PROTENAS DE SUPERFICIE DE NEUMOCOCO: CUANDO EL CONJUNTO ES MAYOR QUE LA SUMA
DE SUS PARTES I. Pe 'rez-Dorado *, S. Galn-Bartual y J.A. Hermoso Departamento de Cristalografa y Biologa Estructural, Instituto de Qu'mica-F'sica Rocasolano, CSIC, Madrid, Espaa Correspondencia: Juan A. Hermoso, Departamento de Cristalografa y Biologa Estructural, Instituto Qu'mica-F'sica Rocasolano, CSIC, Serrano 119, 28006-Madrid, Espaa Tel.:. +34 917 459 538; Fax: +34 915642431; E-mail: xjuan@iqfr.csic.es * Direccin actual: Divisin de Estudios Estructurales, MRC Laboratory of Molecular Biology, Hills Road, Cambridge CB2 0QH, Reino Unido.
Palabras clave: las protenas de unin a colina; LPXTG protenas; lipoprotenas; no clsica protenas de la superficie; Streptococcus pneumoniae; protenas de la superficie; estructura tridimensional Aceptado 16 de mayo 2012 DOI: 10.1111/j.2041-1014.2012.00655.x
RESUMEN Protenas superficiales expuestas de las bacterias patgenas son considerados como posibles factores de virulencia a travs de su contribucin directa a las interacciones patgeno hospedar. Cuatro familias de pro-tenas de superficie decoran la superficie de la clula del patgeno humano Streptococcus pneumoniae . Adems de las lipoprotenas y protenas LPXTG , tambin presente en otras bacterias gram-positivas , el neumococo presenta la protena de unin a colina ( CBP ) de la familia y las protenas de la superficie no clsicos ( NCSPs ) . Los principios bsicos comunes presentan caractersticas estructurales especficas que permiten su anclaje a la envoltura celular a travs de la interaccin no covalente con residuos de colina del cido lipoteicoico y cido teicoico . Programa de apoyo es un trmino genrico para las protenas menos caracterizadas que muestran funciones de pluriempleo en la superficie neumoccica que carecen de un lder pptido y el motivo de membrana ancla. Teniendo en cuenta la evolucin incesante de especies microbianas bajo la presin selectiva del uso de antibiticos , se requiere un conocimiento detallado de la interaccin entre el patgeno y las clulas husped para el desarrollo de nuevas estrategias teraputicas para combatir las infecciones neumoccicas . Este artculo revisa los avances recientes en la investigacin de las estructuras tridimensionales de las protenas neumoccicas expuestos en la superficie . La naturaleza modular de algunos de ellos produce una gran verstil - dad y la sofisticacin de las funciones de virulencia que, en la mayora de los casos, no se puede deducir por el anlisis estructural de los mdulos aislados. INTRODUCCIN El neumococo Streptococcus pneumoniae - un componente normal de la microflora del tracto respiratorio superior humano y un patgeno oportunista - Puede , en condiciones adecuadas, causar infecciones graves y potencialmente mortales como la neumona , la meningitis y la septicemia ( Cartwright, 2002 ) . La carga de la enfermedad es alta , tanto en los pases desarrollados y los pases en vas de desarrollo , y los grupos de alto riesgo incluyen nios , ancianos y pacientes inmunocomprometidos . Aproximadamente un milln de nios menores de 5 aos mueren a causa de infecciones neumoccicas cada ao. A pesar de la disponibilidad de un gran nmero de antibiticos , la mortalidad y la morbilidad por Las infecciones por S. pneumoniae se mantienen altos . Un requisito previo para el desarrollo de nuevas estrategias de control es el conocimiento detallado de la interaccin entre el neumococo y las clulas husped. Esta interaccin est mediada principalmente por los componentes externos de este bac - brio : el polisacrido capsular , la pared celular bacteriana y las protenas ancladas en la pared celular . El polisacrido capsular , que cubre la superficie del neumococo , se ha reconocido como una condicin sine qua non de la virulencia (Austrian, 1981 ) y es el objetivo de las vacunas neumoccicas existentes. Hasta la fecha , 94 cpsulas serolgicamente distintas han sido recono - nized ( Henrichsen , 1995 ) y a pesar de la amplia diversidad en sus composiciones de azcar y los vnculos , todo realizar la misma funcin principal de reducir OPSO - nophagocytosis al limitar el acceso de los receptores fagocticas para complementar unido a la pneumoniae de la pared celular de S. ( Yother , 2004 ) . La pared celular neumoccica contiene un murena de varias capas ( peptidoglicano ) con un cido teicoico unido covalentemente ( TA ) , y un cido lipoteicoico unido a la membrana ( LTA ) . Los pptidos de la murein son reticulados , ya sea directamente oa travs de un puente interpeptdicos . Las unidades de repeticin de TA y LTA tienen una estructura qumica idntica , y hasta el momento se trata de una propiedad nica de neumococos ( Vollmer , 2007 ) . La estructura de la unidad que se repite en neumoccica TA y LTA son de qumica inusual complejidad y actualidad de colina, un amino-alcohol , que es abundante en las clulas eucariotas y slo rara vez se encuentran en las bacterias (Garca et al. , 1998 ) . Tres grupos principales de protenas de la superficie han sido identificados en S. pneumoniae : ( i ) alrededor de 50 lipoprotenas , ( ii) hasta 18 LPXTG consenso secuencia de transporte de pro-tenas que estn unidos covalentemente a travs de sortase al peptidoglicano de la pared celular , y ( iii ) hasta 16 protenas de unin a colina ( CBP ) ( fig. 1 ) . Adems de los tres grupos principales de protenas de la superficie , la envoltura celular de los neumococos est decorado con otro grupo de protenas que carecen de pptido lder clsico y membrana de anclaje motivos . Estas protenas se denominan no clsica protenas de superficie ( NCSPs ) y resultados recientes indican que tambin podran jugar un papel relevante en la subversin de la funcin fisiolgica de las protenas derivadas del husped ( Bergmann y Hammerschmidt , 2006 ) . MODULARIDAD Y FUNCIN DE PROTENAS DE SUPERFICIE neumoccica protenas LPXTG Protenas de superficie de transporte un motivo LPXTG son covalentemente anclado a la pared celular bacteriana . Para llegar a su destino final , estas protenas de superficie requieren tanto un pptido seal N -terminal y una seal de C -terminal de la pared celular de clasificacin ( CWS ) ( Bergmann y Hammerschmidt , 2006 ; . Dramsi et al, 2008 ; Lfling et al, 2011 . ) . El pptido seal N - terminal de la protena promueve la translocacin a travs de la membrana bacteriana . El CWS consiste en tres motivos indispensables : un LPXTG.
secuencia ( donde X es cualquier aminocido ) , seguido de un tramo hidrofbico de aminocidos , y una cola corta positivamente cargada ( Dramsi et al . , 2008 ) . Despus de la translocacin a travs de la membrana , la protena que alberga el CWS est retenido dentro de la membrana a travs de su dominio hidrofbico C-terminal y la cola de carga positiva . En esta etapa , una enzima asociada a la membrana con actividad de transpeptidasa , una clase Un sortase o srta , une covalentemente la protena de la superficie de la membrana ( Mazmanian et al , 2000 ; . . Dramsi et al , 2008 ) . La disponibilidad de datos de secuencias genmicas de cepas neumoccica ha facilitado la identificacin de los 18 y 15 protenas con anclaje peptidoglicano LPXTG - como adorno en las cepas TIGR4 y R6 , respectivamente (Tabla 1 ) ( Tettelin et al, 2001 ; . Frolet et al. , 2010 ; Lfling et al, 2011 ) . . El espectculo estructural y topolgica disponible la informacin de que las protenas LPXTG neumoccicas son en su mayora protenas modulares con funciones enzimticas o adhesina . Adhesinas ayudan al patgeno para adjuntar a las clulas husped y tejidos mediante el reconocimiento de sacrido host o molculas de protena en un paso que es fundamental para establecer con xito una infeccin ( Lfling et al. , 2011 ) . Pro protenas con actividad enzimtica se componen de dominios individuales o mltiples que intervienen en el reconocimiento de acogida molculas que localizan la enzima a su sustrato y el mdulo ( s ) con actividades catalticas . Hay un total de seis glicosilhidrolasas ( STRH , nana, BgaA , endod , SPUA y Eng ), una enzima con liasa polisacrido activi-dad ( SpnHL ), y cuatro proteasas ( ZmpA , ZmpB , ZmpC y Ptra ) . Sus soportes son glicoprotenas , que son fundamentales para la mayora de los procesos biolgicos, ing incluyendo el sistema inmunolgico humano ; glicosaminoglicanos , que son polisacridos largos que forman parte de la matriz extracelular ; y el glucgeno intracelular, que es una molcula que sirve como almacenamiento de energa a largo plazo (van Bueren et al, 2007 ; . . Caines et al, 2008 ; . Lamm - erts van Bueren et al, 2011 ; Garbe y Collin, 2012). La hidrlisis de estos sustratos , por tanto, puede tener efectos dramticos tales como comprometer el sistema inmune del husped , la promocin de eventos de adhesin y migracin mediante la revelacin de los receptores de adhesin , o la creacin de una fuente de nutrientes para el patgeno ( Garbe y Collin, 2012). Las lipoprotenas Las lipoprotenas bacterianas (LPS ) se modifican en su extremo N - terminal con la adicin de un grupo diacylglyceryl N - acilo que las ancla a la membrana . La va biosinttica es ubicuo en las bacterias , lo que refleja
