Ingeniera Gentica

Tcnicas que modifican las caractersticas hereditarias de un organismo en

un sentido predeterminado mediante la alteracin de su material gentico
La formacin de nuevas combinaciones de genes por el aislamiento de un fragmento
de DNA, la creacin en l de determinados cambios y la reintroduccin de este
fragmento en el mismo organismo o en otro. Cuando los genes nuevos son
introducidos en las plantas o animales, los organismos resultantes pasan a llamarse
transgnicos.
OBJETIVOS:
Presentar informacin con validez
cientfica, en forma clara y comprensible.
Contribuir a generar un ambiente propicio
para la reflexin analtica sobre la Ingeniera
Gentica (Tecnologa del ADN recombinante).
Promover el espritu crtico e identificar el
potencial de la investigacin biotecnolgica
para su aprovechamiento en beneficio del
mejoramiento de la calidad de vida
BASES MOLECULARES DE
LA INGENIERIA
GENTICA
HECHOS HISTRICOS DE LA
BIOLOGA MOLECULAR
1953 Watson & Crick determinacin de estructura del ADN
1966 Nirenberg, Ochoa y Khorana elucidaron Cdigo Gentico
1967 Wise y Richardson aislaron ADN ligasa
1970 Smith y Wilcox aislaron y caracterizaron Hind III
1973 Stanley Cohen y H. Boyer pusieron ADNr en bacterias
1974 Demostracin directa de deleccin gnica humana
1975 Edward Southern Southern Blotting
1977 Chow & Roberts, Sharp Intrones-Exones ADN codificante
1978 Y. W. Kan & A. M. Dozy RFPL diag. prenatal, oncogenes
1980 Maxam-Gilbert & Sanger Mtodos de Secuenciacin
1982 Tabaco, la primera planta modificada genticamente
1983 Kary Mullis concibe el PCR / Fred Sanger y colegas
publican la secuencia del fago lambda
2000 26 de junio se presenta 90% borrador genoma humano
2001 26 de enero borrador genma del arroz Oriza sativa
.
Marcadores
Ingeniera Gentica
Tecnologa
del ADN
Frmacos
Anti-cncer
Diagnsticos
Cultivo de
Clulas
Vegetales
Transferencia
de genes en
animales
Sntesis
de Sondas
de ADN
Localizacin
desrdenes
genticos
Clonacin
Solucin de
crimenes
Produccin de
Protenas humanas
Terapia
Gnica
Bancos de
ADN, ARN
Protenas
Mapas de
Genomas
completos
Biologa
Molecular
Sntesis de Nuevas
Protenas
Nuevos
Antibiticos
Nuevas
Plantas y
Animales
Nuevos
Alimentos
Recursos humanos
qumicos raros
BIOTECNOLOGA
genoma
Clula
cromosomas
genes
los genes
contienen
instrucciones
para hacer
protenas
ADN
protenas
las protenas actan
solas o en complejos
para realizar las
funciones celulares
ADN ADN
ARN
PROTENAS
BASES MOLECULARES
DE LA VIDA
Humanos
30,000
genes
GENOMAS
Chimpanc
30,000
genes
A. thaliana
25,000
genes
Ratn
30,000
genes
C. elegans
19,000
genes
D. melanogaster
13,000
genes
95% idntico
70%
20%
60%
De 289 genes
humanos
implicados en
enfermedades,
hay 177
cercanamente
similares a los
genes de
Drosophila.
Entre una persona y otra el ADN solo difiere en 0.2%
Todos los seres vivos tienen su informacin hereditaria
codificada en la molcula de ADN. El juego completo de
ADN de un ser vivo es el genoma. El genoma humano
cuenta con 3 mil millones de pares de bases (pb) y unos 30,000 genes, que son un
3% del genoma. El tamao del genoma es independiente de la complejidad del
organismo. El Genoma de mayor tamao es el del pez pulmonado africano Protopterus
aethiopicus con 139 mil millones de pb; una planta con flores Fritillaria assyriaca
tiene 124,900 millones de pb.
