La fagocitosis por neutrfilos

abstracto
La fagocitosis es central para la funcin microbicida de los neutrfilos. Los agentes patgenos son
inicialmente envuelta en una membrana plasmtica derivado
vacuola, el fagosoma, que procede a adquirir propiedades de degradacin de un complejo proceso
denominado maduracin. En este captulo, se discute
el conocimiento actual de los mecanismos moleculares implicados en la formacin y maduracin
del fagosoma de los neutrfilos.

1. introduccin
Los neutrfilos, que junto con los macrfagos constituyen la
fagocitos profesionales, estn dotados de una capacidad nica
para engullir (Fig. 1) y con ello eliminar los agentes patgenos y clulas
escombros. Los fagocitos estn equipados con receptores especializados
a reconocer sus objetivos, lo que media la compleja maquinaria
internalizacin e inicia un surtido de degradativa
mecanismos que culminan en la matanza y eliminacin de la
partculas envolvi. La mayor parte de nuestro conocimiento de los mecanismos moleculares
mecanismos de fagocitosis se ha derivado de los estudios
de la fagocitosis en macrfagos, y mucho menos se sabe
sobre neutrfilos, debido al hecho de que son refractarios a
manipulacin gentica por cualquiera de transfeccin o microinyeccin.
Por esta razn, la frecuente referencia se har a
fagocitosis en macrfagos, neutrfilos, aunque permanecen
el objetivo principal de esta revisin.
Al igual que los macrfagos, los neutrfilos pueden internalizar tanto opsonizado
(Fig. 1) y las partculas no opsonizadas. El director de la
opsonina receptores de neutrfilos, los receptores Fc y un subgrupo
de las integrinas b2, se unen a la inmunoglobulina o
recubiertos por complemento partculas, respectivamente. Los principales receptores Fc
de los neutrfilos humanos en reposo son FccRIIA (CD32)
y FccRIIIb (CD16), mientras que la alta afinidad FccRI (CD64)
funciones predominantemente neutrfilos despus de haber sido cebados
con interfern [1]. Complemento fragmento C3bi se reconoce
por la integrina activada b2 MAC1 (CD11b/CD18).
Los estudios en los macrfagos sugieren que mientras que la inmersin de
partcula en una vacuola de membrana derivada es el resultado final en
ambos casos, los procesos que subyacen internalizacin no estn
idntica en IgG o mediada por el complemento eventos. mientras que
opsonizadas complemento partculas son internalizados por suavemente
"Hundimiento" en la clula, la ligadura Fcc receptor inicia la
extensin vigorosa de seudpodos que rodean y en ltima instancia,
atrapar las partculas [2]. Una vez formada, la vacuola
se somete a una serie rpida de sucesos de remodelacin que alterar su
composicin, que confiere sobre ella la capacidad para matar los patgenos
y disponer de los desechos. Estos eventos de remodelacin son colectivamente
denomina maduracin. Este captulo presenta una visin general
del conocimiento actual de los procesos moleculares que
mediar en la formacin y maduracin del fagosoma de los neutrfilos
2. Los primeros eventos de sealizacin en la fagocitosis
Como se discuti anteriormente, los mltiples tipos de receptores pueden iniciar
fagocitosis y, si bien son superficialmente similares,
los acontecimientos moleculares que subyacen a la internalizacin de las partculas son
ms probable que difieran en cada caso individual. Por simplicidad,
slo las seales producidas por los receptores de la FCC, que han sido
estudiado ms ampliamente, se revisarn brevemente aqu. activacin
de la transmembrana Fcc receptores requiere la fosforilacin
de los residuos de tirosina en tndem dentro del contexto de un motivo inmunoreceptor
activacin de tirosina o ITAM. Fosforilacin
se produce por el reclutamiento de activado
Quinasas de la familia Src en la proximidad inmediata de los receptores,
como resultado de los conglomerados receptor por ligandos multivalentes.
