Sunteți pe pagina 1din 55

1

HIDROLAZE EC: 3
1
2
Hidrolaze EC: 3
Enzime care catalizeaz reacii de scindare ale unor legturi covalente ale
substratelor cu participarea unei molecule de ap (scindare hidrolitic).
Molecula de ap se fixeaz la punctul de scindare al substratului i
rezult produi de reacie mai simpli.
Teoretic, reaciile sunt reversibile
De regul, reaciile inverse de formare a legturilor covalente, se
realizeaz pe alte ci metabolice
B -
A -
- B +
+
H OH
H
2
O
A
2
3
Clasificarea hidrolazelor n subclase i sub-subclase
3. Hidrolaze
3.1. Hidrolaze care acioneaz asupra legturilor esterice (esteraze)
3.1.1. Hidrolazele esterilor carboxilici (lipaze)
3.1.2. Hidrolazele tioesterilor
3.1.3. Hidrolazele monoesterilor fosforici
3.1.4. Hidrolazele diesterilor fosforici
3.1.5. Hidrolazele triesterilor fosforici
3.1.6. Hidrolazele esterilor sulfurici
3.1.7. Hidrolazele monoesterilor difosforici
3.1.8. Hidrolazele triesterilor fosforici
3.1.11. Exodeoxiribonucleaze ce produc 5-fosfomonoesteri
3.1.13. Exoribonucleaze ce produc 5-fosfomonoesteri
3.1.15. Exonucleaze active cu acid ribo- sau deoxiribonucleic ce produc 5-fosfomonoesteri
3.1.16. Exonucleaze active cu acid ribo- sau deoxiribonucleic ce produc ali compui dect 5-fosfomonoesteri
3.1.21. Endodeoxiribonucleaze ce produc 5-fosfomonoesteri
3.1.22. Endodeoxiribonucleaze ce produc ali compui dect 5-fosfomonoesteri
3.1.25. Endodeoxiribonucleaze specifice pentru baze azotate modificate
3.1.26. Endoribonucleaze ce produc 5-fosfomonoesteri
3.1.27. Endoribonucleaze ce produc ali compui dect 5-fosfomonoesteri
3.1.30. Endonucleaze active cu acid ribo- sau deoxiribonucleic ce produc 5-fosfomonoesteri
3.1.31. Endonucleaze active cu acid ribo- sau deoxiribonucleic ce produc ali compui dect 5-fosfomonoesteri
3
4
3.2. Hidrolaze care acioneaz asupra compuilor glicozidici (glicozidaze)
3.2.1. Hidrolazele compuilor oxigen (O)-glicozidici
3.2.2. Hidrolazele compuilor azot (N)-glicozidici
3.2.3. Hidrolazele compuilor sulf (S)-glicozidici
3.3. Hidrolazele care acioneaz asupra legturilor eterice
3.3.1. Hidrolazele tioeterilor
3.3.2. Hidrolazele eterilor
3.4. Hidrolazele care acioneaz asupra legturilor peptidice (peptidaze)
3.4.11. Aminopeptidaze
3.4.13. Dipeptidaze
3.4.14. Dipeptidil-peptidaze i tripeptidil-peptidaze
3.4.15. Peptidil-dipeptidaze
3.4.16. Carboxipeptidaze (tip serin)
3.4.17. Metal-carboxipeptidaze
3.4.18. Carboxipeptidaze (tip cistein)
3.4.19. Omega peptidaze
3.4.21. Serin endopeptidaze
3.4.22. Cistein endopeptidaze
3.4.23. Aspartat endopeptidaze
3.4.24. Metal-endopeptidaze
3.4.99. Endopeptidaze cu mecanism catalitic necunoscut
Clasificarea hidrolazelor n subclase i sub-subclase
4
5
3.5. Hidrolaze care acioneaz asupra legturilor carbon-azot (C - N), altele dect legturile peptidice
3.5.1. Hidrolazele legturilor C N din amidele liniare
3.5.2. Hidrolazele legturilor C N din amidele ciclice
3.5.3. Hidrolazele legturilor C N din amidinele liniare
3.5.4. Hidrolazele legturilor C N din amidinele ciclice
3.5.1. Hidrolazele legturilor C N din nitrili
3.5.99. Hidrolazele legturilor C N din ali compui
3.6. Hidrolaze care acioneaz asupra legturilor anhidridice
3.6.1. Hidrolazele legturilor anhidridice care conin fosfor
3.6.2. Hidrolazele legturilor anhidridice care conin sulf
3.7. Hidrolaze care acioneaz asupra legturilor carbon-carbon (C - C)
3.7.1. Hidrolazele compuilor cetonici
3.8. Hidrolazele care acionez asupra legturilor cu halogeni
3.8.1. Hidrolazele compuilor cu legturi carbon-halogen
3.9. Hidrolazele care acioneaz asupra legturilor fosfor azot (P N)
3.10. Hidrolazele care acioneaz asupra legturilor sulf azot (S N)
3.11. Hidrolazele care acioneaz asupra legturilor carbon fosfor (C P)
3.12. Hidrolazele care acioneaz asupra legturilor sulf sulf (S S)
Clasificarea hidrolazelor n subclase i sub-subclase
5
6
Hidrolaze caracteristici generale
Sunt protein-enzime (deci nu au cofactori), cu centrii activi constituii fie dintr-un
singur aminoacid, fie dintr-o asociere adecvat de aminoacizi.
