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Delvotest
Testes de difuso padro
para a deteco de substncias antibacterianas no leite.
Introduo
Medicao de gado leiteiro para cura ou preveno de
doenas, conduzir resduos do medicamento no leite por
um certo perodo de tempo. Uma concentrao muito alta
de tais resduos indesejvel, ambos do ponto de vista de
sade e por razes tecnolgicas, relacionados especifica
situao dentro da indstria leiteira. Ento, h necessidade
de um sistema de teste simples e confivel para descobrir
tais resduos, a indstria leiteira e fazendeiros tomam toda
a precauo para prevenir sua presena no leite. Para estes
propsitos Gist-brocades desenvolveu testes padres para
detectar a presena de antibiticos e resduos de sulfa no
leite. Este teste chamado DELVOTEST
e oferece
vantagens sem igual.
Formatos do teste
DELVOTEST
P e DELVOTEST
. Se um
calo for usado, deve ser posicionado de tal modo que a
metade do fundo das ampolas fiquem bem imersas na
gua durante todo o perodo de incubao. A temperatura
da gua deve ser checada no nvel do meio de cultura e
deve ser mantida em 64.0 C 0.5C.
DELVOTEST
AMPOLAS
Contedo
4 blocos (DELVOTEST
).
Adicione um tablete nutriente para cada recipiente com
ajuda do dispensador ou pina, tenha certeza que cada
recipiente contenha um e somente um tablete. Devolva
os tabletes excedentes para o frasco, adicione o bloco de
espuma e cpsula de slica-gel e feche o frasco
firmemente.
Usando uma seringa dosadora apropriada para 0.1 ml de
leite isento de antibitico (e. g. reconstitudo, leite em p
livre de antibitico, obtido do fornecedor de
DELVOTEST
um teste padro, ser necessrio determinar este
tempo, somente ocasionalmente. (e. g. uma vez cada
duas semanas). O tempo certo quando a cor prpura
nos 2/3 mais baixos do teste desapareceu
completamente. Naquele momento a cor no est
completamente amarela, mas tem um aspecto amarelo
plido. Quando a incubao continua alm deste ponto,
a cor gradualmente mudar para o amarelo.
A cor com uma amostra controle negativa sempre ser
completamente amarela, quando o teste lido no tempo
recomendado. Este tempo para DELVOTEST
P: 2
horas e para DELVOTEST
no um
mtodo de teste quantitativo. Embora o teste seja
padronizado, considerando o seu desempenho
diretamente depois da produo, condies durante o
teste para outras situaes e tempos maiores podem
conduzir para uma de sensibilidade um pouco diferente.
Assim, os valores da Tabela 1 devem ser considerados
como uma indicao aproximada e no significam
estarem precisamente corretos a cada teste.
Princpio do teste
O meio de cultura contm um nmero padro de esporos
de bactrias da cepa Bacillus stearothermophilus var.
calidolactis C953. Esta cepa foi selecionada porque
muito sensvel a muitos antibiticos e em particular por
penicilina e outros componentes beta-lactamicos.
Quando o teste mantido resfriado, os esporos
permanecem em boas condies durante muitos meses.
Na adio de nutrientes selecionados e de um aumento
da temperatura para 64C, os esporos germinaro e se
multiplicaro com a formao de cido. Quando
suficiente cido formado, a cor do indicador muda de
prpura para amarelo. Porm, se a amostra de leite
contiver uma substncia inibidora como um antibitico,
esta substncia difundir no meio de cultura e, quando
presente em uma concentrao suficiente, causa uma
inibio do processo de multiplicao e assim produo
cida. A cor do teste neste caso no mudar para
amarelo: permanecer prpura quando a concentrao
do inibidor est acima do limite de deteco do teste
para aquele inibidor e atingir uma cor entre prpura e
amarela, quando a concentrao do inibidor est ao
redor do limite de deteco. O desempenho do
organismo de teste que inclui germinao, crescimento e
formao de cido depende da temperatura da
incubao. Ambos muito altos e muito baixos a
temperatura causa uma resposta mais lenta e assim
conduzir para um tempo de teste mais longo. Tal
temperatura abaixo do ideal, pode tambm afetar a
sensibilidade do teste para certos compostos.
