Universidad de la serena

Departamento de ciencias
Laboratorio de microbiologa


Recuperacin de microbiota normal
humana y control microbiano

ADOLFO LABB
labbezprox@gmail.com

PAULINA MONDACA
paulinamondaca94@gmail.com

JAVIERA PREZ
javiera.perez.munoz@gmail.com

BRBARA VEGA
barbara.vega_93@hotmail.com


Resumen
En el presente informe se evidencia los
mtodos, resultados y anlisis del trabajo
practico realizado en el laboratorio de
microbiologa de la Universidad de La
Serena, correspondientes a las sesiones de
recoleccin y transporte de muestras para
estudios microbiolgicos, micologa
mdica y control de la contaminacin
microbiana.

El documento presenta la toma de
muestras de microbiota normal, lo que se
realiz con la colaboracin de los propios
compaeros del laboratorio, as como los
resultados de dicho procedimiento para la
posterior caracterizacin de los
microorganismos aislados en alguna de
las muestras. Tambin se presentan los
mtodos y resultados del control de
microorganismos, adems se incorporan
loa anlisis de estos resultados.

Palabras claves
Esterilizacin, microbiota, povidona
yodada, autoclave.
Abstract
This report is evidence the methods,
results and analysis of practical work
done in the laboratory of microbiology at
the University of La Serena,
corresponding to the sessions collection
and transportation of samples for
microbiological studies, medical
mycology and microbial pollution
control.
The paper presents the sampling normal
microbiota, which was conducted in
collaboration with the laboratory's peers,
and the results of this procedure for
subsequent characterization of the
microorganisms isolated in any of the
samples. It also presents the methods and
results of control of microorganisms, loa
also incorporated analysis of these results.

Key words
Sterilization, microbiota, povidone
iodine, autoclave.

Introduccin
El cuerpo humano presenta una gran
superficie cutnea y mucosa por la que
entra en contacto con el medio ambiente.
En esta superficie existen diversos
sectores, donde residen microorganismos
con diferentes caractersticas de humedad,
temperatura, pH y disponibilidad de
nutrientes.
La flora humana normal es el conjunto de
grmenes que conviven con el husped en
estado normal, sin causarle enfermedad.
Su composicin es caracterstica para la
especie humana, tanto en los grmenes
que la componen como en su nmero y
distribucin en el organismo.
La flora basal es la caracterstica de cada
sector del organismo y est constituida
por grmenes que siempre estn presentes
en ese sector. Por ejemplo:
Staphylococcus epidermidis en la piel o
Esherichia coli en el intestino. En
cambio, la flora transitoria es variable de
un ser humano a otro y est compuesta
por grmenes que colonizan en forma
intermitente un determinado sector. Esta
flora transitoria puede incluir bacterias
potencialmente patgenas para el propio
individuo u otras personas que entran en
contacto con l.
La flora humana normal desde diversos
puntos de vista representa un importante
mecanismo de defensa del husped.
Contribuye al desarrollo de la respuesta
inmunolgica, como ha sido demostrado
en modelos animales que nacen y son
criados en condiciones de esterilidad
(individuos axnicos). Estos animales
presentan un pobre desarrollo de los
diversos componentes de su sistema
inmunitario. La flora adems ayuda a
evitar la colonizacin de la piel o las
mucosas por bacterias que pueden ser
patgenas.
Los microorganismos ofrecen diversos
beneficios a la sociedad en diferentes
formas. En otro aspecto son tambin los
microorganismos un vehculo para la
produccin de enfermedades. Es por esto
que el ser humano ha buscado los
procedimientos necesarios para controlar
el crecimiento de los microorganismos.
Se denomina esterilizacin al proceso
validado por medio del cual se obtiene un
producto libre de microorganismos
viables. El proceso de esterilizacin debe
ser diseado, validado y llevado a cabo de
modo de asegurar que es capaz de
eliminar la carga microbiana del producto
o un desafo ms resistente. Dado que la
esterilidad no puede demostrarse de
manera absoluta sin causar la destruccin
completa de todas las unidades del lote de
producto terminado, se define la
esterilidad en trminos probabilsticos, en
donde la probabilidad de que una unidad
de producto est contaminada es
aceptablemente remota. Se considera que
un producto crtico es estril cuando la
probabilidad de que un microorganismo
est presente en forma activa o latente es
igual o menor de 1 en 1.000.000
(coeficiente de seguridad de esterilidad
10^-6).
En cambio se denomina desinfeccin a un
proceso fsico o qumico que mata o
inactiva agentes patgenos tales como
bacterias, virus y hongos impidiendo el
crecimiento de estos en fase vegetativa
que se encuentren en objetos inertes. Los
desinfectantes reducen los organismos
nocivos a un nivel que no daan la salud.
Cabe destacar que algunos como los
fenlicos pueden actuar tambin como
antispticos.

