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1.

Introduccin

Al igual que las disciplinas experimentales que han surgido como rama comn que es la
biologa, tiene una historia propia construida a travs de observaciones, experiencias, pruebas
y teoras. Se inici con el estudio de los procesos de fermentacin y de putrefaccin y Antoine-
Laurent Lavoiser (1743- 1794) fue el primero en plantear sobre bases cuantitativas el proceso
de la fermentacin alcohlica al observar una relacin entre cantidad de azcar presente y
productos formados durante el proceso. Sostuvo que la fermentacin poda ser considerada
como una reaccin qumica cualquiera. No obstante Pasteur demostr pronto que los procesos
de putrefaccin y fermentacin eran provocados por la presencia de bacterias y levadura.

2. Evolucion de la enzimologia

Si bien algunos qumicos consideraron esos procesos como metamorfosis de sustancias que
provocaban excitaciones en otras que estaban cerca de ellas, esta cuestin fue, como ya se ha
dicho, definitivamente resuelta por Buchner hacia finales del siglo XIX; exprimiendo masas
celulares de Saccharomyces cerevisie obtuvo un liquido sin clulas, capaz de producir la
mismas reacciones qumicas que se obtenan utilizando la suspensin de clulas, es decir, la
transformacin del azcar en alcohol y anhdrido carbnico. Por tanto, de la levadura se poda
extraer una sustancia capaz de regular un proceso qumico concreto.

Esto obligo a replantear las investigaciones contrarias a la teora de que el proceso digestivo
fuese debido a la trituracin de la s sustancias digeridas hasta el punto de reducirlas a
partculas lo suficientemente finas para poder ser asimiladas. En efecto, en el siglo XVIII R.A de
Reaumur (1683- 1757) haciendo ingerir a un halcn una cpsula de hierro agujereada, que
contena alimento, observ que este qued completamente disuelto por los jugos gstricos y
que, por tanto, no era, molturado de modo mecnico por la robusta musculatura del robusto
animal, pues la cpsula quedo intacta.

Mas adelante se constato que el almidn era degradado a monosacrido y disacrido por la
accin del jugo salival (ptialina) y se describi la presencia de la pepsina en el jugo gstrico.
Posteriormente, fueron aisladas sustancias de carcter fermentativo a partir de numerosas
especies vegetales. Se observo que el extracto de algunas races tenan capacidad para
modificar el color azul de determinadas sustancias y que el extracto de trigo era capaz de
transformar el almidn en disacridos y dextrina.

La va para el estudio de esas sustancias estaba ya abierta. Jons Jacob Berzelius (1779 1848)
interpreto su accin como si se tratase de unos catalizadores que favorecan determinada
reaccin qumica sin ser destruidos y sin aparecer en los productos finales. Richard Kuhne
(1900-1967) fue el primero en dar a tales sustancias el nombre enzimas, tomado del griego,
que significa literalmente "en la levadura".

3. Las enzimas

La Enzima Como Unidad Fundamental De Vida

Cada clula y cada tejido tienen su actividad propia, lo que comporta continuos cambios en su
estado bioqumico, en la base de la cual estn las enzimas, que tienen el poder de catalizar,
facilitar, y agilizar determinados procesos sintticos y analticos. Los propios genes son
reguladores de la produccin de las enzimas; por tanto, genes y enzimas pueden considerados
como las unidades fundamentales de la vida.

Este concepto poco difundido casi hasta el siglo XX, se ha desarrollado y concretado cada vez
mas, y constituye un componente esencial de diversas disciplinas: la microbiologa, la
fisiologa, la bioqumica, la inmunologa y la taxonoma, formando adems parte del campo
aplicado, en gran variedad de industrias. El rasgo particular de las enzimas es que pueden
catalizar procesos qumicos a baja temperatura, compatible con la propia vida, sin el empleo
de sustancias lesivas para los tejidos. La vida es, en sntesis, una cadena de procesos
enzimticos, desde aquellos que tienen por sustratos los materiales mas simples, como el agua
(H2O) y el anhdrido carbnico (CO2), presentes en los vegetales para la formacin de hidratos
de carbono, hasta los mas complicados que utilizan sustratos muy complejos.

La formacin de los prtidos, los glcidos y los lpidos es un ejemplo tpico: Son a la vez
degradados y reconstruidos por otras reacciones enzimticas, produciendo energa a una
velocidad adecuada para el organismo, sin el gasto energtico que exigen los mtodos
qumicos de laboratorio.

4. Importancia biomedica de las enzimas

Sin enzimas, no sera posible la vida que conocemos. Igual que la biocatlisis que regula la
velocidad a la cual tienen lugar los procesos fisiolgicos, las enzimas llevan a cabo funciones
definitivos relacionadas con salud y la enfermedad. En tanto que, en la salud todos los
procesos fisiolgicos ocurren de una manera ordenada y se conserva la homeostasis, durante
los estados patolgicos, esta ltima puede ser perturbada de manera profunda. Por ejemplo,
el dao tisular grave que caracteriza a la cirrosis heptica pueden deteriorar de manera
notable la propiedad de las clulas para producir enzimas que catalizan procesos metablicos
claves como la sntesis de urea. La incapacidad celular para convertir el amoniaco txico a urea
no txica es seguida por intoxicacin con amoniaco y por ultimo coma heptico. Un conjunto
de enfermedades genticas raras, pero con frecuencia debilitantes y a menudo mortales,
proporciona otros ejemplos dramticos de las drsticas consecuencias fisiolgicas que pueden
seguir al deterioro de la actividad enzimtica, inclusive de una sola enzima.

Despus del dao tisular grave (por ejemplo, infarto del miocardio o pulmonar, trituracin de
un miembro) o siguiendo a multiplicacin celular descontrolada (por ejemplo, carcionoma
prostatico), las enzimas propias de tejidos especficos pasan a la sangre. Por lo tanto, la
determinacion de estas enzimas intracelulares en el suero sanguineo proporciona a los
medicos informacion valiosa para el diagnostico y el pronostico.

5. Caracteristicas de las enzimas

Desde el punto de vista qumico, las enzimas estn formadas de carbono (C), Hidrgeno (H),
oxigeno (O), Nitrgeno (Ni), y Azufre (S) combinados, pero siempre con peso molecular
bastante elevado y comn propiedades catlicas especificas. Su importancia es tal que puede
considerarse la vida como un "orden sistemtico de enzimas funcionales". Cuando este orden
y su sistema funcional son alterados de algn modo, cada organismo sufre mas o menos
gravemente y el trastorno puede ser motivado tanto por la falta de accin como por un exceso
de actividad de enzima.

Las enzimas son catalizadores de naturaleza protenica que regulan la velocidad a la cual se
realizan los procesos fisiologicos, producidos por los organismos vivos. En consecuencia, las
deficiencias en la funcion enzimatica causan patologias.

Las enzimas, en los sistemas biolgicos constituyen las bases de las complejas y variadas
reacciones que caracterizan los fenmenos vitales. La fijacin de la energa solar y la sntesis de
sustancias alimenticias llevadas a cabo por los vegetales dependen de las enzimas presentes
en las plantas. Los animales, a su vez, estn dotados de las enzimas que les permiten
aprovechar los alimentos con fines energticos o estructurales; las funciones del metabolismo
interno y de la vida de relacin, como la locomocin, la excitabilidad, la irritabilidad, la divisin
celular, la reproduccin, etc. Estn regidas por la actividad de innumerables enzimas
responsables de que las reacciones se lleven a cabo en condiciones favorables para el
individuo, sin liberaciones bruscas de energa a temperaturas fijas en un medio de pH,
concentracin salina, etc.; prcticamente constante.

A diferencia de un catalizador inorgnico que interviene en numerosas reacciones las enzimas
producidas por los organismos vivos habitualmente solo catalizan un tipo de reaccin o solo
una reaccin determinada; la especificidad de las enzimas es tan marcadas que en general
actan exclusivamente sobre sustancias que tienen una configuracin precisa; por ejemplo, si
solo atacan a los aminocidos que tienen su carbono a , asimtrico, con estructura L-, no
muestran la menor actividad sobre formas idnticas de dichos aminocidos, pero que sean del
tipo D-.

En los sistemas biolgicos se llevan a cabo diversas reacciones a partir de la misma sustancia;
por ejemplo algunos microorganismos convierten la glucosa en alcohol y bixido de carbono,
al paso que otros grmenes la convierten en cido lctico o cido pirvico o acetaldehido. Esto
quiere decir que la glucosa puede descomponerse en distintos productos y aunque todas las
posibilidades son tericas y prcticamente posibles la presencia de ciertas enzimas favorece
uno de los caminos que llevan a la acumulacin de determinados compuestos.

Las enzimas, por lo tanto, se consideran como catalizadores altamente especficos que:

Modifican la velocidad de los cambios promovidos por ellas.
Determinan que sustancias particulares, de preferencia a otras distintas son las que van a
sufrir los cambios.
Impulsan dentro de los distintos cambios posibles que pueda seguir una sustancia, cual de
ellos en especial, ser el utilizado.
Las enzimas representan las sustancias encargadas de graduar la velocidad de una reaccin
determinada en el interior de las clulas; como en las diversas clulas se realizan infinidad de
reacciones, ya que en una de ellas se encuentran varios miles de sustancias, se deduce,
tambin, la presencia de varios miles de enzimas. Es posible, por lo tanto, que la mayor parte
de esta estructura protenica celular est formada por enzimas, encargadas de las diversas
funciones de sntesis, degradacin, oxidacin, etc. caractersticas de la actividad vital de los
distintos organismos.

6. La estructura enzimtica

Por su estructura y composicin qumica puede afirmarse que el origen de las enzimas esta
vinculando al origen de las sustancias proteicas. Al hablar del origen de la vida se ha citado el
xito de los experimentos realizados en el laboratorio para la produccin de aminocidos;
estos aminocidos son los que precisamente constituyen la base del edificio proteico. Tambin
en el laboratorio se ha intentado la sntesis de protenas a partir de aminocidos.

La sede de las enzimas es el citoplasma. Los cloroplastos vegetales contienen una amplia gama
enzimas encargadas de la funcin cloroflica, proceso que a travs de reacciones qumicas
complejas y encadenadas transforman compuestos inorgnicos, como el agua, y el anhdrido
carbnico, en sustancias complejas adecuadas para ser entre otras cosas el alimento
fundamental de los animales.

En las mitocondrias existe un sistema de transporte de electrones que determinan importantes
fenmenos de oxidorreduccin, durante los cuales se forman notables cantidades de ATP, que
es un compuesto altamente energtico del que depende la mayor parte de metabolismo, y
coma, por tanto el trabajo de las clulas; en las mitocondrias se produce el metabolismo
enzimtico de los cidos grasos, los cuales son en parte elaborados tambin en el citoplasma.

En los ribosomas tiene lugar concretamente todas la s sntesis de las sustancias proteicas,
mientras que en los lisosomas se producen enzimas hidrolticos cuya misin escindir, con la
intervencin del agua, molculas grandes en otras menores, que pueden a su vez ser utilizadas
por las clulas; en cambio, las enzimas glucolticos estn difundidos en el citoplasma.