Amostragem
Uma amostra deve ser representativa do lote de leite
que ser investigado. Algum deve cuidar para misturar
o leite cuidadosamente e para evitar a formao de
bolhas de ar ou espuma. O teste projetado para uma
quantidade de amostra de 0.1 ml. A sensibilidade no
muito afetada pela quantia exata mas aconselhvel
limitar a divergncia para um mximo de 10%. As
pipetas descartveis, so fornecidas com o teste de
ampola entregue na quantidade certa, quando so
seguidas as instrues para uso. O nvel de leite na
pipeta neste caso coincidir com a margem pequena no
plstico. Gotas, penduradas na pipeta devem ser
removidas das extremidades do recipiente de leite. A
amostra no deve conter qualquer espuma ou bolhas de
ar. Sob nenhuma circunstncia a mesma pipeta
descartvel deve ser usada para mais de uma amostra.
Como a quantia de amostra pequena, uma gota
restante de um precedente, contendo antibitico, pode
causar a amostra um resultado incorreto. Evite
contaminao da seringa por manipulao muito rpida.
Como uma alternativa para as pipetas disponveis, uma
seringa de dosagem de auto-limpeza especial (ex.
Micro/pettorTM) pode ser usada. O carregamento com
esta seringa muito pequeno, menos que 0.1%, e no
causar problema
4
Controle de Amostras
Para estar certo das condies corretas da abertura do
teste ou para determinar o timo tempo de incubao,
uma amostra controle pode ser testada junto com as
amostras de leite sob investigao. Esta amostra deve
consistir em leite que est livre de qualquer substncia
inibidora. Padres de controles negativos esto
disponveis no fabricante de DELVOTEST
. No use
gua como controle negativo.
Limites de Deteco
Na tabela 1 o limite deteco de DELVOTEST
, P e SP
para um nmero de antibactrias determinado, quando
lido na hora que a cor prpura do teste de controle com
leite isento de antibitico muda para amarelo plido
(tempo de controle) e quando o teste lido no tempo
determinado. DELVOTEST
P: 2 hora e DELVOTEST
SP: 2 horas ou 3 horas.
Tabela 1. Nvel de deteco mnimo de Delvotest
P e SP
DELVOTEST
P DELVOTEST
SP
Antibitico * Controle
tempo
2 horas tempo de
controle
2 horas 3
horas
Penicilina G 0.0025
Penicilina G * * 0.004
Cloxacilina 0.015-0.025
Dicloxacilina 0.015
Oxacilina 0.01
Nafcilina 0.005-0.01
Ampicilina 0.003-0.004
Amoxicilina 0.004
Cefapirina 0.005
Cefalonio 0.01-0.015
Cefalexina 0.04-0.06
Cefacetril 0.02-0.03
Cefaperazon 0.04-0.06
Tetraciclina 0.05-0.1
Oxitetraciclina 0.05-0.2
Clortetraciclina 0.05-0.1
Tilosina 0.04-0.15
Eritromicina 0.3-1.0
Lincomicina 0-1-0.3
Spiramicina 1.0-5.0
Gentamicina 0.2-0,8
Neomicina 0.3-1.0
Dihidrostreptomicina 2.0-5.0
Kanamicina 7.5 - n. s.
Cloramfenicol 2.5-5.0
Sulfametazina n.s.
Sulfadimetoxina n.s.
Sulfatiazol n.s.
Sulfadiazina n.s.
Dapsone n.s
Trimetoprima 0.2-0.5
0.003 0,002
0.005 0,003
0.025 0,015
0.02 0.01
0.01-0.015 0,005
0.01 0,005
0.005 0.002-0.003
0.005-0.006 0,002
0.008-0.01 0,005
0.015-0.02 0.005-0.01
0.06-0.1 0.04-0.06
0.03-0.04 0.02
0.08 0.04
0.2-0.3 0.1
0.3 0.1
0.25-0.3 0.1-0.15
0.1-0.3 0.01-0.02
0.5-1.5 0.05
0.4-1.0 0.1
5.0-n.s 0.2
1.0-4.0 0.1-0.3
1.0-5.0 0.1-0.2
n. s 0.3-0.5
n. s 2.5
5.0-7.5 2.5
n.s 0,025
n.s 0.05
n.s 0.05
n.s 0.05
n.s 0,001
0.5-1.5 0.05
0.0025 0-0025
0.003-0.004 0.003 - 0.004
0.015-0.025 0.02-0.025
0.01-0.015 0.01 -0.015
0.01 0.01
0.005-0.008 0.01
0.003-0.004 0.003-0.005
0.003-0.004 0.003-0.005
0.005-0.008 0.005-0.01
0.01-0.02 0.015-0.025
0.06-0.1 0.06-0.1
0.02-0.04 0.02-0.04
0.06-0.1 0.06-0.1
0.2-0.4 0.3-0,6
0.2-0.4 0.4-0,5
0.2-0.4 0.3-0.6
0.03-0.05 0.1
0.1-0.15 0.25
0.2 0.3-0.4
0.35-0.75 n. s.
