Senai CIC Curso de Controle Ambiental

Relatrio de Anlise Microbiologia

Grupo Coliforme
Tcnica de membrana filtrante





Adriano
Nair
Elizabeth
Tiago
Professora: Julianne



Curitiba
2014

1.Introduo
A poluio das guas por material fecal de origem humana e animal torna esse
elemento um veculo de transmisso de doenas infecciosas causadas por bactrias,
vrus, protozorios e helmintos.
Devido ao seu elevado potencial de disseminao, essas doenas representam um
importante risco sade humana, e so responsveis por elevada morbidade e
mortalidade, principalmente entre crianas dos pases em desenvolvimento (WORLD
HEALTH ORGANIZATION 2004).
A deteco de microrganismos patognicos, embora necessria em algumas
circunstncias, no aplicvel para fins de monitoramento ou verificao de rotina, por
esse motivo, uma das estratgias mais viveis para o controle da qualidade
microbiolgica da gua a avaliao da presena dos chamados microrganismos
indicadores de contaminao fecal.
Esses microrganismos devem possuir uma srie de caractersticas, dentre elas, estar
presente em grande quantidade em fezes humanas e de animais de sangue quente, no
se multiplicar em guas naturais e ser detectvel por mtodos laboratoriais simples e
rpidos.
Alguns microrganismos atendem maior parte desses requisitos, destacando-se dentre
eles as bactrias do grupo coliforme.
Tratam-se de bactrias pertencentes famlia Enterobacteriaceae, e sua definio no
se baseia unicamente em critrios taxonmicos, mas inclui igualmente vrias
caractersticas observadas nos mtodos analticos utilizados para sua deteco.
A tcnica de membrana filtrante um dos mtodos que pode ser utilizado para a
quantificao de coliformes em guas.
uma tcnica muito reprodutvel, pode ser utilizada para grandes volumes de gua e,
em geral, os resultados podem ser obtidos mais rapidamente em comparao com a
tcnica de tubos mltiplos.
bastante til no monitoramento da gua de consumo humano e outras guas
naturais, mas apresenta algumas limitaes, quando a gua possui turbidez elevada ou
altas concentraes de bactrias no pertencentes ao grupo dos coliformes (American
Public Health Association, 2005).





2. Fundamentao Terica
A filtrao vcuo de volumes de amostra adequadas, atravs de membranas
filtrantes, com porosidades menores que uma clula bacteriana.
As bactrias se presentes ficam retidas na superfcie da membrana, a qual ento
transferida assepticamente para a superfcie do meio de cultura contida na placa de petri.
A incubao da placa deve ser na posio invertida para que o princpio da
capilaridade possa alimentar as possveis bactrias presentes sobre as membranas.
Crescimento de bactrias em meios cultura:
Na tcnica da membrana filtrante, usamos dois tipos de meios de cultura: o meio Endo
e o meio MFC, acrescidos de 1,5% de Agar para solicitao.
Para que as baterias possam se multiplicar, a necessidade de 4 fatores importantes:
Meio de Cultura (protenas aminocidos, aucares, etc.);
Temperatura ideal;
Umidade (gua presente no meio da cultura);
pH ideal, em geral entre 6,8 a 7,2
Quando as bactrias se agrupam elas formam uma colnia.
Entendemos que colnia era apenas uma nica clula bacteriana, ento podemos
expressar os resultados com UFC (Unidade Formadora de Colnias).

3. Desenvolvimento
A tcnica de membrana filtrante para quantificao de coliformes baseia-se na
filtrao de volumes adequados de gua, mediante presso negativa (vcuo), atravs de
membrana filtrante com porosidade de 0,45mm.
As bactrias, apresentando dimenses maiores que o poro da membrana, ficar retidas
em sua superfcie, a qual ser ento transferida para uma placa de Petri, contendo o meio
de cultura seletivo e diferencial m-Endo Agar LES. Por capilaridade, o meio se difundira
para a membrana, entrando em contato com as bactrias e, aps um perodo de 22-24 h
de incubao a 35 0,5C se desenvolvero colnias de coliformes.




3.1. Amostragem
A amostra foi retirada de uma poa com gua no ptio de estacionamento do Senai cic.
Parmetros Natureza do recipiente Tempo
recomendado
(Coleta/anlise)
Tcnicas de
conservao
Coliformes totais
Coliformes fecais

Frascos esterilizados de
vidro ou plstico neutro
de 500 ou 100ml
(salmonela 1000 ou
5000ml)
8horas Transporte ao abrigo da
Luz e refrigerado

3.2. Preparo
Materiais (Vidrarias):
Quant. Descrio
3 Placas de Petri auto
clavadas
1 Suporte de filtrao
1 Pina
2 Membranas filtrantes
2 Becker 150ml
1 Basto de Vidro
1 Agitador com bala
magntica

Meio Endo: Utilizado para grupo coliforme totais (35C+0,5C).
Meio Total Fracionado para o procedimento
Endo 4,8g 0,96g (detectar coliformes fecais)
Agar 1,5g 0,3g (base solida para o meio)
H2O 100ml 20ml Diluio dos slidos

Meio mFC: Utilizado para grupo coliforme fecal (44,5C+0,2C).
Meio Total Fracionado para o procedimento
mFC 3,7g 0,74g (detectar coliformes fecais)
Agar 1,5g 0,3g (base solida para o meio)
H2O 100ml 20ml Diluio dos slidos


3.3. Procedimento
Preparao dos Meios.
Pesar o Endo colocar e o Agar colocar no Becker com H2O.
Pesar o mFC colocar e o Agar colocar no Becker com H2O.

Vista dos componentes da unidade de filtrao.
1. Colocar 100ml da amostra em uma proveta;
2. Colocar a membrana no suporte;
3. Colocar 100ml da amostra no suporte e ligar a bomba de vcuo;
4. Aps a filtrao retirar a membrana do suporte cuidadosamente sem virar e
colocar numa placa de petri auto clavada.
5. Levamos as placas de petri e as membranas para a capela e transferimos as
membranas filtrantes com a amostra para os meios cuidadosamente sem
deixar bolhas, em seguida colocamos as placas identificadas meio Endo e
meio mFC na estufa com a membrana virada para baixo e aguardamos 24h
para que os nutrientes agissem conforme as suas caractersticas.







3.4. Anlise dos dados

Aps as placas terem ficado na incubadora analisamos:
UFC (Unidade formadora de colnia).
Meio Endo de Cultura

Cor Vermelho 01 Bactria Outras
cores Encontramos 5 pontos que
podem ser fungos coliformes totais
e encontramos 9 pontos brancos
que podem ser fungos

Meio mFc: UFC

Encontramos 1 verde fungo
3 Azuis fungo ou bactrias







4. Concluso
Atravs de anlises feitas e concludas, com os resultados anotados e comparados
conforme descrio acima, a amostra est contaminada, a mesma foi coletada de uma possa
de gua do estacionamento do Senai-cic. Conforme comparativo visual foi detectada colnias
de fungos e bactrias (coliformes), pode-se concluir que atravs desta anlise possvel
identificar certos tipos de amostras esto contaminadas ou no, podendo assim tomar ao
quanto ao resultado final de uma anlise, seja ela positiva ou negativa.





















5. Referncias Bibliogrficas

- World Health Organization, 2004;
- American Public Health Association, 2005;
- site da Cetesb.