La localizacin de las sedes de las distintas operaciones enzimticas antes mencionadas ha sido
posible a travs del sistema de ruptura de las clulas y de la separacin de los distintos
componentes mediante centrifugacin diferencial del homogeneizado de estas la ruptura
celular y la subdivisin de los componentes subcelulares se realizan actualmente utilizando los
tejidos, por ejemplo con saltos bruscos desde temperaturas inferiores a 0 C hasta
temperaturas mas elevadas con cambios de presin osmtica o mediante ultrasonidos.

7. Naturaleza qumica de las enzimas

Existen numerosas razones para afirmar que las enzimas son proteinas. La

ms importantes son las siguientes:

a.El anlisis de las enzimas obtenidas en forma ms pura, criatalizada, demuestra que son
protenas.
b.Las enzimas son inactivadas a altas temperaturas y, en geeral, la cintica de la
desnaturalizacin trmica de las enzimas da resultados muy parecidos a los de la
desnaturalizacin trmica de las protenas; por ejemplo el Q10 de la mayora de las reacciones
qumicas es de 2 a 3, y, en el casod e las enzimas, a temperaturas elevadas, alrededor de 60 a
70 C, la actividad neta aumeta varios cientos, como sucede con la velocidad de la
desnaturalizacin trmica de las protenas.
c.Las enzimas son activadas en unas zona muy restringida de pH, y presenta un punto ptimo
de ph donde su actividad es mayor. Las protenas en su punto isoelctrico, muestran
propiedades parecidas desde el punto de vista de viscosidad, solubilidad, difucin, etc., que
resulta del todo similares a las propiedades de este tipo que muestran las enzimas.
d.Todos los agentes que desnaturalizan a las protenas tambin destruyen o inactivan a las
enzimas, ya sea el calor, los cidos fuertes, o los metales pesados que puedesn combinarse con
ellas.
e.Los problemas de solubilidad y de precipitacin son comunes a las protenas y las enzimas;
en general, son solubles en agua o soluciones salinas, insolubles en alcohol, precipitan con
determinadas concentraciones de sales neutras, etc.
8. Composicin qumica de las enzimas

Los conocimientos sobre la composicin qumica de las enzimas constituyeron materia de
numerosas controversias hasta 1926, cuando J.B Sumner (1887-1955) consigui cristalizar la
ureasa, enzima que transforma la urea en anhdrido carbonico y amoniaco, y demostrar que
era una sustancia proteica.

A, partir de entonces fueron aisladas otras enzimas en forma pura, cristalina, y el anlisis
demostraba siempre la presencia de una proteina, simple o conjugada. Cuando los analisi
qumicos demuestran que la enzima es una protena conjugada, pueden distinguirse en el dos
partes bien diferenciadas:

El grupo prosteico (Coenzima)
La proteina (Apoenzima)
En algunas enzimas oxidantes fue observada la presencia de la promoporteinas, en las cuales
el grupo prosptico esta representado por un compuesto que contiene Fe y otro elemento, el
cual desmpea un papel importante en la combinacin de la proteina con el sustrato; otras
veces este grupo prosttico es derivada de vitaminas (como la vitamina B); 4en muchos casos
resulta facil de separar de la molcula proteica. No obstante una vez separadas, las dos
unidades no muestran actividad enzimtico; por tanto el grupo proteico (coenzima) y el grupo
proteico (apoenzima) han de estar ntimamente ligados entre si para ser operativos. Por
consiguiente, de las enzimas pueden distinguirse los formados por:

Solo protenas, que difieren entre si por la secuencia con que los aminocidos estn
combinados, como la ureasa y las enzimas digestivas (la pepsina y la tripsina)
Los conjugados, separados en dos entidades qumicas bien definidas: la coenzima y la
apoenzima.
Despus del descubrimiento de Sumner, el numero de la enzimas y el estudio de sus
actividades qumicas proporcionaron un notable impulso en la enzimologa, y la gran cantidad
de las enzimas que rpidamente se acumulaban determinaron la necesidad de utilizar una
clasificacin o nomenclatura para evitar errores y facilitar la comprensin de futuros
investigadores.

9. Nomenclatura y clasificacion de las enzimas

Cien aos atrs solo se conocian enzimas, muchas de estas, catalizaban la hidrlisis de enlaces
covalentes. Algunas enzimas, de manera especial las que fueron descubiertas en un principio,
recibieron nombres ligados mas bien a su sitio de procedencia anatmica que no siguen
ninguna regla ni sistema; tal es el caso de la ptialina de la saliva, que ataca al almidn de la
pepsina del estmago y de la tripsina del pncreas, que atacan protenas; de la renina, que
cuagula la leche; de la papaina, enzima proteoltica que se encuentra en la papaya y de las
catepsinas, tambin proteasas, que se encuentran en las clulas. Las enzimas relacionadas con
la cuagulacin de la sangre, como son la trombina, la plasmina, el plasmingeno, etc. reciben
tambin nombres sistematizados.

Al descrubir nuevas enzimas y proceder a su caracterizacin estricta se aplicaron reglas de
nomenclatura basadas en el nombre del sustrato atacado, o en el tipo general de sustrato, o
en la reaccin catalizada y se ha aadido convencionalmente, la terminacin -asa. Por ejemplo:
las lipasas (hidrolizan lipidos o grasas), las amilasas (hidrolizan almidon), las proteasas
(hidrolizan proteinas), las esterasas (basado en la unin general de tipo ster presentes en
muchas sustancias), colesterol estrerasa (si la esterasa es especfica de los esteres de
colesterol) y acetilcolina esterasa (si la estersa de la acetilcolina). Otros ejemplos: Las
fosfatasas son enzimas que atacan las uniones ster, pero en este caso, toman su nombre del
grupo vecino a la unin que van a atacar, de manera que se denominan fosfatasas (cuando
quitan una molcula de monofosfato), pirofosfatasas (cuando quitan el cido fosfrico como
esteres dobles (pirofosfatos), o triples, etc.) De la misma manera, las carbohidrasas se
denominan as genericamente, pero pueden comprender enzimas con nombres proveniente
del sustrato particular sobre el que actuan como la amilasa que ataca al almidn y la celulasa
que acta sobre la celulosa y, en otras ocaciones, se denominan de acuerdo con la unin
atacada, como la b -glucosidasa que acta sobre las uniones b -glucosdicas. Los ejemplos se
pueden extender a todos los terrenos de la actividad enzimtica, como en las enzimas
proteolticas, las fosforilasas, las nucleasas, etc.

Esta manera de llamarlas, se demostro que era inadecuada porque al descubrirse varias
enzimas, notaron que varias enzimas catalizaban reacciones diferentes del mismo sustrato, por
ejemplo, oxidacion o reduccion de la funcion alcohol de un azucar.

Aunque el sufijo asa continua en uso; actualmente, al nombrar a las enzimas, se enfatiza el
tipo de reaccion catalizada. Por ejemplo: las hidrogenasas catalizan la eliminacion de
hidrogeno y las transferasas, reacciones de transferencia de grupo. Con el descubrimiento de
mas y mas enzimas, surgieron ambiguedades y con frecuencia no estaba claro cual era la
enzima que un investigador deseaba estudiar. Para remediar esta deficiencia, la Comisin para
el estudio de las enzimas, que constituye con respecto a los sistemas anteriores un punto de
vista ms uniforme, preciso y descriptivo; esta formada por la Union Internacional de
Bioquimica (IUB) adopto, en 1964, un sistema complejo pero inequivoco de la nomenglatura
enzimatica basado en el mecanismo de reaccion.

El sistema se basa en la reaccin qumica catalizada que es la propiedad especfica que
caracteriza a cada enzima las cuales se agrupan en clases, porque catalizan procesos
semejantes, y en subclases que especifican con mayor exactitud la reaccin particular
considerada. En general, las enzimas reciben un nombre de acuerdo con el sustrato o los
sustratos que participan en la reaccin seguido por el tipo de reaccin catalizada y, por fin, la
terminacin -asa. A menudo los nombres as obtenidos resultan largos y complejos, por lo que
es muy dificil que en la prctica se pueda excluir el uso de los nombres triviales, consagrados
por la costumbre. Sin embargo, con fines de sistematizacin, se reconoce la necesidad de
aceptar el nuevo sistema.

Aunque su claridad y carencia de ambigedad recomiendan al sistema de nomenglatura IUB
para trabajos de investigacion, nombres mas ambiguos, pero basante mas cortos persisten en
libros de texto y en el laboratorio clinico. Por esta razon, a continuacion solo se presenta
principios generales del sistema IUB:

1.Las reacciones y las enzimas que las catalizan se dividen en 6 clases principales, cada una con
4 a 13 subclases.
2.El nombre de la enzima tiene 2 partes: la primera es el nombre del o los sustratos; la
segunda, con terminacion asa, indica el tipo de reaccion catalizada.
3.Informacion adicional, si es necesario aclarar la reaccion, puede seguir el parentesis. Por
ejemplo: la enzima que cataliza L-malato + NAD= = piruvato + CO2 NADH + H= , se denomina
como 1.1.1.37 L-malato:NAD+ oxidorreductasa (descarboxilante).
4.Cada enzima tiene un numero clave (E.C.) que caracteriza al tipo de reaccion segn la clase
(primer digito), subclase (segundo digito) y subclase (tercer digito). El cuarto digito es para la
enzima especifica. Asi, E.C. 2.7.1.1 denota la clase 2 (una transferasa), subclase 7 (transferencia
de fosfato), sub-clase 1 (una funcion alcohol como aceptor de fosfato). El ultimo digito denota
a la enzima hexocinasa o ATP: D-hexosa-6-fosforotransferasa, enzima que cataliza la
transferencia de fosfato desde el ATP al grupo hidroxilo de carbono 6 de la glucosa.
Al final de sus y trabajos, clasifico las enzimas en seis grupos principales, correspondientes por
sus trminos a las raciones que cada enzima ejerce sobre el sustrato. Estos grupos se
subdividen en otro, segn el tipo de sustrato y los tomos concretos que son sensibles a sus
acciones. Estos seis grupos son los siguientes:

1.Oxidoreductasas
2.Transferasas
3.Hidrolasas
4.Isomerasa
5.Liasas
1.Oxido-reductasas: Son las enzimas relacionadas con las oxidaciones y las reducciones
biolgicas que intervienen de modo fundamental en los procesos de respiracin y
fermentacin. Las oxidoreductasas son importantes a nivel de algunas cadenas metablicas,
como la escisin enzimtica de la glucosa, fabricando tambin el ATP, verdadero almacn de
energa. Extrayendo dos tomos de hidrgeno, catalizan las oxidaciones de muchas molculas
orgnicas presentes en el protoplasma; los tomos de hidrgeno tomados del sustrato son
cedidos a algn captor.

En esta clase se encuentran las siguientes subclases principales: Deshidrogenasas y oxidasas.
Son ms de un centenar de enzimas en cuyos sistemas actan como donadores, alcoholes,
oxcidos aldehidos, cetonas, aminocidos, DPNH2, TPNH2, y muchos otros compuestos y,
como receptores, las propias coenzimas DPN y TPN, citocromos, O2, etc.