La fosforilacin de los motivos ITAM en vez sirve para generar
sitios de atraque para las protenas que llevan dominios SH2, en particular
la tirosina quinasa Syk. Localizada actividad Syk ha sido
demostrado que es esencial para la fagocitosis mediada por Fc, como los neutrfilos
de Syk-ratones deficientes son incapaces de ingerir IgGopsonized
partculas [3]. La participacin de Syk se acompaa
por la estimulacin de la fosfatidilinositol 3-quinasa (PI3K),
que es en gran parte responsable de la conversin de fosfatidilinositol
4,5-bisfosfato (PI4, 5P2) para fosfatidilinositol
3,4,5-trifosfato (PI3, 4,5 P3). Syk ratones deficientes muestran una reduccin
Fosforilacin de PI3K, lo que implica que la activacin de la
tirosina quinasa es un evento temprano que contribuye indirectamente a
phosphoinositide metabolismo. PI4, 5P2 no slo se convierte
a PI3, 4,5 P3, pero tambin acta como un sustrato para la fosfolipasa C
(PLC) para generar localmente diacilglicerol (DAG) [4]. La
Este ltimo produce activacin de coordinacin de las isoformas clsicas y nuevas
de la protena quinasa C (PKC) y domaincontaining C1 otro
enzimas en la proximidad inmediata del fagosoma
[5]. A pesar de conversin intensiva a PI3, 4,5 y P3
DAG, el nivel de PI4, 5P2 se mantiene e incluso aumentado
en las primeras etapas de la fagocitosis por estimulacin localizada de
fosfatidilinositol 4-fosfato 5-quinasa [4]. Activacin normal
de las quinasas phosphoinositide [2] y del PLC [4]
requerido para la fagocitosis, mientras que el requisito para el individuo
Isoformas de PKC es todava objeto de debate.
Los efectores de las quinasas de protenas y lpidos
inducir la polimerizacin de la actina y la membrana localizada
remodelacin que son esenciales para la ingestin de partculas.
Rac1 y Cdc42 se cree que se requiere para la actina conjunto
despus de la estimulacin del receptor de FCC, mientras que juega un Rho
papel equivalente en clulas activadas del complemento [2]. Otro
pequea GTPasa, Arf6, parece jugar un doble papel en phosphoinositide
sntesis y en la regulacin de la entrega de endomembranas
a los sitios de la fagocitosis [6]. La guanina preciso
factores de intercambio de nucletidos (FMAM) que participan en cada
instancia no han sido completamente identificados, se cree que butVav
contribuir a la activacin de Rho-GTPasas de la familia [7], como lo
contiene una homologa pleckstrin (PH) de dominio que tiene un alto
afinidad por PI3, P3 4,5. Ms abajo, el complejo Arp2 / 3
Se considera que desempean un papel central en el conjunto de actina [8].
Arp2 / 3 es estimulada por Cdc42 a travs de WASP y por Rac1
a travs de SCAR / WAVE. La polimerizacin de actina, junto con la
activacin de la PI3, 4,5 P3-sensible miosina X [9] y el
la administracin localizada de endomembranas, impulsa la formacin
de la copa phagosomal y su sellado.
3. Maduracin del fagosoma
Incluso despus de un fagosoma se forma alrededor de una partcula, su
composicin inicial no es antimicrobiana: el trmino "fagosoma
maduracin "por lo tanto, se refiere al proceso por el cual
el fagosoma naciente adquiere la maquinaria celular necesaria
para la matanza y eliminacin de los microorganismos internalizados.
Este desarrollo es un proceso dinmico, que se cree
implicar mltiples eventos de fusin con los componentes de la endoctica
va, as como la eliminacin de componentes por vesicular
fisin. Estas interacciones secuenciales (apodado el
"Kiss and run" hiptesis) provocar grandes cambios
a los contenidos phagosomal y de la membrana, incluyendo el
adquisicin de enzimas microbicidas, vacuolar (V) ATPasas
y el complejo NADPH oxidasa. Aunque mucho se ha aprendido acerca de los determinantes
moleculares de esta maduracin
proceso en los ltimos aos, la mayora de los estudios han sido
llev a cabo en los macrfagos o en clulas no fagocticas (por ejemplo,
fibroblastos) transfectadas con receptores fagocticas (los llamados
diseados fagocitos). Algo menos se conoce sobre fagosoma
maduracin de los neutrfilos, en gran parte debido a que son
como no susceptibles de manipulacin molecular.
