Actividad Prctica : Respuesta Inmune Primaria y Secundaria
Carmen de Tercero MD. MSc
I. Objetivos:
1. Comprender la importancia de la respuesta inmune primaria y secundaria. 2. Diferenciar las inmunoglobulinas que participan en la respuesta inmune primaria y secundaria. 3. Comprender los elementos de la inmunidad que participan para que se de el cambio isotpico IgM a IgG. 4. Conozca los mtodos de deteccin y anticuerpos IgG e IgM por el mtodo de ELISA. 5. Comprender la memoria inmunolgica. II. Introduccin:
La respuesta inmune primaria y secundaria, hacia los agentes infectivos, se puede evaluar por mtodos de laboratorio, lo cual tiene una aplicacin muy importante en el diagnstico clnico de las enfermedades infecciosas. A continuacin se presentan cuatro situaciones clnicas, las que solicitamos que discuta a profundidad con el docente, analizando todos los elementos (clulas y molculas) que participan en la generacin de la respuesta inmune primaria y secundaria. Adems se tiene el propsito de ilustrar a los estudiantes algunos mtodos en la identificacin de anticuerpos IgM e IgG, los cuales se elevan en la respuesta inmune primaria y secundaria respectivamente. Tomando como base terica la discusin de los casos clnicos, para que identifique la presencia de ttulos de anticuerpos especficos detectados por el mtodo de anlisis inmuno enzimtico ELISA-
III. Casos Clnicos:
Caso 1:
Madre de 16 aos de edad que recuerda haber tenido un exantema durante el primer trimestre del embarazo. El recin nacido de sexo femenino, presenta comunicacin interventricular e interauricular y el cardilogo solicita evaluacin oftalmolgica. La nia tiene anoftalmia en el lado izquierdo y una microcrnea y una esclerocrnea en el lado derecho. Exmenes de laboratorio:
Madre: IgG anti virus de la rubola positivo e IgM negativo Recin Nacido: IgM anti rubola positivo
Preguntas:
1. Por qu la IgM en el nio est positiva? 2. Por qu la IgG en el nio est positiva? 3. Explique porqu la madre es IgM negativa? 4. Explique porqu la madre es IgG positiva? 5. Qu se debe hacer en un posible segundo embarazo?
Caso No. 2
Madre que da a luz un nio aparentemente sano. Al examen fsico el neonato no presenta signos de anomalas congnitas. Ella refiere que le diagnosticaron rubola durante el embarazo, sin precisar la fecha en la que ocurri el diagnstico. Al efectuar exmenes de laboratorio, la madre tiene IgG positiva anti rubola y el nio IgM positiva.
Preguntas:
1. Porqu el nio a pesar de tener IgM positiva anti rubola no presenta signos clnicos? 2. Cual es el diagnstico del neonato?
Caso No. 3
Nio de 10 meses, naci el Paraje Xecococh de Santa Maria Chiquimula, Totonicapn, parto atendido en su casa por una vecina. Es llevado a consulta ya que la madre ha observado que su desarrollo psico motor es mucho menor que el de sus hermanitos cuando tenan la misma edad. Refiere que no responde adecuadamente (a estmulos visuales ni auditivos), y que le ve los ojos opacos. En la historia clnica efectuada a la madre, refiere no haber sido nunca vacunada contra la rubola, ha tenido 3 embarazos y 3 partos, tres hijos vivos, los dos mayores estn sanos. No recuerda si durante el embarazo de su tercer hijo tuvo alguna enfermedad que le provocara rash, auque si recuerda que se ausent de sus labores (en una tortillera )por 5 das por una enfermedad febril, la cual no fue diagnosticada ni tratada por medico, tampoco tuvo control pre natal ni ha vacunado a sus hijos.
En los exmenes de laboratorio se encuentra:
Madre. Con IgM negativa e IgG positiva para rubola Nio: IgM negativa e IgG positiva para rubola
Preguntas:
1. Por qu el nio tiene IgM negativa? 2. Por qu la IgG se encuentra alta? 3. Cul es el diagnstico del nio? 4. Cules clulas de la respuesta inmune participan en la produccin de IgM e IgG, 5. Cules son las clulas que cooperan para que se realice el cambio isotpico IgM a IgG 6. Cules citoquinas actan para que se realice el cambio isotpico?
IV. Mtodo ELISA:
Deteccin de anticuerpos anti virales: Para ilustrar este ejemplo, se hizo un test de Ensayo inmuno enzimtico en fase slida ELISA- el cual se prepar previamente en el laboratorio y del que nicamente veremos los resultados. La prueba se realiza de la siguiente manera:
1. Adherir un antgeno (virus de la rubeola) a una microplaca de polietileno (fase slida), ocurre a pH alcalino por una hora.
2. Lavar con buffer: (para eliminar todas las sustancias no especificas y el exceso de antgeno)
3. .Agregar el suero del paciente previamente diluido (segn indicaciones de la estandarizacin previa), incubar a 37 grados 1 hora. (En este paso, se combinan los anticuerpos del paciente con los antgenos disponibles en la placa de poliestireno)
4. Lavar con buffer (eliminacin del exceso de anticuerpos y otros componentes presentes en el suero del paciente)
5. Agregar un segundo anticuerpo denominado conjugado, (anti IgG o anti IgM) marcado con una enzima (peroxidasa), incubar por 1 hora. (este paso es muy importante porque dependiendo de la clase de anticuerpo que se use, ser la clase de anticuerpo que se detecte.
6. Lavar con buffer (eliminacin de exceso de conjugado)
7. . Agregar el sustrato correspondiente a la enzima y ver el cambio de color.
Leer los resultados en un lector de ELISA con un filtro de 450 nm. Este lector interpretar la densidad ptica del color emitido por el sustrato. A mayor concentracin de sustrato mayor densidad ptica. Esto representa una mayor concentracin de anticuerpos en un paciente. Ver la fotografa de los datos en lector.
Para cada placa de ELISA, colocar Controles positivos y negativos para garantizar que todo el funcionamiento del sistema es adecuado.
Placa de ELISA
Pantalla del lector de ELISA
1 3 2 4 1
1
5 6 7 7 [Escriba una cita del documento o del resumen de un punto interesante. Puede situar el cuadro de texto en cualquier lugar del documento. Utilice la ficha Herramientas de cuadro de texto para cambiar el formato del Negativo Positivo Lecturas obligatorias:
Inmunologa. David Male et. Al. Captulos 1,2, y 3 (ya tratados en clase)