Analisis

1.8. Calibracin.
Segn ISO (International Estndar Office), se entiende por calibracin al conjunto

de operaciones que permiten establece, bajo condiciones especficas, la relacin entre las seales
producidas por un instrumento analtico y los correspondientes valores de concentracin [ ] o masa
del juego de patrones de calibrado.

El procedimiento consiste en que el operario prepara una serie de muestras (5-6) con [ ]
conocida de analito, las mide en el instrumento en iguales condiciones y seguidamente medir las
muestras problema. De esta manera, a partir de la seal obtenida para cada patrn de [ ] conocida
se construye la grfica de calibracin, y a partir de esta se interpola la [ ] del analito en las
muestras problema.

Figura. Nro. 27. Conjunto de operaciones en el proceso de calibracin en qumica analtica. LS=Recta global por mnimos
cuadrados de regresin, es muy sensible a los valores atpicos.
Fuente: www.uclm.es/profesorado/.../4-ESPECTROSCOPIA%20ATOMICA.pdf.(Abril 2012)

El procedimiento anterior presenta varias preguntas estadsticas:

1. Es lineal la grfica de calibracin?, y si es curva Qu grafica tiene?
2. Teniendo en cuenta que cada uno de los puntos de la grfica est sujeto a errores, Cul es la
mejor recta que pasa por esos puntos?
3. Suponiendo que la calibracin es lineal, Cules son los errores estimados y los lmites de
confianza para la pendiente y la ordenada en el origen?
4. Cuando la grfica se usa para el anlisis de una muestra problema, cules son los errores y los
lmites de confianza para una [ ] determinada?
5. Cul es el lmite de deteccin del mtodo, es decir, la menor [ ] de analito que se puede
detectar con un nivel de confianza predeterminado?
Tabla Nro. 20 Relacin entre los tipos de ensayo los parmetros de desempeo

Fuente: http://www.lysconsultores.com/Descargar/NT004.pdf

Figura. Nro. 28. Criterios de la calidad de una calibracin analitica.
1.8.1. Calidad de una calibracin. La calidad de la determinacin de una concentracin no puede
ser mejor que la calidad intrnseca de la calibracin. Los factores que determinan la calidad de una
calibracin son:
a. La precisin de las medidas: estimada a travs de la repetitividad y la reproducibilidad de
las medidas. La repetitividad se evala a travs del clculo de la desviacin estndar relativa
(RSD%) de la medida de los patrones de calibrado. En la prctica puede ocurrir que la repetitividad
para los patrones sea ms pequea que para las muestras, por lo que ser necesario fabricar
patrones similares a las muestras o agregar el analito a las mismas.

b. Exactitud de los patrones. Es esencial que los patrones de calibracin cubran el intervalo
completo de [ ] requerido en los anlisis en los que se encuentran las muestras problemas. Valor
de concentracin o masa asignado a cada patrn trae aparejado un error pequeo si es preparado
a partir de reactivos puros (grado analtico) con estequiometria bien definida. Este error en general
se desprecia, frente al error en las medidas de las seales producidas por el instrumento.

c. La [ ] de las muestras problema se calcula por interpolacin, a excepcin del mtodo de la
adicin de estndar, que se hace por extrapolacin.
d. Es importante incluir una muestra en blanco en la curva de calibracin. Esta muestra no contiene
ningn analito, pero si contiene la misma composicin que las otras muestras estndar de
referencia, y est sujeta a la misma secuencia del proceso analtico. La respuesta podra ser cero,
pero por impurezas de reactivos u otras causas pueda no ser as.
e. La curva de calibracin se presenta siempre con la respuesta del instrumento en el eje de las
ordenadas y la [ ] de los patrones en el eje de abscisas.
f. Validez de la calibracin. Generalmente es el factor ms importante. Cuando se calibra un
instrumento se debe tener una razonable certeza de que ste responder de igual manera a
los patrones as como a las muestras, aunque estas tengan una matriz relativamente
diferente*. Si estas diferencias son muy grandes, pueden llegar a invalidar el proceso de
calibracin. Es necesario estar completamente seguro de que el calibrado del instrumento es
vlido antes de utilizarlo para obtener el valor de la concentracin de la muestras incgnita.
En caso contrario, pueden cometerse serios errores en la determinacin. Muchas veces, el
uso de instrumentos verificados legalmente dentro de un sistema de calidad puede presentar
problemas, ya que slo se indican los EMP (errores mximos permitidos), sin la determinacin de
la incertidumbre. http://www.labci.com.ar/nota04.html
Cuadro Nro. 17 Calibracin y regresin
Patrones de
calibracin
1. Concentracin conocida
2. Cubrir el rango de concentracin de las muestras a analizar en
los ensayos
3. Mismoas disolventes y reactivos qque en el ensayo
4. Matriz lo ms parecida posible que la muestra real
5. Incluir el blkanco en la curva (no restar)

Grfica de
calibracin
1. Seal instrumental en ordenadas
2. Concentracin, cantidad en abcisa
3. Habitualmente lineal y= a + bx
Errores 1. Coeficiente de variacin de seal instrumental de 2-3%
2. Preparacin del patrn < 0.1% (despreciable)
3. Si se realiza varias medidas punto calibracin: Distribucin
gaussiana normal.
Fuente: www.slideshare.net/todocello/tema-4-calibraciones-y-regresin-3946691

1.8.2. Grafica de calibracin. En esta tcnica se preparan una serie de soluciones estndar que
contienen [ ] conocidas del analito teniendo en cuenta los puntos antes sealados. Dichas
soluciones deben cubrir el intervalo de [ ] de inters, asi como tener una composicin matricial tan
parecida como se pueda a la de las soluciones de las muestras problema. Tambin se analiza una
solucin en blanco de fondo.
Generalmente hay una relacin lineal entre la seal analtica y, y la [ ] x. Por ello los datos se
ajustan a una recta por el mtodo de mnimos cuadrados, es decir, minimizando la suma de los
cuadrados de los residuos y. Una vez establecida la grfica de calibracin se puede obtener la [ ]
de analito en cualquier muestra problema por interpolacin del valor en dicha recta: Seal =
constante x concentracin
y = m x (18)

La constante m es llamada sensibilidad y corresponde a la constante de proporcionalidad entre la
seal y la concentracin. Esta proporcionalidad es til sobre un restringido intervalo de valores.
A valores muy bajos de concentracin la seal es demasiado pequea y est sujeta a una
gran incertidumbre. A valores muy altos la proporcionalidad dada en ecuacin (18) puede
dejar de ser vlida. Este modelo es utilizado en muy pocos casos.
Si la respuesta a concentracin cero de analito no es conocida de antemano, es necesaria una
calibracin con un mnimo de dos puntos. Para esta calibracin se utiliza un modelo lineal con un
trmino constante:
Seal = seal del blanco + constante x concentracin

y = m x + b (19)

El trmino b indica la magnitud de la seal estimada del blanco, mientras que m es la pendiente de
la recta de calibrado e indica nuevamente la sensibilidad.
Estadsticamente, una calibracin realizada a partir de dos puntos es muy pobre y su
construccin a partir de un nmero mayor de patrones es obligatoria. El procedimiento
estadstico para determinar los coeficientes b y m de la ecuacin (19) se denomina regresin por
cuadrados mnimos.

Figura. Nro. 29. Mtodos instrumentales de establecer la relacin seal/concentracin. Fuente:
www.slideshare.net/todocello/tema-4-calibraciones-y-regresin-3946691

La regresin por cuadrados mnimos es una herramienta muy til, sin embargo, deben conocerse
sus limitaciones. Adems de la regresin por cuadrados mnimos siempre debe hacerse una
inspeccin grfica de los datos obtenidos, para detectar puntos anmalos test Q de Dixon valores
dudosos o fallas en la linealidad. Las ecuaciones mediante las que se obtienen los coeficientes de
la ecuacin (19) se detallan en la prxima seccin.

a. Por qu se prefiere la calibracin lineal? Esta apoyado por un soporte terico (Ley de
Lambert-Beer, ecuacin de Ilkovic y otros), el tratamiento matematico es mas sensillo y ms
intuitivo, la sensibilidad es constante en la regin de calibrado y a cada valor de la seal analtica le
corresponde un nico valorde concentracin.

Figura. Nro. 30. Utilizar los datos para adaptar a una lnea de prediccin que relacione una variable dependiente y una sola
variable independiente x. Es decir, queremos escribir y como una funcinlineal de x: y = + x +.
Linea verdadera (true line).
a. Por qu se prefiere la calibracin lineal? Esta apoyado por un soporte terico (Ley de
Lambert-Beer, ecuacin de Ilkovic y otros), el tratamiento matemtico es mas sensillo y ms
intuitivo, la sensibilidad es constante en la regin de calibrado y a cada valor de la seal analtica le
corresponde un nico valor de concentracin.
1.8.3. Clculo de la recta de regresin por mnimos cuadrados. Es la recta que minimiza la
suma de los cuadrados de los residuos, se establece una recta lineal que relaciona x e y. Para el
modelo de la ecuacin (19) los puntos individuales sobre la recta los denotaremos como:{(x
1
, y
1
) =
blanco, (x
2
,y
2
), (x
3
,y
3
)} siendo el primer punto el corresponde a la lectura del blanco. Como los
residuos de y, algunas veces sern negativos y otros positivos, se intenta minimizar la suma de los
cuadrados de los residuos. Esto explica el uso del trmino de minimos cuadrados, por lo que
la recta buscada pasa por el centro de gravedad, y su pendiente y su ordenada en el origen
sern:

b
(
)(
(20) a = (21)

Donde: , son promedio aritmticos de los valores de x (patrones de concentracin = [ ]) y
valores de y (seales). En la ecuacin (20), el numerador es simbolizado S
xy
y el
denominador S
xx
la expresin:

S
yy
(
Se denota con el smbolo S

yy

Ejemplo Con la pendiente y la ordenada en el origen se construye la recta de regresin de y sobre
x: y = 1.93x +1.52 (22)

Figura Nro. 31. Grafica de una recta de regresin. Fuente:www.slideshare.net/todocello/tema-4-
calibraciones-y-regresion-3946691.

Este mtodo es ampliamente utilizado en todas las ramas de las ciencias, encontrndose
incorporado en muchas calculadoras y planillas de clculo.

La calidad de la calibracin se evala prediciendo el valor de la seal , para los distintos patrones
a travs del modelo utilizado (ecuacin 22). Las diferencias entre la seal observada y las
predichas se denominan residuos. A partir de estos valores se calcula:
http://www.slideshare.net/todocello/tema-4-calibraciones-y-regresin-3946691

[S
y/x
para (N-2)] (23)

S
y/x
es llamada desviacin estndar residual y tiene unidades correspondientes a la seal
observada. Tambin se la conoce como s
y/x
en el texto de Miller o como s
e
en otros textos.Es una
estimacin de los parmetros de regresin.Se emplea N-2 grados de libertad para una regresin
lineal simple, ya que hay N datos disponibles.

Es importante conocer las limitaciones del mtodo de cuadrados mnimos. Al deducir las
ecuaciones anteriores fueron realizadas algunas suposiciones. Estas no siempre se cumplen en
un problema de qumica analtica, por lo que debemos estar atentos. Las suposiciones que
se realizan son:

Figura Nro. 32. Los errores de la pendiente y ordenada en el origen parecida a la desviacin
estndar de medidas repetidas de una distribucin gaussiana excepto que ahora trabajamos con
una recta (n-2). Fuente: http://www.slideshare.net/todocello/tema-4-calibraciones-y-regresin-
3946691

a. La incertidumbre en la concentracin de los patrones es despreciable frente a la desviacin
estndar de la seal medida. Para ello los patrones de calibrado deben ser preparados con una
precisin superior a la de la medicin de la seal.

b. Todas las medidas son estadsticamente independientes unas de otras. Cualquier tendencia de
las seales a travs del tiempo (deriva de la lnea de base o contaminaciones secuenciales)
invalida el calibrado.
c. Todas las medidas tienen igual desviacin estndar, la cual no depende del valor de la seal
observada, por lo tanto las seales altas tendrn igual desviacin estndar que las pequeas. Esta
suposicin es particularmente discutible si se trabaja en un amplio intervalo de concentraciones.
Si no se cumple, es necesario utilizar un mtodo de calibracin ponderado por las desviaciones
estndar de las medidas.
d. Las medidas estn normalmente distribuidas. En general, el error en una medida analtica es
una suma de errores independientes provenientes de distintas partes del instrumento. Aunque el
error de cada fuente individual no sea normalmente distribuido, la suma de esas contribuciones,
producir una distribucin normal.

De todas las suposiciones anteriores, la ms dbil es la tercera, porque en general a bajas
concentraciones, la precisin de las medidas empeora. Una buena aproximacin puede realizarse
restringiendo el intervalo en el cual se realiza la curva de calibracin, de manera que la precisin
sea constante. Si no se desea disminuir el rango lineal, se debe hacer una regresin ponderada.
La ecuacin (24) se usa para calcular la concentracin de una muestra incgnita:

(24)

Figgura Nro. 33. Los errores de estos parmetros se calculan a partir de la varianza de regresin,
que estiman los errores aleatorios en la direccin y. Nro.xxx Fuente:

Para controlarla calidad de la informacin obtenida se puede establecer el intervalo de confianza
del modelo. La desviacin estndar (mas correctamente llamada error estndar) de la pendiente,
s
m
. Desviacin estndar de la pendiente.