3,1. Endocitosis y fagocitosis
Poco despus del sellado, la vacuola phagosomal inicia la
proceso de maduracin. Debido a las similitudes obvias con
endocitosis, una revisin de la maduracin del fagosoma no puede ser
a cabo sin una cierta comprensin de la endoctica
va [10]. Despus de la internalizacin de un complejo receptor-ligando
por endocitosis, el contenido de una vescula endoctica son
dirigida a un endosoma temprano. En esta etapa, el ligando y su
receptor a menudo se disocian, con el receptor se recicla a
la superficie de la clula y el ligando continua a lo largo de la degradacin
brazo de la endoctica endosoma temprano pathway.An puede ser
identificado por su lumen moderadamente cido (pH 6,5 a 6,0) y
por sus molculas caractersticos asociados, incluyendo principios de los aos
endosomal antgeno 1 (EEA1), receptores de transferrina, y el
pequea GTPasa Rab5. Aquellos componentes de la endosoma temprano
que no se recicla a la superficie celular se entregan a
endosomas tardos, donde la degradacin puede comenzar. Late endosomes
son ms cidas (pH 5,5 a 6,0), y porque contienen
vesculas intraluminales, se denominan a menudo multivesicular
cuerpos. Endosomas tardos se pueden identificar por su asociacin
con las GTPasas Rab7 y Rab9, y con lysosomalassociated
protenas de membrana (lmparas). Posteriormente, endoctica
carga se suministra a los lisosomas, que se caracterizan
por su extrema acidez (pH 5,0) y elevacin de
Las concentraciones de proteasas. Los lisosomas son el destino final
endoctica de la carga que se destina para la degradacin.
Debido a que los lisosomas compartir muchos marcadores con endosomas tardos
(Lmparas, por ejemplo), pueden ser mejor identificado en "pulso-caza"
etiquetado experimentos, utilizando protocolos que garanticen la entrega
de sondas internalizados a un compartimiento tarde, terminal,
es decir, el lisosoma.
En muchos sentidos, la maduracin de los macrfagos phagosomal
parece ser una recapitulacin de la secuencia endoctica [11].
Tras el cierre de la copa phagosomal, el recin formado
fagosoma se somete a eventos secuenciales de fusin con principios,
entonces endosomas tardos, hasta que finalmente la fusin con los lisosomas para
producir un fagolisosoma. El fagolisosoma es un cido
compartimento rico en hidrolasas, donde la mayor parte de la degradacin
del contenido luminal se cree que ocurre.
A diferencia de los macrfagos, los cuales se comprometen endocitosis activa,
neutrfilos maduros son notablemente pasiva. Convencional
principios y finales de los endosomas, lisosomas y no son fcilmente
encontrado en estas clulas. En cambio, contienen una variedad de especializada
vesculas y grnulos que no son ni sujetos a trfico
entre s, ni son accesibles desde el medio externo.
Estos se describen en ms detalle a continuacin.
3,2. Vesculas secretoras y grnulos
El fagosoma de los neutrfilos adquiere su antimicrobiano
efectos a travs de la fusin con las vesculas secretoras y grnulos.
Estos orgnulos endomembrane se cree que se forman a partir de
vesculas que brotan de la red trans-Golgi durante neutrfilos
desarrollo, y contienen un heterogneo notablemente
y poderoso arsenal de pptidos microbicidas y proteolticas
enzimas, as como en numerosos unidas a la membrana
protenas que contribuyen a la eliminacin de patgenos. Cuatro categoras
de grnulos han sido identificados: primaria (o azurfilos)
grnulos caracterizados por la presencia de la mieloperoxidasa
y unido a la membrana CD63, grnulos secundarios
(Tambin conocido como grnulos especficos) cuyo contenido incluye
lactoferrina y unido a la membrana CD66b, grnulos terciarios,
que falta CD66b pero contienen gelatinasa, y secretora
vesculas, que contienen fosfatasa alcalina albmina y expresa
y CD35 en sus membranas. Los mecanismos de
la desgranulacin de los neutrfilos son el tema de otra
artculo de este nmero [12], en esta seccin, vamos a limitar nuestra
discusin grnulos de neutrfilos, ya que se refieren especficamente
a la fagocitosis.
Aunque se ha aprendido mucho acerca de los mecanismos que
subyacen fusin grnulo, los lectores deben comprender que
muchos de estos estudios utilizaron mediadores solubles para estimular
grnulo exocitosis en el plasmalema (secrecin generalizado),
mientras que un nmero menor analizaron grnulo localizada
coalescencia con la membrana phagosomal, utilizando partculas
estmulos. Si los resultados de estos estudios son directamente
comparable no est claro, pero es seguro suponer que las dos
fenmenos estn relacionados. En efecto, el uso de la secrecin generalizada
como un modelo para la fusin localizada puede ser una aproximacin razonable,
dado que la fusin de los grnulos con los no sellados
membrana plasmtica se ha demostrado que se producen cerca
formando phagosomes [13].
