Manual de Seguranca Biológica em Laboratório - OMS

Organizao Mundial da Sade
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ISBN 92 4 254650 1
MANUAL DE
SEGURANA BIOLGICA
EM LABORATRIO
Terceira edio
Durante mais de 20 anos, desde que foi publicado em 1983, o Manual
de Segurana Biolgica nos Laboratrios tem sido uma fonte de
orientaes prticas sobre tcnicas de segurana biolgica para os
laboratrios de todos os nveis. Boas Tcnicas de Microbiologia e a
utilizao apropriada do equipamento de proteco por parte de um
pessoal bem formado continuam a ser os elementos fundamentais da
segurana biolgica laboratorial. No entanto, a globalizao, os
progressos considerveis da tecnologia, a emergncia de novas
doenas e as ameaas graves que constituem a utilizao e libertao
intencionais de agentes microbiolgicos e toxinas obrigaram a uma
reviso dos procedimentos em vigor. Nesta nova edio, o Manual foi
portanto alvo de uma ampla reviso e expanso do seu mbito.
O Manual abrange agora a avaliao dos riscos e a utilizao segura
da tecnologia de recombinao de ADN, e fornece igualmente
orientaes para a fiscalizao e certificao dos laboratrios. Foram
igualmente introduzidos conceitos de biosegurana e os mais recentes
regulamentos internacionais para o transporte de substncias
infecciosas. Documentao sobre segurana em laboratrios de
unidades de sade, publicada anteriormente pela OMS noutras
publicaes, foi igualmente incorporada no Manual.
Esperamos que o Manual continue a estimular os pases a introduzir
programas de segurana biolgica e cdigos nacionais de procedi-
mentos para o manuseamento seguro de materiais potencialmente
infecciosos.
Manual de segurana
biolgica em laboratrio
Terceira edio
Genebra
2004
Catalogao pela Biblioteca da OMS
Manual de segurana biolgica em laboratrio 3
a
edio
1.Connamento de riscos biolgicos mtodos 2.Laboratrios padres 3.Infeco
em laboratrio preveno e controlo 4.Manuais I.Ttulo.
ISBN 92 4 154650 6 (Classicao LC/NLM: QY 25) WHO/CDS/CSR/LYO/2004.11
Esta publicao foi apoiada com uma subveno Grant/Cooperative Agreement Number
U50/CCU012445-08 dos Centros para Controlo e Preveno de Doenas (CDC), Atlanta, GA,
EUA. A responsabilidade pelas informaes contidas nesta publicao cabe exclusivamente aos seus
autores e no representam necessariamente o ponto de vista ocial dos CDC.
Organizao Mundial da Sade 2004
Todos os direitos reservados. As publicaes da Organizao Mundial da Sade podem ser pedidas a:
Marketing e Divulgao, Organizao Mundial da Sade, 20 Avenue Appia, 1211 Genebra 27, Sua (Tel:
+41 22 791 2476; fax: +41 22 791 4857; e-mail: bookorder@who.int). Os pedidos de autorizao para
reproduo ou traduo das publicaes da OMS para venda ou para distribuio no comercial devem
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por parte da Organizao Mundial da Sade, nenhum julgamento sobre o estatuto jurdico de qualquer
pas, territrio, cidade ou zona, nem de suas autoridades, nem to pouco questes de demarcao de suas
fronteiras ou limites. As linhas ponteadas nos mapas representam fronteiras aproximativas sobre as quais
pode ainda no existir acordo completo.
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Organizao Mundial da Sade os aprove ou recomende, dando-lhes preferncia a outros anlogos no
mencionados. Com excepo de erros ou omisses, uma letra maiscula inicial indica que se trata dum
produto de marca registado.
A Organizao Mundial da Sade no garante que as informaes contidas nesta publicao sejam
completas e correctas e no pode ser responsvel por qualquer prejuzo resultante da sua utilizao.
Desenhado por minimum graphics
Impresso em Malta
Prefcio viii
Agradecimentos ix
1. Princpios gerais 1
Introduo 1
PARTE I. Directivas de segurana biolgica 5
2. Avaliao dos riscos microbiolgicos 7
Espcimes sobre os quais se dispe de informaes limitadas 8
Avaliao de riscos e microrganismos geneticamente modicados 8
3. Laboratrios de base Nveis 1 e 2 de segurana biolgica 9
Cdigo de prticas 9
Concepo e instalaes do laboratrio 12
Equipamento laboratorial 14
Vigilncia mdica do pessoal 16
Formao 17
Manuseamento de resduos 18
Segurana qumica, elctrica, do equipamento e contra incndios e
radiaes 20
4. Laboratrio de connamento Nvel 3 de segurana biolgica 21
Cdigo de prticas 21
Equipamento laboratorial 23
Vigilncia mdica do pessoal 23
5. Laboratrio de connamento mximo Nvel 4 de segurana biolgica 26
Cdigo de prticas 26
6. Instalaes laboratoriais para animais 30
Instalao para animais Nvel 1 de segurana biolgica 31
iii
ndice
Invertebrados 34
7. Directivas para a scalizao da construo de instalaes
laboratoriais 36
8. Directivas para a certicao de instalaes laboratoriais 39
PARTE II. Directivas de proteco biolgica 47
9. Conceitos de proteco biolgica em laboratrio 49
PARTE III. Equipamento de laboratrio 51
10. Cmaras de segurana biolgica 53
Cmara de segurana biolgica Classe I 53
Cmaras de segurana biolgica Classe II 55
Cmara de segurana biolgica Classe III 57
Ligaes de ar da cmara de segurana biolgica 59
Escolha de uma cmara de segurana biolgica 59
Utilizao de cmaras de segurana biolgica em laboratrio 59
11. Equipamento de segurana 64
Isoladores de presso negativa em plstico exvel 64
Material de pipetar 66
Homogeneizadores, batedores, misturadores e geradores de ultra-sons 67
Ansas descartveis 67
Microincineradores 67
Equipamento e roupa de proteco pessoal 67
PARTE IV. Boas tcnicas microbiolgicas 71
12. Tcnicas de laboratrio 73
Manipulao segura de amostras em laboratrio 73
Uso de pipetas e meios de pipetar 74
Evitar a disperso de materiais infecciosos 74
Utilizao de cmaras de segurana biolgica 75
Evitar a ingesto de material infeccioso e o contacto com a pele e os olhos 75
Evitar a inoculao de material infeccioso 76
Separao de soro 76
Utilizao de centrifugadoras 76
MANUAL DE SEGURANA BIOLGICA EM LABORATRIO
iv
Utilizao de homogeneizadores, batedores, misturadores e geradores
de ultra-sons 77
Utilizao de separadores de tecidos 78
Manuteno e utilizao de frigorcos e congeladores 78
Abertura de ampolas contendo material infeccioso liolizado 78
Armazenagem de ampolas contendo material infeccioso 79
Precaues de base com sangue e outros uidos, tecidos e excrees
orgnicos 79
Precaues a ter com materiais podendo conter pries 80
13. Planos de emergncia e medidas a tomar 83
Plano de emergncia 83
Medidas de emergncia em laboratrios microbiolgicos 84
14. Desinfeco e esterilizao 87
Denies 87
Limpar materiais de laboratrio 88
Germicidas qumicos 88
Descontaminao do meio ambiente local 94
Descontaminao de cmaras de segurana biolgica 95
Lavagem/descontaminao das mos 95
Desinfeco e esterilizao pelo calor 96
Incinerao 98
Eliminao 99
15. Introduo ao transporte de substncias infecciosas 100
Regulamentos internacionais sobre transportes 100
O sistema bsico de embalagem tripla 101
Processo de limpeza de derrames 101
PARTE V. Introduo a biotecnologias 105
16. Segurana biolgica e tecnologia de recombinao de ADN 107
Consideraes de segurana biolgica para sistemas de expresso
biolgica 108
Consideraes de segurana biolgica para vectores de expresso 108
Vectores virais para transferncia de genes 108
Animais transgnicos e knock-out 108
Plantas transgnicas 109
Avaliaes de risco para organismos geneticamente modicados 109
Outras consideraes 110
NDICE
v
vi
PARTE VI. Segurana em relao a produtos qumicos, incndio
e electricidade 113
17. Produtos qumicos perigosos 115
Vias de exposio 115
Armazenagem de produtos qumicos 115
Regras gerais relativas a incompatibilidades qumicas 115
Efeitos txicos dos produtos qumicos 115
Produtos qumicos explosivos 116
Derrames de produtos qumicos 116
Gazes comprimidos e liquefeitos 117
18. Outros tipos de risco em laboratrio 118
Risco de incndio 118
Riscos elctricos 119
Rudo 119
Radiaes ionizantes 120
PARTE VII. Segurana: organizao e formao 123
19. Responsvel da segurana biolgica e comisso de segurana
biolgica 125
Responsvel da segurana biolgica 125
Comisso de segurana biolgica 126
20. Segurana do pessoal auxiliar 128
Servios de manuteno de aparelhos e instalaes 128
Servios de limpeza 128
21. Programas de formao 129
PARTE VIII. Lista de controlo de segurana 131
22. Lista de controlo de segurana 133
Locais 133
Armazenagem 133
Saneamento e instalaes para o pessoal 134
Aquecimento e ventilao 134
Iluminao 134
Servios 134
Segurana 135
Preveno e proteco contra incndios 135
Armazenagem de lquidos inamveis 136
NDICE
vii
Gases comprimidos e liquefeitos 136
Riscos elctricos 137
Proteco individual 137
Sade e segurana do pessoal 137
Equipamento de laboratrio 138
Materiais infecciosos 138
Produtos qumicos e substncias radioactivas 139
PARTE IX. Referncias, anexos e ndex 141
Referncias 143
Anexo 1 Primeiros socorros 146
Anexo 2 Vacinao do pessoal 147
Anexo 3 Centros Colaboradores da OMS para a Segurana Biolgica 148
Anexo 4 Segurana na utilizao do equipamento 149
Equipamento capaz de criar riscos 149
Anexo 5 Produtos qumicos: perigos e precaues 153
ndice remissivo 195
Prefcio
viii
A Organizao Mundial de Sade (OMS) reconhece h muito tempo que a segurana, e
particularmente a segurana biolgica, so questes importantes a nvel internacional; a
primeira edio do Manual de Segurana Biolgica em Laboratrio foi publicada em
1983. Este manual estimulava os pases a aceitar e introduzir conceitos bsicos de segu-
rana biolgica e a elaborar cdigos nacionais de procedimentos para um manuseamento
seguro dos microrganismos patognicos nos laboratrios dentro dos seus territrios.
Desde essa data (1983), numerosos pases tm utilizado as orientaes fornecidas no
manual para elaborar os referidos cdigos. Em 1993 foi publicada a segunda edio.
Nesta terceira edio do manual, a OMS continua a desempenhar o seu papel de lid-
erana internacional no campo da segurana, ao abordar as questes de proteco e de
segurana biolgicas, que temos de enfrentar no novo milnio. Nesta terceira edio sub-
linha-se devidamente a importncia da responsabilidade pessoal; acrescentaram-se novos
captulos sobre a avaliao dos riscos, a utilizao segura da tecnologia ADN recombi-
nante e o transporte de materiais infecciosos. Os recentes acontecimentos mundiais rev-
elaram novas ameaas sade pblica, atravs da utilizao e libertao intencionais de
agentes microbiolgicos e toxinas; em consequncia, nesta edio introduziram-se con-
ceitos de proteco biolgica proteco dos recursos biolgicos contra roubo, perda ou
desvio que possam levar utilizao inapropriada desses agentes como ameaa sade
pblica. Esta nova edio engloba igualmente informaes sobre segurana extradas da
publicao da OMS Safety in Health Care Laboratories (1997).
A terceira edio do Manual da OMS sobre Segurana Biolgica em Laboratrios
uma referncia til e um guia para os pases que aceitam o desao de elaborar e
estabelecer cdigos nacionais de procedimentos para um manuseamento seguro dos
recursos microbiolgicos, assegurando simultaneamente a sua disponibilidade para
ns clnicos, epidemiolgicos e de investigao.
Dr. A. Asamoa-Baah
Director-Geral Adjunto
Doenas Transmissveis
Organizao Mundial de Sade
Genebra Sua
Agradecimentos
ix
A elaborao desta terceira edio do Manual de Segurana Biolgica em Laboratrio
foi possvel graas s competncias das pessoas a seguir nomeadas e a quem apresen-
tamos os nossos profundos agradecimentos:
Dr. W. Emmett Barkley, Howard Hughes Medical Institute, Chevy Chase, MD,
USA
Dr. Murray L. Cohen, Centers for Disease Control and Prevention, Atlanta, GA, USA
(reformado)
Dr. Ingegerd Kallings, Swedish Institute of Infectious Disease Control, Stockholm,
Sweden
Sra. Mary Ellen Kennedy, Consultant in Biosafety, Ashton, Ontario, Canada
Sra. Margery Kennett, Victorian Infectious Diseases Reference Laboratory, North
Melbourne, Australia (reformada)
Dr. Richard Knudsen, Ofce of Health and Safety, Centers for Disease Control and
Prevention, Atlanta, GA, USA
Dra. Nicoletta Previsani, Biosafety programme, World Health Organization, Geneva,
Switzerland
Dr. Jonathan Richmond, Ofce of Health and Safety, Centers for Disease Control and
Prevention, Atlanta, GA, USA (reformado)
Dr. Syed A. Sattar, Faculty of Medicine, University of Ottawa, Ontario, Canada
Dra. Deborah E. Wilson, Division of Occupational Health and Safety, Ofce of
Research Services, National Institutes of Health, Department of Health and Human
Services, Washington, DC, USA
Dr. Riccardo Wittek, Institute of Animal Biology, University of Lausanne, Lausanne,
Switzerland
Tambm agradecemos a ajuda das seguintes pessoas:
Sra. Maureen Best, Ofce of Laboratory Security, Health Canada, Ottawa, Canada
Dr. Mike Catton, Victorian Infectious Diseases Reference Laboratory, North
Melbourne, Australia
Dr. Shanna Nebsy, Ofce of Health and Safety, Centers for Disease Control and
Prevention, Atlanta, GA, USA
x
Dr. Stefan Wagener, Canadian Science Centre for Human and Animal Health,
Winnipeg, Canada
Os autores e os revisores tambm desejam agradecer aos numerosos especialistas que
contribuiram para a primeira e segunda edies do Manual de Segurana Biolgica em
Laboratrio assim como para a publicao da OMS Safety in health-care laboratories
(1997).
1
1. Princpios gerais
Introduo
Neste manual, faz-se referncia aos perigos relativos de microrganismos infecciosos, por
grupos de risco (Grupos de Risco 1, 2, 3 e 4 da OMS). Esta classicao s deve ser
utilizada em trabalho laboratorial. No quadro a seguir descrevem-se os grupos de risco.
Quadro 1. Classicao de microrganismos infecciosos por grupo de risco
Grupo de Risco 1 (nenhum ou baixo risco individual e colectivo)
Um microrganismo que provavelmente no pode causar doena no homem ou num animal.
Grupo de Risco 2 (risco individual moderado, risco colectivo baixo)
Um agente patognico que pode causar uma doena no homem ou no animal, mas que
improvvel que constitua um perigo grave para o pessoal dos laboratrios, a comunidade,
o gado ou o ambiente. A exposio a agentes infecciosos no laboratrio pode causar uma
infeco grave, mas existe um tratamento ecaz e medidas de preveno e o risco de propagao
de infeco limitado.
Grupo de Risco 3 (alto risco individual, baixo risco colectivo)
Um agente patognico que causa geralmente uma doena grave no homem ou no animal, mas
que no se propaga habitualmente de uma pessoa a outra. Existe um tratamento ecaz, bem
como medidas de preveno.
Grupo de Risco 4 (alto risco individual e colectivo)
Um agente patognico que causa geralmente uma doena grave no homem ou no animal e que
se pode transmitir facilmente de uma pessoa para outra, directa ou indirectamente. Nem sempre
est disponvel um tratamento ecaz ou medidas de preveno.
As instalaes laboratoriais designam-se por: laboratrio de base Nvel 1 de segu-
rana biolgica; laboratrio de base Nvel 2 de segurana biolgica, de connamento
Nvel 3 de segurana biolgica, de connamento mximo Nvel 4 de segurana
biolgica. Estas designaes baseiam-se num conjunto de caractersticas de concepo,
estruturas de connamento, equipamento, prticas e normas operacionais necessrias
para trabalhar com agentes de diversos grupos de risco. No quadro 2 relacionam-se
mas no se equacionam os grupos de risco aos nveis de segurana biolgica dos
laboratrios que devem trabalhar com os organismos em cada grupo de risco.
Os pases (regies) devem estabelecer uma classicao nacional (regional) dos
microrganismos, por grupo de risco, levando em considerao:
1. A patogenicidade do organismo
2. O modo de transmisso e raio de aco do organismo. Estes podem ser inuen-
ciados pelos nveis de imunidade da populao local, pela densidade e movi-
mentos da populao atingida, pela presena de vectores apropriados e normas de
higiene ambiental.
3. A disponibilidade local de medidas de preveno ecazes, nomeadamente: pro-
laxia por vacinao ou administrao de antisoros (vacinao passiva); medidas
sanitrias (higiene dos alimentos e da gua); controlo de reservatrios animais ou
vectores artrpodes.
4. A disponibilidade local de tratamento ecaz, nomeadamente vacinao passiva,
vacinao ps-exposio e utilizao de agentes antimicrobianos, antivirais e
quimioteraputicos, levando em considerao a possibilidade de emergncia de
estirpes resistentes aos medicamentos.
A atribuio do nvel de segurana biolgica a um agente num trabalho laboratorial
deve basear-se numa avaliao dos riscos. Esta avaliao deve levar em conta o grupo
de risco e outros factores ao determinar o nvel apropriado de segurana biolgica.
2
Quadro 2. Relao dos grupos de risco com nveis de segurana biolgica,
prticas e equipamento
GRUPO NVEL DE TIPO DE PRTICAS DE EQUIPAMENTO DE
DE SEGURANA LABORATRIO LABORATRIO PROTECO
RISCO BIOLGICA
1 Bsico Ensino bsico, BTM Nenhum; mesa/
Nvel 1 de pesquisa bancada de trabalho
segurana
biolgica
2 Bsico Servios bsicos BTM e fatos de Bancada de trabalho
Nvel 2 de de sade; servios proteco, sinal e CSB para aerossis
segurana de diagnstico, de perigo potenciais
biolgica pesquisa biolgico
3 Connamento Servios especiais Como Nvel 2, mais CSB e/ou outros
Nvel 3 de de diagnstico, roupa especial, dispositivos primrios
segurana pesquisa acesso controlado, para todas as
biolgica ventilao dirigida actividades
4 Connamento Servio de Como Nvel 3, mais CSB classe III ou fatos
mximo manipulao de entrada hermtica, de presso positiva
Nvel 4 de agentes sada com duche, em conjunto com CSB
segurana patognicos eliminao especial classe II, autoclave
biolgica perigosos de resduos duas portas (atravs
da parede), ar ltrado
CSB Cmaras de segurana biolgica.
BTM Boas Tcnicas de Microbiologia (ver Parte IV deste Manual).
1. PRINCPIOS GERAIS
3
Por exemplo, um agente afectado no Grupo de Risco 2 precisa, de um modo geral, de
instalaes, equipamento, prticas e normas de segurana biolgica de Nvel 2 para
realizar o seu trabalho em segurana. Contudo, se determinadas experincias exigirem
a gerao de aerossis de alta concentrao, o Nvel 3 de segurana biolgica pode ser
mais apropriado para dar o grau de segurana necessrio, visto que assegura uma
maior connamento de aerossis no ambiente de trabalho do laboratrio. O nvel de
segurana biolgica atribuda a um determinado trabalho deve depender de uma
avaliao prossional baseada numa estimao dos riscos, em vez da atribuio
automtica de um nvel laboratorial de segurana biolgica, de acordo com a desig-
nao do grupo de risco atribudo ao agente patognico a utilizar (ver Captulo 2).
O Quadro 3 resume as instalaes e equipamentos necessrios para os 4 nveis de
segurana biolgica.
Quadro 3. Resumo dos requisitos para os diversos nveis de segurana biolgica
NVEL DE SEGURANA BIOLGICA
1 2 3 4
Isolamento
a
do laboratrio No No Sim Sim
Sala selada para descontaminao No No Sim Sim
Ventilao:
Aduo do ar No Desejvel Sim Sim
Sistema ventilao controlada No Desejvel Sim Sim
Exaustor com ltro HEPA* No No Sim/No
b
Sim
Entrada com porta dupla No No Sim Sim
Cmara de vcuo No No No Sim
Cmara de vcuo com duche No No No Sim
Antecmara No No Sim
Antecmara com duche No No Sim/No
c
No
Tratamento dos euentes No No Sim/No
c
Sim
Autoclave
in loco No Desejvel Sim Sim
numa sala do laboratrio No No Desejvel Sim
de duas portas No No Desejvel Sim
Cmaras de segurana biolgica No Desejvel Sim Sim
Meios de monitorizao da No No Desejvel Sim
proteco do pessoal
d
a
Isolamento ambiental e funcional do trnsito em geral.
b
Segundo a localizao do exaustor (ver Captulo 4).
c
Dependente dos agentes utilizados no laboratrio.
d
Por exemplo, janela, circuito fechado de televiso, comunicao em dois sentidos.
