UNI VERSI DADE FEDERAL DA BAHI A

P R- RE I T ORI A DE P E S QUI S A E P S - GRADUAO

P r o g r a ma I n s t i t u c i o n a l d e B o l s a s d e I n i c i a o C i e n t f i c a
PI BI C

Relatrio Final
2011/ 2012
Bolsistas PIBIC

Ttulo do Plano de
Trabalho do Bolsista
Determinao da composio mineral das folhas de
pata de vaca (Bauhinia forficata)
Ttulo do Projeto do
Orientador
Determinao da composio mineral das folhas de
pata de vaca (Bauhinia forficata)
Nome do Aluno Raineldes Avelino Cruz Junior
Nome do Orientador

Neyla Margarida Lpo de Araujo
Grupo de Pesquisa
(opcional)

Grupo de pesquisa em Qumica e Quimiometria
(GRPQQ)
Palavras Chave
(at 3)
Bahunia, ICP- OES, Metais e no Metais
Perodo de Vigncia

Novembro 2011 a julho 2012


Resumo
















No presente projeto, proposto o desenvolvimento de procedimentos analticos para
avaliar a composio mineral das folhas de pata de vaca (Bauhinia forficata) e comparar o
teor de minerais para os diferentes cultivos em municpios do Estado da Bahia.
As folhas, caules e razes das espcies Bauhinia, so amplamente utilizadas no Brasil e em
outros pases na forma de chs e outras preparaes fitoterpicas para o tratamento de vrias
enfermidades, principalmente infeces, processos dolorosos e diabetes.
A tcnica analtica de medida utilizada foi a espectrofotometria de emisso ptica com
plasma indutivamente acoplado (ICP OES).
As variveis associadas aos mtodos analticos foram otimizadas usando metodologia
multivariada, mediante uso de planejamentos fatoriais para avaliao da significncia das
variveis e, tcnicas baseadas em metodologias de superfcie de repostas para determinao
das condies experimentais timas.








1. Introduo

Nos ltimos anos, tem-se verificado um grande aumento nos estudos que
comprovam o que se conhece empiricamente, visto que a medicina popular rica em
exemplos de plantas utilizadas para diversos fins, que substituem, muitas vezes, a
prescrio mdica [4-5]. Acredita-se que cerca de 80% da populao mundial usa as
plantas como primeiro recurso teraputico [6,7].
Entre as inmeras espcies vegetais de interesse medicinal, encontram-se as
plantas do gnero Bauhinia, pertencentes famlia Leguminosae, as quais so
encontradas principalmente nas reas tropicais do planeta, compreendendo
aproximadamente 300 espcies. Muitas destas plantas so usadas como remdio na
medicina popular em vrias regies do mundo, incluindo a frica, sia e Amrica
Central e do Sul [8]. Os estudos fitoqumicos e farmacolgicos realizados com estas
plantas indicam que as mesmas so constitudas principalmente de glicosdios,
esterodicos, triterpenos, lactonas e flavonides [5].
O uso medicinal das plantas pertencentes ao gnero Bauhinia pela populao de
diferentes partes do mundo tem encontrado respaldo nos estudos cientficos, que
comprovam a eficcia destas plantas em vrios modelos experimentais. Neste contexto,
alguns efeitos biolgicos ou farmacolgicos, como antifngicos, antibacterianos,
analgsicos, antiinflamatrios e especialmente antidiabticos, so relatados na literatura,
comprovando e justificando o uso destas espcies na medicina popular [9].
No Brasil, as plantas do gnero Bauhinia so conhecidas como Pata-de-vaca
ou Unha-de-boi. As folhas, caules e razes das espcies de Bauhinia, especialmente B.
manca, B. rufescens, B. forficata, B. cheitantha e B. splendens, so amplamente
utilizadas no Brasil e em outros pases em forma de chs e outras preparaes
fitoterpicas para o tratamento de vrias enfermidades, principalmente infeces,
processos dolorosos e diabetes [8,10].