S
b

Intervalo de confianza de la pendiente: b t

(n-2)
S
b
(25)

La desviacin estndar de la pendiente S
b
(error estndar) y de la ordenada S
a
al origen
es:

S
b

S
a
= S
R

(26)

= puntos sobre la recta de regresin calculada, correspondientes a los valores de x, es decir; los
valores de y ajustados. El valor de para un valor de x dado, se calcula a partir de la ecuacin de
regression. Los valores de S
m
y S
b
se pueden utilizar para estimar los lmites de confianza para la
pendiente y la ordenada en el Origen. As, los lmites de confianza para la pendiente viene
dados por:

b= t
(n-2)
S
b
con t que se obtiene para un nivel de confianza deseado y n-2 grados de libertad.
De manera similar, los lmites de confianza para la ordenada en el origen son:
a= t
(n-2)
S
a

Intervalo de confianza de la ordenada en el origen: a t
(n-2)
S
a

Prediccin en muestras incognitas. Los valores de b y a se requieren para realizar predicciones
en muestras incognitas, a travs de la ecuacin: y = bx +a, donde puede obtenerse la
concentracin estimada del analito en la muestra: x
inicial =
(y
inicial
- a)/b

Figura. Nro.34. Fuente: http://www.slideshare.net/todocello/tema-4-calibraciones-y-regresin-394669
Si tenemos una muestra de seal y
o
se puede calcular la concentracin correspondiente a la
misma como:

Un resultado no es tal, sin embargo, si no est acompaado por su correspondiente nivel de
incetidumbre. Para informar x
inic
con su incertidumbre asociada, y establecer su nmero correcto de
cifras, es necesario calcular el error estndar en la concentracin predicha Sx
inic,
lo cual se lleva a
cabo mediante la siguiente expresin

S
xinic

Siendo: (27)

y
inic
= Valor de la seal experimental de la muestra
N = Nmero de patrones utilizados en calibracin
x
inic
= Concentracin de patrones de calibracin.
L = Repeticiones de la medida de la muestra.
Sy/x = es el desvio estndar de los residuos de la regresin dado por la ecuacin (26)
Intervalo de confianza de la concentracin interpolada

La ecuacin (27) permite calcular la desviacin estndar para la concentracin obtenida a
partir de la media
de un conjunto de L anlisis repetidos cuando se usa una curva de

calibracin de N puntos. Recurdese que es el promedio de la seal obtenida para los N datos
de la calibracin. A medida que el valor de la seal
x
se acerca al valor promedio el error de la
determinacin disminuye, por lo que es mejor determinar muestras cuyo valor de seal se
encuentre en el centro de la curva de calibrado. Cuantas ms veces se repite el anlisis de la
muestra incgnita, mayor ser L y por lo tanto menor ser la desviacin estndar. El diseo de
la curva de calibrado tambin es importante, puesto que S
xx
debe ser pequeo. Esto se logra
aumentando la cantidad de patrones en los extremos de la curva de calibrado. La raz cuadrada de
la ecuacin (27), y la segunda con los trminos: que colectivamente recibe el
nombre de de leva (del ingls). La leva mide, de algn modo, la distancia de la muestra incognita
al centro de la calibracin.

Cmo expresamos la incertidumbre del resultado de una muestra incgnita? Esto se hace
en base a un intervalo de confianza para el promedio de concentraciones obtenidos mediante L
anlisis repetidos de la muestra. Puesto que en general el nmero de muestras utilizado en la
calibracin es pequeo se debe utilizar el parmetro t para generar un intervalo de confianza.

Este intervalo de confianza de la concentracin interpolado se calcula mediante la ecuacin (28).
Los resultados para una muestra incgnita se expresan como:

(28)

Donde t depende del nmero de muestras realizadas en la calibracin y del intervalo de confianza
deseado (ver tabla 14,15,16 y 17 Pag. Nro. 42). No debemos olvidar el correcto redondeo de las
cifras decimales, que deber hacerse cuando se hayan finalizado los clculos.

e. mbito Lineal del calibrado. Una parte importante de la tarea de calibracin de un instrumento
analtico es determinar el intervalo de concentraciones para el cual el modelo lineal es vlido. Hay
tres maneras de verificar esto, ninguna de ellas excluye a las otras.

Diagrama. Nro. 04. Representacin de la correlacin de Pearson.Fuente:
aprendeenlinea.udea.edu.co/lms/moodle/mod/.../view.php?

La primera, es la investigacin del grfico de residuos en funcin de la concentracin.
Los residuos deben ser todos de la misma magnitud y deben estar distribuidos aleatoriamente en
su signo (en una secuencia del tipo etc.). Si esto no fuese as, debe sospecharse una relacin
no lineal entre x e y por lo que debe disminuirse el rango de trabajo, o bien aplicar otro modelo, si
la teora as lo permite.
Otra manera de verificar la validez del modelo lineal es mediante el clculo del coeficiente de
correlacin (r) de Pearson: resumen:

r
,(
)(
)-
,(
-,(
-
-1 (29)
b

b Pendiente Sensibilidadinstrumental: a , Ordenada en el origen.

El coeficiente de correlacin vale 1 o 1 en el caso de que las variables estn perfectamente
correlacionadas, pero no debe mal interpretarse puesto que un coeficiente de correlacin de 1, no

+1 -1
0.90
0.70
0.50
0
Buena
Dbil
Poca Psimo

necesariamente significa que la linealidad sea buena, sino que el numerador y el denominador de
la expresin anterior se cancelan mutuamente. Es comn obtener buenos coeficientes de
correlacin con rectas de regresin que no responden a un modelo lineal. El coeficiente de
correlacin slo es otro indicio adicional que debe sumarse al anlisis de los residuos.

En ocasiones se obtienen valores de r ms bajos, siendo necesario utilizar una prueba estadstica
para establecer si r es realmente significativo. El mtodo ms simple es calcular un valor de t
usando la ecuacin:

()
(
)
(30)

Este valor est tabulado y se compara usando una prueba t de dos colas y (n-2) grados de libertad.
Si t calculada es mayor que t terico, se puede asegurar que existe una correlacin significativa.
Tambin se pueden calcular los lmites de confianza de la pendiente y de la ordenada en el origen,
y comparar que estos parmetros estn incluidos dentro de estos lmites.

1.8.4. El tercer mtodo es el anlisis de la varianza de la regresin. El anlisis de la varianza
(ANOVA) puede utilizarse para detectar una falla de ajuste en la regresin. Muchas planillas de
clculo realizan este clculo automticamente. Para realizar este anlisis de forma completa,
se necesitan datos replicados para cada patrn.

Test F de Linealidad. Este Test se basa en descomponer la varianza existente entre las seales
experimentales y los valores predichos en dos aportes. Uno de ellos es el error experimental.
Para tener una estimacin del error experimental en la medicin de las seales, debemos medir i
replicados de cada patrn, por lo que para cada punto x habr varios valores de seal (y
i
). Para
estimar la varianza debida al error puramente
Experimental, calculamos la media de los cuadrados debida a esta contribucin (MS
PE
, Mean
Squares Pure Error): (La media de cuadrados de error puro)

MS
PE

(
(31)

Donde n es el nmero total de mediciones, k es el nmero total de patrones, i son las repeticiones
de cada patrn y los y
ij
son las seales de todos los experimentos.

Para estimar el posible error debido a una falla de ajuste debida a la eleccin de un modelo
incorrecto, calculamos la media de los cuadrados debida a la falta de ajuste (MS
LOF
, Mean
Squares Lack of Fit): (Media de los Cuadrados falta de ajuste)

MS
LOF

(32) F
cal

(33)

Esto mide la diferencia media entre la media de las rplicas de cada patrn y su correspondiente
valor estimado por la regresin. Cabe esperar que si el modelo lineal es correcto, las varianzas
MS
LOF
y MS
PE
sern comparables. Si MS
LOF
es mayor que MS
PE
el ajuste no es correcto y hay que
utilizar otro modelo o reducir el mbito de concentraciones en el cul se hace el calibrado.

Para comparar M
LOF
y MS
PE
hacemos un test F de varianzas calculando (33)
Si Fcal < Fk-2, n-k,o (obtenido de tablas) se acepta que existe buen ajuste al modelo lineal. Los
clculos de ANOVA pueden ser un poco engorrosos y se recomienda el uso de planillas de
clculo que facilitan mucho la tarea.

1.9. Adicin de estndar y estndar interno. En el mtodo del adicin de estandar se le
agrega a la muestra, concentraciones crecientes del analito de inters. La seal obtenida se
deber a la cantidad de analito originalmente presente en la muestra sumada a la cantidad
agregada.

El propsito de estos mtodos es generalmente corregir efectos de interferencias multiplicativas
(las interferencias multiplicativas son aquellas que producen un cambio en la concentracin)
debidas a la matriz de la muestra. Una vez obtenidas, la seales instrumentales se grafican
versus las cantidades de analito aadidas.

Figura. Nro. 35. Mtodos de calibracin en instrumentacin.
1.9.1. Mtodo de adicin de estndar. Otra solucin consiste en realizar todas las medidas sobre
la muestra problema, esto se consigue usando el mtodo de la adicin estndar. Este mtodo
consiste en tomar volmenes iguales de problema, aadir a cada uno por separado cantidades
distintas de analito, excepto a una de las muestras, y finalmente diluir todas las muestras al
mismo volumen final. Seguidamente se determinan las seales instrumentales para cada
disolucin y se representan los resultados.

La escala de concentracin (x) se define con las [ ] concentraciones de analito agregadas a las
soluciones muestra. Por tanto, la [ ] desconocida est dada por el punto en el cual la lnea
extrapolada corta al eje x, es decir, el valor de x para y = 0. Este valor es igual a la razn de la
ordenada en el origen y la pendiente de la recta de regresin establecida por mnimos cuadrados.

b y a estn sujetos a error, as el valor calculado para la [ ], tambin lo estar. Pero en este
caso el resultado no se obtiene a partir de medidas de una sola muestra, por lo que, la desviacin
estndar del valor extrapolado se calcula de la siguiente forma: (35). La recta de regresin se
calcula de manera usual. Para conocer la concentracin de la muestra incgnita se extrapola la
recta al punto sobre el eje x donde y=0. La interseccin negativa sobre el eje x corresponde a la
cantidad de analito en la muestra problema. Este valor viene dado por a/b. En este caso los
resultados se expresan como:

(34)
()
(35)

En esta expresin no aparece L como en la expresin (27), puesto que no se hacen rplicas de
cada muestra, sino que se hace un agregado patrn por cada una de ellas. Esto demanda mucho
tiempo y esfuerzo. No debemos olvidar que para obtener el valor de concentracin en la muestra
original, debemos corregir al valor de x y a su incertidumbre, por las diluciones hechas.Fuente:
http://es.scribd.com/doc/42087016/Calibracion-y-Limite-de-Deteccion-en-Tecnicas-Instrumentales.

Figura. Nro.36. La adicin de patrn es apropiada cuando la composicin de la muestra es
desconocida o compleja y afecta a la seal analtica. Fuente:

Puede observarse que al aumentar N mejora la precisin de la cantidad estimada, siendo
necesarios al menos 6 puntos en un experimento de este tipo. Adems se mejora la precisin
maximizando esta cantidad, por lo que, el intervalo de [ ] a cubrir por las disoluciones de calibracin
debe ser lo ms amplio posible.
Los lmites de confianza para la [ ] del analito en la muestra problema vendrn dados por:
[C
Analito
] = x
E
t Sx
E
Diagrama Nro. 05: Lectura del analito con agregado patrn
Esta es una representacin para orientar al alumno cuando tiene que desarrollar sus prcticas de
laboratorio.

Figura. Nro. 37. Representacin grfica del mtodo de adicin de un patrn en la solucin
problema. Fuente: www.slideshare.net/todocello/tema-4-calibraciones-y-regresin-3946691

Figura. Nro.38. La incertidumbre de la concentracin por adicin de patrn, mtodo de
extrapolacin. Fuente: http://www.slideshare.net/todocello/tema-4-calibraciones-y-regresin-394669

1.9.2. Mtodo de estndar interno. Una cantidad fija de una sustancia pura (estndar interno), se
aade tanto a las soluciones muestra como a las soluciones estndar.

Figura. Nro. 39. Adicin de un patrn interno en la solucin problema. Fuente:
www.slideshare.net/todocello/tema-4-calibraciones-y-regresin-3946691

El estndar interno debe ser una sustancia similar al analito con una seal fcilmente medible y
que no interfiere con la respuesta del analito. Despus se determinan las respuestas del analito y
del estndar interno, y se calcula el cociente de las dos respuestas. De esta manera, si s varia
algn parmetro que afecte a las respuestas medidas, dichas respuestas del analito y del estndar
interno, deben ser afectadas por igual. Por tanto, el cociente de respuestas depende solamente de
la concentracin de analito.

Figura. Nro.40. La incertidumbre de la concentracin por adicin de patrn, mtodo de
extrapolacin. Fuente: http://www.slideshare.net/todocello/tema-4-calibraciones-y-regresin-394669

Una representacin de la relacin o cociente de respuestas analito a estndar interno como funcin
de la [ ] del analito, da una grfica de calibracin cuyo ajuste se hace por mnimos cuadrados.

