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Universidad de San Carlos de Guatemala

Facultad de Ciencias Mdicas


Unidad Didctica de Inmunologa y Microbiologa
2013



Actividad Prctica : Respuesta Inmune Primaria y Secundaria

Carmen de Tercero MD. MSc



I. Objetivos:

1. Comprender la importancia de la respuesta inmune primaria y
secundaria.
2. Diferenciar las inmunoglobulinas que participan en la respuesta inmune
primaria y secundaria.
3. Comprender los elementos de la inmunidad que participan para que se
de el cambio isotpico IgM a IgG.
4. Conozca los mtodos de deteccin y anticuerpos IgG e IgM por el
mtodo de ELISA.
5. Comprender la memoria inmunolgica.
II. Introduccin:

La respuesta inmune primaria y secundaria, hacia los agentes infectivos, se
puede evaluar por mtodos de laboratorio, lo cual tiene una aplicacin muy
importante en el diagnstico clnico de las enfermedades infecciosas. A
continuacin se presentan cuatro situaciones clnicas, las que solicitamos que
discuta a profundidad con el docente, analizando todos los elementos (clulas y
molculas) que participan en la generacin de la respuesta inmune primaria y
secundaria.
Adems se tiene el propsito de ilustrar a los estudiantes algunos mtodos en
la identificacin de anticuerpos IgM e IgG, los cuales se elevan en la respuesta
inmune primaria y secundaria respectivamente. Tomando como base terica la
discusin de los casos clnicos, para que identifique la presencia de ttulos de
anticuerpos especficos detectados por el mtodo de anlisis inmuno
enzimtico ELISA-

III. Casos Clnicos:

Caso 1:

Madre de 16 aos de edad que recuerda haber tenido un exantema durante el
primer trimestre del embarazo. El recin nacido de sexo femenino, presenta
comunicacin interventricular e interauricular y el cardilogo solicita evaluacin
oftalmolgica. La nia tiene anoftalmia en el lado izquierdo y una microcrnea y
una esclerocrnea en el lado derecho.
Exmenes de laboratorio:

Madre: IgG anti virus de la rubola positivo e IgM negativo
Recin Nacido: IgM anti rubola positivo

Preguntas:

1. Por qu la IgM en el nio est positiva?
2. Por qu la IgG en el nio est positiva?
3. Explique porqu la madre es IgM negativa?
4. Explique porqu la madre es IgG positiva?
5. Qu se debe hacer en un posible segundo embarazo?

Caso No. 2

Madre que da a luz un nio aparentemente sano. Al examen fsico el neonato
no presenta signos de anomalas congnitas. Ella refiere que le diagnosticaron
rubola durante el embarazo, sin precisar la fecha en la que ocurri el
diagnstico. Al efectuar exmenes de laboratorio, la madre tiene IgG positiva
anti rubola y el nio IgM positiva.

Preguntas:

1. Porqu el nio a pesar de tener IgM positiva anti rubola no presenta
signos clnicos?
2. Cual es el diagnstico del neonato?

Caso No. 3

Nio de 10 meses, naci el Paraje Xecococh de Santa Maria Chiquimula,
Totonicapn, parto atendido en su casa por una vecina. Es llevado a consulta
ya que la madre ha observado que su desarrollo psico motor es mucho menor
que el de sus hermanitos cuando tenan la misma edad. Refiere que no
responde adecuadamente (a estmulos visuales ni auditivos), y que le ve los
ojos opacos. En la historia clnica efectuada a la madre, refiere no haber sido
nunca vacunada contra la rubola, ha tenido 3 embarazos y 3 partos, tres hijos
vivos, los dos mayores estn sanos. No recuerda si durante el embarazo de su
tercer hijo tuvo alguna enfermedad que le provocara rash, auque si recuerda
que se ausent de sus labores (en una tortillera )por 5 das por una
enfermedad febril, la cual no fue diagnosticada ni tratada por medico, tampoco
tuvo control pre natal ni ha vacunado a sus hijos.

En los exmenes de laboratorio se encuentra:

Madre. Con IgM negativa e IgG positiva para rubola
Nio: IgM negativa e IgG positiva para rubola

Preguntas:

1. Por qu el nio tiene IgM negativa?
2. Por qu la IgG se encuentra alta?
3. Cul es el diagnstico del nio?
4. Cules clulas de la respuesta inmune participan en la produccin de
IgM e IgG,
5. Cules son las clulas que cooperan para que se realice el cambio
isotpico IgM a IgG
6. Cules citoquinas actan para que se realice el cambio isotpico?

IV. Mtodo ELISA:

Deteccin de anticuerpos anti virales: Para ilustrar este ejemplo, se hizo un
test de Ensayo inmuno enzimtico en fase slida ELISA- el cual se prepar
previamente en el laboratorio y del que nicamente veremos los resultados. La
prueba se realiza de la siguiente manera:

1. Adherir un antgeno (virus de la rubeola) a una microplaca de polietileno
(fase slida), ocurre a pH alcalino por una hora.

2. Lavar con buffer: (para eliminar todas las sustancias no especificas y el
exceso de antgeno)

3. .Agregar el suero del paciente previamente diluido (segn indicaciones
de la estandarizacin previa), incubar a 37 grados 1 hora.
(En este paso, se combinan los anticuerpos del paciente con los
antgenos disponibles en la placa de poliestireno)

4. Lavar con buffer (eliminacin del exceso de anticuerpos y otros
componentes presentes en el suero del paciente)

5. Agregar un segundo anticuerpo denominado conjugado, (anti IgG o anti
IgM) marcado con una enzima (peroxidasa), incubar por 1 hora. (este
paso es muy importante porque dependiendo de la clase de anticuerpo
que se use, ser la clase de anticuerpo que se detecte.

6. Lavar con buffer (eliminacin de exceso de conjugado)

7. . Agregar el sustrato correspondiente a la enzima y ver el cambio de
color.

Leer los resultados en un lector de ELISA con un filtro de 450 nm. Este
lector interpretar la densidad ptica del color emitido por el sustrato. A
mayor concentracin de sustrato mayor densidad ptica. Esto
representa una mayor concentracin de anticuerpos en un paciente. Ver
la fotografa de los datos en lector.


Para cada placa de ELISA, colocar Controles positivos y negativos para
garantizar que todo el funcionamiento del sistema es adecuado.



Placa de ELISA

Pantalla del lector de ELISA









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Lecturas obligatorias:

Inmunologa. David Male et. Al. Captulos 1,2, y 3 (ya tratados en clase)

Enfermedades Infecciosas. Krugman- Katz-Gershon-Wilfert, 8a edicin.
Capitulo 24.

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