Figura 1 Modelo esquemtico de las diferentes clases de protenas expuestas en la superficie y su ubicacin en la pared celular neumoccica. A la izquierda, representacin esquemtica de la disposicin modular en protenas de la superficie de neumococo. Derecho, sobre la membrana citoplasmtica, murein multicapa (peptidogly-can) se encuentra con cidos teicoicos covalentemente (TA), y cidos lipoteicoicos unidas a la membrana (LTA). Las unidades de repeticin de TA y LTA de Streptococcus pneumoniae tienen una estructura qumica idntica. Mientras lipoprotenas (por ejemplo mALX) se mantienen ancladas a la membrana, las protenas LPXTG (por ejemplo SPUA) estn unidos covalentemente a peptidoglicano. La pared celular neumoccica consiste en una membrana de fosfolpidos (LM), peptidoglicano (PG), y cidos teicoicos y lipoteicoicos. Protenas de unin a colina (por ejemplo, Pza) de anclaje para la envoltura celular a travs de interacciones no covalentes con residuos de colina de cidos teicoicos. Protenas de la superficie no clsicos (por ejemplo, Eno) carecen de pptido lder clsico y motivos de membrana de anclaje. el papel esencial de estos discos en la supervivencia bacteriana . Las LPs contienen un pptido de seal de exportacin seguido por una caracterstica estructural comn , la LipoBox , que se reconoce antes de la modificacin de lpidos . LipoBox con-tiene una secuencia de consenso de cuatro aminocidos de : [ LVI ] [ ASTVI ] [ GAS ] [C ] . Este es el residuo de cistena que se modifica con un grupo diacylglyceryl para permitir el anclaje de membrana ( Oudega et al . , 1993 ) . Proyectos de secuenciacin del genoma en combinacin con la informtica analiza predecir hasta 46 discos de ms de 2.000 genes que codifican reportados en los genomas de S. pneumoniae (tabla 2 ) ( Hoskins et al, 2001 ; . . Tettelin et al , 2001 ; Babu et al. , 2006 ) . Curiosamente , la mayor parte de los discos parecen tener un papel en la aptitud bacteriana . En el genoma TIGR4 , entre los 46 predijo LPs
( Tettelin et al, 2001 ; . . Babu et al, 2006) 26 son transportadores ABC ( transportistas ATP vinculante cassette ) . Estos componentes ABC , junto con otros seis discos implicados en la unin y transformacin de sustrato , son esenciales para el mantenimiento de la condicin fsica de S. pneumoniae , un comensal obligado que se ve obligado a nutrientes anfitrionas scav -Enge debido a sus rutas biosintticas incompletas ( Bergmann y Hammerschmidt , 2006 ) . Seis discos estn involucrados en los procesos de plegamiento de la protena o la activacin de molculas de superficie celular , tales como sortase ( STRC - 3 ) , que ha demostrado ser especficamente implicado en la formacin del pilus ( Manzano et al . , 2008 ) . Seis discos permanecen sin caracterizar sin funcin conocida , y dos LPs defectuosas sin dominios catalticos tambin se predice ( Babu et al. , 2006 ) . Tabla 1 LPXTG protenas identificadas en Streptococcus pneumoniae nombre de Protena UniProtKB-locus Funcin / bibliografa Cdigos de entrada PDB
STRH P49610 - SP_0057 - STRH ( 1312 aa) BN- acetilglucosaminidasa . La hidrlisis de 2YL5 , 2YL6 , 2YL8 , Q8DRL6 - spr0057 - STRH ( 1312 aa) glicoconjugados de IgA1 , lactoferrina humana , 2YL9 humana , 2YLA , 2YLL , componente secretor , y la glicoprotena A1 - cido ( Clarke 3rpm et al , 1995 . ; Jiang et al, 2011 . ; Pluvinage et al, 2011 . ; Garbe y Collin, 2012 ) ZmpC Q97T80 - SP_0071 - ZmpC -MMP- 9 metaloproteinasa de zinc . Cleaves matriz humana proteasa ( 1856 aa ) metaloproteinasa 9 ( Tettelin et al , 2001 ; . . Oggioni et al , 2003 ) PAVB Q97T70 - SP_0082 - PAVB ( 857 bis) Adhesin implicado en la colonizacin nasofarngea Q8DRK2 - spr0075 ( 1161 aa ) ( Hoskins et al , 2001 ; . . Tettelin et al , 2001 ; Jensch et al, 2010 . ; Paterson y Orihuela, 2010 ) SPUA Q97SQ7 - SP_0268 ( 1280 aa ) La hidrlisis del glucgeno intracelular ( Hoskins et al , 2001 ; . 2J44 , 2YA0 , 2YA1 , Q8DRA6 - spr0247 - Pula ( 1256 aa) Tettelin et al, 2001 . ; van Bueren et al, 2007 . ; Frolet 2YA2 et al, 2010 . ; Lammerts van Bueren et al. , 2011 ) SpnHL Q54873 - SP_0314 ( 1066 aa) liasa polisacrido . La degradacin del tejido conectivo 1C82 , 1EGU , 1F1S , Q8CWU3 - spr0286 - hysa ( 1078 aa ) ( Berry et al , 1994 ; . . Jedrzejas et al , 1998 ; Mitchell , 1BRP , 1N7N , 1N70 , 2000 ; Ponnuraj y Jedrzejas , 2000 ; Botzki et al, 2004 . ; 1N7Q , 1N7R , 1N7P , Rigden et al. , 2006 ) 1OJM , 1OJN , 1OJO , 1OJP , 1F9G , 1LOH , 1W3Y , 1BRP , 2BRV , 2BRW Eng Q2MGH6 - SP_0368 - SpGH101 ( 1767 aa) Endo- aN - acetilgalactosaminidasa . Hidroliza 3ECQ anfitrin Q8DR60 - spr0328 - SpGH101 ( 1767 aa) glicoprotenas ( la T antgeno- o-O glicanos Core- 1 -Type ) . Adhesina Posible ( Umemoto et al , 1977 ; . . Caines et al , Endo D Q97S90 - SP_0498 - endod ( 1646 aa) de 2008; Willis et al, 2009 . ; Frolet et al. , 2010 ) Endo -b N- acetilglucosaminidasa . La hidrlisis de 2W911 , 2W921 , 2XQX , Q8CZ52 - spr0440 ( 1659 aa ) glicoconjugados de la transferrina , fetuina y IgG ( Tettelin 3GDB et al , 2001 ) ( Hoskins et al , 2001 ; . . . Muramatsu et al , 2001 ; Abbott et al, 2009 . ; Jiang et al, 2011 . ; Garbe y Collin, 2012 ) PRTA Q97RY6 - SP_0641 - PRTA ( 2140 aa) Pared celular asociada proteinasa serina. La protelisis de Q8DQP7 - spr0561 ( 2144 aa) lactoferrina humana . Adhesina Posible ( Bethe et al , 2001 . ; Hoskins et al , 2001 . ; Frolet et al, 2010 . ; Mirza y col . , 2011 ) BgaA Q9KGU0 - SP_0648 - BgaA ( 2233 aa) b- galactosidasa . La hidrlisis de glicoconjugados de IgA1 , Q8DQP4 - spr0565 ( 2228 aa) lactoferrina humana , componente secretor humano , y glicoprotena a1- cido ( Zahner y Hakenbeck , 2000 ; Hoskins et al , 2001 . ; Garbe y Collin, 2012 ) ZmpB Q9L7Q2 - SP_0664 - ZmpB (1906 aa) metaloproteasa de zinc . Adhesina Posible (Hoskins et al. , Q8DQN5 - spr0581 (1876 aa) de 2001; Frolet et al. , 2010 ) ZmpA Q97QP7 - SP_1154 - ZmpA - IgA1 proteasa inmunoglobulina A1 ( Wani et al , 1996 ; . Tettelin proteasa ( 2004 aa ) et al , 2001 . ; Mistry y Stockley , 2006 ) Q59947 - spr1042 - IgA1 proteasa ( 1963 aa) MucB Q97PV0 - SP_1492 - mucB ( 202 bis) de dominio de mucina vinculante (Hoskins et al, 2001 ; . Tettelin 3NZ3 Q8CYK3 - spr1345 ( 202 AA ) y otros, 2001 . ; Du et al. , 2011 ) PCLA Q8CYI8 - spr1403 - PCLA ( 2551 aa) Adhesin (Hoskins et al, 2001 ; . . Paterson et al, 2008) Nana P62575 - SP_0463 - Nana ( 1035 aa) neuraminidasa o sialidasa . Se hidroliza de 2VVZ , 2YA4 , 2YA5 , P62576 - spr1536 - Nana ( 1035 aa ) glicoconjugados de IgA1 , lactoferrina humana , 2YA6 humana , 2YA7 , 2YA8 componente secretor , y la glicoprotena - A1 cido . 2W20 , 3H71 , 3H72 , Adhesina Posible ( Camara et al , 1994 ; . Hoskins 3H73 et al , 2001 . ; Xu et al, 2008 . ; Hsiao et al, 2009 . ; Frolet et al, 2010 . ; Gut et al, 2011 . ; Garbe y Collin, 2012 ) PSRP Q97P71-SP_1772-PSPR (4776 aa) La adhesin y la invasin de clulas epiteliales. antifagoctica actividad (Tettelin et al, 2001;.. Shivshankar et al, 2009)
La plasmina y de unin a fibronectina de la protena A. Adhesin (Tettelin et al, 2001;.. Yamaguchi et al, 2008) adhesina Posible (Hoskins et al, 2001;.. Frolet et al, 2010) 1PDB entradas 2W91 2W92 y referente para secuenciar con UniProtKB cdigo de entrada Q93HW0 que tambin corresponde a una secuencia de la cepa endod TIGR4. Ambas secuencias endod de la cepa TIGR4 (Q93HW0 y Q97S90) presentan el 98,2% de identidad de secuencia. Nombre del locus No se encontr ordenado para la entrada Q93HW0. Protenas de la superficie no clsicos
Un subconjunto de la superficie neumoccica expuesto protenas carece de anclaje convencional o secretora sea-les . Estas protenas , el NCSPs (Tabla 3 ) , se describen principalmente como protenas citoplasmticas con roles intra - celulares que no estn involucrados en las interacciones husped- patgeno . Sin embargo , una vez que se encuentran por mecanismos desconocidos en la superficie celular , las funciones de visualizacin NCSPs pluriempleo y con frecuencia actan como adhesinas . La unin del PACN para albergar molculas , como la fibronectina ( PAVA ) o plasmingeno ( Enolasa ) , promueve la invasin neumoccica y la propagacin de la infeccin ( Holmes et al, 2001 ; . . Ehinger et al, 2004) . Hasta la fecha , se han identificado slo seis NCSPs ( Tabla 3 ) . Sin embargo , la falta de seales de secrecin o dominios de anclaje de la pared celular que hace difcil para las herramientas de bioinformtica para detectar estos NCSPs . Es , por lo tanto , cree que su nmero est muy subestimado. Avances en la investigacin y tecnolgicos de futuro en la deteccin directa de protenas de superficie descubrirn nuevas NCSPs mostrando diferentes roles pluriempleo . Protenas de unin a colin Una caracterstica nica de S. pneumoniae es su requerimiento nutricional para la colina ( Tomasz , 1967), que ha sido tomado desde el medio de cultivo ( Bean & Tomasz , 1977 ) y se incorpor en las unidades de repeticin de TA y LTA ( Behr et al . , 1992 ) . Reemplazo de colina en el medio de crecimiento con etanolamina , si bien cumple el requisito nutricional , causa una variedad de alteraciones funcionales y morfolgicas . Residuos de fosforilcolina de neumo - cocos TA y LTA son esenciales para el ptimo
actividad de murein hidrolasas ( Lpez y Garca, 2004 ) , participan en muchas funciones fisiolgicas de S. pneumoniae ( Lpez et al, 1982 ; . . Lo 'pez et al, 2004) , y sirven como un ancla para CBPs situado en la superficie ( Swiatlo et al, 2004 . ) . Miembros de la familia de protenas de unin a colina comparten una organizacin modular ( fig. 2 ) que consta de un mdulo biol - camente activa y un mdulo de unin a colina , que ancla estas protenas de la envoltura celular a travs de una interaccin no covalente con la colina resi-duos de cidos teicoicos . El mdulo de unin a colina , colocado en el extremo N - terminal o C - terminal , se compone de repeticiones homlogas de alrededor de 20 resi-duos de aminocidos ( Garca et al . , 1988 , 1998 ) , la familia de CBP incluye algunos factores de virulencia implicada en la adhesin celular y la colonizacin ( ver Tabla 4 ) . Entre los aproximadamente 15 miembros de la CBP ( dependiendo de la cepa ) la estructura cristalina de rayos X de la pro - tena completa (que lleva tanto el catalizador y los mdulos de carcter defi-nitivo colina) est disponible slo para tres de ellos ( Pza , CBPF y LytC ) . Estructuras tridimensionales de los dominios diferentes han sido reportados por otros cuatro principios bsicos comunes .