* Ar particulado de alta ecincia.
A atribuio do nvel de segurana biolgica leva em considerao o organismo
(agente patognico) utilizado, as instalaes disponveis, bem como o equipamento,
prticas e normas necessrias para trabalhar, com segurana, no laboratrio.
PARTE I
Directivas de
segurana biolgica
2. Avaliao dos riscos
microbiolgicos
7
A pedra angular da prtica da segurana biolgica a avaliao dos riscos. Embora
existam vrios meios para ajudar a avaliar os riscos inerentes a uma determinada expe-
rincia ou processo, a componente mais importante a ponderao prossional. A
avaliao dos riscos deve ser efectuada pelas pessoas mais familiares com as caracters-
ticas especcas dos eventuais organismos, normas, equipamento e modelos animais a
utilizar, bem como do equipamento de connamento e instalaes disponveis. O direc-
tor do laboratrio ou o investigador principal deve assegurar-se da realizao de avali-
aes de riscos adequadas e atempadas e trabalhar em ligao estreita com a comisso
de segurana e o pessoal da instituio, a m de assegurar a disponibilidade de equipa-
mento e instalaes apropriadas para apoiar as actividades em questo. Uma vez efec-
tuadas, as avaliaes dos riscos devem ser reanalisadas de tempos a tempos e revistas
sempre que necessrio, tendo em considerao novos dados que tenham um impacto
no grau de risco, bem como novas informaes pertinentes da literatura cientca.
Um dos instrumentos disponveis mais teis para efectuar uma avaliao dos riscos
microbiolgicos a elaborao de uma lista dos grupos de risco por agentes microbiolgi-
cos (ver Captulo 1). Contudo, a simples referncia a um grupo de risco insuciente para
realizar uma avaliao de riscos. Outros factores devem ser considerados, nomeadamente:
1. Patogenicidade do agente e dose infecciosa
2. Resultado potencial da exposio
3. Via natural da infeco
4. Outras vias de infeco, resultantes de manipulaes laboratoriais (parentricas,
via area, ingesto)
5. Estabilidade do agente no ambiente
6. Concentrao do agente e volume do material concentrado a manipular
7. Presena de um hospedeiro apropriado (humano ou animal)
8. Informao disponvel de estudos sobre animais e relatrios de infeces
adquiridas em laboratrios ou relatrios clnicos
9. Actividade laboratorial planeada (gerao de ultra-sons, produo de aerossis,
centrifugao, etc.)
10. Qualquer manipulao gentica do organismo que possa alargar o raio de aco
do agente ou alterar a sensibilidade do agente a regimes de tratamento ecazes
conhecidos (Ver Captulo 16)
11. Disponibilidade local de prolaxia ecaz ou intervenes teraputicas.
De acordo com a informao obtida durante a avaliao dos riscos, pode atribuir-se
um nvel de segurana biolgica actividade planeada, seleccionar o equipamento
de proteco pessoal apropriado e conceber normas-padro de procedimento
englobando outras intervenes de segurana, a m de assegurar a realizao mais
segura possvel da referida actividade.
Espcimes sobre os quais se dispe de informaes limitadas
O processo de avaliao dos riscos descrito atrs funciona bem quando est disponvel
uma informao adequada. Porm, h situaes em que a informao insuciente
para efectuar uma avaliao de riscos adequada, por exemplo, no caso de amostras
clnicas ou epidemiolgicas colhidas no terreno. Nestes casos, aconselhvel adoptar
uma abordagem prudente na sua manipulao.
1. Respeitar sempre as precaues-padro (2) e utilizar proteces (luvas, batas,
culos) nos casos de amostras colhidas em pacientes.
2. As normas e procedimentos de connamento bsico Nvel 2 de segurana
biolgica so o requisito mnimo para manusear amostras.
3. O transporte de amostras deve obedecer s regras e regulamentos nacionais e/ou
internacionais.
Certas informaes podem ajudar a determinar o risco de manuseamento destes
espcimes:
1. Dados mdicos sobre o doente
2. Dados epidemiolgicos (sobre morbilidade e mortalidade, via provvel de trans-
misso, outros dados de investigao sobre o surto)
3. Informaes sobre a origem geogrca do espcime.
Nos casos de surtos de doena de etiologia no conhecida, podem ser elaboradas e
enviadas pela Internet (www) directivas ad hoc apropriadas, tanto pelas autoridades
nacionais competentes como pela OMS (como foi o caso durante a emergncia do
sndroma respiratrio agudo (SARS) em 2003) indicando como embalar as amostras
para transporte e o nvel de segurana biolgica necessria para anlise das mesmas.
Avaliao de riscos e microrganismos geneticamente modicados
No Captulo 16 encontra-se uma anlise detalhada sobre avaliao de riscos e
organismos geneticamente modicados (OGM).
8
9
3. Laboratrios de base
Nveis 1 e 2 de segurana
biolgica
Neste manual, as orientaes e recomendaes apresentadas como requisitos mnimos
para os laboratrios de todos os nveis de segurana biolgica visam microrganismos
nos Grupos de Risco 1 a 4. Embora algumas precaues possam parecer desnecessrias
para alguns organismos no Grupo de Risco 1, elas so desejveis para efeitos de
formao, tendo em vista promover Boas (seguras) Tcnicas de Microbiologia
(BTM).
Os laboratrios para diagnsticos e cuidados de sade (sade pblica, clnicos ou
hospitalares) devem todos ser concebidos para o Nvel 2 de segurana biolgica, no
mnimo. Dado que nenhum laboratrio tem um controlo total dos espcimes que
recebe, os agentes laboratoriais podem car expostos a organismos em grupos de risco
mais elevado do que o previsto. Esta possibilidade tem de ser levada em conta na
elaborao dos planos e polticas de segurana biolgica. Em certos pases, os labo-
ratrios clnicos tm de estar ocialmente acreditados. De um modo geral, devem
adoptar-se e utilizar-se sempre as precaues-padro (2).
As directivas para laboratrios de base Nveis 1 e 2 de segurana biolgica
aqui apresentadas so abrangentes e detalhadas, dado que so fundamentais para os
laboratrios de todos os nveis de segurana biolgica. Para os laboratrios de
connamento Nvel 3 de segurana biolgica, e laboratrios de connamento
mximo Nvel 4, estas directivas foram alvo de modicaes e acrscimos tendo em
conta o trabalho com agentes patognicos especialmente perigosos (ver Captulos 4 e
5 a seguir).
Cdigo de prticas
Este cdigo uma lista das prticas e normas laboratoriais mais essenciais que esto
na base das BTM. Em muitos laboratrios e programas nacionais para laboratrios,
pode servir para elaborar prticas e normas escritas para actividades laboratoriais
seguras.
Cada laboratrio deve adoptar um manual de segurana ou de trabalho, que iden-
tique perigos conhecidos e potenciais e que especique as prticas e as normas para
eliminar ou minimizar esses perigos. As BTM so fundamentais para a segurana
dos laboratrios. O equipamento laboratorial especializado um suplemento dessa
segurana, mas no pode substituir as normas apropriadas. A seguir se descrevem os
conceitos mais importantes.
Acesso
1. O smbolo e o sinal internacionais de risco biolgico (Ilustrao 1) devem estar
expostos nas portas das salas onde se esto a manusear microrganismos do Grupo
de Risco 2 ou acima.
2. S o pessoal autorizado deve entrar nas reas de trabalho do laboratrio.
3. As portas do laboratrio devem permanecer fechadas.
4. As crianas no devem poder nem ser autorizadas a entrar nas reas de trabalho
do laboratrio.
5. O acesso aos compartimentos de animais requer autorizao especial.
6. Nenhum animal deve entrar no laboratrio, alm dos que se inserem nas activi-
dades do mesmo.
Proteco individual
1. Devem utilizar-se sempre capas, batas ou fatos nos trabalhos de laboratrio.
2. Devem utilizar-se luvas apropriadas em todos os trabalhos que impliquem con-
tacto directo ou acidental com sangue, uidos corporais, materiais potencialmente
10
RISCO BIOLGICO
ENTRADA RESERVADA A PESSOAL AUTORIZADO
Nvel de segurana biolgica : ______________________
Investigador responsvel : _________________________
Contacto em caso de emergncia : ___________________
Telefone de dia : _______________________________
Telefone privado : _______________________________
A autorizao para entrar deve ser pedida ao investigador
responsvel acima nomeado
Ilustrao 1. Sinal de risco biolgico a axar nas portas do laboratrio
infecciosos ou animais infectados. Aps utilizao, devem tirar-se as luvas de
forma assptica e lavar bem as mos.
3. O pessoal deve lavar as mos aps manusear material infeccioso e animais, e antes
de sair das reas de trabalho do laboratrio.
4. Devem utilizar-se culos de segurana, viseiras ou outros dispositivos de pro-
teco, sempre que for necessrio proteger os olhos e a cara de salpicos, impactos
de objectos e raios articiais ultravioleta.
5. proibido utilizar roupa de proteco laboratorial fora do laboratrio (cantina,
cafetaria, escritrios, biblioteca, salas do pessoal e quartos de banho).
6. Sandlias e chinelos no devem ser utilizados nos laboratrios.
7. proibido comer, beber, fumar, maquilhar-se e pr lentes de contacto nas reas
de trabalho do laboratrio.
8. proibido guardar comidas e bebidas nas reas de trabalho do laboratrio.
9. A roupa de proteco laboratorial utilizada no laboratrio no deve ser guardada
nos mesmos cacifos ou armrios da roupa normal.
Normas
1. Pipetar com a boca deve ser imperiosamente proibido.
2. Nenhum material deve ser colocado na boca. No lamber rtulos.
3. Todos os procedimentos tcnicos devem ser efectuados de forma a minimizar a
formao de aerossis e gotculas.
4. A utilizao de agulhas e seringas hipodrmicas deve ser limitada; estas no devem
ser utilizadas como substitutos de pipetas ou qualquer outro m, alm de injeces
parentricas ou aspirao de uidos de animais de laboratrio.
5. Qualquer derrame, acidente, exposio efectiva ou potencial a materiais infec-
ciosos deve ser noticado ao supervisor do laboratrio. Deve manter-se um registo
escrito de tais acidentes e incidentes.
6. Devem ser elaboradas normas escritas para a limpeza destes derrames e devida-
mente aplicadas.
7. Os lquidos contaminados devem ser (qumica ou sicamente) descontaminados
antes de serem lanados nos esgotos sanitrios. Pode ser necessrio um sistema
de tratamento de euentes, segundo a avaliao de riscos do agente (ou agentes)
manuseado.
8. Os documentos escritos susceptveis de sarem do laboratrio precisam de ser
protegidos de contaminao dentro do laboratrio.
reas de trabalho do laboratrio
1. O laboratrio deve estar arrumado, limpo e sem materiais que no sejam perti-
nentes para as suas actividades.
2. As superfcies de trabalho devem ser descontaminadas aps qualquer derrame
de material potencialmente perigoso e no m de um dia de trabalho.
3. LABORATRIOS DE BASE NVEIS 1 E 2 DE SEGURANA BIOLGICA
11
3. Todos os materiais contaminados, espcimes e culturas devem ser descontamina-
dos antes de serem ejectados ou limpos para reutilizao.
4. A embalagem e o transporte devem obedecer aos regulamentos nacionais e/ou
internacionais pertinentes.
5. Se as janelas forem de abrir, devem ter redes de proteco contra artrpodes.
Controlo da segurana biolgica
1. O director do laboratrio (a pessoa que tem a responsabilidade directa do labo-
ratrio) responsvel pela elaborao e adopo de um plano de controlo da
segurana biolgica e de um manual de segurana ou de operaes.
2. O supervisor do laboratrio (que depende do director do laboratrio) deve assegurar-
se de que o pessoal recebe uma formao regular em segurana laboratorial.
3. O pessoal deve ser alertado para os perigos especiais e deve ler o manual de segu-
rana ou de operaes e seguir as prticas e normas-padro. O supervisor deve
assegurar-se de que o pessoal compreende bem estas instrues. Um exemplar do
manual de segurana deve estar disponvel no laboratrio.
4. O laboratrio deve ter um programa de controlo de artrpodes e roedores.
5. O pessoal deve dispor de observao mdica, vigilncia e tratamento adequados,
sempre que necessrio, devendo assegurar-se a manuteno do historial mdico.
Concepo e instalaes do laboratrio
Ao conceber um laboratrio e atribuir-lhe um determinado nmero de actividades,
deve prestar-se uma ateno especial s condies susceptveis de provocar problemas
de segurana nomeadamente:
1. Formao de aerossis
2. Actividades com grandes volumes e/ou altas concentraes de microrganismos
3. Sobrelotao de pessoal e equipamento
4. Infestao de roedores e artrpodes
5. Entradas no autorizadas
6. Fluxo de trabalho: utilizao de amostras e reagentes especcos.
Nas ilustraes 2 e 3 a seguir, mostram-se exemplos de concepes de laboratrios
para os Nveis 1 e 2 de segurana biolgica.
Caractersticas
1. Espao amplo para empreender as actividades laboratoriais de forma segura, bem
como para a limpeza e manuteno.
2. As paredes, o tecto e o pavimento devem ser lisos, fceis de limpar, impermeveis
e resistentes a produtos qumicos e desinfectantes normalmente utilizados em
laboratrios. O pavimento deve ser anti-derrapante.
3. As bancadas devem ser impermeveis e resistentes a desinfectantes, cidos, lcalis,
solventes orgnicos e calor moderado.
12
4. A iluminao deve ser adequada a todas as actividades; devem evitar-se reexos e
brilho indesejveis.
5. O mobilirio deve ser robusto. O espao entre e debaixo de bancadas, cmaras e
equipamentos deve ser acessvel para a limpeza.
6. O espao de armazenamento deve ser apropriado para guardar o material de uso
corrente e evitar assim amontoados nas bancadas e passagens. Deve igualmente
prever-se um espao de armazenagem a longo prazo, convenientemente localizado
fora da rea de trabalho do laboratrio.
7. Deve igualmente prever-se espao e meios para um manuseamento seguro e
armazenagem de solventes, material radioactivo e gs comprimido e liquefeito.
8. Devem existir instalaes, fora da rea de trabalho do laboratrio, para guardar
roupas e objectos pessoais.
9. Devem igualmente existir, fora da rea de trabalho do laboratrio, instalaes para
comer, beber e descansar.
13
Ilustrao 2. Laboratrio tpico para o Nvel 1 de segurana biolgica
(grcos gentilmente cedidas por CUH2A, Princeton, NJ, EUA)
10. Em cada sala de laboratrio deve existir um lavatrio, se possvel com gua
corrente, e de preferncia perto da porta de sada.
11. As portas devem ter painis transparentes, proteco anti-fogo adequada e de
preferncia um sistema de fecho automtico.
12. No Nvel 2 de segurana biolgica, deve existir uma autoclave ou outro meio de
descontaminao, na proximidade adequada do laboratrio.
13. Os sistemas de segurana devem prever o combate a incndios, emergncias elc-
tricas, chuveiros de emergncia e meios de lavagem dos olhos.
14. Devem estar previstas reas ou salas de primeiros socorros convenientemente
equipadas e facilmente acessveis (ver anexo 1).
15. Ao planear novas instalaes, deve examinar-se a possibilidade de prever sistemas
de ventilao mecnica que injectem um uxo de ar sem recirculao. Se no
houver ventilao mecnica, as janelas devem ser de abrir e estar equipadas de
redes contra artrpodes.
16. essencial dispor de um abastecimento seguro de gua de boa qualidade. No
devem existir inter-conexes entre a gua de beber e a gua para o laboratrio.
Deve instalar-se um dispositivo anti-reuxo para proteger o sistema de abastec-
imento de gua.
17. Deve haver um fornecimento de electricidade adequado e de conana e ilumi-
nao de emergncia que permita uma sada segura. desejvel dispor de um
gerador para apoio do equipamento essencial, como incubadoras, cmaras de
segurana biolgica, congeladores, etc., bem como para a ventilao dos compar-
timentos dos animais.
18. Deve igualmente dispor-se de um fornecimento de gs adequado e de conana.
A boa manuteno do sistema imprescindvel.
19. Os laboratrios e os compartimentos de animais so ocasionalmente alvo de
vandalismo. Deve examinar-se a possibilidade de instalar um sistema de proteco
das instalaes e contra incndios. Portas robustas, grades nas janelas e restrio
do nmero de chaves so elementos imprescindveis. Outras medidas que
aumentem a segurana devem ser examinadas e aplicadas, se apropriado.
Equipamento laboratorial
Juntamente com as boas prticas e procedimentos, a utilizao do equipamento de
segurana ajudar a reduzir os riscos ao enfrentar os perigos inerentes segurana
biolgica. Nesta seco, abordam-se os princpios bsicos relativos ao equipamento
apropriado para os laboratrios dos diversos nveis de segurana biolgica. Os
requisitos para equipamento de laboratrio de um nvel de segurana biolgica
mais elevado so abordados nos captulos pertinentes.
O director do laboratrio, aps consulta com o responsvel da segurana
biolgica e a comisso de segurana (se houver), deve assegurar-se da disponibilidade
do equipamento adequado e da sua boa utilizao. A escolha do equipamento deve
levar em conta determinados princpios gerais, nomeadamente:
14
1. Ser concebido para evitar ou limitar o contacto entre o operador e o material
infeccioso
2. Ser construdo com materiais impermeveis aos lquidos, resistentes corroso e
conformes aos requisitos estruturais
3. Ser fabricado sem asperidades, arestas cortantes e partes-movedias sem proteco
4. Ser concebido, construdo e instalado de forma a facilitar o seu manuseamento,
manuteno, limpeza, descontaminao e testes de certicao; vidro e outros
materiais quebrveis devem ser evitados, sempre que possvel.
Pode ser necessrio analisar as possibilidades detalhadas de utilizao e as especi-
caes de construo do equipamento, para se assegurar que possui as necessrias cara-
ctersticas de segurana (ver tambm captulos 10 e 11).
15
(grcos gentilmente cedidos por CUH2A, Princeton, NJ, EUA). As manipulaes
susceptveis de gerar aerossis tm lugar numa cmara de segurana biolgica.
As portas so mantidas fechadas e com os sinais de perigo apropriados. Os
resduos potencialmente contaminados so separados do sistema geral de
evacuao de resduos.
Equipamento essencial de segurana biolgica
1. Meios de pipetar para evitar pipetar com a boca. Existem as mais diversas
formas.
2. Cmaras de segurana biolgica, para utilizar sempre que:
se manusear material infeccioso; este material pode ser centrifugado no labo-
ratrio se forem utilizados copos hermticos de segurana centrfuga e se
forem enchidos e esvaziados numa cmara de segurana biolgica
houver um risco acrescido de infeco por via area
forem utilizados procedimentos com alto potencial de produo de aerossis,
tais como: centrifugao, moagem, mistura, agitao, separao por ultra-sons,
abertura de recipientes com material infeccioso, cuja presso interna seja
diferente da presso ambiental, inoculao intranasal em animais e colheita de
tecidos infecciosos de animais e de ovos.
3. Ansas de plstico descartveis; podem utilizar-se incineradores de espirais
elctricos, dentro das cmaras de segurana biolgica, a m de reduzir a produo
de aerossis.
4. Tubos e frascos com tampa de rosca.
5. Autoclaves ou outros meios apropriados para descontaminar o material
infeccioso.
6. Pipetas Pasteur de plstico, descartveis, sempre que disponveis, para evitar o
vidro.
7. O equipamento como as autoclaves e as cmaras de segurana biolgica precisa
de ser validado com mtodos apropriados, antes de ser utilizado. A recerticao
deve ser feita a intervalos peridicos, segundo as instrues do fabricante (ver
Captulo 7).
Vigilncia mdica do pessoal
A entidade empregadora, atravs do director do laboratrio, tem de assegurar uma
vigilncia apropriada da sade do pessoal do laboratrio. O objectivo desta vigiln-
cia controlar o aparecimento de doenas do trabalho. Para o efeito deve:
1. Proceder vacinao activa ou passiva, sempre que pertinente (ver Anexo 2)
2. Facilitar a deteco precoce das infeces adquiridas no laboratrio
3. Excluir as pessoas altamente susceptveis (grvidas e imunodecientes) de
trabalhos laboratoriais de alto risco
4. Fornecer equipamento e meios de proteco pessoal ecazes.
Directivas para a vigilncia do pessoal de laboratrio que manuseia microrganismos,
ao Nvel 1 de segurana biolgica
A experincia mostra que no provvel que os microrganismos manuseados a este
nvel provoquem doena no homem ou doena animal de importncia veterinria.