1.9.3. Parmetros caractersticos. El primer objetivo de un proceso de medicin en el laboratorio
debe ser alcanzar su control estadstico
a. Lmite de Deteccin. En Anlisis Instrumental, debemos aprender a elegir la tcnica correcta
para cumplir con nuestro anlisis. Para ello, debemos comparar muchas figuras de mrito de
cada mtodo. Las figuras de mrito forman una base comn sobre las que se pueden comparar los
mtodos analticos.

Ya hemos visto algunas figuras de mrito, como ser la sensibilidad, la exactitud y la
precisin. Otra figura de mrito importantsima es el Lmite de Deteccin. Puede definirse como
aquella que proporciona una seal instrumental significativamente diferente de la seal del
blanco o seal de fondo. El clculo del lmite de deteccin responde la pregunta: Cul es la
menor concentracin que podemos detectar con este mtodo de anlisis? Para responder a esta
pregunta, debemos analizar cul es la menor seal detectable.

Figura Nro. 41. Validacin lmite de Cuantificacin, deteccin y de ruido. Fuente: www.ops-
oms.org/Spanish/AD/THS/EV/bpm-Validacion04.pp

La probabilidad que la ms pequea seal analtica discernible, y
L
, puede ser medida y no
corresponde a una fluctuacin aleatoria de la medida del blanco, y
B
, depende de a cuantas
unidades de desviacin estndar del blanco (s
B
) est y
L
de
(promedio de las medidas del

blanco). Si la diferencia entre y
B
e y
L
es 3s
B
la probabilidad que la medida de y
L
sea una
fluctuacin del blanco es menor que el 0,13% (si el nmero de medidas del blanco es superior a
25). Para determinar la concentracin lmite, x
L
,, IUPAC define que :

(36)
Ideal
Ideal
0.70
0.50
0.90
Muy
buena
Dbil
Donde k es un valor que se elige de acuerdo al nivel de confianza que se desee, generalmente 3.
La concentracin lmite es una funcin de y
L
y por lo tanto:

(37)
En donde x
L
es la seal lmite, obtenida para la concentracin mnima detectable de analito.

Sustituyendo la ecuacin (36) en la (37) se obtiene que: S
B
= desviacin estandar del blanco

(38)

Por lo tanto el lmite de deteccin puede encontrarse dividiendo ks
B
por la pendiente
obtenida por regresin de la curva de calibracin. Sin embargo, la concentracin lmite as
obtenida ser un reflejo del verdadero lmite de deteccin slo si la pendiente, m, y la ordenada al
origen, b, estn bien calculadas.

El mtodo IUPAC utiliza como fuente de variabilidad de las seales, la desviacin estndar del
blanco. Un mtodo alternativo, aunque menos usado, utiliza la desviacin estndar de los
residuales del calibrado s
x
(ecuacin 27) como estimador de la desviacin estndar del blanco.
Esto es til si no se ha repetido el blanco y s
B
no puede calcularse.

El mtodo definido por la ecuacin (37) es vlido solo si la principal fuente de error est en el
blanco. Por lo tanto, en la mayora de los casos este mtodo dar lmites de deteccin ms bajos
que si se tiene en cuenta todo el error del calibrado.
Un detallado artculo sobre lmite de deteccin puede leerse en Analytical Chemistry; 55 (1983)
712A.

Experimentalmente, el lmite de deteccin se determina involucrando todos los factores que
afectan la medida y se define, en general, para obtenerlo en unidades de concentracin como:

LD = 3s
B
/ m
cal
bajas concentraciones (39)

Donde, s
B
= desviacin estndar de los blancos, (b) m
cal
es la pendiente de una curva de
calibracin del sistema, preparada a muy bajas concentraciones. Este criterio es recomendado
por IUPAC.

Aplicado a los mtodos espectrofotomtricos, entonces, s
B
= desviacin estndar de los blancos en
absorbancia y (b) m
cal
pendiente de la curva de calibracin (A vs [C]) en unidades de
Absorbancia/Concentracin, por lo tanto, al calcular la relacin el lmite de deteccin se obtiene en
unidades de concentracin.

Otros autores, utilizan para calcular el lmite de deteccin, la siguiente expresin:

(40)

En donde C
nominal
es la concentracin del patrn de baja concentracin y C
promedio

corresponde al promedio aritmtico, de las concentraciones halladas experimentalmente por
interpolacin (despus de interpolar la absorbancia en una curva de calibracin), de por lo menos
diez replicas de la solucin de baja concentracin. Este criterio aunque no lo recomienda
IUPAC es muy utilizado en diferentes laboratorios.

b. Lmite de cuantificacin: Corresponde a la cantidad o concentracin del analito a partir de la
cual es confiable realizar determinaciones cuantitativas y se define como:

Lmite de cuantificacin = LOQ = 10s
B
/ m
cal bajas concentraciones
(41)

Definicin sugerida recientemente por organismos oficiales de EEUU. En trminos generales
se puede definir l limite de deteccin de un analito, como aquella [ ] que proporciona una seal
instrumental significativamente diferente de la seal de una muestra en blanco, o la seal de fondo.
Significativamente diferente, da al analista un buen margen de libertad para establecer la
definicin exacta del lmite de deteccin. De hecho, en la prctica existe poco acuerdo entre los
Organismos Oficiales sobre este acuerdo.

Una definicin aceptable de lmite de deteccin, que ha sido sugerida recientemente por
organismos de EEUU, es que el lmite de deteccin es la cantidad de analito que proporciona
una seal y e igual a la del blanco ms tres veces la desviacin estndar del blanco:

y
LD
= y
B
+ 3 S
B
(42)

El lmite de cuantificacin o determinacin considerado como el lmite de [ ] ms bajo para
mediciones cuantitativamente precisas, se define como la cantidad de analito que proporciona
una seal y e igual a la del blanco ms diez veces la desviacin estndar del blanco:

y
LQ
= y
B
+ 10 S
B
(43)

En la prctica, cuando se trabaja con una recta de regresin convencional, se puede usar la
desviacin estndar de residuos S
y/x
en lugar de S
B
, y se puede emplear el valor de A = (0,0) como
una estimacin de la seal correspondiente al blanco. Una vez obtenido el valor de y obtendremos
la [ ] correspondiente al lmite de deteccin o cuantificacin, a partir de la recta de calibrado. Para
resolver problemas son definiciones ampliatorias a lo desarrollado anteriormente, pero que
tienen el mismo concepto.

Figura. Nro. 42. Representacin grfica de sensibilidad, LOD, LOQ (S
b
=S
B
) y rango dinmico.
Fuente: www.slideshare.net/todocello/tema-4-calibraciones-y-regresin-3946691

y
LD
= y
B
+ 3 S
B
Luego: b + 3 S
y/x
= m x + b

y
LD
= b + 3 S
y/x
x =
(44)

y = m x + b

c. Rango de trabajo. Es el rango de concentraciones de analito el cual puede producir valores de
absorbancia adecuados para anlisis prcticos. Es imposible ser especfico en definir este rango
debido a que las necesidades analticas pueden ser muy variables. No obstante como una regla
general para un rango de trabajo debiera caer entre 0.1 y 0.8 U. ABS, pues esta es la regin de
mayor precisin ptica. Sin embargo, mediciones tiles pueden ser realizadas a absorbancias
menores, y el rango completo de trabajo puede extenderse hasta el lmite ms bajo que es
alrededor de 10 veces el lmite de deteccin.

Para anlisis con llama, el clculo del rango de trabajo es simple: El fabricante del instrumento
usualmente proporciona la concentracin caracterstica que puede ser esperada para cada
elemento en solucin acuosa. Este valor puede entonces emplearse para establecer un rango
nominal de trabajo.

Figura. Nro. 43. [C
m
] = Concentracin mnima de sustancia apreciable, LC = Lmite De
cuantificacin, LL = Lmite de linealidad. Fuente:
www.uam.es/personal_pdi/ciencias/.../InstrumentalLecc1.pdf

Como la concentracin caracterstica corresponde a 0.0044 U. ABS, un factor 100 proporcionara
0.44 U. ABS (alrededor de la mitad del rango ptimo). Una vez establecido lo anterior resulta fcil
determinar el rango ptimo de trabajo.

d. Rango lineal. El intervalo de [ ] en que es aplicable un mtodo analtico va desde el limite de
cuantificacin hasta la [ ], a la cual, la curva de calibrado se desva de la linealidad (LL). En el lmite
de cuantificacin (LC), figura Nro. 42, la desviacin estndar relativa de las medidas es de
aproximadamente un 10 %, y disminuye con rapidez cuando aumentan las concentraciones [ ].
e. Sensibilidad. La sensibilidad de un instrumento o mtodo se define como, su capacidad para
discriminar entre pequeas diferencias en la [ ] de un analito. La sensibilidad viene limitada por
la pendiente de la curva de calibracin y la reproducibilidad o precisin del sistema de
medida, tambin se define como la pendiente del calibrado, de manera que para dos mtodos
que tengan igual precisin, el que presente mayor pendiente en la curva de calibracin ser el
ms sensible, y viceversa.

La IUPAC, define la sensibilidad como la pendiente de la curva de calibracin a la [ ] de inters.
Como la mayora de las curvas de calibracin son lineales, en ellas la sensibilidad de calibracin es
independiente de la [ ], e igual a la pendiente de la recta de calibrado.
Mandel y Stichler, definen la sensibilidad analtica a una determinada [ ], teniendo en cuenta la
precisin, como:

Donde m= pendiente S
S
= desviacin estndar de las seales.
= sensibilidad analtica.

f. Selectividad. La selectividad de un mtodo analtico durante el grado de ausencia de
interferencias, debidas a otras especies contenidas en la matriz de la muestra.
Desafortunadamente, ningn mtodo analtico est totalmente libre de interferencias, y con
frecuencia deben realizarse distintas operaciones para eliminarlas.
Consideremos una muestra que contiene un analito A, as como dos especies potencialmente
interferentes (B y C), encontrndose en [ ] C
A
, C
B
, C
C
, con sensibilidad de calibracin: ma, mb, mc.
La seal medida en el instrumento vendr dada por:

S
blanco
= ma C
A
+ mb C
B
+ mc C
C
+ S
bl
(45)

Se define el coeficiente de selectividad de B con respecto de A, como:

El coeficiente de selectividad nos da la respuesta relativa del mtodo para la especie B cuando se
compara con A. Anlogamente, el coeficiente de selectividad de C con respecto de A, ser:

Si sustituimos en la ecuacin anterior estos coeficientes, obtenemos que:

S = m
A
(C
A
+ K
B
,
A
C
B
+ K
C
,
A
C
C
) + S
bl
(46)

Los coeficientes de selectividad pueden variar desde 0 en ausencia de interferencias hasta 1
ms. Un coeficiente ser negativo si la interferencia causa una reduccin en la intensidad de la
seal del analito y a la inversa.

Los coeficientes de selectividad son parmetros de calidad tiles para describir la selectividad de
los mtodos analticos, pero son poco usados.
g. Relacin ruido-seal. La seal analtica puede dividirse en dos partes; una causada por los
analitos componentes de la matriz de la muestra y la otra originada por la instrumentacin usada
en la medicin, parte de la seal se conoce como ruido y constituye informacin no deseada, ya
que degrada la exactitud y precisin del anlisis, a la vez que aumenta el lmite de deteccin.
Para una seal cualquiera, la magnitud del ruido se define como la desviacin estndar del valor
de la seal medida, mientras que la seal viene dada por la media de la medida:
S/N =
(47)
Conforme la [ ] disminuye hacia el nivel de trazas, el problema de distinguir las seales respecto al
ruido, se hace cada vez ms difcil, lo que ocasiona una disminucin en la exactitud y presin de
las mediciones a la vez que se aumenta el lmite inferior de la cantidad de analito que se pueda
detectar.
h. Homocedasticidad: Varianza constante del trmino de error. Se refiere al supuesto de que las
variables dependientes exhiban iguales niveles de varianza a lo largo del rango de los valores de
las variables independientes. Cmo evaluarla?