2.Las Transferasas: Estas enzimas catalizan la transferencia de una parte de la molcula
(dadora) a otra (aceptora). Su clasificacin se basa en la naturaleza qumica del sustrato
atacado y en la del aceptor. Tambin este grupo de enzimas actan sobre los sustratos mas
diversos, transfiriendo grupos metilo, aldehdo, glucosilo, amina, sulfat, sulfrico, etc.

3.Las Hidrolasas: Esta clase de enzimas actan normalmente sobre las grandes molculas del
protoplasma, como son la de glicgeno, las grasas y las protenas. La accin cataltica se
expresa en la escisin de los enlaces entre tomos de carbono y nitrgeno (C-Ni) o carbono
oxigeno (C-O); Simultneamente se obtiene la hidrlisis (reaccin de un compuesto con el
agua)de una molcula de agua. El hidrgeno y el oxidrilo resultantes de la hidrlisis se unen
respectivamente a las dos molculas obtenidas por la ruptura de los mencionados enlaces. La
clasificacin de estas enzimas se realiza en funcin del tipo de enlace qumico sobre el que
actan.

A este grupo pertenecen protenas muy conocidas: la pepsina, presente en el jugo gstrico, y la
tripsina y la quimiotripsina, segregada por el pncreas. Desempean un papel esencial en los
procesos digestivos, puesto que hidrolizan enlaces ppticos, estricos y glucosdicos.

4.Las isomerasas:Transforman ciertas sustancias en otras ismeras, es decir, de idntica
formula emprica pero con distinto desarrollo. Son las enzimas que catalizan diversos tipos de
isomerizacin, sea ptica, geomtrica, funcional, de posicin, etc. Se dividen en varias
subclases.

Las racemasas y las epimerasas actan en la racemizacin de los aminocidos y en la
epimerizacin de los azcares. Las primeras son en realidad pares de enzimas especficas para
los dos ismeros y que producen un solo producto comn. Las isomerasas cis trans modifican
la configuracin geomtrica a nivel de un doble ligadura. Las xido reductasas
intramoleculares cetalizan la interconversin de aldosas y cetosas, oxidando un grupo CHOH y
reduciendo al mismo tiempo al C = O vecino, como en el caso de la triosa fosfato isomerasa,
presente en el proceso de la gluclisis ; en otros casos cambian de lugar dobles ligaduras,
como en la (tabla) isopentenil fosfato isomerasa, indispensable en el cambio biosintico del
escualeno y el colesterol. Por fin las transferasas intramoleculares (o mutasas) pueden facilitar
el traspaso de grupos acilo, o fosforilo de una parte a otra de la molcula, como la lisolecitina
acil mutasa que transforma la 2 lisolecitina en 3 lisolecitina, etc. Algunas isomerasa actan
realizando inversiones muy complejas, como transformar compuestos aldehdos en
compuestos cetona, o viceversa. Estas ultimas desarrollan una oxidorreduccin dentro de la
propia molcula (oxido rreductasa intramoleculares)sobre la que actan, quitando hidrgeno,
a algunos grupos y reduciendo otros; actan ampliamente sobre los aminocidos, los
hidroxcidos, hidratos de carbono y sus derivados.

5.Las Liasas: Estas enzimas escinden (raramente construyen) enlaces entre tomos de carbono,
o bien entre carbono y oxigeno, carbono y nitrgeno, y carbono y azufre. Los grupos separados
de las molculas que de sustrato son casi el agua, el anhdrido carbnico, y el amoniaco.
Algunas liasa actan sobre compuestos orgnicos fosforados muy txicos, escindindolos;
otros separan el carbono de numerosos sustratos.

6.Las Ligasas: Es un grupo de enzimas que permite la unin de dos molculas, lo cual sucede
simultneamente a la degradacin del ATP, que, en rigor, libera la energa necesaria para llevar
a cabo la unin de las primeras. Se trata de un grupo de enzimas muy importantes y recin
conocidas, pues antes se pensaba que este efecto se llevaba a cabo por la accin conjunta de
dos enzimas, una fosfocinasa, para fosforilar a una sustancia A (A + ATP A - + ADP) y una
transferasa que pasara y unira esa sustancia A, con otra, B (A - + B A B + Pi ). A este grupo
pertenecen enzimas de gran relevancia reciente, como las aminocido ARNt ligasas conocidas
habitualmente con el nombre de sintetasas de aminocidos ARNt o enzimas activadoras de
aminocidos que representan el primer paso en el proceso biosinttico de las protenas, y que
forman uniones C-O; las cido-tiol ligasas, un ejemplo tpico de las cuales es la acetil coenzima.
A sintetasa, que forma acetil coenzima. A partir de cido actico y coenzima A ; las ligasas
cido amoniaco (glutamina sintetasa), y las ligasas cido-aminocido o sintetasas de
pptidos, algunos de cuyos ejemplos ms conocidos son la glutacin sintetasa, la carnosina
sintetasa, etc.

La accin de estas enzimas se manifiesta con la formacin de enlaces entre tomos de carbono
y oxigeno de diversas molculas, o bien entre carbono y azufre, carbono y nitrgeno y carbono
y carbono. Las ligasas utilizan siempre, para el proceso de reaccin, la energa proporcionada
por el ATP o compuestos homlogos que son degradados, Por consiguiente las enzimas de esta
clase son los nicos que intervienen en reaccin no espontnea desde un punto de vista
termodinmico; Actan sobre los sustratos ms diversos y revisten particular importancia en el
metabolismo de los cidos nucleicos.

Estas reacciones enzimticas se desarrollan en dos tiempos: en el primero se forma un
complejo intermedio con potencia energtica muy alta-, en el segundo utilizan la energa
obtenida para realizar la reaccin de sntesis.


Grupo
Accion
ejemplos

1. Oxidoreductasas
Catalizan reacciones de oxidorreduccin. Tras la accin catlica quedan modificados en su
grado de oxidacin por lo que debe ser transformados antes de volver a actuar de nuevo.
Dehidrogenasas

Aminooxidasa

Deaminasas

Catalasas



2. Transferasas
Transfieren grupos activos (obtenidos de la ruptura de ciertas molculas)a otras sustancias
receptoras. Suelen actuar en procesos de interconversiones de azucares, de aminocidos, etc
Transaldolasas

Transcetolasas

Transaminasas

3. Hidrolasas
Verifican reacciones de hidrlisis con la consiguiente obtencin de monmeros a partir de
polmeros. Suele ser de tipo digestivo, por lo que normalmente actan en primer lugar
Glucosidasas

Lipasas

Peptidasas

Esterasas

Fosfatasas

4. Isomerasas
Actan sobre determinadas molculas obteniendo de ellas sus ismeros de funcin o de
posicin. Suelen actuar en procesos de interconversion
Isomerasas de azcar

Epimerasas

Mutasas

5. Liasas
Realizan la degradacin o sntesis (entonces se llaman sintetasas) de los enlaces denominados
fuertes sin ir acoplados a sustancias de alto valor energtico.
Aldolasas

Decarboxilasas

6. Ligasas
Realizan la degradacin o sntesis de los enlaces fuertes mediante el acoplamiento a
sustancias ricas en energa como los nucleosidos del ATP
Carboxilasas

Peptidosintetasas


10.Partes del sistema enzimatico

Los sistemas enzimticos en general, estn formados por la enzima propiamente dicha
(apoenzima), el sustrato o los sustratos un grupo proteico ( o coenzimas) y sustancias
activadoras. La estructura formada por la apoenzima y la coenzima se denomina boloenzima;
con cierta frecuencia se reconocen sistemas enzimaticos que no tienen grupo prosttico o
activadores reconocidos.

Apoenzima: concepto del centro activo

La apoenzima es la enzima propiamente dicha, de naturaleza proteica formada por cadenas de
polipptidos, con peso molculas elevado, no dializable y termolbil.

Las estudiadas analticamente hasta ahora, han sido, por razones tcnicas de peso molecular
bajo, 12 a 24 000, tienen una sola cadena polipeptdica (ribonucleasa, papaina, tripsina,
pepcina, etc.) excepto uno o dos casos (a - quimotripsina y aldolasa) que tienen dos.

El anlisis de los aminocidos que componen a diversas enzimas demuestran que tienen una
estructura similar a la de cualquier protena; existen, de hecho unos cuantos casos en los que
se ha determinado su secuencia completa, es decir, el orden en el que estn dispuestos todos
ellos en la cadena. El anlisis de la estructura secundaria de la protena, osea el modo como la
cadena peptdoica se dispone a lo largo de su eje mayor y el de la estructura terciaria, osea la
forma en que la cadena se pliega y se acomoda para formar una estructura tridimensional se
conocen muy mal para todas las enzimas. Solo en el caso de la lisozima (enzima presente en las
lgrimas donde funciona como un antisptico suave y que tiene la capacidad de atacar a los
polisacridos que forman la pared de diversas bactrias) se ha determinado la estructura
tridimensional de una enzima; para este fin se aplican las tcnicas de cristalografa de rayos x,
con una solucin de dos , lo que demostr que la lisosima es una protena con su cadena de
129 aminocidos ampliamente plegada y en la que se reconoce una hendidura representante
del centro activo donde se acomodan muy bien los inhibidores ciertos compuestos del tipo
de carbohidratos que nulifican su actividad enzimtica. Se ha demostrado, en este caso, que
es cierta regla general de que el modo como se ordenan y disponen los aminocidos de
termoina el arreglo espacial que permite a las otras partes del sistema enzimtico sustratos,
cofactores, iones, etc. adaptarse, en el espacio, en forma adecuada, para que se lleve a cabo
la accin cataltica. Por lo tanto, las estructuras indispensables que permiten la combinacin
con el sustrato y que confieren propiedades enzimticas a la molcula se denomina "centro
activo". Se acepta que el centro activo no es una parte muy grande de la enzima completa y,
en ciertos sistemas estudiados por medio de bloqueos qumicos no parece constituir una zona
de ms de 20 de dimetro. Es muy posible que el centro activo est formado por la
contribucin de grupos funcionales de aminocidos situados en distintas cadenas o en
diferentes repliegues de una cadena, asiendo aparecer a dichos grupos muy distantes entre
ellos si se considera el orden que guardan a lo largo de la cadena polipeptdica.

Un caso muy ilustrativo sobre lo que significa la estructura del centro activo desde el punto de
vista de la composicin de los aminocidos es el de la triptofano pirrolasa, enzima
ampliamente estudiada en bacterias desde el punto de vista de la bioqumica gentica. En ella,
la modificacin de algunos aminocidos produce perdida e la actividad enzimtica, que se
recupera si vuelve a incluirse los aminocidos en el orden original; sin embargo, se pueden
reemplazar dos de ellos por otros completamente distintos, y la enzima vuelve a ser
totalmente activa. Es posible que con estos nuevos aminocidos se consigan tambin las
condiciones de distribucin espacial de grupos funcionales y estructuras necesarias para la
actividad enzimtica.

