Centro Universitario de Investigaciones Biomdicas

Universidad de Colima, Colima, Mxico

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CONTENIDO

Prlogo

Captulo 1
Canales inicos: macromolculas subyacentes a la excitabilidad neuronal.
1.1. Identidad bioqumica de los canales inicos.
1.2. Relacin de las propiedades funcionales de un canal inico con los
dominios estructurales del complejo macromolecular.
a) Mecanismo de Compuerta
b) Permeabilidad Selectiva
c) Inactivacin
1.3. La unidad funcional de los canales inicos es un complejo
multimrico.
1.4. La distribucin de los canales inicos no es al azar
1.5. Importancia teraputica de los canales inicos.
Perspectivas.

Captulo 2
Bases Termdinmicas del Estado en Reposo.
2.1. La ecuacin del flujo.
2.2. La ley de Fick.
2.3. La ecuacin de Nernst.
2.4. Potencial de unin lquida.
2.5. La ecuacin de campo constante.
2.6. Permeabilidad y conductancia.

Captulo 3
Propiedades Pasivas fuera del Reposo.
3.1. La capacitancia y resistencia de la membrana.
3.2. Potenciales electrotnicos en clulas esfricas.
3.3. Potenciales electrotnicos en clulas cilndricas (teora del cable
infinito).
3.4. Solucin particular en el estado estacionario.
3.5. Solucin general de la ecuacin del cable.
3.6. Solucin particular de la ecuacin del cable en x=0.

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Captulo 4
El Impulso Nervioso.
4.1. El potencial de accin.
4.2. Corrientes inicas
4.3. La conductancia de potasio.
4.4. La conductancia de sodio.

Apndice.
Canales Unitarios.
1. Permeabilidad, conductancia y dependencia de voltaje.
2. Cintica de apertura y cierre de canales unitarios.
2.1. Un canal con dos estados.
2.2. Dos canales con dos estados.
2.3. Un canal con tres estados con tres niveles de conductancia.
2.4. Un canal con tres estados con dos niveles de conductancia.

Agradecimientos.

Lecturas recomendadas.
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Prlogo

Desde la creacin del programa de Posgrado en Ciencias Fisiolgicas de la
Universidad de Colima hemos impartido el curso de Excitabilidad y a lo
largo de esta experiencia hemos transitado de una poca en que el material
bibliogrfico disponible en nuestro idioma era completamente ausente hasta
la creacin reciente de pginas completas de internet acerca de tpicos de
Electrofisiologa.
A pesar de este cambio, consideramos que la idea de concretar el presente
proyecto es vigente y puede ser el punto de partida para una serie de
publicaciones elaboradas por y para la docencia.
En los primeros aos el nico respaldo didctico con el que
contbamos fueron acetatos y apuntes que nosotros mismos elaboramos y
que tradicionalmente se han distribudo a los estudiantes del curso en un
formato rudimentario. Actualmente este material se encuentra disponible en
la biblioteca del Centro de Investigaciones Biomdicas pero de manera
fragmentada por lo que siempre tuvimos la intencin de integrar y
sistematizar los conceptos recientes de la biologa de los canales inicos con
el anlisis de los modelos mecansticos del funcionamiento de los mismos.
Esos apuntes se fueron enriqueciendo con la retroalimentacin de la
experiencia docente, que nos permiti identificar aquellos aspectos que
provocaban confusin en los alumnos, y se han venido modificando a
medida que se han incorporado nuevos elementos al marco conceptual de la
electrofisiologa.
Este cuaderno es el resultado de la revisin y seleccin del material
que surgi de esta manera. La intencin es mantener a los alumnos en
contacto con las aportaciones de trabajos clsicos que nunca envejecen, a la
vez que procuramos redefinir esos conceptos en un contexto ms actual.
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Captulo 1
CANALES INICOS: MACROMOLCULAS SUBYACENTES A LA
EXCITABILIDAD NEURONAL

La funcin de los canales inicos es mantener la homeostasis electroqumica
en los diferentes compartimientos intracelulares por medio de la regulacin
del flujo de cargas a travs de las membranas biolgicas. Como
consecuencia del movimiento de carga elctrica, acarreada por distintas
especies inicas, se producen cambios en el potencial transmembrana; estos
cambios se traducen en seales elctricas que la clula utiliza como parte de
un cdigo de comunicacin intercelular. As, los canales son molculas
responsables de la generacin y transmisin de seales bioelctricas y sus
propiedades determinan la naturaleza de la actividad elctrica en el Sistema
Nervioso.
En trminos generales la actividad de un canal inico se caracteriza por:
a) su capacidad para conducir iones
b) su capacidad para discriminar el tipo de in que puede permear a
travs del poro de conduccin.
c) su capacidad para cambiar su conformacin molecular en respuesta
a seales elctricas, mecnicas o qumicas; como resultado de estas
transiciones conformacionales la va de conduccin inica se abre
o se cierra.
Como la variedad de canales inicos es enorme, es conveniente identificar
aquellas caractersticas que se han utilizado como criterios para su
nominacin o clasificacin, a saber:

1) Selectividad inica. La selectividad se refiere a que los canales
distinguen y seleccionan la naturaleza de la especie inica que ser
trasportada (carga y valencia); cuando hablamos de canales de sodio,
significa que los aniones como el cloro y otros cationes, como el calcio,
son excludos de la va de conduccin, mientras que el sodio atraviesa
fcilmente ese canal. Entonces, cada in permea con mayor facilidad a
travs de un tipo particular de canal (Figura 1.1).

2) Mecanismo de compuerta. El mecanismo de compuerta es el estmulo
que regula el cambio en el estado funcional de un canal; estrictamente
hablando, es el mecanismo que determina la probabilidad de que la
compuerta abra o cierre un canal (Figura 1.2). Hay varias subfamilias de
canales, segn su mecanismo de compuerta: a los canales que se abren
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3) y/o cierran por un cambio en la diferencia de potencial entre el interior y
el exterior de la clula se les denomina canales activados por voltaje.
Otro mecanismo de compuerta es la unin de un ligando especfico; los
ligandos pueden tener acceso a la protena del canal desde el espacio
extracelular (por ejemplo los neurotransmisores) o desde el lado
intracelular (como ocurre con los nucletidos cclicos).
Existen tambin canales activados por el estiramiento; stos se abren
en respuesta a un cambio en la tensin local en la bicapa lipdica de la
membrana y en algunos casos se encuentran asociados con las protenas
del citoesqueleto. En bacterias la funcin de estos canales es relevante
para la regulacin del volumen celular durante cambios en la osmolaridad
del medio externo, mientras que en organismos multicelulares participan
en el proceso de mecanotransduccin sensorial; es decir el proceso
mediante el cual la energa mecnica que produce una deformacin de la
membrana celular se transduce en una seal elctrica. De este modo, los
canales mecanosensibles son mediadores importantes del sentido del
tacto y el odo.

Figura 1.1
Variedad de canales
inicos en funcin de su
selectividad inica.
Los canales inicos son
vas para el transporte
selectivo de distintas
especies inicas en forma
independiente. En una
clula coexisten diversos
tipos e isoformas de estas
protenas integrales de la
membrana plasmtica, y
su interaccin funcional
determina las propiedades
elctricas de una clula
excitable. Su distribucin
y expresin en diferentes
tejidos de un organismo son reguladas por seales bioqumicas intra y extracelulares
durante el desarrollo y su localizacin heterognea en la superficie celular da origen a
dominios funcionales a nivel unicelular.

Recientemente se ha propuesto que la apertura del poro de un canal
puede estar acoplado a otros mecanismos de compuerta como son
cambios en el potencial de xido reduccin o en el pH.
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4) Conductancia. La magnitud de la corriente inica cuando el canal ha sido
abierto por el mecanismo de compuerta depende del gradiente
electroqumico, y de la facilidad con que permean los iones a travs del
canal. Algunos canales del mismo tipo, por ejemplo los canales de
potasio activados por calcio (K
Ca
), pueden distinguirse
electrofisiolgicamente por su conductancia unitaria; as los canales BK
(big) tienen una conductancia entre 100 y 250 pS mientras que los SK
(small) de slo 5-20 pS.






















Figura 1.2
El mecanismo de compuerta regula el cambio del estado funcional en los canales
inicos.
Los canales inicos sufren transiciones conformacionales aleatorias entre distintos
estados funcionales. La probabilidad de que un canal pase del estado cerrado (izquierda)
al estado abierto (derecha) es controlada por distintos estmulos. Los canales activados
por voltaje (panel superior) se abren o se cierran en respuesta a cambios en la diferencia
de potencial elctrico a travs de la membrana; estos cambios producen una reorientacin
de cargas en la regin de la protena que funciona como sensor de voltaje (+). Algunos
canales se abren gracias al cambio conformacional provocado por la unin de un ligando
en una regin receptora de la protena (panel medio) mientras que otros responden a una
deformacin de la membrana celular (panel inferior) y por tanto se denominan
mecanosensibles.
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5) Farmacologa. El perfil farmacolgico de un canal se refiere a la
susceptibilidad de ste a drogas o toxinas que alteran su funcionamiento;
cuando una toxina o un frmaco se une de manera especfica y con alta
afinidad a un tipo de canal (Figura 1.3), puede usarse para la
identificacin del mismo.
Por ejemplo, la tetrodotoxina (TTX) ha sido una de las herramientas
ms importantes para el estudio de los canales de sodio activados por
voltaje; a concentraciones del rango nanomolar la TTX bloquea
selectivamente y de manera reversible a los canales de sodio. La unin
estrecha de una toxina con su sitio receptor ha permitido aislar y purificar
estos receptores (canales) a partir de un tejido.
Adems, un nervio puede exponerse a esta toxina marcada con tomos
radioactivos y de este modo es posible contar el nmero de sitios de
unin por unidad de superficie de membrana y estudiar la distribucin y
densidad de canales en diferentes tejidos excitables; en un nervio
perifrico existen alrededor de 100 sitios de unin a TTX por micrmetro
cuadrado.

El mecanismo por el cual estos agentes interfieren con la funcin de un
canal puede ser la obstruccin de la va de conduccin inica (como es el
caso de la tetrodotoxina) o bien modificando el mecanismo de
compuerta. Si conocemos en detalle la estructura de estos inhibidores
especficos y analizamos las caractersticas de su interaccin con el canal
correspondiente, podemos inferir como es la organizacin espacial de los
aminocidos que constituyen el sitio receptor en el canal y asi obtener
informacin estructural del mismo.

6) Estructura. Los canales inicos pueden agruparse en familias que
conservan un patrn bsico de organizacin macromolecular. Por
ejemplo: los canales de potasio activados por voltaje son tetrmeros con
un poro central, los canales de cloro son homodmeros con un poro en
cada subunidad, los canales activados por ligando son pentmeros,
mientras que los canales intercelulares son hexmeros (Figura 1.9).

Una clula est equipada con una variedad de canales que actan como vas
independientes para que diferentes tipos de in atraviesen la membrana. La
excitabilidad celular depender no slo del repertorio particular de canales
sino de la interaccin funcional entre stos en un momento determinado.
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Las propiedades elctricas de una neurona pueden ser controladas por
mecanismos de regulacin selectiva a nivel de la transcripcin de genes que
codifican las protenas de un canal, a nivel de la traslacin del RNA
mensajero, o bien a nivel de la insercin dirigida de canales inicos en un
dominio de la superficie celular.

Figura 1.3
Frmacos y toxinas como herramientas para la identificacin y el anlisis
estructural de los canales inicos.
La tetrodotoxina es una neurotoxina que bloquea especficamente canales de sodio. La
molcula de TTX consiste en un grupo guanidino cargado positivamente y un anillo de
pirimidina. El sitio de unin para esta toxina consiste en un grupo de aminocidos con
carga negativa localizados en el extremo exterior del poro del canal de sodio y la
constante de disociacin es de 10
-10
nM. La TTX obstruye el poro del canal, impidiendo
la entrada de iones de sodio an cuando el canal se encuentre abierto y el bloqueo es
reversible. Utilizando esta toxina marcada con radioistopos ha sido posible calcular la
densidad de canales por unidad de superficie de membrana.

1.1. Identidad bioqumica de los canales inicos
Los canales inicos son protenas integrales que forman conductos
hidroflicos y constituyen la va para el movimiento de cargas a travs de la
bicapa lipdica. Durante dcadas, los canales se estudiaron con tcnicas
bioqumicas y electrofisiolgicas convencionales que dieron lugar a los
modelos mecansticos analizados en otros captulos de este libro. El estudio
funcional de los canales inicos en terminos moleculares se bas
inicialmente en tcnicas bioqumicas para el estudio de la protenas
(solubilizacin con detergentes, reconstitucin funcional en vesculas
lipdicas, ensayos de unin con ligandos marcados, etc).