ESTRUCTURA TRIDIMENSIONAL DE PROTENAS LPXTG Glicosil hidrolasas STRH , nana, endod , SpGH101 y SPUA La informacin estructural se ha informado de cinco protenas LPXTG con actividades glicosil hidrolasa . Son STRH (exo -BN- acetilhexosaminidasa ) , Nana ( neuramidasa o sialase ) , endod (endo -BD- glucosaminidasa ) , SpGH101 (endo - aN - acetylgalacto - saminidase ) y SPUA ( pullulanasa ) , que pertenecen a Tabla 2 lipoprotenas identificados en Streptococcus pneumoniae Cdigos de entrada PDB nombre Protena UniProtKB-locus Funcin / bibliografa SP_0092 Q97T63 - SP_0092 ( 491 aa ) transportador ABC ( Hoskins et al , 2001 ; . . Tettelin et al , 2001 ) Q8DRJ6 - spr0083 -ABC -SBP (514 bis) SP_0112 Q97T43 - SP_0112 ( 268 aa) El aminocido transportador ABC ( Tettelin et al. , 2001 ) Q8DRI6 - spr0101 -ABC -SBP ( 265 bis) SP_0148 Q97T12 - SP_0148 ( 276 bis) transportador de protena-cido amino de unin al sustrato ABC Q8DRG2 - spr0146 -ABC -SBP ( 276 bis) transporte (Hoskins et al, 2001 ; . . Tettelin et al, 2001) SP_0149 Q97T11 - SP_0149 ( 284 aa ) Lipoprotena ( Hoskins et al , 2001 ; . . Tettelin et al , 2001 ) Q8DRG1 - spr0147 -ABC -SBP ( 284 bis) SP_0191 Q97SX2 - SP_0191 ( 189 bis) de protena no caracterizada putativos ( Tettelin et al. , 2001 ) SP_0198 Q97SW6 - SP_0198 ( 152 bis) putativos aminopeptidasa D- estereoespecfica (Hoskins et al. , 3GE2 2001 ; Tettelin et al . , 2001 ) SP_0366 P35592 - SP_0366 -alia- exp1 - PLPA (661 bis) sistema de transporte de la cadena ABC. Vinculante Oligopptido - protena Alia ( Tettelin et al , 2001 ; . . Babu et al , 2006 ) SRTC- 3 ; SRTD Q97SB7 - SP_0468 - SRTD ( 283 aa ) sortase ( Hoskins et al , 2001 ; . Tettelin et al , 2001 ; . Manzano 2W1K et al, 2008 . ; Moschioni et al. , 2008 ) SP_0620 Q97S05 - SP_0620 ( 266 AA ) de aminocidos transportador ABC ( Hoskins et al , 2001 ; . Tettelin Q8CWT0 - spr0545 -ABC -SBP ( 271 bis) et al. , 2001 ) SP_0629 Q97RZ7 - SP_0629 ( 238 bis) de protena no caracterizada putativos (Hoskins et al, 2001 . ; Q8DQQ1 - spr0554 ( 238 aa ) Tettelin et al . , 2001 ) SP_0659 Q97RX4 - SP_0659 ( 188 bis) protena de la familia tiorredoxina (Hoskins et al, 2001 ; . Tettelin Q8DQN9 - spr0576 ( 197 aa ) et al . , 2001 ) Sistema de transporte ABC LivJ Q97RQ0 - SP_0749 - livJ ( 386 bis) ( Tettelin et al. , 2001 ) PPIA Q97RN2 - SP_0771 ( 267 bis) peptidil - propil cis - tras EMPRESAS isomerasa , tipo ciclofilina (Hoskins Q8DQG5 - spr0679 - Ppia ( 267 AA ) y otros, 2001 . ; Tettelin et al . , 2001 ) Lipoprotena de unin SP_0845 Q97RH0 - SP_0845 ( 350 aa ) Sustrato ( Hoskins et al , 2001 ; . Tettelin Q8DQC2 - spr0747 ( 374 aa ) et al . , 2001 ) SP_0859 Q97RG2 - SP_0859 ( 307 bis) superfamilia DUF979 . funcin desconocida SP_0899 Q97RC4 - SP_0899 ( 290 bis) de protena no caracterizada putativos (Hoskins et al, 2001 . ; Q8CYX1 - spr0799 ( 290 aa ) Tettelin et al . , 2001 ) PRSA Q97R51 - SP_0981 ( 313 bis) maduracin de la protena proteasa , putativo. Protena foldasa prsA Q8DQ24 - spr0884 - PRSA- PPMA ( 313 aa ) ( Hoskins et al , 2001 ; . . Tettelin et al , 2001 ) SP_1000 Q97R36 - SP_1000 ( 185 bis) protena de la familia tiorredoxina (Hoskins et al, 2001 ; . Tettelin Q8DQ10 - spr0904 ( 191 aa ) et al . , 2001 ) ADCII Q97R34 - SP_1002 ( 305 bis) de lipoprotenas de Adhesin . Putativo protena de unin a laminina - . 3CX3 Q8DQ09 - spr0906 - LMB ( 311 aa ) protena de unin glutamina - ( Hoskins et al , 2001 ; . Tettelin et al , 2001 . ; Loisel et al. , 2008 ) SP_1032 Q97R09 - SP_1032 ( 341aa ) Iron- compuesto ABC transportador de iones ( Tettelin et al. , 2001 ) Q8DPY6 - spr0934 ( 341aa ) Nane Q97Q95 - SP_1330 - Nane ( 233 bis) epimerasa N- acetilmanosamina - 6 - fosfato ( Tettelin et . al, 2001 ) GlnH Q97Q37 - SP_1394 ( 271 aa) El aminocido transportador ABC ( Tettelin et al. , 2001 ) Q8DPB7 - spr1251 - glnH ( 271 bis) PstS 1 Q97Q31 - SP_1400 - PstS1 ( 292 bis) transportador de fosfato ABC, protena de unin a fosfato , Q8DPB1 - spr1257 - PstS1 ( 292 bis) putativo Unin a fosfato de la protena PstS - 1 ( Hoskins et al , 2001 . ; Tettelin et al . , 2001 ) AATB Q97PU3 - SP_1500 - AATB ( 278 aa) El aminocido transportador ABC (Hoskins et al, 2001 ; . Tettelin Q8DP50 - spr1353 - glnH ( 278 aa ) et al . , 2001 ) Alib P0A4G0 - SP_1527 - alib ( 652 bis) Oligopptido transportador ABC ( Alloing et al, 1994 ; . Hoskins PsaA spr1382 - P0A4G1 - alib ( 652 bis) P0A4G2 - SP_1650 - PAAS ( 309 AA ) y otros, 2001 . ; Tettelin et al . , 2001 ) Manganeso transportador ABC , manganeso vinculante adhesio 'n 1PSZ , 3ZTT P0A4G3 - spr1494 - PAAS ( 309 bis) o lipoprotenas de adhesina de superficie neumoccica A ( Berry & Paton , 1996 ; Dintilhac et al , 1997 . ; Lawrence et al , 1998 . ; Novak et al . , 1998 ) SP_1683 Q97PE6 - SP_1683 ( 442 aa ) Azcar transportador ABC ( Hoskins et al , 2001 ; . . Tettelin et al , Q8DNU8 - spr1527 -ABC -SBP ( 442 bis) de 2001) nanE2 P65520 - SP_1685 - nanE2 ( 232 bis) epimerasa N- acetylmannosidase - 6 - fosfato ( Nane ) ( Tettelin et al . , 2001 ) SP_1690 Q97PE1 - SP_1690 ( 445 aa ) transportador ABC ( Hoskins et al , 2001 ; . . Tettelin et al , 2001 ) Q8DNU2 - spr1534 -ABC -SBP ( 445 bis) SP_1796 Q97P48 - SP_1796 ( 538 bis) ABC transportador ( Tettelin et al. , 2001 ) SP_1826 Q97P18 - SP_1826 ( 355 bis) ABC transportador ( Tettelin et al. , 2001 ) SP_1870 Q97NY1 - SP_1870 ( 318 bis) de hierro compuesto transportador ABC , pernease protena (Hoskins Q8DNJ4 - spr1685 - FATC ( 318 AA ) y otros, 2001 . ; Tettelin et al . , 2001 ) SP_1872 Q97NX9 - SP_1872 ( 321 bis) de hierro compuesto transportador ABC , de fijacin del hierro compuesto Q8DNJ2 - spr1687 - FatB ( 321 aa ) protena ( Hoskins et al , 2001 ; . . Tettelin et al , 2001 ) AMIA P18791 - SP_1891 - amiA ( 659 bis) Oligopptido transportador ABC ( Alloing et al, 1990 , 1994 . ; Q8DNI1 - spr1707 - amiA ( 659 bis) Hoskins et al, 2001 . ; Tettelin et al . , 2001 ) Rafe Q97NW2 - SP_1897 - Rafe ( 419 bis) transportador de azcar , protena de unin de azcar ( Tettelin et al. , 2HEU , 2HFB , Q8DNH8 - spr1712 - MIPYME ( 419 aa) 2001 ) 2HQ0 , 2I58 SP_1916 Q97NU6 - SP_1916 ( 167 bis) protena de la familia PAP2 ( Babu et al. , 2006 ) SP_1945 Q97NS2 - SP_1945 ( 206 bis) protena hipottica ( Babu et al. , 2006 ) OxaA2 Q97NP5 - SP_1975 - oxaA2 ( 308 aa ) protena de la familia SpoIIIJ ( Hoskins et al , 2001 ; . . Tettelin et al , Q8DNE1 - spr1790 - oxaA2 2001 ) ( 308 bis) OxaA1 Q97NI6 - SP_2041 - oxaA1 ( 274 aa ) protena de la familia SpoIIIJ ( Hoskins et al , 2001 ; . . Tettelin et al , Q8DN93 - spr1852 - oxaA1 ( 276 bis) de 2001) PstS P0C2M5 - SP_2084 - pstS 2 ( 291 bis) Fosfato transportador ABC ( Novak et al, 1999 ; . Orihuela Q8DN64 - spr1895 - pstS2 ( 291 aa ) et al . , 2001 ) MALX P59213 - SP_2108 - mALX ( 423 bis) Maltosa / maltodextrina transportador ABC , 2xd2 , 2XD3 / Protena de unin maltodextrina - P59214 - spr1918 - mALX ( 423 bis) la maltosa ( Puyet y Espinosa, 1993 ; Abbott et al. , 2010 ) ADCA O05703 - SP_2169 -ADCA ( 501 aa ) Zinc transportador ABC ( Dintilhac et al. , 1997 ) Q8CWN2 - spr1975 -ADCA ( 501 bis) SP_2197 Q97N69 - SP_2197 ( 335 aa ) transportador ABC ( Hoskins et al , 2001 ; . . Tettelin et al , 2001 ) Q8DMZ7 - spr2003 ( 335 bis) Tabla 3 Identified protenas de superficie no clsicos en Streptococcus pneumoniae
Factor de adherente neumoccica y la virulencia A. Adhesin (Holmes et al, 2001 ; . Bergmann y Hammerschmidt , 2006 ; . Nobbs et al, 2009) Enolasa . Enlaza plasmina (plasmingeno ) ( Bergmann et al, 2001 ; . . Ehinger et al, 2004 ; Bergmann y Hammerschmidt , 2006 ; . Nobbs et al, 2009) Gliceraldehdo 3 - fosfato deshidrogenasa ( Hoskins et al , 2001 ; . . Tettelin et al , 2001 ) 6-fosfogluconato deshidrogenasa . Adhesina putativo. Enlaza las clulas epiteliales ( Daniely et al, 2006 ; . . Nobbs et al, 2009) Serina proteasa implicada en la colonizacin nasofarngea ( Hoskins et al , 2001 ; . . Tettelin et al , 2001 ; Sebert et al , 2002 ; . . Nobbs et al , 2009 )