Centrii activi ai hidrolazelor:
Un aminoacid - Exemplu: - tripsina,
- chimotripsina
- colinesterazele au n centrul activ Ser
- Ribonucleaza i papaina au n centrul activ Cys
Mai muli aminoacizi: pepsina are n centrul activ patru aminoacizi: Ileu,
Val, Asp, Tre
Hidrolazele pot fi activate de ionii metalici
Fosfatazele alcaline, diferite peptidaze, sunt hidrolaze activate de metale (Zn
2+
).
Reaciile catalizate de hidrolaze se petrec cu modificri energetice minime,
nefiind implicate n obinerea de energie.
Pot s acioneze extracelular, cum este cazul hidrolazelor tractului digestiv, cu rol
n metabolismul nutrientelor.
Acestea realizeaz scindarea moleculelor mari n molecule mici, simple,
absorbabile la nivelul mucoasei intestinale.
6
7
3. Hidrolaze
Hidrolaze care acioneaz asupra legturilor esterice
ESTERAZE (EC 3.1)
Carboxiesterazele (EC 3.1.1) hidrolizeaz esterii acizilor carboxilici
Lipazele (EC: 3.1.1.3) - hidrolizeaz triacilglicerolii elibernd, n trepte
succesive, acizii grai care esterific funciile alcoolice ale glicerolului, =>
diacil-, monoacilgliceroli, sau chiar glicerol i acizii corespunztori.
CH
2
CH
CH
2
O
O
O
C
C
C
R
1
R
2
R
3
2 HOH
Lipaze
2-Monoacil glicerol
O
O
O
+
+ R
1
-COOH R
3
-COOH +
triacilgliceroli
7
Aciunea lipazelor este
favorizat de ionii de
calciu, ntruct acizii
grai rezultai din
hidroliz sunt
transformai n sruri
insolubile de calciu.
n acest mod, echilibrul
de reacie este
permanent deplasat n
sensul hidrolizei.
8
Fosfolipazele A
1
i A
2
acioneaz asupra legturilor I i II ale fosfatidilcolinelor (lecitinelor) scindnd
legturile esterice dintre gruprile hidroxil ale glicerolului i acizii grai R
1
i R
2
CH
2
CH
CH
2
C
C
O CH
2
CH
2
N
CH
3
CH
3
CH
3
R
1
R
2
Fosfolipaza A1
EC: 3.1.1.32
O
O
O
Fosfolipaza A2
EC: 3.1.1.4
P
OH
+
I
II
III
IV
O
O
O
Fosfolipaza A
1
(EC: 3.1.1.32) fosfatidilcolin + H
2
O 2 acil glicerofosfocolin + acid gras
Fosfolipaza A
2
(EC 3.1.1.4) fosfatidilcolin + H
2
O 1-acil-glicerofosfocolin + acid arahidonic
Eicosanoizi
proinflamatorii
8
9
3. Hidrolaze
3.1.1. Colinesteraze
CH
2
CH
2
O
C CH
3
N
CH
3
CH
3
CH
3
CH
3
COO
CH
2
CH
2
OH
N
CH
3
CH
3
CH
3
O
Acetilcolinesteraza
Acetilcolina
+
Colina
+ HOH
+
+
-
Acetilcolinesteraza (EC: 3.1.1.7)
se gsete n eritrocite, fibre nervoase, sinapse, muchi striat
este implicat n transmisia influxului nervos
este activat de ionii de magneziu
Colinesteraza (EC 3.1.1.8) denumit i pseudocolinesteraza
prezent n plasm i n ficat
catalizeaz hidroliza esterilor colinei cu ali acizi organici cum ar fi
acidul butiric i propionic
9
10
Hidrolazele esterilor fosforici
Rol important n metabolismul glucidelor, lipidelor, nucleotidelor
FOSFOMONOESTERAZELE (EC: 3.1.3)- sunt hidrolaze ale monoesterilor fosforici
Aceste enzime se mai numesc i fosfomonoesteraze sau fosfataze
O P
O
OH
OH
O H P
O
OH
OH
O
R
+ H R
+
Monoester fosforic Alcool
Acid fosforic
OH H
fosfataze
FOSFODIESTERAZELE (EC 3.1.4) hidrolizeaz esterii n care dou funcii acide ale
acidului fosforic sunt esterificate cu alcooli.
Hidrolazele diesterilor fosforici
O
OH P O
O
O
OH P O
OH
O
Diester fosforic
R
1
R
2
OH H
+
fosfodiesteraze
Monoester fosforic
R
2
+
R
1
H
Alcool
10
11
Exemple de fosfomonoesteraze:
1. Dup pH-ul optim de aciune:
- fosfataza alcalin (EC: 3.1.3.1), are pH optim de aciune
8,6 9,4 i este localizat, mai ales, n epiteliul intestinal i renal,
precum i n oase;
- fosfataza acid (EC: 3.1.3.2), are un pH optim de aciune
5 5,5 i este localizat mai ales n rinichi, splin, prostat, etc.