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La primera evidencia electrofisiolgica slida de la naturaleza proteica de
los canales inicos fu el trabajo de Rojas y Luxoro quienes, en 1963,
estudiaron el efecto de la tripsina sobre la gnesis del impulso nervioso
mediante la perfusin del axoplasma del axn gigante de calamar. Diez aos
despus, Armstrong, Bezanilla y Rojas realizaron un estudio detallado para
explicar el efecto de enzimas proteolticas sobre el potencial de accin; con
ese trabajo mostraron que la pronasa destruye selectivamente la inactivacin
de la corriente de sodio sin afectar el proceso de activacin, ni la
conductancia a potasio. Desde entonces se acepta que los canales de potasio
y los de sodio son entidades distintas e independientes, que el mecanismo de
activacin de los canales de sodio puede disociarse del mecanismo de
inactivacin y, finalmente, que el transporte inico depende de que se
mantenga intacta la funcin de las protenas de membrana.

Una vez que las tcnicas de clonacin molecular permitieron conocer la
secuencia de aminocidos de los canales inicos, se inici un cambio en
nuestra concepcin de estas protenas; actualmente tenemos una idea de cul
es el sustrato molecular de la diversidad funcional y farmacolgica de los
canales inicos.
En esta seccin describiremos cmo se orienten los canales inicos en
la membrana, de acuerdo con las propiedades que predice la secuencia de
aminocidos en un prototipo de canales activados por voltaje.
El plegamiento de una protena en su conformacin nativa depende de
diversas fuerzas de interaccin intramolecular (puentes de hidrgeno,
interacciones electrostticas, enlaces covalentes, interacciones hidrofbicas).
La manera en que se agrupan aminocidos con diferentes tendencias
hidroflicas e hidrofbicas determina el ndice de hidropata de una protena
y ste refleja su estabilidad en un medio acuoso.
El ndice de hidropata proporciona informacin acerca de la posible
disposicin espacial de una cadena polipeptdica. En una protena
citoplsmica las regiones hidroflicas estarn localizadas en la periferia, en
contacto con el medio acuoso, mientras que los residuos hidrofbicos se
orientan en el centro de la molcula. Por otra parte, en una protena de
membrana las regiones hidrofbicas estarn en contacto con la bicapa
lipdica mientras que las hidroflicas debern situarse ya sea en el medio
intracelular o en el extracelular. Considerando el espesor de la bicapa
lipdica y el tamao de una cadena polipeptdica en la configuracin de
hlice, vemos que para atravesar la membrana de lado a lado se requiere un
segmento de aproximadamente 23 aminocidos. As, al obtener el perfil de
hidropata de segmentos consecutivos de la protena de un canal inico, se
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genera un modelo topolgico como el que se ilustra en la Figura 1.4, que
representa el patrn bsico de los canales inicos activados por voltaje. En
general, la superfamilia de canales activados por voltaje consta de cuatro
subunidades cuatro dominios dispuestos en tandem; cada dominio est
constitudo por seis segmentos transmembrana (S1-S6). El cuarto segmento
(S4) contiene 8 aminocidos bsicos (arginina o lisina) intercalados con
aminocidos hidrofbicos; estos aminocidos tienen carga positiva al pH
fisiolgico, lo que sugiri inicialmente que esta regin de la protena podra
desempear la funcin del sensor de voltaje (Figura 1.4).


Figura 1.4
Modelo topolgico de los canales activados por voltaje.
De acuerdo al ndice de hidropata, la protena que forma la subunidad principal de los
canales de sodio y de calcio activados por voltaje tiene 24 segmentos transmembrana.
Los segmentos que atraviesan la membrana se agrupan en cuatro dominios homlogos (I-
IV) que constan de seis segmentos cada uno; tanto el extremo amino como el carboxilo se
localizan intracelularmente. El cuarto segmento de cada dominio (S4) contiene
aminocidos con carga positiva que le permiten funcionar como sensor de voltaje. Entre
los segmentos S5 y S6 se localiza un lazo que penetra parcialmente en la bicapa; los
cuatro lazos orientados hacia el eje central forman el poro y contienen el dominio
estructural responsable de la selectividad inica.

Los modelos topolgicos son representaciones bidimensionales; el arreglo
tridimensional de la protena que resulta en la formacin de la va de
conduccin es distinto en las diferentes familias de canales inicos. En el
caso de los canales de potasio que son homotetramricos, cuatro asas P
idnticas se proyectan hacia el eje central en torno al cual se disponen las
cuatro subunidades. Cada lazo proviene de una subunidad y forma la va de
conduccin; en forma anloga, en los canales de sodio y de calcio cada uno
de los cuatro dominios homlogos contribuye con una asa (Figura 1.5). La
secuencia de aminocidos en el segmento de aminocidos que forman el asa
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del poro determina las propiedades de selectividad y conduccin del canal.
Cabe sealar que mientras este patrn se conserva en las subfamilias de
canales catinicos, los canales de cloro son homodmeros en los cuales cada
subunidad tiene su propio poro, mientras que los canales que transportan
agua (acuaporinas) son tetrmeros, con un poro por cada subunidad.
La importancia de la permeabilidad selectiva de la membrana en la
generacin de seales elctricas fu establecida desde 1950 por Hodgkin y
Huxley, y pasaron tres dcadas para que fuese clonado el primer canal inico
por el grupo de investigacin de Numa. La secuenciacin del canal de
potasio Shaker en la mosca de la fruta Drosophila por el grupo de Lilly J an
en 1987 permiti la localizacin del poro y la identificacin de la secuencia
de consenso del filtro de selectividad de los canales de potasio. Mediante
anlisis mutacional se observ que los grupos funcionales de la cadena
lateral de los aminocidos del poro no determinan la selectividad inica de
los canales y se postul que esta funcin yaca en los grupos carbonilo de la
cadena polipeptdica principal. Esta hiptesis fue confirmada en 1999,
cuando el grupo de investigacin de Rod MacKinnon describi a nivel
atmico la estructura cristalogrfica del canal de potasio (KcsA) de la
bacteria Streptomyces lividans.
El anlisis de difraccin de rayos X del canal KcsA permiti conocer
en detalle las dimensiones de la va de conduccin y dar una explicacin
fsica al efecto del poro largo descrito en 1955 por Hodgkin y Keynes, ya
que fue posible observar dos iones K+(completamente deshidratados y
separados por slo 8 A) ocupando simultneamente el filtro de selectividad.
Hacia el interior, el poro se ensancha formando una cavidad de
aproximadamente 10 A que puede ser ocupada por un tercer in hidratado;
finalmente, la entrada al vestbulo interno del canal contiene residuos
negativos que contribuyen a exclur aniones de la va de conduccin. Estos
datos concuerdan con los estudios electrofisiolgicos realizados por Clay
Armstrong en la dcada de los setentas, utilizando el catin tetraetilamonio
(TEA) y sus derivados para bloquear canales de potasio.
As, la resolucin de la estructura tridimensional de un canal de
potasio, acorde con la informacin obtenida mediante el abordaje
experimental de la electrofisiologa, ha sentado las bases para una nueva
visin de la excitabilidad celular.





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Figura 1.5
Los dominios homlogos de los canales activados por voltaje se organizan en torno
al poro de conduccin.
Los canales inicos activados por voltaje constan de subunidades o dominios homlogos
(delimitados por lneas punteadas) dispuestos simtricamente alrededor de un poro
central. El asa del poro (segmento S5-S6) de cada dominio (en amarillo) se proyecta
hacia el eje de simetra y contiene la secuencia caracterstica del filtro de selectividad
para cada tipo de canal.

1.2. Relacin de la propiedades funcionales de un canal inico con los
dominios estructurales del complejo macromolecular
El problema de la relacin estructura-funcin de los canales inicos se
refiere a la asignacin de una caracterstica funcional del canal a una regin
o dominio de la protena. En esta seccin se describirn las caractersticas de
los dominios asociados con el funcionamiento de los canales activados por
voltaje.

a) Mecanismo de compuerta
Como se mencion con anterioridad, en los canales inicos activados por
voltaje un cambio en el campo elctrico a travs de la membrana modifica el
equilibrio entre diferentes conformaciones estructurales de la
macromolcula. En reposo, los canales permanecen aleatoriamente en
alguno de sus estados fsicos y pasan de uno a otro debido al movimiento
trmico de la molcula. Estas transiciones conformacionales de naturaleza
reversible determinan el porcentaje de canales que se encuentran en un
estado discreto de conduccin inica (abierto o cerrado) y el voltaje modula
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la fraccin de canales que pasan al estado abierto. El tiempo que permanece
un canal en cada estado depender de la barrera de energa que la molcula
deba remontar para que ocurra la transicin estructural.
La diferencia de potencial a travs de la membrana ejerce una fuerza
elctrica sobre la molcula de un canal y modifica la barrera energtica para
una transicin entre estados. Como ya mencionamos, en el segmento S4 de
los canales activados por voltaje (Figura 1.4) abundan aminocidos con
carga elctrica en la cadena lateral; estos grupos cargados se reorientan bajo
la influencia del campo elctrico.
En otras palabras, el estado funcional de los canales inicos depende
del movimiento de un componente estructural de la protena cuyo
desplazamiento en el plano de la membrana desencadena un rearreglo
espacial de la molcula completa, que abre la va para el transporte de iones.
A este componente estructural se le conoce como el sensor de voltaje y se
localiza en el cuarto segmento transmembranal (S4). La caracterstica
distintiva del sensor de voltaje es la abundancia de aminocidos bsicos que
le confiere una mayor densidad de carga positiva; estrictamente hablando, el
sensor incluye no slo las cargas del segmento S4 sino tambin el campo
elctrico circundante.
La consecuencia del movimiento o reorientacin de estas cargas es
una corriente capacitiva conocida como corriente de compuerta (Figura 1.6)
que precede a la corriente inica que atraviesa el poro y es en esencia la
manifestacin elctrica del cambio conformacional de un canal. Al integrar
esta corriente capacitiva es posible calcular la carga de la compuerta.

La dependencia al voltaje de la conductancia del canal refleja la sensibilidad
al voltaje del sensor; en la curva de conductancia en funcin del voltaje, la
tasa de cambio (asociada a la constante de Boltzmann) est relacionada con
el nmero de cargas equivalentes involucradas en el mecanismo de
compuerta. Para medir experimentalmente la corriente de compuerta es
indispensable eliminar la corriente inica; esto se ha logrado mediante el uso
de bloqueadores especficos o bien utilizando canales mutantes en los que se
anula especificamente la conduccin inica preservando el proceso de
compuerta; adems, mediante la expresin de canales clonados en sistemas
heterlogos se reduce la contribucin del componente capacitivo lineal de la
membrana y la corriente de compuerta es mucho mayor debido a la elevada
densidad de canales inicos por unidad de superficie.
Finalmente, debemos sealar que an desconocemos cmo se acopla
el movimiento del sensor de voltaje con la apertura del poro de un canal
15
activado por voltaje y, por supuesto, parece que existen distintas
configuraciones en distintos tipos de canal.

















Figura 1.6
El desplazamiento del sensor de voltaje produce una corriente de compuerta y
desencadena el cambio conformacional asociado a la apertura del poro.
El movimiento de carga (B) asociado con la transicin entre estado cerrado (A) y el
estado abierto (C) de un canal activado por voltaje genera una pequea corriente
transitoria (a) denominada corriente de compuerta, que precede a la corriente inica (b).
La corriente de compuerta asociada con la activacin del canal es de naturaleza
capacitiva y cambia en forma no lineal en funcin del voltaje. Para poder observar la
corriente de compuerta en un canal de sodio es necesario bloquear la corriente inica (por
ejemplo con TTX). Es importante sealar que puede haber movimiento de carga sin que
se active la conductancia del canal. Los registros a y b fueron tomados del trabajo de
Almers (Rev. Physiol. Biochem. Pharmacol., 1978; vol 82, pag 102).

b) Permeabilidad selectiva.
El mecanismo de transporte a travs de un canal inico es notablemente
dinmico; en algunos aspectos es semejante al mecanismo de catlisis
enzimtica. Por ejemplo, el flujo de potasio se satura a concentraciones
elevadas del in, un fenmeno que describe el modelo de Michaelis-Menten
para la actividad enzimtica. Adems, el flujo puede inhibirse
completamente por otros cationes impermeables, del mismo modo que los
sustratos anlogos inhiben la funcin de una enzima. Estas caractersticas
sugieren que los iones interactan con los componentes bioqumicos que
forman el poro; por tanto, las propiedades fisicoqumicas de los aminocidos
16
que forman el contorno del poro determinarn las caractersticas de las
fuerzas a las que se somete un in a su paso por el canal.