3,3. Las seales para la secrecin
La naturaleza abrupta de la fagocitosis despus de la fusin implica
la generacin de seales efectivas aguda. Como en otro
sistemas, el calcio puede provocar la fusin de los grnulos de los neutrfilos.
Adems, elevado calcio libre citoslico se sabe que
acompaar la ingestin de partculas durante la fagocitosis. Mltiple
fuentes contribuyen a aumentar el calcio citoslico: la
catin es liberado del retculo endoplasmtico [14],
que a su vez activa la entrada de calcio extracelular. En
Adems, es concebible que el calcio tambin puede ser liberado
localmente por el compartimento de destino, es decir, el fagosoma en s
[15].
Cambios en el nivel de calcio libre citoslico se requieren
para la secrecin de grnulos [16] y, ms importante, para granular
fusin con fagosomas en los neutrfilos [17]. El individuo
compartimentos secretores tienen diferentes umbrales de calcio
para la secrecin, con vesculas secretoras que tienen el ms bajo y
grnulos azurfilos del umbral ms alto [18]. El mecanismo
responsable de esta sensibilidad diferencial de calcio es desconocido. Una familia de protenas
sensibles a calcio, las sinaptotagminas,
Se ha postulado para mediar la sensibilidad al calcio
en otras clulas. Una isoforma, la sinaptotagmina II, fue
encontrado para ser asociado con grnulos especficos y translocado
para el fagosoma en una manera dependiente de calcio [19].
Los autores de este estudio especularon que la sinaptotagmina II
sirve como el sensor de calcio de estos grnulos. Ser de
inters para definir si las isoformas de sinaptotagmina diferentes
existen en los compartimentos individuales secretoras de neutrfilos
y para validar su participacin en la fusin.
Otros sitios de accin podran contribuir al efecto de
calcio en maduracin del fagosoma. La capa de actina que las lneas
la copa phagosomal se desmonta rpidamente despus del sellado,
y este paso se piensa que es permisiva para el acoplamiento y la
la fusin de vesculas y grnulos con la membrana phagosomal.
Es de destacar que la despolimerizacin de la actina periphagosomal
requiere cambios en el calcio intracelular [20]. El catin
por lo tanto, podra promover la secrecin de las vesculas mediante la concesin de
acceder a su objetivo, la membrana phagosomal. La calmodulina
es otra posible efector de calcio durante el fagosoma
maduracin. Estudios en levaduras sugirieron que la calmodulina mayo
sern contratados de forma dependiente de calcio a las vacuolas,
en los que puede catalizar la coalescencia de membrana apposed
bicapas [21]. Los efectores de la calmodulina en este
proceso probablemente incluir calmodulina dependiente de la protena quinasa
II [22]. Por ltimo, las protenas de unin a calcio-I y anexina
anexina III son conocidos para asociar con el fagosoma en
neutrfilos, y puede contribuir a su maduracin, aunque
su funcin sigue siendo poco clara [23].
Mientras que el requisito de calcio en la secrecin de
grnulos est bien establecido, el papel de las isoformas de PKC en este
proceso no est tan bien definida. Aunque por lo menos cuatro isoformas
de PKC translocacin a la membrana plasmtica sobre la fagocitosis,
parece que mientras que la PKC es esencial para la superxido
generacin, la quinasa no es estrictamente necesario para la degranulacin
[24]. Por otra parte, la familia Src de tirosina de protenas
quinasas ha sido implicado en la maduracin del fagosoma
en los neutrfilos. Como se dijo anteriormente, la familia Src quinasas juegan un papel decisivo
en la secuencia de activacin temprana, provocada por receptor
clustering. Adems, sin embargo, Hck se ha localizado
a grnulos azurfilos y en la fagocitosis de los
zimosan opsonizado, se activa y se transloca hacia el
fagosoma [25]. Curiosamente, se ha demostrado que cuando
neutrfilos internalizar micobacterias, Hck no se activar
y no se translocan al fagosoma. Ms importante an,
bajo estas condiciones, la fusin de los grnulos azurfilos
con el fagosoma se realiza la ablacin, mientras que la fusin con
grnulos especficos no se ve afectada [26]. Estas observaciones sugerentes
implicar Hck en fusin de grnulos azurfilos, pero la
modo de accin de la quinasa queda por definir.