2. Materiais e mtodos


2.1.1. Reagentes e Solues
Todas as solues foram preparadas com reagentes de grau analtico e gua ultrapura,
com resistividade especfica de 18 M cm
-1
, de um sistema de purificao Millipore
(Milli-Q, Millipore, Bedford, MA, EUA). Todas as vidrarias e frascos foram
previamente descontaminados em banho cido contendo HNO
3
10% (v v
-1
), por no
mnimo 24 h e lavadas com gua ultrapura antes do uso.
Na execuo dos experimentos, os seguintes reagentes foram utilizados: cido ntrico
65% (m/m) (Merck, Alemanha), perxido de hidrognio 30% (v v
-1
) (Merck,
Alemanha).

2.1.2. Amostras
Os experimentos foram executados utilizando amostras de Folha de Pata de vaca,
disponveis em feiras comerciais nas cidades de Salvador, Cruz das Almas, Santo
Amaro,Alagoinhas, Dias D`Vila, Simes Filho e Lauro de Freitas na Bahia.
O material de referncia certificado utilizados nos estudos de validao foi o NIST
1573a (Tomato Leaves).

2.1.3 Instrumentao
O procedimento de digesto foi feito atravs do bloco digestor, modelo (TECNAL
modelo TE 040/25), esse sistema permite o acoplamento de diversas amostras
simultaneamente.
Para a deteco dos analitos foi empregado um Espectrmetro de emisso tica com
plasma de argnio indutivamente acoplado (ICP OES) simultneo com viso axial e
detector de estado slido VISTA PRO (Varian, Mulgrave, Austrlia). O sistema ptico
do ICP OES foi calibrado com soluo de referncia multielementar e o alinhamento da
tocha foi realizado com uma soluo de Mn 5,0 mg L
-1
.

2.2 Preparo das amostras
As amostras secas foram modas em moinho de bolas e em seguida pesadas em balana
analtica, para posteriormente serem colocadas em tubo digestor para serem submetidas
digesto em bloco de aquecimento (TECNAL modelo TE 040/25) 150 C, fazendo
uso de dedo frio para promover o refluxo do sistema minimizando as perdas por
volatilidade, durante duas horas. Os reagentes utilizados foram: 3 ml de cido ntrico e 2
ml de perxido de hidrognio 30% (v/v) (Merck). Os digeridos foram transferidos para
tubos cnicos e o volume foi completado para 15 ml com gua ultra pura obtida atravs
de um sistema de purificao MilliQ. As determinaes analticas foram realizadas
empregando a tcnica de ICP OES.



.
3. Resultados

Nesta etapa foi realizada a digesto da amostra em bloco digestor conforme
procedimento previamente descrito com posterior anlise das solues dos digeridos
empregando ICP OES para a determinao da concentrao dos analitos, os resultados
obtidos so mostrados nas tabelas abaixo.


Tabela 1: Resultados obtidos para os analitos em mg/g para as
amostras adquiridas em Salvador
Cu Fe Mg Mn Na P Zn
Mdia 0,0083 0,331 <0,06 0,111 0,79 1,64 0,0282
Desvio 0,0001 0,003 --- 0,002 0,03 0,05 0,0002


Tabela 2 : Resultados obtidos para os analitos em mg/g para as
amostras adquiridas Lauro de freitas
Cu Fe Mg Mn Na P Zn
Mdia 0,0051 0,23 1,3 0,29 0,28 0,7 0,14
Desvio 0,0002 0,09 0,4 0,06 0,01 0,2 0,05


Tabela 3: Resultados obtidos para os analitos em mg/g para as
amostras adquiridas em Alagoinhas
Cu Fe Mg Mn Na P Zn
Mdia 0,005 0,03 <0,06 0,16 0,16 0,55 0,012
Desvio 0,001 0,01 --- 0,02 0,05 0,07 0,003


Tabela 4 : Resultados obtidos para os analitos em mg/g para as
amostras adquiridas em Dias dVila
Cu Fe Mg Mn Na P Zn
Mdia 0,007 0,04 <0,06 0,9 0,1 0,9 0,011
Desvio 0,005 0,03 --- 0,6 0,1 0,4 0,009