En esta seccin trataremos de enfatizar cuales son las propiedades de los
determinantes estructurales de la va de conduccin que confieren las
caractersticas fisicoqumicas de un canal y las que explican la analoga con
las enzimas. Resulta lgico pensar que la regin del poro de canales con
diferente selectividad presentar un menor porcentaje de homologa en la
secuencia de aminocidos que aquellos que transportan el mismo in. Por
otra parte, en una familia de canales cuya selectividad es similar puede haber
una enorme diversidad en cuanto a mecanismos de activacin y regulacin,
como ocurre con los canales selectivos a potasio cuya apertura est acoplada
a diferentes tipos de energa, segn el mecanismo de compuerta.
Como se mencion previamente, los aminocidos que forman el
dominio estructural responsable de la permeacin inica se localizan entre
los segmentos S5 y S6, y se conoce como regin del poro. En los canales de
potasio el asa del poro presenta una secuencia distintiva de aminocidos
altamente conservada Glicina-Tirosina-Glicina (GYG) en el filtro de
selectividad; las cadenas laterales de los aminocidos del filtro de
selectividad estn orientadas hacia fuera mientras que los carbonilos de la
cadena principal estn orientados hacia el eje del poro.

El filtro de selectividad de los canales de potasio desempea un importante
papel en la regulacin del flujo de carga positiva hacia el medio exterior, a la
vez que impide el transporte de sodio, cuyo radio hidratado es menor que el
del potasio. Es difcil imaginar como es que el in Na+cuyo dimetro es de
1.9 A puede ser excludo del poro del canal de potasio que tiene un dimetro
de 3 A.
A la fecha, la explicacin ms acorde con los resultados
experimentales y los datos estructurales es la siguiente: los iones en solucin
acuosa establecen una fuerte interaccin electrosttica con los tomos de
oxgeno de las molculas de agua; los cambios de energa que experimenta
un in al deshidratarse y atravesar el filtro de selectividad deben ser
compensadas por interacciones electrostticas con el poro del canal. La
energa de los iones potasio en solucin acuosa es muy similar a la energa
del ion K+coordinado con grupos carbonilo en un radio de 3 A, mientras
que para el in sodio, la distancia para establecer este tipo de interaccin es
mayor y sera necesario que el poro se colapsara para estabilizar este catin.
As, la energa del in sodio en el poro del canal de potasio sera mucho
mayor que la enega del in hidratado.
17

Por otra parte, el movimiento de iones a lo largo de la va de conduccin no
difiere desde el punto de vista fsico del movimiento de iones en solucin;
esto concuerda con la elevada tasa de transporte. Por ejemplo, en un canal de
potasio, el flujo calculado es de 10
6
-10
8
iones por segundo. Asi, el
mecanismo de conduccin inica a una elevada tasa de permeacin debe
funcionar de manera coordinada con el mecanismo de selectividad inica.
Para ilustrar este compromiso funcional, consideremos como ejemplo
los canales de calcio activados por voltaje. En la solucin extracelular, la
concentracin de iones de sodio rebasa enormemente a la concentracin de
iones de calcio, y la fuerza de arrastre a la que ambos estn sometidos apunta
en la misma direccin (hacia el interior de la clula). Esto significa que para
que un canal de calcio sea realmente selectivo, los iones de sodio deben ser
excludos del poro, al mismo tiempo que se facilite el transporte de calcio,
permitiendo el flujo de calcio de aproximadamente 10
6
iones por segundo.
Estos dos fenmenos, aparentemente contradictorios son posibles gracias a
la presencia de un sitio de coordinacin para calcio creado por las cadenas
laterales de cuatro glutamatos orientados de manera asimtrica dentro del
poro del canal, generando un sitio de alta afinidad para un in calcio. La
fuerza de repulsin electrosttica que experimenta este in cuando un
segundo calcio entra al poro favorece la translocacin del primero hacia el
interior de la membrana. As. la presencia de sitios de unin de alta afinidad
explica la selectividad de los canales de calcio mientras que la ocupacin
simultnea del poro favorece el flujo debido a la repulsin electrosttica.
La ocupacin mltiple del poro de un canal y la saturacin del
transporte en funcin de la concentracin del in permeante son propiedades
comunes en la familia de canales activados por voltaje.

c) Inactivacin.
Aunque la manera ms simple de explicar el funcionamiento de un canal
inico es un modelo de dos estados (abierto o cerrado), los canales presentan
otros estados funcionales. En particular hablaremos aqu del modelo
fenomenolgico que permite explicar a nivel molecular el proceso de
inactivacin, que consiste en la transicin a un estado no conductor,
diferente al estado cerrado, producido por una despolarizacin de la
membrana (Figura 1.7).
En diversos canales activados por voltaje se observa un efecto dual de
la despolarizacin de la membrana. Un canal que ha sido abierto por una
despolarizacin breve puede volver al estado de reposo cerrado mediante el
proceso de deactivacin; cuando el potencial de la membrana se
18
hiperpolariza el canal queda listo para ser activado nuevamente. En cambio,
si la despolarizacin es sostenida, los canales se inactivan espontneamente
despus de haberse activado y no pueden abrirse de nuevo a menos que la
membrana vuelva al nivel de reposo y ocurra la recuperacin de la
inactivacin, que les permite transitar hacia el estado cerrado en reposo. En
muchos casos, el proceso de inactivacin est acoplado al proceso de
acivacin.

Desde los primeros estudios de las corrientes de sodio en el axn gigante de
calamar se propuso que el fenmeno de inactivacin es el resultado del
bloqueo del canal con una partcula de inactivacin que interfiere con el
transporte inico. Este modelo propuesto por Armstrong y Bezanilla en 1977
es conocido como el mecanismo de bola y cadena.
La clonacin de los canales de potasio Shaker que presentan
inactivacin rpida, similar a la de los canales de sodio, permiti estudiar
por primera vez los determinantes estructurales de este proceso; mediante la
delecin gentica de diferentes secciones de la protena del canal se lleg a
la conclusin de que los primeros 20 aminocidos del extremo amino
terminal (NH
2
) son indispensables para que el canal se inactive. En 1990,
Zagotta y colaboradores mostraron que la corriente a travs de canales
Shaker desprovistos del extremo amino no se inactiva, y que la inactivacin
se restaura mediante la perfusin intracelular de un polipptido soluble cuya
secuencia de aminocidos era similar a la del extremo amino.
En este contexto, el extremo amino sera el equivalente molecular de
la partcula de inactivacin (la bola); la interaccin fsica de la partcula de
inactivacin con un sitio en el acceso intracelular del poro del canal
involucra interacciones electrostticas e hidrofbicas. La partcula de
inactivacin se comporta como un bloqueador del canal en el estado abierto,
ya que compite con el tetraetilamonio (TEA) y puede ser desplazada de su
sitio de unin cuando se aumenta la concentracin de potasio del lado
extracelular. Por su parte, la funcin de cadena se lleva a cabo por un
segmento flexible, adyacente al extremo amino, que consta de 30 a 100
aminocidos.
En los canales de sodio, el asa intracelular que une los dominios III y
IV (ver Figura 4) es anloga al extremo amino terminal de los canales de
potasio ya que su destruccin proteoltica o la modificacin de la secuencia
de aminocidos produce canales de sodio que no inactivan. La presencia de
residuos hidrofbicos isoleucina, fenilalanina y metionina es indispensable
para que los canales se inactiven; nuevamente la inactivacin depende de la
19
insercin de un dominio citoplsmico del canal en un sitio localizado en el
vestbulo interno del canal.

























Figura 1.7
Una despolarizacin genera la transicin entre distintos estados funcionales de un
canal.
La figura representa los estados funcionales de un canal en funcin de los cambios
producidos por el voltaje en las compuertas de activacin e inactivacin. Se muestra un
ejemplo de la corriente unitaria (i) que refleja la transicin entre el estado abierto y el
estado cerrado de un canal durante los primeros milisegundos despus de haber
despolarizado la membrana. El trazo inferior ilustra la corriente inica macroscpica que
resulta de la apertura simultnea de cientos de canales inicos en paralelo. Una
despolarizacin de la membrana activa los canales que al abrirse permiten el rpido flujo
de iones Na+; si la despolarizacin es prolongada por ms de 1ms los canales se inactivan
y el flujo de iones disminuye. En esta condicin los canales no conducen y permanecen
refractarios a menos que la membrana se repolarice y se de un tiempo suficiente para que
se recuperen hacia el estado cerrado. La corriente macroscpica es transitoria ya que
decae progresivamente a medida que la poblacin de canales pasa al estado inactivado. El
20
cierre de la fraccin de canales que an estaban abiertos al final del pulso de voltaje
genera una cola de corriente.

Adems de la inactivacin rpida por el mecanismo de bola y cadena (tipo
N), en los canales de potasio tipo Shaker existe otra forma de inactivacin
conocida como tipo C. Este tipo de inactivacin es mucho ms lento (del
orden de segundos); la ocupacin del filtro de selectividad con diferentes
cationes permeantes modifica la cintica de la inactivacin tipo C por lo que
este proceso involucra los componentes moleculares del poro, a diferencia
de la inactivacin tipo N.


1.3. La unidad funcional de los canales inicos es un complejo
multimrico
Los canales estn constitudos por agregados de subunidades peptdicas; es
decir, son complejos macromoleculares en los que cada subunidad
contribuye de manera particular a definir las caractersticas funcionales del
canal.
Como se mencion con anterioridad, los canales de K
+
, Na
+
y Ca
2+

activados por voltaje son estructuralmente homlogos; los determinantes
estructurales de la conduccin y la selectividad inica, as como del sensor
del voltaje transmembrana se localizan en una subunidad principal
denominada . En este tipo de canales, la subunidad se asocia a una o ms
subunidades auxiliares.
En los canales de calcio, la subunidad forma un complejo
multimrico con las subunidades ,
2
, y . La subunidad es una protena
de aproximadamente 70 kDa, localizada en el lado citoplsmico del canal,
mientras que la subunidad es una glucoprotena con cuatro segmentos
transmembrana. Por otra parte, la subunidad
2
es un dmero asociada
mediante puentes disulfuro, que resulta de la expresin de un mismo gen
(Figura 1.8).
En los canales de sodio, las subunidades son glucoprotenas
transmembranales con el extremo carboxilo orientado hacia el citoplasma, y
el extremo amino hacia el medio extracelular. Los canales de sodio del
cerebro son complejos heterotrimricos con dos subunidades auxiliares: la
subunidad
1
que se asocia a la subunidad principal de manera no covalente,
y la subunidad
2
que se une mediante puentes disulfuro. En el msculo
esqueltico slo se expresa una subunidad , estructuralmente similar a la
subunidad
1
del tejido cerebral.
21
Finalmente, las subunidades de los canales de potasio son
polipptidos que constan de aproximadamente 400 aminocidos, y se
ensamblan con las subunidades con una estequiometra 1:1.


















Figura 1.8
Los canales inicos son heteromultmeros.
Los canales inicos estn constitudos por una subunidad principal, responsable de la
conductancia inica, y subunidades auxiliares complementarias que interactan de
manera directa con la subunidad principal. La asociacin con las subunidades auxiliares
regula el transporte interorganelos y la insercin en la membrana de los canales
funcionales maduros, as como sus propiedades biofsicas. La figura ilustra el complejo
macromolecular representativo de los canales de calcio activados por voltaje de alto
umbral. La combinacin de distintas isoformas de cada pptido y su expresin diferencial
en distintos tejidos genera una enorme diversidad funcional.