1. Examen visual de los residuos
2. Test de Levene: Igualdad de varianzas, este test es una alternativa al test de Bartlett. El test de
Levene es menos sensible a la falta de normalidad que el de Bartlett. Sin embargo, si estamos
seguros de que los datos provienen de una distribucin normal, entonces el test de Bartlett es el
mejor.
El test de Levene se resuelve con un ANOVA de los valores absolutos de las desviaciones de los
valores muestrales respecto a un estadstico de centralidad (media, mediana o media truncada)
para cada grupo. La eleccin del estadstico de centralidad de los grupos detemina la
robustez y la potencia del test. Por robustez se entiende la habilidad del test para no detectar
errneamente varianzas distintas, cuando la distribucin no es normal y las varianzas son
realmente iguales. La potencia significa la habilidad del test para sealar varianzas distintas,
cuando efectivamente lo son. Fuente: http://erre-que-erre-paco.blogspot.com/2009/11/test-de-
levene-para-la-igualdad-de.html

Figura. Nro. 44. Pero qu sucede si los datos tienen valores atpicos y/o no cumple con los supuestos de anlisis de
regresin?
1.9.4. Qu esperamos en el desarrollo del anlisis instrumental?
El anlaisis instrumental que podemos conceptuar de otra manera, es la ciencia y la tecnologa de
los sistemas complejos que permiten medir magnitudes fsicas cuyo objetivo es la obtencin de
datos que se transmiten a dispositivos de representacin, registro o elementos de control
aprovechando las propiedades fsicas, qumicas y electromagnticas de la materia entendindolo
en su manifestacin infinitisimal.

a.La instrumentacin analtica. Se puede definir como la ciencia que desarrolla y mejora mtodos
e instrumentos para obtener informacin sobre la composicin y naturaleza qumica de la materia.
Dentro de la Qumica Analtica Instrumental se incluye el Anlisis Instrumentacin, que se basa en
las propiedades qumico, fsicas y del espectro electromagntico. La clasificacin del anlisis
instrumental como hemos visto en la seccin preliminar.
b. En el mercado ambiental. Nos permiten probar los contaminantes biolgicos y qumicos en el
aire, agua, alimentos y tierra. Alrededor del mundo, estas herramientas han contribuido
decisivamente en los esfuerzos para proteger el medio ambiente y la salud humana.
c. Alteraciones endocrinas por pesticidas y metales pesados en la tierra, de los alimentos y
el agua: Se cree que ciertos pesticidas alteran el sistema endocrinolgico y causan trastornos tales
como defectos de nacimiento, cncer de seno y cancers de diverso orden. Existen metodologas
de Cromatografa de gases/ espectrometra de masas (GC/MS) capaz de analizar
rpidamente muestras de los 567 pesticidas y otros probables alteradores del sistema
endocrino que causan preocupacin mundial, ofreciendo un mtodo ms sencillo para
supervisar estos qumicos en el abasto de alimentos. Los hidrocarburos voltiles contribuyen a
la degradacin del ozono a nivel de la tierra, uno de los principales componentes del smog urbano.
La Agencia Mundial Antidopaje (AMA) ha estipulado seis clases de substancias prohibidas:
estimulantes, narcticos, agentes anablicos/esteroides, diurticos, hormonas ppticas y
compuestos afines, as como otras drogas restringidas. Estas clases incluyen ms de 400
substancias y miles de compuestos relacionados.
Problema Nro. 16. A partir de las siguientes observaciones para 5 aos de las variables (x, y),
ajstese el modelo de regresin de y en funcin de x ms idneo.
Donde:

y: produccin nacional de un subsector industrial, en millones de toneladas.
x: tiempo.
Ao x y
1995 1 1,25
1996 2 5
1997 3 11,25
1998 4 20
1999 5 30,5

*(
)(
)+
(
Pendiente/sensibilidad instrumental, Ordenada en el origen

, rxy =
()
()

1. Ajuste de una funcin lineal: y = bx + a
xi yi x
2
y
2
xi yi
(
)

(
)

(
)(
)

(

1 1,25 1 1,56 1,25 -2 -12.35 24.7 4
2 5 4 25 10 -1 -8.6 8.6 1
3 11,25 9 126,56 33,75 0 -2.35 0 0
4 20 16 400 80 1 6.4 6.4 1
5 30,5 25 930,25 152,5 2 16.9 33.8 4
15 68 55 1483,3 277,5 73.5 10
3 13,6 11

Reemplazandolos datos del problema Nro. 16 en el cuadro de regresin lineal por mnimos
cuadrados.

Figura. Nro.44. Fuente: www.uclm.es/profesorado/.../4-ESPECTROSCOPIA%20ATOMICA.pdf - En cach -
Similares
1.9.4. Covarianza. El anlisis de la covarianza es una tcnica estadstica que, utilizando un
modelo de regresin lineal mltiple, busca comparar los resultados obtenidos en diferentes grupos
de una variable cuantitativa pero corrigiendo las posibles diferencias existentes entre los grupos en
otras variables que pudieran afectar tambin al resultado (covariantes).
En el estudio conjunto de dos variables, lo que interesa principalmente es saber si existe algn tipo
de relacin entre ellas. Esto se ve grficamente con el diagrama de dispersin. La covarianza
S(x,y) de dos variables aleatorias x e y se define como:
(48)
Donde x
i
y
i
representan los pares de valores de la variable y el producto
que corresponde al
producto de las medias aritmeticas de las variables x e y respectivamente.
- Si S
xy
> 0 hay dependencia directa (positiva), es decir, a grandes valores de x
corresponden grandes valores de y.
- Si S
xy
= 0 Una covarianza 0 se interpreta como la no existencia de una relacin lineal entre
las dos variables estudiadas.
- Si S
xy
< 0 hay dependencia inversa o negativa, es decir, a grandes valores de x
corresponden pequeos valores de y.
La matriz de covarianza S
XY
de dos variables aleatorias n-dimensionales expresadas como
vectores columna (
e Y (
se define como:
,( ,- )( ,-)-
Donde: E[ ] es el operador esperanza.
= 55,32
Hemos obtenido un valor prctico para la covarianza que corresponde a una dependencia directa.
CONCLUSIONES
1 Recordar: Un supuesto bsico del modelo de regresin, es que para cada valor
posible de x,y es una variable aleatoria con distribucin normal cuya media es
y/x

2 Lo correcto es decir que las medias poblacionales de y se incrementan ( o
disminuyen) al aumentar x
3 Recordar que en realizad trabajamos con estimadores de parmetros desconocidos,
y son por tanto, variables aleatorias sobre las que se deben hacerse afirmaciones
probabilsticas.
http://www.slideshare.net/smedinat/regresin-por-mnimos-cuadrados
Problema Nro. 17. Calcular covarianza talla peso
Talla
cm x
160 165 168 170 171 175 175 180 180 182
Peso
Kg y
55 58 58 61 67 62 66 74 79 83
1. Sumamos los productos de los valores x (talla) por los de y (pesos)
x
i
y
i
= 160*55+165*58+168*58+170*61+171*67+175*62+175*66+180*74+180*79+180*83
x
i
y
i
= 114987
Definimos n como numero de eventos que en este caso es igual a 10

Hasta esta parte hemos descrito como debemos manejar la muestra, en cuanto a la toma y
preparacin, as como debemos de manejar la teora estadstica que requerimos para evaluar los
datos.

1.10. Puesta a punto del mtodo analitico.

1.10.1. Validacin de un Mtodo Analtico. Es el proceso que permite demostrar que los
resultados producidos por el mismo son fiables y reproducibles y que el mtodo es adecuado para
la aplicacin sobre la que se emplea. La confirmacin mediante un examen y la provisin de una
evidencia objetiva de que se han satisfecho unos requisitos particulares para un uso pretendido y
especfico. La puesta en operacin de un mtodo analtico se completa con la validacin del
mismo. Validar implica demostrar experimentalmente y formalmente que un proceso de
medicin qumica o una parte del proceso (por ej. Muestreo) funciona como se espera de l y
lo hace a lo largo del tiempo. Se trata de documentar la calidad del procedimiento analtico
determinando sus caractersticas (performance) sobre la base de criterios tales como la
exactitud, precisin, lmite de deteccin, etc.
Este proceso obliga a que el analista investigue todas las posibles fuentes de error y las elimine.
De esta forma demostrar que el mtodo origina resultados que pueden ser manejados hasta las
referencias elegidas, esto se consigue solo con estructuras adaptadas, personal entrenado,
motivado y con instrumentos adaptados y convenientemente sustentados.
1.10.2. Los pasos de inters.
a. Validacin de la instrumentacin. Debe ser siempre anterior a la validacin del mtodo.
b. Revisin bibliogrfica. Hay muy pocos mtodos analticos que estn suficientemente
detallados y validados como para poder ser aplicados directamente sin riesgos.
c. Validadcin del mtodo analtico. La estrategia consiste en estudiar el procedimiento analtico
hacia atrs, estudiando primero el sistema ms sensillo (p.e. las disoluciones empleadas en el
calibrado) y despus paso a paso hasta la muestra real. Tambien debe evaluarse la robustez del
procedimiento, los mtodos patrn o estandarizados son de validacin sensilla. En este caso
basta con evaluar la precisin, verificar la veracidad, investigar la sensibilidad y la robustez.

d. Validacin de la etapa de deteccin final. Los errores en la etapa de calibracin son muy
frecuentes, incluyen:
Errores en clculos sensillos (p.e. concentraciones)
Errores de dilucin
Confusiones originadas al utilizar disolventes
Utilizacin de compuestos impurificados
Contaminaciones, interferencias, patrones inadecuados
Correccin de fondo mal hecha o confianza ciega en sistemas de integracin
Mal uso de las unidades como ppm, ppb.
Debe de prepararse disoluciones con concentraciones exactamente conocidas en el analito,
almacenarse en adecuadas condiciones y ser manejadas con cuidado para no ser contaminados.

e. Muestras slidas. Estar familiarizado con el manejo de las muestras solidas mineralizadas
f. Robustez del mtodo. Evitar cambio del equipo (Soxhlet, reactores, ), de temperatura o
humedad.
g. Puntos y grficos de control. Los grficos de control permiten la deteccin de nuevos erroeres
sistemticos y elk seguimiento de la precisin si se hacen medidas replicadas.
h. Materiales de referencia certificados.(MRC). Cada valor certificado se acompaa de su
incertidumbre a un nivel de confianza dado:
Sustancias o disoluciones puras para calibracin e identificacin
Materiales de matriz conocida para calibracin de mtodos comprativos
Materiales de matriz lo ms parecida posible a la analizada por el usuario
Materiales de referencia definidos metodolgicamente p.e. biodisponibilidad, lixiviables,
Implican un protocolo muy estricto.
i. Buenas prcticas de laboratorio. (GLP). Estan relacionadas con los procesos organizativos y la
planificacin en los laboratorios
j. Normalizacin. Depende del campo de actividad (alimentos, medio ambiente, biomdico), son
sistemas de acreditacin que cada pases ha adoptado, hay normas escritas, organismos
normalizadores, Anivel mundial el organismo central es el ISO, con cientos de comits tcnicos.
La validacin tiene dos objetivos fundamentales.

Linealidad
de un analito en un material
0.010
0.015
0.020
0.025
0.030
0.035
0.040
0.01 0.015 0.02 0.025 0.03 0.035 0.04
Material de referencia mg/mL
A
n
a
l
i
t
o

c
a
l
c
u
l
a
d
o

e
n

m
g
/
m
L
Buena
0
.
0.33
Ade
L

ruido
P Pico B
Lnea

Valid
Tabla
de
x y

#
Material de
referencia
Calculado
mg/mL
1

Figura Nro. 45. El estudiante como parte de su entrenamiento, resolver manualmente y/o
reemplazar. Determinar los parmetros validados de la estadstica de linealidad que se han
obtenido.
Fuente: www.ops-oms.org/Spanish/AD/THS/EV/bpm-Validacion04.pp

0.0100
0.0101

Figura Nro.46 .Reemplazando los datos de la tabla anterior en: Fuente:
www.uclm.es/profesorado/.../4-ESPECTROSCOPIA%20ATOMICA.pdf - En cach - Similares Se puede
comparar los resultados con lo mostrado en la figura Nro. 39
Objetivo 1. Definir y asegurar la calidad de la informacin analtica generada. Una validacin
intrnseca que consiste en caracterizar un proceso de medicin qumica a travs de las
propiedades o caractersticas de desempeo del mismo.

Objetivo 2. Garantizar la coherencia entre la informacin analtica generada y las necesidades
informativas planteadas por la sociedad, industria, comercio, ciencia y tecnologa, en un proceso
denominado validacin extrnseca del proceso analtico. La validacin intrnseca puede hacerse
de dos maneras generales, una es la validacin por etapas, se valida instrumentos, muestreo,
datos etc, y la otra es la validacin global del proceso de medicin qumica.
Durante el proceso de validacin, los estudios para determinar los parmetros de desempeo de
un mtodo deben realizarse con equipamiento debidamente calificados, es decir que cumplan
con las especificaciones necesarias, que funcionen correctamente y estn correctamente
calibrados. Los analistas deben de estar entrenados y conocer adecuadamente la metodologa en
estudio.

Deben utilizar equipos, reactivos y materiales de laboratorio apropiado y en perfectas
condiciones para su uso; patrones de referencia bien caracterizados de pureza adecuada y
debidamente documentada. Se recomienda la utilizacin de MRC de naturaleza similar a las
muestras sobre que se aplicara el ensayo.

Todo el proceso de validacin se debe confirmar y encontrarse documentado en protocolos e
informes de validacin. Tenemos tres tipos de validacin:

Validacin Prospectiva: es aquella validacin realizada a mtodos analticos nuevos.
Validacin Retrospectiva: Para mtodos analticos antiguos, pero que se usan en forma rutinaria,
y que no han sido validados.
Revalidacin: repeticin parcial o total de una validacin debido a cambios efectuados, que
puedan afectar a la capacidad del mtodo validado.
1.10.3. Parmetros fundamentales de validacin. Una vez que se ha realizado el ajuste de los
parmetros y se ha probado con xito el mtodo en muestras, se est en condiciones de realizar la
validacin del mtodo, para poder confirmar y documentar que los resultados obtenidos por el
mtodo son seguros y confiables.