Tabela 5 : Resultados obtidos para os analitos em mg/g para as
amostras adquiridas em Simes filho
Cu Fe Mg Mn Na P Zn
Mdia 0,0063 0,1 0,90 0,27 0,16 0,64 0,012
Desvio 0,0007 0,1 0,08 0,03 0,08 0,06 0,002


Tabela 6: Resultados obtidos para os analitos em mg/g para as
amostras adquiridas em Cruz das Almas
Cu Fe Mg Mn Na P Zn
Mdia 0,011 0,042 1,33 0,23 0,32 0,61 0,010
Desvio 0,002 0,007 0,10 0,02 0,04 0,07 0,003

Tabela 7: Resultados obtidos para os analitos em mg/g para as
amostras adquiridas em Santo Amaro
Cu Fe Mg Mn Na P Zn
Mdia 0,01 0,042 <0,06 -- 0,321 0,61 0,017
Desvio 0,01 0,003 -- -- 0,004 0,07 0,002

Tabela 8: Resultados obtidos para os analitos em mg/g para as
amostras adquiridas em Aracaj.
Cu Fe Mg Mn Na P Zn
Mdia 0,0097 0,059 <0,06 0,262 0,240 0,83 0,0187
Desvio 0,0001 0,001 -- 0,004 0,004 0,01 0,0006

Tabela 9: Resultados obtidos para os analitos em mg/g para as
amostras adquiridas em Feira de Santana
Cu Fe Mg Mn Na P Zn
Mdia 0,0052 0,19 <0,06 0,069 0,46 1,06 0,0179
Desvio 0,0007 0,01 0,004 0,02 0,05 0,0021



Analise dos Grficos de pesos e escores

Os dados foram pr-processados atravs do auto-escalonamento e as amostras foram
identificadas da seguinte forma: SSA= Salvador, CDA= Cruz das Almas, LFA= Lauro
de Freitas, SAM= Santo Amaro, SFI= Simes Filho, DDA= Dias Dvila, ALG=
Alagoinhas, onde atravs das tabelas podemos identificar os mximos e os mnimos dos
minerais analisado no mtodo.
Atravs da analise da figura 1,a PC2 com os elementos Na e Mg anticorrelacionados,
identificando dois tipos de grupos os da folhas in natura e da ensacadas independente
das localizaes das amostras, sendo que as in natura apresentam um maior teor de
sdio e menores teores de Mg devido a possuir escores mais positivos, j nas ensacadas
elas apresentam escores mais positivos para Mg e menor teor para sdio.



Projection of the variables on the factor-plane ( 1 x 2)
Active
Cu
Fe
Mg
Mn
Na
P
Zn
-1,0 -0,5 0,0 0,5 1,0
Factor 1 : 30,22%
-1,0
-0,5
0,0
0,5
1,0
F
a
c
t
o
r

2

:

2
8
,
1
5
%
Active
ACJ ArCJ
ACJ
dvila dvila
SF SF
SAM 2
SAM2
SAM2
CIA
CIA
CIA
CMC
CMC
CMC
CRUZ
CRUZ CRUZ
LF
LF
LF
ALG1
ALG1 ALG2 ALG2
SAM
SAM SAM
FSA
FSA
FSA
SF*
SF*
SF*
-2,0 -1,5 -1,0 -0,5 0,0 0,5 1,0 1,5 2,0
Factor 1: 30,22%
-2,5
-2,0
-1,5
-1,0
-0,5
0,0
0,5
1,0
1,5
2,0
F
a
c
t
o
r

2
:

2
8
,
1
5
%


Figura 1: Grficos de pesos e escores



Validao do mtodo

O material de referncia certificado utilizado nos estudos de validao foi o MRC
NIST 8433 (Corn bran, Gaithersburg, Maryland, USA). A tabela com os resultados obtidos
para Cu, Fe, Mn, Na, P e Zn so mostradas abaixo:


Elementos Material de Referencia Resultado Obtido
Cu 4,70 0,14 4,69 0,02
Fe 368 7 368 9
Mn 246 8 248 6
Na 136 4 139 7
P 0,216 0,004 0,218 0,005
Zn 30,9 0,7 30,4 0,8



Limites de deteco e quantificao

Os clculos do limite de deteco (LOD) e limite de quantificao (LOQ) podem
ser efetuados como descrito nas equaes 1 e 2 (MONTASER e GOLIGHTLY, 1996).