El concepto de arreglo tridimensional adecuado de los aminocidos que forman la cadena
polipeptdica de la enzima para lograr la actividad funcional correcta permite entender
numerosos denmenos: la necesidad de que la molcula proteica ntegra est preservada en
su forma; el hecho de que la desnaturalizacin de la enzima al permitir la separacin de los
pliegues, conduce a la perdida de la actividad enzimtica; que al calentar una enzima con su
sustrato (por ejemplo, la invertasa con sacaroza, la transaminasa con cido a -cetoglutrico), se
impide una desnaturalizacin que sin ellos se producira, pues es posible que el propio sustrato
contribuya a sostener y reforzar la aproximacin de los pliegues de la cadena, etc.

Tambin se entiende por que al atacar la ribonucleasa con pepsina y romper una sola unin
peptdica que separa un tetrapptido del extremo con grupo carboxilo libre se pierde la
actividad, mientras que si solo se quita los tres ltimos disminuye su accin sugiriendo as la
importancia del residuo de cido asprtico para sostener el centro activo en condiciones de
eficiencia, o lo que es ms probable, para formar parte del propio centro activo. Si se parte la
ribonucleasa entre los aminocidos 20 y 21, y se separan los dos fragmentos, ninguno es
activo, pero basta mezclarlos para que se unan en tal forma que se restablece la actividad,
aunque un poco menor que la originalmente observada.

El estudio detallado de la estructura del centro activo se hace por medio de inhibidores o de
reactivos que se combinan de modo especfico, con algunos de los aminocidos del centro
activo tales como el diisopropilfluorofosfato (DFP), que se combina con el OH del aminocido
serina, en diversas esterasas, peptidasas, etc. , e inactiva el centro activo del que forman parte
dicho aminocido; este inhibidor, an a concentraciones de 10-10 M, inhibe a la
acetilcolinesterasa; mucho de los derivados del DFP se utilizan como gases de guerra o como
insecticidas (parathion), y su utilidad se debe, en rigor a su capacidad para destruir
funcionalmente ciertas enzimas.

La unin del DFP al aminocido cedina es muy estrecha y a permitido el anlisis de los
aminocidos vecinos a l, haciendo un estudio de su ordenamiento en el centro activo. La
secuencia de los centros activos de diversas enzimas hidrolticas sensibles al DFP, se
demuestran que la mayora tienen cerina y a dems un aminocido dicarboxlico (asprtico o
glutmico) y en el otro un aminocido neutro (alanina o glicina). Tambin se ha demostrado
que la histidina, cuando menos para el caso de la quimotripsina, forma parte del centro activo
an cuando el anlisis de la secuencia no demuestra que exista cerca de la cerina ninguna
histidina; se trata, por lo tanto, de otro ejemplo de una aminocido, alejado e otro, y en
distinto pliegue de la cadena, que integra el centro activo.

Teniendo en cuenta estos hechos, se deduce, por lo tanto, que la actividad de la enzima
depende en parte de la disposicin o arreglos de los aminocidos y grupos prostticos en
determinada regin de la protena. Los aminocidos que componen a las protenas pueden
tener moderadas actividades catalticas, aunque de ninguna manera comparable en su
magnitud, cuando se les considera en forma aislada, a las que muestran la gran molcula
proteica. De hecho para muchos sistemas enzimticos se han ideado modelos anlogos, osea
sustancias qumicas sencillas que suelen reproducir los efectos ocasionados por la enzima, tal
es el caso de los anlogos, a base de piridoxsal que representan la parte activa de enzimas
descarboxilantes y transaminantes. Esto no significa que necesariamente, en el estado natural,
la enzima funcione como lo hace el anlogo pues muchos sistemas pudieran tener otro
mecanismo de operacin; la hidrlisis del almidn lo mismo se logra con la adicin del cido
que con la enzima especfica amilasa, an cuando en el primer caso se atacan
indiscriminadamente numerosas uniones glucosdicas, y con la enzima, en cambio solo se
desprenden, uno tras otro fragmentos de dos unidades de glucosa de los extremos de las
ramificaciones.

Conformacin de la enzima y propiedades del centro activo. La propiedad cataltica de las
enzimas parece depender de la facilidad con la que ayudan a que se pongan en contacto las
sustancias reaccionantes para dar el producto o los productos de la reaccin. Esto implica que
el sistema enzimtico tenga una conformacin especial osea, una disposicin adecuada de os
grupos funcionales aminocidos de la apoenzima y grupos prostticos, cuando existen estos
y de las molculas mismas de los sustratos que se unirn a aquellos y permitirn que se lleve
a cabo la reaccin qumica. Este acercamiento de las sustancias reaccionantes de los grupos
prostticos y los grupos funcionales fue las razn del modelo de Ehrlich, conocido clsicamente
como de la "llave y la cerradura". As la enzima sera un molde tridimensional en negativo, de
la estructura tambin tridimensional, en positivo de los reaccionantes que se adaptaran
perfectamente a ala disposicin de la enzima. Sin embargo ha sido necesario reconsiderar esta
situacin y sugerir de acuerdo con Koshland la teora de un "acomodo inducido".
As las enzimas pueden sufrir un cambio en su estructura desde el momento en que entran en
contacto con los reaccionantes, sustratos y cofactores, y es posible que todos ellos modifiquen
el arreglo tridimensional de la enzima; la enzima los recibe en un orden determinado y cada
uno de ellos al unirse a la enzima modifica su estructura. La nueva analoga es la del "guante y
la mano"; aquel no representa una estructura de negativo tridimensional mientras no se halla
la mano en el, ya que antes pueden tener diversas formas y disposiciones, una vez que ha
entrado la mano - que a su vez tambin puede adoptar distintas posiciones se ponen en
contacto todas las partes correspondientes, es decir, en el caso de la enzima, las partes
reactivas del sistema enzimtico, con las partes reaccionantes, osea los sustratos. Se ha
preservado con esta nueva idea, el aspecto de la armona estructural entre el sustrato y la
enzima pero se introduce el nuevo concepto de que es necesario provocar un cambio en la
estructura proteica que favorezca la colocacin adecuada de todos los elementos que
interviene en la reaccin enzimtica. Los cambios de la estructura protica se denominan
"conformacionales". El cambio en la disposicin tridimensional puede hacerse a distancia y en
muchas ocasiones la unin del sustrato a una parte de la enzima modifica otras zonas de ella y
an su estructura completa, debido a plegamientos que acercan o alejan diversos grupos
colocados a lo largo del pptido que forma la enzima. Esta alteracin mltiple y de tipo
flexible, permite entender mejor el proceso de entrada ordenada de los sustratos, y los
cofactores y la reaccin en la que se participan. Tambin permiten comprender porque un
sustrato entra a una enzima y es atacado y uno que no lo es an muy parecido a l, puede
quedar excluido del centro activo.

Se ejemplifican estas ideas en A se encuentra la enzima en una forma desplegada con ciertos
grupos reactivos (+) y (-), colocados en una zona de la superficie de la enzima. La entrada de un
cofactor F1, modifica una parte del sistema (B); se introduce en el sistema un nuevo arreglo a
base de la reactividad de tipo electrnico entre la zona (+) y una parte del cofactor F1, recin
introducido; por fin la entrada de un nuevo reaccionate F2 modifica la parte terminal de la
enzima de manera que permite la entrada del otro reaccionante (sustrato) que se acomoda en
un lugar preparado previamente por los reaccionantes F1 y F2, y permite de esta manera echar
a andar la reaccin cataltica. Los cambios conformacionales, se pueden demostrar con
diversos mtodos algunos de tipo fsico, como son las modificaciones en la rotacin ptica o en
el patrn de sedimentacin en el campo gravitacional de la ultracentrfuga, o qumicos como el
aumento o la disminucin de la actividad enzimtica bajo la influencia de cambios trmicos o
la adicin de agentes desnaturalizantes. Basten unos cuantos ejemplos: la transaminasa a -
cetoglutrica se pude calentar a 65 C. en presencia de su sustrato sin que se afecte, al paso
que la enzima sola es rpidamente degradada, cambia de configuracin y se precipita; la
miosina, protena muscular contrctil, en presencia de ATP hace ms notable su forma de
espiral y permite el reconocimiento de aminocidos previamente ocultos en sus pliegues; la D-
amino oxidasa, al unirse a su cofactor, el FAD, pasa de la forma espiral en a -hlice, a una
disposicin irregular distribuida al azar.