IDENTIDAD GENTICA
ESPECIES CROMOSOMAS GENES PARES DE BASES
(MILLONES)
HUMANO
(Homo sapiens)
46 (23 pares) 28-35,000 ~ 3,100*
RATN
(Mus musculus)
40 22.5-30,000 ~ 2,700
PEZ SOPLADOR
(Fugu rubripes)
44 ~ 31,000 ~ 365
MOSQUITO DE MALARIA
(Anopheles gambiae)
6 ~ 14,000 ~ 289
CHORRO DE MAR
(Ciona intestinalis)
28 ~ 16,000 ~ 160
MOSCA DE LA FRUTA
(Drosophila melanogaster)
8 ~ 14,000 ~ 137
LOMBRIZ INTESTINAL
(Caenorhabditis elegans)
12 19,000 ~ 97
BACTERIA
(Escherichia coli)
1 (cromonema) ~ 5,000 ~ 4.1
(www.jgi.doe.gov)
En humanos, aprximadamente el 3% son secuencias codificantes
COMPARACIN DE GENOMAS
ESTRUCTURA DE UN GEN
Tradicionalmente, un gen se ha
definido como un segmento de
ADN que codifica para un
polipptido o para una molcula
funcional de ARN.
Recientemente, los nuevos descubrimientos han
alterado radicalmente esta visin, para adoptar una
definicin ms vaga. De acuerdo con ello, un gen es
una secuencia de ADN genmico o de ARN que es
esencial para especificar una determinada funcin.
Para llevar a cabo su funcin el gen no necesita ser
traducido a protena, y a veces ni siquiera necesita
ser transcrito.
Molcula
de
ADN
ESTRUCTURA DE UN GEN
Elementos tpicos:
1) regin reguladora
o promotor basal (caja TATA).
o sitios de unin de proteinas
reguladoras (upstream promoter).
o Realzadores (enhancers)
o Silenciadores
2) sitio de inicio de transcripcin.
3) 5'UTR.
4) codn de inicio.
5) intrones y exones alternados, con
sitios de procesamiento aceptores y
donadores
6) Codn de paro.
7) 3'UTR.
8) seal de poli-adenilacin.
(Gomez, M. & R. Alonso-Allende, CSIC)
Regin cromosmica del gen ADAM33. (a) estructura genmica de genes a los lados de ADAM33 (barra
15 kb). (b) Estructura exon intron de ADAM33 (barra 1 kb). Polimorfismos de nucletidos nicos SNPs se
indican abajo del gen. (c ) Organizacin del Dominio del gen ADAM33 y localizacin de SNPs 3UTR
Codificantes. Tamao de exones en pares de bases (pb) (Kreeger, Y. The Scientist apr. 2003).
ESTRUCTURA GENMICA DE GENES
La Ingeniera Gentica o tecnologa del
ADNr se inici en la dcada de los 70s.
Se refiere a un grupo de tecnologas
usadas para cambiar la composicin
gentica de las clulas y mover genes a
travs de las fronteras de las especies
para producir nuevos organismos.
Se pueden aislar genes, modificarlos,
introducirlos a nuevos hospederos, y
clonarlos para obtener una ventaja
novedosa sobre el organismo natural.
INGENIERA GENTICA O ADNr
INGENIERA GENTICA: TCNICAS DEL
ADN RECOMBINANTE (ADNr)
TCNICA PROPSITO
Enzimas Restriccin Cortan ADN en puntos especficos, hacen fragmentos de ADN
ADN Ligasa Une fragmentos de ADN
Vectores Virus o fagos: llevan ADN a las clulas y aseguran replicacin
Plasmidos Clase comn de vector
Marcadores Genticos Identifican a las clulas que han sido transformadas
PCR Amplifica la cantidad de ADN de muestras pequeas
ADNc Copia de ADN a partir de ARN mensajero
Sondas de ADN Para identificar y marcar una pieza de ADN conteniendo cierta
secuencia
Sntesis Gnica Para hacer un gen de una base de datos
Gel Electroforsis Para separar fragmentos de ADN
Secuenciacin ADN Para leer la secuencia de bases de un segmento de ADN
Enzimas
de restriccin
ADN polimerasas
ARN polimerasas
Nucleasa
ADN ligasa
Kinasa
Fosfatasa
Transcriptasa reversa
TCNICAS DEL ADNr: ENZIMAS PARA
LA MANIPULACIN DEL ADN
1. Agrobacterium. Uso de la bacteria
Como "Ingeniero Gentico". La bacteria
conteniendo el inserto, infecta las clulas
de la planta produciendo la recombinacin gentica.