Figura 2 La naturaleza modular de las protenas de unin a colina (CBP). Miembros de la familia de CBP comparten un mdulo de unin a colina N-terminal o C-terminal compuesta de repeticiones homlogas de alrededor de 20 residuos de aminocidos (cajas verdes), que facilita el anclaje de estas protenas de la envoltura celular. Adems, los PCN presentan un mdulo cataltico o funcional que muestra las diferentes actividades. Los asteriscos indican las protenas para las que existe la estructura tridimensional de la protena completa. las familias de las glicosil hidrolasas 20 , 33 , 85, 101 y 13 , respectivamente . Estructuras de glicanos N secuencialmente hidrolizan STRH y Nana presentes en varias molculas de defensa del husped en concierto con otro glicosil hidrolasa , BgaA ( a b - galactosidasa) . Sustratos de STRH , Nana y BgaA identificados hasta ahora son : IgA1 , humano lactofer -rin , componente secretor humana y glicoprotena -a1 cido ( Garbe y Collin, 2012). STRH es un factor de virulencia demostrada en mltiples pantallas de modelo animal de neumona y otitis media ( Pluvinage et al. , 2011 ) . Nana se ha demostrado que desempean un papel crucial en la invasin cerebral endotelial neumoccica a travs de su dominio de lectina , y su actividad cataltica se involucrado en la formacin de biopelculas y la colonizacin ( Gut et al. , 2011 ) . Ms an , la accin combinada de SrtH , Nana y BgaA Recientemente se ha demostrado jugar un papel importante en la evasin de la muerte opsonofagoctica mediada por los neutrfilos ( Dalia et al. , 2010 ) . STRH es una enzima modular formado por dos dominios en tndem N - terminal de GH20 catalticos ( GH20A y GH20B ) y dos G5 -dominios C-terminales . GH20 dominios hidrolizan el b -(1,2 ) enlace entre N -ace - tyl -D- glucosamina ( GlcNAc ) y manosa ( Man) de varios glicoconjugados presentes en el a-( 1,3) o a-( 1,6) brazos de glicanos (Clarke et al . , 1995 ). Cada dominio GH20 consiste en un ( a / b ) 8 triosa - fosfato isomeraseb ( TIM ) barril seguido por un dominio de paquete de tres hlice (Fig. 3A ) ( Jiang et al , 2011 ; . . PLUVI - nage et al , 2011 ) . El anlisis estructural de GH20A y GH20B dominios en complejo con molculas de sustrato muestra que se unen GlcNAc -Man disacrido de la misma manera , pero hay diferencias notables en los sitios de unin - glicano all de la posicin 1 . Estas diferencias les proporcionan especificidades de sustrato distintivos : dominio GH20A reconoce las -a ( 1,3) brazos de un N- glicanos , mientras que GH20B reconoce glicanos bisectados (Clarke et al, 1995 ; Pluvinage et al, 2011 . ). . Conservacin de ambos dominios GH20 con diferentes especificidades sugiere que un dominio podra ser proporcionando el sustrato para el otro , o que la combinacin de ambas especificidades podra proporcionar el par de trabajo requerida para hidrolizar el rango de sustrato necesario ( Pluvinage et al . , 2011 ) . Tabla 4 protenas de unin a colina identificados en Streptococcus pneumoniae Cdigos de entrada PDB nombre Protena UniProtKB - locus Funcin / bibliografa CBPI Q9KGY8 - SP_0069 - CBPI ( 211 aa ) Putativo adhesina ( Gosink et al , 2000 ; . . Tettelin et al ,
PspA Q97T39 - SP_0117 - PspA ( 744 bis) de 2001; Frolet et al. , 2010 ) Factor de virulencia . Se inhibe la activacin del complemento 2PMS1 Q8DRI0 - spr0121 - PspA ( 619 aa ) ( Tu et al , 1999 ; . Mitchell , 2000 ; Hoskins et al , 2001 . ; Tettelin et al , 2001 . ; Senkovich et al . , 2007 ) CPBF Q97SI4 - SP_0377 - CpCp - CBPC ( 340 bis) Funcin reguladora de autolisis neumoccica por 2V04 , 2V05 , 2VYU , Q8DR52 - spr0337 - CBPF ( 338 aa ) inhibir la autoltico LytC muramidasa (Hoskins 2X8M , 2X8O , 2X8P et al , 2001 . ; Tettelin et al , 2001 . ; Molina et al . , 2009a , b ) CbpJ Q9KGY7 - SP_0378 - CbpJ ( 332 aa ) Putativo adhesina ( Gosink et al , 2000 ; . Tettelin et al , 2001 . ; Frolet et al. , 2010 ) CbpG Q97SH5 - SP_0390 - CbpG ( 285 bis) de funcin desconocida ( Tettelin et al. , 2001 ) CbpK Q9KGY9 - SP_0391 - CBPF ( 340 bis) putativo de adhesin ( Gosink et al, 2000 ; . Hoskins Q8DR39 - spr0351 - PCPC ( 294 AA ) y otros, 2001 . ; Tettelin et al . , 2001 ) CbpL Q97RW9 - SP_0667 ( 332 aa ) putativos de adhesin ( Hoskins et al , 2001 ; . Tettelin Q8CZ16 - spr0583 ( 329 AA ) y otros, 2001 . ; Frolet et al. , 2010 ) CbpE Q9KGZ1 - SP_0930 - CbpE ( 627 bis) la funcin crtica en la adherencia neumoccica y 2BIB , 1WRA Q8DQ62 - spr0831 - CbpE - LytD - Pza ( 627 bis) invasividad . Adhesina ( Gosink et al , 2000 ; . Hoskins et al , 2001 . ; Tettelin et al , 2001 . ; Hermoso et al . , 2005 ; Frolet et al. , 2010 ) LytB P59205 - SP_0965 - LytB ( 658 bis) la actividad N- acetilglucosaminidasa involucrado en P59206 - spr0867 - LytB ( 702 aa ) separacin de las clulas hijas ( Garca et al , 1999 . ; Hoskins et al , 2001 . ; Tettelin et al , 2001 . ; de Las Rivas et al . , 2002 ) Protena relacionada con PspC PspC -Like SP_1417 ( degenerado ) ( Tettelin et al. , 2001 ) LytC Q2MGF6 - SP_1573 - LytC ( 490 bis) la actividad Muramidasa . Funcin en la colonizacin. Virulencia 2WW5 , 2WWC , 2WWD Q8DP07 - spr1431 - LytC ( 501 bis) factor involucrado en el fratricidio ( mecanismo de competencia programada) (Garca et al , 1999 . ; Gosink et al , 2000 . ; Claverys y Havarstein , 2007 ; Prez - Dorado et al. , 2010 ) LytA P06653 - SP_1937 - LytA ( 318 aa ) N - acetylmuramoyl - L - alanina amidasa . Virulencia . 2BML , 1GVM , 1H8G , Q7ZAK4 - spr1754 - LytA ( 318 bis) Liberacin de capas y PG inflamatorio y TA de 1HCX la pared celular bacteriana . Pared celular crecer y volumen de negocio. Participa en el fratricidio (Garca et al, 1985 . ; Fernndez - Tornero y otros, 2001 , 2002 . ; Claverys y Havarstein , 2007 ; Kadioglu et al. , 2008 ) CbpA Q97N74 - SP_2190 - PspC - SpsA - CbpA Major adhesina de neumona por estreptococo . 1W9R Q8DN05 - spr1995 - CbpA - PcpA Inmunoglobulina A inactivacin ( Mitchell, 2000 ; Luo et al , 2005 . ; Hammerschmidt et al, 2007 . ; Kadioglu et al, 2008 . ; Agarwal et al, 2010 . ; Frolet et al. , 2010 ) CBPM Q8DP99 - spr1274 ( 129aa ) Putativo adhesina ( Hoskins et al , 2001 ; . . Zhang et al , 3HIA 2009 ; Frolet et al. , 2010 ) PcpA Q97NB5 - SP_2136 - PCPA ( 621 aa ) Putativo adhesina ( Snchez - Beato y col , 1998 . ; Q8DN38 - spr1945 - PCPA ( 690 bis) Hakenbeck et al. , 2009 ) CBPD Q9KGZ2 - SP_2201 - CBPD ( 448 bis) La adhesin y colonizacin nasopharingeal ( Gosink Q8DMZ4 - spr2006 - CBPD ( 448 bis) et al. , 2000 ) Entrada 1PDB 2PMS referentes a UnitProtKB entrada Q54972 correspondiente a PspA de neumococo cepa Rx1 ( Senkovich et al. , 2007 ) , que exhibe 100 % de identidad de secuencia con PspA de la cepa R6 ( UniProtKB entrada Q8DRI0 ) . NANA se forma por un laminina dominio N-terminal de G- como LEC - estao - unin y un dominio cataltico C - terminal que es responsable de la escisin de un - ( 2,3 ) - , un - ( 2,6 ) - ,
cido a-( 2,8) - vinculado silico en N-glucanos ( Gut et al. , 2011 ) . La estructura del dominio cataltico NANA ha informado solo, y en el complejo con sustrato
Figura 3 estructuras tridimensionales de protenas LPXTG neumoccicas. (A) STRH (E361Q) _GH20 mutante en el complejo con NGA2B [Protein Data Bank (PDB) 2YLA la entrada]. (B) de dominio cataltico de endod en complejo con GlcNAc-tiazolina (AP entrada 2W92). (C) endod- CBM32 dominio (AP entrada 2XQX). (D) SpnHL en complejo con disacrido hialurnico (AP entrada 1C82). (E) de dominio de mucina vinculante de MucBP (AP entrada 3NZ3). (F) de dominio cataltico de Nana en el complejo con el inhibidor de DANA (AP entrada 2VVZ). Estructura (G) SpGH101 (AP entrada 3ECQ). (H) SPUA en complejo con maltotetraosa (entrada 2YA1 PDB). Dominios / mdulos con actividad cataltica estn en rojo, por Dominios / mdulos con funcin de unin a carbohidratos conocida / supuesta estn en azul, y las molculas de ligando estn en verde. anlogos e inhibidores . Su estructura ( residuos 322-791 ) se compone de un cannica de seis palas de la hlice B - veces , con una insercin de 200 - residuo entre los segundo y tercero B - captulos de la segunda cuchilla (Fig. 3F ) ( Gut et al , 2011 . ) . La informacin estructural permitido la comprensin del mecanismo de accin de los inhibidores de la focalizacin del dominio cataltico de Nana ( Gut et al. , 2011 ) .