En el proceso de validacin, los parmetros que son evaluados generalmente son:
Selectividad, Linealidad, Precisin, Sesgo, Exactitud, Sensibilidad. Parmetros de calidad.
En la Tabla 18 se enumeran los criterios cuantitativos de funcionamiento de los instrumentos,
criterios que se pueden utilizar para decidir si un determinado mtodo instrumental es o no
adecuado para resolver un problema analtico. Estas caractersticas se expresan en trminos
numricos y se denominan parmetros de calidad.
Tabla. Nro. 20: Criterios numricos para seleccionar mtodos analticos
Criterios Parmetros de calidad
Precisin e incertidumbre: Grado de
concordancia mutua entre los datos que
se han obtenido de una misma forma.
Estima la repetitividad.
Desviacin estndar absoluta, y relativa,
coeficiente de variacin, varianza,
covarianza.
Veracidad: Se refiere a la diferencia entre el valor
obtenido y el verdadero.
Exactitud Combinacin de la veracidad y precisin
Trazabilidad: Propiedad del resultado de
una medicin o de un patrn,

Sesgo: Error absoluto sistemtico, error
relativo sistemtico.
Error absoluto sistemtico, error relativo
sistemtico. sesgo - xt Donde es la
media de la poblacin de la concentracin
de un analito en una muestra cuya
concentracin verdadera es xt

Sensibilidad: Es una medida de la
capacidad de un mtodo, depende de la
pendiente de la curva de calibrado y de
la reproducibilidad de las medidas
Sensibilidad de calibracin, sensibilidad
analtica
Limite de deteccin: Mnima
concentracin o mnima masa de analito
que se puede detectar para un nivel de
Blanco mas tres veces la desviacin
estndar del blanco
confianza dado.
Intervalo de concentracin Concentracin entre el limite de
cuantificacin (LOQ),lmite de deteccin
(LOD) y el limite de linealidad ( LOL)
Selectividad y especificidad: Grado de
ausencia de interferencias con otras
especies que contienen la matriz de la
muestra. La capacidad de un mtodo
para determinar exactamente y
especficamente el analito de inters en
la presencia de otros componentes en la
matriz, bajo condiciones de prueba
estadstica.
Coeficiente de selectividad
Robustez Es una medida de su capacidad de
permanecer inalterado por pequeas, pero
deliberadas, variaciones en los parmetros
del mtodo y proporciona una indicacin de
su confiabilidad durante su uso normal.
Otras caractersticas
Velocidad, Facilidad y Comodidad,
Habilidad del operador, Coste y
disponibilidad de tiempo, Coste por
muestra

Fuente: Ampliada - SKOOG-HOLLER-NIEMAN Principios de ANALISIS INSTRUMENTAL 5ta Edic. Mc Graw Hill
Pag. 12

Precisin. De los datos analticos se define como el grado de concordancia mutua entre los datos
que se han obtenido de una misma forma. La precisin indica la medida del error aleatorio, o
indeterminado de un anlisis. Los parmetros de la calidad de la precisin son la desviacin
estndar absoluta y relativa, el coeficiente de variacin y la varianza. (SKOOG-HOLLER-NIEMAN
Pag. 12)
Exactitud. Mide el error sistemtico o determinado de un mtodo analtico. Se puede determinar
por comparacin con muestras patrn y por comparacin con un mtodo patrn.
Exactitud = Donde valor medio
Sesgo. El sesgo se define mediante la ecuacin: sesgo - x
t
Donde es la media de la
poblacin de la concentracin de un analito en una muestra cuya concentracin verdadera es x
t

Sensibilidad. En general se acepta que la sensibilidad de un instrumento o de un mtodo es
una medida de su capacidad de diferenciar pequeas variaciones en la concentracin del
analito. La definicin aceptada por (IUPAC), es la de sensibilidad de calibrado, que se define como
la pendiente de la curva de calibrado a la concentracin objeto de estudio. En un mtodo
(tcnica) Instrumental se mide una seal (S), en funcin de la sensibilidad requeridas en la solucin
del problema de anlisis.

S [C
X
]
analit

Figura Nro. 47. LD = Limite De dilucin, LOQ = Lmite de cuantificacin, LOL = Lmite de
linealidad. Fuente: SKOOG-HOLLER-NIEMAN Principios de ANALISIS INSTRUMENTAL 5ta
Edic. Mc Graw Hill Pag. 12

Donde: S (sensibilidad analtica) es proporcional a La concentracin [C]

del analito. Todos los
mtodos ofrecen caractersticas diferenciadas por lo que es necesaria su seleccin en funcin de
la sensibilidad y selectividad requerida en el problema de anlisis.
S m [C] + S
bl
(49)
Donde S es la seal de medida, [C] es la concentracin del analito, S
bl
es la seal instrumental de
un blanco y m (b) es la pendiente de la lnea recta.
Mandel y Stiehler (1964) consideraron la necesidad de incluir la precisin en un tratamiento
matemtico y proponen: (m) m S
S
(50)
Donde m es la pendiente de la curva, S
S
es la desviacio0n estndar de las medidas.
Selectividad. Depende de la interrelacin de todos los componentes, longitud de onda,
interferentes, y la muestra.
1.10.3. Limite de deteccin y cuantificacin. Son varios los mtodos empleados para la
determinar el lmite de deteccin (LOD) y lmite de cuantificacin (LOQ), dependiendo si el
procedimiento es instrumental o no instrumental. (LOD) Es la mnima concentracin de analito
que se puede detectar para un nivel de confianza dado. Este lmite depende de la relacin entre
la magnitud de la seal analtica y el valor de las fluctuaciones estadsticas de la seal del blanco.
(LOQ) Es la menor concentracin de analito en una muestra determinada que puede proporcionar
una medida cuantitativa positiva, utilizando un mtodo analtico determinado.
En anlisis instrumental debemos aprender a elegir la tcnica correcta para cumplir con nuestro
anlisis, ya hemos visto algunas figuras de mrito importantsimas en el lmite de deteccin
como la sensibilidad, la exactitud y la precisin, otra figura de mrito importantsima es el lmite de
deteccin. El clculo del lmite de deteccin (LD) responde a la pregunta. Cul es la menor
concentracin que podemos detectar con este mtodo de anlisis? Para responder a esta
pregunta, debemos analizar cul es la menor seal detectable.
DEFINICION DE IUPAC: La concentracin del analito que produce una seal igual a la del blanco
mas k veces la desviacin estndar del blanco. Ahora veamos si la concentracin C
L
para lo cual:
y
L
=

Cada punto de la curva de calibracin (incluyendo el blanco) tiene una variacin (normalmente
distributiva) sobre el eje y que puede estimarse con la desviacin estndar de los residuos S
R

0 -----------------------------------C
LD
------------------------------------------C
LC
---------- Concentracin

y
B
------------------------------- y
L
+ 3S
B
-----------------------------------y + 10S
B
--- Seal
Analito sin detectar Regin de Deteccin Regin de cuantificacin
Recuewrde siempre: Las definiciones son bastante arbitrarias, es el usuario quien escoje k
cuando se reporta un lmite de deteccin debe incluirse informacin de k.

Figura. Nro. 48. Patrones analticos para la construccin de una curva de calibrado apartir de
soluciones patrn.
Fuente: http://isearch.babylon.com/?q=limite+de+detecci%C3%B3n+powerpoint&s=web&as=3&babsrc=HP_ss
1.10.4. Calibracin de los instrumentos. Se entiende por el proceso por el cual se asegura que
un sistema (instrumental) es apropiado para el uso que se desee emplear y que se desempea de
acuerdo con las especificaciones dadas por el fabricante. Es decir, asegurarse de que el
instrumento funciona correctamente.
Los distintos sistemas de calidad y/o requerimientos regulatorios requieren variados niveles y
combinaciones de calificacin, calibracin, verificacin y ensayos de adecuacin del sistema.
Son ejemplos la comprensin, el conocimiento y manejo del espectro electromagntico la
determinacin de la exactitud de la longitud de onda con filtros de oxido de holmio, o la calibracin
de una balanza analtica mediante el uso de pesas calibradas.
Luego se contina con la calibracin metodolgica analtica, que consiste en comparar la seal
(S) generada por el analito presente en la muestra con aquella proporcionada por el analito de una
muestra patrn o estndar. Por ejemplo en el cuadro 1-3, se aprecia la utilizacin del estndar
externo, existe otros mtodos como el de agregar un estndar a la muestra a analizar, y un
estndar interno.
a.Curva o grfica analtica. Se preparan una serie de disoluciones patrn de forma que cubran un
intervalo de concentraciones adecuado y que tengan una composicin en matriz parecida a la de la
muestra. Tambin se prepara un blanco, este tiene igual composicin que los dems estndares
pero sin el analito. Su seal debera ser cero pero a veces por efecto del ruido de fondo no es as.
Se representan las respuestas en una grfica frente a las concentraciones de los estndares que
las han proporcionado. Generalmente hay una relacin lineal entre la seal analtica (y) y la
concentracin [x] y por ello los datos se ajustan a una recta por el mtodo de mnimos cuadrados
segn y=ax+b, siendo y la seal instrumental, a la pendiente, b la ordenada en el origen y x las
concentraciones de los estndares.
En general, la etapa de calibracin y la obtencin de la concentracin de analito en una muestra
constan de los siguientes pasos:
Paso 1: Preparacin de los patrones. Se preparan patrones del analito que cubran un intervalo
adecuado de concentraciones, y se mide la seal analtica proporcionada por los mismos.

Disoluciones del analito de concentracin conocida y creciente

Paso 2: Obtencin de la relacin seal-concentracin. Se traza un grfico con las seales frente a
la concentracin de analito y se calcula la recta que "mejor" se ajusta a los datos mediante un
ajuste por mnimos cuadrados. De esta forma se obtiene la pendiente (b) y la ordenada (a) en el
origen que definen la recta.

Grfico seal-concentracin y recta ajustada por mnimos cuadrados
Paso 3: Uso de la recta de calibrado. Una vez obtenida la grfica, se interpola la seal de la
muestra y se obtiene la concentracin de analito en la muestra.

Figura Nro. 49 . Obtencin de la concentracin de analito en las muestras a partir de la
grfica y la recta Fuente: http://www.uv.es/gammmm/Subsitio%20Operaciones/6%20Calibracion.htm
En el desarrollo del cursoel tutor del curso les alcanza una plantilla para el ajuste por mnimos
cuadrados mediante la hoja de clculo EXCEL y la herramienta de grficos de dicho programa para
que el estudiante pueda consolidar sus tareas. Finalmente, para obtener la concentracin de
analito en la muestra hay que tener en cuenta en los clculos las posibles diluciones a las que
se ha sometido la muestra para obtener las disoluciones M1, M2 y M3 de medida.
Problema Nro. 18. Estimacin de LD(Lmite de deteccin) Y LC(Lmite de cuantificacin) a partir
de la repetitibilidad de la seal del blanco (o matriz de la muestra) comparado con una seal
producida por un estndar de concentracin muy diluida, donde seal sea ms de 3 veces la del
ruido. Datos en mV obtenidos CG-FID para un pesticida en un efluente de aguas residuales. Cstd=
4 pp. A partir de lecturas de blanco y un estndar diluido

2
0.0150
0.0145
Estd
Estd
Yblanco blanco
C
Y
S Y
LD
29 . 3 +
=
3
Estd
Estd
Yblanco blanco
C
Y
S Y
LC
10 +
=
0.0200
Estd
Estd
Yblanco blanco
C
Y
S Y
LC
10 +
=

0.0210
1
0
29 . 3
b
S Y
LD
b blanco
+
=
0.0250
1
0
10
b
S Y
LC
b blanco
+
=
0.0260 5 0.
03
00
0.0294
6

V
a
l
i
d
a
c
i
n
Esti
ma
ci
n
de
LD
Y
LC
a
part
ir
de
la
rep
etib
ilid
ad
de
la
se
( )
2
2
/
=

n
y y
S
i
y x
A partir de lecturas de blanco y un estndar
diluido
x b b y
1 0
+ =
1
/
29 . 3
b
S Y
LD
y x Std
+
=

Figura Nro. 50. El estudiante desarrolle manualmente los parmetros encontrados, como parte de
su preparacin para el examen, determine la curva de calibrado a partir de soluciones patrn.
Fuente: www.unlu.edu.ar/.../Tp/Introduccionalanalisisquimicocuantitativo2011.ppt

Respuesta al ejercico de aplicaciones numricas.

Datos en V obtenidos CG-FID para un pesticida en un efluente de aguas residuales. Cstd= 4 ppm.
LIMITE DE DETECCION A PARTIR DE LA CURVA DE
CALIBRACIN POR ADICIN DE ESTNDAR

Figura Nro.51 .Reemplazando los datos de la tabla anterior en: Fuente:
www.uclm.es/profesorado/.../4-ESPECTROSCOPIA%20ATOMICA.pdf - En cach - Similares
Problema Nro. 19: Se han analizado una serie de soluciones estndar de fluorescena con un
espectrofluormetro, obtenindose las siguientes intensidades de fluorescena (en unidades
arbitrarias)

Intensidad fluorescencia (u.a) 2,1 5,0 9,0 12,6 17,3 21,0 24,7
Concentracin de floresceina
pg/mL
0 2 4 6 8 10 12

a. Calcule la pendiente y la ordenada al origen de la recta de regresin para los datos
mostrados.
b. Calcule la desviacin estndar residual y los lmites de confianza al (95 %) para la
pendiente y la ordenada al origen.
c. Determine las concentraciones, las desviaciones estndar y sus lmites de confianza (95%)
para soluciones con intensidades de fluorescencia de 2,9 13,5 y 23 unidades (L=1).
Analice cual presenta el mejor limite de confianza en valores absolutos. Analice donde es
conveniente que caiga el valor de la seal de la muestra dentro de la curva de calibracin.
d. Si se considera como el promedio de cuatro medidas el valor de intensidad de
fluorescencia de 13,5 cules sern los valores de la desviacin estndar de la
concentracin calculada y el lmite de confianza? Y si fuera el promedio de ocho? Analice
cual es la mejora obtenida al aumentar el nmero de medidas.
e. El anlisis del grafico de residuos indica una buena linealidad?