0,2-0.4 0.4-0.5
0.3-1.0 0.4-2.0
1.5-3.0 2.5-10.0
7.5 n.s.
7.5 7.5-10.0
0.05-0.1 0.1-0.2
0.05-0.1 0.1
0.05-0.1 0.1-015
0.05-0.1 0.1
0.001-0.004 0.004-0.008
0.1-0.3 0.5
*concentrao dadas em partes por milhes (g/ml ou mg por litro de leite)
* * concentrao em Unidades Internacionais por ml de leite
Controle tempo: tempo ao qual o controle branco mudou para amarelo
n.s.: no sensvel, limite de deteco acima p.p.m.
5
Armazenamento de amostras de leite
Se no for possvel testar a amostra de leite dentro de
algumas horas, deve ser armazenado no refrigerador ou, se
no testado no mesmo dia, em um freezer.
Confirmao
Para confirmar a presena de antibiticos beta - lactamicos
em uma amostra de leite encontrada como positiva,
prossiga como segue: misture um ml da amostra de leite
com 0.1 ml de uma soluo de 10 Unidades Internacionais
de penicilinase tipo 1 (ex. Bacillus cereus) por ml de gua e
teste 0.1 ml desta mistura com DELVOTEST
.
Se este teste der uma cor amarela, confirmada a
presena de um antibitico beta - lactamico (penicilina G,
ampicilina, cloxacilina, cefapirina, cefuroxima, etc.) na
amostra de leite. De um modo semelhante, a presena de
sulfonamidas e combinaes relacionadas, podem ser
confirmadas testando 0.1 ml de uma mistura de 1 ml de
amostra de leite e 0.1 ml de uma soluo aquosa que
contm 1 mg do sal de sdio de cido de p-aminobenzoico.
Uma cor amarela do teste repetido indica a presena de um
sulfonamida, um sulfone ou - em antifolate na amostra de
leite.
Leite anormal
H uma possibilidade pequena do resultado do teste estar
incorreto por causa da presena de assim chamadas
substncias inibidoras naturais no leite. Tais substncias
esto presentes na teta da vaca em concentraes
aumentadas depois de parir (em colostro), no caso de uma
infeco do bere (mastite), ao trmino do perodo de
lactao e parte do sistema de defesa da vaca contra
infeces. Estas substncias tm atividades
antibactericidas e causaro uma inibio do sistema de
testes bacterianos em geral. Isto demonstrado melhor no
disco de ensaio onde a presena de inibidores naturais na
amostra de leite provoca uma zona de inibio de 1 - 3 mm
ao redor do disco. Esta uma indicao que durante, o
tempo necessrio para o teste o movimento externo destas
substncias do disco no meio de cultura (difuso) cobrem
s uma pequena distncia. O mesmo acontecer no
DELVOTEST
menos afetado por nitrato de sdio onde uma diluio de 1:
1 basta para neutralizar seu efeito.
Tabela 2. Concentraes de alguns desinfetantes e
detergentes, dando um DELVOTEST
positivo.
Cloro Ativo. 200 ppm
Iodo 150 ppm
Perxido de Hidrognio. (30%) 600 ppm
Cetrimida (bromato de amonia quaternario) 100 ppm
Farmquat (5% cloridato de amonia quaternario) 10000 ppm
Rodalon (cloridato de amonia quaternario) 30 ppm
Niroklar (baseado em cido fosfrico - agente limpeza) 500ppm
Calgonita (5% potssio dicloro-iso-cianureto) 1 00 ppm
Sublimato (cloridato de mercrio) 20 ppm
Dicromato de Potssio 20 ppm
Nitrato de Sdio 50 ppm
6
Controle de qualidade
Cada lote de DELVOTEST
SP - NT
Instrues Ilustradas para Uso de Delvotest
ampola
1. Separar o nmero
desejado de ampolas com
uma tesoura. Tomar
cuidado para no
danificar a pelcula
protetora (lacre de folha
de alumnio) das ampolas
remanescentes.
4. Esvaziar o contedo da
seringa na ampola
marcada correspondente
amostra pressionando o
mbolo da seringa
lentamente para baixo.
Usar uma nova pipeta
descartvel para cada nova
amostra de leite.
2. Abrir as ampolas
perfurando o lacre de
folha de alumnio com a
seringa. Marcar as
ampolas para identificar
as amostras.