Metodologa
Procedimiento para recoleccin y
transporte de muestras: (Ver sesin 6,
gua prctica de laboratorio microbiologa
y parasitologa, Universidad de La
Serena, enfermera 2013).
Micologa mdica (Ver sesin 7, gua
prctica de laboratorio microbiologa y
parasitologa, Universidad de La Serena,
enfermera 2013).
Control de la contaminacin microbiana
(Ver sesin 9, gua prctica de laboratorio
microbiologa y parasitologa,
Universidad de La Serena, enfermera
2013).
Resultados
Recuperacin de microbiota normal:
TABLA 1 Muestra de cuero cabelludo:
Aspecto Filamentoso
Color Verde/blanco (con exudado)
Tamao 8cm de largo x 7,5cm de
ancho
Funcin
micelio
Reproductiva


TABLA2.1 Muestra mucosa bucal, hongo
a:
Aspecto Aterciopelado
Color Centro verde, borde blanco
Tamao 2,5 x 2,3 cm
Funcin
micelio
Reproductiva


TABLA2.2 Muestra mucosa bucal hongo
b:
Aspecto Algodonoso
Color verde oscuro
Tamao O,5x 0,4 cm
Funcin
micelio
Reproductiva

TABLA 3 muestra interdigital
Hongo muestra interdigital
Aspecto Filamentoso
Color Vende Blanquecino (centro)
Blanco verdoso (alrededor)
Tamao 1,5 x 1,3 cm
Funcin
micelio
Reproductiva

Antispticos y su accin sobre microbiota
normal:
TABLA 4 muestra del pliegue de la
mueca
Muestra del pliegue de la mueca
Control (+)
Povidona yodada (-)

TABLA 4.1 microorganismo a
Actinomiceto color morado
Color Blanco
Margen Ondulada
Elevacion Papilar
Aparienia Cremosa
Densidad Opaca
Tamao Grande
Consistencia Dura


TABLA 4.2 microorganismo b
Penicilium contaminante (esporas)
Color Blanco y negro
Margen Filamentoso
Forma Filamentosa
Tamao Grande


TABLA 4.3 microorganismo c
Penicilium
Color Blanco y naranjo
Margen Filamentoso
Forma Filamentosa
Tamao Medio

TABLA 4.4 microorganismo d
Estafilococo G+
Color Amarillo
Margen Dentada
Elevacion Convexa baja
Aparienia Suave
Densidad Opaca
Tamao Medio
Consistencia Cremosa


TABLA 4.5 microorgnismo e
Estafilococos G+
Color Blanco
Margen Entera
Elevacion Convexa
Aparienia Suave
Densidad Opaca
Tamao Medio
Consistencia Cremosa


Desinfectantes y su accin sobre
superficies:
TABLA 5 desinfectantes
Control (+)
Alcohol (-)
Cloro 1min. (-)


Control de microorganismos por calor hmedo:
TABLA 6 K. pneumoniae
Caractersticas Control Bao trmico Autoclave
Desarrollo en superficie Velo delgado - liso No presenta
desarrollo
No presenta
desarrollo
Sedimento Muy escaso No presenta No presenta
Grado de desarrollo Abundante Casi nulo Sin crecimiento
Olor Pronunciado Leve Nulo
Color Amarillo Ausencia Ausencia
Presencia de gas No No No
Grado de turbidez Abundante Nula Nula

TABLA 7 B. cereus
Caractersticas Control Bao trmico Autoclave
Desarrollo en superficie Velo delgado -
granuloso
Nulo Nulo
Sedimento Abundante viscoso No presenta No presenta
Grado de desarrollo Moderado Sin crecimiento Sin crecimiento
Olor Pronunciado Nulo Nulo
Color Amarillo Ausencia Ausencia
Presencia de gas No No No
Grado de turbidez Abundante Nula Nula