Solucin: En el procedimiento de calibracin en anlisis instrumental se consideran los siguientes
asunciones bsicas.
i. Los errores aleatorios en el experimento de calibracin ocurren solamente en los
valores de y, las y y las concentraciones estndares sobre la x
ii. L magnitud del error aleatorio en y es independiente de la concentracin del analito
(HOMOCEDASTICIDAD)
iii. El error aleatorio en y sigue una distribucin normal
iv. La muestra en blanco contiene todo los reactivos menos el analito.
v. El coeficiente de correlacin Momento-Producto: (x
1
, y
1
) (x
2
, y
2
)..(x
i
, y
i
)..(x
n
, y
n
)
.
Intensidad fluorescencia (u.a) 2,1 5,0 9,0 12,6 17,3 21,0 24,7
Concentracin de floresceina
pg/mL
0 2 4 6 8 10 12

El coeficiente de correlacin r esta dado por:
r =
()()
()
()
)(

S
b
=
, S
a
=

S
y/x
=
(
, r =
()()
()
()

a. Calcule la pendiente y la ordenada al origen de la recta de regresin para los datos dados
en el problema: Con los datos tabulados y las frmulas de regresin.
)(
(10.5830)(20.4524) 216.45
Pendiente:

Intercepto:
Lnea de regresin: y = 1,93x + 1,52

Desviacin estndar de la pendiente:
S
b
=
=
()
= 0.471423
S
b
=
= 0.0445453
Desviacin estndar de la ordenada en el origen:
S
a
=
= 0.47142
()
= 0.47142 = 0.321221
El calculo del coeficiente de correlacin r esta dado por:
r =
()()
()
()
= 0.998545

b. Calcule la desviacin estndar residual y los lmites de confianza (al 95%) para la pendiente
y la ordenada al origen.
Datos: n = 7 a = 1,52 b = 1,93 S
XX
= 112 S
YY
= 418,56 t = 2,57 (95% f=5)

0,471423

Lmites de confianza: Para la pendiente y la ordenada.

b tS
b
= 1,93 2,57*0,0445453 = 1,93 0,11

S
a
= S
R

= 0, 471423
0,321221

a tS
a
= 1,52 2,57*0,321221 = 1,52 0,83

Figura Nro. 52. Grfica de la recta de regresin: y= (1.930.11) x (1.52 0.83)
c. Determine las concentraciones, las desviaciones estndar y sus lmites de confianza (95%)
para soluciones con intensidades de fluorescencias de 2,9; 13,5 y 23 unidades para L= 1.
Analice donde es conveniente que caiga el valor de la seal de la muestra dentro de la curva
de calibracin.
Solucin.
1. Calculo de la concentracin de una muestra desconocida : x
o
=

2. y
0
= Es el valor experimental de y a partir del cual se determina x
0

3.
Donde de L= es el nmero de lecturas para obtener y

0

4. Intervalo de confianza: x
0
t S
xo
t con (n-2) grados de libertad.

5. Datos: n=7 a = 1,52
S
R
= 0,471423 L = 1 b = 1,93
6. Intervalo de confianza:
Para y
o
= 2,9

= 0,72 0,74

Para y
o
= 13,5 = 6,21 0,67
Para y
o
= 23,0 = 11,13 0,73
Ntese que estos intervalos se hacen ms anchos a medida que y
o
se aleja de y
d. Si se considera como el promedio de cuatro medidas el valor de intensidad de fluorescencia de
13,5 cules sern los valores de la desviacin estndar de la concentracin calculada y el lmite de
confianza? Y si fuera el promedio ocho? Analice cual es la mejora obtenida al aumentar el nmero
de medidas.
n = 4
S
R
= 0,4672 b = 1,93 y
o
= 13,5 S
xx
= 112

= 0,3054
Limite de confianza para el 95%.
b tS
b
= 1, 93 2, 57*0, 3054 = 1, 93 0, 8877
S
a
= S
R

= 0, 471423
0, 3564
a tS
a
= 1,52 2,57*0,3564 = 1,52 0,9159; Para un valor de 8.
= 0,2798

Problema Nro. 20. L a concentracin de plata en una muestra de desechos fotogrficos se
determino por AA.
0 5 10 15 20 25 30
0.32 0.41 0.52 0.60 0.70 0.77 0.89

Determine la concentracin de plata en la muestra y los lmites de confianza al 95 % para esta
concentracin.

y= 0.01864x + 0.3218
a = - 0.3216 S
xx
= 700 0.6014 b = 0.01864 SR = 0.01092
y= 0.01864x + 0.3218 Cuando y= 0

X
Ag
=|[
- t = 2.57 (95% f=5)

Sb
Ag
=
= 0.2221
X
Ag
= 17.3 0.2 ug/mL

1.10.5. Materiales de Referencia Certificada (CRM).
1. Son muestras en las que los valores de una o ms de sus propiedades estn certificadas, con
sus incertidumbres especificas, obtenidos por procedimientos tcnicamente validos bajo la
responsabilidad de un organismo competente e independiente; la certificacin tambin implica una
documentacin detallada de su trazabilidad.

2. En el mundo existen varios organismos reconocidos como certificadores de materiales de
referencia dentro de ellos se encuentran: NIST (NationalInstitute of Standars and Technology) de
US, NRC (nacional Research Council de Canada, BRC (EU Standars, measurement & testing
programe, Blgica)

3. Su costo es demasiado elevado para permitir el uso diario y suele ser reemplazado por
materiales de referencia secundarios con propiedades certificadas por el laboratorio usuario
mediante el uso de un material de referencia certificado.
4. Existen normas Internacionales y Nacionales vinculadas a distintos aspectos acerca de los
materiales de referencia.

1.11. Caractersticas de desempeo de un mtodo analtico. Es necesario contar con
informacin completa de las condiciones experimentales debido a que cuanto ms variadas sean
estas, mayores sern las causas de variabilidad, mayor la dispersin del conjunto de resultados y
menor precisin.
Linealidad. Capacidad del mtodo de producir resultados que son directamente proporcionales a
la concentracin del analito en la muestra.
Rango Dinmico Lineal. Intervalo entre las concentraciones mximas y mnima del analito
para las que se ha demostrado que el mtodo tiene niveles aceptables de precisin, exactitud y
linealidad.

Robustez. Es una medida de la capacidad del mtodo para no ser afectado por pequeos cambios
deliberados en sus parmetros y provee una indicacin de su confiabilidad durante su uso normal.

Sensibilidad. La definicin aceptada por (IUPAC), es la de sensibilidad de calibrado, que se define
como la pendiente de la curva de calibrado a la concentracin objeto de estudio.

a. Lmite de deteccin. Es la concentracin de analito [C
LD
] que corresponde a una seal Y
LOD

que puede distinguirse estadsticamente de una seal del blanco (Y
Blanco
) y que se concreta
matemticamente en la expresin: Y
LOD
= Y
B
+ 3
B
Siendo Y
B
la media cuando n > 30 blancos y
B

su desviaci{on etandar.

Figura Nro. 53. Comparacin de lmites de deteccin. Fuente.
analisisindustrial.wikispaces.com/.../Calibracion+univariada+y+AFOMs.ppt

b. Limite de cuantificacin. El lmite instrumental de cuantificacin, se puede definir
como la cantidad ms pequea de un analito que se pueda cuantificar confiablemente
en un instrumento. Generalmente se acuerda la cuantificacin como la seal para una
concentracin igual a 10 veces la desviacin estndar del blanco. Esto se llama el
lmite de la cuantificacin o lmite de la determinacin, por ello: Y
LOQ
= Y
B
+ 10
B

xx
x y
Q
x
M A
s
2
/
1
3
1
28 . 3
LOD + + =
A
s
y
3
LOD =
Cstd/ppm
Y/V
SY

Figura Nro. 54. Limite de cuantificacin. Fuente:

0.1 mL de muestra de agua
contaminada. Estndar de
pesticida de 1000 ppm
LD= 0.19
LC= 0.37
xx
x y
Q
x
M A
s
s
2
/
0
1
3
1
+ + =

Figura Nro. 55. Elaboracin de la curva patrn, sealando sus componentes principales. Fuente:
1.12. Evaluacin de la calidad de un laboratorio analtico. La evaluacin de la calidad debe
realizarse de dos formas distintas e independientes mediante control de calidad interno y control de
calidad externo.

El control de calidad interno de un laboratorio es el conjunto de procedimientos llevados a cabo
por el personal del laboratorio para controlar en forma continua la operacin y los resultados de las
mediciones a fin de decidir si los resultados son suficientemente confiables para ser emitidos.

Puede utilizarse un MRC material de referencia certificada o un MRI material de referencia
interno o secundario. Estos materiales deben ser en lo posible representativos de las muestras
que se estn ensayando en lo que respecta a composicin de la matriz, el estado fsico de
preparacin y el intervalo de concentracin del analito. Tanto los materiales de control como
aquellos usados para calibraciones debieran ser trazables a materiales de referencia certificados o
por lo menos a un mtodo de referencia reconocido.

Procedimiento general: Se somete rutinariamente la muestra control a anlisis completo en
condiciones de reproducibilidad y luego se evalan estadsticamente los resultados obtenidos. Se
construyen diagramas de control que son trazos grficos de los resultados de las pruebas con
relacin al tiempo o secuencia de las mediciones, se establecen lmites estadsticos que pueden
ser preventivos o de Peligro (2) o lmites de accin o rechazo (3)
Diariamente, se somete una alcuota de la misma muestra del MRC o MRI al anlisis y se
representa en la carta de control. Existen varias reglas destinadas a interpretar diagramas de
control, una de las mas conocidas son las reglas de Shewhart.
El
control de calidad externo est a cargo de un grupo de laboratorios que participan de una ronda de
anlisis de un MRC o un MRI comn, luego un organismo externo realiza las evaluaciones
estadsticas de los resultados. De esta manera puede conocerse la exactitud de los resultados
emitidos por un laboratorio respecto de los dems. Puede realizarse con distintos fines:

a. Acreditacin del Laboratorio
b. Examinar el trabajo de los laboratorios: Proficienty Testing, doble comparacin entre
valores de los laboratorios participantes y con el valor certificado si es un MRC.

1.13. Acreditacin de laboratorios. Es el reconocimiento formal, por una organizacin
independiente con bases cientficas, de que un laboratorio es competente para realizar pruebas
especficas. Por lo general la acreditacin es especfica para probar sistemas, productos,
componentes o materiales, para los cuales el laboratorio afirma ser competente. En
Argentina existen instituciones gubernamentales y privadas que poseen atribuciones legales o
licencias internacionales para realizar acreditaciones. El SENASA es el organismo oficial de
acreditacin de laboratorios para realizar determinaciones en alimentos a exportar. El Bureau
VERITAS posee la licencia a nivel Nacional para acreditacin de normas ISO. A su vez organismos
internacionales que realizan sus propias acreditaciones como la FDA de US.

1.14. Problemas bsicos de calibracin. Tcnicas instrumentales.
Problema. Nro. 21. Los datos obtenidos en la calibracin para determinar plomo a partir de su
espectro de emisin de llama se analizaron por mnimos cuadrados y la ecuacin obtenida fue:
S = 1.12 c
Pb
+0.312
Siendo c
Pb
la concentracin de plomo en partes por milln y S la seal de la intensidad relativa de
la lnea de emisin del plomo. Se obtuvieron los siguientes resultados en los replicados:

Conc. Pb en ppm Nro. de replicados Valor medio de S s
10.000 10 11.6200 0.1500
1.000 10 1.1200 0.0250
0.000 24 0.0296 0.0082

Calcular (a) la sensibilidad de calibrado, (b) la sensibilidad analtica para 1 ppm y para 10 ppm de
Pb y (c) el lmite de deteccin.