O
CH
2
OH
OH
OH
OH
OH
O
OH
OH
OH
OH
CH
2
O P OH
OH
O
-D-Glucoz
1
2
3
4
5
6
Glucoz 6-fosfat
+ H
2
O
glucozo-6-fosfataza
+ P
i
2. Glucozo-6-fosfataza (EC: 3.1.3.9)
Implicat n homeostazia glucozei
FOSFOMONOESTERAZE (EC: 3.1.3)
11
Elibereaza
gruparile fosfat
de pe multe tipuri
de molecule
(nucleotide,
proteine)
12
Fosfolipaza C (EC 3.1.4.3) fosfatidilcolin + H
2
O 1,2 diacil glicerol + colin fosfat
Fosfolipaza D (EC 3.1.4.4) fosfatidilcolin + H
2
O colin + acizi fosfatidici
CH
2
CH
CH
2
C
C
O CH
2
CH
2
N
CH
3
CH
3
CH
3
R
1
R
2
O
O
O
P
OH
+
I
II
III
IV
O
O
O
fosfolipaza C
EC 3.1.4.3
fosfolipaza D EC 3.1.4.4
Exemple de fosfodiesteraze:
Prezente att intracelular ct i n sucurile digestive,
participnd la digestia lecitinelor din alimente
FOSFODIESTERAZE (EC: 3.1.4)
12
13
Deoxiribonucleazele (EC 3.1.21)
catalizeaz scindarea hidrolitic
a legturilor fosfodiesterice din
structura ADN-ului
Ribonucleazele (EC 3.1.26)
catalizeaz scindarea hidrolitic a
legturilor fosfodiesterice din
structura ARN-ului
Deoxiribonucleazele i
ribonucleazele catalizeaz
depolimerizarea ADN i ARN
elibernd oligo- i mono-
nucleotidele purinice i
pirimidinice constitutive.
Alte hidrolaze ale esterilor fosforici
13
14
Hidrolaze care acioneaz asupra legturilor glicozidice
GLICOZIDAZE (EC 3.2)
Glicozidazele (EC 3.2) catalizeaz reacia de scindare hidrolitic a legturilor
glucozidice din structura homopolizaharidelor (homoglicani - amidon,
glicogen) sau a oligozaharidelor (di-, tri-, tera-, penta-zaharide).
Aceste reacii pot fi considerate reacii de transfer ale unor resturi glucozil
pe molecula de ap ca acceptor.
Se pot subclasifica n hidrolaze ale compuilor O-glicozilai, N-glicozilai,
S-glicozilai.
14
15
Subclasa GLICOZIDAZE (EC 3.2)
Sub-subclasa hidrolaze ale compuilor O-glicozilai
Homopolizaharidaze = amilaze
-amilaza (EC: 3.2.1.1), denumirea sistematic -1,4-glucan-4-glucan hidrolaza
acioneaz asupra legturilor glicozidice interne, situate n poziiile 1-4 din
interiorul catenelor poliozice din amiloz, componenta din structura amidonului
cu un grad mai mic de ramificare.
scindeaz numai legturile 1-4 glicozidice, nu i pe cele 1-6
rezult compui intermediari de hidroliz numii dextrine. Dextrinele puse n
libertate sub aciunea amilazei devin substrate pentru aceeai enzim; degradarea
hidrolitic merge pn la maltoz (dizaharid)
se gsete n saliv, i produce scindarea moleculei de amidon provenit
din alimente, n cavitatea bucal
-amilaza (EC: 3.2.1.1), cu denumirea sistematic -1,4-glucan-malto hidrolaza
secretat de pancreas i are rolul de a continua digestia amidonului i a
glicogenului la nivel intestinal.
hidrolizeaz numai legturile 1-4 glicozidice marginale, terminale (aflate la
capetele nealdehidice ale lanurilor de amiloz), rezultnd direct maltoz (fr ca
hidroliza s mai treac prin stadiul intermediar de dextrine)
15
16
GLICOZIDAZE
Homopolizaharidaze
O
CH
2
-OH
OH
OH
O
CH
2
-OH
OH
OH
O
CH
2
-OH
OH
OH
O
CH
2
-OH
OH
OH
O
CH
2
-OH
OH
OH
O
OH
OH
CH
2
O
CH
2
-OH
OH
OH
OH
O
O
O
O
CH
2
-OH
OH
OH
O O
O O O O
capt
reductor
1
2
4
4
5
6
1
2
3
1
6
3
5
1

- amilaz

- amilaz
Enzima R
1 4
Aciunea amilazelor asupra moleculei de amidon
Amilazele acioneaz asupra polizaharidului pe principiul atacului multiplu.
Odat format complexul enzim-substrat, enzima poate hidroliza unele
legturi n mod succesiv nainte ca enzima s fie din nou liber.
16
17
GLICOZIDAZE
Oligozaharidaze
Au specificitate marcat n funcie de configuraia atomului de carbon glicozidic,
de izomeri optici i de structura ciclului (-glucozidaze sau -glucozidaze).
-glucozidaza (EC: 3.2.1.20), denumit i maltaza, are denumirea sistematic :
-D-glucozid glucohidrolaza.
scindeaz legturile alfa-glicozidice din maltoz dizaharid din bobul de mal
(pH optim4,5).
Maltaza intestinal are un pH optim de 6,5
O
OH
OH
CH
2
-OH
OH
O
CH
2
-OH
OH
OH
OH
O
1 4
5
6
2
3
4
Maltoz (glucoz - - 1,4-glucoz)
Maltaz (EC: 3.2.1.20)
17
18
GLICOZIDAZE
Oligozaharidaze
-galactozidaza (EC: 3.2.1.23), cu denumirea sistematic
-D-galactozid galactohidrolaza, este foarte rspndit i hidrolizeaz lactoza
cu formare de glucoz i -galactoz;
O
CH
2
-OH
OH
OH
O H
O
O
CH
2
-OH
OH
OH
OH
2
3
4
5
6
Lactoz (galactoz -
1
2
3
4
5
6
1
- 1,4-glucoz)
- galactozidaza (EC: 3.2.1.23)

18
19
GLICOZIDAZE
Oligozaharidaze
zaharaza (EC: 3.2.1.26). denumit i sucraza, are denumirea sistematic
-D-fructofuranozid fructohidrolaza
Scindeaz zaharoza (sucroza) ntr-o molecul de glucoz i una de fructoz.