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11. Coenzima y grupos prostticos
Aparte del sustrato, cuya transformacin ser condicionada por la enzima,
existe otra parte del sistema enzimtico, de peso molculas bajo y por lo tanto
dializable, termostable y en general, no protica, adherida de mas o menos
laxa a la apoenzima y a la cual se le llama grupo prosttico, si est muy
intimanente ligada a la apoenzima como es el caso del ncleo porfirnico de
numerosas oxidasas o la estructura flavnica de la deshidrogenasa succnica
o coenzima cuando la unin es dbil y se separan fcilmente, como por
ejemplo el DPN y el TPN que asisten a las funciones de varias deshidrogenasas.
Es muy grande la importancia del grupo prosttico o de la coenzima desde el
punto de vista funcional pues suelen ceder y recibir alternadamente parte de
los productos de la reaccin. Por ejemplo en las reacciones de oxido
reduccin los hidrgenos desprendidos de un sustrato deben ser captados por
una sustancia con lo que se expulsa al sustrato oxidado y es posible recibir una
nueva molcula del sustrato con hidrgenos. Tal sustancia es una coenzima,
como el DPN, el TPN, el FAD, etc., que, a su vez, suele cederlos a una tercera
sustancia o, cuando las reacciones son reversibles los pasan al sustrato
oxidado para reducirlo. Algunos autores denominan cosustratos a estos
agrupamientos coenzimticos para hacer nfasis en su carcter reversible, no
cataltico y equimolecular con respecto al sustrato. Una proporcin de las
vitaminas forman parte de molculas mas complejas que funcionan como
coenzimas en diversas reacciones.
Muchas enzimas requieren una coenzima
Muchas enzimas que catalizan la transferencia de grupos y otras reacciones
requieren, adems de su sustrato, una segunda molcula orgnica conocida
como coenzima sin la cual son inactivas. Para distinguirlas de iones metlicos
activadores y de las enzimas mismas, las coenzimas se definen como
compuestos orgnicos termoestable, de peso molecular bajo, requeridas para
la actividad de las enzimas. La mayor parte de las coenzimas se unen a las
enzimas por fuerza no covalentes. Las que forman enlace covalentes con las
enzimas se denominan tambin grupos prostticos.
Entre las reacciones que requieren coenzimas estn las oxidorreducciones, las
reacciones de transferencia de grupo e isomerizacin y las reacciones que
forman enlaces covalentes (claves 1,2,5 y 6;IUB). Las reacciones lticas que
comprenden reacciones hidrolticas catalizadas por enzimas digestivas no
requieren de coenzimas.
Las coenzimas pueden considerarse como segundo sustrato
La coenzima puede considerarse como un segundo sustrato o cosustrato por
dos razones. En primer lugar, los cambios qumicos en la coenzima compensa
exactamente a los que realizan en el sustrato. Por ejemplo, en las reacciones o
oxidorreduccin (deshidrogenasa), una molcula de sustrato es oxidasa y una
molcula de coenzima es reducida.
Una segunda razn para dar igual nfasis a las reacciones de la coenzima es
que, en realidad, este aspecto de la reaccin es el que puede ser de significado
fisiolgico fundamental. Por ejemplo, la importancia de la capacidad del
msculo que trabaja en condiciones anaerobias para convertir el piruvato en
lactato no residen en el piruvato ni en el lactato.
La reaccin sirve solamente para oxidar la coenzima reducida NADH a NAD+.
Sin NAD+ la gluclisis no puede continuar y la sntesis anaerobias de ATP (y
por tanto, el trabajo) tiene que cesar. En condiciones anaerobias, la reduccin
del piruvato en lactato reoxida al NADH y permite la sntesis de ATP. Otras
reacciones pueden servir igualmente bien. Por ejemplo, en las bacterias o
levaduras que crecen en medio anaerobio, algunos metabolitos derivados del
piruvato son utilizados como oxidante para el NADH y son reducidos en el
proceso.
Las coenzimas funcionan como reactivos en la transferencia de grupos
Las reacciones bioqumicas de transferencia de grupo del tipo.
D G + A = A G + D
En la cual un grupo funcional, G es transferido de una molcula denadora, D-
G, a una molcula aceptora, A, por lo general comprende la participacin de
una coenzima como ltimo aceptor (por ejemplo, reacciones de
dehidrogenacin) o como portador intermediario del grupo (por ejemplo,
reacciones de transaminacin). El esquema siguiente muestra el ltimo
concepto.
D-H CoE A-G
D CoE-G A
Aunque estos sugiere la formacin de un complejo sencillo CoE-G, durante el
curso de la reaccin global, pueden intervenir varios complejos intermediarios
CoE-G en una reaccin particular (por ejemplo, transaminacin).
Cuando el grupo transferido es el hidrgeno, es costumbre representar slo la
"mitad izquierda de la reaccin":
D-H CoE
D CoE-H
Que esto representa en realidad slo un caso especial de la transferencia
general de grupos puede apreciarse mejor en trminos de las reacciones que
ocurren en las clulas intactas. Se pueden representar de las siguientes
manera:
D-H CoE A-H
D CoE-H A
Las coenzimas pueden clasificarse de acuerdo al grupo cuya transferencia
facilitan
Basndose en este concepto podra clasificarse a las coenzimas como sigue:
Para la transferencia de grupos distintos del hidrgeno:
Fosfatos de azcares
CoASH
Pirofosfato de tiamina.
Fosfato de piridoxal
Coenzimas del folato
Biotina
Coenzimas de cobamida (B12)
cido lipoico
Para la transferencia del hidrgeno:
NAD+, DADP+
FMN, FAD.
cido lipoico
Coenzima Q.
-Muchas coenzimas derivan de vitamina B y del monofosfato de adenosina
Las vitaminas B forman parte de la estructura de numerosas coenzimas. Las
vitaminas B; nicotinamida, tiamina, riboflavina y cido pantotnico son
constituyentes esenciales de las coenzimas para las oxidaciones y las
reducciones biolgicas y las coenzimas cido flico y cobamida funcionan en el
metabolismo de compuestos de un solo carbono. Numerosas coenzimas
contienen adenina, ribosa y fosfato y se derivan del monofosfato de adenosina
AMP. Los ejemplos incluyen NAD+ y NADP+
12. Activadores
Las enzimas son catalizadores orgnicos que disminuyen la barrera denominada energa de
activacin; y por tanto facilitan el que se inicie una reaccin. Este proceso implica el trabajo
necesario para poner a dos molculas en un contacto lo suficientemente estrecho como para
que reaccionen; adems, el trabajo debe realizarce sobre la unin qumica una con
covalencia en sentido estricto para que pueda romperse y formar otros compuestos. Las
enzimas, como muchos catalizadores, son partculas de gran superficie y muestran que
tienen capacidad para atraer y captar diversas molculas. Cualquier factor que permita por
una parte atraer al sustrato a su centro activo se pude considerar como un activador,
adems algo que permita la rpida salida de los productos tambin pude considerarse como
un activador. Asi se reconocen diversas posibilidades:
Activacin inica. Numerosos metales monodivalentes son necesarios para la actividad
enzimtica de diversos sistemas. Destacan entre ellos los siguientes: K+, Mn++, Mg++,
Ca++, Fe+++, Cu+, Cu++, etc. A menudo el metal, a estas condiciones, es el centro que
permite la unin conjunta del sustrato, de la coenzima y de la misma apoenzima con la
que forma quelatos (de chelos, garra; complejos moleculares sostenidos por un metal) al
unirse con grupos cargados electricamente. Muy amenudo se demuestra que es posible
sustituir los metales divalentes entre ellos, sin grandes modificaciones de la velocidad de
la reaccin.
Los metales como el hierro, el cobre y el molibdeno, actan a menudo como
transportadores de electrones y no se les puede considerar activadores en el sentido estricto
pues forman parte integral del grupo prosttico. Algunos aniones tambin son necesarios
para la actividad de ciertas enzimas; bien conocido es el caso del Cl-, el que puede
sustituirse, a un cuando con baja de la velocidad, por Br-, para la amilasa salival; o el propio
radical fosfato que se requiere en reacciones de fosforilacin.
Activacin por el grupo prosttico. En determinadas reacciones estos son indispensables
para el trabajo de la enzima y constituyen, en rigor, la parte funcional activa del sistema.
Activacin de la apoenzima. Consisite en la obtencin de una correcta estructura del
centro activo de la proteina con actividad enzimtica, ya referido anteriormente.
Integridad de los grupos funcionales del centro activo. Destaca la relacionada con los
grupos sulfhidrilo, -SH. Cualquier alteracin qumica que los destruya, bloquee u oxide a
disulfuro, -S-S-, puede inactivar a las enzimas. Esto puede suceder incluso en las suaves
condiciones del trabajo celular por exposicin a agentes oxidantes o al oxigeno mismo,
aunque puede lograrse por el efecto de sustancias que los ataquen y que combinen con
ellos como la yodacetamida. En otras ocaciones la destruccin de los grupos SH, aun la
distancia del centro activo modifica de tal manera la estructura tridimencional de la
enzima que el centro activo se deforma al grado de que no puede llevar a efecto su accin
sobre las sustancias reaccionantes. Existen otros grupos funcionales cuyo bloqueo acaba
por completo con la actividad enzimatica; en tal caso estara la accin de inhibidores o
venenos enzimticos.
Medida de la actividad enzimtica. Aparte del problema de medir las pequesimas
cantidades de enzimas presentes en los tejidos; muy pocas de ellas poseen
caractersticas qumicas o espectroscpicas particulares que permita medirlas
directamente. En general, las enzimas se cuantean siguiendo la actividad de la reaccin
que catalizan y se aceptan, en principio que dicha actividad es proporcional a la cantidad
de enzima presente. Como la actividad de un enzimas slo rara vez se puede expresar en
relacin a su peso absoluto o a la molaridad de la enzima, lo habitual es expresarla en
"unidades" fijadas de modo convencional con relacin a la proteina presente en la
preparacin.
La actividad enzimtica se mide por la desaparicin del sustrato o la aparicin de alguno de
los productos de la reaccin, siguiendo dichos cambios en el tiempo. Sin embargo, las
condiciones del sistema no son uniformes a lo largo del tiempo: el grado de saturacin de la
enzima con el sustrato cambia constantemente, los productos que aparecen suelen inhibir a
la enzima o se presentan modificaciones del pH que afectan a la reaccin, etc. Para evitar
estos problemas se hace la medida de la velocidad inicial, tomando en cuenta solo el
comienzo, en forma de lnea recta de la grfica, lo que sucede en general cuando se ha
consumido no ms de una cuarta parte del sustrato.
La actividad puede espresarce, una vez determinada la reaccin, en relacin con el tiempo
empleado por la enzima para producir un cambio determinado; mientras mayor sea el
tiempo, la actividad de la enzima es menor. Por lo tanto, la recproca del tiempo (la inversa
del tiempo osea el valor que resulta de dividir la unidad sobre el tiempo, 1/T) es una medida
de la actividad enzimtica.
13. Las enzimas son catalizadores estereoespecficos
Casi todos los sustratos forman por lo menos tres enlaces con las enzimas. Esta adherencia
en tres puntos pueden conferir asimetra a una molcula por otro lado simtrica. La figura *
muestra una molcula de sustrato, representada como un tomo de carbono que tiene tres
grupos diferentes, prximos a adherirse en tres puntos a un sitio de la enzima. Si el sitio
puede ser alcanzado slo desde un lado y nicamente los tomos complementarios y los
silios pueden interactuar (ambos suposiciones vlidas para las enzimas reales), la molcula
se unir slo en una forma. La reaccin misma puede estar confinada a los tomos unidos
en los sitios 1 y 2 an, cuando los tomos 1 y3 sean idnticos. Girando mentalmente la
molcula de sustrato en el espacio, ntese que puede adherirse en tres puntos a un costado
del sitio planar con una sola orientacin. En consecuencia, los tomos 1 y 3 aunque sean
