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Universidade Federal do Rio de Janeiro

Instituto de Microbiologia Prof. Paulo de Ges


Microbiologia e Imunologia
Ksia Thas Barros dos Santos
Mariana Masello Maia
Nathalia Silveira da Fonseca Ribeiro
Rafael Melo
Yasmin da Silva Fontes
PROTOCOO de Treinamento Cientfico !
Professora Bernadete Tei"eira#
Tema$ Biodiversidade Bacteriana no Cor%o &'mano
Introduo
O cor%o h'mano %oss'i 'm microbiota diversificada# (ntre os micror)anismo
%resente nesta* %odemos destacar a flora bacteriana a +'al vamos est'dar mais
%rof'ndamente# , flora bacteriana normal %ode ser observada atravs de diferentes
mtodos como a Colora-.o de /ram# Neste mtodo a bactria classificada como /ram
0 e /ram 1 * de acordo com a estr't'ra de s'a membrana cel'lar#
2tili3aremos em nosso %rocedimento a colora-.o de /ram %ara tornar %ossvel o
est'do das bactrias encontradas na re)i.o do 'mbi)o#
Se)'ndo 4iri &'lcr 5lder do Pro6eto da Biodiversidade do 2mbi)o5 7O 'mbi)o
%rote)ido* tornando5se 'm ref8)io %ara as bactrias da %ele normal9 * as es%cies mais
detectadas s.o o Staphylococcus epidermidis,e o Micrococcus luteus#
Obetivo
Reali3ar 'm est'do sobre a diversidade bacteriana do 'mbi)o* 'tili3ando a
Colora-.o de /ram#
M!todos
,T(N:;O$ Reali3ar todos os %assos descrito abai"o na 3ona de se)'ran-a do bico de
b'nsen#
5Pre%arar o <)ar san)'e* <)ar chocolate* <)ar sim%les* <)ar manitol e caldo sim%les= e
des%e6ar e des%e6ar em 'm > %lacas de %etri?@ %lacas de <)ar san)'e e 'ma %laca de
cada 'm dos o'tros <)arAe %i%etar o caldo sim%les em 'm t'bo de ensaioB
5es%erar os meios de c'lt'ra end'recerem e formar o meio sClidoB
5com 'm sDab fa3er* fa3er 'm esfre)a-o no 'mbi)oB
52tili3ar o sDab %ara fa3er semead'ra %or es)otamentoE na s'%erfcie das cinco %lacas
de %etri com <)arB
5Fechar e identificar as %lacasB
5Colocar na est'fa d'rante @Fh a GHICB
5 ,%Cs observado o crescimento nas %lacas* isolar as colJnias em 'm t'bo de ensaio
contendo o caldo sim%les ?com o ob6etivo de obter 'ma c'lt'ra %'raA d'rante @Fh a
GHICB
5,%Cs o crescimento das c'lt'ras %'rasB
52tili3ando 'ma al-a de %latina ?flambada ao r'broA* retirar 'ma al+'ota da c'lt'ra 6K
isolada no caldo sim%lesB
5Passar a al-a em 'ma lLmina reali3ando movimentos es%iraisB
5Reali3ar a colora-.o de /ramM nas lLminas com a c'lt'ra %'raB
5(s%era as lLminas secaremB
5Com as lLminas secas* %in)ar 'ma )ota de Cleo de seda e observar no microscC%io ? em
lente de imers.oA#
" Pre#arao de $gar %angue
FCrm'laNProd'tos
Meio comercial$ Blood <)ar Base* Col'mbia <)ar Base* B&! <)ar* M'eller &inton
<)arB
San)'e desfibrinado de carneiro o' coelho$
> ml %ara cada OPP ml de meio base#
%&$ Q*R 0N5 P*@
Procedimentos
Pesar e hidratar o meio conforme instr'-Ses do fabricanteB
(sterili3ar em a'toclaveB
(sfriar a base T 0N5 >PUCB
,dicionar > ml de san)'e desfibrinado de carneiro %ara cada OPP ml de baseB
&omo)enei3ar delicadamente %ara n.o formar bolhas
Pre#arao do $gar c&ocolate
Form'laNProd'tos
Meios comerciais$ B&! <)ar V* Col'mbia <)ar Base* Blood <)ar Base* M'eller &inton
<)ar#
San)'e de cavalo* carneiro o' coelho desfibrinado#
Recomenda5se o 'so da base de B&! <)ar* %or a%resentar melhor crescimento das ce%as
e"i)entes* %rinci%almente ce%as de &aemo%hil's s%%#
Procedimentos
Pesar e hidratar o meio conforme instr'-Ses do fabricanteB
(sterili3ar em a'toclaveB
(sfriar a base T tem%erat'ra de a%ro"imadamente RPUCB
,dicionar > ml de san)'e desfibrinado de cavalo %ara cada OPP ml de baseB
&omo)enei3ar bem at lisar totalmente as hemKcias e o meio a%resentar 'ma cor
castanho esc'ro
?chocolateAB
Wistrib'ir em %lacas de Petri de XP mm de diLmetro#
Pre#arao do $gar nutriente 'caldo sim#les(
Form'laNProd'tos$
Prod'to$ N'triente <)ar
FCrm'la$
Y ("trato de carne G )
Y Pe%tona > )
Y <)ar K)ar O> )
Y <)'a destilada OPPP ml
Y %&$ Q*R 0N5 P*@ Mod !Z 5 >
Procedimentos$
Pesar e hidratar os com%onentesB
F'ndirB
Wistrib'ir G ml %or t'boB
(sterili3ar em a'toclaveB
,%Cs retirar da a'toclave* inclinar os t'bos ainda +'entes %ara +'e solidifi+'em com a
s'%erfcie
em forma de [bico de fla'ta[ ?Ln)'lo de F>UA#
Pre#arao do $gar Manitol
FCrm'laNProd'tos$
)om#osio em g*+,
5Pe%tona Proteose$ OP#PB("trato de Bife$ O#PBCloreto de SCdio$ H>#PBW5Manitol$
OP#PBZermelho Fenol$ P#P@>B,)ar$ O>#P
5%& Final ?a @>UCA$ H#F \ P#@