O
CH
2
-OH
OH
OH
O H
O
O
CH
2
-OH
O H
OH
HO-H
2
C

- D glucoz
-D fructoz
1
4
5
6
1
2
3
4
5
6 Zaharaz
(EC: 3.2.1.26)
Sucroz (D glucoz-- 1,2--fructoz)
Se cunosc dou zaharaze care
acioneaz asupra zaharozei:
-glucozidaz cu rspndire
preponderent n regnul
animal, care acioneaz asupra
legturilor - glicozidice,
pH optim7
-fructozidaza (invertaz)
(microorganisme), care
acioneaz asupra legturilor -
glicozidice, pH optim4,5
19
20
GLICOZIDAZE
Oligozaharidaze
Hialuronidaza (EC: 3.2.1.35) este o depolimeraz a acidului hialuronic.
Acidul hialuronic = polizaharid alctuit din uniti repetitive de dizaharid format
din acid glucuronic i N-acetilglucozamin legate prin legturi 1,3 -glicozidice.
O
COOH
OH
OH
O
O
CH
2
-OH
NH
OH
O
O C H
3
O
COOH
OH
OH
O
O
CH
2
-OH
NH
OH
O
O
O C H
3
1
2
3
4
5
6
4
1
3
C

legtur
1,3 - glicozidic
4
1
3
C

legtur
1,4 - glicozidic
Hialuronidaza
EC: 3.2.1.35
20
Permeabilizarea esutului
conjunctiv
21
Hidrolaze care acioneaz asupra legturilor peptidice
PEPTIDAZE (EC 3.4)
Peptidazele sunt enzime care scindeaz hidrolitic legturile
peptidice rezultate din condensrile aminoacizilor.
Pentru hidroliza complet a proteinelor n aminoacizi liberi este
nevoie de aciunea combinat a mai multor enzime proteolitice cu
specificiti diferite.
n literatur se mai ntlnete i denumirea de proteinaze sau
proteaze, tot cu rol de hidroliz a legturilor peptidice.
Acionez n tractul gastrointestinal precumi intracelular.
Sunt clasificate n endopeptidaze i exopeptidaze, n funcie de
poziia legturilor peptidice a cror scindare o catalizeaz.
21
22
EXOPEPTIDAZELE
scindeaz legturi peptidice la care particip aminoacizi situai la
extremitile catenelor polipeptidice
Exemple:
N H
2
CH
R
C NH CH
C
R
O
O
aminopeptidaz
. . . .
HOOC CH
R
C NH CH
R
NH
O
carboxipeptidaz
. . . .
Aminopeptidazele (EC: 3.4.11.2.)
scindeaz legtura peptidic a
unui aminoacid terminal cu
grupare amino liber.
Carboxipeptidaze (EC: 3.4.17.1)
Elibereaz prin hidroliz
aminoacizii carboxiterminali.
Au zinc n centrul activ
Dipeptidazele catalizeaz hidroliza unui dipeptid,
cu formarea a doi aminoacizi.
22
23 23
Mecanismele de aciune ale enzimelor proteolitice
24
ENDOPEPTIDAZELE
scindeaz legturile peptidice din interiorul lanului peptidic
Exemple de endopeptidaze sunt: pepsina, tripsina, chimotripsina, renina,
enteropeptidaza (enterokinaza), papaina, etc.
Exemple:
Pepsina (EC: 3.4.23.1)
aspartil-endopeptidaz
Hidrolizeaz numai legturile peptidice realizate ntre un aminoacid aromatic
(fenilalanin, tirozin) i un aminoacid dicarboxilic (de ex. acid glutamic)
secretat de glandele fundice ale stomacului sub form inactiv de pepsinogen.
acioneaz n stomac, n cursul digestiei
reprezint primul atac al enzimelor digestive asupra substanelor proteice
Hidrolizeaz aprox. 30% din legturile peptidice ale proteinelor alimentare
pH-ul su optimde aciune este 1,2 2
centrul activ al pepsinei este format din patru aminoacizi: Ileu-Val-Asp-Thr
24
25
Pepsinogenul inactiv (zimogen sau proenzim) => pepsina activ (prin proteoliz limitat)
Pepsinogen
42 000 D
Pepsin
34 000 D
+
peptid inhibitor
8 000 D
25
26
Exemple de endopeptidaze
Tripsina (EC: 3.4.21.4)
serin endopeptidaz - are serin n centrul su catalitic
scindeaz legturile peptidice realizate ntre un aminoacid bazic,
diaminomonocarboxilic (lizin, arginin) i un aminoacid aromatic (tirozin,
fenilalanin)
secretat de pancreasul exocrin sub form inactiv de tripsinogen.
Activarea sa se face autocatalitic, sub influena urmelor de tripsin, la pH 7 9,
sau sub aciunea enterokinazei (EC: 3.4.21.9) din mucoasa intestinal, la pH 5,2 6
Are loc scindarea unui hexapeptid terminal cu structura
Val-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys
Tripsina are o mas molecular de 24000 Daltoni
pH-ul su optim de aciune este 7 9
n intestin tripsina hidrolizeaz numai proteinele denaturate, dup ce au fost
parial digerate de pepsin
26
27
Exemple de endopeptidaze
Chimotripsina (EC: 3.4.21.1)
rupe legturile peptidice la care particip aminoacizi aromatici, i scindeaz
proteinele pn la fragmente compuse din 6 8 aminoacizi.
secretat tot de pancreasul exocrin sub form de chimotripsinogen inactiv
Are loc formarea unor familii de chimotripsine: , , , , al cror centru
catalitic conine serin.
Att tripsina ct i chimotripsina fac parte din grupul proteazelor care conin
aminoacidul serina n centrul lor catalitic (Ser-195), deci sunt serin proteaze.