idnticos viene a ser distintos cuando el sustrato est adherido a la enzima. Por tanto, un
cambio qumico puede afectar el tomo uno (pero no al tomo tres) o viceversa. Esto puede
explicar el porqu la reduccin, catalizada enzimticamente de la molcula del piruvato
pticamente inactiva, forma L- y no D,L-lactato.
14. Especificidad enzimtica
Los distintos grupos de enzimas muestran variaciones considerables en su grado de
especificidad. Algunas de ellas muestran requerimientos estrictos tanto para el sustrato (o
los sustratos si se trata de reacciones bimoleculares) como para el tipo de unin qumica
sobre el que van a actuar; pequeos cambios en cualquiera de ellos bastn para inactivar la
reaccin; tal es el caso de la mayora de las enzimas. En otras ocaciones, la deshidrogenasa
alcohlica, que funciona con DPN como coenzima, es absolutamente especfica para el
DPN, pero pude actuar sobre diversos alcoholes aparte del etlico que es su sustrato
caracterstico. Asi mismo, las enterasas, las fosfatasas y ciertas peptidasas a menudo solo
son especficas para el tipo de unin atacada ster, peptdica, etc. y no requieren
estructuras definidas en el sustrato, a ambos lados de la unin. Hay ejemplo de
especificidad doble: la xantina oxidasa, altamente especfica para la xantina a la que
convierte en cido rico, y por otro lado muy activa, pero en forma inespecfica, al mostrar
gran capacidad para mostrar la activacin de gran variedad de aldehidos.
El requisito de estereoespecificidad para los sustratos es muy importante. Las enzimas que
habitualmente atacan a los azcares naturales con configuracin D-, no lo hacen sobre sus
ismeros artificiales L-; las enzimas tan activas en la naturaleza sobre los aminocidos
comunes tipo L- so inactivas para los aminocidos artificiales (o muy raros en los
organismos vivos) de tipo D-. Esto es tan absoluto que cuando existen mezclas racmicas de
ismeros D- y L-, un mtodo conveniente de separarlas, es el de dejar que actue sobre ellas
una enzima que degradar exclusivamente a uno de los dos ismeros dejando al otro
intacto.
Cuando el sustrato es simtrico y el producto es asimtrico, la enzima provoca,
especficamente, la formacin de uno solo de los productos asimtricos, aquel para el que la
enzima es activa; tal es el caso de la deshidrogenasa lctica que, al actuar sobre el cido
pirvico (simtrico) produce exclusivamente cido D-lctico y no cido L-lctico, y el de la
deshidrogenasa glutmica que al atacar el cido a -cetoglutrico produce solo cido L-
glutmico:
CH3CH3
| |
C = O HCOH
| |
COOH COOH
cido pirvico cido D-lctico
Existen otras formas de isomerismo geomtrico aparte del isomerismo D-, L-, suceptibles
de ser reconocidas por enzimas. Tal es la situacin de los ismeros cis trans en que solo
uno de los tipos del par es atacado. La fumarasa introduce una molcula de agua en el cido
fumrico trans, pero el ismero cis, o sea el cido maleico, no es atacado.
H C COOH H C COOH
HOOC C H H C COOH
cido fumrico (trans) cido malico (cis)
Las enzimas tambin pueden distinguir molculas que desde el puntod e vista estructural,
como compuestos qumicos, son identicas. Por ejemplo, la glicerol cinasa, por medio de
ATP, convierte al glicerol en L-grlicerol 3- fosfato, osea produce su fosforilacin, pero
exclusivamente en la posicin 3, hecho que se ha demostrado con glicerol marcado con C
radiactio, C14, en las dos posiciones posibles 1 y 3.
Los mismo sucede con el cido ctrico que al ser oxidado y descarboxilado hasta producir
cido a -cetoglutrico adquiere un grupo C=O, en uno de los lados de la molcula,
quimicamente simtrica. Esta capacidad de la enzima para reconocer el sustrato obedece a
que debe tener por lo menos tres grupos qumicos orientados en el espaciod e tal modo que
el sustrato, aunque en apariencia simtrico, solo puede adaptarse por completo a la enzima
en una sola posicin. De todo esto se desprende por el sustrato a los sustratos necesitan
tener un patrn peculiar de grupos qumicos, especficos para cada enzima particular, de
modo que se adapte perfectamente a su centro activo; mientras mayor y ms complejo sea
este requerimiento mayor ser la especificidad de la enzima.
15. Preparacin y purificacin de las enzimas
Aun cuando se sabe que las propiedades de las enzimas in situ puden ser muy diferentes a
las de las enzimas puras estudiadas en el laboratorio, est plenamente justificada la
necesidad de tener preparaciones puras para hacer el estudio qumico completo de su
actividad. En la actualidad se han cristalizado o purificado de manera adecuada cerca de
unas 200 enzimas (del posible total de unas 5000 ) y quizas en los prximos aos aumente
de modo considerable este nmero.
Para extraer las enzimas de las clulas que las contienen, a menudo es necesario dividir
finamente el tejido, por medio de un homogeneizador o una licuadora; los tratamientos ms
enrgicos comprenden la molienda del tejido con arena el empleo de vibraciones
ultrasnicas, los procesos alternados de congelamiento y descongelamiento, la autolsis , el
desecado con calor o el emmpleo de solventes como la caetona, el ter y el tolueno. El
desecado con acetona y la produccin de los llamados polvos acetnicos constituyen un
excelente ejemplo de rotura de la menbrana celualr y la obtencin de un material rico en
enzimas y de fcil concervacin. Cuando las enziams estn asociadas a lpidos, como sucede
con als enzimas mitocondriales, es ventajoso el tratamiento con sustancias de tipo
detergente o con butanol que disgregan la estructura lipoprotica y permiten la salida de las
enzimas.
La purificacin de las enzimas con mtodo de precipitacin fraccionada recurre a diversos
procedimientos, el cambio de pH quita las nucleoprotenas y el material grueso, con lo que
se facilitan los pasos siguientes. Con el empleo del calor a veces se logra la
desnaturalizacin de material protico inactivo; por ejemplo, en la purificacin de la
transaminasa se aade el sustrato de la enzima cido a - cetoglutrico al homogenado y
se calienta hasta 65 C, con lo que muchas enzimas se desnaturalizan y precipitan, lo que no
sucede con la transaminasa as protegida.
En otros casos se emplean solventes orgnicos como el etanol, muy utilizado para separar
diversas protenas del suelo sanguneo y la caetona; o las sales, como el sulfato de amonio,
que es muy soluble en agua, por lo que se puede manejar a elevadas concentraciones, y en
general no ataca la estructura de las enzimas. la absorcin fraccional tiene gran utilidad
para absorver gran material indeseable o para absorber la enzima y luego desprenderla del
material absorbente en una forma ms pura; muy usado con este fin en el gel de aluminio C.
En los ltimos aos se han logrado adelantos notables en materia de fraccionamiento
protico con el empleo de tcnicas coromatogrficas en columnas que se basan en
fenmenos de absorcin, de intercambio inoco o de una verdadera "filtracin molecular".
Se agraga a una columna con el material activo la solucin de la enzima que queda fijada a
dicho material; se lava la columna con soluciones de sales, cada vez ms concentradas o con
distinto pH, etc. , y se recogen los lavados en fracciones de volmenes determinadas; en
alguna porcin sale la enzima en estudio, en forma ms pura. Los materiales ms usados
para este fin son ciertas formas de fosfato de calcio hidroxiapatita -, resians de
intercambio inico, como las Amberlitas o las Dowex (aunque tienen el inconveniente de
desnaturalizar a las protenas y de tener poca superficie til) y diversos derivados de la
celulosa, tales como la dietilaminoetil celulosa (DEAE celulosa) y la carboximetil celulosa
(CM celulosa). Ejemplos de los filtros moleculares lo constituye el material que est
compuestod e un polisacrido que forma una rejilla tridimensional, el Sephadex, que puede
retener protenas con peso molecular aproximado de 25 000 hasta 200 000 segn el tipo
que se emplee.
El paso final de la purificacin es el de la cristalizacin de la enzima que debe repetirse
varias veces pues los primeros cristales suelen estar contaminados con otras enzimas. A
pesar de esto, la obtencin de cristales no demustra que la enzima est 100% pura, es solo
obtencin de una actividad especfica de un valor constante ante las recristalizaciones
repetidas la que ofrece la seguridad de su pureza.
El estudio de la pureza de una enzima comprende la aplicacin de las tcnicas empleadas
para el estudio de la pureza de las portenas, el anlisis por ultracentrfuga, el anlisis el
electrofortico, etc. Sin embargo, an es podsible, si se somete la enzima a fraccionamientos
ms sensitivos, como losd e la electroforsis en gel de agar, de almidn, o de acrilamida
demostrar que la enzima en cuestin puede estar formada por varias protenas, algunas de
las cuales tienen la misma actividad enzimtica, pero que por tener propiedades fsicas o
estructurales diferentes se deben considerar como isoenzimas, y otras que son proteinas
que se han procesado a lo largod e todas las etapas de purificacin.
En general las enziams se consideran especies qumicas homogneas y puras cuando llenan
requisitos como los siguientes: su actividad no debe aumentar despus de que se la
recristaliza repetidas veces; su solubilidad no aumenta al elevar la cantidad de cristales de
la protena problema que se pone en solucin; tanto en el anlisis realizado con la
ultracentrfuga como en los diversos mtodos electroforticos se encuentra un patrn de
mobilidad nico y persistente.
16. Isoenzimas
Al hacer el estudio electrofortico del suero humano normal y hacer un revelado de la
actividad de la deshidrogenasa lctica se encontr distribuida en cinco bandas diferentes; se
lleg as al concepto que es posible que en un tipo de tejido existan diversas y mltiples
formas moleculares de una enzima, a las que se denominan isoenzimas. Son por lo tanto
protenas con actividad cataltica que favorece la misma reaccin pero que pueden
distinguirse por alguna caracterstica fsica, estructural, inmunolgica, etc. En el ejemplo
antereior sus diferencias se rejistraron en la velocidad de migracin electrofortica. En
otras ocaciones la diferencia eside en las propiedades cinticas; por ejemplo, existen dos
deshidrogensas mlicas que catalizan la misma reaccin; sin embargo, actuan de modo
distinto cuando se les pone en contacto con los anlogos artificiales del DPN y, adems, una
es de origen mitocondrial, la otra se encuentra en el sobrenadante celular.
Sin embargo, este concepto tiene sus limitaciones; el caso de la deshidrogenasa lctica es
muy ilustrativo. Esta enzima se diferencia en 5 isienzimas denominadas I, II, III, IV y V que
parecen ser caractersticas de distintos tejidos; en el corazn dominan el I y la II, el higado
tiene un predominio de la V, etc. al tratar la enzima que pesa 135 000 con rea o
guanidina, su molcula se fragmenta en cuatro porciones, cada una de las cuales tiene un
peso molecular de unos 35 000. Las cinco isoenzimas comunes de la hidrogenasa lctica
parecen sermezclas de dos tipos bsicos A y B, o H (de "heart", corazn) y de m (msculo)
de la siguiente manera:
HHHH Tipo I, miocrdico, H
HHHM Tipo II
HHMM Tipo III
HMMM Tipo IV
MMMM Tipo V, muscular, M
Se ha confirmado inmunolgicamente su presencia; los anticuerpos preparados contra
ambas molculas originales H o M nomuestran reaccin cruzada entre si, pero si reaccionan
con los hbridos formados de H y de M. Del mismo modo, muestran diferencias
considerables en su composicin de aminocidos.
No solo las caractersticas fisicoqumicas son diferentes; quiz aun ms importante sea el
aspecto funcional. La actividad de las deshidrogenasas lcticas ante sus sustratos normales,
lactato, piruvato, y ante los anlogos del DPN indican el papel de la enzima en la regulacin
de las relaciones DPN/DPNH2, que a su vez, regulan funciones celulares importantes. Es
muy notable la diferencia en la inhibicin producida por un exceso de piruvato sugerente de