Escinde endod el ncleo quitobiosa presente en los N-glicanos ( Muramatsu et al . , 2001 ) , y sus sustratos identificados hasta ahora son de transferrina , fetuina e IgG ( Garbe Y Collin, 2012). La desglicosilacin de la IgG por endod se cree que contribuyen a la virulencia por la disminucin de la capacidad de estos anticuerpos para interactuar con el complemento ( Garbe y Collin , 2012 ) . Neumoccica endod es un protena multi-dominio con un dominio de GH85 N-terminal, seguido por un dominio de unin a carbohidratos de la familia 32 ( CBM32 ) , cuyas estructuras han sido resueltos de forma independiente ( Abbott et al , 2009 ; . Ab - Bott y Boraston , 2011 ) . El dominio endod - GH85 se compone de un N -terminal ( B / A ) 8 barril ( residuos 173 - 522 ), seguido por dos dominios b- sndwich, D1 ( resi - cuotas de 523 a 702 ) y D2 (residuos 703-808 ) (Fig. 3B ). El sitio de unin al sustrato consta de una ranura que se extiende a lo largo de la superficie de la protena y diverge en dos canales . El hecho de que endod tiene preferencia por glucanos ramificados ( Muramatsu et al , 2001 . ) Est de acuerdo con la presencia de un canal de unin al sustrato bisecada que debe ser capaz de acomodar los brazos de glicanos ramificados ( Abbott et al , 2009 ; . Abbott Y Boraston , 2011 ) . La actividad cataltica de Endod se probable asistido por dominios D1 , D2 y endod - CBM32 , que han sido propuestos para enlazar las molculas de hidratos de carbono y por lo tanto puede ayudar a la enzima para interactuar con su sustrato ( fig. 3C ) ( Abbott et al . , 2009 , Abbott & Boraston , 2011 ) . Escinde neumoccica SpGH101 el vnculo entre Gal- b- 1 ,3- restos GalNAc y Ser / Thr resi-duos presentes en las glicoprotenas de acogida ( el T- antgeno o Core - 1 - Type O -glicanos ) . Es un factor de virulencia que pueden ayudar a la colonizacin mediante la destruccin de la barrera de mucina y proporcionar una fuente de nutrientes ( Caines et al . , 2008 ) . La estructura de SpGH101 se resolvi en siete de los ocho dominios predichos para la enzima (residuos 119-1481 ) ( Caines et al. , 2008 ) ( Fig. 3G) . El dominio GH101 cataltico o dominio 3 (residuos 602-893 ) se pliega como una distorsionada (b / a) 8 de can con tres espirales y lneas reemplazado por un complejo arreglo de bucles. El sitio activo putativo es rica en resi-duos polares , incluidos los propuestos a ser los catalizadores , que deben ser capaces de interactuar con el sustrato . Al igual que ocurre con otros glicosilhidrolasas descritos en esta seccin , el dominio cataltico se acompaa de otros dominios con capacidad vinculante carbo hidratos putativo (dominios 1 , 2 , 5 y 6 ) , lo que probablemente participan en el reconocimiento del sustrato ( Caines et al. , 2008 ) . SPUA es una enzima de mltiples modular requerido para la plena virulencia en un modelo de ratn - pulmn de la infeccin por S. pneumoniae ( van Bueren et al . , 2007 ) . Contiene dos dominios de unin a carbohidratos N- terminales ( CBM41 - 1 y CBM41 - 2 ) y un dominio cataltico que GH13 coche -rios a cabo la hidrlisis de un - 1 ,6- branchpoints de glucgeno . Interaccin con glucgeno intracelular ha sido
propone haya de realizarse a travs de los dominios CBM41 , incluyendo glucgeno en el contexto de tipo II las clulas alveolares en el tejido pulmonar (van Bueren et al. , 2007 ) . Por agotamiento del glucgeno intracelular , el patgeno puede influir negativamente en la sntesis de surfactante (para el que el glucgeno es un precursor ) y la fuente de energa segura durante las infecciones pulmonares invasivos. La estructura de longitud completa casi SPUA en complejo con maltotetra - osa ha informado , que comprende seis de los siete dominios de la enzima y tres molculas de maltotetraosa (Fig. 3H ) ( Lammerts van Bueren et al . , 2011 ) . El dominio cataltico (residuos 573 a 1035 ) consiste en un ( a / b ) 8 barril . En el canal de unin al sustrato se encontraron dos molculas de maltotetraosa imitando el sustrato ( Lammerts van Bueren et al. , 2011 ) . Los CBM41 - 1 y CBM41 - 2 dominios (residuos 130-350 ) presentan un sitio de unin a carbohidratos construido por tres residuos aromticos . El mdulo CBM41 - 1 se orienta sobre el centro cataltico, y su sitio de unin a carbohidratos participa tanto se ampla el sitio activo y el sustrato reconocimiento. La delecin de los dominios CBM41 compromete la capacidad de la enzima para hidrolizar su sustrato , que revela que tanto cataltica y CBM41 - 1 dominios cooperan durante la catlisis ( Lammerts van Bueren et al . , 2011 ) . El CBM41 - 2 es distal desde el sitio activo y es probable que no tiene ningn efecto directo en la catlisis , aunque debera servir para anclar el glucgeno . Los resultados reportados por van Bueren et al. proporcionar una amplia informa-cin sobre el mecanismo cataltico , en el que la interaccin entre los dominios CBM41 - 1 y GH13 es clave para la actividad de la enzima . cido hialurnico liasa SpnHL
SpnHL es una de las principales protenas de la superficie entre los estreptococos . Pertenece a la familia liasa polisacrido 8 , y degrada los componentes esenciales de la matriz extracelular del husped , cido hialurnico (HA ), condroitina unsulfat - ed ( CH) y ciertos sulfatos de condroitina (CHS) . Este proceso facilita la propagacin de bacterias entre los tejidos del husped ( Rigden et al. , 2006 ) . SpnHL es una protena de cuatro dominio formado por un HA / CH / dominio de unin a CHS - N - terminal presunto seguido por un dominio espaciador , un dominio cataltico (A- dominio ) y un ( dominio B ) C - terminal que modula el acceso de sustrato a la maquinaria cataltica ( Fig. 3D ) ( Li et al , 2000 ; . Ponnuraj y Jedrzejas , 2000 ) . Los estudios estructurales produjeron 18 estructuras de la regin que contiene tanto un - dominio y dominio B , solo y en complejo con diferentes ligandos ( Berry et al , 1994 ; . . Jedrzejas et al , 2000 ; . Li et al , 2000 ; Mitchell , 2000 ; Ponnuraj y Jedrzejas , 2000 ; Nukui et al, 2003 ; . Rig- den y Jedrzejas , 2003 ; . Botzki et al, 2004 ; Rigden et al, 2006) . . Tanto un dominio (residuos 171-531 ) y B - dominio (residuos 543-893 ) construir la hendidura cataltica , cuyas propiedades permiten que se produzca la degradacin del sustrato por un mecanismo de processive : ( i) es altamente positivamente cargada, lo cual facilita la unin del sustrato de cido; ( ii ) tiene un rea negativa en su extremo que favorecer la liberacin del producto ; ( iii ) que tiene tres residuos cataltico supuestos responsables de la escisin del sustrato ; y ( iv ) que tiene un ncleo hidrfobo que permite la orientacin sustrato adecuado para la catlisis ( Li et al , 2000 ; . Ponnuraj y Jedrzejas , 2000 ; Rigden y Jedrzejas , 2003 ; . Rigden y col , 2006 ) . Adems , la flexibilidad de su arquitectura modular parece permitir un movimiento de apertura / cierre que favorecer la liberacin sustrato y la translocacin durante la degradacin processive ( Rigden y col . , 2006 ) .
Protena mucina vinculante MucBP MucBP es una protena de unin a mucina - que funciona como adhesina mediante la interaccin directa con las clulas epiteliales ( Bumbaca et al , 2007 ; . . Du et al , 2011 ) . Es probable que desempee un papel importante en la colonizacin neumoccica y la invasin de los tejidos del husped por las mucinas de unin , que son protenas glicosiladas unidos a O - que constituyen la mayor parte de la mucosidad. MucBP est formado por un dominio de unin a mucina - N- terminal ( MucBD ) y una rica en prolina dominio C-terminal ( PRD ) . Estructura de MucBD consta de una nica repeticin de unin a mucina con un pliegue similar a inmunoglobulina b - sndwich ( fig. 3E ) ( Du et al . , 2011 ) . La protena presenta tres residuos hidrofbicos que estn relativamente conservados con respecto a otros MucBPs , y que podra estar implicado en el reconocimiento de sacridos (Du et al. , 2011 ) . ESTRUCTURA TRIDIMENSIONAL DE lipoprotenas SP_0198
Estructura tridimensional de SP_0198 ha sido depositado en el Banco de Datos de Protenas (PDB ) por el Centro Centro-Oeste de Genmica Estructural . La estructura cristalina SP_0198 est formado por un motivo b- barril, seal por la base de datos CATH como una aminopeptidasa - D estereoespecfica putativo (Fig. 4A ) . SP_0198 no se ha caracterizado funcionalmente , pero mantiene el dominio DUF3642 , un importante factor de virulencia de las bacterias gram-negativas ( Punta et al . , 2012 ) . Este hecho sugiere que esta lipoprotena , podran estar involucrados en las interacciones husped- patgeno en S. pneumoniae. Sortase STRC - 3
STRC - 3 ( tambin llamado STRD ) es el nico de los tres sortases del opern de pilus rlrA con una seal de LipoBox mientras que los otros dos sortases probablemente estn vinculados a la membrana a travs de un dominio transmembrana . Sorta - ses catalizan la unin de protenas LPXTG al peptidoglicano por primera reconociendo su motivo LPXTG y posterior ataque nuclefilo sobre el vnculo Thr - Gly de la protena diana por el catalizador sortase cys - teine . STRC - 3 sortase es una estructura A / B compuesto de un ncleo B - barril rodeado por hlices . La hlice A3 se inform para actuar como una " tapa " que podra regular la interaccin STRC - 3 con sustrato (Fig. 4D ) ( Manzano et al . , 2008 ) . Experimentos de mutagnesis directos proporcionaron pruebas de que in vivo STRC podra estar involucrado en fijar - ing dos protenas del pilus ( RrgA y RRGB ) al peptidoglicano ( Neiers et al. , 2009 ) .