Serina mpreun cu un rest de histidin i de acid aspartic (His-57 i Asp-102)
realizeaz un atac nucleofil asupra legturii peptidice
28 28
Activarea chimotripsinogenului prin trecerea formei ciclice, inactive,
n form ciclic, activ
29
ALTE ENDOPEPTIDAZE
Trombina (EC 3.4.21.5)
fibrinogenaz, este o serin- endopeptidaz
scindeaz selectiv legturile de tip arginin-glicin din fibrinogen, pentru a forma
fibrin, elibernd fibrinopeptidele A i B, importante n procesul de coagulare
se formeaz de la protrombin (factorul II al coagulrii), avnd activitate omoloag cu
chimotripsina
Renina (EC: 3.4.23.15)
denumit i angiotensinogenaz este o aspartil-endopeptidaz.
n organismul uman se formeaz de la prorenin n plasm i rinichi.
Acioneaz asupra angiotensinogenului, pe care l transform n angiotensin cu
aciune vasoconstrictoare.
Enzima de conversie a angiotensinei (ACE, EC 3.4.15.1.)
denumit i peptidil-dipeptidaza A, este o glicoprotein dependent de Zn
2+
i
de Cl
-
care transform angiotensina I n angiotensin II (elibernd un dipeptid
carboxiterminal) cu aciune vasoconstrictoare.
29
30
ALTE ENDOPEPTIDAZE
Angiotensinogen
Renina
(aspartil-proteaza renala)
Angiotensina I
Angiotensina II
Enzima de conversie a
angiotensinei (ACE)
Asp-Arg-Val-Tyr-Ile-His-Pro-Phe-His-Leu
Asp-Arg-Val-Tyr-Ile-His-Pro-Phe + His-Leu
Bradikinina
Actiune vasoconstrictoare directa
Stimuleaza sistemul nervos simpatic
Induce senzatia de sete (ingestie apa)
Stimuleaza sinteza de aldosteron
Stimuleaza sinteza de hormon
antidiuretic (retentie hidrica)
Efect hipotensiv
Efect hipertensiv
Kininogen
alfa-globuline plasmatice
Kalicreina
30
31
Catepsinele
enzime proteolitice intracelulare (n special lizozomale) care scindeaz
legturi peptidice intracatenare, la care particip aminoacizi aromatici
particip la procesele de autodigerare (autoliz)
rol esenial n turnover-ul metabolic celular, de exemplu resorbia osoas
se disting numeroase catepsine, n funcie de structura molecular, de
mecanismul catalitic i de proteina pe care o scindeaz
active la pH mic
Catepsinele pot fi:
aspartil proteaze (catepsinele D i E);
serin-proteaze (catepsinele A i G);
cistein-proteaze (catepsinele B, C, F, H, K, L1, L2, M, O, P, R, Q, N, T, W).
ALTE ENDOPEPTIDAZE
31
32
HIDROLAZE CARE ACIONEAZ ASUPRA LEGTURILOR CARBON AZOT
(C N), ALTELE DECT CELE PEPTIDICE (AMIDAZE) (EC 3.5)
Ureaza (EC: 3.5.1.5), cu denumirea sistematic : uree amidohidrolaz
hidrolizeaz ureea la amoniac i ap (numai la plante i microorganisme)
enzim cu specificitate absolut de substrat !!
C
NH
2
NH
2
CO
2
NH
3
O + HOH 2
ureaza
+
Adenin deaminaza (EC: 3.5.4.2)
Guanin deaminaza (EC: 3.5.4.3)
N
N
NH
2
N
N
H
NH
3
N
N
OH
N
N
H
Adenina
Hipoxantina
adenin deaminaza
+ HOH
N
N
OH
N
N
H
N H
2
N
N
OH
N
N
H
O H
NH
3
Guanina
Xantina
guanin deaminaza
+ HOH
32
33
Asparaginaza (EC: 3.5.1.1), cu denumirea sistematic : L-asparagin amidohidrolaza
C
NH
2
CH
2
CH
COOH
NH
3
N H
2
COOH
CH
2
CH
COOH
N H
2
O
HOH
L-asparagina
acid L-aspartic
asparaginaza
+
EC 3.5. HIDROLAZE CARE ACIONEAZ ASUPRA LEGTURILOR CARBON
AZOT (C N), ALTELE DECT CELE PEPTIDICE (AMIDAZE)
Medicamente cu
asparaginaz:
LEUCOGEN
ELSPAR
C
NH
2
CH
2
CH
2
CH
COOH
NH
3
N H
2
COOH
CH
2
CH
2
CH
COOH
N H
2
O
HOH
L-glutamina
acid L-glutamic
glutaminaza
+
Glutaminaza (EC: 3.5.1.2), cu denumirea sistematic : L-glutamin amidohidrolaza
Glutamina este, n celul,
transportorul de grupri
NH
2
toxice rezultate din
catabolismul proteinelor
i aminoacizilor.
Predomin n organismele
animale.
33
34
EC 3.6. HIDROLAZE CARE ACIONEAZ ASUPRA LEGTURILOR ANHIDRIDICE
ALE ACIZILOR
Pirofosfataza anorganic (PP-aza, EC: 3.6.1.1), cu denumirea sistematic : pirofosfat
fosfohidrolaza
Hidrolizeaz pirofosfatul la dou molecule de ortofosfat.
Adenozintrifosfataza (EC: 3.6.1.3), denumit ATP-aza sau ATP monofosfataz, are
denumirea sistematic : ATP-fosfohidrolaza.
Hidrolizeaz ATP la ADP i Pi (fosfat anorganic), cu eliberarea a 30,54 kJ/mol (7,3 kcal).