que, en rigor, la enzima tipo M o V funciona ms bien como una reductasa del piruvato.
Esta forma (M o V) es muy til en los msculos voluntarios que presentan demandas
bruscas de energa proporcionadas por la gluclisis, o en tejidos con poco oxgeno
(anaerobiosis). Por el contrario la tipo H (I) funcionan preferentemente en msculos que
deben realizar un ejercicio sostenido y en los que las necesidades energticas se satisfacen
por medio de un metabolismo aerbico intenso; este tipo, por lo tanto, est capacitado,
funcionalmente, para lograr una mayor exidacin del lactato a cido pirvuco.
La distribucin de la enzima con respecto a la aerobiosis (o anaerobiosos) del tejido se ha
comprobado en varios casos: la de tipo H (I) es ms abundante en la corteza renal (cerca de
100%) que en la mdula (50%) en las papilas (10%), en razn directa con el grado
deaerobiosis de esas zonas renales. Lo mismo sucede con msculos de un mismo animal; si
tienen que trabajar constantemente muestran grandes proporciones de la forma H (I),
como el dorsal ancho de las gallinas que casi en el 100% muestran dicha forma; el pectoral,
en cambio tiene menos del uno por ciento de ella, en cambio, en los pectorales de las aves
migratorias que deben sostener por horas y aun das, esfuerzoz extraordinarios, aparece
nuevamente la forma H (I) de preferencia a la M (V).
Es obio que cuando son muy marcadas las diferencias de pesos moleculares, composicin
de aminocidos, caractersticas cineticas y otras propiedades fsicas, es dificil hablar de
isoenzimas; ms conveniente es considerarlas entonces como enzimas distintas que
simplemente catalizan la misma reaccin reservando el trmino de isoenzima para aquellas
situaciones como la de la deshidrogenasa lctica que representan agregados hbridos de
composicin relativamente parecida.
17. Cinetica de las reacciones enzimaticas
Aunque las leyes generales de la catlisis debieran ser vlidas para las enzimas, el hecho de
que stas sean sustancias complejas, de alto peso molecular, de tamao coloidal y de
composicin difcil de precisar, impide la aplicacin de dichas leyes de una manera estricta;
por ejemplo, su tamao coloidal puede causar fenmenos de adsorcin o diversas
reacciones debidas a sus numerosas cargas elctricas. No obstante, los factores que afectan
la velocidad de la reaccin enzimtica son los ya sealados a propsito de las reacciones
qumicas en general, como la temperatura y las concentraciones de las sustancias
reaccionantes que, en este caso particular, son la enzima el sustrato. Adems intervienen el
PH medio donde se realiza la reaccin, la presencia de los productos de la reaccin, y otros
factores secundarios como las radiaciones y los efectos xido reductores.
18. Relaciones entre la enzima y el sustrato.
Es universalmente aceptado, que la enzima, como todo catalizador, participa
de una manera activa en la reaccin. Existen pruebas experimentales de esta
situacin cuando menos para algunos.
Un ejemplo bien conocido es el de la peroxidasa que, en presencia de perxido
de hidrgeno, H2O2, y un acceptor de hidrgeno adecuado, produce la
reduccin del H2O2, . La peroxidasa en ausencia de H2O2 muestras unas
bandas de absorcin caractersticas en el espectro visible; cuando se combina
con el H2O2 , pero sin que exista el acceptor de los hidrgenos, aparece una
nueva distribucin de las bandas. Si se permite el paso de los hidrgenos a un
acceptor, automticamente desaparecen las bandas nuevas y reaparecen las
originales de peroxidasa.
Se acepta corrientemente una hiptesis propuesta por Michaelis para explicar
la actividad enzimtica, sobre la base de la informacin de un compuesto de la
enzima con el sustrato (complejo enzima sustrato), previamente al ataque
del sustrato por la enzima y a la liberacin de los productos de la reaccin. El
desarrollo matemtico que permiti a Michaelis formular su hiptesis, estuvo
acorde con los datos experimentales obtenidos una vez vencidos los enormes
obstculos de orden tcnico para llevar a cabo la confirmacin de la teora en
el laboratorio.
Si se hace el estudio de la actividad de una enzima en relacin con la
concentracin de sustrato. En ella se registran, en las abscisas, la cantidad
creciente de sustrato y, en las ordenadas, la cantidad de uno de los productos
de la reaccin liberada de un tiempo dado, que expresa, en rigor, la actividad
de la enzima. La curva obtenida es la de una hiprbola rectangular, la cual
tiene algunas propiedades interesantes; por ejemplo, la velocidad lmite o
velocidad mxima, es el valor que trata de alcanzar la curva a medida que se
aumenta el sustrato y que, en la figura, est sealada con la lnea V. Existe un
punto, fijado arbitrariamente, en el que la mitad de la velocidad lmite
corresponde a una concentracin especfica del sustrato; esta concentracin
de sustrato se representa habitualmente como KM, y se denomina constante
de Michaelis, valor caracterstico para un par enzima sustrato y que, por lo
tanto, es la concentracin de sustrato con la cual se alcanza la mitad de la
velocidad lmite o velocidad mxima de la reaccin. Los resultados obtenidos
experimentalmente concuerdan con los derivados de modo matemtico, sobre
la hiptesis de formacin de un complejo enzima sustrato.
La constante de Michaelis, KM, indica en trminos generales, las relaciones de
afinidad entre el sustrato y la enzima; un KM, implica la necesidad de una alta
concentracin de sustrato que, al combinarse con una enzima, produzca la
mitad de la velocidad mxima, o sea, que la afinidad por la enzima y sustrato
es pobre; por el contrario, si la concentracin de sustrato que se requiere para
alcanzar la mitad de la velocidad es muy pequea (KM pequea), quiere decir
que el sustrato tiene una gran afinidad por la enzima.
En ocasiones, la misma enzima puede ser ms afn a un sustrato que a otro;
por ejemplo, la sacarasa es 16 veces ms activa para atacar a la sacarosa que a
la rafinosa. Se conocen con exactitud los valores de KM para muchos sustratos
y enzimas, con los siguientes: la pepsina, actuando sobre albmina, de huevo:
KM de 4.5. por ciento; la tripsina sobre la casena :KM de 2 por ciento; la
amilasa sobre el almidn en presencia de Cl : KM de 0.4 por ciento ; la
sacarasa de levadura, sobre la sacarosa : KM 0.016 a 0.04 M, etc.
La explicacin de la curva hiperblica que implica la formacin del complejo
enzima sustrato parece depender de la existencia fsica, en la enzima, de
determinados sitios donde se absorbe el sustrato para ser activado. Al
principio de la curva se puede aumentar la concentracin del sustrato y la
enzima es capaz de activarlo con toda eficiencia; pero como una vez activado el
sustrato se separa en forma de los productos, y la velocidad con la que stos se
separan no es igual a la velocidad con la que captado el sustrato, y en vista de
la cantidad creciente del sustrato, la lnea obtenida no es una recta, sino la
curva sealada. Cuando la cantidad de sustrato ha sobrepasado la capacidad
fsica de la enzima para recibirlo y poder transformarlo, la curva alcanza una
meseta, lo que significa que la reaccin prosigue a la misma velocidad,
independientemente de la cantidad de sustrato adicionada. De acuerdo con los
trminos ligados a la velocidad de reaccin, expresados en la pgina 36, se
encuentra que, al principio del experimento, la reaccin depende
exclusivamente de la concentracin del sustrato y se trata de una reaccin de
primer orden; al final de ella, cuando hay un exceso de sustrato, la reaccin es
independiente de la cantidad de sustrato y, por lo tanto, es de orden cero.
Otra caracterstica en relacin con la finalidad de la enzima por el sustrato es
la comprendida en el llamado nmero de recambio, el cual representa los
moles de sustrato atacados por un mol de enzima en una unidad de tiempo
determinada, generalmente un minuto. Este nmero de recambio, en algunas
ocasiones, es muy elevado, como sucede con la catalasa que a 0 C., tiene un
nmero de recambio de 2.5 millones; es decir, un mol de enzima es capaz, en
un minuto, de desdoblar dos y medio millones de moles de H2O2 ; el
citrocomo c, a 38 C, tiene un nmero de recambio de 1.4 X 103 ; la
carboxialasa a 30 C., da un nmero de recambio de 1 X 103 , etc.
Mecanismo Ping Pong
En la transaminacin, la reaccin avanza a travs de los fenmenos alternos
de adicin de sustrato y liberacin de producto .
Iones sustrato
Estos facilitan la fijacin del sustrato y la catlisis por creacin de varias de
complejo de puente constituidos por un enzima, metal y sustrato en la que os
iones metlicos pueden actuar como catalizadores cidos generales o facilitar
la aproximacin de los reactantes.
19. Accion de inhibidores.
Si a un sistema enzimtico se aaden sustancias que impidan la realizacin de la actividad
propia de la enzima, se dice que el sistema ha sido inhibido, y la sustancia usada con estos
fines se denomina inhibidor.
Muchos inhibidores son agentes que desnaturalizan a las enzimas, ya que stas son
molculas protenicas, susceptibles a una diversidad de agentes, especialmente qumicos,
como aniones complejos o metales pesados, Zn ++, Pb ++, Ag ++, etc. A menudo estos
agentes que impiden la actividad enzimtica actan sobre casi todas las enzimas, lo que
demuestra que su accin no es especfica, sino que afectan a tosa molcula protenica . Tal
es el caso de los inhibidores de sufhidrilos, -SH, los cuales forman parte de una gran
variedad de enzimas. Otras sustancias bloquean especficamente determinadas reacciones
enzimticas y su especificidad es tal, que slo cierto sustrato y cierta enzima son los
susceptibles.
De acuerdo con esto, es posible clasificar los fenmenos de inhibicin enzimtica en
diversos grupos : inhibicin por competencia e inhibicin por no competencia y sta, a su
vez, en la debida a agentes desnaturalizantes y a agentes inespecficos.
20. Inhibicion por competencia
En este caso el inhibidor no permite la formacin del complejo enzima sustrato normal,
ya que se forma un complejo enzima inhibidor ; una vez que el inhibidor ocupa el lugar
activo de la enzima, el complejo enzima inhibidor, no se separa, en vista de que la enzima
no tiene accin sobre el inhibidor y, por lo tanto, queda bloqueada la parte activa de la
enzima. El sustrato no puede entrar al lugar activo, que est ocupado por el inhibidor y, de
esta manera, se impide la accin enzimtica.
El ejemplo clsico de inhibicin competitiva es el de la enzima deshidrogenasa succnica
que, en presencia de cido succnico en cido fumrico, reduciendo, simultneamente, al
acceptor de H. Diversas sustancias parecidas al cido succnico, como el cido malnico, el
oxlico y el glutrico, se pueden combinar con la enzima e impiden su accin sobre el cido
succnico.
Al aadir el inhibidor, la actividad enzimtica disminuye sin embargo, si se aaden
cantidades mayores del sustrato natural de la enzima (en el ejemplo anterior, de cido
succnico) nuevamente empieza a aparecer actividad enzimtica, y cuando las cantidades de
cido succnico aadido sobrepasan considerablemente a las presentes del inhibidor, la
actividad enzimtica se restablece por completo. Esta situacin representa, aparentemente,
un fenmeno de competencia entre el sustrato natural y el inhibidor para ocupar el sitio
activo de la enzima; la cantidad presente de una sustancia o de otra , en un momento dado,
en el sitio de la reaccin , determina si se dirige en un sentido o de otro; si hay ms
inhibidor, la enzima queda bloqueada por ste, y no se lleva a cabo la reaccin enzimtica ;
si an en presencia de importantes cantidades de inhibidor existen mayores cantidades del
sustrato natural, ste domina al inhibidor y llega a desplazarlo introducindose en los sitios
activos de la enzima para permitir que se reanude la actividad cataltica.
21. Inhibicion por no competencia
Cuando las sustancias inhibidoras actan independientemente de la calidad del sustrato