2. Acelerador de Partculas (Gene Gun). Un can
artificial bombardea micropartculas con el inserto,
sobre la clula.
3. Electroporacin. Uso de carga elctrica para que
el ADN atraviese la membrana nuclear.
4. Polietilenglicol. Exposicin de las membranas al
PEG, facilita el movimiento de las molculas de ADN.
5. Silicon Wiskers. Inyeccin con fibras microscpi-
cas, que atraviesan las membranas con los insertos.
Tcnicas del ADNr: SISTEMAS
DE TRANSFERENCIA GENTICA
6. Microinyeccin. Una clula
es adherida a una pipeta bajo un
microscopio y el ADN forneo es
inyectado directamente en el
ncleo usando una micropipeta
muy fina. Se usa cuando hay pocas clulas disponibles,
tales como clulas fertilizadas de huevo animal.
7. Liposomas. Los vectores pueden ser
encapsulados en
pequeas vesculas
de membrana para
introducir el ADN in vivo
en la clula.
Tcnicas del ADNr: SISTEMAS
DE TRANSFERENCIA GENTICA
Aplicaciones de la Ingeniera Gentica
Cartografa. Es el Proyecto Genoma Humano: describir todos los genes del
organismo humano, localizarlos y secuenciarlos.
Diagnstico. identificar los defectos genticos y diagnosticar o pronosticar las
enfermedades que aparecen o pudieran aparecer.
Identificacin (forense/paternidad). identificar personas o determinar la
paternidad.
Teraputica. corregir defectos genticos causantes de las enfermedades
genticas. Los "tratamientos genticos" consisten en la reparacin o
sustitucin de genes defectuosos o delecionados.
Biotecnologa. alterar los genomas de los seres vivos para dotarles de
alguna cualidad que no tenan (plantas resistentes a heladas, frutas que
maduran antes, cultivos que crecen ms,...).
Los ANIMALES son:
Caenorhabditis elegans
(100 millones pb, 19,000 genes,
Drosophila melanogaster (165 millones pb)
Mus musculus
(3 mil millones pb, 30,000 genes)
Sus scrofa
(2 mil 700 millones pb)
Los VEGETALES son:
Arabidopsis thaliana (100 millones
pb)
Nicotiana tabacum
Orizae sativa (400 millones pb)
Solanum tuberosum
Ingeniera Gentica:
MODELOS ANIMALES Y VEGETALES
Blom, N. & Rapacki K. www.dur.ac.uk/biological.sciences/Bioinformatics/dogs.htm
27.8
millones
de ha 1998
$ 2.1-$ 2.3
miles de
millones
1999
En el ao 2000 se cultivaron en
el mundo 44,2 millones de
ha de PRIMERA GENERACION
de cultivos transgnicos.
Tolerancia
herbicidas
Resistencia
insectos
Ambos
NATURALEZA DE LA MODIFICACIN GENTICA
(Counseil de la science et de la technologie, 2002).
16 99,7 44,2
TOTAL
7 6 2,8
Colza
11 12 5,3
Algodn
16 23,3 10,3
Maiz
36 58,4 25,8
Soya
Produ total
plantas
cultivos
transgn.
Sup. cult.
millones ha.
Plantas
transgnic
as
74%
19%
7%
(Counseil de la science et de la technologie, 2002).
PAS 1999 2000
% de
Cambio
Estados Unidos 28,7 30,3 +5,6
Argentina 6,7 10,0 +49,3
Canada 4,0 3,0 -25,0
China 0,3 0,5 +66,7
Africa del Sur 0,1 0,2 +100
Australia 0,1 0,2 +100
Otros <0,1 <0,1 -
TOTAL 39,9 44,2 +10,8
INDICADORES: CULTIVOS TRANSGNICOS POR
PAS EN MILLONES DE HECTAREAS, 1996 A 2000
El Algodn
Bt
creciendo en
China ha reducido el uso de
pesticidas, incrementado la
eficiencia de la produccin y
ha mejorado la salud del
agricultor (Science,295, 674 (2002).