Contudo, todo o pessoal de laboratrio deve ser submetido a um controlo de sade
16
pr-emprego, onde se registe a sua histria mdica. aconselhvel a noticao
imediata de doenas ou acidentes laboratoriais e deve chamar-se a ateno de todo o
pessoal para a importncia de manter boas tcnicas de microbiologia.
Directivas para a vigilncia do pessoal de laboratrio que manuseia microrganismos
ao Nvel 2 de segurana biolgica
1. necessrio um controlo de sade antes de assumir as suas funes. Deve
registar-se a histria mdica da pessoa e efectuar-se uma avaliao centrada na
sade ocupacional.
2. A administrao do laboratrio deve manter registo de doenas e ausncias.
3. O pessoal feminino em idade de procriar deve ser avisado dos riscos para o feto
inerentes sua exposio a determinados microrganismos (vrus da rubola). As
medidas exactas a tomar para proteger o feto variam, segundo os microrganismos
a que a me esteja exposta.
Formao
Erros humanos e ms tcnicas podem comprometer as melhores salvaguardas de
proteco do pessoal de laboratrio. Assim, um pessoal consciente da importncia da
segurana, bem informado sobre a forma de reconhecer e controlar os perigos even-
tuais nos laboratrios, uma pea fundamental para prevenir infeces, incidentes e
acidentes nos laboratrios. Por este motivo, essencial assegurar uma formao con-
tnua in loco sobre medidas de segurana. Um programa ecaz de segurana comea
pelos responsveis dos laboratrios que devem assegurar a integrao de prticas e
procedimentos laboratoriais seguros na formao bsica do pessoal. A formao em
medidas de segurana deve ser parte integrante da insero de novos trabalhadores;
estes devem familiarizar-se com o cdigo de prticas e directivas do laboratrio,
incluindo o manual de segurana ou de operaes. Devem adoptar-se medidas que
assegurem que os novos agentes leram e compreenderam as directivas, tais como
assinar certas pginas. Os supervisores dos laboratrios desempenham o papel mais
importante na formao do seu pessoal em boas tcnicas laboratoriais. O responsvel
pela segurana biolgica pode ajudar na formao e na elaborao de material de
formao e de documentao (ver igualmente Captulo 21).
A formao do pessoal deve sempre incluir informao sobre mtodos seguros para
situaes de alto risco, que o pessoal de laboratrio tem frequentemente de enfrentar,
nomeadamente:
1. Riscos de inalao (durante a produo de aerossis, por exemplo) ao utilizar
ansas, semear s riscas a gelose, pipetar, fazer esfregaos, abrir frascos de culturas,
tirar amostras de sangue/soro, centrifugar, etc.
2. Riscos de ingesto ao manusear amostras, esfregaos e culturas
3. Riscos de perfuraes cutneas ao utilizar seringas e agulhas
4. Mordidelas e arranhes ao manusear animais
17
5. Manuseamento de sangue e outros materiais patolgicos potencialmente perigosos
6. Descontaminao e eliminao de material infeccioso.
Manuseamento de resduos
Consideram-se como resduos tudo aquilo que se deve deitar fora.
Nos laboratrios, a descontaminao dos resduos e a sua eliminao nal esto
intimamente interligadas. No dia a dia, so poucos ou nenhuns os materiais contami-
nados que precisam de ser retirados do laboratrio ou destrudos. A maior parte
dos recipientes de vidro, instrumentos e roupa de laboratrio so reutilizados ou
reciclados. O princpio dominante que todo o material infeccioso deve ser
descontaminado, esterilizado em autoclave ou incinerado no laboratrio.
Antes de deitar fora qualquer objecto ou material de laboratrio utilizado
em microrganismos ou tecidos animais potencialmente infecciosos, devemos
assegurar-nos:
1. Se os referidos objectos ou materiais foram bem descontaminados ou desinfecta-
dos segundo as normas em vigor.
2. Na negativa, se foram embalados segundo as normas para a incinerao imediata
in loco ou transferncia para outras instalaes com capacidade de incinerao.
3. Se a eliminao dos objectos ou materiais descontaminados implica, para as
pessoas que procedem sua eliminao ou que possam entrar em contacto com
eles, qualquer outro perigo potencial, biolgico ou outro, fora das instalaes.
Descontaminao
A esterilizao pelo calor, em autoclave, o mtodo preferencial para todos os proces-
sos de descontaminao. O material a descontaminar e eliminar deve ser colocado
num recipiente (ex.: sacos de plstico para autoclaves) com cores codicadas, segundo
se destinem a autoclaves e/ou incineradores. Outros mtodos s podem ser considera-
dos se removerem e/ou matarem os microrganismos (ver Capitulo 14 para mais
pormenores).
Normas de manuseamento e eliminao de resduos e materiais contaminados
Deve adoptar-se um sistema de identicao e separao de materiais e recipientes
infecciosos. Devem seguir-se os regulamentos nacionais e internacionais, tendo em
conta as seguintes categorias:
1. Resduos no-contaminados (no-infecciosos) que podem ser reutilizados, reci-
clados ou eliminados como resduos domsticos ordinrios
2. Material cortante contaminado (infeccioso) agulhas hipodrmicas, escalpelos,
facas e vidro partido; este material deve sempre ser arrumado em recipientes
antiperfurantes, munidos de tampas, e tratado como material infeccioso
3. Material contaminado para descontaminao em autoclave, lavagem posterior e
reutilizao ou reciclagem
18
4. Material contaminado para descontaminao em autoclave e eliminao
5. Material contaminado para incinerao directa.
Material cortante
As agulhas hipodrmicas, uma vez utilizadas, no devem ser reintroduzidas nos seus
invlucros, partidas ou retiradas das seringas descartveis. Todo o conjunto deve ser
posto num recipiente para descartveis. As seringas descartveis, quer utilizadas com
ou sem agulhas, devem ser colocadas em recipientes para descartveis e incineradas,
aps descontaminao em autoclave, se necessrio.
Os recipientes para agulhas descartveis devem ser resistentes/antiperfurantes e no
devem ser totalmente cheios; quando estiverem quase cheios (3/4 da sua capacidade)
devem ser postos em contentores para resduos infecciosos e incinerados, aps
descontaminao em autoclave, se as prticas do laboratrio o exigirem. Os
recipientes para agulhas descartveis no devem ser deitados em aterros.
Material contaminado (potencialmente infeccioso) para descontaminao em autoclave e
utilizao ulterior
No procurar fazer qualquer prlavagem a este material. Qualquer limpeza ou
reparao s pode ser feita aps descontaminao em autoclave ou desinfeco.
Material contaminado (potencialmente infeccioso) para eliminao
Com excepo das agulhas, j atrs abordadas, todo o material contaminado (poten-
cialmente infeccioso) deve ser descontaminado em autoclave, em recipientes imper-
meveis, por exemplo sacos de plstico para autoclaves com cores codicadas, antes
de ser eliminado. Aps a descontaminao, o material deve ser colocado em recipi-
entes de transporte para ser levado para o incinerador. O material proveniente de
actividades ligadas a cuidados de sade no deve ser deitado fora em aterros, mesmo
que j tenha sido descontaminado. Se o laboratrio possuir um incinerador, pode
omitir-se a descontaminao em autoclave, colocando os resduos contaminados em
recipientes especcos (com cores codicadas) e levando-os directamente para o
incinerador. Os recipientes de transporte reutilizveis tm de ser impermeveis e ter
tampas hermticas. Devem ser desinfectados e limpos, antes de serem enviados de
volta ao laboratrio.
Em todos os postos de trabalho devem ser colocados recipientes para descartveis
(baldes ou vasos) de preferncia inquebrveis (ex. plstico). Quando se utilizam desin-
fectantes o material deve permanecer em contacto ntimo com o desinfectante (no
protegido por bolhas de ar) o tempo apropriado, segundo o desinfectante utilizado
(ver Capitulo 14). Os recipientes para descartveis devem ser descontaminados e
lavados, antes de serem reutilizados.
A incinerao de material contaminado deve ser aprovada pelas autoridades de
sade pblica e ambiental, bem como pelo responsvel da segurana biolgica no
laboratrio (ver Captulo 14 seco Incinerao).
19
Segurana qumica, elctrica, do equipamento e contra incndios e radiaes
Acidentes qumicos, elctricos e provocados por incndio ou radiao podem provo-
car uma ruptura no connamento de organismos patognicos. portanto essencial
manter altos padres de segurana nestes domnios, em qualquer laboratrio de
microbiologia. As regras e regulamentos pertinentes so normalmente estabelecidos
pelas autoridades nacionais/locais competentes, a quem se deve solicitar assistncia,
se necessrio. Na Parte IV deste manual (Captulos 17 e 18) descrevem-se por-
menorizadamente os eventuais perigos qumicos, elctricos, de incndio e radiao.
No Captulo 11 encontra-se informao adicional sobre equipamentos de
segurana.
20
21
4. Laboratrio de connamento
Nvel 3 de segurana biolgica
O laboratrio de connamento Nvel 3 de segurana biolgica foi concebido e
equipado para trabalhar com microrganismos do Grupo de Risco 3 e com grandes
quantidades ou altas concentraes de microrganismos do Grupo de Risco 2 que cons-
tituem um risco acrescido de propagao de aerossis. O connamento ao Nvel 3
de segurana biolgica exige um reforo dos programas operacionais e de segurana
superior ao dos laboratrios bsicos Nveis 1 e 2 de segurana biolgica (ver
Captulo 3).
As directivas apresentadas neste captulo so de facto suplementos s directivas
para laboratrios de base Nveis 1 e 2 de segurana biolgica, as quais devem por-
tanto ser aplicadas, antes de aplicar as directivas para os laboratrios de connamento
Nvel 3 de segurana biolgica. Os principais acrscimos e alteraes encontram-se:
1. No cdigo de prticas
2. Na concepo e instalaes do laboratrio
3. Na vigilncia mdica do pessoal.
Esta categoria de laboratrios deve estar registada junto (ou na lista) das autoridades
nacionais competentes.
Cdigo de prticas
O cdigo de prticas para os laboratrios de base Nveis 1 e 2 de segurana
biolgica aplicvel, excepto nos seguintes casos:
1. O sinal/smbolo internacional de risco biolgico (Ilustrao 1) colocado nas portas
de acesso ao laboratrio deve indicar o nvel de segurana biolgica e o nome do
supervisor do laboratrio que controla o acesso, bem como denir eventuais
condies especcas para entrar na referida rea, por exemplo, estar vacinado.
2. A roupa de proteco deve ser do tipo: batas envolventes e com a parte da frente
reforada, fatos de esfrega, capas, gorras e, quando apropriado, proteco de
sapatos ou sapatos de laboratrio. Batas normais de laboratrio, de apertar
frente, no so apropriadas, bem como mangas curtas ou arregaadas. A roupa de
proteco no pode ser utilizada fora do laboratrio e tem de ser descontaminada
antes de ser lavada. Quando se trabalha com determinados agentes (ex. agrcolas
ou zoonticos) pode ser necessrio tirar a roupa toda e vestir-se com roupa espec-
ca de laboratrio.
3. A manipulao de qualquer material potencialmente infeccioso deve ser realizada
numa cmara de segurana biolgica ou noutro dispositivo de connamento
primrio (ver Captulo 10).
4. A utilizao de material de proteco respiratria pode ser necessria em certos
procedimentos laboratoriais ou ao trabalhar com animais infectados com certos
agentes patognicos (ver Captulo 11).
A concepo e instalaes para os laboratrios de base Nveis 1 e 2 de segurana
biolgica so aplicveis, excepto nos seguintes casos:
1. O laboratrio tem de estar separado de reas de passagem livre, dentro do edif-
cio. Pode obter-se uma separao adicional, colocando o laboratrio na parte sem
sada de um corredor, ou construindo uma parede de separao e porta de acesso
atravs de uma antecmara (ex. entrada de porta dupla ou laboratrio de base de
Nvel 2 de segurana biolgica) reservando uma rea especca destinada a manter
o diferencial de presso entre o laboratrio e o seu espao adjacente. A antec-
mara deve ter instalaes para separar a roupa limpa da roupa suja e um chuveiro
pode igualmente ser necessrio.
2. As portas da antecmara devem fechar-se automaticamente e estar interligadas,
de modo que s possa abrir-se uma de cada vez. Pode prever-se um painel que-
brvel para utilizar como sada de emergncia.
3. As superfcies das paredes, tectos e pavimentos devem ser resistentes gua e fceis
de lavar. As perfuraes nessas superfcies (ex. passagens de cabos e canalizaes)
devem estar seladas para facilitar a descontaminao do local.
4. A sala de laboratrio deve poder ser selada para descontaminao. Os sistemas de
aduo de ar devem ser construdos de modo a permitir a descontaminao por
meio de gases.
5. As janelas devem ser fechadas, seladas e inquebrveis.
6. Um lavatrio com comandos no manuais deve ser instalado perto das portas de sada.
7. Deve existir um sistema controlvel de ventilao com aduo de ar para a sala de labo-
ratrio. Deve ser instalado um sistema de monitorizao visual, com ou sem alarme,
para que o pessoal possa sempre assegurar-se do bom funcionamento da ventilao.
8. O sistema de ventilao do edifcio deve ser concebido e instalado, de forma que
o ar do laboratrio de confinamento Nvel 3 de segurana biolgica no seja
encami-nhado para outras reas do edifcio. Este ar pode ser filtrado (HEPA Ar
Particulado de Alta Eficincia) recondicionado e recirculado dentro deste labo-
ratrio; quando este ar do laboratrio (e no o ar das cmaras de segurana
biolgica) for lanado para o exterior, deve ser expelido longe do edifcio e das
entradas de ar; dependendo dos agentes utilizados, pode ser expelido atravs de
filtros HEPA. A fim de evitar uma pressurizao positiva contnua do labo-
ratrio, pode instalar-se um sistema de controlo HVAC (HVAC Aquecimento,
Ventilao e Ar Condicionado). Pode igualmente ponderar-se a possibilidade de
22
instalar alarmes audveis ou bem visveis para informar o pessoal de uma falha
no sistema HVAC.
9. Todos os ltros HEPA devem ser instalados de forma a permitir descontaminao
por meio de gases e vericao.
10. As cmaras de segurana biolgica devem estar situadas longe das zonas de
passagem e das correntes de ar provenientes das portas e sistemas de ventilao
(ver Captulo 10).
11. O ar expelido das cmaras de segurana biolgica Classe 1 ou 2 (ver Captulo
10) e que passou atravs dos ltros HEPA, tem de ser expelido de forma a evitar
interferncia com o equilbrio do ar da cmara ou com o exaustor do edifcio.
12. O laboratrio de connamento deve possuir uma autoclave para descontaminar
resduos contaminados. Se for necessrio remover resduos infecciosos do labo-
ratrio de connamento para descontaminao e eliminao, preciso faz-los
transportar em recipientes selados, inquebrveis e hermticos, segundo os regula-
mentos nacionais ou internacionais pertinentes.
13. O sistema de abastecimento de gua deve estar equipado com dispositivos anti-
reuxo. As linhas de vcuo devem ser protegidas com sifes de desinfectantes
lquidos e ltros HEPA, ou equivalentes. As bombas de vcuo alternativas devem
tambm ser devidamente protegidas com sifes e ltros.
14. A concepo das instalaes e os procedimentos operacionais do laboratrio de
connamento Nvel 3 de segurana biolgica devem estar documentados.
Na Ilustrao 4 d-se um exemplo de concepo de um laboratrio para o Nvel 3 de
segurana biolgica.
Equipamento laboratorial
Os princpios para a escolha do equipamento do laboratrio, incluindo as cmaras de
segurana biolgica (ver Captulo 10) so os mesmos que para os laboratrios de base
Nvel 2 de segurana biolgica. No entanto, no Nvel 3 de segurana biolgica, o
manuseamento de todo o material potencialmente infeccioso tem de ser efectuado
dentro de uma cmara de segurana biolgica ou outro dispositivo de connamento
primrio. Deve igualmente considerar-se equipamento como centrifugadoras, que
requerem, no entanto, acessrios de connamento adicionais, tais como baldes de
segurana ou rotores de connamento. Algumas centrifugadoras e outros equipa-
mentos, como os instrumentos de triagem de clulas para utilizar com clulas infe-
ctadas, podem precisar de ventilao adicional do exaustor com ltragem HEPA para
uma conteno ecaz.
Vigilncia mdica do pessoal
Os objectivos dos programas de vigilncia mdica do pessoal para os laboratrios de
base Nvel 1 e 2 de segurana biolgica tambm se aplicam aos laboratrios de
connamento Nvel 3 de segurana biolgica, excepto nos seguintes casos:
4. LABORATRIO DE CONFINAMENTO NVEL 3 DE SEGURANA BIOLGICA
23
1. O exame mdico de todo o pessoal de laboratrio, que trabalha em laboratrios de
connamento Nvel 3 de segurana biolgica, obrigatrio. Este exame deve incluir
o registo da histria clnica detalhada e um exame fsico centrado na prosso.
2. Aps um exame clnico satisfatrio, o agente recebe um carto de contacto mdico
(ver Ilustrao 5) mencionando que o portador trabalha numa unidade equipada
com um laboratrio de connamento Nvel 3 de segurana biolgica. Este carto
deve conter uma fotograa do portador, ter formato de bolso e estar sempre na
posse do portador. O nome da pessoa a contactar tem de ser denido no labo-
ratrio, mas pode incluir o director do laboratrio, o mdico assistente e/ou o
responsvel da segurana biolgica.
24
(grcos gentilmente cedidos por CUH2A, Princeton, NJ, EUA). O laboratrio est
separado do local de passagem geral e a ele se acede atravs de uma antecmara (que
pode ser uma entrada de porta dupla ou um laboratrio de base Nvel 2 de segu-
rana biolgica) ou uma caixa de ar. O laboratrio est equipado de uma autoclave
para descontaminao de resduos antes da sua eliminao, assim como de um
lavatrio com comandos no manuais. O ar circula do exterior para o interior e todo
o trabalho com material infeccioso realizado numa cmara de segurana biolgica.
4. LABORATRIO DE CONFINAMENTO NVEL 3 DE SEGURANA BIOLGICA
25
A. Recto do carto
Contacto mdico
Nome
Dr. Tel. profissional
Para o empregado
Guardar este carto na sua possesso. No caso de doena febril inexplicvel,
apresent-lo ao seu mdico e notificar uma das seguintes pessoas segundo
a ordem da lista:
Tel. pessoal
Dr. Tel. profissional
Tel. pessoal
Fotografia
do portador
B. Verso do carto
Para o mdico
O portador deste carto trabalha para
numa zona onde esto presentes vrus, rickettsias, bactrias, protozorios ou
helmintas patognicos. No caso de um acesso febril inexplicvel, queira por
favor contactar o patro para obter informaes sobre os agentes aos quais
o empregado pode ter sido exposto.

Nome do laboratrio:
Endereo:
Tel.:
Ilustrao 5. Modelo proposto de carto mdico
26
5. Laboratrio de connamento
mximo Nvel 4 de
segurana biolgica
O laboratrio de connamento mximo Nvel 4 de segurana biolgica foi conce-
bido para trabalhar com microrganismos do Grupo de Risco 4. Antes de construir e
pr a funcionar um laboratrio deste tipo, deve proceder-se a amplas consultas com
as instituies que tm a experincia de trabalhar com instalaes semelhantes. Os
laboratrios operacionais de connamento mximo Nvel 4 de segurana biolgica
devem estar sob o controlo das autoridades sanitrias nacionais ou organismos equi-
valentes. A informao a seguir apresentada deve ser considerada como material de
introduo. As entidades que procuram criar um laboratrio deste tipo devem con-
tactar o programa de Segurana Biolgica da OMS para obter informaes adicionais
1
.
Cdigo de prticas
O cdigo de prticas para o Nvel 3 de segurana biolgica aplicvel, excepto nos
seguintes casos:
1. Deve aplicar-se a regra de trabalho a dois , isto nenhuma pessoa pode tra-
balhar sozinha. Isto particularmente importante quando se trabalha nas insta-
laes de Nvel 4 de segurana biolgica onde preciso trabalhar com fatos
pressurizados.
2. necessrio mudar totalmente de roupa e de sapatos antes de entrar e de sair do
laboratrio.
3. O pessoal deve receber uma formao em tcnicas de extraco de emergncia,
em caso de ferimentos ou doena.
4. Deve existir um mtodo de comunicao entre o pessoal que est a trabalhar no
laboratrio de connamento mximo Nvel 4 de segurana biolgica e o restante
pessoal do laboratrio, para contactos de rotina e casos de emergncia.