LOD = 3.RSDbco.BEC / 100 (Eq. 1)
LOQ = 3.LOD (Eq. 2)

Onde:
BEC = concentrao equivalente de background, calculada pela razo entre a mdia das
intensidades do branco e o coeficiente angular da curva.

RSDbco = coeficiente angular da curva analtica de calibrao

Os resultados obtidos para os limites de deteco e quantificao para os elementos Cu,
Fe, Mg, Mn, Na e Zn so mostrados na Tabela 7.


Tabela 7. Estimativa dos limites e deteco e quantificao para ICP OES.

Analitos LOD ( mg.L
-1
) LOQ ( mg.L
-1
)

Cu 0,0063 0,0211

Fe 0.0078 0,0261

Mg 0,0180 0,0600

Mn 0,0010 0,0034

Na 0,0806 0,2688

Zn 0,0094 0,0315




4. Discusso


As amostras de folhas avaliadas no presente trabalho foram previamente
identificadas no instituto de biologia da Universidade Federal da Bahia, uma vez que
existem vrios tipos de Bauhinia. A espcie utilizada no estudo do tipo Bauhinia
Forficata.
O mtodo de digesto apresentou resultados adequados considerando o mtodo de
decomposio empregado para as amostras das Folhas Pata de Vaca. Alm disso, foi
possvel decompor vrias amostras, simultaneamente. Este mtodo de decomposio foi
utilizado para a determinao de Cu, Mg, Mn, Fe,Na, P e Zn nas amostras por ICP OES.
Para a validao do mtodo foi empregado o material de referncia certificado MRC
NIST 8433. Os resultados obtidos para os elementos Cu, Fe, Mn, Na, P e Zn empregando o
mtodo proposto foram comparados com os valores certificados, no sendo constatadas
diferenas significativas empregando teste t para 95% de confiana.
Os valores obtidos para os limites de deteco e quantificao dos analitos definem
a boa sensibilidade associada ao mtodo proposto.




5. Referncias bibliogrficas (mximo 15)

1. Ugaz, O. L.; Investigacin Fitoqumica; Fondo Editorial. Lima: Pontificia
Universidad Catlica del Peru, Lima: Peru, 1994.

2. Cechinel Filho, V.; Yunes, R. A.; Quim. Nova 1998, 21, 99.

3. Hamburger, M.; Hostettmann, K.; Phytochemistry 1991, 30, 3864.

4. Yunes, R.A.; Pedrosa, R.C.; Cechinel Filho, V.; Quim. Nova 2001, 24, 147.

5. Cechinel Filho, V.; Quim. Nova 2000, 23, 680.

6. Yamada, C.S.B.; Racine 1998, 2, 50.

7. Cragg, G. M.; Newman, D. J.; Snader, K.M.; J. Nat. Prod. 1997, 60, 52.

8. Achenbach, H.; Stocker, M.; Constenla, M. A. F.; Phytochemistry 1988,
27, 1835.
9. Silva, K. L.; Cechinel Filho, V.; Quim. Nova 2002, 25, 449.

10. Teske, M; Trentini, A..M. M.; Compndio de Fitoterapia; Herbarium Lab.
Botnico, Curitiba: Paran, 1995.












Relatrio Final Parte II

1. Atividades realizadas no perodo

Determinao da composio mineral na folha pata de vaca por ICP-OES





2. Participao em reunies cientficas e publicaes

Apresentao do trabalho em forma de pstern no III Workshop de
Quimiometria, de 25 a 27 de abril de 2012, Arembepe, Camaari - Ba

Trabalho aceito para apresentao em forma de pster V Congresso
Iberoamericano de Qumica Analtica (CIAQA 2012) no perodo de 07 a 10 de
outubro de 2012 em Montevidu- Uruguai