Las subunidades auxiliares modulan el curso temporal de las corrientes
inicas, as como la dependencia al voltaje de los procesos de activacin e
inactivacin de los canales inicos.
En general, las subunidades no slo regulan la funcin de la
subunidad principal, sino tambin la insercin de canales funcionales en la
membrana plasmtica. En sistemas heterlogos la coexpresin de las
subunidades y aumenta la expresin funcional de corrientes inicas,
comparada con las corrientes acarreadas por la subunidad . Incluso, en
algunos casos, sta ltima no es transportada a la membrana plasmtica
22
durante la biognesis de los canales inicos a menos que la subunidad se
acople mediante ensamblaje intermolecular en el retculo endoplsmico.
Tanto la composicin como la relacin estequiomtrica de
subunidades es relevante para la diversidad funcional de canales inicos
porque en principio hay mltiples combinaciones posibles para el
coensamble de subunidades. Adems, la composicin de isoformas de cada
subunidad es distinta para cada tejido y sufre cambios a lo largo del
desarrollo, o durante procesos fisiopatolgicos.
La asociacin especfica de un conjunto particular de subunidades
define las caractersticas funcionales y farmacolgicas de un canal, por lo
que la existencia de mltiples isoformas de cada subunidad es de gran
importancia en el funcionamiento de tejidos excitables

1.4. La distribucin de los canales inicos no es al azar
Como ocurre con cualquier otra protena, las clulas regulan los procesos de
biosntesis y degradacin de los canales inicos de acuerdo con las
condiciones fisiolgicas o con la etapa de desarrollo ontognico. En los
genes de los canales inicos hay variaciones que resultan en isoformas de la
protena y, en consecuencia, subtipos del canal correspondiente. Adems de
la regulacin a nivel gentico, del procesamiento postranslacional y del
transporte de los canales hacia la membrana, existen mecanismos que
modulan la funcin de la protena madura una vez insertada en la membrana
plasmtica.
De lo anterior se desprende el concepto de que la poblacin de canales
en una clula cambia en forma dinmica; hay cambios en la combinacin de
subunidades que se asocian, en el repertorio de canales que se expresan en
un momento dado, y en la manera en que funcionan. Ms an, la
participacin de un canal inico en la integracin de seales elctricas
depende no slo de su capacidad de transportar iones, sino de su abundancia
y distribucin tisular, de su localizacin subcelular, y de la interaccin con
otras molculas que regulan su funcin.
Uno de los aspectos ms apasionantes de la fisiologa neuronal es la
segregacin de protenas especializadas en compartimientos funcionales
dinmicos. En los vertebrados superiores, la conduccin del impulso
nervioso a lo largo de distancias relativamente grandes a un costo
metablico mnimo, as como la rpida propagacin de esta seal elctrica es
posible gracias a la localizacin discontinua de canales inicos dependientes
de voltaje y a la formacin de cpsulas aislantes de mielina. La conduccin
saltatoria del impulso nervioso es consecuencia de la distribucin
heterognea de los canales de sodio y de potasio, que forman agregados en
23
dominios de la membrana celular localizados en los nodos de Ranvier de las
fibras mielnicas.
La membrana de los axones mielinizados est organizada en varios
microdominios: el nodo de Ranvier, y las regiones paranodal,
yuxtaparanodal, e internodal. La composicin molecular de cada dominio es
nica: en el nodo se concentran los canales de sodio, molculas de adhesin
celular (CAMs) y la protena ankirina G, que se asocia con los canales de
sodio mediante el dominio citoplmico de las subunidades . La regin
paranodal, donde se ancla la mielina a la superficie del axn, delimita los
dominios axonales y restringe la difusin lateral de componentes de
membrana; este dominio se caracteriza por la abundancia de la protena
contactina. En la regin yuxtaparanodal se acumulan los canales de potasio
que participan en la repolarizacin del potencial de accin, adems de la
protena Caspr2. En la regin internodal las protenas integrales y los
componentes de la matriz extracelular estn dispersos; a la fecha no se ha
reportado acumulacin de alguna protena en particular.
Entonces, durante el desarrollo del sistema nervioso se establecen
verdaderos complejos supramoleculares en la regin nodal y yuxtaparanodal
cuya integridad mantiene el mecanismo de conduccin del potencial de
accin; cuando hay un dao que produce desmielinizacin, los canales
inicos se redistribuyen alterando estos dominios de la membrana. La
perturbacin de la organizacin molecular de la fibra mielnica se asocia a
patologas en las que hay bloqueo parcial de la propagacin del impulso
nervioso y neurodegeneracin.

1.5. Importancia teraputica de los canales inicos
Diferentes tipos de canales inicos desempean un papel pivotal en
innumerables procesos fisiolgicos. La alteracin funcional de estas
protenas se ha asociado con gran cantidad de enfermedades en la poblacin
humana, ya sea idiopticas, autoinmunes o hereditarias, lo cual indica que
son elementos susceptibles de modificacin con agentes teraputicos.
Debido a que la permeabilidad inica controla funciones esenciales
como la secrecin hormonal, el balance de electrolitos y, por supuesto, la
generacin y transmisin de seales elctricas, la alteracin funcional de los
canales inicos produce trastornos importantes en la integracin funcional de
los organismos. En la actualidad diversos grupos de investigacin estudian la
contribucin de los canales inicos en la fisiopatogenia de mltiples
enfermedades, as como el diseo de nuevos frmacos dirigidos a restaurar o
regular la funcin de canales inicos, cuya localizacin en la superficie
celular facilita el acceso de drogas especficas.
24


























Figura 1.9
Los canales intercelulares son exmeros que se agrupan en zonas especializadas de
la membrana.
Los canales intercelulares permiten el paso de iones y molculas pequeas ( 1 kDa) del
citoplasma de una clula hacia el citoplasma de la clula adyacente. La unidad molecular
son las conexinas (panel superior), protenas con cuatro dominios transmembrana (M1-
M4) que se asocian formando hexmeros (panel medio) conocidos como conexones. Los
conexones de una clula se alinean con los conexones de la clula vecina (panel inferior)
formando as estructuras dodecamricas que permiten la comunicacin a travs de
canales hidroflicos.

Por citar un ejemplo, el bloqueo de los canales de calcio tipo N, que
regulan la inhibicin presinptica en la vas que transmiten informacin
sobre estmulos nociceptivos, reduce la sensacin de dolor en pacientes con
enfermedades crnicas como el cncer. El uso de frmacos especficos para
25
estos canales promete ejercer menos efectos secundarios que la morfina,
tradicionalmente utilizada para disminur el dolor en estos pacientes.

Perspectivas
Gracias a la integracin de distintos enfoques metodolgicos, actualmente
tenemos una idea acerca de la estructura de las protenas que forman un
canal y del papel de cada regin de la protena en las propiedades de
selectividad inica, permeabilidad, activacin, inactivacin, y regulacin de
los canales inicos. Es decir, tenemos un panorama ms amplio de las bases
moleculares de la excitabilidad neuronal.
En particular, la tcnica de patch-clamp, nica en cuanto a la
posibilidad de estudiar in vivo la actividad biolgica de protenas de
membrana, se utiliza ampliamente para investigar canales inicos nativos, y
canales inicos clonados expresados en sistemas heterlogos. El registro
electrofisiolgico con esta tcnica es sumamente flexible; tiene las ventajas
de una resolucin temporal del orden de microsegundos, del acceso al medio
intracelular y, finalmente, permite resolver corrientes inicas a travs de un
solo canal, con magnitudes del orden de los picoamperes. Sin embargo, la
tcnica implica consumo de tiempo y se requiere mantener viables clulas
aisladas as como un sistema relativamente sofisticado para evitar
interferencia por vibracion mecnica y ruido elctrico.
Por lo anterior, la posibilidad de automatizar esta tcnica ha
despertado gran inters recientemente, ya que catalizara el proceso de
anlisis funcional del efecto de diversas drogas diseadas especficamente
hacia los canales inicos.
La combinacin de mtodos electrofisiolgicos con las nuevas tcnicas de
biologa molecular y bioqumica de protenas genera informacin integral
acerca del funcionamiento y regulacin de los canales inicos y, en
consecuencia, de la excitabilidad celular.

26
Captulo 2
BASES TERMODINMICAS DEL ESTADO EN REPOSO

Todas las clulas estn formadas por dos compartamientos: el medio
intracelular (citosol) y el medio externo separados por una membrana
plasmtica que consta de dos capas de lpidos y protenas integrales.

La membrana plasmtica es capaz de controlar el intercambio (transporte) de
solutos y agua entre los dos compartimientos. Desde este punto de vista, se
puede considerar el sistema citosol-medio externo como un sistema
termodinmico, aunque no se puede descartar la participacin de la energa
metablica en el mantenimiento del estado de reposo.

En el reposo, en las clulas excitables se puede definir un sistema
electroqumico en equilibrio, de manera que el flujo neto de solutos a travs
de la membrana es cero y la diferencia de potencial transmembranal se
mantiene constante.


2.1. La ecuacin del flujo
Para estudiar este tema vamos a suponer un sistema discontinuo (como se
muestra en la figura 2.1), en el que no se utiliza energa metablica, los
solutos no son transportados por acarreadores, y adems los
compartimientos pueden intercambiar materia entre el exterior (e) y el
interior (i) celular.

En ese sistema, la energa libre de Gibbs total, que es la energa de un
sistema termodinmico la cual depende del numero de moles del soluto, de
la presin y de la temperatura, es:

e
dG
i
dG = dG +


A temperatura y presin constantes, el cambio de energa libre para
cada compartimiento es:

dG =
i

~
dn
i


para una sola especie de solutos (i), dnde:

i
n d
G d
i

~
=
27
es el potencial electroqumico y n
i
el nmero de moles.

Figura 2.1
Esquema de un sistema termodinmico
con dos compartimientos, interior y
exterior, cada uno con temperatura (T),
presin (p), y cantidad de solutos (n) que
pueden intercambiarse entre ambos
compartimientos.


En un proceso natural donde se pierde energa libre, se cumple la 2a. ley de
la termodinmica, es decir:

dG<0,

por lo tanto:


0
i
i
dn
i
i

~ e
i
dn
e
i

~
dG < + =


La cantidad de solutos que fluye del interior al exterior es igual al que
circula en sentido opuesto, es decir:

e
dn
i
dn =

entonces:

0 <
i
)dn
i
i

~
-
e
i

~
( = dG

Adems, dn
i
> 0, por lo que:

0 )
i
i

~ e
i

~
( <

es decir que es necesario que el potencial electroqumico del exterior sea
mayor que el del interior,

~ i
i

~
>

e
i

para que el soluto fluya del interior al exterior.
28
Una clula excitable, que se puede considerar como un sistema discontinuo,
la diferencia de potencial electroqumico aparece como fuerza de arrastre,
que es la fuerza que impulsa el movimiento de iones a traves de la
membrana:
dx
i

~
d
i
X =



dicha fuerza por mol de soluto se conoce adems como fuerza de difusin
molar.
Si el sistema no est muy alejado del equilibrio, la velocidad media de
difusin (v
i
) es proporcional a la fuerza de arrastre: v
i
=u
i
X

donde u
i
es la
movilidad que no depende de la fuerza de arrastre.
El flujo de un ion (j
i
) es proporcional a la velocidad de transporte (v
i
) y por
lo tanto a la fuerza de arrastre:

j
i
= c
i
v
i


donde c
i
es la concentracin del in i, o sea que,


x d
i

~
d
i
c
i
u
i
j =
........................................(1)

Esta es la ecuacin del flujo.
Considerando que en una clula excitable la mayora de los solutos son iones
con carga, el potencial electroqumico es la suma del potencial qumico ms
el potencial elctrico:


F
i
z
i

~
+ =

Donde el potencial qumico es:

i
RTlnc T) (p,
o
i

i
+ =

es el potencial elctrico, z
i
la valencia del ion, F la constante de Faraday, R
la constante de los gases, T la temperatura, y
i
0
es el potencial qumico en
estado estndar (a temperatura de 20C y a una presin de 1 atmsfera).
Reemplazando en la ecuacin (1), se obtiene:

29
)
x d
d
i
Fc
i
z +
x d
i
c d
(RT
i
u
i
j

=
...............(2)


Esta es la ecuacin de Nernst-Planck que relaciona el flujo con los
gradientes de potencial qumico (dc
i
/dx) y elctrico (d/dx).

2.2. La Ley de Fick
Cuando se trata de solutos no electrolticos, a partir de la ecuacin de
Nernst-Planck se puede obtener la Ley de Fick, que describe el flujo en
trminos exclusivamente del gradiente de concentracin. En este caso z
i
=0 y
de la ecuacin (2):

x d
i
c d
i
D
x d
i
c d
RT
i
u
i
j = =



donde D
i
= u
i
RT es el coeficiente de difusin.

2.3. La ecuacin de Nernst
Si se trata de una especie inica que se encuentra en equilibrio a travs de la
membrana celular, semejante a lo que ocurre en una clula en reposo, el
flujo neto sera cero (j
t
= j
i
+ j
e
= 0). Si se iguala a cero e integra la ecuacin
de Nernst-Planck se obtiene la ecuacin de Nernst que describe el potencial
de equilibrio (E
i
) de un solo ion:

e
i
c
i
i
c
ln
F
i
z
RT
- =
i
E



Para un catin monovalente a 20C (293K), RT/zF = 25.25mV, y utilizando
logaritmos decimales (ln y = 2.3 log y), la ecuacin resulta:

e
i
c
i
i
c
log -58mV
e
i
c
i
i
c
log 2.3 mV -25.25
e
i
c
i
i
c
ln
T
i
z
RT
- =
i
E = =



La importancia de esta ecuacin, aunque sea slo una interpretacin parcial
de la realidad, radica en que en el estudio de las propiedades
electrofisiolgicas de las clulas excitables e incluso de aquellas que no lo
son, es fundamental. Por ejemplo, en una neurona de mamfero, las
concentraciones de los iones de potasio (K
+
) son: en el interior celular C
i
=
30
140 mM, y en el medio extracelular C
e
= 5 mM. Por lo tanto, el potencial de
equilibrio del potasio es:

mV 84
5
140
log mV 58
K
E =

lo que significa que, si la clula en reposo tiene un potencial de
aproximadamente -84 mV, los iones de potasio estarn en equilibrio y por lo
tanto el flujo total de potasio en el reposo ser cero.