TABLA 8 E. coli
Caractersticas Control Bao trmico Autoclave
Desarrollo en superficie Anillo Nulo Nulo
Sedimento Abundante No presenta No presenta
Grado de desarrollo Moderado Moderado a
nulo
Sin crecimiento
Olor Leve Leve Nulo
Color Amarillo Nulo Nulo
Presencia de gas No No No
Grado de turbidez Abundante Nula Nula




Formacin de aerosoles:

TABLA 9
Desarrollo
Placa + tos (control) (+)
Placa + tos +
mascarilla
(-)
Placa + tos + lysoform (-)

Discusiones:
Recuperacin de microbiota normal:
Muestra del cuero cabelludo

Al tener una visin macroscpica de la
colonia formada por hongos, podemos
indicar que presenta un aspecto
filamentoso por la presencia de micelio
(masa de hifas) que constituye el cuerpo
vegetativo de un hongo. Dependiendo del
crecimiento de estos podemos
clasificarlos como micelios
reproductores, debido a que crecen hacia
la superficie externa del medio y as no
quiebran el agar donde se encuentran
cultivados. Al observar la muestra
microscpicamente, se evidencian
esporas y conidios medio a travs de los
cuales se reproduce el hongo.
Al analizar la muestra a travs del
microscopio, podemos observar que el
hongo a estudiar presenta hifas septadas,
conidias y la presencia de esporas. Al
comparar las estructura del hongo
observado en relacin a esquemas
presentes en el manual (sesin 7, gua
prctica de laboratorio microbiologa y
parasitologa, Universidad de La Serena,
enfermera 2013), la figura que ms se le
asemeja a la forma estructural de
Pencillium.

Muestra de mucosa bucal

En una boca con una higiene perfecta se
encuentran un nmero infinito de
bacterias y otros organismos en vida
saprfita. Entre estos organismos
encontramos las Candidas, responsables
de las micosis ms frecuentes
(Candidiasis oral o moniliasis). La
Cndida es un microorganismo comensal
presente normalmente en la boca.
Esta infeccin por hongos aparece cuando
se altera el equilibrio en la cavidad bucal.
La especie ms frecuente es la Cndida
Albicans aunque tambin otras especies
pueden ser responsables: C. krusei, C.
parakrusei, C. tropicalis, C.
seudotropicalis, C. stellatoidea, C.
glabrata, C. dubliniensis.
Muestra de mucosa bucal

En una boca con una higiene perfecta se
encuentran un nmero infinito de
bacterias y otros organismos en vida
saprfita. Entre estos organismos
encontramos las Candidas, responsables
de las micosis ms frecuentes
(Candidiasis oral o moniliasis). La
Cndida es un microorganismo comensal
presente normalmente en la boca.
Esta infeccin por hongos aparece cuando
se altera el equilibrio en la cavidad bucal.
La especie ms frecuente es la Cndida
Albicans aunque tambin otras especies
pueden ser responsables: C. krusei, C.
parakrusei, C. tropicalis, C.
seudotropicalis, C. stellatoidea, C.
glabrata, C. dubliniensis

En la caracterizacin se pudo encontrar 2
microorganismos diferente a y b
(Ver anexo, ilustracin 2) luego de una
tincin simple de a se llega a la
conclusin de que podra ser un
penicillium debido a sus caractersticas
microscpicas (Ver anexo, ilustracin 3)