As caractersticas de um laboratrio de connamento Nvel 3 de segurana biol-
gica tambm se aplicam ao laboratrio de connamento mximo Nvel 4 de segu-
rana biolgica, acrescentando-se as seguintes:
1
Biosafety programme, Departement of Communicable Disease Surveillance and Response, World Health
Organization, 20 Avenue Appia, 1211 Geneva 27, Switzerland (http://www.who.int/csr/).
1. Connamento primrio. Deve existir um sistema ecaz de connamento
primrio, composto por um ou uma combinao dos seguintes requisitos:
Laboratrio com cmaras de Classe 3 necessrio passar por duas portas, no
mnimo, antes de entrar nas salas que contm cmaras de segurana biolgica
Classe 3 (Sala de cmaras). Nesta congurao laboratorial, as cmaras
de segurana biolgica Classe 3 constituem o connamento primrio.
necessrio um chuveiro nos vestirios internos e externos. O material e os
abastecimentos que no entrem na sala das cmaras pelos vestirios, so intro-
duzidos atravs de uma autoclave ou cmara de fumigao de duas portas.
Uma vez a porta exterior bem fechada, o pessoal dentro do laboratrio pode
abrir a porta interior para retirar o material. As portas da autoclave ou da
cmara de fumigao so concebidas de forma a que a porta exterior no se
possa abrir antes da autoclave ter terminado o ciclo de esterilizao ou da
cmara de fumigao ter sido descontaminada (ver Captulo 10).
Laboratrio para trabalhos com fatos pressurizados A concepo e as
instalaes de um laboratrio com fatos pressurizados com aparelhos de
respirao incorporados diferem signicativamente das do laboratrio de
Nvel 4 de segurana biolgica com cmaras de segurana biolgica Classe
3. As salas deste tipo de laboratrio so concebidas de forma a encaminhar o
pessoal atravs dos vestirios e zonas de descontaminao, antes de penetrar
nas reas onde se manuseiam os materiais infecciosos. necessrio instalar um
chuveiro de descontaminao dos fatos para uso obrigatrio do pessoal que
sai da zona de connamento. entrada e sada dos vestirios, existem igual-
mente duches para o pessoal. O pessoal que vai trabalhar na zona onde se tra-
balha com fatos pressurizados tem de se equipar com um fato hermtico, de
presso positiva, com ltro HEPA e dispositivo de respirao; o sistema de
fornecimento de ar tem de ter uma capacidade 100% redundante com uma
fonte independente, para utilizao em caso de emergncia. A entrada no
laboratrio feita atravs de uma cmara de vcuo com portas hermticas. O
laboratrio deve possuir um sistema apropriado de alerta para o pessoal
que a trabalha, para utilizao em caso de ruptura num dos sistemas (ver
Captulo 10).
2. Acesso controlado. O laboratrio de connamento mximo Nvel 4 de segu-
rana biolgica deve estar situado num edifcio independente ou numa zona bem
delimitada, dentro de um edifcio seguro. A entrada e sada do pessoal e dos
abastecimentos feita atravs de uma cmara de vcuo ou sistema de ltros. Ao
entrar, o pessoal tem de mudar completamente de roupa; ao sair, tem de tomar
duche antes de vestir a sua prpria roupa.
3. Sistema de ar controlado. Nas instalaes preciso manter presso negativa. Tanto
admisso como evacuao, o ar tem de ser processado atravs de um ltro
HEPA. H diferenas signicativas nos sistemas de ventilao do laboratrio com
cmaras de Classe 3 e do laboratrio com fatos pressurizados:
5. LABORATRIO DE CONFINAMENTO MXIMO NVEL 4 DE SEGURANA BIOLGICA
27
Laboratrio com cmaras de Classe 3 O ar fornecido cmara de segurana
biolgica de Classe 3 pode ser extrado da prpria sala de laboratrio, atravs
de um ltro HEPA instalado na cmara ou enviado directamente pelo sistema
de abastecimento de ar. O ar expelido da cmara de segurana biolgica de
Classe 3 tem de passar atravs 2 ltros HEPA, antes de ser lanado para o exte-
rior. A cmara deve funcionar sempre a uma presso negativa em relao ao
laboratrio. necessrio um sistema de ventilao prpria no-recirculante
para o laboratrio de cmaras.
Laboratrio para trabalhos com fatos pressurizados So necessrios sistemas
prprios de fornecimento e de expulso do ar. H um equilbrio entre as com-
ponentes fornecimento e expulso do sistema de ventilao, de modo
a permitir um uxo de ar dirigido, desde a rea de menor perigo para a rea
ou reas de maior perigo potencial. So necessrios exaustores em abundn-
cia para assegurar que as instalaes permanecem sempre em presso nega-
tiva. As presses diferenciais dentro do laboratrio e entre o laboratrio e as
zonas adjacentes devem ser monitorizadas. O uxo de fornecimento e expul-
so de ar do sistema de ventilao tem de ser monitorizado e deve utilizar-se
um sistema apropriado de controlo para evitar a pressurizao do laboratrio.
necessrio assegurar o fornecimento de ar ltrado HEPA rea onde se usam
os fatos pressurizados, ao chuveiro de descontaminao, e s cmaras de vcuo
ou de descontaminao. O ar expelido deste laboratrio tem de ser processado
atravs de um conjunto de 2 ltros HEPA, antes de ser lanado no exterior.
Como alternativa, aps a passagem pelos 2 ltros HEPA, o ar pode ser recir-
culado mas apenas dentro do laboratrio com fatos pressurizados. Em
nenhuma circunstncia, o ar evacuado de um laboratrio de segurana biol-
gica de nvel 4 deve ser recirculado para outros locais. Ao optar-se pela recir-
culao do ar num laboratrio com fatos pressurizados, devem tomar-se as
maiores precaues. Devem levar-se em conta os tipos de pesquisa feita,
equipamento, produtos qumicos e outros materiais utilizados no laboratrio,
bem como espcies animais eventualmente envolvidas na(s) pesquisa(s).
Todos os ltros HEPA precisam de ser testados e certicados anualmente. Os
receptculos dos ltros HEPA foram concebidos para permitir uma descontami-
nao in loco antes de retirar os ltros. Como alternativa, pode remover-se o ltro
e coloc-lo num recipiente selado prova de gs, para uma posterior desconta-
minao e/ou incinerao.
4. Descontaminao de euentes. Todos os euentes da rea de fatos pressurizados,
cmara de descontaminao, chuveiro de descontaminao ou cmara de segu-
rana biolgica Classe 3 tm de ser descontaminados antes de serem denitiva-
mente eliminados. O tratamento por calor o mtodo de eleio. Os euentes
podem tambm precisar de uma correco para um PH neutro antes da sua
eliminao. As guas dos duches e retretes podem ser deitadas directamente
nos esgotos sem tratamento.
28
5. Esterilizao de resduos e material. No laboratrio, deve existir uma autoclave
de duas portas ( frente e atrs). Devem existir igualmente outros mtodos de
descontaminao para artigos e equipamento que no suportam a esterilizao
por vapor.
6. Pontos de entrada para amostras, material e animais devem igualmente estar
previstos.
7. Sistema de emergncia e linha(s) prpria(s) de fornecimento de energia devem
estar previstas.
8. Drenos de connamento devem estar instalados.
Devido grande complexidade da concepo e construo de instalaes de Nvel 4
de segurana biolgica, quer do tipo cmara ou fato pressurizado, no se incluram
representaes esquemticas de tais instalaes.
Devido grande complexidade do trabalho nos laboratrios de Nvel 4 de segu-
rana biolgica, deve elaborar-se, em separado, um manual de trabalho detalhado,
e testado em seguida em exerccios de formao. Por outro lado, deve conceber-se
um programa de emergncia (ver Captulo 13). Para preparar este programa, deve
estabelecer-se uma cooperao activa com as autoridades sanitrias nacionais e
locais. Devem igualmente envolver-se outros servios de emergncia, por exemplo:
bombeiros, polcia e hospitais designados.
5. LABORATRIO DE CONFINAMENTO MXIMO NVEL 4 DE SEGURANA BIOLGICA
29
30
6. Instalaes laboratoriais
para animais
Todos os que utilizam animais para ns experimentais e de diagnstico tm a obri-
gao moral de tomar todas as precaues para evitar inigir-lhes dor e sofrimento
desnecessrios. Os animais devem ter alojamentos higinicos e confortveis e comida
e gua salubres e apropriadas. No nal das experincias devem ser tratados com
humanidade.
Por razes de segurana, o alojamento dos animais deve ser uma unidade inde-
pendente e separada. Se for adjacente a um laboratrio, a sua concepo deve prever
o seu isolamento das partes pblicas do laboratrio, se tal for necessrio, bem como
a sua descontaminao e desinfestao.
Quadro 4. Nveis de connamento das instalaes para animais: resumo das
prticas e equipamento de segurana.
GRUPO DE NVEL DE PRTICAS LABORATORIAIS E EQUIPAMENTO DE SEGURANA
RISCO CONFINAMENTO
1 NSBIA 1 Acesso limitado, roupa de proteco e luvas
2 NSBIA 2 Prticas de NSBIA 1 mais: sinais de alerta para perigos.
CSB Classe 1 e 2 para actividades que produzem aerossis.
Descontaminao de resduos e alojamentos antes de lavar.
3 NSBIA 3 Prticas de NSBIA 2 mais: acesso controlado.
CSB e roupa de proteco especial para todas as actividades
4 NSBIA 4 Prticas de NSBIA 3 mais: acesso estritamente limitado.
Mudar de roupa antes de entrar. CSB Classe 3 ou
fatos de presso positiva. Duche sada. Descontaminao de
todos os resduos antes da sua remoo da instalao.
NSBIA Nvel de segurana biolgica em instalaes para animais.
CSB Cmaras de segurana biolgica.
As instalaes para animais, tal como os laboratrios, podem ser classicadas de Nvel
1, 2, 3 e 4 de segurana biolgica de instalaes para animais, segundo a avaliao do
risco e o grupo de risco dos microrganismos a serem investigados.
Quanto aos agentes a utilizar no laboratrio animal, devemos considerar os
seguintes factores:
1. A via normal de transmisso
2. As quantidades e concentraes a utilizar
3. A via de inoculao
4. Se estes agentes podem ser excretados e qual a via.
No que se refere aos animais a utilizar em laboratrio, devemos considerar os
seguintes factores:
1. A natureza dos animais (agressividade e tendncia para morder e arranhar)
2. Os seus ecto- e endoparasitas naturais
3. As zoonoses a que so susceptveis
4. A possvel disseminao de alrgenos.
Tal como nos laboratrios, os requisitos para as caractersticas de concepo, equipa-
mentos e precaues a tomar tornam-se mais rigorosos, segundo o nvel de segurana
biolgica. Estes nveis, j resumidos no Quadro 4, descrevem-se a seguir. Estas direc-
tivas so de carcter aditivo, isto : cada nvel superior engloba automaticamente as
normas do nvel inferior, acrescentando-lhe as suas prprias normas.
Instalao para animais Nvel 1 de segurana biolgica
Este nvel adequado para a manuteno da maior parte dos animais aps quarentena
(excepto primatas no humanos, sobre os quais se deve consultar as autoridades
nacionais) e para os animais que foram deliberadamente inoculados com agentes do
Grupo de Risco 1. So necessrias boas tcnicas de microbiologia. O director das insta-
laes para animais tem de estabelecer polticas, procedimentos e protocolos para
todas as operaes e para o acesso ao viveiro. Deve ser estabelecido um programa
de vigilncia mdica apropriada para o pessoal. Deve igualmente preparar-se e
adoptar-se um manual de segurana ou de operaes.
Este nvel adequado para trabalhar com animais que foram deliberadamente
inoculados com microrganismos do Grupo de Risco 2. As seguintes precaues de
segurana so aplicveis:
1. necessrio observar todos os requisitos estabelecidos para o Nvel 1 de segurana
biolgica.
2. Devem axar-se sinais de risco biolgico (ver Ilustrao 1) nas portas e outros
locais apropriados.
3. A instalao deve ser concebida de forma a facilitar a sua limpeza e manuteno.
4. As portas devem abrir para dentro e fechar automaticamente.
5. O aquecimento, a ventilao e a iluminao devem ser adequados.
6. Se houver ventilao, o uxo do ar deve ser dirigido para o interior. O ar usado
deve ser expelido e no recirculado para qualquer outra parte do edifcio.
7. O acesso deve ser restringido ao pessoal autorizado.
6. INSTALAES LABORATORIAIS PARA ANIMAIS
31
8. Nenhum animal deve entrar nas instalaes, alm daqueles utilizados em
experincias.
9. Deve existir um programa de controlo de roedores e artrpodes.
10. As janelas, se houver, devem ser seguras, inquebrveis e, se forem de abrir, devem
estar equipadas com redes contra artrpodes.
11. As superfcies de trabalho devem ser descontaminadas com desinfectantes ecazes,
aps utilizao (ver Captulo 14).
12. Cmaras de segurana biolgica (Classes 1 e 2) ou caixas isolantes com forneci-
mento de ar e exaustores com HEPA so necessrias para trabalhos que impliquem
eventualmente a produo de aerossis.
13. Deve existir uma autoclave in loco ou na proximidade adequada da instalao.
14. Os forros para instalao dos animais devem ser retirados de forma a minimizar
a produo de aerossis e p.
15. Todos os resduos e forros tm de ser descontaminados antes de eliminados.
16. A utilizao de instrumentos cortantes deve ser limitada, sempre que possvel. O
material cortante deve ser recolhido em recipientes no perfurveis com tampas
e tratado como material infeccioso.
17. O material destinado a autoclaves ou incinerao tem de ser transportado de
forma segura, em recipientes fechados.
18. As caixas/gaiolas tm de ser descontaminadas, aps utilizao.
19. As carcaas dos animais devem ser incineradas.
20. O pessoal tem de utilizar roupa e equipamento de proteco nas instalaes e
retir-los antes de sair.
21. Devem existir lavatrios na instalao e o pessoal tem de lavar as mos antes de sair.
22. Qualquer ferimento, por mais pequeno que seja, tem de ser tratado apropriada-
mente, noticado e registado.
23. Comer, beber, fumar e maquilhar-se formalmente proibido nas instalaes.
24. Todo o pessoal tem de receber uma formao apropriada.
Este nvel adequado para trabalhar com animais que foram deliberadamente ino-
culados com agentes do Grupo de Risco 3, ou quando indicado de outra forma por
uma avaliao dos riscos. Todos os sistemas, prticas e procedimentos precisam de ser
revistos e certicados de novo, todos os anos.
As seguintes precaues de segurana so aplicveis:
1. necessrio observar todos os requisitos estabelecidos para os Nveis 1 e 2 de segu-
rana biolgica.
2. O acesso tem de ser rigorosamente controlado.
3. A instalao tem de estar separada de outras zonas de alojamento e do laboratrio
por uma sala com uma entrada de duas portas, formando uma antecmara.
32
4. A antecmara deve dispor de lavatrios.
5. A antecmara deve dispor de chuveiros.
6. necessria uma ventilao mecnica para assegurar um uxo de ar contnuo
atravs de todas as salas. O ar usado tem de passar por ltros HEPA antes de ser
lanado para o exterior sem recircular. O sistema tem de ser concebido de forma
a evitar um reuxo acidental e uma pressurizao positiva em qualquer parte do
alojamento animal.
7. Deve existir uma autoclave num local conveniente para o alojamento, onde se
encontra o risco biolgico. Resduos infecciosos devem ser processados pela auto-
clave, antes de passarem para outras zonas das instalaes.
8. Deve existir igualmente um incinerador in loco ou encontrar uma soluo alter-
nativa com as autoridades competentes.
9. As caixas/gaiolas de animais infectados com microrganismos do Grupo de Risco
3 devem ser colocadas em isoladores ou salas com exaustores atrs das
caixas/gaiolas.
10. Os forros devem libertar o menor p possvel.
11. Toda a roupa de proteco tem de ser descontaminada antes de ser lavada.
12. As janelas devem estar fechadas e seladas e ser inquebrveis.
13. A vacinao do pessoal deve ser assegurada, sempre que necessrio.
As actividades nesta unidade esto normalmente ligadas s do laboratrio de con-
namento mximo Nvel 4 de segurana biolgica e as regras e regulamentos
nacionais e locais tm de ser harmonizados para se aplicarem a ambas instalaes. Se
as actividades tiverem de ser realizadas num laboratrio de trabalhos com fatos pres-
surizados, devem respeitar-se prticas e procedimentos adicionais aos aqui descritos
(ver Captulo 5).
1. necessrio observar todos os requisitos estabelecidos para os Nveis 1, 2, e 3 de
segurana biolgica.
2. O acesso tem de ser rigorosamente controlado; s o pessoal designado pelo direc-
tor do laboratrio tem autorizao de entrar.
3. Nenhum membro do pessoal pode trabalhar sozinho; a regra das duas pessoas
aplica-se.
4. O pessoal deve ter recebido o nvel mais elevado de formao em microbiologia
e estar familiarizado com os perigos inerentes ao seu trabalho e as precaues
necessrias.
5. Nas zonas de alojamento dos animais infectados com os agentes do Grupo de
Risco 4 tm de observar-se os critrios de connamento descritos e aplicados nos
laboratrios de connamento mximo Nvel 4 de segurana biolgica.
6. A entrada para a instalao faz-se atravs de uma antecmara de vcuo, com um
vestirio e chuveiros separando a rea limpa da rea restrita.
33
7. O pessoal tem de tirar a sua prpria roupa e vestir roupa especial de proteco.
Quando terminar, tem de retirar a roupa de proteco para descontaminao
numa autoclave e tomar um duche antes de sair.
8. A instalao deve possuir um sistema de ventilao com ltro HEPA, concebido
de forma a assegurar uma presso negativa (uxo de ar dirigido para dentro).
9. O sistema de ventilao deve ser concebido de forma a evitar o retrouxo e a pres-
surizao positiva.
10. igualmente necessrio uma autoclave de duas portas, com a parte no conta-
minada num quarto fora das salas de connamento, para a troca de material.
11. Deve igualmente existir uma passagem (cmara) de vcuo, com a parte no con-
taminada num quarto fora das salas de connamento, para a troca de material que
no se pode descontaminar em autoclave.
12. Todo o manuseamento de animais infectados com agentes do grupo de Risco 4
deve processar-se em condies de connamento mximo Nvel 4 de segurana
biolgica.
13. Todos os animais devem estar alojados em isoladores.
14. Todos os forros dos alojamentos e resduos dos animais tm de ser processados
em autoclave, antes de ser retirados das instalaes.
15. O pessoal deve estar sob vigilncia mdica.
Invertebrados
Tal como no caso dos vertebrados, o nvel de segurana biolgica da instalao
para animais determinado pelos grupos de risco dos agentes sob investigao,
ou quando indicado por uma avaliao dos riscos. As seguintes precaues
suplementares so necessrias com determinados artrpodes, particularmente com
insectos voadores:
1. Devem prever-se salas separadas para os invertebrados infectados e para os no
infectados.
2. As salas devem poder ser seladas para fumigao.
3. Pulverizadoresinsecticidas devem estar disponveis no local.
4. Devem estar disponveis meios de arrefecimento para reduzir, quando for
necessrio, a actividade dos invertebrados.
5. O acesso s instalaes deve efectuar-se atravs de uma antecmara com armadi-
lhas para insectos e redes contra os artrpodes nas portas.
6. Todas as sadas de ventilao (exaustores) e janelas de abrir devem estar equipadas
com redes contra os artrpodes.
7. Os ralos para resduos nas pias e esgotos nunca devem car secos.
8. Todos os resduos devem ser descontaminados em autoclaves dado que alguns
invertebrados no morrem com desinfectantes.
9. Deve controlar-se os nmeros de formas larvares e adultas de artrpodes voadores,
rastejantes e saltitantes.
34
10. Os receptculos de carraas e caros devem permanecer em bandejas de leo.
11. Os insectos voadores infectados ou potencialmente infectados devem ser guarda-
dos em gaiolas de rede dupla.
12. Os artrpodes infectados ou potencialmente infectados devem ser manuseados
em cmaras de segurana biolgica ou caixas isoladoras.
13. Os artrpodes infectados ou potencialmente infectados podem ser manipulados
em bandejas de arrefecimento.
Para mais informaes ver referncias (36).
35
36
7. Directivas para a scalizao
da construo de instalaes
laboratoriais
A scalizao da construo das instalaes pode denir-se como o processo sis-
temtico de anlise e documentao assegurando que determinados componentes
estruturais, sistemas ou componentes de sistemas foram instalados, inspeccionados,
testados operacionalmente e vericados como conformes s normas nacionais e inter-
nacionais apropriadas. Os critrios e funes de concepo do respectivo sistema de
construo estabelecem esses requisitos. Por outras palavras, os laboratrios do Nvel
1 a 4 de segurana biolgica tm requisitos de licenciamento diferentes e cada vez mais
complexos. As condies geogrcas e climticas, tais como as falhas geolgicas e o
calor, frio ou humidade extremos, tambm podem afectar a concepo do laboratrio
e os requisitos de scalizao. Aps a concluso do processo de scalizao, os com-
ponentes estruturais e sistemas de apoio pertinentes tm sido sujeitos s diversas
condies de funcionamento e falhas eventuais que se possam normalmente prever e
tm sido aprovados.