2.4. Potencial de unin de lquida
Consideremos el caso de una sal puesta en una interfase a diferentes
concentraciones.

En este caso si los dos componentes, catin y anin, se mueven con diferente
movilidad, a partir de la ecuacin de Nernst-Planck, aplicada para el catin y
el anin, se puede deducir el potencial de unin lquida, o potencial de
difusin libre de la sal.
El flujo para el catin es:

)
dx
d
k
Fc
k
z +
dx
k
dc
(RT
k
u
i
j

=


donde u
k
, z
k
y c
k
son la movilidad, la valencia y la concentracin del catin,
respectivamente.
De manera anloga, el flujo del anin es:

)
dx
d
a
Fc
a
z +
dx
a
dc
(RT
a
u
i
j

=

donde u
a
, z
a
y c
a
son la movilidad, la valencia y la concentracin del anin,
respectivamente.

Por el principio de electroneutralidad que establece que la carga neta total
deber ser igual a cero:

s
c =
a
c
a
z =
k
c
k
z

Donde c
s
es la concentracin de la sal. En consecuencia no puede haber flujo
neto de cargas:
31


a
j
a
z =
k
j
k
z

entonces:

)
s
c (ln
dx
d
F
RT
a
z
a
u +
k
z
k
u
a
u -
k
u
- =
d
dx



Integrando la ecuacin, resulta:
e
s
c
i
s
c
ln
F
RT
a
z
a
u +
k
z
k
u
a
u -
k
u
- =
e
i
=
u
E

que es el potencial a travs de la interfase lquida en funcin de la movilidad
y de la concentracin de cationes y aniones.
Un ejemplo particular de la ecuacin es cuando z
k
y z
a
tienen los valores de
1 y -1, como por ejemplo el cloruro de sodio (NaCl). As la ecuacin ser:

e
s
c
i
s
c
ln
F
RT
a
z
a
u +
k
z
k
u
a
u -
k
u
- =
e
i
=
u
E


y si u
k
= 0 u
a
= 0, la ecuacin es igual a la ecuacin de Nernst.

2.5. Ecuacin de campo constante
En cualquier clula excitable hay mas de un solo tipo de iones que fluyen a
travs de la membrana plasmtica (K
+
, Na
+
y Cl
-
) determinando el potencial
de reposo de la clula, en funcin de sus concentraciones y permeabilidades.
La permeabilidad es una propiedad de la membrana celular que depende de
la movilidad del ion, de la temperatura y del espesor de la membrana.

F
i
RTu
=
i
P

Si se iguala a cero el flujo total:

j
Na
+ j
K
+ j
Cl
= 0

Usando la ecuacin de Nernst-Planck para cada flujo, se puede deducir la
ecuacin de Goldman, Hogkin y Katz o ecuacin de campo constante, que
toma en cuenta la participacin de los tres iones. Adems son necesarias dos
32
suposiciones: una, que el interior celular sea isopotencial, o sea que todo el
interior celular tenga el mismo potencial y, de la misma manera, que el
exterior celular sea isopotencial. La otra suposicin, es que el espesor de la
membrana plasmtica sea constante.
En esas condiciones, la ecuacin de campo constante es:

i
Cl
c
Cl
P +
e
K
c
K
P +
e
Na
c
Na
P
e
Cl
c
Cl
P +
i
K
c
K
P +
i
Na
c
Na
P
ln
F
RT
m
E =



que describe el potencial de membrana en reposo en funcin de las
permeabilidades y las concentraciones. La distribucin de iones a ambos
lados de la membrana plasmtica es asimtrica. La figura 2.2 muestra un
ejemplo de las concentraciones de los iones ms abundantes en neuronas de
mamferos. La figura 2.3 muestra una grfica del potencial de reposo en
funcin de la concentracin extracelular de potasio. Como puede observarse
a concentaciones de potasio bajas la curva se aparta de la recta que
correspode al potencial de equilibrio del potasio. Esto se debe a que la
membrana no es permeable exclusivamente al potasio, sino tambien al sodio
y al cloro, aunque en menor grado.

En el caso de que la permeabilidad a cloro sea muy pequea comparada con
las permeabilidades al potasio y al sodio, la ecuacin sera:

K
P
Na
P
=

, (a 20C),
e
Na
C +
e
K
c
i
Na
C +
i
K
c
58log
m
= E


Donde:





Figura 2.2
Concentraciones (en mM) en los iones ms
abundantes en neuronas de mamferos.



33





Figura 2.3
Potencial de reposo (E
r
) en funcin de la
concentracin extracelular de potasio
([K]
e
) en mM. Las abscisas se muestran en
escala logartmica.


Que es la relacin de la permeabilidad al sodio con respecto a la del potasio.
La permeabilidad al potasio se considera la permeabilidad de referencia por
ser la de mayor valor. Por lo que el potasio es el in que ms participa en la
generacin del potencial de reposo, en la mayora de las clulas.

La suposicin de que el flujo total es la suma de los flujos de cada in,
implica que dichos flujos individuales son independientes entre s. Si ahora
consideramos que el flujo de iones generan corrientes elctricas, podemos
proponer un circuito elctrico equivalente de la membrana celular en reposo,
como el que se muestra en la figura 2.4.



Figura 2.4
Circuito elctrico equivalente
de la membrana celular en
reposo tomando en cuenta los
iones Na
+
, K
+
y Cl
-
. R
Na
, R
K
y
R
Cl
representan las resistencias
a los iones de Na
+
, K
+
y Cl
-
de
la membrana celular, y E
Na
, E
K
y E
Cl
los potenciales de equilibrio para el Na
+
, K
+
y Cl
-

respectivamente.








34

2.6. Permeabilidad y conductancia
Frecuentamente se confunden dos propiedades, permeabilidad y
conductancia. Como se dijo la permeabilidad es una propiedad de la
membrana plasmtica mientras que la conductancia es una propiedad de los
canales ionicos.
Para distinguir entre permeabilidad y conductancia es necesario encontrar la
corriente inica. La corriente inica es igual a la carga (zF) multiplicada por
el flujo:

I
i
= zFj
i

Como ya se ha visto, el flujo inico ser:

dx
d
czF
i
u
dx
dc
RT
i
u
i
j

=

y la corriente ionica:


dx
d
2
F
2
cz
i
u -
dx
dc
RTzF
i
-u =
i
I

............................ (3)


Se pude poner la ecuacin en funcin de la movilidad elctrica que se
obtiene multiplicando la movilidad qumica (u
i
) por la carga (zF), es decir:

u
e
= zFu
i
= u

entonces, integrando la ecuacin (3) entre 0 y y suponiendo que el
potencial de membrana es:

E
m
=
i

e

De esta manera:

)
i
E -
m
(E
i
g = I
i


Donde:
i
r
1
=
i
g
es la conductancia.

35
F
RTu
= P
El circuito elctrico equivalente permite suponer que la corriente total es la
suma de las corrientes para cada in:

I
t
= I
Na
+I
K
+I
Cl
,

entonces:

)
Cl
E -
m
(E
Cl
g + )
K
E -
m
(E
K
g + )
Na
E -
m
(E
Na
g =
t
I

Como la condicin de equilibrio es I
t
= 0, entonces:

Cl
g +
K
g +
Na
g
m
Cl
E
Cl
g +
K
E
K
g +
Na
E
Na
g
= E

que es la ecuacin de campo constante en funcin de las conductancias de la
membrana a los diferentes iones.
Para relacionar la conductancia (g) con la permeabilidad (P), es necesario
recordar que el flujo debido al potencial elctrico es:
dx
d
-uc =
e
j


En un campo constante:

E
- =
dx
d

Dnde E es el campo elctrico y el espesor de la membrana.
Luego, el flujo es igual a:

E
uc =
e
j

y la corriente:

E
uczF =
e
zFj = I

Como se vi anteriormente la permeabilidad es:


36



Por la 1a. ley de Ohm, I = gE, por lo que:

RT
Pc
2
F
2
z
= g


Es decir que, a temperatura constante, la conductancia es proporcional a la
permeabilidad y a la concentracin del in, mientras que la permeabilidad no
depende de la concentracin sino de la movilidad.
x
i
D
uzFc
= g
La conductancia en funcin de la movilidad es:


Donde D
i
es el coeficiente de difusin.

37
Captulo 3
PROPIEDADES PASIVAS FUERA DEL REPOSO

El umbral de una clula excitable es el nivel de voltaje por encima del cual
la clula es capaz de generar un potencial de accin. En el prximo captulo
veremos que el potencial de accin es una propiedad intrnseca de las celulas
excitables. Toda clula excitable ante un estmulo elctrico subumbral
responde con un cambio en el potencial de membrana que es semejante a la
carga de un capacitor o de una serie de capacitores en paralelo. El curso
temporal de ese cambio depende de la geometra de la clula. En este
captulo trataremos con particular inters dos casos geomtricos: clulas
aproximadamente esfricas y cilndricas.

3.1. La capacitancia y resistencia de la membrana
Como se dijo anteriormente la membrana plasmtica est formada por una
bicapa lipdica en la cual se encuentran protenas insertadas que cumplen la
funcin de transportar iones a travs de la membrana. La bicapa lipdica
acta como un aislante elctrico separando dos conductores, el citoplasma y
el medio extracelular, constituyendo as un capacitor elctrico.
La capacitancia est definida como:

A
= c

Donde A es el rea de la membrana, el espesor de la membrana, y la
constante dielctrica del vacio.
En este caso, es mejor definir la capacitancia en forma independiente del
rea; es decir, la capacitancia por unidad de rea: c/A. As, la
capacitancia de membrana es:

=
m
C

Como el espesor de la membrana plasmtica () es solamente de
aproximadamente 25, en todas las clulas, la capacitancia por unidad de
rea es muy alta, aproximadamente 1 F/cm
2
. De la misma manera es til
definir otra unidad independiente del rea de la membrana. Esta es, la
resistencia de membrana por unidad de rea (/cm
2
).

Tomando en cuenta estas dos componentes membranales: la capacitancia
(dada por la bicapa lipdica) y la resistencia (dada por las protenas que
38
tienen la funcin de canales inicos), permiten proponer el circuito elctrico
equivalente que se muestra en la figura 3.1.

Figura 3.1
Dibujo esquemtico de la
membrana celular mostrando la
bicapa lipdica y un canal inico.
En el dibujo de la derecha se
muestra el circuito elctrico
equivalente compuesto de un
ncia (R capacitor (C
m
) que representa la bicapa, de una resiste
M
) que corresponde a los
canales inicos de la membrana, y una batera (E
m
) que corresponde al potencial de
membrana.


3.2. Potenciales electrotnicos en clulas esfricas
Por un lado, es posible medir la diferencia de potencial entre el interior y el
exterior, que se conoce como potencial de membrana (E
m
), utilizando
microelectrodos. Por otro lado, es posible estimular la clula inyectando una
corriente a traves de un microelectodo.
Suponiendo que los medios extracelular e intracelular son isopotenciales y
con un arreglo experimental como se esquematiza en la figura 3.2; en esas
condiciones, el circuito elctrico equivalente de la membrana se muestra en
la figura 3.3.













Figura 3.2
Esquema experimental para estudiar los potenciales electrotnicos de clulas esfricas.




39











Figura 3.3
Circuito elctrico equivalente de la membrana celular. C
m
es la capacitancia de la
membrana por el cual circula la corriente capacitiva (I
C
), R
m
la resistencia de la
membrana por donde circula la corriente resistiva (I
R
). E
r
es el potencial en reposo, I
0
la
corriente aplicada y E
m
el potencial de membrana.

Para entender como se distribuye la la corriente en todos los componentes
del circuito, aplicamos la 1a. ley de Kirchoff que dice:

I
0
(t) = I
C
+ I
R
.

Como nos interesa conocer la relacin entre la corriente resistiva y el
potencial de membrana, aplicamos la ley de Ohm:

I
R
= g
m
(E
m
-E
r
)

Dode E
r
es el potencial de reposo.
La carga del capacitor es:

Q = E
m
C
m
.

Debido a que C
m
es constante, derivando respecto del tiempo resulta:

C
I
dt
m
dE
m
C
dt
dQ
= =

que es la corriente capacitiva.

Si se define:

r
E
m
E V =
40

Como E
r
es constante y se deriva:

dt
m
dE
dt
dV
=

Por lo tanto:

dt
dV
m
C V
m
R
1
0
I + =

Multiplicando por R
m
y agrupando variables, resulta la siguiente ecuacin
diferencial:

0
V
0
I
m
R V
dt
dV
m
= = +


Donde, V
O
es el potencial en el estado estacionario, y
m
= R
m
C
m
es la
constante de tiempo.