Solucin:

(a) La definicin cuantitativa de sensibilidad aceptada por la Unin Internacional de Qumica
Pura y Aplicada (IUPAC), es la de sensibilidad de calibrado, que se define como la
pendiente de la curva de calibrado a la concentracin objeto de estudio. La mayora de las
curvas de calibrado que se usan en qumica analtica son lineales y se puede representar
mediante la ecuacin: S= mc + S
bl
en la que S es la seal medida, c es la concentracin
del analito, S
bl
es la seal instrumental de un blanco y m es la pendiente de la lnea recta.
El valor de S
bl
ser la interseccin de la recta con el eje y. Por lo tanto el valor de la
pendiente es la sensibilidad de calibrado: m = 1.12
(b) Mandel y Stiehler proponen la siguiente definicin para la sensibilidad analtica = m/S
S

siendo m pendiente y S
S
es la desviacin estndar de las medidas. Para 10 ppm de plomo
= 1.12/0.15 = 7.5 Para 1 ppm de plomo = 1.12/0.025 = 45
(c) El lmite de deteccin es la mnima concentracin o la mnima masa de analito que se
puede detectar para un nivel de confianza dado. Este lmite depende de la relacin entre la
magnitud de la seal analtica y el valor de las fluctuaciones estadsticas de la seal del
blanco. S
m
=
bl
+ ks
bl
= 0.0296 + 3 x 0.0082 = 0.054 sustituyendo en la ecuacin: c
m
= [S
m

-
bl
] / m = [0.054 -0.0296] / 1.12 = 0.022 ppm de Pb.
Referencia: pag. 14 Skoog-Holler-Nieman Principios de Anlisis Instrumental

Problema Nro. 22. El coeficiente de selectividad para un electrodo selectivo de iones de K
+
con
respecto a los iones Na
+
es de 0.052. Calcular el error relativo en la determinacin de K
+
de una
disolucin que tiene una concentracin 3.00 x 10
-3
M de K
+
si la concentracin de Na
+
es (a) 2.00 x
10
-2
M; (b) 2.00 x 10
-3
M; (c) 2.00 x 10
-4
M. Suponer que S
bl
para una serie de blancos es cero.
Solucin.
La selectividad de un mtodo analtico indica el grado de ausencia de interferencias con otras
especies que contiene la matriz de la muestra. El coeficiente de selectividad indica la respuesta
relativa del mtodo para la especie B cuando se compara con A: k
AB
= m
B
/ m
A
. Un coeficiente
similar para C con respecto a A ser: k
CA
= m
C
/ m
A
.
Sustituyendo en S
m
=
bl
+ ks
bl

Conduce: S = m
A
(c
A +
k
BA
c
B
+ k
CA
c
C
) + S
bl
Luego: (a) S / m
K+
= (c
K+ +
k
Na+K+
c
Na+
) + S
bl

S/ m
K+
= 3, 00 x 10
-3
+0.052 X 2.00 X 10
-2
= 4, 04 X 10
-3
Si no hubiera Na
+

S / m
K+
= 3,00 x 10
-3
Para (b) S/ m
K+
= 3, 00 x 10
-3
+0.052 x 2.00 x 10
-3
= 3, 104 x 10
-3
Para (c) S/ m
K+
= 3, 00 x 10
-3
+0.052 x 2.00 x 10
-4
= 3, 0104 x 10
-3

Luego los errores relativos en c
K+
ser idntico al error relativo en S/ m
K+

(a) E
rel
= [(4,04 x 10
-3
3,00 x 10
-3
)/3,00 x 10
-3
] x 100% = 35.00%
(b) E
rel
= [(3,104 x 10
-3
3,00 x 10
-3
)/3,00 x 10
-3
] x 100% = 3.46%
(c) E
rel
= [(3,0104 x 10
-3
3,00 x 10
-3
)/3,00 x 10
-3
] x 100% = 0.346%


Problema Nro. 23. Se pipetean varias alcuotas de 10 ml. De una muestra de agua mineral en
matraces aforados de 50.00 ml. A cada uno se adicionan exactamente 0,00; 5,00; 10,00; 15,00 y
20,00 ml de una disolucin patrn que contiene 11,1 ppm de Fe
3+
seguido de un exceso de ion
tiocianato para dar el complejo rojo Fe(SCN)
2+
y se enrasan hasta 50,00 ml. Las seales del
fotmetro para las cinco disoluciones fueron 0,240; 0,437; 0,621; 0,809 y 1,009, respectivamente
(a) Qu concentracin de Fe
3+
hay en la muestra de agua? (b) Calcular la desviacin estndar de
la pendiente, de la ordenada en el origen y de la concentracin de Fe
3+

Solucion:

(a) Calculo de la concentracin de Fe
3+

X(V) Y(S) X
2
XY Y
2
0 0,240 0 0 0.0576
5 0,437 25 2,185 0,19097
10 0,621 100 6,21 0,3844
15 0,809 225 12,135 0,6545
20 1,009 400 20,18 1,01808
E 50 3,116 750 40,71 2,30555
1/5 E 10 0,6232 150 8.142 0.46111

m = b =
2 2
X X 1/5
Y X - XY 1/5
= [(8,142 10 x 0, 6235)] / (150 100) = 0, 0382

X b - Y a = = 0, 6232 (0, 0382)10 = 0, 2412

y = b x + a

S = 0,0382V
s
+ 0, 2412

La concentracin C
X
se puede obtener a partir de los valores de b y a y los valores
conocidos de: b = 0,0382 C
S
= 11,1 ppm Fe
3+
V
X
= 10,00ml

y
V
S
= a / b = V
X
C
X
/C
S

C
X
= a C
S
/ b V
X
= (0, 2412 x 11, 1) / (0, 03820 x 10, 00) = 7, 01 ppm de Fe
3+

Este valor se puede determinar por extrapolacin. El valor extrapolado representa el
volumen de reactivo que corresponde a una seal en el instrumento y que en este caso es
-6,31 mL La concentracin desconocida de analito en la disolucin original se puede
calcular como sigue:

C
X
= - [(V
S
)
O
]C
S
/ V
X
= 6,31 mL x 11,1ppm / 10,00 mL = 7,01 ppm Fe
3+

0.000E+00
2.000E-01
4.000E-01
6.000E-01
8.000E-01
1.000E+00
1.200E+00
1.400E+00
1.600E+00
0.000E+00 1.000E+01 2.000E+01
T
t
u
l
o

d
e
l

e
j
e
:
A
b
s
o
b
a
n
c
i
a

Ttulo del eje: Concentracin
grafica
grafica
Linear (grafica)
(b) La desviacin estndar de la pendiente S
b
y la desviacin estndar de la ordenada en
el origen S
a
la raz cuadrada de esta ecuacin da:

S
C
(

S
C
Fe
3+

C
X
= 7.01 0.12 ppm


Problema Nro. 24. En la determinacin de una especie X por un mtodo instrumental en el que la
seal analtica se define como P = kCx, se obtuvieron los siguientes datos de calibracin:

Concentracin de X
i
0 2 6 10 14 18
Seal analtica P 0,031 0,173 0,422 0,702 0,956 1,248

a) Representa y calcula la ecuacin de la curva de calibrado.
b) Calcular la concentracin molar de X en una muestra, si al medir la intensidad de la seal
Analtica se obtiene un valor de P = 0,532.
c) Sabiendo que la desviacin estndar absoluta del blanco es s
b
= 0.0079, calcula el limite de
deteccin y de cuantificacin del compuesto X usando este mtodo instrumental.
d) Define la sensibilidad del calibrado y calcula la sensibilidad analtica del mtodo propuesto.
Dato: Pm (X) = 207.2 g mol-1
Respuesta: a) y = 0,0670x + 0.03001; b) 3.615x10-5 M; c)LOD = 0.353 y LOQ = 1.180; d) 0.067
y 0.143.
Solucin: Vamos a resolver este problema por dos procedimientos el manual y por el mtodo
regresin lineal por mnimos cuadrados segn la fuente: :
www.uclm.es/profesorado/pablofernandez/FAI/1-INTRODUCCION.pdf -

) (
) (
)(
)
0 0.031 -8.33 69.3889 -0.557 0.310249 4.63981
2 0.173 -6.33 40.0689 -0.415 0.172225 2.7834695
6 0.422 -2.33 5.4289 -0.166 0.027556 0.38678
10 0.702 1.67 2.7889 0.114 0.012996 0.19038
14 0.956 5.67 32.1489 0.368 0.135424 2.08656
18 1.248 9.67 93.5089 0.66 0.4356 6.1715874
8.33 0.588 -4.33 243.3334 -0.004 1.09405 16.2585869
Procedimiento manual.

El coeficiente de correlacin r esta dado por:

Donde:

Fuente: www.uclm.es/profesorado/pablofernandez/FAI/1-INTRODUCCION.pdf -
Lnea de regresin: y = 0.0668x + 0.032 (Procedimiento manual)
Linea de regresin: y = 0.06704x + 0.03001 (procedimiento segn
Fuente: www.uclm.es/profesorado/pablofernandez/FAI/1-INTRODUCCION.pdf -)
b) Calcular la concentracin molar de X en una muestra, si al medir la intensidad de la seal
Analtica se obtiene un valor de P = 0,532.

y = 0.0668x + 0.032
0.532 = 0.0668x + 0.032
x = 7.485 ppm.

c) Sabiendo que la desviacin estndar absoluta del blanco es S
B
= 0.0079, calcula el limite de
deteccin y de cuantificacin del compuesto X usando este mtodo instrumental.

LOD =
= 0.35479 ppm

LOQ =
= 1.1826 ppm

d) Define la sensibilidad del calibrado y calcula la sensibilidad analtica del mtodo propuesto.
1. La sensibilidad del calibrado es el valor de la pendiente: b= 6.68x10
-2

2. La sensibilidad analtica se define como el valor de la pendiente entre la desviacin estndar
de las medidas:

0.1428 = 1.428x10
-1

Problema Nro. 25. Se llevo a cabo la determinacin de un metal M en vinos mediante una tcnica
ptica (absorcin atmica). Para ello, en cinco matraces aforados de 50 mL se pusieron 10 mL de
vino y se le aadieron a cada uno de ellos 0, 5, 10, 15 y 20 mL de una disolucin patrn de M
conteniendo una concentracin de 10 mg L-1 de dicho metal. Seguidamente, los matraces se
enrasaron con agua des ionizada y se midi la absorbancia de cada una de ellas obteniendo los
siguientes valores: 0.040, 0.062, 0.081, 0.102, 0.135. Realiza un esquema del experimento
propuesto y explica brevemente que tipo de mtodo de calibracin se ha usado para la
determinacin del M. Finalmente calcula la ecuacin de la recta de regresin y obtn la
concentracin del M en el vino (mg L-1).
Solucin: 8.26 mg L-1 de M

Problema 26. Un acero de alto grado se analizo para ver su contenido en Mn, usando para su
determinacin Fe como estndar interno. Se preparo una muestra estndar que contena Fe y 5
mg L-1 de Mn cuya lectura de intensidades absolutas fueron 8.0 (2933 A) y 10.2 (2932 A)
respectivamente. Una muestra desconocida de acero se trato de la misma forma, es decir, se le
aadi la misma concentracin de Fe y se midieron las intensidades absolutas a las longitudes de
onda correspondientes para cada metal obtenindose valores de 8.2 y 12.5 para Fe y Mn
respectivamente. Explica brevemente en que consiste el mtodo de calibracin usando patrn
interno y calcula la concentracin de Mn en la muestra de acero desconocida.
Solucin: 5.98 mg L-1 de Mn

Cuadro Nro. 04. Uso de puntos experimientales

Fuente: http://www.ebookpp.com/ej/ejercicios-de-regresion-no-lineal-resueltos-ppt.html.

Comparacin de lmites de
deteccin
Antigua definicin de
IUPAC:
Nueva definicin de
IUPAC:
lmite de cuantificacin deteccin
LOQ = 10 s
0

De este modo, el error
estndar en
la cuantificacin es del
10% como mximo.
En calibracin univariada:
Lmite de cuantificacin: clculo
Intervalos de Confianza y
Regresin Lineal

Tabla 21: Diversas Tcnicas de Anlisis empleadas segn la fase de la Muestra.
Fase Tcnicas de Anlisis que aceptan esta fase de la muestra
Gas Espectrometra Infrarroja
Raman (camino largo)
Espectrometra UV-VIS
Emisin y Absorcin atmica
Luminiscencia
Espectrometra de microondas
Cromatografa de Gases
Espectrometra de masa
Mtodos radio qumicos
Espectrometra de movilidad de iones
Disolucin/liquido Cromatografia liquida
Cromatografia de gs
Cromatografia de fluidos supercrticos
Volumetrias
Ressonncia magntica nuclear
Espectrometria infrarroja
Espectrometria Raman
Espectrometria UV-VIS
Resonancia de spin eletrnica
Gravimtrica
Mtodos eletroqumicos
Absorcin, emisin atmica
Espectrometria de masas
Mtodos de radiofrecuenccias
Mtodos radioquimicos
Dispersin por luz de polmero

Slidos Fluorescencia de rayos X
Cristalografa de rayos X
Espectrometra infrarroja (reflexin y transmisin)
Espectrometra Raman
UV-Visible (reflexin y transmisin)
Espectrometria fotoacstica
Activacion neutronica
Mtodos radioquimicos
Mtodos de anlisis trmico
Resonancia magntica nuclear del estado slido
Tcnicas de anlisis de superficies(ESCA, Auger, microscopia de
efecto tnel, microscopia de fuerza atmica, retrodifusion de
Rutherford, Difraccin electrnica)
Espectrometra de Moosbauer
Resonancia de spin electrnico

1.15. Prcticas de laboratorio.
Prctica N 1: Cifras significativas, propagacin de errores y tratamiento estadstico de
resultados.
I. Objetivos.
a. Determinar las cifras significativas experimentales , propagacin de errores y
eltratamiento estadstico de los resultados.
b. Adquirir habilidad en el uso y aplicacin de las herramientas estadsticas de
naturaleza aleatoria.
II. Fundamentos tericos
III. Materiales, Reactivos y Equipos.
a. Clips, clavos, monedasbalanza analitica
IV. Mtodo operatorio
a. Pesar las muestras proporcionadas por el profesor.
b. Frmula =

c. Desarrollar los ejercicios de cifras significativas, incertidumbre con la cantidad
correcta de cifras significativas y mtodo de mnimos cuadrados para calcular la
ecuacin de la mejor recta. (del 1 al 13)
V. Clculos y resultados
a. Presentar las respuestas para un L.C. al 97%
VI. Bibliografia

1. Redondee cada nmero a la cantidad de cifras significativas, incertidumbre que se indica.

a) 1,2367 a 4 c. s

b) 1, 2384 a 4 c. s

c) 0, 1352 a 3 c. s

d) 2,051 a 2 c. s

e) 2, 0050 a 3 c. s

f) 2, 0150 a 3 c. s

g) 2, 00501 a 3 c. s

Respuesta: 1,237; 1,238; 0,135; 2,1; 2,00; 2,02; 2,01.