Procedimentos$
Wissolva OOO )ramas em OPPPml de K)'a destilada# ,+'e-a %ara dissolver o meio
com%letamente# (sterili3ar a'toclavando a O>lbs de %ress.o a O@OUC %or O> min'tos#
Mist'rar bem e %or em %lacas de Petri#
Pre#arao do $gar sim#les
Form'lasNProd'tos$
Completar!!
Procedimentos$
)om#letar--
./!cnica de semeadura #or esgotamento
Materiais
5,l-a de %latina
5Bico de b'nsen
5(st'fa
5ColJnia de Bactria
Procedimentos
5 Pe)'e a al-a do mesmo modo +'e se %e)a 'ma canetaB
5Flambe a al-a bacteriolC)ica* levando5a ao fo)o at +'e o metal se trone r'broB
5Na 3ona de se)'ran-a ?cerca de @Pcm em torno da chamaA* es%ere +'e a al-a esfrieB
5to+'e o material +'e contm micrCbiosB
5Passe a al-a s'avemente sobre o meio de c'lt'ra* fa3endo 'm 3i)53a)* em 'm 8nico
sentido da %laca# Mantendo o mesmo sentido* )ire a %laca e contin'e o 3i)53a)#
5Flambe novamente a al-a* antes de )'ardK5laB
5, %laca de meio de c'lt'ra* assim %rocessada* deve ser )'ardada em tem%erat'ra
ade+'ada* com o f'ndo %ara cima* e dei"ada o tem%o s'ficiente %ara +'e os bactrias se
m'lti%li+'em* formando colJnias#
0)olorao de Gram
Prod'tosNMateriais
5Cristal Zioleta
5Safranina
5<lcool X>] ? o s'ficiente %ara remover o coranteA
5')ol
5^leo de seda
5MicroscC%io
5@ lLminas
5,l-a de %latina
5<)'a
Procedimentos
5Core o esfre)a-o com cristal violeta %or O min#
5Remova o corante com K)'a destilada
5Colo+'e o sol'-.o de l')ol sobre o esfre)a-o d'rante O min#
5Remova a sol'-.o de l')ol com K)'a destilada
5ave o esfre)a-o com Klcool X>] at +'e o Klcool +'e escorre da lLmina fi+'e
trans%arente
5Remova o Klcool X>] com K)'a destiladaB
5,dicione a safranina d'rante F> se)'ndos
5Remova a safranina com K)'a destilada
5(s%ere a lLmina secar#
Materiais
5<)'a destiladaB
5,l-a de %latina
5Bico de b'nsen
5> sDabs
5 > %lacas de %etri
5G t'bos de ensaio
5 (rlenme_er >PP m
5(st'fa
5Bec`er >PP m
5Pissete
5Sol'-.o salinaB
5Balan-aB
5San)'e de carneiro > mB
5(s%Kt'laB
5<)ar baseB
5<)'a destiladaB
Resultados$
,%Cs o es)otamento das bactrias tiradas do 'mbi)o* foi %ossvel observar o
crescimento de tras ti%os diferentes de colJnias# (ssa diversidade de colJnias sC %Jde
ser observada no <)ar san)'e# No <)ar chocolate* ho've crescimento* mas n.o m'ito*
en+'anto +'e no <)ar sim%les ho've %o'co crescimento# , %artir da coleta de colJnias
isoladas da Placa de %etri com <)ar san)'e* foram feitas colora-.o )ram nessas tras
es%cies de bactrias* observando +'e se tratavam de coccus (bbbbbbbbA# We%ois de
isoladas em caldo n'triente* foram novamente s'bimetidas a colora-.o )ram e
observadas em microscC%io #Podemos %erceber a %resen-a de coccus ?bbbbA /rams 0#
')om#letar111(...............
)oncluso,
Referncias Bibliogrfica
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cUmbigo abriga cerca de cem es#!cies diferentes de bact!rias: mostra #es5uisa# O
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