En resumen, comparativamente poco se sabe acerca de la
eventos que desencadenan la fusin de membrana durante la maduracin de
phagosomes en los neutrfilos. Calcio y protenas quinasas
sin duda juegan un papel clave, pero sus objetivos y los
posible existencia de seales adicionales debe ser el centro de
trabajo futuro.
3,4. Especificidad de la secrecin
Mientras que las vesculas secretoras y grnulos son claramente capaces
de fusin a travs de la membrana plasmtica cuando las clulas estn
activado por los agonistas solubles, durante la inmersin de las partculas,
fusin se limita a la membrana de la naciente y
formado fagosoma. Claramente, algn mecanismo (s) debe existir
para garantizar el carcter vectorial y especificidad de estos fusin
eventos. Los candidatos obvios para esta tarea son la SNARE
familia de protenas. Se cree que un SNARE (soluble
N-etilmaleimida sensible-fusin-protena de unin a protenas
receptor) en una membrana de donante interacta con un cognado
SNARE en una membrana diana para formar un complejo estable
que consta de cuatro hlices, presentadas por el SNARE dos
protenas. Este complejo tetrahelical sirve para llevar los dos
membranas juntos y promueve su fusin.
Hasta la fecha, se conoce relativamente poco sobre el papel de
SNAREs definidos en la maduracin del fagosoma. Sin embargo, la
exocitosis de los grnulos de los neutrfilos activados por soluble
estimulantes se ha estudiado. En los neutrfilos activados con
forbol-12-miristato-13-acetato, la protena SNARE
SNAP-23 translocado a partir de grnulos especficos y terciaria a
la superficie de la clula [27], en el que se encontr a interactuar con
syntaxin 6, otro SNARE. Los anticuerpos del SNAP-23 impidi
exocitosis de los grnulos azurfilos no especficos pero
grnulos; en contraste, los anticuerpos para syntaxin 6 impedido
exocitosis de grnulos especficos y ambos azurfilos. La
autores de este informe se propona que syntaxin 6 en el neutrfilo
membrana plasmtica acta como un objetivo para la secrecin de
grnulos especficos y azurfilos, mientras SNAP-23 es
slo participan en la secrecin de grnulos especficos. Un similar
estudio realizado por los mismos investigadores sugirieron que syntaxin 4 en
la membrana de plasma interacta con VAMP-2 en la superficie
de grnulos especficos y terciarias, con miras a su exocitosis
[28]. Es evidente que an queda mucho por aprender sobre el papel de la
Trampas de neutrfilos fisiologa.
Aunque trampas son mediadores importantes de la membrana
los eventos de fusin, el grado de especificidad de sus interacciones
sigue siendo controvertido. Otros determinantes de la especificidad y
direccionalidad sera necesario en el caso de que SNAREs hacer
no dictar todo el proceso. La familia de GTPasas Rab es
probabilidades de cumplir esta funcin. Al trabajar en concierto con
Trampas, las protenas Rab conferir una capa adicional de especificidad para
el acoplamiento de los donantes a las membranas dianas. De la familia Rab
de GTPasas, Rab5 es de lejos el mejor estudiado. Al igual que otros
miembros de la familia, Rab5 es una GTPasa monomrica, cuya
capacidad para desplazarse entre GTP y GDP unido estados permite
que funcione como un interruptor molecular [29]. En los macrfagos,
Rab5 se ha detectado a residir transitoriamente en fagosomas tempranos,
cada vez ms evidente poco despus de la escisin de la
superficie de la membrana. Ms importante an, fue recientemente Rab5
demostrado que regulan la maduracin del fagosoma de los neutrfilos:
inhibicin de Rab5a (uno de tres isoformas de Rab5) utilizando
oligonucletidos antisentido alterada LAMP-1 y lactoferrina
adquisicin por el fagosoma maduracin [30]. La precisa
modo de accin de Rab5 es totalmente comprendida. La GTPasa se cree que interactan con un
gran nmero de protenas,
denomina Rab5 efectores, que incluyen Rabaptin-5,
-5 Rabenosyn, EEA1, y la clase III PI3K, el mamfero
homlogo de la levadura Vps34, que genera fosfatidilinositol
3-fosfato (PI3P). Cmo estos y posiblemente otros Rab5
efectores funcionar conjuntamente para facilitar el acoplamiento de la membrana es
no se sabe con certeza. El reclutamiento de Vps34 se consider una
etapa temprana, lo que conduce a la formacin rpida de PI3P. La generacin
de la fosfoinositida por el complejo Rab5 efector
podra servir para reclutar otras protenas. De hecho, algunos Rab5
efectores, como EEA1 Rabenosyn y 5, tienen FYVE llamada
dominios ricos en cistena secuencias que se unen especficamente a
PI3P. Adems, PI3P es tambin un ligando para ciertas protenas
teniendo phox homologa (PX) dominios. Curiosamente, EEA1
contiene dos espacialmente distintos Rab5 sitios de unin, y puede
por lo tanto sirven para atar dos membranas que contienen Rab5.