natural presente, se trata de inhibicin por no competencia. En este caso, el inhibidor
bloquea loas sitios activos de la enzima de modo irreversible ; en ocasiones se trata de la
desnaturalizacin de la enzima, como cuando se aaden aniones o cationes que precipitan
las protenas. En otros casos la combinacin irreversible se hace con sustancias que actan
de manera especfica sobre ciertos grupos activos de la enzima, o sobre la conformacin o
estructura completa de ella ; sin embargo, en estas circunstancias, se ven afectadas por
igual todos o cuando menos varios tipos de enzimas.
Existen algunos inhibidores no competitivos que muestran cierta especificidad, como los
agentes bloqueadores del radical sulfhidrilo, -SH, presente en las cadenas laterales del
aminocido cistena, comn a todas las molculas protenicas y, por lo tanto, a las enzimas.
Entre los inhibidores de sulfhidrilos ms conocidos se encuentran el ferricianuro, el
yodacetato, el famoso gas usado con fines blicos, la lewisita, y otras sustancias de tipo
arsenical que deben sus efectos letales a su combinacin con los grupos sulfhidrilo de
protenas y enzimas de gran importancia fisiolgica.
Hay enzimas que contienen iones metlicos indispensables para su actividad y que son
susceptibles a la accin inespecfica de agentes que afectan dichos iones; tal es el caso de las
enzimas con hierro que son intoxicadas por medio del cianuro o el H2S. De la misma
manera, la adicin de oxalato a un sistema puede precipitar el calcio o el magnesio, e
impedir la actividad de enzimas que los requieren.
22. Antagonismo metaboloco (antimetabolitos)
Las enzimas pueden ser inhibidas por diversos compuestos, especialmente los que
presentan una estructura parecida al sustrato natural, como expres en el caso del cido
malnico y el cido succnico con respecto a la deshidrogenasa succnica.
Esta inhibicin se denomina metabolitos las sustancias presentes o producidas en el curso
del metabolismo celular, y antimetabolitos las sustancias parecidas a aqullos, y que
impiden su aprovechamiento y utilizacin ; en general, se trata de sustancias que compiten,
a nivel enzimtico, en vista de su parecido estructural, con los metabolitos naturales.
Numerosos hongos, actinomicetos, bacterias, etc., producen sustancias que muestran
actividad contra otros microorganismos. Estas sustancias se han denominado antibiticos
y, en principio, se deben considerar como antimetabolitos que impiden, por razones de
competencia , el crecimiento de determinadas formas microbianas. En medicina ha
resultado del mayor inters el aislamiento y la actividad de los antibiticos, ya que en
ciertas condiciones se usan para reprimir el desarrollo de grmenes patgenos para los
seres humanos.
El estudio de los antimetabolitos probablemente se inici al observar que numerosas
bacterias podan crecer en un medio que tuviera sulfanilamida, que normalmente es un
inhibidor de su crecimiento, siempre que se aadieran grandes cantidades de cido p-
aminobenzoico, una vitamina necesaria para la nutricin celular. En vista del parecido
estructural entre las dos molculas, la sulfanilamida y el cido p-aminobenzoico, se acept
que los fenmenos de inhibicin tenan una base estructural.
Entre los antibiticos, existen algunos de gran utilidad teraputica, como la penicilina,
aislada de diversos hongos Penicillium ; la estreptomicina, proveniente de cultivos de
Streptomyces griseus, y las tetracilinas, sustancias que tienen amplio campo de accin de
diversas infecciones producidas por bacterias grampositivas o gramnegativas.
Qumicamente, son sustancias complejas formadas por distintos grupos :por ejemplo, la
estreptomicina contiene glucosamina, estreptosa y estreptidina. Algunos antibiticos son
pptidos, de tipo bsico, aislados de bacterias, tales como la gramicidina y las tirocidinas.
Un ejemplo peculiar de antibitico producido por el hongo Pemicillium notatum es la
notatina, idntica a la enzima glucosa oxidasa que ataca a la glucosa permitiendo su
conversin a gluconolactona y cido glucnico ; es posible que de esta manera ejerza su
accin de antibitico.
Muchos antimetabolitos suelen intervenir de modo especfico a nivel de las coenzimas o de
los grupos prostticos, cuando stos son del tipo de las vitaminas. Se trata, por lo tanto, en
estos casos, de antivitaminas , muy comunes en las del grupo B. As, la tiamina modificada
en su estructura qumica para formar piritiamina o oxitiamina, no participa en los procesos
de descarboxilacin.
El cido piridn 3 sulfnico impide la accin de la vitamina natural parecida a l, o cido
nicotnico y perturba numerosas reacciones de deshidrogenacin. La piridoxina es
antiorganizada por la desoxipiridoxina y la biotina, de la misma manera, por la
destiobiotina. Se han preparado numerosas sustancias parecidas a las bases pricas y
pirimidnicas con la finalidad de bloquear los sistemas de formacin de protena, que
dependen de la presencia de cidos nucleicos que contienen dichas bases, en el interior de
la clulas; estos trabajos se han planeado para deprimir la velocidad de desarrollo de clulas
cancerosas. Entre las sustancias obtenidas en fechas recientes se puede sealar el grupo del
5 fluorouracilo, que produce inhibicin tumoral por el siguiente mecanismo, que puede
ser comn a un gran nmero de sustancias con estas propiedades : en el tumor falta la
enzima que destruye el antimetabolito, en este caso el 5 fluorouracilo, el cual se vuelve
muy agresivo hacia el tumor ya que no es degradado por l; en cambio, dicha sustancia es
menos txica para el tejido normal que s est en posibilidad de destruirlo.
23. Inhibicion alosterica
De gran importancia en el fenmeno de la actividad enzimtica es el hecho de que, en las
protenas, pueden existir dos (o cuando menos dos) sitios diferentes desde el punto de vista
estereo- especfico y que, adems, estn en lugares distintos. Un de estos sitios es el centro
activo, donde el sustrato es atacado para dar origen a los productos de la reaccin y por lo
tanto donde reside el aspecto funcional de la protena. El otro sitio denomina sitio
alostrico y en l puede acomodarse de manera complementaria - pero reversible - alguna
sustancia llamada efector alostrico ; al efectuarse esta unin se produce una alteracin
discreta de la estructura de la protena, la transicin alostrica, que modifica la actividad
biolgica de la protena, porque altera la distancia, las propiedades del sitio activo.
Es muy importante que el efector alostrico normal no tiene relacin qumica o metablica
alguna con el sustrato de dicha enzima y que su accin tan especfica se debe a que altera de
tal modo la conformacin de la protena que modifica su centro activo.
El efecto alostrico se ha estudiado de manera especial en bacterias, pero ocurre tambin en
animales superiores. En un principio se reconoci como un efecto inhibidor que, por su
caractersticas, fue denominado "por retro- alimentacin" o "por producto final" . En rigor,
en las bacterias, es la regla que el metabolito formado al final de un camino metablico,
resulte un poderoso inhibidor de su propia sntesis. Parte de la explicacin de este efecto
(pg. 535) se debe a que dicho metabolito inhibe especficamente a una sola enzima
localizada en el camino metablico que forma a dicha sustancia, y de manera curiosa, la
enzima sensible al metabolito final es la primera de este camino metablico.
En un ejemplo de camino A B C D E, siendo E el metabolismo final, ste inhibira a la
primera enzima la que forma B a partir de A. En este captulo en que se estudia la
regulacin metablica se analizan con detalle algunos de estos ejemplos y las reacciones
qumicas individuales afectadas. La inhibicin alostrica demuestra la alta especializacin
de las enzimas que reconocen tanto al sustrato como al inhibidor, siendo muy especficas
para ambos. Como qumicamente el sustrato y el efector alostrico son muy distintos, se
acepta que la unin con la enzima debe efectuarse en sitios diferentes, lo que ha
demostrado con mutantes bacterianas no sensibles al efector alostrico . Adems, no hay
interaccin directa entre el sustrato y el inhibidor puesto que los sitios receptores estn
muy separados.
Las protenas alostricas pueden corresponder a polmeros, es decir, a molculas
compuestas de sub- unidades idnticas, con ejes de simetra definidos. El hecho de que se
agreguen las subunidades, por una parte, y el que al estar en forma polimrica adopten
diversas situaciones conformaciones, hace susceptibles a la enzima a los inhibidores, o por
el contrario, a recibir (fig. 3-10) al sustrato y llevar a efecto su accin caracterstica. Ms
an, para el caso de la transcarbamilasa asprtica se ha demostrado que una subunidad se
combina con el sustrato y otra, distinta, con el inhibidor. Estos fenmenos adquieren una
importancia de tipo general, al demostrarv que es factible modificar la accin de las
enzimas por cambios en la estructura cuaternaria de las protenas, basados en la asociacin
y disociacin de subunidades. Algunos ejemplos particulares son los siguientes : la
deshidrogenasa glutmica, con peso molecular de cerca de 1 milln puede partirse en
subunidades de 250 000 por diversos agentes : DPN, ADP, estrgenos tiroxina y ciertos
aminocidos . Otro ejemplo es la carboxilasa de la acetil coenzima. A, que es activada por la
adicin de citrato, el cual cambia el coeficiente de sedimentacin de la enzima de 18 S a 43
S, o sea la molcula pasa a forma de polmero activo a partir de monmeros inactivos. Un
caso ya clsico es el de la fosforilasa inactiva que se convierte en activa cuando se fosforila;
la estructura inactiva est formada por 2 unidades y la activa por 4.
24. Enzimas: regulacion de actividades
La regukacion del metabolismo logra la homeostacia
La regulacin de la actividad enzimtica contribuye en gran parte a preservar la
homeostasia que, mantiene un entorno intracelular e intraorgnico relativamente constante
en presencia de fluctuaciones amplias en al medio ambiente externo, como cambios de
temperatura, presencia o ausencia de agua o tipos especficos de alimentos.
Como conservar la homeostasia
Las concentraciones locales de sustrato , comparticin de enzimas y secrecin como
proenzimas o cimogenos ( como por ejemplo la quimiotripsina ) sin actividad cataltica
contribuyen a la regulacin de los procesos metablicos . Adems , las alteraciones rpidas
y mnimas en la actividad cataltica de enzimas reguladas clave tienen funciones
importantes en la canalizacin selectiva de metabolitos hacia uno u otro proceso metablico
.
Las enzimas reguladoras
Tienden a ser aquellas que catalizan una reaccin temprana nica ( con frecuencia la
primera ) de una secuencia determinada de reacciones metablicas .
La actividad cataltica de las enzimas reguladas puede modularse por ejemplo ,cambios
repetidos entre estados bajo y alto de actividad cataltica ; cuando no hay sntesis protenica
nueva ni degradacin protenica .
La modulacin se logra cuando matabolitos especficos se unen en forma covalente y no
covalente, a la enzima regulada en general a sitios ( alostricos ) bastantes separados del
sitio cataltico .
Tres mecanismos generales regulan la actividad enzimatica
Por ejemplo el flujo neto de carbono en una reaccin catalizada en una reaccin enzimtica
podra ser influido
1. Cambiando la cantidad absoluta de enzima presente .
2. Alterando el tamao del conjunto de sustancias reaccionantes distintas de la enzima.
3. Alterando la eficacia cataltica de la enzima (estas tres opciones son utilizadas e casi
todas las formas de vida).
La modulacin de actividad enzimtica por cambios en la conformacin del sitio cataltico
puede incluir la alteracin de Km para un sustrato de Vmax para la reaccin global o para
efectos sobre los dos, Km y Vmax

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