O processo de scalizao e os critrios de aceitao devem ser estabelecidos na
fase inicial, de preferncia durante a fase de programao do projecto de construo
ou renovao. Ao entrar em contacto com o processo de scalizao na fase inicial do
projecto, os arquitectos, engenheiros, pessoal de segurana e de sade e os prprios
donos dos laboratrios compreendem as capacidades do referido laboratrio e esta-
belecem expectativas uniformes para a performance do laboratrio e/ou instalao.
O processo de scalizao d instituio e comunidade vizinha uma maior con-
ana que os sistemas estruturais, elctricos, mecnicos, de canalizao, de conna-
mento e descontaminao, de segurana e alarme funcionam conforme previsto,
assegurando o connamento de qualquer microrganismo potencialmente perigoso
com que se esteja a trabalhar num determinado laboratrio ou instalao para
animais.
As actividades de scalizao comeam geralmente durante a fase de programao
do projecto e prosseguem durante a construo e perodo de garantia subsequente do
laboratrio ou instalao. O perodo de garantia dura geralmente um ano aps a ocu-
pao dos locais. Aconselha-se que o scal escolhido seja independente dos arquitec-
tos, engenheiros e construtores envolvidos na concepo e construo da obra. O scal
serve de advogado da instituio que constri ou renova o laboratrio e deve ser
considerado como um membro da equipa de concepo; a participao do scal na
fase de programao inicial do projecto essencial. Nalguns casos, a instituio pode
actuar como o seu prprio scal. No caso de instalaes laboratoriais mais complexas
(Nveis 3 e 4 de segurana biolgica) a instituio deve escolher um scal externo com
experincia e xito comprovado na scalizao de laboratrios complexos de segu-
rana biolgica e instalaes para animais. Mesmo nos casos em que se utiliza um
scal independente, a instituio deve sempre ser membro da equipa de scalizao;
aconselha-se que alm do scal, o Responsvel da Segurana, o Responsvel do
Projecto, o Director do Programa e um representante do pessoal de Operaes e
Manuteno faam parte da equipa.
A seguir se encontra uma lista de sistemas e componentes laboratoriais que podem
ser includos num plano de scalizao para testes funcionais, segundo o nvel de con-
namento da instalao a renovar ou construir. A lista no exaustiva. evidente que
o plano de scalizao reectir a complexidade do laboratrio a planear.
1. Construir sistemas de automao incluindo ligaes a postos remotos de moni-
torizao e controlo
2. Sistemas de vigilncia e deteco electrnicos
3. Fechaduras de segurana e leitores de proximidade electrnicos
4. Sistemas de aquecimento, ventilao (aduo e exausto) e ar condicionado
5. Sistemas de ltragem de ar particulado de alta ecincia (HEPA)
6. Sistemas de descontaminao HEPA
7. Controlo sistemas HVAC, exaustor e sincronismos
8. Amortecedores isoladores hermticos
9. Sistemas de refrigerao de laboratrios
10. Caldeiras e sistemas a vapor
11. Sistemas de deteco, alarme e extino de incndios
12. Dispositivos de preveno do reuxo das guas domsticas
13. Sistemas de tratamento da gua (osmose de reverso, gua destilada)
14. Sistemas de tratamento e neutralizao de euentes lquidos
15. Sistemas elementares de drenagem de esgotos
16. Sistemas de descontaminantes qumicos
17. Sistemas de gs para laboratrios mdicos
18. Sistemas de ar para respirao
19. Sistemas de ar para servios e instrumentos
20. Vericao diferencial de presso em cascada nos laboratrios e reas de apoio
21. Rede da rea local (LAN) e sistemas de dados informticos
22. Sistemas normais de energia (rede de electricidade)
23. Sistemas elctricos de emergncia
24. Sistemas elctricos ininterruptveis
25. Sistemas luzes de emergncia
26. Vedantes para xaes elctricas
27. Vedantes para perfuraes elctricas e mecnicas
28. Sistemas telefnicos
7. DIRECTIVAS PARA A FISCALIZAO DA CONSTRUO DE INSTALAES LABORATORIAIS
37
29. Sincronizadores de controlo das portas de passagens de vcuo
30. Vedantes de portas hermticas
31. Vedantes de janelas e de painis de observao
32. Proteco contra perfuraes do revestimento
33. Vericao da integridade das estruturas (pavimentos, paredes e tectos)
34. Vericao do revestimento de proteco (pavimentos, paredes e tectos)
35. O connamento a Nvel 4 de segurana biolgica engloba pressurizao e isolao
36. Cmaras de segurana biolgica
37. Autoclaves
38. Sistema de nitrognio lquido e alarmes
39. Sistemas de deteco de gua (no caso de inundaes dentro da zona de
connamento)
40. Sistemas de chuveiros de descontaminao e aditivos qumicos
41. Sistemas de lavagem e neutralizao de gaiolas/jaulas
42. Tratamento de resduos.
38
39
8. Directivas para a certicao de
instalaes laboratoriais
Os laboratrios so meios complexos e dinmicos. Hoje em dia, os laboratrios clni-
cos e de investigao biomdica tm de adaptar-se rapidamente s necessidades e
presses sempre crescentes de sade pblica. Um exemplo disto a necessidade dos
laboratrios ajustarem as suas prioridades, para enfrentar os desaos das doenas
infecciosas emergentes ou re-emergentes. A m de assegurar que a adaptao e
manuteno se processa prontamente e de forma segura e apropriada, todos os labo-
ratrios clnicos e de investigao biolgica devem ser certicados regularmente. A
certicao de um laboratrio ajuda a assegurar que:
1. Esto a ser utilizados controlos tcnicos apropriados e esto a funcionar ade-
quadamente, conforme previsto
2. Existem controlos administrativos apropriados in loco e previstos nos protocolos
3. O equipamento de proteco pessoal apropriado s tarefas realizadas
4. A descontaminao dos resduos e do material foi resolvida de forma adequada e
existem procedimentos apropriados para o tratamento dos resduos
5. Existem procedimentos adequados para a segurana geral do laboratrio,
incluindo a segurana fsica, elctrica e qumica.
A certicao dos laboratrios diferente das actividades de scalizao (Captulo 7)
em diversos pontos importantes. A certicao de um laboratrio a anlise
sistemtica de todas as caractersticas e procedimentos de segurana, dentro do
laboratrio (controlos tcnicos, equipamentos de proteco pessoal e controlos
administrativos). As prticas e procedimentos de segurana biolgica so igualmente
examinados. A certicao dos laboratrios uma actividade contnua de controlo da
qualidade e da segurana, que deve decorrer regularmente.
Os prossionais de segurana e sade ou de segurana biolgica, devidamente
formados, podem efectuar actividades de certicao de laboratrios. As instituies
podem utilizar pessoal que tenha o conjunto de aptides necessrias para efectuar
as scalizaes, vistorias ou inspeces (termos sinnimos) ligadas ao processo de
certicao. Contudo, podem decidir ou ser estimuladas a recrutar terceiros para
essas funes.
As instalaes laboratoriais clnicas e de investigao biomdica podem criar
instrumentos de scalizao, vistoria ou inspeco, a m de assegurar consistncia no
processo de certicao. Tais instrumentos devem ser sucientemente exveis para
abranger as diferenas fsicas e de procedimento entre os laboratrios, que exige o tipo
de trabalho a efectuar, permitindo simultaneamente uma abordagem consistente
dentro da instituio. Deve, porm, ter-se o cuidado de assegurar que os referidos
instrumentos so apenas utilizados por pessoal devidamente formado e que no so
utilizados como substitutos de uma boa avaliao prossional da segurana biol-
gica. Nos Quadros 5 a 7 do-se exemplos desses instrumentos.
Os resultados da scalizao, vistoria ou inspeco devem ser debatidos com o
pessoal e a direco do laboratrio. Dentro do laboratrio, deve identicar-se e
responsabilizar-se uma pessoa para assegurar que so tomadas as medidas de cor-
reco das decincias identicadas durante o processo de scalizao. A certicao
do laboratrio no estar completa e o laboratrio no ser declarado funcional, at
que as referidas decincias tenham sido devidamente corrigidas.
A complexidade das operaes laboratoriais do Nvel 4 de segurana biolgica
ultrapassa o mbito deste manual. Para mais informaes e detalhes, queira contac-
tar o programa de Segurana Biolgica da OMS
1
(ver Anexo 3).
40
1
WHO Biosafety programme, Department of Communicable Disease Surveillance and Response, World
Health Organization, 20 Avnue Appia, 1211 Geneva 27, Switzerland (htp://www.who.int/csr/).
8. DIRECTIVAS PARA A CERTIFICAO DE INSTALAES LABORATORIAIS
41
Quadro 5. Laboratrio de base Nvel 1 de segurana biolgica: Vistoria da segu-
rana em laboratrio
Localizao . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Data . . . . . . . . . . . . . . . . .
Responsvel do laboratrio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
ITEM VISTORIADO (DATA DA VISTORIA) SIM NO N/A COMENTRIOS
Laboratrio
Sinalizao prpria: Luz ultravioleta, laser, material Nvel de segurana
radioactivo, etc. ......................................................... biolgica:
Directivas de segurana biolgica apropriadas, Anexar formulrio
disponveis e aplicadas ............................................. apropriado
Equipamento laboratorial devidamente etiquetado Vistoria do Nvel de
(risco biolgico, radioactivo, txico, etc.) ................. Segurana Biolgica
Concepo do laboratrio
Concebido para limpeza fcil .........................................
Luzes ultravioletas com comutador interligado .............
Todas as prateleiras xas ...............................................
Tampos das bancadas impermeveis e resistentes
a cidos, lcalis, solventes orgnicos e ao calor ......
Iluminao apropriada ...................................................
Espao de armazenagem adequado e bem utilizado .....
Cilindros de gs
Todos os cilindros xos .................................................
Cilindros de reserva com tampas ..................................
Gases asxiantes e perigosos s em salas ventiladas ..
Cilindros de reserva ou vazios in loco ...........................
Produtos qumicos
Inamveis armazenados em armrios apropriados .....
Geradores de perxidos (com data de recepo e
data de abertura) ......................................................
Produtos qumicos bem separados ...............................
Produtos qumicos perigosos armazenados acima
do nvel dos olhos ....................................................
Produtos qumicos armazenados no cho .....................
Recipientes de produtos qumicos no fechados ..........
Todas as solues devidamente etiquetadas .................
Termmetros de mercrio em utilizao .......................
Frigorcos/congeladores/cmaras frigorcas
Presena de alimentos para consumo humano .............
Inamveis em contentores antiexplosivos ...................
Avisos nas portas caso contenham substncias
cancergenas, radioactividade e/ou riscos
biolgicos .................................................................
Cmara frigorca dispe de disparo de emergncia ....
42
Equipamento elctrico
Existem extenses .........................................................
Tomadas com ligao terra e polaridade adequada ....
Conexes perto de pias, debaixo de chuveiros, etc. ......
Equipamento com cabos esados ou danicados .........
Tomadas ou ligaes elctricas sobrecarregadas ..........
Ligaes elctricas instaladas no pavimento .................
Fusveis adequados nas caixas-condutas ......................
Tomadas elctricas perto de fontes de gua esto
conformes as normas locais .....................................
Cabos elctricos possuem ligao terra .....................
Aquecedores portteis ...................................................
Equipamento de proteco pessoal
Soluo para lavar os olhos ..........................................
Chuveiros de segurana .................................................
(luvas, batas, culos, etc.) ........................................
Pessoal devidamente equipado ......................................
Batas, capas, aventais, luvas e outro material
de proteco no utilizado fora do laboratrio .........
Equipamento de proteco pessoal disponvel
para armazenagem criognica ..................................
Tratamento de resduos
Provas de eliminao inadequada dos resduos ............
Resduos separados em contentores apropriados .........
Contentores de resduos qumicos etiquetados, datados
e selados ...................................................................
Contentores de resduos qumicos devidamente
acondicionados e armazenados ................................
Recipientes de objectos cortantes devidamente
utilizados e eliminados ..............................................
Nenhum lixo no cho .....................................................
Normas para a eliminao dos resduos axadas no
laboratrio .................................................................
Programas de sade ocupacional e de segurana existentes
Comunicao de riscos ..................................................
Proteco respiratria ....................................................
Proteco auditiva ..........................................................
Monitorizao do formaldedo .......................................
Monitorizao do xido de etileno .................................
Monitorizao do gs anestsico ...................................
43
Controlos tcnicos gerais
Fluxo de ar do laboratrio negativo, para
instalaes gerais, corredores e escritrios .............
Pias e drenos servem de respiradouros .........................
Lavatrios disponveis para lavar as mos ....................
Partes de mquinas expostas (polias, engrenagens) ....
Circuito de vcuo tem ltros e sifes nas bancadas
do laboratrio ...........................................................
Riscos de reuxo no abastecimento de gua ................
Sistemas de gua destilada em boas condies ...........
Programa de controlo de artrpodes e roedores
activo e ecaz ...........................................................
Prticas e procedimentos gerais
Comida para consumo humano armazenada fora
do laboratrio ...........................................................
Fornos microondas com avisos bem visveis: No
preparar comida S para uso do laboratrio .....
Comer, beber, fumar e/ou maquilhar-se no laboratrio .
Recipientes de vidro pressurizados protegidos
(por exemplo, cmaras de vcuo) ............................
Pipetar com a boca proibido ..........................................
Meios mecnicos de pipetar disponveis e
utilizados. ..................................................................
Roupa de proteco do laboratrio guardada
separadamente da roupa pessoal. ............................
Manuteno geral do laboratrio
Frascos arrumados no cho. .........................................
Riscos evidentes de tropear. ........................................
Panos absorventes limpos nas superfcies de trabalho .
Estilhaos de vidro manuseados com meios
mecnicos (escovas, aparadores lixo, pinas, etc.) ..
Proteco contra incendios
Cabeas de extintores livres e no obstrudas ..............
Perfuraes nas paredes, tectos, pavimentos, etc. .......
Cablagem ou tubagem pelas aberturas das portas ........
Largura de passagem mnima de 1m no laboratrio .....
Armazenagem em cima de canalizaes ou de
montagens elctricas ................................................
Restos de combustveis armazenados no laboratrio ...
Banheiras aquecidas a temperaturas constantes
Equipadas com nvel mnimo de gua e vlvula de
sobreaquecimento. ....................................................
Construdas com materiais noinamveis .................
Assinatura do vistoriador. . . . . . . . . . Data do termo da vistoria . . . . . . . . . . . . .
44
Quadro 6. Laboratrio de base Nvel 2 de segurana biolgica: Vistoria da
segurana em laboratrio.
Formulrio a utilizar com o formulrio de vistoria de segurana em labo-
ratrio do Nvel 1 de segurana biolgica.
Localizao . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Data . . . . . . . . . . . . . .
Responsvel do laboratrio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
Cmara de segurana biolgica (CSB)
Certicao no ano anterior ............................................. Data:
Superfcie da CSB limpa com desinfectante apropriado
no incio e no nal de cada procedimento ................. Local:
Grelha frontal e ltro exaustor no obstrudos ................
Chamas vivas utilizadas dentro da cmara ...................... Modelo:
Circuitos de vcuo dispondo de ltros em srie e sifes
desinfectantes ............................................................. Tipo:
CSB comprometida pelo ar da sala ou localizao ..........
CSB utilizada quando h risco de formao de N Srie:
aerossis......................................................................
Laboratrio
Acesso limitado e restrito ao pessoal autorizado ............
Entrada limitada ao pessoal avisado de todos os perigos
potenciais ...................................................................
Sinal de risco biolgico axado na porta do laboratrio,
sempre que tal for o caso ..........................................
Sinal com informaes exactas e actuais ............
Sinal legvel e em bom estado. ............................
Todas as portas fechadas. ................................................
Descontaminao
Descontaminante especco ao organismo utilizado .......
Todos derrames e acidentes com materiais infecciosos
noticados ao supervisor do laboratrio. ...................
Descontaminante apropriado utilizado para limpeza
de derrames ................................................................
Superfcies de trabalho descontaminadas antes e depois
de cada procedimento, diariamente e aps
derrames. ....................................................................
Manuseamento de resduos contaminados
Utilizao correcta de recipientes de resduos
infecciosos ..................................................................
Recipientes no cheios demais .......................................
Recipientes devidamente etiquetados e fechados ...........
Stocks de culturas e outros resduos regulamentados
devidamente descontaminados antes de
eliminados ..................................................................
45
Materiais descontaminados fora do laboratrio
transportados em contentores fechados, resistentes,
estanques, em conformidade com regras e
regulamentos locais ....................................................
Resduos diversos biologicamente descontaminados,
antes de eliminao como resduos qumicos ou
radiolgicos ................................................................
Proteco pessoal
Pessoal de laboratrio alertado para vacinao/testes
apropriados contra agentes manuseados ...................
Apelo a servios mdicos apropriados para exames,
vigilncia e tratamento em caso de exposio
prossional .................................................................
Utilizao de luvas ao manusear material infeccioso ou
equipamento contaminado .........................................
Proteco da cara ao trabalhar fora da CSB com
material infeccioso ......................................................
Lavagem das mos depois de tirar as luvas, depois de
trabalhar com agentes infecciosos e antes de
sair do laboratrio ......................................................
Agente antimicrobiano disponvel para primeiros
socorros imediatos .....................................................
Prticas
Utilizar CSB sempre que existir potencial para produo
de aerossis/salpicos infecciosos ..............................
Manual de segurana biolgica preparado e adoptado ....
O pessoal l, estuda e segue as instrues sobre
prticas e procedimentos, incluindo o manual de
segurana ou de operaes (todo o pessoal,
anualmente) ................................................................
As manipulaes so realizadas de forma a minimizar
aerossis/salpicos ......................................................
Com agentes infecciosos, utilizar seringas de agulha
xa/seringas-agulhas descartveis .............................
Recipientes e rotores de centrifugadora s devem ser
abertos numa CSB ......................................................
O transporte de espcimes infecciosos fora de CSB
deve ser feito em contentores aprovados, segundo
os regulamentos de transporte aprovados .................
Instalaes
Lavatrio para lavar mos instalado perto da sada
do laboratrio. ............................................................
Assinatura do vistoriador. . . . . . . . . . Data do termo da vistoria . . . . . . . . . . . . .
46
Quadro 7. Laboratrio de connamento Nvel 3 de segurana biolgica: Vistoria da
segurana em laboratrio.
Formulrio a utilizar com os formulrios de vistoria de segurana em
laboratrio dos Nveis 1 e 2 de segurana biolgica.
Localizao . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Data . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
Responsvel do laboratrio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
Instalaes
Laboratrio separado de reas de passagem livre
no edifcio ..........................................................................
Acesso ao laboratrio atravs de antecmara com portas
que fecham automaticamente ............................................
Todas as entradas do laboratrio so ou podem ser seladas
para descontaminao .......................................................
O ar expelido da sala de passagem nica enviado para
longe das reas ocupadas .................................................
Sistema de ventilao controlado para monitorizar o
sentido da circulao do ar ...............................................
Proteco pessoal
Batas fechadas frente a utilizar no laboratrio ....................
Roupa de proteco a utilizar unicamente em locais do
laboratrio .........................................................................
Lavatrio para lavar as mos controlado por pedal,
cotovelo ou automtico .....................................................
Proteco das mos
Utilizar luvas duplas ao manusear material infeccioso e
equipamento e superfcies de trabalho potencialmente
contaminados ....................................................................
Proteco respiratria
Todo o pessoal deve utilizar proteco respiratria no
laboratrio, quando os aerossis no forem contidos de
forma segura numa CSB ...................................................
Prticas
Proteger as membranas mucosas ao trabalhar com material
infeccioso fora de uma CSB ..............................................
Alertar o pessoal para perigos especiais ligados ao(s)
agentes(s) ..........................................................................
Aconselhar o pessoal a ler, estudar e seguir as instrues
sobre prticas e procedimentos, incluindo o manual de
segurana biolgica ou de operaes ...............................
Fornecer ao pessoal actualizaes anuais e formao
adicional sobre alteraes aos procedimentos ..................
Desinfectar em autoclave todos os resduos contaminados
antes de os eliminar ..........................................................
Assinatura do vistoriador. . . . . . . . . . Data de termo da vistoria . . . . . . . . . . . . .