Adems de traer compartimentos membranosos juntos,
Protenas Rab tambin pueden regular la direccin de la
procesos de fusin. Fagosomas son conocidos para mover bidireccionalmente
a lo largo de los microtbulos y los inhibidores de microtbulos
evitar fagosomas adquieran los marcadores de la tarde endoctica
va [31]. Rab5 se ha demostrado que interactan con
dinena, un menos-end dirigidas microtbulos basada en protena motora
[32]. De manera similar, Rab7, que se encuentra en endosomas tardos
y los lisosomas, se ha demostrado que interactan con una protena
llamado RILP (Rab7 interaccin protena lisosomal). RILP reclutas
el complejo dinena dynactin, que media centrpeta
movimiento de orgnulos a lo largo de microtbulos [33]. A
qu punto estas protenas motoras estn implicados en la maduracin
de fagosomas en los neutrfilos no se conoce todava.
Finalmente, aunque la secrecin de grnulos de los neutrfilos
requiere calcio, es interesante sealar que el centro de coordinacin,
naturaleza polarizada de fusin grnulo en los sitios de fagosoma es
no dictada por el calcio. Esta administracin localizada puede ser interrumpido
por la colchicina, pero no citocalasina, lo que sugiere un papel
por los microtbulos en la entrega preferencial de grnulos a
el fagosoma [13].
4. La NADPH oxidasa de neutrfilos
Tras la activacin, los neutrfilos son altamente eficaz en la generacin
especies reactivas de oxgeno (ROS) por un proceso conocido como
la explosin respiratoria. En los neutrfilos estimulados, ROS son
generado casi exclusivamente por una NADPH oxidasa que
pertenece a la familia de protenas de NOX. El leucocitos
NADPH oxidasa especfico es una entidad con multisubunit
componentes unidos a la membrana y soluble que se ensamblan en
un complejo hetermero cuando las clulas son estimuladas. Mientras que un
fraccin de los componentes intrnsecos de la oxidasa estn
presentes en la membrana plasmtica en el momento de la fagocitosis,
ms se entregan a travs de la fusin con el almacenamiento intracelular
sitios. Grnulos secundarios se piensa que son la principal fuente
de la NADPH oxidasa phagosomal [34].
Asamblea puede ocurrir en el plasmalema, cuando soluble
agonistas se utilizan, o en la membrana durante phagosomal
ingestin de partculas. La oxidasa de ensamblado facilita la
la transferencia de un electrn del NADPH citoslico a molecular
oxgeno capturado a partir del medio. El producto de esta reaccin,
el anin superxido, entonces se puede convertir en otro
metabolitos de oxgeno reactivo, incluyendo el perxido de hidrgeno
y cido hipocloroso. En conjunto, estos ROS servir como altamente
agentes antimicrobianos eficaces. La importancia clnica de la
NADPH oxidasa y sus productos se ejemplifica mejor en
pacientes con enfermedad granulomatosa crnica (CGD). Estos
pacientes, que tienen la funcin defectuosa oxidasa, son susceptibles
a infecciones recurrentes bacterianas y fngicas.
5. Papel de pH en maduracin del fagosoma: macrfagos
vs neutrfilos
En los macrfagos, uno de los rasgos clave de la maduracin
fagosoma es su acidez aumenta constantemente. Fagosomas tardos
(Fagolisosomas) puede alcanzar un pH luminal 5,0. Esta
acidificacin es la clave para la actividad ptima de las proteasas y
otras hidrolasas lisosomales implicados en el asesinato de patgenos.