La solucin de la ecuacin diferencial es:

m

t
e V V = (1
0

)
........................................... (4)

Que satisface las siguientes condiciones:

t en t = 0, V = 0 y para , V = V
o
.

Si t =
m
entonces:

0
0.63V )
1
e (1
0
V V

=

Esto significa que cuando ha transcurrido una constante de tiempo, como se
observa en la figura 3.4, el voltaje alcanza el 63% del potencial estacionario
(V
O
).

Despejando y aplicando logaritmos a la ecuacin (4) resulta:


t
m

1
)
0
V
V
ln(1 =

que es la ecuacin de una recta, cuya pendiente es: -1/
m
.

41





Figura 3.4
Curso temporal del potencial
cuando en la clula se aplica
un pulso de corriente con
forma de escaln. Ntese que
al transcurrir un tiempo
m
el
potencial (V) alcanza el 63%
de V
0
.

Para obtener R
m
se construye la curva voltaje-corriente (V-I), cuya pendiente
es igual a R
m
. As,

m
R
m

m
C =


3.3. Potenciales electrotnicos en clulas cilndricas (teora del cable
infinito)
Si ahora consideramos el caso de en una clula cilndrica, como una clula
nerviosa o una fibra muscular. Con el arreglo experimental como se muestra
en la figura 3.5.

En este caso la clula se puede comparar con un cable extremadamente largo
si se cumplen las siguientes condiciones:
1) que el dimetro sea mucho menor que la longitud, es decir: L,
2) que sea un cable homogneo: 2 conductores separados por un dielctrico,
3) que las resistencias interna (R
i
), externa (R
o
) y la de la membrana celular
(R
m
) cumplan con la ley de Ohm (que sean hmicas), y
4) que la resistencia externa sea mucho menor que la resistencia interna,
R
o
R
i

Considerando lo anterior se puede proponer un circuito elctrico equivalente
de la membrana celular como se muestra en la figura 3.6.
42









Figura 3.5
Esquema experimental para estudiar los potenciales electrotnicos de clulas cilndricas.


Figura 3.6
Circuito elctrico equivalente
de la membrana celular. R
m
y
C
m
son las resistencias y
capacitancias de cada unidad
de membrana, respectivamente,
y R
i
la resistencia longitudinal
del medio intracelular. Por cada
unidad de membrana, i
m
, i
r
, i
c
e
i
i
son las respectivas corrientes.
I
0
es la corriente aplicada en el punto x=0, y V
x
el potencial de membrana en un punto
dado x.

Para desarrollar las ideas es importante definir los parmetros de la
membrana y sus unidades:

i
i
: corriente intracelular (A/cm)
i
m
: corriente transversal (A/cm)
c
m
: capacitancia de 1 cm de longitud de membrana (F/cm)
C
m
: capacitancia de 1 cm de membrana (F/cm); c
m
=2aC
m
a: radio de la clula (cm)
r
i
: resistencia interna longitudinal de 1 cm de clula (/cm)
R
i
: resistividad del medio interno (.cm); r
i
=R
i
/a
r
m
: resistencia de la membrana de 1 cm de clula (.cm)
R
m
: resistividad de 1 cm de membrana (.cm); r
m
=R
m
/2a
I
o
: corriente aplicada en la posicin x=0 (A)
V
o
: cambio de E
m
en la posicin x=0 (V)
V
x
: cambio de E
m
en determinado valor de x (V)
43

La corriente que atraviesa la membrana en un punto x, puede verse como
prdida de la corriente interna (i
i
), es decir:
A medida que fluye la corriente longitudinalmente, la perdida de corriente a
traves de la membrana produce una disminucin de voltaje en cada
segmento (V
x
):
dx
i
di
m
i =

, entonces:
i
i
i
r
dx
x
dV
=


dx
x
dV
i
r
1
i
i =

En cada segmento de membrana representado por una resistencia en paralelo
con un capacitor, conocido como circuito RC simple:

dx
x
dV
m
c
m
r
x
V
c
i
r
i
m
i + = + =

Sustituyendo:

dt
x
dV
m
c
m
r
x
V
)
dx
x
dV
i r
1
(
dx
d
+ = , o sea:


dt
x
dV
m
c
m
r
x
V
2
dx
x
V
2
d
i r
1
+ =


Multiplicando por r
m
, reordenando trminos y definiendo
m
= r
m
c
m
y

2
= r
m
/r
i
, resulta:

0
x
V
dt
x
dV
m

2
dx
x
V
2
d
2
= + +


que es la ecuacin general del cable infinito.

Los parmetros que caracterizan elctricamente la membrana (R
i
, R
m
, y C
m
)
se pueden visualizar pensando en las caracteristicas geomtricas de la fibra.
Por ejemplo si el dimetro de la fibra es grande, los valores de R
i
y R
m
sern
44
pequeos porque la fibra ofrecer una resistencia menor para que fluya la
corriente, mientras que C
m
ser grande porque el area de membrana ser
grande.

Para encontrar los valores de R
i
, R
m
, y C
m
que caracterizan al circuito
equivalente de la membrana, es necesario encontrar la solucin de la
ecuacin del cable.

Para simplicar la ecuacin general se puede encontrar la solucin de la
ecuacin en el estado estacionario ya que en esas condiciones el voltaje no
cambia con el tiempo, es decir permanece constante.

3.4. Solucin particular en el estado estacionario

t 0
dt
x
dV
= Cuando , , por lo tanto:

0
x
V +
2
dx
x
V
2
d
2
- =


La solucin general de esta ecuacin es:

x
Be

x
Ae ) (x,
x
V

+ =


Es evidente que para x 0, V
x
disminuye a medida que x aumenta, por lo
tanto una solucin particular de la ecuacin se puede obtener
haciendo A=0, es decir que para x=0, V
x
=B=V
o
, luego:

x
e
0
V
x
V

=

que es el potencial de membrana en el estado estacionario en funcin de la
distancia (x).

Cuando x =

1
e
0
V
x
V

=

es decir: V
x
0.37V
o
,

45
esto significa que a una distancia igual a la constante de espacio () el
potencial de membrana decae al 37% del potencial en el punto donde se
inyecta la corriente (V
o
).

Grficamente se puede observar en la figura 3.7.

Despejando:

x
e
0

=
V
x
V


tomando logaritmos:

x

1
0
V
x
V
ln =

que es la ecuacin de una recta cuya pendiente es igual a 1/



Figura 3.7
Disminucin del potencial (V
x
) a
medida que aumenta la distancia
(x) desde el punto donde se aplica
la corriente. Este decaimiento es
para las dos direcciones. Observe
que a la distancia o - el
potencial (V
x
) es del 37% de V
0
.



3.5. Solucin general de la ecuacin del cable
La solucin general de la ecuacin del cable es:

T) f(X,
4
0
I
i
r
t) (x,
x
V =

Dnde:

)] T 2
T 2
X
erf( [1
x
e )] T 2
T 2
X
erf( [1
x
e T) f(X, +

=

dnde X = x/, = t/, y la funcin error (erf) es la integral de 0 a x de
una funcin gaussiana:
46

2
2
y
2
1
e

es decir:

dy
x
2
y

2
erf(x)
0
e

=



3.6. Solucin particular de la ecuacin del cable en x=0
La ecuacin en x=0 es:

T) f(0,
4
0 i
t) (0,
0
V =
I r
, dnde:


) T erf( ) T erf( t) f(0, + =

) T erf( ) T erf( = ) T 2erf( ) = t f(0, Como , entonces: , de esa manera:

)

t
erf(
2
0
I
i
r
t) V(0, =


que es la ecuacin del cable en x=0.


erf(1
2
0 i
) V(0, = )
I r
En t = ,

como erf(1) 0.843 entonces:

2
0
I
i
r
843 . 0 ) V(0,


Como erf() = 1, entonces

0
I
0
R
0
I
i
r
m
r
2
1
2
0
I
i
r
) V(0, = = =

i
r
m
r
2
1
0
R =
dnde: , que es la resistencia de entrada de la clula.

47
Finalmente:

0
I
0
R 0.843 ) V(0, 0.843 )
m
V(0, =
Es decir que cuando ha ranscurrido un tiempo igual a la constante de tiempo
(
m
) el potencial de membrana en el punto donde se inyecta la corriente
alcanza el 84.3% del potencial en el estado estacionario.

Para calcular R
i
, R
m
y C
m
a partir de los parmetros medibles:

i
r
m
r
=

m
=r
m
c
m


i
r
m
r
2
1
0
R =

se procede de la siguiente manera: se mide de la pendiente de la

x

1
V
x
V
ln =
0
recta: ,


se mide de la grfica V
o
(t) en x=0, y

R
o
de la pendiente de la recta de la funcin V
0
() vs I
0

48
Captulo 4
EL IMPULSO NERVIOSO

4.1 El potencial de accin
Una de las formas de comunicarse una neurona con otra o con otro tipo de
clulas es el impulso nervioso tambin llamado potencial de accin. Para
que una neurona produzca un potencial de accin es necesario que reciba un
estmulo elctrico, qumico o mecnico que modifique el potencial de
membrana hasta alcanzar un nivel llamado umbral. A partir de ese nivel
(umbral de disparo) la neurona comienza un proceso automtico que
despolariza la membrana plasmtica. Es decir, el potencial de membrana se
hace mas positivo (o menos negativo) hasta que la polaridad de la membrana
se invierte. Una vez que alcanz un mximo (pico del potencial) la
membrana se repolariza y regresa al potencial de reposo (figura 4.1). Una
vez que se produjo, el potencial de accin se propaga por toda la fibra sin
disminuir de amplitud (figura 4.2). La propagacin del potencial de accin
es a travs de circuitos locales de corriente en los axones amielnicos o por
conduccin saltatoria en los nodos de Ranvier en los axones mielnicos
(figura 4.3). La fase despolarizante del potencial de accin es debida
principalmente a la activacin de canales de sodio que permiten la entrada
de sodio, los que posteriormente se inactivan. Despus se activan canales de
potasio por los que salen esos iones y producen la repolarizacin de la
membrana (figura 4.4). Por el hecho que los canales de sodio se inactivan, el
potencial de accin tiene un periodo refractario. Es decir que si durante los
primeros milisegundos del potencial de accin se proporciona otro estmulo
la membrana no podr generar un nuevo potencial de accin (figura 4.5)
hasta que los canales de sodio se hayan recuperado de la inactivacin.


Figura 4.1
Fases del potencial de accin de una
neurona.
A partir del potencial de reposo, cuando se
aplica un estmulo que alcanza el umbral de
disparo, se produce una despolarizacin
hasta que la polaridad de la membrana se
invierte (sobretiro) y alcanza un mximo (o
pico) despus del cual se produce una
repolarizacin hasta que el potencial regresa
nuevamente al reposo.

49






Figura 4.2
El potencial de accin se
propaga sin disminuir su
amplitud.
El esquema representa registros
del potencial de accin en un
axn, en tres posiciones
diferentes a lo largo del axn.







Figura 4.3
e muestra la conduccin

igura 4.4
muestra que los canales
Dibujo qu
continua y saltatoria en un axn
amielnico y en uno mielnico,
respectivamente.




F
El esquema
de Na
+
se abren al comenzar la
despolarizacin. Al alcanzar el
umbral se abren ms canales de Na
+

hasta el pico del potencial cuando se
cierran esos canales y se abren los
canales de K
+
hasta que el potencial
de membrana llega al valor del
potencial de equilibrio del K
+
y se
cierran esos canales.


50

igura 4.5
que representa un
que el

.2 Corrientes inicas
diaron las propiedades de la membrana del axn
igura 4.6
l potencial de accin de
ara estudiar esas propiedades de la membrana del axn, estimularon con
pulsos de voltaje en lugar de usar pulsos de corriente. Esta tcnica se llama



F
Esquema
registro de doble pulso.
El esquema muestra
segundo estmulo (E2), aplicado
pocos milisegundos despus del
primer estmulo (E1), no produce
potencial de accin.


4
Hodgkin y Huxley estu
gigante del calamar. Durante el potencial de accin el voltaje es una funcin
complicada del tiempo y la distancia. Para simplificar esta funcin se puede
eliminar la propagacin del potencial de accin. Esto se logr introduciendo
un alambre axial en el axn gigante. De esta manera, el voltaje ser una
funcin solamente del tiempo: V = V(t), y tendr una forma semejante,
como la que se muestra en la figura 4.6, a la que tiene cuando se propaga.
Por lo tanto, podemos decir que la respuesta de la membrana a un estmulo
de corriente, el potencial de accin, es una propiedad intrnseca de la
membrana del axn.