PARTE II
Directivas de
proteco biolgica
9. Conceitos de proteco biolgica
em laboratrio
49
O Manual de Segurana Biolgica em Laboratrio tem-se centrado no passado em
directivas tradicionais sobre segurana biolgica em laboratrios. Sublinha a utiliza-
o de boas prticas microbiolgicas e de equipamentos de connamento apropria-
dos; a concepo, funcionamento e manuteno adequadas das instalaes, bem como
as observaes administrativas para minimizar o risco de ferimentos e doenas entre
os membros do pessoal. Ao seguir estas recomendaes, minimiza-se obviamente os
riscos para o ambiente e a comunidade vizinha em geral. Agora tornou-se necessrio
alargar esta abordagem tradicional da segurana biolgica atravs da introduo de
medidas de proteco biolgica em laboratrio. Os eventos mundiais dos ltimos
tempos tm vindo a sublinhar a necessidade de proteger os laboratrios e os materi-
ais neles contidos de exposio intencional a uma situao capaz de causar danos
populao, aos animais, agricultura e/ou ao ambiente. Contudo, antes de denir as
necessidades de proteco biolgica em laboratrio de uma instalao, importante
compreender a diferena entre segurana biolgica e proteco biolgica .
Segurana biolgica o termo utilizado para descrever os princpios de con-
namento, as tecnologias e as prticas que so implementadas para evitar a exposio
no intencional a agentes patognicos e toxinas, ou o seu escape acidental. Proteco
biolgica em laboratrio refere-se a medidas de proteco estabelecidas e pessoais
concebidas para evitar perda, roubo, utilizao indevida, desvio ou escape intencional
de agentes patognicos e toxinas.
Prcticas ecazes de segurana biolgica so a verdadeira base de actividades de
proteco biolgica. Atravs de avaliaes de risco efectuadas como parte integrante
do programa de segurana biolgica de uma instituio, recolhe-se informao sobre
o tipo de organismos disponveis, sua localizao fsica, o pessoal com necessidade de
acesso a tais organismos, e identicao das pessoas por eles responsveis. Esta infor-
mao pode ser utilizada para avaliar se uma instituio dispe de material biolgico
aliciante para quem desejar utiliz-lo indevidamente. Devem elaborar-se normas
nacionais reconhecendo e assumindo a responsabilidade constante dos pases e insti-
tuies pela proteco de espcimes, agentes patognicos e toxinas contra utilizao
abusiva.
Para cada servio, preciso preparar e implementar um programa especco sobre
proteco biolgica em laboratrio, segundo as exigncias do servio, o tipo de tra-
balho realizado, e as condies locais. Em consequncia, as actividades de proteco
biolgica em laboratrio devem ser representativas das vrias necessidades da insti-
tuio e devem incluir dados de directores cientcos, investigadores principais,
responsveis de segurana biolgica, pessoal cientco do laboratrio, pessoal de
manuteno, administradores, pessoal de tecnologia de informao e, quando apro-
priado, agncias e pessoal de segurana.
As medidas de proteco biolgica em laboratrio devem basear-se num programa
integral de responsabilidade por agentes patognicos e toxinas, incluindo um inven-
trio actualizado com localizao da armazenagem, identicao do pessoal com
acesso, descrio da utilizao, documentao de transferncias internas e externas
dentro e entre servios, e qualquer desactivao e/ou eliminao de materiais. Da
mesma maneira, deve estabelecer-se um protocolo sobre proteco biolgica em la-
boratrio para identicao, noticao, investigao e reparao de infraces pro-
teco biolgica em laboratrio, incluindo desacordos em resultados de inventrio.
No caso de infraco proteco, a participao e os papis e responsabilidades das
autoridades de sade e de proteco pblica devem ser claramente denidos.
A formao em proteco biolgica em laboratrio, distinta da formao em segu-
rana biolgica em laboratrio, deve ser administrada a todo o pessoal. Esta formao
deve ajudar o pessoal a compreender a necessidade de proteco de tais materiais e o
fundamento lgico de medidas de proteco biolgica especcas, e deve incluir um
estudo de normas nacionais pertinentes e de procedimentos especcos instituio.
Durante a formao tambm se deve tomar conhecimento do papel e responsabili-
dades do pessoal no caso de uma infraco proteco.
A aptido prossional e tica de todo o pessoal com acesso regular autorizado a
materiais sensveis para trabalhar com agentes patognicos perigosos est tambm no
centro de actividades ecazes de proteco biolgica em laboratrio.
Em resumo, as precaues de segurana devem fazer parte do trabalho de rotina
de laboratrio, tal como as tcnicas de assepsia e as prticas microbiolgicas seguras.
As medidas de proteco biolgica em laboratrio no devem entravar a troca e-
ciente de materiais de referncia, espcimes clnicos e epidemiolgicos e informao
relacionada necessria para investigaes clnicas ou de sade pblica. A gesto com-
petente da proteco no deve interferir indevidamente nas actividades dirias dos
cientistas, nem ser um impedimento investigao. O acesso legtimo a materiais
clnicos e de investigao importantes tem de ser preservado. A avaliao da aptido
do pessoal, a formao centrada na proteco e a observncia rigorosa dos proce-
dimentos de proteco dos agentes patognicos so meios razoveis de reforo da
proteco biolgica em laboratrio. Todos estes esforos devem ser estabelecidos e
mantidos por meio de avaliaes regulares de risco e de ameaa, e reviso e actua-
lizao regulares dos procedimentos. A vericao da conformidade com tais proces-
sos, com instrues claras sobre papis, responsabilidades e aces de soluo, deve
ser uma parte integrante de programas de proteco biolgica em laboratrio e de
normas nacionais para proteco biolgica de laboratrios.
50
Parte III
Equipamento de
laboratrio
10. Cmaras de segurana
biolgica
53
As cmaras de segurana biolgica (CSB) foram concebidas para proteger o operador,
o ambiente laboratorial e o material de trabalho da exposio a aerossis e salpicos
resultantes do manuseamento de materiais que contm agentes infecciosos, tais como
culturas primrias, stocks e amostras para diagnstico. Qualquer actividade que
liberta energia num lquido ou semilquido, tal como agitar, verter, misturar ou deitar
um lquido numa superfcie ou noutro lquido, produz partculas de aerossol. Outras
actividades laboratoriais, como semear s riscas uma placa de gelose, inocular culturas
de clulas em frascos com pipetas, utilizar uma pipeta com vrios canais para in-
jectar suspenses lquidas de agentes infecciosos em placas de microculturas, homo-
geneizar e turbilhonar material infeccioso, centrifugar lquidos infecciosos ou traba-
lhar com animais, podem gerar aerossis infecciosos. Partculas de aerossis inferiores
a 5m de dimetro e gotculas entre 5 e 100m de dimetro no so visveis a olho
nu. O pessoal de laboratrio nem sempre se apercebe que estas partculas esto a ser
geradas e podem ser inaladas ou contaminar materiais na superfcie de trabalho. As
CSB, quando devidamente utilizadas, tm-se revelado altamente ecazes na reduo
de infeces adquiridas em laboratrio e contaminaes cruzadas de culturas, devido
a exposio a aerossis. As CSB tambm protegem o ambiente.
Entretanto, a concepo bsica das CSB sofreu diversas alteraes. A principal foi
a adio de um ltro de ar particulado de alta ecincia (HEPA) ao sistema de
exausto. O ltro HEPA retm 99.97% das partculas de 0.3m de dimetro e 99.99%
das partculas maiores ou mais pequenas. Isto permite que o ltro HEPA retenha efec-
tivamente todos os agentes infecciosos conhecidos e que s ar isento de micrbios seja
expelido da cmara. A segunda alterao foi dirigir o ar do ltro para a superfcie de
trabalho, protegendo assim os materiais que a se encontram de contaminao. Esta
caracterstica frequentemente designada de proteco do produto . Estes conceitos
bsicos levaram criao de 3 tipos de CSB; no Quadro 8, a seguir, descreve-se o tipo
de proteco que cada um deles fornece.
Nota. Cmaras horizontais e verticais de escoamento ( equipamentos de ar limpo )
no so cmaras de segurana biolgica e no devem ser utilizadas como tal.
Cmara de segurana biolgica Classe I
A Ilustrao 6, abaixo, apresenta um diagrama esquemtico de uma CSB da Classe I.
O ar da sala aspirado atravs da abertura na frente, a uma velocidade mnima de
0,38m/s, passa por cima da superfcie de trabalho e expelido pelo canal de escape.
O uxo de ar varre as partculas de aerossol que possam gerar-se na superfcie de tra-
balho para longe do operador e envia-as para o canal de escape. A abertura na frente
permite igualmente que os braos do operador cheguem superfcie de trabalho
dentro da cmara, enquanto este observa a operao atravs de um painel de vidro.
54
Quadro 8. Seleco de cmaras de segurana biolgica (CSB), segundo o tipo de
proteco necessria
TIPO DE PROTECO SELECO DE CSB
Proteco do pessoal, microrganismos nos Classe I, II, III
Grupos de Risco 13
Proteco do pessoal, microrganismos no Classe III
Grupo de Risco 4, laboratrio com porta-luvas
Proteco do pessoal, microrganismos no Classe I, II
Grupo de Risco 4, laboratrio com fatos pressurizados
Proteco do produto Classe II ou III unicamente se uxo
laminar includo
Proteco contra radionucldios/qumicos volteis, Classe IIB1, Classe IIA2 de
quantidades mnimas evacuao exterior
Proteco contra radionucldios/qumicos volteis Classe I, IIB2 ou III
ar da sala
ar potencialmente contaminado
ar filtrado com filtro HEPA
corte lateral
A
D
C
B
Ilustrao 6. Diagrama esquemtico de uma cmara de segurana biolgica de Classe I
A Abertura frontal; B Painel de observao; C Filtro exaustor HEPA;
D Conduta do exaustor
Este pode ser completamente levantado, permitindo o acesso superfcie de trabalho
para a sua limpeza ou outros ns.
O ar da cmara expelido atravs de um ltro HEPA: a) para o laboratrio e depois
para o exterior do edifcio atravs do exaustor do mesmo; b) para o exterior atravs
do exaustor do edifcio; c) directamente para o exterior. O ltro HEPA pode estar
colocado na conduta do exaustor do CSB ou no exaustor do edifcio. Algumas CSB
da Classe I esto equipadas com um exaustor de ventoinha, enquanto outras depen-
dem da ventoinha do exaustor do edifcio.
A CSB da Classe I foi a primeira CSB reconhecida e, devido sua concepo
simples, continua a ser amplamente utilizada no mundo inteiro. Tem a vantagem de
fornecer proteco pessoal e ambiental e pode igualmente ser utilizada para trabalhar
com radionucldios e qumicos txicos volteis. Contudo, dado que o ar aspirado da
sala e que varre a superfcie de trabalho no-esterilizado, considera-se que no
assegura uma proteco do produto consistente e digna de conana.
Cmaras de segurana biolgica Classe II
Dado o aumento da utilizao de culturas de clulas e tecidos para a propagao de
vrus e outros ns, considerou-se que j no era satisfatrio varrer a superfcie de tra-
balho com ar no-esterilizado. A CSB da Classe II foi concebida para fornecer pro-
teco pessoal, mas tambm para proteger os materiais na superfcie de trabalho do
ar contaminado da sala. As CSB da Classe II, da qual existem 4 tipos (A1, A2, B1 e
B2), distinguem-se das CSB da Classe I pelo facto de s permitirem o uxo de ar este-
rilizado (ltro HEPA) sobre a superfcie de trabalho. A CSB da Classe II pode ser
utilizada para trabalhar com agentes infecciosos dos Grupos de Risco 2 e 3 e mesmo
do Grupo de Risco 4 se forem utilizados fatos de presso positiva.
Cmara de segurana biolgica Classe II, tipo A1
Na Ilustrao 7, a seguir, apresenta-se um esquema desta cmara. Uma ventoinha
interna suga ar da sala (abastecimento de ar) pela abertura na frente e envio-o para a
cmara atravs da grelha de entrada. A velocidade de entrada deste ar deve ser, no
mnimo, 0,38m/s na abertura da frente. O ar passa ento por um ltro HEPA de
abastecimento, antes de ser injectado para a superfcie de trabalho. medida que o
uxo de ar desce, a cerca de 618cm da superfcie de trabalho, divide-se em duas cor-
rentes secundrias: metade do uxo de ar passa atravs da grelha da frente do exaus-
tor e a outra metade atravs da grelha de trs. Quaisquer partculas de aerossol geradas
na superfcie de trabalho so imediatamente capturadas neste uxo de ar descendente
e enviadas para as grelhas (posterior ou anterior) do exaustor, assegurando assim o
mais elevado nvel de proteco do produto. O ar ento expelido atravs da conduta
traseira no espao entre os ltros de abastecimento e do exaustor, localizados no topo
da cmara. Devido ao tamanho destes ltros, cerca de 70% do ar reenviado atravs
do ltro HEPA de abastecimento para a zona de trabalho; os restantes 30% passam
pelo ltro do exaustor para a sala ou para o exterior.
10. CMARAS DE SEGURANA BIOLGICA
55
O ar do exaustor da CSB Classe IIA1 pode ser reenviado para a sala ou expelido
para o exterior do edifcio atravs de uma conexo a uma conduta prpria ou atravs
do exaustor do edifcio.
Recircular o ar usado para a sala tem a vantagem de fazer baixar os custos de com-
bustvel, porque no se est a expelir para o exterior ar aquecido e/ou arrefecido. Uma
conexo a um sistema de ventilao por condutas tambm permite utilizar algumas
CSB em trabalho com radionucldios volteis e qumicos txicos volteis (Quadro 8).
Cmaras de segurana biolgica Classe II tipo A2 com ventilao para o exterior,
B1 e B2
As CSB Classe IIA2 com ventilao para o exterior, Classe IIB1 (Ilustrao 8) e Classe
IIB2 so variantes da Classe II tipo A1. No Quadro 9, mostram-se as suas caracters-
ticas, bem como as das CSB da Classe I e da Classe III. Cada variante permite utilizar
as CSB para ns especcos (ver Quadro 8). Estas CSB distinguem-se umas das outras
em diversos aspectos: a velocidade de entrada do ar pela abertura frontal; a quanti-
dade de ar recirculado pela superfcie de trabalho e expelido da cmara; o sistema de
ventilao, que determina se o ar da cmara expelido para a sala, para o exterior
atravs de um sistema prprio, ou para o sistema de ventilao do edifcio;
56
corte frontal corte lateral
B
A
E
C
D
F
ar da sala
Ilustrao 7. Diagrama esquemtico de uma cmara de segurana biolgica da Classe IIA1
A Abertura frontal; B Painel de observao; C Filtro exaustor HEPA; D
Conduta traseira; E Filtro HEPA de abastecimento; F Ventoinha
o sistema de presso (se as cmaras dispem de condutas e plenums biologicamente
contaminados sob presso negativa ou condutas e plenums biologicamente conta-
minados, rodeados por condutas e plenums de presso negativa).
Descries detalhadas das diversas CSB Classe IIA e IIB podem ser extradas das
referncias (7) e (8) e das brochuras dos fabricantes.
Cmara de segurana biolgica Classe III
Este tipo de cmara (Ilustrao 9) fornece o nvel mais elevado de proteco pessoal
e utilizado para os agentes do Grupo de Risco 4. Todas as perfuraes so seladas
prova de gs . O ar fornecido ltrado por HEPA e o ar expelido passa por 2
ltros HEPA. O uxo de ar mantido por um sistema de ventilao prprio, fora da
cmara, que mantm o interior da mesma sob presso negativa (cerca de 124,5 Pa).
O acesso superfcie de trabalho requer luvas de borracha de grande resistncia, colo-
cadas entrada da cmara. As CSB Classe III devem possuir uma caixa de passagem
anexa que possa ser esterilizada e equipada com um exaustor de ltro HEPA. As
57
B
A
F
C
G
F
E
D
ar da sala
Ilustrao 8. Diagrama esquemtico de uma cmara de segurana biolgica da Classe IIB1
A Abertura frontal; B Painel de observao; C Filtro exaustor HEPA; D Filtro
de admisso HEPA; E Plenum do exaustor de presso negativa; F Ventoinha;
G Filtro HEPA de admisso de ar. necessrio ligar o exaustor da cmara ao
sistema de ventilao do edifcio
58
Quadro 9. Diferenas entre as Cmaras de segurana biolgica (CSB) das Classes
I, II e III
CSB VELOCIDADE(m/s) FLUXO DE AR (%) SISTEMA DE EXAUSTO
RECIRCULADO EXPELIDO
Classe I
a
0,36 0 100 Conduta dura
Classe IIA1 0,380,51 70 30 Exausto para sala
ou conexo dedal
Classe IIA2 0,51 70 30 Exausto para sala ou
Ventilao para o conexo dedal
exterior
a
Classe IIB1
a
Classe IIB2
a
Classe III
a
NA 0 100 Conduta dura
NA No aplicvel.
a
Todas as condutas biologicamente contaminadas esto sob presso negativa ou rodeadas por condutas e
plenums de presso negativa.
B
A
E
C
D
C
F
ar da sala
Ilustrao 9. Diagrama esquemtico de uma cmara de segurana biolgica da Classe III
(com porta-luvas)
A Porta-luvas (cobrindo o brao todo); B Painel de observao; C Filtros
exaustores HEPA duplos; D Filtros de admisso HEPA; E Autoclave de duas
portas ou caixa de passagem; F Reservatrio de desinfeco qumica.
necessrio ligar o exaustor da cmara ao sistema de ventilao do edifcio.
cmaras podem ser conectadas a uma autoclave de duas portas, apropriada para
descontaminar todos os materiais que entram ou saem das cmaras. Podem juntar-se
vrias caixas de luvas para ampliar a superfcie de trabalho. As CSB de Classe III so
apropriadas para trabalhar em laboratrios dos Nveis 3 e 4 de segurana biolgica.
Ligaes de ar da cmara de segurana biolgica
As ligaes de dedal ou de capuz foram concebidas para utilizar em CSB de
Classes IIA1 e IIA2 com ventilao para o exterior. O dedal encaixa na caixa do
exaustor da cmara, aspirando o ar da cmara e expelindo-o para as condutas do
exaustor do edifcio. Entre o dedal e a caixa do exaustor da cmara mantm-se um
pequeno orifcio, geralmente de 2,5cm de dimetro, o que permite que o ar da sala
seja tambm aspirado e expelido para o exaustor do edifcio. A capacidade deste
sistema tem de ser suciente para captar o ar da sala e o ar do exaustor da cmara. O
dedal deve poder ser removido ou ser concebido de forma a permitir testes opera-
cionais da cmara. De um modo geral, o rendimento de uma CSB com ligao de
dedal no muito afectado por utuaes no uxo de ar do edifcio.
As CSB de Classe IIB1 e IIB2 tm condutas rgidas, solidamente ligadas sem qual-
quer abertura ao sistema de ventilao do edifcio, ou, de preferncia, a um sistema
prprio de condutas. O sistema de ventilao do edifcio tem de corresponder rig-
orosamente s necessidades de uxo de ar especicadas pelo fabricante, tanto no que
se refere ao volume como presso esttica. A certicao de CSB de condutas rgidas
demora mais tempo do que a de cmaras que recirculam o ar para a sala ou que tm
ligao de dedal.
Escolha de uma cmara de segurana biolgica
A escolha de uma CSB depende em primeiro lugar do tipo de proteco necessria:
proteco do produto; proteco pessoal contra microrganismos dos Grupos de Risco
1 a 4; proteco pessoal contra exposio a radionucldios e qumicos txicos volteis;
ou uma combinao destes. No Quadro 8 so indicadas as CSB recomendadas para
cada tipo de proteco.
Qumicos txicos ou volteis no devem ser utilizados em CSB que reenviam o ar
usado para a sala: cmaras da Classe I, que no esto conectadas ao exaustor do edif-
cio, ou da Classe IIA1 e IIA2. Cmaras da Classe IIB1 so aceitveis para trabalhos
com quantidades diminutas de qumicos volteis e radionucldios. Quando estiver
previsto trabalhar com quantidades signicativas de radionucldios e qumicos
volteis, necessrio utilizar uma CSB da Classe IIB2, tambm conhecida por cmara
de exaustor mximo.
Utilizao de cmaras de segurana biolgica em laboratrio
Localizao
A velocidade do uxo de ar atravs da abertura frontal para dentro da cmara de
aproximadamente 0,45m/s. A esta velocidade, a integridade do uxo frgil e pode
59
ser facilmente desintegrada por correntes de ar causadas por pessoas que passam
perto da cmara, janelas abertas, registos do fornecimento de ar e pelo abrir e fechar
de portas. A soluo ideal seria instalar a CSB num local afastado da circulao das
pessoas e de correntes de ar que a perturbem. Sempre que possvel, deve prever-se um
espao livre de cerca de 30cm nas traseiras e em cada lado da cmara, permitindo um
acesso fcil para a manuteno do aparelho. Pode igualmente ser necessrio um espao
livre de cerca de 3035cm acima da cmara, para a medio exacta da velocidade do
ar atravs do ltro exaustor e para a mudana do ltro.