O
OH OH
CH
2
O P O P O P O H
O O
OH OH OH
O
N
N
N
N
NH
2
adenina
ATP (adenozin trifosfat)
~ ~
riboza
ATP
+
HOH ADP + P
i
+ 7,3 kcal
ATP-aza
H
3
PO
4
P O O H
OH
P OH
OH
+ HOH 2
PP-aza
Pirofosfat
O O
34
EC: 4. LIAZE
35
EC: 4. LIAZE
Liazele sunt enzime care catalizeaz reacii de scindare nehidrolitic a unor
legturi chimice din molecula substratului.
Clasificarea liazelor n subclase i sub-subclase se face n funcie de tipul de
legtur covalent pe care o scindeaz: carbon-carbon, carbon-oxigen, carbon-
azot, sulf-azot, carbon-fosfor.
4. Liaze
4.1. Liaze carbon-carbon
4.1.1. Carboxi-liaze
4.1.2. Aldehid-liaze
4.1.3. Oxo-acid liaze
4.1.99. Alte liaze carbon-carbon
4.2. Liaze carbon-oxigen
4.2.1. Hidro-liaze
4.2.2.Liaze care acioneaz asupra polizaharidelor
4.2.99. Alte liaze carbon-oxigen
4.3. Liaze carbon-azot
4.3.1. Amoniac-liaze
4.3.2. Amidino-liaze
4.3.3. Amino-liaze
4.3.4. Alte liaze carbon-azot
4.4. Liaze carbon-sulf
4.5. Liaze carbon-halogen
4.6. Liaze carbon/fosfor
4.99. Alte liaze 36
COFACTORII LIAZELOR CARBON-CARBON (C-C) (EC 4.1)
Decarboxilaze ale cetoacizilor, enzime dependente de tiaminpirofosfat (TPP)
Decarboxilaze ale aminoacizilor, enzime dependente de piridoxal fosfat (PLP)
Aldehid-liaze (EC 4.1.2)
Fructozo-1,6-bisfosfat aldolaza (EC: 4.1.2.13) denumit i aldolaz, are
denumirea sistematic: fructoz 1,6-bisfosfat D-gliceraldehid-3-fosfat liaz
CH
2
C
CH HO
OH
OH
CH
2
HC
HC
CH
2
C
CH
2
-OH
OH
CH
2
HC
HC
OH
OH
O
OH
OH
O
OH
OH
O
OH
OH
O
O
O
O P
fructozo 1,6 bisfosfat
aldolaza
O
O
+
O
O
dihidroxiaceton fosfat
gliceraldehid fosfat
fructozo 1,6 bisfosfat
P
P
P
EC 4.1.2.13
37
n glicoliz
Exemple de reacii catalizate de LIAZE:
LIAZE CARBON-OXIGEN (CO) (EC 4.2)
Anhidraza carbonic (EC: 4.2.1.1), denumit i carbonat dehidrataza, cu
denumirea sistematic: carbonat hidroliaza. Centrul su catalitic conine Zn
2+
O
O H
O H
CO
2
C
Anhidraza carbonic
+ H
2
O
acid carbonic
(H
2
CO
3
)
L-serin dehidrataza (EC 4.2.1.13), denumit i serin deaminaz, are
denumirea sistematic : L-serin hidroliaza (dezaminat).
CH
COOH
C H
2
OH
N H
2 CH
3
C
O
COOH
Serin dehidrataza
NH
3

L-Serina
Acid piruvic
PLP
H
2
O
H
2
O

38
Proces este important
pentru transportul CO
2
de
la esuturi la plmni i
pentru meninerea
echilibrelor acido-bazice
HCO
3
-
+ H
+
LIAZE CARBON-SULF (C-S) (EC 4.4)
LIAZE CARBON-AZOT (CN) (EC 4.3)
R CH
NH
2
COOH R
C COOH
O
NH
3
Aminoacid
+ HOH
+
+ H
2
O
2
H
2
O + 1/2 O
2
Catalaza
+
Cetoacid
FMN
FAD
Exemplu: L,D aminoacid oxidaze - flavinenzime
Exemplu: Dezaminarea desulfurant a cisteinei
Cistein-desulfhidraza (EC 4.4.1.15), are denumirea sistematic: cistein
sulfid liaza
CH
COOH
C H
2
SH
N H
2
C H
3
C COOH
O
L-cistein hidrogen
sulfid liaza (EC 4.4.1.15)
PLP
H
2
O
NH
3
Acid piruvic
L-Cisteina
H
2
S

39
Liaze fosfor-oxigen (EC 4.6)
Aceste enzime se mai numesc nucleotidil-ciclaze i catalizeaz, n general,
eliminarea pirofosfatului din moleculele de nucleozid trifosfat.
Adenilat ciclaza (EC 4.6.1.1), denuimit i 3,5 AMP ciclic sintetaz, are
denumirea sistematic ATP pirofosfat liaz (cu ciclizare).
ATP
3',5'-AMP ciclic
+
pirofosfat
adenilat ciclaza
O
N
N
N
N
O P
P
O
P
O
O
O
N
N
N
N
P O
NH
2
OH OH
CH
2 HO
O
O
OH HO
OH HO
adenozin trifosfat (ATP)
adenilat ciclaza
EC 4.6.1.1
NH
2
OH
CH
2
O
OH
+
PPi
AMP ciclic
3
'
5
'
40
EC 5. IZOMERAZE
41
EC 5. IZOMERAZE
Izomerazele sunt enzime care catalizeaz diferite reacii de rearanjri
interne n molecula substratului (modificri structurale).