Receptores de unin a iones de metal - AdcAII y PsaA La regulacin por incremento del transporte de iones de metal es crtico para la supervivencia bacteriana , la deficiencia de metal induce estrs oxidativo mientras que el exceso generar toxicidad ( Moore & Helmann , 2005 ) . AdcAII ( SP_1002 ) y PsaA ( SP_1650 ) son dos receptores de unin a iones metlicos que pertenecen a la ABC permeasas grupo 9 ( Dintilhac y Claverys , 1997 ; Claverys , 2001 ) . AdcAII y PsaA Se ha reportado que tienen afinidad tanto Zn2 + y Mn2 + y sus homlogos se denominan protenas laminina - de encuadernacin en otras especies bacterianas. Las estructuras tridimensionales de AdcAII ( fig. 4C ) y PsaA (Fig. 4B ) se han reportado , ( Lawrence et al , 1998 ; . . Loisel et al , 2008 ) . Ambos presentan un pliegue similares , la principal diferencia es la conformacin de un bucle flexible que se encuentra en la entrada del sitio de unin . Su pliegue presenta dos ( b / a ) 4 dominios unidos por una rgida a- hlice (Lawrence et al, 1998 ; . . Loisel et al, 2008) . En ambas estructuras de un catin Zn2 + se encuentra en la hendidura interdominio , est estabilizado por una coordinacin tetradrica que implica His71 , His147 , His211 y
Figura 4 estructuras tridimensionales de las lipoprotenas de neumococo y no clsico T protenas de superficie . ( A) La lipoprotena SP_0198 [ Protein Data Bank (PDB ) entrada 3GE2 ] . (B ) La lipoprotena PsaA en complejo con manganeso , residuos implicados en la coordinacin de metales estn marcados en color naranja ( AP entrada 3ZTT ) . (C ) La lipoprotena AdcAII en complejo con zinc ( AP entrada 3CX3 ) , los residuos que participan en la coordinacin de metal estn marcados en rojo (D ) La lipoprotena STRC -3 ( AP entrada 2W1K ) . ( E) La lipoprotena Rafe en complejo con rafinosa , molculas ligando son de color verde ( AP entrada 2I58 ) . (F ) La lipoprotena mALX en complejo con maltoheptaosa , molculas ligando son de color verde ( AP entrada 2XD3 ) . (G ) No- clsico Enolasa protena de superficie . La protena se muestra en su estado oligomrica ( octmero ) , los monmeros se destacan en diferentes colores. Los sitios de unin tambin estn indicados para referencia ( AP entrada 1W6T ) . Glu286 , en AdcAII ; y His67 , His139 , Glu205 y Asp280 , en PsaA . A pesar de los resultados estructurales se refieren a la coordinacin de anillo Zn2 + , la afinidad de PsaA de
Mn2 + se ha reportado ( Dintilhac et al . , 1997 ) , lo que sugiere un mecanismo probable para Mn2 + estabilizacin coordinado no slo por la composicin de aminocidos del sitio de unin , sino tambin por la modulacin de la geometra del terreno ( Lawrence et al . , 1998 ) . Transportador de azcar Rafe Rafe es un componente del sistema de transporte de ABC responsable de la absorcin de la rafinosa , un derivado de sacarosa trisacrido un - galacto - Syl compuesto de galactosa , fructosa y glucosa ( Rosenow et al . , 1999 ) . La estructura cristalina de S. pneumoniae Rafe ha sido reportado ( fig. 4E ) ( Paterson et al . , 2006 ) y presenta un pliegue A / B compuesta por dos dominios . Una de las estructuras se obtuvo en complejo con Raffi - nariz revelando los residuos ( Tyr65 , Trp162 , Trp246 y Trp348 ) que eran crticas en la unin del ligando (PAT - ersona et al . , 2006 ) . Poco se sabe acerca de la funcin in vivo de esta protena , pero una cepa neumoccica Rafe - inactivo mostraron un efecto polar sobre-expresin de sus genes permeasa aguas abajo Raff y rafG (expresin 287 veces menor en el mutante ) , lo que indica la presencia de un mecanismo de cascada en el opern Raf en presencia de sustrato ( Tyx et al. , 2011 ) . Maltosa / vinculante maltodextrina - protena mALX MALX es el nico componente extracelular de S. pneumoniae que es capaz de transportar productos de degradacin de glucgeno y por lo tanto es crtico en el uso de glucgeno exgeno como fuente de carbono . La capacidad de las clulas neumoccica utilizar glucgeno ordenador no slo metabol -mente ventajoso para un agente patgeno, sino que tambin ayuda a los neumococos a invadir anfitrin atacando tipo II las clulas alveolar . Estas clulas utilizan el glucgeno como un componente clave del sistema inmune innato y como el principal precursor para la produccin de surfactante ( Cundell y Tuo - manen , 1994 ) . De esa manera , la degradacin y la absorcin de glucgeno ayudaran neumococos a crecer al tiempo que favorece la colonizacin mediante la reduccin de la respuesta del husped . Estructura mALX (Fig. 4F ) ( Abbott et al. , 2010 ) pre -senta un a / b- pliegue tpico con dos dominios principales que contienen el bolsillo de unin en la hendidura central. La estructura se obtuvo en complejo con maltohepta - osa , lo que permite la identificacin de sitios de unin y sus residuos clave ( Tyr197 , Trp273 y Trp384 ) , todos los cuales se conservan en pro-tenas de unin maltodextrina . Esta configuracin particular del bolsillo de unin , con tres residuos conservados capaces de tres anillos de azcar STA- bilizing , explica la alta afinidad de mALX para maltotriosa . La estructura de apo revel que hasta 12 residuos podran ser acomodados al abrir el sitio de unin . Sin embargo , estos sitios -Ing se unen adicionales no contribuyen fuertemente a la estabilizacin de las cadenas de glucosa ms largos ; un resultado que explica afinidades mALX similares para sustratos que van de cuatro a siete cadenas de glucosa ( Abbott et al . , 2010 ) . Ninguna de las estructuras disponibles de S. pneumoniae PT tiene una densidad de electrones interpretable en la primera regin 30 resi - debido . Predicciones de alineacin de homologa de secuencia con motivos y sugieren que esta regin de conexin de la protena a la membrana podra ser desorganizado en vivo , proporcionando alta flexibilidad de la LP y de ese modo la orientacin faci - TATING hacia sus objetivos ( Lawrence et al . , 1998 ) .
Estructuras tridimensionales de protenas de superficie no clsicos Enolasa La enolasa neumoccica es la nica estructura PAPCN reportado hasta la fecha ( Ehinger et al. , 2004 ) . Filtracin en gel analtica demostr enolasa octamrico oligo - merizacin , un resultado adicional corroborado por la estructura cristalina (Figura 4G ) . El octmero se est formando un anillo con un 19-A en todo el poro central . La parte N -terminal de cada monmero est orientada hacia el centro, mientras que el C -terminal que sostiene los sitios de unin del plasmingeno - se enfrenta el anillo exterior. El sitio activo enolasa acta tambin como el sitio de unin del plasmingeno - ( BS1 ) y est situado en el extremo C - terminal de la b - barril incluyendo Glu164 cataltico , Glu205 y Lys342 . Bajo condiciones de desnaturalizacin , que impiden la oligomerizacin de la enolasa , la inactivacin qumica de Lys342 abole la unin del plasmingeno . Sin embargo , el bloqueo de este sitio de unin ( BS1 ) en el oligo - mer no impide la unin del plasmingeno , lo que indica la presencia de otro sitio ( BS2 ) . Este nuevo sitio fue identificado por el anlisis de pptidos spot- sintetizado y comprende de los residuos 248-256 . BS2 es significativamente ms expuestos , en el enolasa oligomrica , y es por lo tanto esencial en las funciones de pluriempleo para reclutar plasmingeno humano durante la infeccin ( Ehinger et al. , 2004 ) . Los roles de pluriempleo de muchos NCSPs en la virulencia siguen siendo desconocidos. Sin embargo , el anlisis estructural de estas protenas podra proporcionar pistas acerca de sus funciones no clsicos en la virulencia , proporcionando nuevas dianas para el desarrollo de nuevas vacunas y la teraputica .
ESTRUCTURAS TRIDIMENSIONALES DE CBPS autolisina LytA
Dos autolisinas se han identificado de forma inequvoca en el neumococo hasta el momento: la amidasa LytA y la lisozima LytC ( Garca et al , 1999 . ) . LytA amidasa ha sido bien estudiado y representa el paradigma de las enzimas autolticos ( Lpez y Garca, 2004 ) . LytA es responsable de la autolisis celular , a travs del cual se media la liberacin de sustancias txicas - tales como la neumolisina toxina formadora de poros de la pared celular y productos de degradacin - que endotelial daos y las barreras epiteliales y permiten neumococos para obtener acceso a la circulacin sangunea y difundir a travs del cuerpo ( Berry & Paton, 2000 ) . Curiosamente , se ha demostrado que los neumococos estn protegidos de la actividad ltica de LytA durante el crecimiento exponencial , pero no en la fase estacionaria ( Tomasz et al . , 1970 ) . Resultados recientes confirman este punto y un modelo que explica por qu ocurre esto , se ha propuesto ( Mellroth et al. , 2012). LytA se organiza estructuralmente como una protena de dos mdulos (Fig. 2 ) con un mdulo de N-terminal (residuos 1-174 ) que cataliza la escisin del N - acetylmuramoyl - L-alanina enlace de la cadena principal de peptidoglicano neumoccica ( Mosser y Tomasz , 1970 ) , y un mdulo de unin a colina C - ter-minal . El mdulo C -terminal (residuos 175-301 ) , responsables de la unin de la pared celular , se forma por un tndem de seis repeticiones de 20 residuos imperfectos , conocidos ya sea como P -motivos o repeticiones de unin a colina , caractersticas de la familia de CBP . Hasta ahora , no hay informacin estructural para la protena de longitud completa , pero la estructura cristalina del mdulo de cho - unin de lnea de LytA ( C - LytA ) ha sido reportado ( Fernndez - Tornero et al . , 2001 , 2002 ) . C - LytA presenta un solo pliegue ordinario formado por una disposicin de superhelical de las repeticiones de unin a colina y la cola C-terminal (Fig. 5A ) . La colina est situado en la interfaz de dos repeticiones consecutivas de tal manera que tres residuos aromticos estructuralmente conservadas (dos Trp y Tyr uno ) forman una cavidad en la que los grupos metilo de colina se colocan (Fig. 5B ) . Una interaccin catin - P entre los sistemas ricos en electrones de los anillos aromticos y la carga positiva de colina mejora la unin . Este patrn de reconocimiento tambin se ha observado en todos los PBC reportado hasta ahora. A pesar de los numerosos estudios sobre LytA , varias caractersticas bsicas de esta protena sigue siendo difcil de alcanzar . es claro lo que regula su actividad ltica , por lisis se dispara en un plazo de tiempo predecible tras la entrada en fase estacionaria, cmo autolisis se conecta a la lisis inducida por penicilina ( Tomasz et al. , 1970 ) , la forma en la conversin de un E- forma inactiva a la activa C- forma de LytA ( Tomasz y Westphal, 1971 ) se produce y cmo LytA se dirige a la pared celular . En este sentido, la elucidacin de la estructura tridimensional de los de larga duracin LytA podra proporcionar informacin valiosa para aclarar estas cuestiones.
Protena de superficie neumoccica A Protena de superficie neumoccica (PspA ) es una CBP ( Jedrzejas et al . , 2000 ) que , como se muestra por los anticuerpos anti - PspA , se localiza en la superficie de la pared celular de los neumococos ( McDaniel et al . , 1984 ) . La masa molecular de PspA oscila entre 67 y 98 kDa en las cepas de neumococo diver- ous . PspA est estructuralmente sin organizacin en cuatro regiones distintas: un mdulo / dominio N-terminal funcional ( compuesta de 288 residuos en la cepa Rx1 de S. pneumoniae ) , una regin rica en prolina ( 83 residuos ) , un mdulo de unin a colina construido a partir de un tramo de 10 repeticiones de unin a colina , y, finalmente, una cola C- terminal de 17 residuos hidrofbicos ( Jedrzejas et al . , 2001 ) (Fig. 2 ) . El dominio funcional N- terminal se cree que se extienden desde la pared celular e incluso para sobresalir fuera de la cpsula . La mitad N -terminal de PspA madura se prev que sea totalmente un - helicoidal ( Yother y Briles , 1992 ) . Una regin de unin a lactoferrina de PspA ha sido localizado dentro de los residuos 168 a 288 de este un - helicoidal de dominio ( Hakansson et al . , 2001 ) . No hay informacin estructural se ha informado de la protena de longitud completa . Sin embargo , la estructura cristalina de un complejo del dominio de unin a lactoferrina de PspA con la N- lbulo de la lactoferrina humana , un componente del sistema inmune innato , se ha informado ( Sen - Kovich et al . , 2007 ) . El dominio de unin a lactoferrina de PspA consta de cuatro hlices conectadas por lazos mviles. En el extremo N-terminal hay un corto a- hlice seguida de tres hlices anfipticas largas con interacciones hidrofbicas nume-rosas entre hlices antiparalelas vecinos. La compleja estructura revel interacciones directas y especficas entre la superficie negativamente cargada de hlices PspA y el resto de la lactoferrina altamente catinica de lactoferrina. La unin de PspA debe bloquear la accesibilidad superficie de este pptido bactericida , evitando que penetren en la membrana bacteriana ( Senkovich et al . , 2007 ) .