F
Registro de
un axn gigante de calamar con un
alambre axial para evitar la
propagacin.



P
51
fijacin de voltaje y fue introducida por K. S. Cole. En la siguiente seccin
veremos que la probabilidad de apertura de los canales de Na
+
y K
+
del axn
depende del voltaje y es independiente del flujo de corriente. Otra razn para
usar la tcnica de fijacin de voltaje es que la aplicacin de un pulso de
voltaje cargar instantneamente el capacitor de la membrana eliminando
la contribucin de la corriente capacitiva en el registro de la corriente
membranal.
Si uno quiere estudiar la propiedad de una poblacin de canales de una rea
de membrana grande en fijacin de voltaje es necesario que el potencial de

Figura 4.7
ircuito electrnico del amplificador
in de voltaje del axn
m i e
.
axial y atraviesa la membrana del axn y es
a fijacin de voltaje se obtiene usando un sistema de retroalimentacin
egativa, usando el siguiente mtodo: se mide el potencial de membrana
de pulsos de voltaje hiperpolarizantes
(negativos), a partir de un potencial de mantenimiento de -70 mV (cercano al
membrana sea homogneo en toda la regin en estudio. En el axn gigante
de calamar, el control espacial del voltaje, se resolvi introduciendo un
alambre en el interior del axn, como se muestra en la figura 4.7, logrando
hacer isopotencial el interior del axn. As, se elimina la variacin
producida por la propagacin del potencial.


C
para fijac
gigante del calamar.
V
i
es el potencial intracelular y V
e
el
potencial extracelular. V = V - V
obtenida por el amplificador A
1
. El
amplificador A
2
compara V
m
con V
C

(que es el potencial comando) para
La corriente se inyecta por un alambre
recogida por placas y registrada por un
dispositivo.


inyectar la corriente I para mantener V
m
= V
C
L
n
(V
m
), el valor medido se compara con el pulso comando (V
c
), que es valor
de potencial de membrana deseado. Para que V
m
sea igual a V
c
, el arreglo
experimental inyectar la corriente necesaria (I), la cual ser igual a la
corriente de membrana. Con esta tcnica, se aplican los pulsos comandos
(V
c
) y se registran las corrientes (I).
Si el axn se encuentra sumergido en una solucin que contiene sodio y
potasio y se aplican cierta cantidad
52
potencial de reposo), se producen corrientes de membrana negativas
(entrantes) relacionadas linealmente con la amplitud de los pulsos de voltaje.
Adems, la corriente prcticamente no depende del tiempo, es decir se
mantiene constante; esto significa que la corriente fluye por una resistencia
pasiva. Si los pulsos de voltaje aplicados a partir del mismo potencial de
mantenimiento (-70 mV) son despolarizantes (positivos) la corriente primero
es entrante (negativa) y despus saliente (positiva); esto puede observarse en
la figura 4.8. La corriente entrante alcanza un mximo a un potencial
alrededor de 0 mV. Con despolarizaciones mayores la corriente entrante
disminuye. A partir de +40 mV la corriente saliente presenta una fase inicial
rpida seguida de una componente lenta.





Figura 4.8
orrientes de membrana obtenidas
on pulsos despolarizantes de 60
desde un potencial de
.3 La conductancia de potasi
eemplazando el Na
+
por un catin impermeable como la colina, Hodgkin y
uxley registraron las corrientes de K; tambien puede usarse tetrodotoxina
quea canales de Na
+
. Observaron que las
C
c
a 60 mV
mantenimiento de 70 mV.



4 o
R
H
(TTX), que es una toxina que blo
componentes entrantes y las salientes tempranas desaparecen, como se ve en
la figura 4.9. La caracterstica principal de esta corriente es que se hace
mayor y ms rpida a medida que aumenta la despolarizacin y no aparecen
cuando los pulsos son hiperpolarizantes. Se puede caracterizar esta corriente
haciendo una grfica de la amplitud de la corriente al final del pulso como
una funcin del potencial de membrana durante el pulso (figura 4.10). Es
obvio que la relacin entre la corriente y el voltaje, o curva I-V, no es lineal
para potenciales despolarizantes y prcticamente cero para potenciales
hiperpolarizantes. Si el K
+
dentro y fuera del axn se reemplaza por colina,
entonces la mayora de las corrientes desaparecen, la corriente remanente es
muy pequea y est relacionada linealmente con el voltaje, es decir, se
comporta como una resistencia. La corriente remanente fue llamada por
53
Hodgkin y Huxley corriente de fuga y cumple una funcin importante en el
potencial de reposo y en el valor del umbral de excitacin.






Figura 4.9
orrientes de potasio obtenidas
on pulsos hiper y despolarizantes
desde un potencial de
igura 4.10
urva corriente-voltaje (I-V)
ara la corriente de potasio
al del pulso.
partir de los resultad
uantitativa entre la corriente y el voltaje usando el concepto de
onductancia. La corriente de potasio (I
K
) est dada por el producto de la
onde la conductancia, g
K
(V,t), es una funcin del potencial y del tiempo, y
E
K
es el potencial de inversin para el ion potasio.
e dividen los trazos de la
C
c
hasta 60 mV
mantenimiento de 70 mV.









F
C
p
medida al fin




A os mostrados es posible definir una relacin
c
c
conductancia (g
K
) y la fuerza de arrastre (V-E
K
):

I
K
= g
K
(V,t) (V-E
K
)

D

Para entender el curso temporal y la dependencia de voltaje de la
conductancia es necesario un anlisis detallado. Si s
54
corriente de potasio por V-E
K
durante y despus del pulso, se obtiene el
cin y
as son compatibles con un proceso de orden mayor que 1,

igura 4.11
onductancia de potasio como
ncin del tiempo durante y
un pulso a -10 y
o
Las corrientes inicas macroscpicas son el resultado de la activacin de un
gran nmero de canales. Desde el punto de vista del canal de K
+
, podemos
robabilidad de apertura
l parmetro n es la probabilidad de que una subunidad est en la posicin
activa po,
= n(V,t), que se puede modelar elevando n a la cuarta potencia, n
4
; es
curso temporal de la conductancia para cada despolarizacin y para la
recuperacin durante la hiperpolarizacin. En la figura 4.11 se puede
observar el curso temporal de la g
K
para dos despolarizaciones diferentes.
Las caractersticas importantes son:
1) la conductancia cambia ms rpido para potenciales ms positivos,
2) la conductancia al final de un pulso prolongado es mayor a potenciales
ms positivos, y
3) el desarrollo de la conductancia es sigmoidal durante la despolariza
la recuperacin durante la repolarizacin es una exponencial simple.
Estas caracterstic
con mltiples niveles durante la despolarizacin y de primer orden, igual a 1,
durante la repolarizacin.



F
C
fu
despus de
+60 mV.


s Correlacin del modelo n con los canales unitari
suponer que la apertura del canal depende de la p
(P
o
), que est dada por el parmetro n y la conductancia mxima
corresponde a la conductancia de un canal multiplicada por el nmero de
canales disponibles (N
K
): N
K

K
= g
Kmax
, dnde
K
es la conductancia un
canal. Entonces, la corriente macroscpica ser:

I
K
= N
K

K
P
o
(V-E
K
), y N
K

K
P
o
= g
K
(V,t).

E
, y n es una funcin del voltaje y del tiem
n
decir, un proceso de cuarto orden.
55
Es importante hacer notar que este modelo predice el retardo en el trazo de
conductancia durante la despolarizacin, porque las cuatro subunidades
o
i el axn se baa y perfunde con soluciones sin iones de potasio, las
n de voltaje son diferentes a las obtenidas en

igura 4.12
orrientes de sodio a
ntre -50 y +60
la curva I-V es negativa para
otenciales ms negativos que 0 mV. Esto significa que hay una resistencia
deben estar en la posicin de activacin para que haya conduccin. Por otro
lado, el cierre del canal depende del regreso de una sola subunidad. Es decir,
un proceso de primer orden.

4.4 La conductancia de sodi
S
corrientes registradas en fijaci
soluciones normales. Los trazos, como se muestran en la figura 4.12,
corresponden a un potencial de mantenimiento de -70 mV y pulsos desde -
60 mV hasta +60 mV cada 10 mV. Las corrientes son entrantes para
despolarizaciones pequeas y no se mantienen durante la duracin del pulso
porque decaen espontneamente. La direccin de la corriente se invierte
alrededor de los 50 mV y ese potencial coincide con el potencial de
equilibrio del Na
+
. Si se grfica el mximo (pico) de corriente en funcin de
la amplitud del pulso, se obtiene una grfica como se muestra en la figura
4.13A. Ntese que la corriente es entrante para potenciales ms negativos
que 50 mV y saliente para potenciales ms positivos.







F
C
potenciales e
mV desde un potencial de
mantenimiento de -70 mV.


Adems, es obvio que la pendiente de
p
negativa, es decir, hay un elemento que en lugar de disipar energa est
inyectando energa al sistema. Esa energa puede deberse a que la fuerza de
arrastre para el Na
+
est forzando a los iones de sodio a fluir en la direccin
contraria de su gradiente electroqumico. Los cuadros corresponden a las
56
caractersticas de los canales abiertos, escalada por el nmero de canales, es
decir: N
Na
i
Na
.
La figura 4.13B muestra la conductancia al pico como funcin del potencial
igura 4.13
V medida al pico de la
a inactivacin de la corriente de sodio
la corriente de sodio: su amplitud
de membrana donde se puede observar la relacin sigmoidal tpica como se
vio para los canales de K
+
. Esta curva se obtuvo, de la misma forma que para
el K
+
, dividiendo la corriente por V-E
Na
.
















F
A: curva I-
corriente de sodio. B: conductancia de
sodio al pico como funcin del potencial
de membrana.


L
Hay una caracterstica sobresaliente de
decae aun cuando se mantiene el pulso; este proceso se llama inactivacin.
Veremos como estudiar la manera como se desarrolla la inactivacin y la
recuperacin de la inactivacin. La figura 4.14 muestra una serie de
corrientes de Na
+
producidas por un protocolo de doble pulso. El primer
pulso vara entre -90 y -30 mV y el segundo siempre es a 0 mV. Ntese que
la amplitud de la corriente durante el segundo pulso depende del potencial
durante el primero. Esto es importante porque muestra que la corriente a 0
mV no siempre es la misma y depende de la historia previa: a mayor
despolarizacin durante el pulso previo, hay menos canales disponibles para
57
ser activados, y por lo tanto, la corriente producida por el segundo pulso es
menor. Si se grafica la corriente normalizada durante el segundo pulso en
funcin del potencial del primer pulso se encuentra una curva sigmoidal
(figura 4.15). Esta curva de inactivacin refleja un proceso que est
controlado la variable h diferente a la que controla la activacin (m); por esta
razn tambin se la conoce como curva h. El efecto del prepulso se
desarrolla con el tiempo; para prepulsos muy cortos los canales no estn
inactivados pero conforme aumenta la duracin del prepulso aumenta el
porcentaje de canales inactivados. Cuando el prepulso es muy prolongado,
se dice que se trata de inactivacin es estado estable o a tiempo infinito, h

.
El efecto sobre la corriente durante el pulso de prueba corresponde al
resultado mostrado en la figura 4.14 y h como se muestra en la figura 4.15.


igura 4.14
Na
+
producidas
igura 4.15
de voltaje del efecto de un


F
Corrientes de
por un protocolo de doble
pulso. El primer pulso vara
entre -90 y -30 mV y el
segundo siempre a 0 mV.










F
Dependencia
prepulso prolongado sobre la corriente
de sodio.




58
La recuperacin de la inactivacin
La despolarizacin abre canales de Na
+
. Si la despolarizacin se mantiene,
esos canales se inactivan. Cuanto tiempo debe transcurrir para que los
canales puedan conducir nuevamente? En primer lugar es claro que si la
despolarizacin se mantiene los canales no conducen porque la inactivacin
persiste. Es necesario repolarizar la membrana para regresar a las
condiciones iniciales. En la figura 4.16 se muestra un experimento para
estudiar la recuperacin de la inactivacin. La membrana se despolariza a 0
mV produciendo una corriente entrante de Na
+
. Luego la membrana se
repolariza a -70 mV durante tiempos variables antes de despolarizar
nuevamente a 0 mV. La figura muestra todos los trazos sobrepuestos.
Cuando el intervalo de recuperacin es durante un tiempo breve la corriente
de Na
+
es muy pequea, comparada con la producida por el primer pulso. A
medida que aumenta el tiempo de recuperacin a -70 mV, la corriente al
pico aumenta, hasta que se recupera totalmente. Esto es una consecuencia
importante en el periodo refractario del potencial de accin.