Clasificarea izomerazelor n subclase i sub-subclase
5. Izomeraze
5.1. Racemaze i epimeraze
5.1.1. Care acioneaz asupra aminoacizilor i a derivailor acestora
5.1.2. Care acioneaz asupra hidroxiacizilor i a derivailor acestora
5.1.3. Care acioneaz asupra glucidelor i a derivailor acestora
5.1.99. Care acioneaz asupra altor compui
5.2. Izomeraze cis-trans
5.3. Oxidoreductaze intramoleculare
5.3.1. Care fac interconversia aldoze i cetoze
5.3.2. Care fac interconversia grupelor ceto- i enol-
5.3.3. Mutarea legturilor C = C
5.3.4. Mutarea legturilor S S
5.3.99. Alte oxidoreductaze intramoleculare
5.4. Transferaze intramoleculare (mutaze)
5.4.1. Care transfer grupri acil
5.4.2. Fosfotransferaze (fosfomutaze)
5.4.3. Care transfer grupri amino
5.4.99. Care transfer alte grupri
5.5. Liaze intramoleculare
5.99. Alte izomeraze
42
RACEMAZE I EPIMERAZE (EC 5.1)
Racemazele aminoacizilor (EC 5.1.1)
Catalizeaz interconversia formelor D i L ale unui substrat.
Reacii importante pentru metabolismul celular, n conversia din forma D n forma L
a aminoacizilor ce ptrund n organism prin intermediul nutrimentelor
Organismul utilizeaz numai forma L a moleculelor respective.
piridoxal fosfat (PLP)-dependente
COOH
CH
3
CH N H
2 C H
COOH
CH
3
NH
2
alanin racemaza
(EC 5.1.1.1)
PLP
L--alanin D--alanin
L-aminoacid D-aminoacid
PLP
43
IZOMERAZE CIS-TRANS (EC 5.2)
Aceste enzime rearanjeaz geometria moleculei la nivelul dublei legturi.
Exemplu:
Retinal izomeraza (EC 5.2.1.3) sau all-trans-retinal 11-cis-trans-izomeraza
Aceast transformare reversibil este implicat n mecanismul vederii.
CHO
CHO
all-trans-retinal
11-cis-retinal
11
retinal izomeraza
44
OXIDOREDUCTAZE INTRAMOLECULARE (EC 5.3)
Catalizeaz reacii de oxidoreducere intramoleculare, adic oxidarea unei pri a
unei molecule, cu reducerea corespunztoare a unei alte pri din molecul.
n aceast subclas sunt incluse enzimele ce au glucide ca substrat, de exemplu
enzimele ce catalizeaz interconversia aldozelor i cetozelor.
Exemple:
Triozofosfat izomeraza (EC: 5.3.1.1) sau fosfotriozo- izomeraza, cu denumirea
sistematic : gliceraldehid 3-fosfat cetol-izomeraza
CH
2
C
CH
2
-OH
OH
CH
2
HC
HC
OH
OH
O
OH
OH
O
triozofosfat- izomeraza
O
O
O P
O
dihidroxiaceton fosfat
gliceraldehid-3-fosfat
P
Glucoz-6-fosfat izomeraza (EC: 5.3.1.9), sau fosfohexozo izomeraza sau
fosfohexomutaz, are denumirea sistematic : -glucozo-6-fosfat-cetol izomeraza.
O
CH
2
-O-PO
3
H
2
OH
OH
OH
OH
O
O H
OH
CH
2
-O-PO
3
H
2
CH
2
-OH
2
alfa-D- glucoz 6-fosfat beta-D- fructoz 6-fosfat
1
2
3
4
5
6
1
3
4
5
6
glucozo 6-fosfat izomeraza
OH
45
TRANSFERAZELE INTRAMOLECULARE. MUTAZE (EC 5.4.)
Cofactorii acestor enzime sunt : metilcobalamina i 5-deoxiadenozilcobalamina,
vitamere B
12
.
Exemple:
Metilmalonil-SCoA mutaza, (EC 5.4.99.2)
HOOC CH
CH
3
O
SCoA
HOOC CH
2
CH
2
O
SCoA
5'-deoxiadenozil
cobalamin
Succinil ~SCoA
Metilmalonil -
CoA mutaza
Metilmalonil~SCoA
1 2
3
1
2 3
C
~
C
~
Metil-aspartat mutaza (EC: 5.4.99.1), sau glutamat-mutaz
HOOC CH
2
4
CH
2
3
C
2
H
COOH
1
NH
2
HOOC CH
CH
3
C
H
COOH
NH
2
metil-aspartat-mutaza
EC: 4.4.99.1
Acid glutamic
Acid metil-aspartic
metil-cobalamina
46
EC. 6 LIGAZE
47
Ligazele sunt enzime care catalizeaz formarea unei molecule mari prin
combinarea a dou molecule mai simple, cu crearea de legturi covalente.
Ligazele catalizeaz deci reacii de biosintez care au loc pe seama energiei
furnizate de obicei de ATP.
Pentru enzimele din aceast clas se folosete i denumirea de sintaze sau
sintetaze.
Se cunosc n prezent numai cofactorii ligazelor carbon-carbon : biotina i
filochinonele (vitamina K
1
).