CHINA ENCABEZA LA REVOLUCIN DE OMGs
La investigacin en cultivos de
plantas genticamente
modificadas para
alimentacin, est detenida
en muchas
partes del mundo.
En China las polticas estn
promoviendo el aumento de
capacidad de la Biotecnologa
Vegetal. Los investigadores
trabajan con ms de 50
especies de plantas, que
incluyen (arroz, trigo, papas y
mani) y con ms de
150 genes funcionales.
ANIMALES ACUTICOS TRANSGNICOS
Especies Transgenes Pases
Ctenopharingodon idella carpa triploide de grama
Cyprinus carpio carpa comn
Carassius auratus pez dorado, goldfish
Pez de Wuchang / Charr del artico / Mummychog / Walleye
Pangio kuhli locha gigante / Esox lucio lucio del norte
Oncorhynchus mykis trucha arcoiris, O. kisuth salmn
Salmo salar salmn del Atlntico
Oreochromis spp tilapia
Artemia spp pulga de agua
Macrobrachium rosenbergii camarn de agua dulce
Penneus indicus camarn blanco
Haliotis kamtschatkana abaln japones
Haliothis rufescens abaln rojo
Mytilus edulis almeja azul
Crassostrea virginica ostra oriental
Crassostrea gigas ostra del Pacfico
Genes marcadores
Hormona de
crecimiento
Polipeptido
anticongelamiento
Cecropina
Interferon
Fitasa
Factor VII de
coagulacin humana
Genes reporteros
para contaminantes
GnRH antisentido
(liberacin Hormona
Gonadotropina)
USA
Canad
Cuba
Reino Unido
Francia
Noruega
China
Japn
Corea
India
Israel
Hallmark, E. 2003, ISB News Report, april
ARROZ DORADO con beta caroteno de
genes de narciso y de Erwinia uredovora,
pigmentos que se transforman en pro-
vitamina A al ser ingeridos.
ARROZ fortificado con un gen de la ferritina.
ARROZ con aa esenciales
Ingeniera Gentica:
NUEVOS ALIMENTOS
(ISB, 2001, oct; Netlink, 2000).
(Pearson, H. Nature, 26 april 2002).
ARROZ con enzima lactoferrina de leche
humana, que puede ser utilizada para mejorar
las frmulas de leche infantil. Los nios la
necesitan para usar eficientemente el hierro y
pelear contra las infecciones
ARROZ con altos niveles de tolerancia a
diferentes condiciones ambientales de estrs.
Se insertaron dos genes fusionados de trehalosa
de E. Coli y un promotor tejido especfico
dependiente del estrs. Los genes de trehalosa
permiten la produccin de arroz an si est
estresado por frio, sequa o altos niveles de
salinidad e incrementa la produccin en 20%.
El azcar trehalosa ayuda a estabilizar
molculas biolgicas: lpidos, enzimas y otras
protenas, en organismos en condiciones de
estrs. La composicin qumica de los granos no
cambia (PNAS Online, 27 nov. 2002).
Ingeniera Gentica NUEVAS PLANTAS
Salmn transgnico por
hormona de crecimiento.
Producido por AF Protein Inc. Cuenta con el promotor de la
protena de anticongelamiento de otra especie de pez. Crece de
4 a 6 veces ms rpido que un salmn no transgnico. Tiene un
20% en mejoramiento de la eficiencia de conversin del
alimento.
Ingeniera Gentica:
NUEVOS ALIMENTOS
(ISB, 2001, oct; Netlink, 2000).
(Hoag, H. Nature, 27 enero 2003).
VACAS LECHERAS con incremento de
protenas. En Nueva Zelanda se clonaron
vacas con vulos mejorados genticamente,
para mejorar la produccin del queso y crema,
aumentando dos veces la kappa casena,
crucial para hacer la cuajada y de 20% ms de
beta caseina, que mejora la accin del cuajo
Implicaciones ticas de
la Manipulacin Gentica en Plantas
Se refieren al hecho de informar o no al consumidor de que se trata de
productos manipulados genticamente. Son desconocidos los efectos que
tendrn estos alimentos en el ser humano ya que se trata de especies
nuevas, no surgidas naturalmente.