Figura 4.16
Registros de corrientes de
sodio como respuesta a
un protocolo de doble
pulso. El tiempo de
separacin entre los dos
pulsos es variable para
estudiar la recuperacin
de la inactivacin.



La corriente de fuga
Adems de las corrientes de Na
+
y K
+
hay una corriente pequea que
depende linealmente del potencial de membrana, comportndose como una
resistencia pura con un potencial de inversin mas positivo que E
K
pero ms
negativo que E
Na
. Esta corriente se atribuye a una conductancia inespecfica
que puede escribirse como:

I
L
= g
L
(V-E
L
)

59
Finalmente, la corriente inica total a travs de la membrana del axn es:

I
i
= g
K
(V,t) (V-E
K
)+ g
Na
(V,t) (V-E
Na
)+ g
L
(V-E
L
)

Donde las conductancias de K
+
y Na
+
son dependientes del voltaje y el
tiempo, mientras que la de fuga no depende ni del voltaje ni del tiempo.
Basndose en el modelo de Hodgkin y Huxley:

g
K
= n
4
g
Kmax
y g
Na
= m
3
hg
Namax

Donde n, m, y h dependen del voltaje y del tiempo.

La corriente capacitiva
Se puede calcular la corriente capacitiva (I
C
) fcilmente si se toma en cuenta
que la corriente es el flujo de carga (iones en este caso), o sea la cantidad de
carga que atraviesa por unidad de tiempo. Es decir, I
C
es la primera derivada
de la carga Q = CV con respecto al tiempo. Suponiendo que C es constante,
I
C
= dQ/dt = C(dV/dt). Esta ecuacin muestra que mientras el voltaje este
cambiando en funcin del tiempo fluir corriente por el capacitor, mientras
que si el voltaje es constante no habr corriente capacitiva.

60
Apndice
CANALES UNITARIOS

Cuando se pudo dar un avance importante en el estudio de los canales
inicos fue al utilizarse la tcnica de patch-clamp en sus diferentes
configuraciones (vase la figura A.1).

1. Permeabilidad, conductancia y dependencia de voltaje
Para el anlisis de los canales unitarios es necesario estudiar la conductancia
unitaria y la permeabilidad del canal, la dependencia de voltaje y la cintica
de apertura y cierre.
Lo primero es medir tres parmetros: la amplitud de la corriente unitaria, el
tiempo de permanencia abierto y el tiempo de permanencia cerrado. Con la
amplitud de la corriente a diferentes potenciales de membrana se obtiene la
curva corriente voltaje (I-V) (figura A.2B). A partir de esos datos se puede
obtener la conductancia unitaria de la pendiente de la recta, y la
permeabilidad del canal ajustando la ecuacin de Goldman-Hodgkin-Katz a
los datos obtenidos:


[ ] [ ]
1 ) RT /
m
FV exp(
i
i ) RT /
m
FV exp(
e
i
RT
m
V
2
F
i
P
i
I

=

Para conocer la dependencia de voltaje es necesario obtener la probabilidad
de apertura es estado estable a diferentes potenciales de membrana (figura
A.3). La probabilidad de apertura en estado estable se obtiene con la
ecuacin:

NT
N
1 j
j
t j
o
P

=

=

Donde t
j
es el tiempo que el canal permanece en el nivel j, N el nmero total
de canales observados en el registro y T el tiempo total del registro. Si se
quiere obtener los parmetros de la dependencia de voltaje hay que ajustar la
ecuacin de Boltzmann a los datos obtenidos:

+ =
k )
m
V
0.5
(V
1 / 1
omax
P
o
P e

61
donde V
0.5
es el potencial al que se alcanza la mitad de la probabilidad de
apertura y k la pendiente de la curva ajustada.




























Figura A.1
Configuraciones usadas con la tcnica de patch-clamp.








62













Figura A.2
A: registros de la actividad de un
canal de potasio a 40 y 40 mV en la
configuracin inside-out patch, en
condiciones de potasio simtrico. c y
o indican los niveles cerrado y
abierto, respectivamente.
B: curva I-V (lnea continua) de ese
canal. La lnea punteada corresponde
al ajuste de la ecuacin de Goldman-
Hodgkin-Katz.









Figura A.3
Probabilidad de apertura del
canal normalizada (P
o
/P
omax
)
como funcin del potencial de
membrana




63

2. Cintica de apertura y cierre de canales unitarios
Para analizar la cintica de canales inicos consideraremos los 4 casos ms
sencillos: 1 canal con 2 estados, 2 canales con dos estados, 1 canal con 3
estados con 3 niveles de conductancia, y 1 canal con 3 estados con 2 niveles
de conductancia (figura A.4).















Figura A.4
Esquema de la actividad de canales unitarios considerando los siguientes ejemplos: un
canal con dos estados (A), dos canales con dos estados (B), un canal con tres estados con
tres niveles de conductancia (C), y un canal con tres estados con dos niveles de
conductancia (D).


2.1. Un canal con dos estados
Cuando se trata de 1 solo canal con 2 estados, el registro de la corriente
unitaria se ve como en la figura A.5 mostrando dos niveles de conductancia:
c y o.






Figura A.5
Esquema de un registro de la corriente unitaria de un solo canal con dos estados: cerrado
(c) y abierto (o).

Si definimos:
=probabilidad por unidad de tiempo que un canal cerrado se abra
64
=probabilidad por unidad de tiempo que un canal abierto se cierre
P
o
(t) =probabilidad que un canal est abierto (al tiempo t) si el canal
se abri al tiempo 0

Esta definicin no toma en cuenta lo que ocurri entre 0 y t, es decir no
importa cuentas veces el canal se cierre. Esto es lo que se conoce como un
proceso homogneo de Markov.
La ecuacin diferencial que describe el proceso es:

dP
o
/dt =-P
o
+(1-P
o
). La solucin de la ecuacin es:

P
o
(t) =/(+) +(1 - /(+))exp(-(+)t) ........................(1)

La constante de tiempo del proceso es: o =1/(+)
En los lmites:
P
o
(0) =1 y P
o
() =P
o
=/(+), que es la probabilidad de que el canal est
abierto en el estado estacionario.
Es decir: /(+) <P
o
(t) <1

A partir de los valores de o y P
o
se puede calcular y . o y P
o
se obtienen
ajustando la ecuacin (1) al histograma que resulta de la medicin de las Po
durante un periodo de tiempo (como se muestra en la figura A.6).
Otra forma para calcular y es medir el tiempo de permanencia del canal
en cada estado. Para esto se define:
p
o
(t) =probabilidad que un canal permanezca abierto al tiempo t
despus de una transicin cerrado-abierto al tiempo 0
En este caso, la ecuacin diferencial es:
dp
o
/dt =-p
o
, y la solucin de la ecuacin diferencial:
p
o
(t) =exp(-t) ..................................................(2)
La constante de tiempo es: o =1/
Los valores que toma p
o
(t) estn entre 0 y 1

De manera semejante, para el estado cerrado, la ecuacin diferencial es:
dpc/dt =-pc, y la solucin:
p
c
(t) =exp(-t) ..................................................(3)
La constante de tiempo es: c =1/
Los valores que toma p
c
(t) estn entre 0 y 1

65
Ajustando las ecuaciones (2) y (3) a los histogramas se obtienen
o
y
c
( y
) (como se muestra en la figura A.7).





Figura A.6
Probabilidad de apertura en funcin
del tiempo de un canal con dos
estados. En este caso, la probabilidad
de apertura no toma en cuenta lo que
ocurri entre 0 y t, es decir no importa
cuentas veces el canal se cerr.






Figura A.7
Probabilidad de apertura en funcin
del tiempo de un canal con dos
estados. En este caso, es la
probabilidad que un canal permanezca
abierto al tiempo t despus de una
transicin cerrado-abierto al tiempo 0.



2.2. Dos canales con dos estados
Tratndose de 2 canales iguales con 2 estados, es decir que presentan 3
niveles de conductancia, el registro se vera como en la figura A.8.

Figura A.8
Esquema de un registro
de la corriente unitaria
de dos canales iguales
con dos estados que
presentan tres niveles: los dos cerrados (cc), uno abierto y uno cerrado (oc) y los dos
abiertos (oo).


66
En el estado estacionario, para cada canal: Po =/(+)
Entonces:
P
0
=(1 - P
0
)(1 - P
0
) =(1 - P
0
)
2
=(/(+))
2
P
1
=2P
0
(1 - P
0
) =2/(+)
2
P
2
=P
0
P
0
=P
0
2
=(/(+))
2

En este caso, las p
s
son: p
0
=1/(2), p
1
=1/(+), p
2
=1/(2)
Para el nivel 1 hay una informacin adicional:
(#de transiciones de 1 a 2) / (#de transiciones de 1 a 0) =/.

O sea que se pueden obtener 3 estimaciones de y , una para cada nivel.

Sin embargo, si /(+) es pequeo, P
2
tendr un valor muy pequeo, es
decir el nmero de veces en el nivel 2 es pequeo, y ser prcticamente
imposible de medir. Adems el error tendra un valor grande:
=(nP(1-P))
1/2
.
Para cualquier nmero de canales las limitaciones son las siguientes:
a) resolver los diferentes niveles de corriente
b) conocer el nmero de canales en la membrana
c) la probabilidad de que ocurran 2 transiciones simultneas aumenta
con el nmero de canales.


2.3. Un canal con tres estados con tres niveles de conductancia
Cuando en el parche de membrana hay un canal que tiene 3 estados
presentando 3 niveles de conductancia, el registro se ve como en la figura
A.9.

En este caso, , , a y b se obtienen de las siguientes ecuaciones:

o
=1/,
c2
=1/(+),
c1
=1/a, (#C
2
O)/(#C
2
C
1
) =/b


Figura A.9
Esquema de la actividad de un
canal que tiene tres estados con
tres niveles de conductancia.



67
2.4. Un canal con tres estados con dos niveles de conductancia
En este caso el registro se ver como en la figura A.10.
En el registro se observan periodos de cierre breves y periodos prolongados.
Si esos periodos son muy diferentes se ven como rfagas de actividad.


Figura A.10
Esquema de la actividad de un canal que tiene tres estados con dos niveles de
conductancia.

En este caso:
o
=1/
Pero la distribucin de los tiempos de cierre no es una exponencial simple.

p
1,2
=probabilidad de permanecer en C
1
o C
2
despus de una transicin O
C al tiempo 0
La ecuacin diferencial sera:
dp
1,2
/dt =- p
1,2
P
2
donde, P
2
=a/(a+b) +(1 - a/(a+b))exp(-(a+b)t

La solucin es:
p
1,2
=exp(-(a/(a+b))t - (b/(a+b)
2
)(1 - exp((-a+b)t))) .....................(4)

As, a, b y se obtienen del ajuste de la ecuacin (4).
Si a y b son grandes, la ecuacin se puede reducir a:
p
1,2
=exp(-(a/(a+b))t),
luego:
c
=(a+b)/a, y no hay manera de saber si hay dos estados cerrados.

Si a y b son pequeos se observaran rfagas en el registro, y se pueden
obtener dos distribuciones: una para los tiempos prolongados,
c1
=1/a, y
otra para los tiempos breves,
c2
=1/

b se puede obtener a partir de:
(#C
1
O)/(#C
1
C
2
) =/b
68
La figura A.11 muestra un ejemplo de la cintica de un canal con 3 estados y
dos niveles de conductancia semejante al del esquema de la figura A.10. En
este caso, para los tiempos de apertura se ajust una funcin exponencial
simple a los datos del histograma, mientras que para los tiempos de cierre se
ajust la ecuacin:
F(t) = P
j
(1/
j
)
.
exp(-t/
j
), j =1,2



Figura A.11
Ejemplo de los histogramas de tiempos de apertura y cierre de un canal con tres estados y
dos niveles de conductancia. El histograma de tiempos de apertura se ajust a una
exponencial simple, mientras que para los tiempos de cierre se ajust la suma de dos
exponenciales.

69
AGRADECIMIENTOS

A la Q.F.B. Adriana Hernndez Leal, tcnico acadmico del Centro de
Investigaciones Biomdicas de la Universidad de Colima, por su respaldo en
las actividades de nuestros laboratorios.

A la M. en C. Myrian Velasco Torres, por su participacin en las actividades
de docencia durante los cursos de Excitabilidad y de Biofsica, y por la
discusin crtica de los contenidos.

Al Lic. J uan Carlos Muoz, quien colabor en la elaboracin de las figuras y
a la Lic. Yojana Hernndez Valdivia por la figura de la Portada.

70
LECTURAS RECOMENDADAS

Adelman W.J . Ed. (1975) Biophysics and Physiology of Excitable
Membranes. Van Nostrand Reinhold Co. 509 pp.

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Hanlon M.R. & Wallace B.A. (2002) Structure and function of voltage-
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