5. Verificar a temperatura do
aparelho incubador (64C
0.5C). Colocar cada
ampola dentro de um dos
orifcios apropriados do
incubador.
Registrar o tempo e ajustar
o timer para 3 horas ou para
o tempo de controle.
3. Colocar uma nova
pipeta descartvel na
seringa. Pressionar o
mbolo da seringa para
baixo o mximo possvel,
inserir a ponteira da pipeta
na amostra de leite e
deixar que o mbolo volte
lentamente sua posio
inicial sob presso da
mola.
6. Fazer a leitura de cor da
parte inferior
correspondente a 2/3 do
gar slido nas ampolas
aps o tempo de incubao
requerido.
Delvotest
Cores e Resultados
Negativo Limite de deteco Positivo
Para maiores informaes
favor entre em contato com:
DSM Food Specialties
Dairy Ingredients
P.O. Box 1, 2600 MA Delft
The Netherlands
Tel.: +31-15-2792355
Fax: +31-15-2793200
E-mail: info.dairy-ingredients@dsm.com
www.dsm-dairy.comy
ou nosso representante local :
"As informaes contidas neste folheto so precisas e completas segundo nossos melhores conhecimentos.
No entanto, nenhuma das informaes fornecidas deve ser considerada como garantia ou especificao de qualidade".
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Boletim Tcnico
MCI 12 INCUBATOR
Introduo:
Delvotest um kit de teste para a deteco de substncias antibacterianas tais como resduos de
antibiticos e sulfonamidas em leite. A operao do teste requer o uso deste incubador a 64 C,
conforme procedimento do teste de antibitico.
(Delvotest Procedimento - boletim).
O MCI 12 Incubator - ( 115 / 230 Vac + /- 10%, 50/60Hz, Potncia 20 W) com termmetro integrado
e funes de tempo e alarme foi desenvolvido exclusivamente para ampolas do Delvotest.
- Modelos em 12V dc e 24V dc tambm so disponveis. (Consulte a Globalfood para mais
informaes).
Cuidado! Evite perigo de choques eltricos aterrando corretamente o MCI 12 Incubator. Evitar
tambm contato com gua ou outros lquidos. No abra ou repare o equipamento. Qualquer duvida
ou mau funcionamento contate a Globalfood.
Antes do uso Voltagem 120 / 230 V:
O incubador deve ser utilizado em lugares fechados em superfcie plana e aterrado corretamente.
Conecte o plug do MCI 12 tomada local de 115 a 230 V, 50/60Hz. Assegure-se do fcil manuseio
do cabo de fora. O MCI 12 automaticatimente utilizar a voltagem local. Aps acionar o boto
On/Off do equipamento, este iniciar seu pr-aquecimento sendo indicado no mostrador digital como
segue: [Pr] [HEAt}. Aps acionado o boto de liga-desliga On-Off uma luz indicativa ( Vermelho em
230V e Amarelo em 115V) permanecer ligada. Aps 5 minutos de funcionamento, esta luz
comear a piscar indicando que a temperatura se encontra prxima de uso do equipamento
(Temperatura de 64 C). Todas as funes permanecero desativadas durante o pr-aquecimento.
Para obter resultados confiveis, aconselha-se a manter por mais 5 minutos em aquecimento para
que a temperatura permanea estvel.
O Incubador passa a operar no modo contnuo e no mostrador pode ser verificada a temperatura
atual [64C]/[cont], estando o equipamento pronto para ser utilizado.
Aps o uso:
O MCI 12 tem a facilidade de poder ser desligado na chave liga e desliga On/Off. Para
permanncia de longo prazo sem utilizao, recomendado desligar o cabo de fora. Para reiniciar
o MCI 12 de qualquer modo de programa ou modo erro, desconecte da tomada por no mnimo 5
segundos.
Preveno para uso:
O MCI 12 deve ser utilizado em uma sala com uma temperatura constante (10 a 35 C) e no deve
ser colocado prximo a janelas ou locais de circulao intensa de ar. Assegure-se que as ampolas
estejam inseridas completamente. Quando da realizao freqente de testes, o equipamento deve
permanecer ligado.Para melhores resultados recomenda-se no adicionar ampolas quando j
iniciado o teste, pois poder ocorrer queda da temperatura.
Alarme sonoro e desligamento automtico:
Durante o modo contnuo, o MCI 12 pode ser programado para soar um alarme [Snd] e/ou para
desligamento automtico. [Auto].