Implicaciones ticas de
la Manipulacin Gentica en Animales
Las mayores crticas se han dirigido contra la disminucin de la
biodiversidad de las especies clonadas.
Poblacin muy homognea, que podra sucumbir completamente ante
una epidemia, pues sta afectara por igual a todos los ejemplares.
Todos los trabajos deben ser sometidos a un anlisis en el que se
comparen los beneficios con el sufrimiento del animal.
Clonacin Animal
Transgnesis.
Variante de la recombinacin gentica, se interviene en el patrimonio
gentico de un ser con adicin de nuevos genes y alteracin por
tanto, de sus caractersticas.
Se rompe totalmente la barrera natural entre las especies, y es
tericamente factible insertar genes en casos que es imposible que
se den en la naturaleza.
La transgnesis debera considerarse ticamente ilcita debido a que
supone una grave transgresin contra la naturaleza. Adems no se
postulan grandes beneficios ni a corto ni a largo plazo, salvo la mera
curiosidad de ver como se comporta la naturaleza en estos casos
Implicaciones ticas de
la Manipulacin Gentica en
Microorganismos
Manipulacin Gentica de seres vivos se crean nuevas especies. En el
caso de los microorganismos se podran estar construyendo nuevos
patgenos y con ello nuevas enfermedades.
Proliferacin de nuevos microorganismos con caractersticas peculiares
y los consecuentes peligros para la especie humana. Entre ellos figuran la
introduccin de genes productores de neoplasias malignas.
Es previsible la formacin de microorganismos de una virulencia
extraordinaria y resistentes a la teraputica usual conocida.
Implicaciones ticas de
la Manipulacin Gentica en Humanos
Mientras que los beneficios potenciales de la ingeniera gentica son
considerables tambin lo son sus riesgos
La ingeniera gentica ofrece a este nivel, esperanzas fundadas de que en
un futuro prximo se puedan tratar con xito algunas enfermedades
especficas.
Dado que todas las actuaciones de la terapia gnica tienen un claro fin
teraputico, a priori son moralmente lcitas. Esta licitud desaparece cuando
se usan los hombres a modo de "conejillos de indias", desapareciendo el fin
teraputico.
Actuaciones sobre el Genoma Humano
Se llama genoma a la totalidad del material gentico de un
organismo. El genoma humano posee entre 50 000 y 100 000 genes
distribuidos entre los 23 pares de cromosomas de la clula somtica
humana.
Cada cromosoma puede contener ms de 250 millones de pares de
bases de DNA, y se estima que la totalidad de genoma humano
tiene 3000 millones de pares de bases.
La investigacin del genoma, representa un hecho claramente
positivo. Los anlisis prenatales sirven para determinar si un
embrin lleva o no una tara gentica. El estudio puede prevenir
futuras actuaciones teraputicas, en este caso es ticamente lcito,
porque se busca un fin teraputico en el anlisis.
En algunos casos, un anlisis gentico puede tener como objetivo
un tratamiento que como consecuencia del diagnstico obtenido
puede conducir al aborto. Por esto para determinar la licitud de estas
actuaciones hay que preguntarse cul es el fin de las mismas.
Existen diferentes argumentos que tratan de justificar la interrupcin del
embarazo por motivos eugensicos:
El caso de la tesis que sostiene que el nacimiento de nios minusvlidos
sera irresponsable.
Los nios con taras no se incluyen dentro de los nios deseados.
Todas estas justificaciones y otras similares son inaceptables ya que
ignoran totalmente el respeto a la dignidad de cada ser humano.
La Declaracin Universal sobre el Genoma y Derechos Humanos, en el
artculo 10 dice que: "Ninguna investigacin relativa al genoma humano ni
sus aplicaciones, en particular en las esferas de la biologa, la gentica y la
medicina, podrn prevalecer sobre el respeto de los derechos humanos, de
las libertades fundamentales y de la dignidad humana de los individuos o, si
procede, de los grupos humanos". Con esto se ratifica la ilicitud de las
actuaciones eugensicas
Discriminacin Gentica
Se estn usando como mtodo de discriminacin, hecho que aparte de
ilegal, moralmente es inaceptable.