EC. 6 LIGAZE
Clasificarea ligazelor n subclase i sub-subclase
6. Ligaze
6.1. Ligaze care formeaz legturi carbon-oxigen
6.1.1. Ligaze care formeaz aminoacil-ARNt i compui nrudii
6.2. Ligaze care formeaz legturi carbon-sulf
6.2.1. Ligaze acid-tiol
6.3. Ligaze care formeaz legturi carbon-azot
6.3.1. Ligaze acid-amoniu (sau amin) (amid sintetaze)
6.3.2. Ligaze acid-aminoacid (peptid sintetaze)
6.3.3. Ciclo-ligaze
6.3.4. Alte ligaze carbon-azot
6.3.5. Ligaze carbon-azot cu glutamin ca donor de N-amid
6.4. Ligaze care formeaz legturi carbon-carbon
6.5. Ligaze care formeaz legturi de esteri fosforici
48
LIGAZE CE FORMEAZ LEGTURI CARBON-OXIGEN (C-O)
(EC 6.1)
Aminoacil ARNt-ligazele (EC 6.1.1):
Catalizeaz condensarea unui aminoacid
cu ARN-ul de transport printr-un proces de acilare
Se formeaz aminoacil-ARN de transport (ARNt)
Are loc activarea aminoacizilor, etap obigatorie n biosinteza proteic.
Procesul este dependent de energia furnizat de ATP, iar legtura dintre
aminoacizi i ARNt este de tip ester.
Aminoacid + ATP Aminoacil-AMP + PP
i
Aminoacil-AMP + ARNt
AMP + Aminoacil-ARNt
Reacia se desfoar n dou etape:
C
H
R
NH
3
+
C
O
O
-
Aminoacid + ATP + ARNt
+ PP
i
+ AMP
ARNt
C
H
R
NH
2
C
O
O
aminoacil-ARN transport
Reacia global este:
49
50
Pentru fiecare aminoacid exist
un ARNt corespunztor, i deci,
o ARNt-ligaz corespunztoare.
ARN
t
LIGAZE CE FORMEAZ LEGTURI CARBON-AZOT (C-N)
(EC 6.3)
Glutamin sintetaza (EC 6.3.1.2), sau glutamat amoniac ligaza, are
denumirea sistematic : L-glutamat : amoniac ligaza (ADP formator).
COOH
CH
2
CH
2
CH N H
2
COOH
CH
2
CH
2
CH
COOH
N H
2
NH
3
NH
2
O
+
acid L-glutamic
+
+
ATP
C
ADP
+ Pi
glutamin sintetaza
EC: 6.3.1.2
L-glutamina
Reacie este implicat n detoxifierea amoniacului n organism prin
transformarea sa n glutamin.
51
C
CH
2
CH
2
CH N H
2
COOH
O
NH C
O
NH CH
2
COOH
SH
CH
2
CH
-L-Glutamat-cisteinil-
glicin-ligaza
acid L-glutamic + L-Cistein + Glicin + ATP
+ ADP + P
i
Glutation redus (GSH)
Glutation sintetaza (EC: 6.3.2.3), denumit i glutation sintaz, are denumirea
sistematic : -L-glutamil-L-cisteinil : glicin ligaza (ADP formatoare).
LIGAZE CE FORMEAZ LEGTURI CARBON-AZOT (C-N)
(EC 6.3)
52
LIGAZE CE FORMEAZ LEGTURI CARBON-CARBON (C-C).
CARBOXILIGAZE (EC 6.4)
Enzime care realizeaz carboxilarea unor compui organici ;
Cofactorii acestor enzime sunt biotina i vitamina K
1
.
Exemple:
Piruvat carboxilaza (EC: 6.4.1.1), sau piruvat carboxiligaza
COOH
CH
2
COOH C H
3
O
O
COOH
Mn
2+
+
"CO
2
" + ATP
C
ADP+P
i
C
Biotin-enzim
acid piruvic
acid oxalilacetic
Acetil~SCoA carboxilaza (EC 6.4.1.2), sau acetil~SCoA carboxiligaza
O
SCoA C H
3
COOH
CH
2
O
SCoA
Mn
2+
C
~
+
"CO
2
" + ATP
C
~
ADP + P
i

Biotin-enzim
malonil~SCoA
molecula starter
din biosinteza
de acizi grai
53
Gama-glutamil carboxilaza catalizeaz, mpreun cu vitamina K, carboxilarea acidului
glutamic din structura unor proteine biologic active din organism. Aceast modificare
posttranslaional este indispensabil pentru activarea acestor proteine, cum este cazul
proteinelor implicate n cascada coagulrii (factorii II, VII, IX, X) i a osteocalcinei
implicat mineralizarea esutului osos.
COOH
CH
2
CH
2
CH
2
CH
2
COOH COO
OH
OH
CH
3
R
R
CH
3
O
O
SH
SH
S
S
C
H N
H
C
O
Rest de acid glutamic
din polipeptide (Glu)
C
H N
H
C
O
H
C
H
Rest de acid gama-carboxiglutamic
din polipeptide (Gla)
+ O
2
+CO
2
Gama-glutamil carboxilaza
Filochinon
(forma redus)
Filochinon 2,3-epoxid
R - radical fitil
O
Epoxid reductaza
NADH+H
+
NAD
+
X
X
compusi
ditiolici
compusi cu punte
disulfur
H
2
O
54
CH
2
COO
CH
2
COO OOC
O
2
CO
2
CH
2
CH
O
O
NH - CH - C -
-
Precursor inactiv al factorilor II, VII, IX, X -
protein cu acid glutamic necarboxilat
(Glu-proteine)
- -
Vitamina K
+
+
NH - CH - C -
Factori activi ai coagularii
protein cu acid glutamic -carboxilat
(Gla-proteine)
}
Rest de acid glutamic
}
Rest de acid -carboxi-glutamic
C C
O O
O
O
CH
2
CH
NH - CH - CO -
Ca
2+
Resturile -
carboxiglutamice
permit chelarea
ionilor de calciu la
nivelul proteinelor ce
intervin n coagulare
i n mineralizarea
osoas !
Gama-glutamil
carboxilaza
55