Operadores
Se as CSB no forem utilizadas de forma apropriada, a proteco que fornecem pode
car muito reduzida. Os operadores das CSB tm de ser muito cuidadosos ao intro-
duzir e retirar os seus braos da cmara, a m de manter a integridade do uxo de ar
proveniente da abertura frontal. Deve-se introduzir e retirar os braos lentamente, na
perpendicular da abertura frontal. O manuseamento dos materiais dentro da cmara
s deve comear 1 minuto depois de introduzir as mos e os braos na cmara, para
que o ambiente no interior se estabilize e o uxo de ar varra a superfcie das mos
e dos braos do operador. igualmente necessrio minimizar os movimentos de
entrada e sada da cmara, introduzindo previamente todos os materiais necessrios,
antes de iniciar a manipulao.
Colocao do material
A grelha frontal de entrada das CSB da Classe II no pode estar bloqueada com papel,
equipamento ou outros artigos. A superfcie do material a colocar dentro da cmara
deve ser descontaminada com lcool a 70%. O trabalho pode ser efectuado sobre
toalhas absorventes embebidas num desinfectante, a m de capturar borrifos e salpi-
cos. Todo o material deve ser colocado no fundo da cmara, perto da borda traseira
da superfcie de trabalho, sem bloquear a grelha traseira. O equipamento gerador de
aerossis (misturadores, centrifugadoras) deve ser colocado no fundo da cmara.
Artigos volumosos, tais como sacos de proteco biolgica, bandejas de pipetas
descartveis e frascos de suces devem ser colocados numa das partes laterais do inte-
rior da cmara. O trabalho em si deve uir ao longo da superfcie de trabalho, da rea
limpa para a rea contaminada.
O saco de segurana para recolha de material perigoso e a bandeja de pipetas que
podem ser descontaminados em autoclave, no devem ser colocados no exterior
da cmara. A frequncia dos movimentos para dentro e para fora que implica a
utilizao destes recipientes iria perturbar a integridade da barreira de ar na cmara
e comprometer tanto a proteco pessoal como a do produto manipulado.
Funcionamento e manuteno
A maior parte das CSB so concebidas para trabalhar 24 horas/dia, e os investigadores
acham que o funcionamento contnuo ajuda a controlar os nveis de p e partculas
60
no laboratrio. As CSB Classe IIA1 e IIA2 com exaustor para a sala ou conectadas
a condutas exaustoras prprias, por ligaes de dedal, podem ser desligadas quando
no forem necessrias. Outros tipos de CSB, como as da Classe IIB1 e B2, que possuem
instalaes de condutas rgidas, precisam de manter um uxo de ar ininterrupto, para
ajudar a manter o equilbrio do ar da sala. As cmaras devem ser ligadas, pelo menos
5 minutos antes do incio das actividades, e permanecer ligadas 5 minutos aps o
termo das mesmas, a m de purgar a cmara, isto , dar tempo para que o ar con-
taminado seja expelido do ambiente interior da cmara.
Todas as reparaes numa CSB devem ser efectuadas por um tcnico qualicado.
Qualquer defeito no funcionamento deve ser assinalado e reparado antes de voltar a
utilizar a cmara.
Lmpadas ultravioleta
Lmpadas ultravioleta no so necessrias nas CSB. Se forem utilizadas, devem ser
limpas todas as semanas, para retirar o p e sujidade que podem bloquear a eccia
germicida dos raios. A intensidade destes deve ser vericada quando a cmara recer-
ticada, a m de assegurar que a emisso de luz apropriada. necessrio desligar as
lmpadas ultravioleta quando a sala est ocupada, para proteger os olhos e a pele de
exposio descuidada.
Chamas vivas
Deve evitar-se chamas vivas no ambiente quase isento de micrbios, criado dentro da
CSB; elas perturbam os padres do uxo de ar e podem ser perigosas quando se uti-
lizam substncias inamveis volteis. Para esterilizar ansas bacteriolgicas existem
microqueimadores ou fornos elctricos, que so preferveis chama viva.
Derrames
Deve estar axada no laboratrio uma cpia dos procedimentos necessrios em caso
de derrames; todo o pessoal do laboratrio deve ler e compreender estes procedi-
mentos. Se ocorrer um derrame de material perigoso dentro de uma CSB, deve
comear-se imediatamente a limpeza da mesma, continuando a cmara a funcionar.
Deve utilizar-se um desinfectante ecaz e aplic-lo de forma a minimizar a produo
de aerossis. Todo o material que entrou em contacto com o produto derramado deve
ser desinfectado e/ou esterilizado em autoclave.
Certicao
O funcionamento e a integridade operacional das CSB devem ser certicados con-
formes s normas nacionais e internacionais, aquando da instalao e depois peri-
odicamente, por tcnicos qualicados, de acordo com as instrues do fabricante. A
avaliao da eccia do connamento das cmaras deve incluir testes sobre a inte-
gridade da cmara, fugas nos ltros HEPA, perl de velocidade do uxo de descida,
velocidade aparente, presso negativa/taxa de ventilao, modelo de fumo do uxo de
61
ar, alarmes e interconexes. Pode igualmente fazer-se testes opcionais para fugas de
electricidade, intensidade de iluminao, intensidade das luzes ultravioleta, nvel de
rudo e vibrao. Para efectuar estes testes necessrio uma formao, aptido e
equipamento especiais, sendo por isso imprescindvel que sejam feitos por um pros-
sional qualicado.
Limpeza e desinfeco
Todos os artigos na CSB, incluindo o equipamento, devem ser descontaminados e
retirados da cmara no nal das operaes, dado que os meios de cultura residuais
podem permitir a proliferao de micrbios.
As superfcies internas das CSB devem ser descontaminadas antes e depois de cada
utilizao. As superfcies de trabalho e as paredes interiores devem ser esfregadas com
um desinfectante que mate qualquer microrganismo que se encontre na cmara. No
nal do dia de trabalho, a descontaminao nal da superfcie deve incluir uma esfre-
gadela geral da superfcie de trabalho, das partes laterais e do fundo e do interior do
vidro. Deve utilizar-se uma soluo de hipoclorito de clcio ou lcool a 70%, se ecaz
para os organismos visados. necessrio esfregar uma segunda vez com gua esteri-
lizada, quando se utilizar um desinfectante corrosivo como o hipoclorito de clcio.
aconselhvel que a cmara continue a funcionar durante a descontaminao.
Caso tenha sido desligada, deve voltar a ser ligada e funcionar durante 5 minutos para
purgar o ar interior, antes de ser desligada.
Descontaminao
As CSB precisam de ser descontaminadas antes de mudar ltros ou quando mudam
de localizao. O mtodo de descontaminao mais comum a fumigao com gs
formaldedo. A descontaminao das cmaras deve ser efectuada por um prossional
qualicado.
Deve utilizar-se este equipamento sempre que se utilizar uma CSB. Batas de labo-
ratrio so aceitveis para os trabalhos realizados aos Nveis 1 e 2 de segurana biol-
gica. Batas de fechar atrs, com frente slida, fornecem uma melhor proteco e devem
ser utilizadas nos Nveis 3 e 4 de segurana biolgica (excepto nos laboratrios onde
os fatos pressurizados so obrigatrios). As luvas devem cobrir os punhos da bata e
no devem car debaixo das mangas. Podem utilizar-se mangas elsticas para prote-
ger os pulsos do investigador. Para certos procedimentos podem ser necessrias
mscaras e culos de proteco.
Alarmes
As CSB podem ser equipadas com um ou dois tipos de alarme. Alarmes no painel de
observao s existem nas cmaras com painel de correr; o alarme accionado quando
o operador no coloca o painel na posio apropriada; para corrigir esta situao,
62
basta voltar a colocar o painel na posio correcta. Alarmes no uxo de ar indicam
que h uma decincia no uxo normal de ar da cmara; isto signica que h um
perigo imediato para o operador ou para o produto. Quando este alarme se activar,
o trabalho deve ser imediatamente interrompido e o supervisor do laboratrio deve
ser informado. O manual de instrues do fabricante deve fornecer mais informaes.
A formao na utilizao das CSB deve abranger este aspecto.
Informaes suplementares
Escolher o tipo apropriado de CSB, instal-la, utiliz-la correctamente e certicar o
seu bom funcionamento todos os anos so processos complexos. Assim, aconsel-
hvel que isto se faa sob a superviso de um prossional de segurana biolgica, de-
vidamente formado e com experincia. Este prossional deve estar bem familiarizado
com a documentao pertinente, enumerada na seco Referncias, e ter recebido uma
formao sobre todos os aspectos das CSB. Os operadores devem receber uma
formao formal sobre o funcionamento e utilizao das CSB.
Para mais informaes ver referncias (5) e (716), bem como Captulo 11.
63
64
11. Equipamento de segurana
Dado que os aerossis so uma fonte importante de infeco, deve tomar-se a pre-
cauo de reduzir as possibilidades da sua formao e disperso. Diversas operaes
laboratoriais (fundir, misturar, separar, agitar, mexer, separar por ultra-sons e cen-
trifugar materiais infecciosos) podem produzir aerossis perigosos. Mesmo quando
se utiliza equipamento seguro, melhor, sempre que possvel, efectuar estas operaes
numa cmara de segurana biolgica. No captulo anterior (10) analisa-se a utiliza-
o e testes de controlo destas cmaras. A utilizao de equipamento de segurana no
, em si, uma segurana de proteco, excepto se o operador estiver devidamente
formado e utilizar tcnicas adequadas. O equipamento deve ser testado regularmente,
a m de assegurar a eccia da proteco.
No quadro 10 encontra-se uma lista de controlo do equipamento de segurana,
concebida para eliminar ou reduzir certos perigos, bem como um resumo das suas
caractersticas de proteco. Nas pginas subsequentes, do-se mais pormenores sobre
estes equipamentos. No Captulo 12, encontra-se informao adicional sobre a sua
utilizao correcta.
No Anexo 4 encontram-se informaes sobre o equipamento e as operaes que
podem criar perigos.
Isoladores de presso negativa em plstico exvel
O isolador de presso negativa em plstico exvel um dispositivo de connamento
primria completo, que fornece a proteco mxima contra materiais biolgicos
perigosos. Pode ser montado numa estrutura mvel e o espao de trabalho est total-
mente envolvido num invlucro transparente de cloreto de polivinilo (PVC), suspenso
numa estrutura de ao. O isolador mantido a uma presso interna inferior presso
atmosfrica. O ar de entrada passa atravs de um ltro HEPA e o ar de sada atravs
de 2 ltros HEPA, o que evita a necessidade de canalizar o ar usado para o exterior
do edifcio. O isolador pode ser equipado com incubadora, microscpio e outro
equipamento laboratorial, tal como centrifugadoras, gaiolas/caixas para animais,
blocos trmicos, etc. O material introduzido e removido do isolador atravs de aber-
turas prprias sem comprometer a segurana microbiolgica. O manuseamento das
operaes feito com mangas e luvas incorporadas, descartveis. Existe igualmente
um manmetro para controlar a presso no invlucro.
11. EQUIPAMENTO DE SEGURANA
65
Quadro 10. Equipamento de segurana biolgica
EQUIPAMENTO RISCO EVITADO CARACTERSTICAS DA SEGURANA
Cmara de segurana Aerossis e salpicos Fluxo de ar de entrada mnimo
biolgica Classe I (velocidade frontal) ao nvel da
abertura de acesso ao trabalho.
Filtragem adequada do ar evacuado.
No fornece proteco ao produto
Cmara de segurana Aerossis e salpicos Fluxo de ar de entrada mnimo
biolgica Classe II (velocidade frontal) ao nvel da
abertura de acesso ao trabalho.
Filtragem adequada do ar evacuado.
Fornece proteco ao produto
Cmara de segurana Aerossis e salpicos Connamento mximo
biolgica Classe III Fornece proteco ao produto se
tiver uxo de ar laminar
Isolador de presso Aerossis e salpicos Connamento mximo.
negativa, em plstico
exvel
Escudo contra salpicos Salpicos de produtos Cria uma barreira entre o operador e
qumicos a operao
Material de pipetar Riscos devidos a pipetar Facilidade de utilizao
com a boca, como Controlo da contaminao da
ingerir agentes extremidade de suco da pipeta,
patognicos, inalar proteco do meio de pipetar, do
aerossis produzidos utilizador e do circuito de vcuo.
pela suco na pipeta, Podem ser esterilizados
derramar lquido ou Controlo de fugas pela extremidade
gotas da pipeta, da pipeta
contaminao da
extremidade de suco
da pipeta
Microincineradores de Salpicos das ansas de Protegido por um tubo de vidro ou
ansas, ansas descartveis transferncias cermica fechado numa extremidade.
Aquecido a gs ou electricidade
Descartvel, aquecimento
desnecessrio
Recipientes estanques Aerossis, derrames e Construo estanque com tampa
para recolha e transporte fugas Duradouros
dentro do servio de Utilizveis em autoclaves
materiais infecciosos a
esterilizar
Utilizam-se isoladores de plstico exvel para manusear organismos de alto risco
(Grupos de Risco 3 e 4) em trabalhos no terreno, onde no possvel nem apropri-
ado instalar ou manter cmaras de segurana biolgica convencionais.
Material de pipetar
Deve sempre utilizar-se este material para pipetar, e a suco com a boca deve ser ri-
gorosamente proibida. Nunca demais sublinhar a importncia de utilizar este mate-
rial. Os perigos mais comuns ligados utilizao de pipetas so causados pela suco
bucal. A aspirao pela boca e a ingesto de matrias perigosas tm sido responsveis
por muitas infeces de origem laboratorial.
Tambm possvel transferir agentes patognicos para a boca quando se pe um
dedo contaminado na extremidade de suco da pipeta. Um perigo menos conhecido
a inalao de aerossis causados pela suco. O tampo de algodo no um ltro
ecaz de micrbios, presso negativa ou positiva, podendo sugar-se partculas
atravs do mesmo. Pode mesmo ocorrer uma suco mais violenta, se o tampo estiver
muito apertado, aspirando-se o tampo, aerossis e o prprio lquido. S a utilizao
do material prprio de pipetar pode evitar a ingesto de agentes patognicos.
66
Recipientes para objectos Feridas por picadas Utilizveis em autoclaves
cortantes ou aados Robustos, no perfurveis
descartveis
Contentores para Libertao de Robustos
transporte entre microrganismos Contentores primrios e secundrios
laboratrios/instituies impermeveis, para evitar derrames
Material absorvente para derrames
Autoclaves manuais ou Material infeccioso Concepo aprovada
automticas (tornado seguro para Esterilizao por calor ecaz
eliminar ou reutilizar)
Garrafas com tampas de Aerossis e derrames Connamento ecaz
rosca
Proteco da linha de Contaminao do Filtro de cartucho evita passagem de
vcuo sistema de vcuo do aerossis (tamanho das partculas
laboratrio com 0,45m)
aerossis e uidos Frasco de descarga contm
derramados desinfectante apropriado. Uma
vlvula de borracha pode servir para
fechar o vcuo automaticamente
quando o frasco-depsito estiver
cheio.
Todo o equipamento utilizvel em
autoclave.
EQUIPAMENTO RISCO EVITADO CARACTERSTICAS DA SEGURANA
Podem igualmente produzir-se aerossis quando caem gotas de uma pipeta na
superfcie de trabalho, quando se misturam culturas sugando e soprando alternada-
mente e quando se sopra a ltima gota de uma pipeta. A inalao de aerossis, inevi-
tavelmente produzidos durante as operaes de pipetar, pode ser evitada trabalhando
numa cmara de segurana biolgica.
O material de pipetar deve ser escolhido com cuidado. A sua forma e utilizao no
devem criar um risco adicional de infeco, e o material deve ser fcil de esterilizar e
limpar. Para manusear microrganismos e culturas de clulas devem utilizar-se
tampes (resistentes a aerossis) nas extremidades da pipeta,.
No devem utilizar-se pipetas com a extremidade de suco rachada ou lascada,
dado que danicam as juntas de encaixe do material de pipetar e tornam-se assim um
perigo.
Homogeneizadores, batedores, misturadores e geradores de ultra-sons
Os homogeneizadores domsticos (de cozinha) no so selados e libertam aerossis.
S deve ser utilizado equipamento que foi concebido para laboratrios, cuja cons-
truo minimiza ou evita essa libertao. Os separadores, que podem actualmente
ser utilizados para pequenos e grandes volumes, tambm podem produzir aerossis.
Os homogeneizadores utilizados para os microrganismos do Grupo de Risco 3
devem ser sempre enchidos e abertos em cmaras de segurana biolgica.
Os geradores de ultra-sons podem libertar aerossis; devem funcionar em cmaras
de segurana biolgica ou cobertos com proteces durante a sua utilizao. As pro-
teces e o exterior do gerador de ultra-sons devem ser descontaminados aps a sua
utilizao.
Ansas descartveis
A vantagem destas ansas no precisarem de ser esterilizadas podendo portanto
ser utilizadas em cmaras de segurana biolgica, onde queimadores Bunsen e
microincineradores perturbariam o uxo do ar. Estas ansas devem ser postas num
desinfectante, aps a sua utilizao, e eliminadas como resduos contaminados (ver
Captulo 3).
Microincineradores
Os microincineradores a gs e electricidade tm escudos de vidro borossilicato ou de
cermica, que minimizam os borrifos e asperso de material infectado quando se
esterilizam ansas. Contudo, podem perturbar o uxo de ar e devem portanto ser colo-
cados na parte detrs da superfcie de trabalho das cmaras de segurana biolgica.
Equipamento e roupa de proteco pessoal
O equipamento e a roupa de proteco pessoal podem servir de barreira, mini-
mizando o risco de exposio a aerossis, salpicos e inoculao acidental. A roupa
e o equipamento escolhido dependem da natureza do trabalho a efectuar. Deve
67
Blusas, batas, fatos e aventais de laboratrio
As blusas de laboratrio devem ser totalmente abotoadas. Contudo, batas e fatos de
mangas compridas e de apertar atrs do melhor proteco do que as blusas de labo-
ratrio e so preferidos nos laboratrios de microbiologia e quando se trabalha com
cmaras de segurana biolgica. Quando necessrio, podem envergar-se aventais por
cima dos fatos ou das batas, a m de dar uma proteco adicional contra o derrame
de produtos qumicos ou biolgicos, tais como sangue ou uidos de culturas. Deve
existir uma lavandaria nas instalaes ou perto delas.
68
Quadro 11. Equipamento de proteco pessoal
EQUIPAMENTO RISCO EVITADO CARACTERSTICAS DE PROTECO
Blusas, batas e fatos de Contaminao do vesturio Abertura atrs
laboratrio Cobrem o vesturio pessoal
Aventais plsticos Contaminao do vesturio Impermeveis
Calado Impactos e salpicos Fechados frente
culos de proteco (tipo Impactos e salpicos Lentes resistentes a impactos
culos de soldador) (opticamente correctas ou
utilizadas por cima de culos de
correco)
Proteces laterais
culos de segurana Impactos Lentes resistentes a impactos
(opticamente correctas)
Proteces laterais
Viseira de proteco facial Impactos e salpicos Protegem a cara toda
Fcil de tirar em caso de acidente
Aparelhos e mscaras de Inalao de aerossis H diversos modelos: descartvel,
respirao completa ou meia mscara
puricadora de ar, completa ou de
capuz com ar ltrado presso,
e com abastecimento de ar
Luvas Contacto directo com Em latex, vinilo ou nitrilo
microrganismos microbiologicamente aprovados,
descartveis
Proteco das mos
Cortes Malha de ao
vestir-se roupa de proteco quando se trabalha no laboratrio. Antes de sair do labo-
ratrio, deve tirar-se a roupa de proteco e lavar as mos. No Quadro 11, a seguir,
descreve-se de forma sucinta alguns equipamentos de proteco pessoal utilizados em
laboratrio e a proteco que fornecem.
Tais blusas, batas, fatos e aventais no devem ser utilizados fora dos locais do
laboratrio.
culos de proteco, culos de segurana e viseiras de proteco facial
A escolha do equipamento para proteger os olhos e a cara contra salpicos e impactos
de objectos depende da operao a efectuar. culos normais ou graduados podem ser
fabricados com uma armao especial que permite inserir lentes na frente da armao,
utilizando um material inquebrvel que acompanha a forma do rosto, ou ser equipa-
dos com proteces laterais (culos de segurana). Os culos de segurana no
fornecem porm uma proteco adequada contra salpicos, mesmo quando acom-
panhados de proteco lateral. Nesse caso, devem utilizar-se culos de proteco (tipo
culos de soldador) que protegem contra salpicos e impactos, por cima dos culos
graduados ou lentes de contacto (que no oferecem proteco contra perigos biolgi-
cos ou qumicos). As viseiras de proteco facial so feitas de plstico inquebrvel,
ajustam-se cara e so seguras cabea por tiras ou por uma touca.
culos de proteco, de segurana e viseiras no devem ser utilizados fora do
laboratrio.