2. Escriba cada respuesta con la cantidad correcta de cifras significativas.

a) 1,021 + 2,69 = 3,711

b) 12,3 1,63 = 10,67

c) 4,34 x 9,2 = 39,928

d) 0,0602 / (2,113 x 10
4
) = 2,84903 x 10
-6

Respuesta: 3,71; 10,7; 40; 2,85 x 10
-6
.

3. Empleando la cantidad correcta de cifras significativas, calcule la masa molar de:

a) cloruro de bario

b) C
31
H
32
O
8
N
2

PA Ba = 137,327
g.mol
-1

PA H = 1,00794
g.mol
-1

PA Cl = 35,4527
g.mol
-1

PA O = 15,9994
g.mol
-1

PA C = 12,011 g.mol
-1

PA N = 14,00674
g.mol
-1

7. Escriba cada resultado con la cantidad correcta de cifras significativas:

a) 1,0 + 2,1 + 3,4 + 5,8 = 12,3000

b) 106,9 - 31,4 = 75,5000

c) 107,868 - (2,113 x 10
2
) + (5,623 x 10
3
) = 5519,568

d) (26,14 / 37,62) x 4,38 = 3,043413

e) (26,14 / 37,62 x 10
8
) x (4,38 x 10
-2
) = 3,043413 x 10
-10

f) (26,14 / 3,38) + 4,2 = 11,9337
Respuesta: 12,3; 75,5; 5520; 3,04; 3,04 x 10
-10
; 11,9.

8. Determine la incertidumbre absoluta y la incertidumbre relativa porcentual para cada clculo.
Exprese los resultados con una cantidad razonable de cifras significativas.

a) 9,23 ( 0,03) + 4,21 ( 0,02) - 3,26 ( 0,06) = ?

b) 91,3 ( 0,1) x 40,3 ( 0,2) / 21,1 ( 0,2) =?

c) [4,97 ( 0,05) - 1,86 ( 0,01)] / 21,1 ( 0,2) =?

d) 2,0164 ( 0,0008) + 1,233 ( 0,002) + 4,61 ( 0,01) =?

e) 2,0164 ( 0,0008) x 10
3
+ 1,233 ( 0,002) x 10
2
+ 4,61 ( 0,01) x 10
1
= ?

Respuesta: 10,18 ( 0,07) , 10,18 ( 0,7 %) ; 174 ( 2) , 174 ( 1 %) ; 0,147 ( 0,003) , 0,147 (
2 %) ; 7,86 ( 0,01) , 7,86 ( 0,1 %) ; 2185,8 ( 0,8) , 2185,8 ( 0,04 %).

9. Para el cloruro de sodio.

a) Demuestre que la masa molar del cloruro de sodio es 58,4425 ( 0,0009) g.mol
-1
.

b) Para preparar una disolucin de cloruro de sodio, se tom una masa de 2,634 ( 0,002) g y
se disolvi en un matraz aforado de 100,00 ( 0,08) mL. Exprese la molaridad de la
disolucin resultante y su incertidumbre con la cantidad correcta de cifras significativas.

PA (Na) = 22.989768 ( 0,000006) g.mol
-1
.
PA (Cl) = 35.4527 ( 0.0009) g.mol
-1
.
Respuesta: 0,4507 ( 0,0005) M ; 0,4507 ( 0,1 %) M.

10. Mediante el test Q, decida si el valor 216 debe descartarse del conjunto de resultados 192, 216,
202, 195, 204.

Respuesta: No debe descartarse.

11. Empleando el mtodo de mnimos cuadrados se calcul la ecuacin de la mejor recta a partir
de los puntos: (3,0 ; -3,87 x10
4
), (10,0 ; -12,99 x 10
4
), (20,0 ; -25,93 x 10
4
), (30,0 ; -38,89 x 10
4
),
(40,0 ; -51,96 x 10
4
).

Los resultados son: m = -1,29872 x10
4
, b = 256,695,
m
= 13,190,
b
= 323,57. Exprese la
pendiente y la ordenada en el origen y sus incertidumbres con la cantidad correcta de cifras
significativas.
Respuesta: y = [- 12987 ( 13) ] x + 257 ( 324)

12. Empleando el test Q, determine el nmero n ms grande que podra conservarse en el conjunto
63, 65, 68, 72, n.

Respuesta: 88.

13. Aplique el mtodo de mnimos cuadrados para calcular la ecuacin de la mejor recta que pase
por los puntos: (1 ; 3), (3 ; 2), (5 ; 0).

Exprese su respuesta en la forma y = [m (
m
)]x + [b (
b
)], con la cantidad correcta de cifras
significativas.
Respuesta: y = [ - 0,8 ( 0,1) ] x + 3,9 ( 0,5)

Practica Nro. 02: Valoracin potenciomtrica

I. Objetivo.
PARTE A: Valoracin de una disolucin de NaOH empleando un patrn primario.
PARTE B: Obtencin de las curvas de valoracin de un cido fuerte y de un cido
dbil.
PARTE C: Determinacin potenciomtrica de la constante de acidez del cido actico.
a. El objetivo de la prctica es doble: por una parte, introducir al alumno en el campo
cuantitativo donde, a diferencia del cualitativo, la medicin exacta de todas las variables es
de capital importancia; y por otra parte, ilustrar la utilizacin del mtodo potenciomtrico
en dos de sus aplicaciones ms importantes: (1) valoracin potenciomtrica cido-base,
obtencin de la curva de valoracin y (2) utilizacin de los datos potenciomtricos
obtenidos en una valoracin para la determinacin de una constante de acidez.
b. Evaluacin del punto de equivalencia utilizando los mtodos analticos instrumentales
empleando la primera derivada, segunda derivada y mtodo de Gran.
II. Fundamento terico.

Figura Nro. 56. Patrones cidos y patrones alcalinos. Fuente:
http://www.powershow.com/view/292265YzAzY/VALORACIONES_CIDOBASE_powerpoint_ppt_presentation

Figura Nro. 57. Forma de las grficas de las Titulacionews Potenciomtricas. Fuente:
http://www.webdelprofesor.ula.ve/ciencias/rmhr/Index_archivos/Conductimetria-%20Potenciometria.pdf

III. Materiales, reactivos y equipos.
Materiales Reactivos Equipos
Dos vasos de precipitados de 100,
400 mL (NaOH) y 3 de 100 mL de
vidrio (HAc, HCl y para Valor.pot.)
Disolucin de cido
clorhdrico aprox. 0.1 M
para ser valorada.
pHmetro con
electrodo de vidrio
Agitador magntico
Erlenmeyer de 100 mL
Pipeta de 5 mL y 2 propipeta
Bureta de 50, 100 mL
Papel milimetrado y calculadora
Probeta 50 mL
Pesasustancias
2 Esptulas por balanza

Disolucin de NaOH
aprox. 0.1 M para ser
valorada.
Disolucin de cido
actico aprox. 0.1 M
para ser valorada.
Disoluciones tampn de
pH 4 y 7 para calibrar el
pH-metro
Ftalato cido de potasio
(C
6
H
4
C
2
HO
4
K).
Fenolftaleina
NaCl (s)
Balanza digital

IV. Procedimiento: Segn el manual adicional de experimentos,

Figura. Nro. 58: Esquema del sistema de valoracin potencio mtrica.
Fuente: http://www.uv.es/fqlabo/QUIMICOS/GRADO/LQII/LQII_2012-2013/LQII_Practica_8_Valoracion_potenc.pdf

V. Clculos

1. Graficar los valores de pH vs V mL de HCl aadidos.
2. En la grfica determine los puntos de equivalencia. Utilizando los mtodos analticos
instrumentales empleando la primera derivada, segunda derivada y mtodo de Gran.
3. Determine V
A
, V
B,
as como V
A
/2, V
B
/2 y calcule los valores de [ pK
a
y pK
b
]

Practica Nro. 03: Valoraciones conductivimtricas.
I. Objetivo.
a. Determinar las conductividades de varias muestras de agua. Agua destilada, Agua de
servicio pblico, Agua de diversas fuentes de afloramiento en la provincia de Huaura,
Agua de mar.
b. Valorar una disolucin bsica mediante otra cida de concentracin conocida, empleando
como mtodo la variacin de la conductividad elctrica.

c. Determinar el punto de equivalencia resolviendo las dos ecuaciones conductimtricas,
evaluadas por regresin lineal por mnimos cuadrados.

II. Fundamento terico.

Figura Nro. 59. Forma del grfico de una Titulacin Conductivimtrica. Fuente:
http://www.webdelprofesor.ula.ve/ciencias/rmhr/Index_archivos/Conductimetria-
%20Potenciometria.pdf

Figura Nro. 60. Relacin entre la conductividad y slidos disueltos. Fuente:
http://es.scribd.com/doc/37234683/CONDUCTIMETRIA-Y-POTENCIOMETRIA

Figura Nro. 61. Relacin entre la conductividad y Dureza del agua. Fuente:
http://es.scribd.com/doc/37234683/CONDUCTIMETRIA-Y-POTENCIOMETRIA
III. Materiales, reactivos y equipos.
Materiales Reactivos Equipos
Dos vasos de precipitados de 100,
400 mL (NaOH) y 3 de 100 mL de
vidrio (HAc, HCl y para Valor.pot.)
Erlenmeyer de 100 mL
Pipeta de 5 mL y 2 propipeta
Bureta de 50, 100 mL
Papel milimetrado y calculadora
Probeta 50 mL
Pesasustancias
2 Esptulas por balanza
Muestras de aguas de diversas
fuentes
Disolucin de cido
clorhdrico aprox. 0.1 M
para ser valorada.
Disolucin de NaOH
aprox. 0.1 M para ser
valorada.
Disolucin de cido
actico aprox. 0.1 M
para ser valorada.
Disoluciones tampn de
pH 4 y 7 para calibrar el
pH-metro
Ftalato cido de potasio
(C
6
H
4
C
2
HO
4
K).
Fenolftaleina
NaCl (s)
Conductvimetro con
electrodo de vidrio
Agitador magntico
Balanza digital

IV. Mtodo operatorio. Segn el manual adicional de experimentos

V. Clculos.
Mostrar grficamente los datos reales y las evaluadas por regresin en papel milimetrado o a
computadora con colores diferentes y la solucin de las dos ecuaciones que dan el punto exacto
de equivalencia volumtrica.
VI. CUESTIONARIO:
1. Qu informacin se puede obtener de una curva de titulacin conductivetrica?
2. Cules son los equilibrios a considerar en cada parte de esta titulacin?
3. Cmo se espera la curva de titulacin del cido actico?
4. Cules son los equilibrios a considerar en esta titulacin?

Figura Nro. 62. Titulador automtico y detalle de los dispositivos que se integran en la celda de
valoracin. Fuente: agrobioenmiendas.iespana.es/materialesymetodos.pdf
Practica Nro. 04: Titulaciones potenciomtricas de neutralizacin
I. Objetivo.
a. Determinar la concentracin de soluciones problema de electrolitos fuertes y dbiles
por mediode titulaciones potenciomtricas.
b. Aplicar la potenciometria en la titulacin de neutralizacin para determinar las
constantes de disociacin del cido fosfrico.
c. Conocer la aplicabilidad de la titulacin potenciomtrica para determinar la acidez total
en muestras de vino.
II. Fundamentos tericos

Figura Nro. 63. Esquema de un proceso de titulacin Potenciomtrica de
neutralizacin. Fuente: http://www.slideshare.net/madridmgd/mtodos-volumetricos-de-
anlisis
III. Materiales, reactivos y equipos
Vasos de precipitados de: 250,400, 100 mL.
Bureta de 50, 100mL. Agitador magntico, potencimetro
Soluciones: NaOH 0.1N, H
3
PO
4
0.1M
Solucin tampn pH 4 y 7 para calibracin del pH-metro
Solucin problema de cido fosfrico
Vino rosado o blanco.
IV. Mtodo operatorio
a. Segn el manual adicional de experimentos: .(Pginas 22-28 Manual de laboratorio de
anlisis instrumental Prof. Silvia Margarita Calderon y Prof. Aura Marina Gonzalez)
b. Titulacin de una solucin de cido fosfrico de concentracin desconocida,
Determiknacin de la acidez total de una muestra de vino, Determinacin de la acidez
total de una muestra de vino.
V. Clculos.
a. Derivacin numrica para determinar los puntos de equivalencia en titulaciones
potenciomtricas.

Analisis

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1.8. Calibracin.

Segn ISO (International Estndar Office), se entiende por calibracin al conjunto

Se denota con el smbolo S

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- t = 2.57 (95% f=5)

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