Para programar o alarme sonoro e/ou desligamento automtico deve-se:
- Pressionando rapidamente a tecla PROGRAM a programao ser ativada, mostrando a
memria atual
- A seguir, pressione rapidamente uma vez mais a tecla PROGRAM que alterna, entra [Snd
para alarme sonoro e [Auto] para desligamento automtico, aps o tempo estipulado.
- Para memorizar o mostrador, teclar e manter pressionado a tecla PROGRAM por 2 segundos
( um bip ser acionado por 2 segundos enquanto estiver sendo pressionado a tecla). Aps
aproximadamente 5 segundos, o mostrador retornar ao modo contnuo.
Programao do tempo de durao e final de teste:
Durante o modo contnuo, o temporizador do MCI 12 pode ser programado para o auto-
desligamento e alarme sonoro:
- Pressionando rapidamente a tecla TIME SET, ativa o modo de programao e mostra o valor
de memria atual.
- Pressionando rapidamente por sucessivas vezes a tecla, alterar o valor desde [1:45] at
[3:15] com incremento de tempo de 15 minutos cada.
- Para memorizar o tempo de teste, pressione e mantenha a tecla por 2 segundos (um bip ser
acionado por 2 segundos enquanto estiver sendo pressionada a tecla). Aps
aproximadamente 5 segundos, o mostrador retornar ao modo contnuo.
Utilizao -Incio e finalizao do teste ( timer):
- Para iniciar o teste com o programa definido nos passos anteriores pressione START/STOP
por um segundo. O mostrador alterar em ciclos os valores atuais de temperatura, funes
de alarme e desligamento automtico e o tempo restante do teste.
- Para parar o programa pressione a tecla STOP. No mostrador piscar a palavra [Stop],
confirme pressionando uma vez mais a tecla e mantenha pressionada. Se durante um
perodo de 5 segundos no ocorrer a confirmao, o programa continuar em operao.
- Se o MCI 12 for programado com alarme sonoro [Snd], o alarme somente ser ouvido
quando do trmino do programa [End]. Para parar o programa sonoro, pressione STOP. Isto
tambm far com que o MCI 12 retorne ao menu inicial ( modo contnuo). Pressionando uma
vez mais o START/STOP reinicializar o temporizador com a ltima programao.
- Se o MCI 12 teve definida a programao de desligamento automtico, um sinal sonoro ser
emitido e o mostrador indicar OFF. Para parar o alarme (e o programa), pressione STOP.
Isto tambm far com que o MCI 12 retorne ao menu inicial (modo contnuo). Pressionando
uma vez mais o START/STOP reinicializar o temporizador com a ltima programao.
- Os valores de memria permanecem estabelecidos mesmo quando desligado o equipamento
da tomada.
Ajuste e verificao de temperaturas:
O MCI 12 tem estabelecido como temperatura 64 C, podendo ser realizados ajustes dentro da
faixa de 63 a 65 C. Para reprogramar a temperatura padro:
- Pressione as teclas PROGRAM e TIME SET ao mesmo tempo para aumento de
temperatura.
- Pressione as teclas PROGRAM e START/STOP, ao mesmo tempo, para reduzir a
temperatura.(Aps 5 segundos o mostrador retornar para o modo contnuo). Na placa
metlica do incubador existem dois orifcios para uso de termmetros externos para efeito de
verificao, com termmetros de bulbos ou digital.
Mensagens de erro:
O MCI 12 pode diagnosticar possveis falhas durante a operao. Mensagens podem aparecer no
mostrador indicando erro. O incubador permanecer em funcionamento. Para reinicializar o
equipamento, desconecte da tomada por no mnimo 15 segundos. Contate a Globalfood para
suporte tcnico.
As seguintes mensagens podero aparecer:
[Lo t] Temperatura muito baixa
[Hi t] Temperatura muito alta
[Err1] Voltagem local fora da faixa permitida
[Err2] Freqncia local fora da faixa permitida.
Estocagem e transporte:
O MCI deve ser transportado cuidadosamente, evitando choques mecnicos.
Limpeza:
Utilize somente pano seco ou algodo no MCI 12. Nunca utilizar gua ou outros lquidos.
Informaes adicionais contate:
Representante DSM:
Globalfood Sistemas Ingredientes e Tecnologia para Alimentos Ltda.
Rua Alberto Sampaio, 45 Vila Santa Catarina
04373-030 So Paulo S.P.
Telefone: (011) 5564-1100 Fax: (011) 5564-1101
e-mail: vendas@globalfood.com.br
Ou seu vendedor