Figura 5 las estructuras tridimensionales de las protenas de unin a colina (PBC) . (A ) Diagrama de la cinta de C- LytA ( AP entrada 1H8G ) . Los anlogos de colina se dibujan como esferas de color naranja . (B ) la estabilizacin de colina en los PCN . Los residuos que forman la cavidad sitio de unin a colina se representan en un modelo de palo . Molcula de colina ( Cho ) est marcado. (C ) Diagrama de la cinta de CBPF con el dominio de unin a colina de color cian , dominio enlazador coloreada en verde, y el dominio N -terminal de color en color magenta (PDB 2V04 entrada) . Consenso ( p1- p5 ) y no en el consenso ( DP1- dp6 ) repeticiones de unin a colina se etiquetan . (D ) Estructura de la esterasa fosforilcolina neumoccica, Pza , en complejo con fosforilcolina (PC) y anlogos de colina (CHA ) ( AP entrada 2BIB ) . Mdulos de color diferente : mdulo cataltico N - terminal , magenta ; mdulo de unin a colina , cian ; enlazador , verde. El bucle (residuos 36-61 ) que participan en las interacciones intermodulares es de color naranja. La molcula de PC en el sitio activo se dibuja en esferas azules , mientras que las molculas Bis-Tris obligados a los sitios de unin a colina e iones metlicos (Zn , amarillo; Ca , verde ) se representan como esferas . Derecha , zoom del sitio activo de Pza con superficie molecular de color de acuerdo a sus dominios . La molcula de PC ( palos blancos ) y molculas de Bis -Tris (palos naranja) estn etiquetados . (E ) Estructura de autolisina neumoccica LytC , en complejo con peptidoglicano y de colina ( AP entrada 2WWD ) . Mdulos de color diferente : mdulo cataltico C -terminal , magenta ; mdulo de unin a colina , cian . La molcula de peptidoglicano en el sitio activo se dibuja en esferas verdes , mientras que las molculas de colina se representan como esferas de color naranja . El Lc bucle involucrados en actividades ESPECFICA de LytC est etiquetado . Derecha , el gancho en forma de conformacin de LytC . Superficie molecular es de color de acuerdo a sus dominios . La molcula de peptidoglicano ( palos verdes) y molculas de colina (palos naranja) estn etiquetados . Unin a colina protena A
CbpA ( tambin referido como PspC , SpsA y PbcA ) es una de las principales adhesinas neumoccicas . La secuencia de la CbpA N-terminal ( residuos 39 a 514 ; . . ( Tettelin et al , 2001 ) exhibe numerosas repeticiones del motivo de cremallera de leucina ( Landschulz et al , 1988 ) que clster dentro de los cinco dominios denomina A, B , R1 , R2 y C ( Hammerschmidt et al . , 1997 ) (Fig. 2 ) . Dominios a, B y C son 21-25 aminocidos de longitud y se predicen para formar dmeros de enrollado de la bobina . El 110 - resi-duos - largo , ( . Zhang et al, 2000) dominios " repetidas ", R1 y R2 ( 78 % idntico ) , son los dominios de adhesin de CbpA ( Lu et al, 2003 ; . . Elm et al, 2004b ) .
El dominio C -terminal de CbpA est formado por ocho repeticiones de unin a colina . Para evitar la lisis bacteriana mediada por el complemento , neumococos contratar el complemento regu-ladores centrales Factor H y protenas de unin a C4b . La principal protena de unin al factor H de S. pneumoniae es CbpA ( PspC ) y se denomina Hic (inhibidor de la unin del factor H del complemento) en otro subconjunto de cepas ( Agarwal et al. , 2010 ) . Curiosamente , mientras que la lnea de unin - cho - dominio C -terminal de PspC ancla la protena de forma no covalente a la fosforilcolina de la pared celular , la PspC - como Hic ( PspC11.4 ) est anclado covalentemente al peptidoglicano de neumococos despus de transpepti - dase escisin del motivo LPXTG . Tanto PspC y
Cuota de Hic en sus regiones N -terminal un dominio de unin para el factor inhibidor del complemento humano H ( Agarwal et al. , 2010 ) . Dominios CbpA R se unen las inmuno- globulina - igual que los dominios extracelulares del receptor de inmunoglobulina polimrica ( pIgR ) durante la invasin de las clulas epiteliales - nasopha larngea humanos ( Hammerschmidt et al , 2000 ; . . Zhang et al , 2000 ) . CbpA se une especficamente a un dominio extracelular de pIgR (Dave et al , 2004 ; . . Elm et al , 2004a ) y secuestra la maquinaria de la endocitosis para trasladar los neumococos a travs de las clulas epiteliales nasofarngeas en el torrente sanguneo ( Luo et al , 2005 . ) . A pesar de la falta de informacin sobre la estructura CbpA com-pleto ; la estructura de la solucin de dominio R2 de CbpA se ha determinado mediante espectroscopia de resonancia magntica nuclear (Luo et al. , 2005 ) . Esta estructura tambin se utiliza para modelar que para el dominio R1 . Los dominios de I , formado por 12 copias imperfectas de la cremallera de leucina motivo heptad , adoptan un 3-a - hlice , la estructura de la balsa como nico. Cada par de hlices es anti- paralelo y residuos conservados en el bucle entre hlices 1 y 2 muestran una novela " tenedor tirosina ' es-tructura que est involucrado en pIgR vinculante.
Pza esterasa Fosforilcolina La esterasa fosforilcolina TA , Pza ( o CbpE ) fue descrita por primera vez en 1974 ( Holtje y Tomasz , 1974 ) , demostrando que la enzima es capaz de eliminar un nmero limitado de fosforilcolina (PC) los residuos de las paredes celulares de neumococo . La arquitectura molecular de Pza incluye un mdulo cataltico localizado en la parte N - terminal de la protena ( 312 residuos ) , un mdulo de unin a colina C - terminal con 10 unidades de repeticin - homologas Gous ( 205 residuos) , y una larga C - borne cola de 85 residuos (Fig. 2) . La informacin estructural para el dominio cataltico ( Ga- rau et al. , 2005 ) y para la Pza completa slo falta la cola C -terminal ( Hermoso et al. , 2005 ) ha sido reportado . La estructura cristalina de longitud completa de protena (Fig. 5D ) comprende el mdulo cataltico y el mdulo de unin a colina , que estn unidos por un enlazador pequea . El mdulo cataltico se pliega en una arena - wich AB / BA similar a la de metalo -b- lactamasas . El mdulo de unin a cho -line - est formado por 10 repeticiones ( p1- p10 ) despus de un pliegue superhelical zurdo , similar a la observada en C- LytA . El sitio activo se encuentra en la interfaz de los b- hojas en la N- terminal de mdulo , donde una larga ranura de muy negativo electro - potencial esttico contiene dos iones Zn2 + colocado en el fondo de un profundo agujero (Fig. 5D) Pza muestra una nueva disposicin estructural de sus mdulos constituyentes. A pesar de fuertes diferencias en los tamaos y formas de los mdulos , la estructura general parece ser bastante rgida . El marco estructural Pza est determinada por tres factores principales : (i) un corto enlazador en la superficie del mdulo cataltico ; ( ii ) la presencia de un bucle muy largo en el mdulo cataltico (residuos 36-61 ) , L36 - 61 , que interacta fuertemente con los tres primeros unidades de repeticin del mdulo de unin a colina , y (iii ) dos estruc - turales de Ca2 + iones de refuerzo de la L36 - 61 conformacin . Las principales interacciones mediadas por esta com - premio bucle de un sistema de cremallera en el cual aromticos resi-duos de ambos mdulos alternativo. Esta disposicin modular produce un sitio activo prolongado que conecta el sitio cataltico con un sitio de unin a colina (Fig. 5D ) . Una de las caractersticas ms llamativas relativas Pza fue la observacin anterior , tanto in vivo ( Holtje y Para - Masz , 1974 ) e in vitro ( de las Rivas et al , 2001 ; . Vollmer y Tomasz , 2001 ) , que la enzima es capaz para liberar slo un nmero limitado de residuos de colina de la pared celular neumoccica , que representa aproximadamente el 30 % del contenido total de PC . El modular de dis-posicin en Pza configura el sitio activo de la protena de longitud completa de tal manera que slo los residuos localizados en el extremo de las cadenas de TA son accesibles al centro cataltico . Por lo tanto , Pza estara involucrada en la liberacin especficamente slo aquellos terminales PC resi-duos relevantes para las interacciones clula-clula , pero la retencin de residuos de colina de la pared celular que son importantes para el crecimiento normal de las clulas y el mantenimiento de los principios bsicos comunes unido a la envoltura bacteriana ( Hermoso et al . , 2005 ) . Selectivamente la modificacin de la distribucin de los restos de la PC en la superficie bacteriana por Pza debe menoscabar la capacidad de los componentes de la PC focalizacin respuesta del husped , como la protena C reactiva humana , para unir de manera eficiente las bacterias , y proporcionara un mecanismo para neumococos para escapar el ataque por el sistema de defensa del husped . Por otra parte , los restantes residuos de PC expuestas se pueden usar para unirse a los receptores de factor activador de plaquetas para la invasin Pro - Moting . Por lo tanto , la regulacin fina de la PC deco - racin en la superficie bacteriana , mediada por la actividad Pza , puede favorecer tanto la infeccin y la colonizacin por S. pneumoniae .