Sin embargo, adems de su efecto inhibidor directo sobre la
crecimiento y la viabilidad de los microbios, el pH cido phagosomal
Es probable tambin importante para la maduracin del fagosoma. Por lo tanto,
tratamiento de los macrfagos con bases dbiles likeNH4Cl inhibe
fagosoma-lisosoma fusin. El mecanismo de esta inhibicin
no se conoce, pero el hallazgo sugiere que, en lugar
de ser simplemente una consecuencia de la maduracin, acidificacin
en s puede ser necesario para el fagosoma para desarrollarse completamente.
Esta nocin es consistente con las observaciones hechas en el endoctica
va, donde la inhibicin de la vacuolar (V) -
ATPasa disminuy la tasa de entrega de la carga de multivesicular
endosomas a lisosomas [35].
Como en los endosomas, la acidificacin de los fagosomas en los macrfagos
se establece principalmente por la accin de la
V-ATPasa, una protena transmembrana de multisubunidades que las bombas
protones en el lumen del fagosoma. V-ATPasas son
apenas detectable en la membrana plasmtica de las clulas quiescentes
y por tanto no se presente inicialmente en el fagosoma naciente.
Sin embargo, son rpidamente insertada por los eventos de fusin
con orgnulos endomembranas. En los neutrfilos, secretora
vesculas, grnulos primarios y terciarios, secundarios, pero no
grnulos fueron encontrados para contener V-ATPasas [36].
Sorprendentemente, a pesar del hecho de que los grnulos se fusionan con cidos
los fagosomas de los neutrfilos, lo que insertingV-ATPasas,
el lumen de los fagosomas en estas clulas no es muy cida. En
hecho, una alcalinizacin transitorio inicial se ha descrito,
que desaparece despus de un perodo de minutos. No est claro
si el pH se mantiene cerca de la neutralidad a continuacin, o se convierte
ligeramente cida (para revisin ver [37]). Este comportamiento inesperado
se ha atribuido principalmente al reclutamiento y activacin
de la NADPH oxidasa, que es mucho ms pronunciada
en los neutrfilos que en los macrfagos. La oxidasa
altera phagosomal pH por varios mecanismos independientes.
En primer lugar est el consumo neto de H + luminal
durante la dismutacin del superxido en perxido de hidrgeno
(Fig. 2I). En segundo lugar, ROS generado por la oxidasa disminuir
la eficacia de la fusin con el grnulo phagosomal membrana, resultando en una reduccin de la
insercin de V-ATPasas y
tasas consiguiente inferiores de H + bombeo [38]. Debido a que el
pH misma juega un papel en el proceso de maduracin, la incapacidad
de fagosomas para desarrollar una acidificacin temprano tendr un impacto
en su posterior fusin con grnulos de cojinete adicional
V-ATPasas, lo que agrava el efecto sobre el pH. Por ltimo, el oxidativo
efecto de las ROS tambin aumenta la "fuga" de pasivo o
permeabilidad al H + (equivalentes), evitando su acumulacin
en el lumen [38].
6. Electrofisiologa de maduracin del fagosoma
La activacin de la NADPH oxidasa es una electrognico
evento. Durante el estallido respiratorio, la oxidasa media la
translocacin vectorial de electrones a travs de la bicapa, a
catalizar la reduccin de oxgeno extracelular o luminal.
Al mismo tiempo, los protones se liberan en el citoplasma durante
la oxidacin de NADPH a NADP +. El combinado
efectos de esta separacin de la carga positiva representar el citosol
con respecto a la parte extracelular o luminal de la membrana.
La magnitud de esta despolarizacin se ha estimado
exceda de 100 mV [39].
Un reciente anlisis detallado de la relacin corriente-voltaje
de la oxidasa demostr que, como se haba previsto, la
actividad de la enzima disminuye a medida que lucha contra una
creciente gradiente electroqumico [39]. De ello se deduce que la continuacin,
robusta actividad de la oxidasa, que es esencial para su
accin microbicida, slo puede sostenerse si una disipacin de carga
va desarrolla en paralelo. El ms importante
colaborador de esta va parece ser un nico, altamente
selectivo H + (equivalente) canal (ver [40] para una revisin).