Muestra interdigital

Las manos son el contacto directo con el
entorno, a travs de ellas podemos
realizar la mayora de las acciones
diariamente, debido a esto estn en
constante riesgo de adquirir algn
microorganismo. Cabe mencionar que en
nuestra piel (incluyendo las manos)
normalmente albergan de por si un
nmero significativo de
microorganismos, pero estos hay que
controlarlos ya que podran traer
problemas si hay una concentracin
mayor que lo normal.
Antispticos y su accin sobre
microbiota normal:
En el trabajo practico, al caracterizar la
muestra control (sin povidona) se
evidenci un alto grado de desarrollo de
microorganismos (ver anexo, ilustracin
5) los que al hacer una caracterizacin se
evidenci eran bacterias y hongos. Cabe
destacar que el yodo se ha modificado
para utilizarse como antisptico.
La polividona yodada es un yodoforo
eficaz sobre bacterias, hongos, virus,
protozoos, quistes y esporas, y reduce de
manera significativa las infecciones de las
heridas quirrgicas.
La microbiota normal de la piel contiene
muchos microorganismos, entre ellos
podemos encontrar 2 grupos, flora
residente y flora transitoria. Los que se
encuentran en mayor cantidad en la flora
residente son estafilococos. En nuestra
muestra de los 5 microorganismos
observados encontramos 2 estafilococos
gram positivos, por lo que podemos
deducir que la microbiota normal de la
piel de la persona muestreada si
presentaba una mayor cantidad de
estafilococos.
Dentro del genero penicillium slo una
especie es patgena: Penicillium
marnefeii. Podemos deducir que nuestros
2 penicillium contaminante son parte de
la flora normal de la piel y no patgenos.
Los actinomicetos son bacterias Gram
positivas que presentan crecimiento
micelial durante parte de su ciclo
biolgico, entre ellos el grupo de los
dermatophilus son parsitos que estn
sobre la piel de los animales,
conformando la flora normal por lo tanto
podramos decir que nuestro actinomiceto
encontrado no es patgeno.

Desinfectantes y su accin sobre
superficies:
Las sustancias qumicas se han utilizado
desde ya varios aos para evitar
infecciones. En relacin a los resultados
podemos decir que la muestra control fue
la nica que desarrollo un crecimiento ya
que las que se expusieron a desinfectantes
(alcohol y cloro) no presentaron
desarrollo alguno. Con esto podemos
decir que los desinfectantes utilizados,
cloro y alcohol fueron eficientes al
eliminar la carga de microorganismos.
Con respecto podemos decir que
el etanol posee actividad bactericida y se
utiliza para desinfectar la piel antes de la
inyeccin, punciones venosas o
intervenciones quirrgicas. En cambio el
cloro se utiliza ms bien para la
desinfeccin de superficies.
Control de microorganismos por calor
hmedo:
Los resultados revelan que en las 3
muestras control (Bacillus cereus,
Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae)
se comprob un grado de crecimiento, en
cambio en los tubos que se expusieron al
bao trmico ya hay una baja o ausencia
total del crecimiento esto se debe a que el
bao trmico es un medio utilizado para
la esterilizacin. Con la exposicin al
autoclave ocurre algo parecido a lo que
ocurre con el bao trmico, con la
diferencia de que con la exposicin al
autoclave en ninguno de los tubos se
presenta crecimiento, esto nos deja en
evidencia que el autoclave es ms eficaz
en la esterilizacin que el bao trmico.
Formacin de aerosoles:
Al igual que en los resultados ya
analizados el control dio resultado
positivo. En cabio en el que se utilizo la
mascarilla para toser arroj un resultado
negativo, lo que significa que la
mascarilla es un mtodo eficaz para la
prevencin del contagio de
microorganismos, pero hay que tener
precauciones ya que las mascarillas tiene
un tiempo determinado en el que son
eficientes despus de este no se garantiza
su eficiencia. En relacin al lysoform
tambin arroj un resultado negativo, por
lo que se deduce que su accin es efectiva
frente a los microorganismos, es
necesario destacar que la accin de los
desinfectantes no solo depende de los
agentes que contengan sino que tambin
de las concentraciones en las que estos se
encuentren.


Conclusin

Agradecimientos
Se agradece a la Universidad de La
Serena, por facilitarnos sus instalaciones
para realizar este trabajo y los materiales
necesarios para realizar los
procedimientos, y a nuestras ayudantes
por guiarnos y ayudarnos en la
realizacin de los procedimientos.

Bibliografa
Gua prctica de laboratorio
microbiologa y parasitologa,
Universidad de La Serena,
enfermera 2013.
http://www.sampac.es/sites/default/fil
es/docs/UROCULTIVO.pdf
Microbiologa medica de Murray
2009













ANEXOS

ILUSTRACIN 1.1 muestra del cuero
cabelludo


ILUSTRACIN 1.2 vista microscpica
hongo de muestra del cuero cabelludo.


ILUSTRACIN 2 muestra de mucosa
bucal




ILUSTRACION 3 vista microscopica de
hongo de mucosa bucal a (penicilium)


ILUSTRACIN 4 muestra interdigital


ILUSTRACION 5 muestra control de
pliegue de la mueca.