Muchas compaas de seguros estn haciendo anlisis genmicos de
los peticionarios de seguros de vida. Con este fin buscan el mayor
beneficio al discriminar (excluyndolos o con tasas abusivas), a los que
parece que tienen alguna mayor predisposicin a enfermedades graves
o a muertes prematuras.
Las empresas: no contrataran a un obrero cuyos genes revelaran que
concluira pronto su vida til.
Las personas: podran guiarse por la gentica a la hora de escoger una
pareja que encajara con ellos.
Clonacin Humana
La generacin de una entidad biolgica idntica a otra
entidad: es decir, a la obtencin de seres humanos
genticamente idnticos a un ser humano ya existente.
Mientras la clonacin reproductiva dejara nacer al
individuo clonado, la as llamada clonacin
teraputica lo habra fabricado para experimentar
con l y luego destruirlo, lo cual es un acto que
atenta gravemente contra el respeto debido a todo
individuo humano, incluso al que es producido
por clonacin
Fabricndonos
Casi sin que nos demos cuenta, los cientficos han llegado a un punto en
el que no slo seran capaces de clonar seres humanos, sino que podran
modificar genes en embriones para producir seres superiores.
Los problemas ticos que plantean estas tcnicas afectan
fundamentalmente a la dignidad humana. Estas tcnicas plantean una
serie de preguntas sobre qu significa "ser humano", sobre las relaciones
familiares y entre generaciones, el concepto de individualidad y el
tratamiento de los nios como objetos.
Cientficos de la Universidad de
California han conseguido multiplicar
por seis la expectativa de vida de un
gusano, gracias a una terapia gentica.
El nematodo del experimento comparte
muchas caractersticas genticas con
nuestra especie, por lo que la proeza
puede en principio escalarse a nivel
humano y aumentar nuestra
expectativa de vida hasta 500 aos sin
perder la juventud.
En busca de la Inmortalidad
Eugenesia
Mejoramiento del Patrimonio Hereditario
Tecnologa Segura ?
Para crear una alteracin gentica a travs de empalmes de genes es necesario
romper y reconstruir directamente el cdigo gentico por procedimientos que
nunca podran ocurrir en la naturaleza. Lejos de ser precisas, estas alteraciones son
realmente azarosas. En la mayora de los casos, la funcin del gen que se altera no se
conoce completamente, sus interacciones con otros procesos bioqumicos en el
organismo son oscuras, y no se pueden predecir los efectos a largo plazo
No hemos sido suficientemente advertidos por el DDT, la talidomida, dioxinas,
plutonio, Chernobyl, la enfermedad de las vacas locas, las abejas asesinas, los
clorofluorocarbonados, el asbesto...?
La ausencia de conocimiento de peligro no debe
confundirse con la ausencia de peligro.
Los gobiernos tienen que comprender que
estn legislando para los hijos de otras
personas, no slo los propios.
La responsabilidad de los cientficos
En el pasado, los cientficos fueron motivados
por la inspiracin del descubrimiento
cientfico..
Ahora, sin embargo, la presin sobre los
cientficos es econmica y es de tal magnitud
que los genetistas han abandonado su
preocupacin principal por la vida humana.
Bioindustria
La sociedad tiene que promover, tambin en el mundo de la
investigacin y la ciencia, valores y principios fundamentales. Los
derechos humanos valen para todo hombre.
La ciencia ofrece a la humanidad un nmero creciente de
descubrimientos. Cada nueva frontera conquistada abre nuevas
posibilidades. Orientar bien todo este cmulo de saberes depende de la
tica. No basta con ensear en la universidad lo que es posible
hacer, sino lo que es correcto. El respeto al hombre, a cada hombre,
desde que inicia su existencia como cigoto hasta que muere, debe
ser el criterio de discernimiento fundamental para juzgar las
acciones. Fuera de ese respeto podrn darse descubrimientos
importantes, pero ser mucho ms lo que se pierda. No vale la pena
vivir en un mundo tcnicamente perfecto y ticamente inhumano.
Reflexin Final
GRACIAS