcie com alta capacidade de disperso e que tambm colonize corpos dgua de pequeno porte, incluindo reas de cabeceiras, pode fornecer indcios mais conclusivos acerca da idade da conexo entre os formadores do lago Aman e do rio Unini e da periodicidade com que esse evento ocorre ou ocorreu. Alm disso, outra abordagem que certamente contribuir para o entendimento do histrico biogeogrfico da regio do interflvio Negro-Solimes uma anlise detalhada das comunidades de peixes das bacias do lago Aman e do rio Unini utilizando os novos dados gerados a partir das coletas do presente estudo. Os estudos atuais da ictiofauna neotropical que avaliam a distribuio de espcies, linhagens evolutivas e/ou populaes costumam, quando muito, apresentar associaes entre seus resultados e a biologia dos organismos feitas a posteriori (e.g. Sivasundar, 2001; Turner et al., 2004). Os fatores biolgicos que influenciam a distribuio atual das populaes e espcies so to diversos que uma anlise muito simplificada pode no
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ser capaz de produzir avaliaes que esclaream pontos importantes relativos ao histrico evolutivo e biogeogrfico dos organismos estudados. Por conta dessa complexidade, estudos filogenticos e filogeogrficos que considerem a ecologia das espcies j em sua concepo provavelmente sero capazes de dar uma relevante contribuio para o entendimento da distribuio e da formao da fauna amaznica como conhecemos hoje. A reconhecida importncia do pulso de inundao como principal fora motora de aspectos ecolgicos nas populaes de peixes amaznicos (Junk et al., 2010), bem como na produo de ambientes heterogneos, induz a tentar avaliar seu papel nos processos evolutivos de diferenciao de espcies. O pulso de inundao resultado do tamanho da bacia e seu relevo, em conjunto com a distribuio diferencial das chuvas ao longo do ano na Amrica do Sul (Sioli, 1985). Em diversas hipteses de formao geolgica da bacia amaznica, a partir de cerca de 15 M.a., sugerida a presena de uma drenagem principal fluindo para o norte e depois para o leste (Hubert & Renno, 2006; Wesselingh & Hoorn, 2011). Esta drenagem certamente possua propores menores do que o Amazonas atual, mas tambm flua em uma rea de plancie (Wesselingh & Hoorn, 2011), fazendo crer que um padro sazonal de heterogeneidade ambiental gerado por um pulso de inundao, de certa forma similar ao encontrado nos dias de hoje, j tenha ocorrido. Lundberg (1997) e Lundberg & Aguilera (2003) relataram a ocorrncia de espcies de grande porte de gneros tpicos de plancies de inundao e rios grande porte como, Arapaima, Colossoma e Brachyplatystoma e Phractocephalus, no perodo mioceno no norte da Amrica do Sul, reforando a idia de que uma bacia hidrogrfica de grande porte j ocorria na regio. Como j mencionado, espera-se, em teoria, que as caractersticas de ambientes com heterogeneidade ambiental em uma escala temporal previsvel sejam fatores que incentivam a seleo de organismos com grande amplitude de plasticidade fenotpica (Kingsolver et al., 2002; Schlichting , & Smith, 2002). Nessas situaes, a seleo natural acaba favorecendo o desenvolvimento de organismos que apresentem respostas plsticas, promovendo, assim, o desenvolvimento evolutivo da plasticidade. No entanto, ainda controverso o papel da plasticidade na diversificao evolutiva (Pfennig et al., 2010; Leichty et al., 2012). Por exemplo, a plasticidade j foi considerada como fator impeditivo de processos de diferenciao e especiao (Schlichting, 2004). De fato, populaes com nveis elevados de plasticidade tendem a permanecer distantes de picos adaptativos, quando as presses de seleo so intensificadas o que ajudaria na
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seleo divergente e sucessiva diferenciao de populaes (Price et al., 2003). O mesmo raciocnio, contudo, tambm pode ser usado para entender como a plasticidade, ao contrrio, capaz de contribuir para o surgimento de inovaes fenotpicas e para a diferenciao de populaes (e.g. Price et al., 2003; West-Eberhard, 2005; Pfennig et al., 2010; Moczek et al., 2011), especialmente quando os nveis de plasticidade apresentados so moderados (Price et al., 2003). Naturalmente, a plasticidade facilita a sobrevivncia de linhagens em longo prazo dando tempo para que mutaes se acumulem por deriva, alm de experimentar presses de seleo que favorecem a divergncia da populao ancestral (Price et al., 2003). Da mesma forma, a plasticidade acaba blindando a diversidade gentica da seleo natural. Os efeitos de novos variantes genticos so amenizados por respostas plsticas compensatrias, fazendo com que novas mutaes no sejam excludas pela seleo (Schlichting, 2004). Alm disso, em contraste com as rpidas respostas produzidas pela plasticidade, se a produo de novos fentipos favorveis necessita de novas mutaes, o tempo para sua acumulao pode ser demasiado longo e a probabilidade de subsequente perda por deriva pode ser alta (Pfennig et al., 2010). Da forma mais evidente, a plasticidade promove a divergncia entre populaes produzindo diferenas fenotpicas nos casos em que as populaes experimentam circunstncias ambientais divergentes (e.g. Langerhans et al., 2003; Webster et al., 2011). A induo de um fentipo pode influenciar indiretamente a expresso de vrios outros traos, expondo-os a novas presses seletivas (Pfennig et al., 2010). Por exemplo, uma mudana de comportamento induzida ambientalmente pode alterar a natureza e a fora da seleo em traos morfolgicos (e.g. Sol et al., 2005). A plasticidade fenotpica tambm promove a divergncia entre populaes facilitando mudanas de picos ou cruzando vales na paisagem adaptativa (Price et al., 2003). As novas presses experimentadas pelos indivduos colonizando um novo habitat podem reforar e refinar, atravs da seleo, os padres iniciados por respostas ao ambiente (Pfennig et al., 2010). Alm do mais, quando populaes diferentes desenvolvem limites de resposta distintos, a acomodao gentica pode acentuar a divergncia entre populaes (West-Eberhard, 2005). O processo de especiao se inicia quando populaes se tornam geneticamente isoladas (e.g., graas a segregao espacial, ou isolamento reprodutivo por reconhecimento). Esse processo culmina com a divergncia dessas populaes em funo tanto de seleo como de deriva gnica, at que no consigam mais se reproduzir de forma bem sucedida
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(West-Eberhard, 2005). A tendncia da plasticidade em facilitar a divergncia entre populaes deve ser crucialmente importante para a especiao, j que qualquer processo que promova a divergncia populacional deve tambm facilitar a especiao (Pfennig et al., 2010). A heterogeneidade ambiental em uma escala temporal previsvel ao longo do tempo evolutivo da bacia amaznica parece ter contribudo para a seleo de formas com graus elevados de plasticidade fenotpica. Em ltima anlise, esse fator intrnseco aos organismos aliado heterogeneidade ambiental que ora facilita a disperso de indivduos (e o fluxo gnico, por consequncia) e ora age como filtro seletivo isolando populaes, s grandes dimenses e ao histrico geolgico da bacia amaznica, pode ser um dos responsveis pela distribuio atual de peixes na regio. Estudos futuros levando em considerao esse aspecto ainda no abordado podem ser de fundamental importncia para se entender a origem e os mecanismos que mantm a megadiversidade da ictiofauna amaznica.
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