Tres caractersticas de este canal que sea idealmente apropiado para su
funcin disipativa en los fagocitos: en primer lugar, es marcadamente voltaje
sensible, siendo activada como la clula se despolariza. La
relacin corriente-voltaje muestra una profunda hacia afuera
rectificacin, asegurando que el H + (equivalentes) se ir, y no
de entrar en el citosol, el alivio de la acidificacin en desarrollo.
En segundo lugar, el canal se activa por acidificacin citoslica,
favoreciendo la exportacin de H + citoslico durante la respiracin
reventar. Finalmente, la activacin del canal parece ser
estrechamente ligada a la estimulacin de la oxidasa, asegurando acoplamiento de sus funciones
[40]. De hecho, se ha argumentado
que la actividad conductiva es inherente a la transmembrana
subunidades de la oxidasa (Fig. 2II), es decir, que la oxidasa es tambin
el canal [41]. La evidencia tanto a favor como en contra de esta
hiptesis se ha informado y se resume y se debatieron
en un artculo reciente [42].
6,1. La oxidasa y la desgranulacin
Como se discuti anteriormente, la NADPH oxidasa se ha marcado
efectos sobre el desarrollo de la acidificacin luminal que est
cree que, a su vez, necesaria para la maduracin ptima de la
fagosoma. En consecuencia, los pacientes con exposicin anormal CGD
la desgranulacin de neutrfilos, y la inhibicin de la oxidasa en
Las clulas normales ha marcado efectos sobre la maduracin phagosomal
[43]. Aunque estos efectos pueden ser ms fcilmente explicada por la
bien establecidos alteraciones en el pH inducidos por phagosomal
la oxidasa, una explicacin alternativa fue presentado recientemente.
Basado en las mediciones de los flujos de cationes alcalinos y
contenido, Reeves et al. [44] propone que K +, en lugar de H +,
puede ser el contrain primaria que neutraliza la electrognico
desplazamiento de los electrones por la oxidasa. Segn
estos autores, la acumulacin de accionamiento elctrico de K + en
el lumen del fagosoma genera un medio hipertnico de
alta fuerza inica. Esta solucin nica es entonces previstas para
facilitar la disolucin de la matriz que contiene los contenidos
de grnulos secretores juntos. Si no se activan la oxidasa,
por ejemplo en individuos con CGD, privara al fagosoma
de la capacidad de dispersar los contenidos granulares, haciendo que el
observado deficiencia de secrecin. Aunque atractivo, este modelo
requiere confirmacin independiente, ya que no est claro cmo un
solucin hipertnica puede ser generada en el agua y permeable
y la membrana phagosomal distensible. Por otra parte, la supuesta
alta concentracin de K + generada en el phagosomal
lumen por la oxidasa no se ha demostrado directamente. Por ltimo,
la valinomicina ionforo conductor tena efectos paradjicos
en el informe de Reeves et al. [44], que no son fcilmente
compatible con su hiptesis. Es evidente que una ms directa
la cuantificacin de la contribucin relativa de H + y K + a la
corriente elctrica y para los eventos asociados con la secrecin
maduracin se requiere.
7. Observaciones finales
Cada vez es ms evidente que la formacin de fagosoma
y la maduracin no son idnticos en todos los casos. Obvio
Se indican las diferencias entre los neutrfilos y los macrfagos,
que necesariamente impacto en la capacidad de los fagosomas a
eliminar los agentes patgenos o cuerpos apoptticos. Adems, no todos
pares de ligando y receptor desencadenar modos comparables de fagosoma
formacin, y la velocidad y grado de maduracin tambin
parece diferir entre ellos. Como resultado, el modo de entrada de
patgenos es ms probable para influir en su destino, que puede
adems, resultan ser muy diferentes de los neutrfilos y
macrfagos. Esta toma de conciencia hace que sea imperativo definir
los distintos eventos moleculares que subyacen a la fagocitosis mediada
por los receptores individuales y la contribucin diferencial
de la NADPH en tipos celulares especficos. Adems, otro
desafo ser explicar las similitudes y las diferencias
entre el "clsico" de la maduracin de fagosomas en los macrfagos,
que es paralela a la secuencia endoctica, y que en
neutrfilos, en la que el secretora nico y muy especializado
orgnulos no son componentes activos de la endoctica
maquinaria. Es evidente que an queda mucho por aprender.