Protenas de unin a colina F CBPF es una de las protenas ms abundantes en la pared celular neumoccica . La estructura cristalina de CBPF en complejo con la colina se ha informado recientemente ( Molina et al . , 2009a ) . CBPF muestra una novedosa estructura modular compuesto por dos partes ( p1- p5 ) y no en el consenso ( DP1- dp6 ) repeticiones de unin a colina (Fig. 5C ), distribuidos a lo largo de su longitud , que dramticamente altera su forma y capacidad de unin , la organizacin de la protena en dos mdulos bien definidos . El mdulo de N - termi-nal ( N - CBPF ) muestra un disco en forma de confor -macin mientras que el mdulo C-terminal ( N - CBPF ) sigue el superhelical veces encontrado previamente en otros PCN (Fig. 5C ) . Se encontraron siete molculas de colina unido al dominio C-terminal . Notablemente, las repeticiones de construccin del mdulo N - terminal son muy modificados , por tanto los aminocidos adicionales y mutaciones en diferentes posiciones del consenso motivo , y no cumplen con los requisitos de unin a colina . Las variaciones en la secuencia de las repeticiones de unin a colina tambin fueron responsables de la disposicin modular en CBPF (Molina et al. , 2009a ) . Ensayos experimentales demostraron que CBPF puede inhibir la actividad de autolisina neumoccica LytC tanto in vitro como in vivo . Curiosamente , C - CBPF no alter la actividad enzimtica de LytC , lo que sugiere fuertemente que la N - CBPF podra desempear un papel crtico en esta inhibicin ESPECFICA . Sorprendentemente , el efecto inhibidor no se limita a LytC lisozima pero tambin afecta a otras lisozimas de fagos neumoccica tales como CPL- 1 y CPL- 7 compartiendo el mismo mdulo cataltico como LytC . Este efecto inhibidor de alguna manera debe estar relacionado con la pared celular de unin a travs de su dominio N -terminal como sondeado por los experimentos de resonancia de plasmn superficial ( Molina et al. , 2009a ) . Un estudio de los ortlogos CBPF en otras cepas neumoccicas revel la existencia de protenas CBPC y CbpJ en la cepa TIGR4 . Otras an-lisis de los genomas de neumococo conocidos revelaron la existencia de varias protenas que son propensos a mostrar la misma arquitectura que CBPF . Estas protenas podran constituir una nueva subfamilia CBPF - como dentro de la gran familia de la CBP de protenas que tienen un mdulo tpico de colina - de encuadernacin y una regin N - terminal formada por una serie de repeticiones no consensuados . A pesar de las pequeas diferencias en la composicin de aminocidos entre todos los miembros de la subfamilia CBPF - como , la mayor parte de los res - idues implicados tanto en la estructural N - terminal del armazn trabajo y en las interacciones intermodulares se conservan , lo que sugiere que estas protenas podran EXHI bits funciones reguladoras similares a los de CBPF . autolisina LytC LytC lisozima est ganando ms atencin sobre todo por su papel significativo recientemente descrito en el fratricidio celular ( Claverys y Havarstein , 2007 ) . Se ha demostrado que durante el giro neumococos estado competente en la expresin de toxinas de protenas aceous ( LytA , LytC y CBPD ) , que mata y lisa clulas hermanas neumoccicas no competentes , as como otras bacterias de especies estrechamente relacionadas ( Johnsborg et . al, 2008) . Fratricide contribuye a vir - ulence al exacerbar una infeccin a travs de la liberacin de factores de virulencia y mediadores inflamatorios . CBPD hace que algunos la lisis de las clulas diana por su cuenta, pero su efecto se multiplica varias veces por su activacin de LytA y LytC ( Eldholm et al. , 2009 ) . Como lisis coincide con la competencia , ADN liberado de las clulas diana se toma por las clulas competentes atacante , que resulta en aumento de la eficiencia de la transferencia de genes y por lo tanto tambin en resistencia a los antibiticos ( Johnsborg y Havarstein , 2009 ) . Una de las caractersticas ms llamativas relativas LytC fue la reciente observacin de que la concentracin relativamente alta de LytC detect en el medio de los cultivos de neumococo no competentes en la fase exponencial de crecimiento no fue perjudicial para las clulas , lo que demuestra que LytC es inactivo o muy regulado bajo estas circunstancias ( Eldholm et al . , 2009 ) . Tambin se demostr que era necesaria la presencia de CBPD , que alberga un CHAP ( cistena , histidina dependiente amidohydrolases / peptidasas ) dominio implicado en Mur- ein escisin del tallo - pptido , para activar la lisozima LytC durante fratricida . Sin embargo , la naturaleza de este mecanismo de activacin se mantuvo difcil de alcanzar . La estructura cristalina de longitud completa LytC en un complejo ternario con la colina y un fragmento de peptidoglicano se ha informado recientemente ( Prez - Dorado et al . , 2010 ) (Fig. 5E ) . LytC comprende un mdulo de cho - lnea - de unin a N-terminal (residuos 1-267 ) y un mdulo cataltico C - ter-minal (residuos 268-468 ) formados por un nico dominio estructural que muestra el irregular ( b / a) de can 5 B3 tpica de la glicosil hidrolasa fami-lia 25 ( GH25 ) ( Hermoso et al . , 2003 ) . Once repeticiones de unin a colina ( p1- p11 ) construir el mdulo de unin a colina . Si bien los primeros nueve repeticiones ( p1 -P9 ) son
dispuestos en el pliegue de la mano izquierda super- helicoidal tpico implicada en la unin (dominio NI) de colina , las dos ltimas repeticiones ( p10 , p11 ) (dominio NII) son crticos en la disposicin modular de LytC . La estructura tridimensional de estas repeticiones difiere de la de las repeticiones de pre - cedentes ; esto rompe la orientacin lineal del mdulo de unin a colina y orienta el sitio activo LytC hacia el mdulo de anclaje . La disposicin modu - lar est en la base de las actividades especficas observadas para este autolisina . LytC y CPL- 1 , una endolisina de la Cp - 1 fago , ambos pertenecen a la familia GH - 25 ( Hermoso et al , 2003 . ) ; que escinden el mismo enlace glicosdico de neumococo peptidogly - can. Sin embargo , sus actividades especficas son notablemente dispares : 6000 U mg ) 1 para LytC vs 100 000 U mg ) 1 para Cpl - 1 . Sus temperaturas ptimas para la in vitro activi-dad tambin son diferentes, ya que LytC es ms activo a 30 C , mientras que el cabo - 1 exhibe una mayor actividad a 37 C. La produccin de una quimera de retencin de la disposicin modular de LytC pero con el centro cataltico de CPL- 1 mostr propiedades enzimticas que se correlacionaron perfectamente con los de LytC ( Prez - Dorado et al , 2010 . ) ; es decir , la actividad especfica fue baja y similar a la de LytC y su temperatura ptima fue de 30 C. Este resultado sugiere que las propiedades especficas - catalticos de LytC no slo podran ser atribuidos a la naturaleza del sitio activo dado, sino tambin a su disposicin modular especfica. Adems , la conformacin en forma de gancho - cin inusual de LytC con el sitio activo est orientado hacia el mdulo de unin a colina (Fig. 5E ) , lo que puede explicar su activacin por CBPD en fratricida . La estructura cristalina del complejo LytC -colina - peptidoglicano indica que el pptido tallos largos y reticulados cadenas de peptidoglicano debe ser perjudicial para la actividad hidroltica por impedimento estrico con tanto un bucle LytC - especfica , LC , y por todo el mdulo de unin a colina . Por lo tanto , la divisin anterior del pptido tallos realizada por el dominio CHAP de CBPD debera facilitar la hidrlisis de las cadenas de peptidoglicano no reticuladas por LytC , explicando con ello la activacin de LytC observado en el fratricidio ( Prez - Dorado et al. , 2010 ) .
OBSERVACIONES FINALES Protenas de la superficie de neumococo estn involucrados en los aspectos crticos de la vida de patgenos tales como la aptitud de bacterias , las interacciones clula-clula , la eliminacin de competidores y interacciones patgeno-hospedador (por ejemplo, mediante la contratacin de componentes de sistema principal o escapar del sistema inmune). Cuatro familias de protenas de superficie se encuentran en el neumococo , algunos de los cuales son exclusivos de este patgeno y sus parientes cercanos . Durante las diversas etapas de la infeccin , estas bacterias tienen que adaptarse a diferentes nichos de acogida . Esto implica que la expresin de factores de virulencia , que se produce de una manera muy coordinada y regulada , es esencial para la persistencia bacteriana xito en un nicho de host determinado o su difusin en todo el host. Estudios estructurales han desentraado algunos de estos papeles y proporcionar un rico retrato de la gran diversidad y inesperado nivel de complejidad que subyace a los mecanismos de virulencia que median la infeccin. Como la mayora de las estructuras de las protenas superficiales de neumococo permanecen sin caracterizar , se espera que la informacin estructural de las protenas superficiales restantes nos permitir descifrar las interacciones orquestar la unin de diferentes protenas y el conjunto de protena modular , y tan revelador objetivos potenciales para nuevos medicamentos para manejar las infecciones neumoccicas . La mayora de las protenas de superficie de neumococo muestran una naturaleza modular . La informacin estructural reportado hasta ahora, revela que la combinacin de mdulos catalticos con mdulos defi-nitivo o adhesinas de la pared celular no produce un nuevo conjunto de actividades que son la suma aritmtica de sus componentes . De hecho , como muy bien observado en las protenas LPXTG y especialmente en los PCN , el resultado final de la protena de mltiples modular es una novela mquina macromolecular mostrar las capacidades nicas . Estas nuevas actividades incluyen, por ejemplo , la hidrlisis selectiva del sustrato (por ejemplo SPUA o Pza ) o la regulacin de (auto) actividad ltica (por ejemplo LytC ) y , en general, producen una protena de funcin dual que combina la aptitud funciones bacterianas con interacciones husped -patgeno . En este sentido, la informacin estructural de protenas de superficie neumoccica de larga duracin es la capital de descubrir su complejidad funcional . Como se desprende de los pocos ejemplos reportados hasta la fecha , est claro , al menos en las protenas de superficie neumoccica , que el todo es mayor que la suma de sus partes. AGRADECIMIENTOS Estamos en deuda con D. Laurents por su lectura crtica del manuscrito. Este trabajo fue apoyado por una beca del Ministerio espaol de Economa y
Competitividad (BFU2011 - 25326 ) , EU- CP223111 ( CAREPNEUMO , Unin Europea ), y el programa de cine biomdica del gobierno de la Comunidad Autnoma de Madrid ( S2010/BMD- 2457 ) . IP- D es financiado por una FEBS becas a largo plazo . REFERENCIAS Abbott , D. W. y Boraston , A. ( 2011 ) El anlisis estructural de un mdulo de unin a carbohidratos de la familia 32 putativo de la enzima endod Streptococcus pneumoniae . Acta Crystallogr Secta F Struct Biol. Cryst Commun 67: 429-433 . Abbott , D. W. , Macauley , M. S. , Vocadlo , D. J. y Boras toneladas , A.B. ( 2009 ) Streptococcus pneumoniae endohex - osaminidase D, visin estructural y mecnica en la catlisis del sustrato con ayuda de la familia el 85 de glicsidos hy - drolases . J Biol. Chem. 284 : 11676 a 11689 . Abbott , DW, Higgins, MA, Hyrnuik , S., Pluvinage , B., Lammerts van Bueren , A. y Boraston , AB ( 2010 ) La base molecular de la degradacin del glucgeno y el transporte en Streptococcus pneumoniae. Mol Microbiol 77: 183-199 . Agarwal , V., Asmat , TM, Luo , S., Jensch , I., Zipfel , PF y Hammerschmidt , Factor de S. ( 2010 ) regulador de H del complemento media una absorcin de dos pasos de Streptococcus pneumoniae por las clulas humanas . J Biol. Chem. 285 : 23486-23495 . Alloing , G., Trombe , M.C. y Claverys , JP ( 1990 ) El locus ami de la bacteria gram - positiva Streptococcus pneumoniae es similar a operones de transporte dependiente de la protena de bacterias gram - negativo de unin . Micro- Mol biol 4 : 633-644 . Alloing , G., de Felipe, P. y Claverys , JP ( 1994 ) Tres lipoprotenas de membrana altamente homlogas par- ticipar en el transporte de oligopptidos por el sistema Ami del grampositivos Streptococcus pneumoniae. J Mol Biol 241: 44-58 . Austraco , R. ( 1981 ) El desarrollo de la vacuna contra el neumococo. Proc Am Philos Soc 125: 46- 51 . Babu, M. M. , Priya , M. L. , Selvan , A.T. et al . ( 2006 ) Una base de datos de las lipoprotenas bacterianas ( DOLOP ) con asignaciones funcionales a lipoprotenas predichos. J Bacteriol 188 : 2761-2773 . Bean, B. y Tomasz , A. ( 1977 ), el metabolismo de colina en los neumococos . J Bacteriol 130 : 571- 574 . Behr , T. , Fischer , W. , Peter - Katalinic , J. y Egge , H. ( 1992 ) La estructura de cido lipoteicoico neumoccica . Mejora de la preparacin, la qumica y los estudios de espectrometra de masas . Eur J Biochem 207 : 1063-1075 .
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