Respiradores
Ao proceder a trabalhos de alto risco (por exemplo: limpeza de um derrame de mate-
rial infeccioso) pode ser necessrio utilizar material de proteco respiratria. A
escolha do respirador depende do tipo de perigo(s). Existem respiradores com ltros
permutveis: proteco contra gazes, vapores, partculas e microrganismos; impres-
cindvel que o ltro escolhido corresponda ao tipo apropriado de respirador. Para
assegurar a proteco ideal, o respirador deve ser instalado na cara do operador e
testado. Os respiradores auto-sucientes, com abastecimento de ar integral, assegu-
ram uma proteco total. Deve solicitar-se o conselho de uma pessoa devidamente
qualicada, por exemplo um higienista prossional, para escolher o respirador ade-
quado. As mscaras utilizadas em cirurgia foram concebidas para a proteco dos
doentes e no asseguram a proteco respiratria dos operadores. Alguns respiradores
descartveis (ISO 13.340.30) foram concebidos para assegurar a proteco contra a
exposio a agentes biolgicos.
Os respiradores no devem ser utilizados fora das reas laboratoriais.
Luvas
Durante certas manipulaes laboratoriais pode ocorrer a contaminao das mos.
Estas so igualmente vulnerveis a ferimentos causados por objectos cortantes. No
trabalho normal de laboratrio e no manuseamento de agentes infecciosos, sangue e
uidos corporais, usam-se geralmente luvas descartveis de latex, vinilo ou nitrilo,
microbiologicamente aprovados, semelhantes s utilizadas em cirurgia. Pode igual-
mente recorrer-se a luvas reutilizveis, mas tem de assegurar-se a lavagem, remoo,
limpeza e desinfeco adequadas das mesmas.
69
Devem tirar-se as luvas e lavar bem as mos, aps manusear materiais infecciosos,
trabalhar em cmaras de segurana biolgica e antes de sair do laboratrio. Depois
de utilizadas, as luvas descartveis devem ser eliminadas com os resduos laboratori-
ais infectados.
Reaces alrgicas como dermatite e hipersensitividade imediata tm sido assina-
ladas em laboratrios e entre outros trabalhadores que utilizam luvas de latex, parti-
cularmente nas que contm p. Devem estar disponveis alternativas s luvas de latex
com p.
Devem utilizar-se luvas de malha de ao inoxidvel, sempre que existir a probabi-
lidade de exposio a instrumentos cortantes, como nas autpsias. Estas luvas pro-
tegem contra cortes mas no contra perfuraes.
No devem utilizar-se luvas fora das reas laboratoriais.
Para mais informaes ver referncias (12), (17) e (18).
70
PARTE IV
Boas tcnicas
microbiolgicas
12. Tcnicas de laboratrio
73
Erros humanos, ms tcnicas e m utilizao do equipamento esto na origem da
maioria dos acidentes em laboratrio e infeces relacionadas com o trabalho. Este
captulo fornece um resumo de mtodos tcnicos destinados a evitar ou a reduzir os
problemas mais vulgarmente assinalados.
Manipulao segura de amostras em laboratrio
A recolha, o transporte e a manipulao de amostras em laboratrio no correcta-
mente efectuadas representam um risco de infeco para o pessoal implicado.
Recipientes de amostras
Os recipientes de amostras devem ser de vidro ou de preferncia em plstico. Devem
ser resistentes e estanques uma vez a tampa ou rolha correctamente colocada. O
exterior dos recipientes no deve ter traos do material. Os recipientes devem ser
correctamente etiquetados para facilitar a identicao. Os formulrios de pedidos ou
de especicao de amostras no devem ser embrulhados com os recipientes mas
metidos em envelopes de preferncia impermeveis.
Transporte de amostras dentro do servio
Para evitar escoamento ou derrame acidental, devem utilizar-se recipientes
secundrios, por exemplo caixas, munidos de separaes para que os recipientes com
as amostras se mantenham em posio vertical. Estes recipientes secundrios podem
ser de metal ou de plstico, devem poder ser esterilizados em autoclave ou devem ser
resistentes a desinfectantes qumicos, e o fecho deve, de preferncia, ter uma junta.
Devem ser regularmente descontaminados.
Recepo de amostras
Os laboratrios que recebem grande nmero de amostras devem ter uma sala ou zona
especial para tal efeito.
Abertura de embalagens
O pessoal que recebe e desembrulha os recipientes com amostras deve conhecer os
riscos potenciais para a sade que isso implica, e deve ser treinado para adoptar
medidas de precauo de base (2) especialmente no caso de recipientes partidos ou
que vertem. Os recipientes de amostras devem ser abertos numa cmara de segurana
biolgica. Devem ter-se disposio desinfectantes.
Uso de pipetas e meios de pipetar
1. Deve utilizar-se sempre um meio de pipetar. Pipetar com a boca deve ser proibido.
2. Todas as pipetas devem ter um tampo de algodo para reduzir a contaminao
dos dispositivos para pipetar
3. Nunca se deve soprar com a pipeta num lquido contendo agentes infecciosos.
4. No misturar materiais infecciosos aspirando e soprando alternadamente atravs
de uma pipeta.
5. No soprar na pipeta para expelir os lquidos.
6. Deve dar-se preferncia a pipetas graduadas que no necessitam de expulsar as
ltimas gotas.
7. As pipetas contaminadas devem ser imersas num desinfectante apropriado
contido num recipiente inquebrvel. Devem car no desinfectante durante o
tempo que for indicado antes de serem eliminadas.
8. Um recipiente para as pipetas a eliminar deve ser colocado no interior e no no
exterior da cmara de segurana biolgica.
9. No se devem utilizar seringas com agulha hipodrmica para pipetar.
10. Devem utilizar-se dispositivos para abrir frascos com cpsula que permitem a
utilizao de pipetas e evitam a utilizao de seringas e agulhas hipodrmicas.
11. Para evitar a disperso de material infeccioso cado de uma pipeta, a rea de tra-
balho deve ser coberta com um material absorvente que depois deve ser eliminado
como resduo infeccioso.
Evitar a disperso de materiais infecciosos
1. Para evitar o derrame prematuro do material, as ansas de transferncia micro-
biolgica devem ter um dimetro de 23mm e estar completamente fechadas.
Os cabos no devem ter mais de 6cm de comprido para minimizar a vibrao.
2. O risco de projeco de material infeccioso com a chama do bico de Bunsen pode
ser evitado utilizando um micro-incinerador elctrico para esterilizar as ansas de
transferncia. Devem preferir-se as ansas descartveis que no precisam de ser
esterilizadas.
3. Ao secar amostras de saliva, preciso ter cuidado para evitar criar aerossis.
4. Amostras e culturas a esterilizar em autoclave e/ou a eliminar devem ser colocadas
em recipientes estanques, por exemplo, sacos de resduos de laboratrio. Antes de
colocados em contentores de lixo, devem ser bem fechados (por exemplo, com ta
isoladora de autoclave).
5. As zonas de trabalho devem ser descontaminadas com um desinfectante apropri-
ado no m de cada perodo de trabalho.
Para mais informaes ver referncia (12).
74
Utilizao de cmaras de segurana biolgica
1. A utilizao e limitaes das CSB devem ser explicadas a todos os utilizadores
potenciais (ver Captulo 10), referindo-se s normas nacionais e documentao
apropriada. O pessoal deve receber protocolos escritos ou manuais sobre pro-
teco ou funcionamento. Em especial, deve ser bem explicado que a cmara no
protege o trabalhador de derrame, quebra ou tcnica deciente.
2. A cmara s deve ser utilizada se estiver a funcionar correctamente.
3. O painel de vidro no deve ser aberto quando a cmara estiver em funcionamento.
4. Na cmara deve ter-se o mnimo de aparelhos e materiais para no bloquear a
circulao do ar no espao do fundo.
5. Os bicos de Bunsen no devem ser utilizados dentro da cmara. O calor pro-
duzido desvia o uxo de ar e pode danicar os ltros. possvel utilizar um
microincinerador mas deve dar-se preferncia a ansas de transferncia estreis e
descartveis.
6. Todas as operaes devem ser realizadas no centro ou na parte de trs da rea de
trabalho e devem ser visveis atravs do painel.
7. A passagem de pessoal por trs do operador deve ser reduzida ao mnimo.
8. O operador no deve perturbar o uxo do ar introduzindo ou retirando os braos
da cmara repetidamente.
9. As grelhas de ar no devem ser obstrudas com papis, pipetas ou outro material
pois isso interrompe o uxo do ar causando contaminao potencial do material
e exposio do operador.
10. Uma vez o trabalho terminado e no m do dia, a superfcie da cmara de segu-
rana biolgica deve ser limpa com um desinfectante apropriado.
11. O ventilador da cmara deve funcionar pelo menos durante 5 minutos antes do
incio do trabalho e outros 5 depois do trabalho terminado.
12. Nunca se deve colocar documentos dentro das CSB.
Para mais informaes sobre cmaras de segurana biolgica ver o Captulo 10.
Evitar a ingesto de material infeccioso e o contacto com
a pele e os olhos
1. As partculas e gotculas (>5m de dimetro) libertadas durante as manipulaes
microbiolgicas depositam-se rapidamente nas reas de trabalho e nas mos do
operador. Devem utilizar-se luvas descartveis. O pessoal de laboratrio deve
evitar tocar na boca, olhos e cara.
2. Alimentos e bebidas no devem ser consumidos nem armazenados no laboratrio.
3. No laboratrio no se deve levar boca nenhum objecto canetas, lpis, goma
de mascar.
4. No se deve fazer a maquilhagem no laboratrio.
5. Durante operaes que possam resultar em projeces de materiais potencial-
mente infecciosos, deve proteger-se a face, olhos e boca.
12. TCNICAS DE LABORATRIO
75
Evitar a inoculao de material infeccioso
1. A inoculao acidental devido a ferimento com vidros ou utenslios partidos pode
ser evitada com medidas de precauo. Sempre que possvel, os utenslios de vidro
devem ser substitudos por utenslios em plstico.
2. Ferimentos com agulhas ou seringas hipodrmicas, pipetas de Pasteur de vidro ou
vidro partido, por exemplo, podem causar inoculao acidental.
3. Podem reduzir-se os ferimentos com agulhas: (a) limitando ao mnimo o uso
de seringas e agulhas (por exemplo, dispondo de dispositivos simples para abrir
frascos com cpsulas de forma a utilizar pipetas em vez de seringas e agulhas);
(b) utilizando dispositivos de segurana especiais quando as seringas e agulhas
so realmente necessrias.
4. As agulhas nunca devem ser reinseridas nos seus invlucros. Os artigos descartveis
devem ser colocados em recipientes especiais imperfurveis, providos de tampa.
5. As pipetas de vidro devem ser substitudas por pipetas Pasteur de plstico.
Separao de soro
1. Este trabalho s deve ser realizado por pessoal devidamente formado.
2. Devem utilizar-se luvas e proteco para os olhos e as membranas mucosas.
3. Projeces e aerossis s podem ser evitados ou minimizados com boas tcnicas
de laboratrio. O sangue e o soro devem ser pipetados cuidadosamente e no
vazados de um recipiente para outro. Pipetar com a boca deve ser proibido.
4. Depois de utilizadas, as pipetas devem ser completamente submergidas num
desinfectante apropriado. Devem car no desinfectante durante o tempo que
for indicado antes de serem eliminadas ou lavadas e esterilizadas para nova
utilizao.
5. Tubos de amostras contendo cogulos de sangue, etc. destinados a ser eliminados
devem ser tapados com as suas tampas e colocados em recipientes estanques
apropriados para esterilizao em autoclave e/ou incinerao.
6. Desinfectantes adequados devem estar disponveis para limpar salpicos e derrames
(ver Captulo 14).
Utilizao de centrifugadoras
1. O bom funcionamento mecnico de centrifugadoras de laboratrio um requi-
sito prvio de segurana microbiolgica na sua utilizao.
2. As centrifugadoras devem ser utilizadas segundo as instrues do seu fabricante.
3. As centrifugadoras devem ser colocadas de maneira que os agentes possam ver o
interior da cuba para colocar correctamente os recipientes e os copos.
4. Os tubos e recipientes de amostras para centrifugadora devem ser feitos de vidro
espesso ou de preferncia de plstico e antes de serem utilizados devem ser inspec-
cionados para detectar defeitos eventuais.
5. Os tubos e recipientes de amostras devem ser sempre bem tapados (se possvel
com rolhas de rosca) para centrifugao.
76
6. Os copos devem ser carregados, equilibrados, fechados e abertos em CSB.
7. Os copos e os recipientes devem ser postos aos pares segundo o peso e, uma vez
os tubos no lugar, correctamente equilibrados.
8. O espao que deve ser deixado entre o nvel do uido e a borda do tubo de
centrifugao deve estar assinalado nas instrues do fabricante.
9. Para equilibrar os copos vazios deve utilizar-se gua destilada ou lcool (propanol
a 70%). No se devem utilizar solues salinas nem hipocloretos pois corroem os
metais.
10. Para microrganismos dos Grupos de Risco 3 e 4 devem utilizar-se copos de
centrifugadora fechados (copos de segurana).
11. Ao utilizar rotores angulares, preciso assegurar-se que os tubos no estejam
demasiado cheios pois podem verter.
12. O interior da cuba da centrifugadora deve ser inspeccionado todos os dias para
vericar se h manchas ou sujidades a nvel do rotor. Havendo provas de manchas
ou sujidade, os protocolos de centrifugao devem ser novamente avaliados.
13. Os rotores e copos da centrifugadora devem ser inspeccionados todos os dias para
detectar sinais de corroso e rachas nas.
14. Copos, rotores e cubas das centrifugadoras devem ser descontaminados depois de
cada utilizao.
15. Depois de utilizados, os copos devem ser guardados invertidos para secar o lquido
que serviu para equilibrar.
16. Quando as centrifugadoras esto a funcionar, pode haver ejeco de partculas
infecciosas transportadas pelo ar. Tais partculas deslocam-se a velocidades
demasiado grandes para poderem ser retidas pelo uxo de ar da cmara de segu-
rana se a centrifugadora estiver colocada numa cmara de segurana biolgica
tradicional de abertura frontal de Classe I ou Classe II. Encerrar as centrifugado-
ras em cmaras de segurana de Classe III evita a disperso generalizada dos
aerossis emitidos. Contudo, uma boa tcnica de centrifugao e tubos cuida-
dosamente tapados oferece proteco apropriada contra aerossis infecciosos e
partculas dispersas.
Utilizao de homogeneizadores, batedores, misturadores
e geradores de ultra-sons
1. Os homogeneizadores domsticos (de cozinha) no devem ser utilizados em
laboratrio pois podem verter ou libertar aerossis. Misturadores e separadores
de laboratrio so mais seguros.
2. As tampas e copos ou frascos devem estar em boas condies e sem rachas ou
deformaes. As tampas devem vedar bem e as juntas devem estar em boas
condies.
3. Durante o funcionamento de homogeneizadores, batedores e geradores de
ultra-sons, a presso aumenta no interior dos recipientes, e aerossis contendo
material infeccioso podem escapar-se por interstcios entre estes e as tampas.
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Recomendam-se recipientes plsticos, em particular em politetrauoroetileno
(PTFE), pois o vidro pode partir-se libertando material infeccioso e ferindo
possivelmente o trabalhador.
4. Durante a utilizao, homogeneizadores, batedores e geradores de ultra-sons
devem estar cobertos com uma cobertura plstica transparente e robusta que ser
desinfectada depois da utilizao. Sempre que possvel, tais mquinas devem ser
utilizadas com a sua cobertura numa cmara de segurana biolgica.
5. No m da operao, o recipiente deve ser aberto numa cmara de segurana
biolgica.
6. Uma proteco auditiva deve ser fornecida ao pessoal utilizando geradores de
ultra-sons.
Utilizao de separadores de tecidos
1. Os separadores em vidro devem ser envolvidos em material absorvente e seguros
por mos protegidas com luvas. Os separadores plsticos (PTFE) so mais seguros.
2. Os separadores de tecidos devem ser utilizados e abertos numa cmara de segu-
rana biolgica.
Manuteno e utilizao de frigorcos e congeladores
1. Frigorcos, congeladores e arcas de dixido de carbono slido (neve carbnica)
devem ser descongelados e limpos periodicamente, e ampolas, tubos, etc. quebra-
dos durante a conservao devem ser retirados. Durante a limpeza, deve utilizar-
se uma proteco facial e luvas de borracha resistentes. Depois da limpeza, devem
desinfectar-se as superfcies internas da cmara.
2. Todos os recipientes conservados em frigorcos, etc. devem estar claramente
etiquetados com o nome cientco do contedo, a data em que foram colocados
no frigorco e o nome da pessoa que o fez. Materiais sem etiqueta e antigos
devem ser desinfectados em autoclave e eliminados.
3. Deve manter-se um inventrio do contedo do congelador.
4. No se devem guardar solues inamveis num frigorco excepto se este for
prova de exploso. Para este efeito, devem colocar-se avisos nas portas dos mesmos.
Abertura de ampolas contendo material infeccioso liolizado
preciso ter cuidado quando se abrem ampolas de material liolizado pois, estando
o interior da ampola a uma presso inferior, a entrada sbita de ar pode dispersar
uma parte do contedo na atmosfera. As ampolas devem ser sempre abertas numa
cmara de segurana biolgica. O processo recomendado :
1. Primeiro, desinfectar a superfcie exterior da ampola.
2. Fazer um trao no tubo com uma lima mais ao menos a meio do tampo de
algodo ou celulose, se este existir.
3. Segurar a ampola com algodo embebido em lcool para proteger as mos antes
de a partir no risco da lima.
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4. Retirar delicadamente a parte superior da ampola e trat-la como material
contaminado.
5. Se o tampo de algodo ainda estiver por cima do contedo da ampola,
remov-lo com pinas esterilizadas.
6. Juntar lquido para voltar a formar a suspenso tendo o cuidado de o fazer
lentamente para evitar a formao de espuma.
Armazenagem de ampolas contendo material infeccioso
Ampolas contendo material infeccioso nunca devem ser mergulhadas em azoto
lquido pois pode haver o risco das que esto rachadas ou mal arrolhadas partirem
ou explodirem sada. Sendo necessrio temperaturas muito baixas, as ampolas
devem ser conservadas unicamente na fase gasosa acima do azoto lquido. Tambm
se pode armazenar material infeccioso em criostato ou neve carbnica. O pessoal de
laboratrio deve usar proteco para os olhos e as mos quando retira ampolas assim
armazenadas.
A superfcie externa das ampolas deve ser desinfectada quando so retiradas da
armazenagem.
Precaues de base com sangue e outros uidos, tecidos e excrees orgnicos
Precaues de base (que incluem precaues universais (19) so destinadas a
reduzir o risco de transmisso de microrganismos tanto de fontes de infeco reco-
nhecidas como desconhecidas (2).
Recolha, etiquetagem e transporte de amostras
1. Devem sempre tomar-se as precaues de base (2); usar luvas para todas as
manipulaes.
2. A recolha de sangue de pacientes e animais deve ser feita por pessoal com
experincia.
3. Para ebotomias, os sistema convencionais de agulha e seringa devem ser subs-
titudos por dispositivos de segurana descartveis (recolha no vcuo) que per-
mitem a recolha de sangue directamente para tubos fechados de transporte e/ou
de cultura, inutilizando automaticamente a agulha no m da operao.
4. Os tubos devem ser colocados em recipientes adequados para transporte at ao
laboratrio (ver Captulo 15) e dentro do laboratrio (ver neste Captulo a seco
sobre transporte de amostras dentro do servio). Os formulrios de pedido devem
ser colocados parte em sacos ou envelopes impermeveis.
5. O pessoal que recebe as amostras no deve abrir estes sacos.
Abertura de tubos com amostras e contedos de amostragens
1. Os tubos de amostras devem ser abertos numa cmara de segurana biolgica.
2. O uso de luvas obrigatrio. Tambm se recomenda proteco para olhos e mem-
branas mucosas (culos de proteco ou viseiras).
79
3. A roupa de proteco deve ser completada com um avental de plstico.
4. Para evitar projeces, deve pegar-se no tampo com uma folha de papel ou gaze.
Vidro e objectos cortantes
1. Sempre que possvel, o vidro deve ser substitudo por plstico. S deve ser usado vidro
resistente (borossilicato), e o material deteriorado ou rachado deve ser eliminado.
2. As agulhas hipodrmicas no devem ser utilizadas como pipetas (ver tambm
neste Captulo a seco sobre Evitar a inoculao de material infeccioso).
Esfregaos para microscopia
Fixar e colorir amostras de sangue, expectorao e fezes para microscopia no mata
necessariamente todos os organismos ou vrus nos esfregaos. Tais artigos devem ser
manipulados com pinas, guardados correctamente e descontaminados e/ou desin-
fectados em autoclave antes de serem eliminados.
Equipamento automtico (gerador de ultra-sons, misturador de vrtice)
1. O equipamento deve ser de preferncia fechado para evitar projeces de gotcu-
las e aerossis.
2. Os euentes devem ser recolhidos em recipientes fechados para desinfeco em
autoclave e/ou eliminao.
3. O equipamento deve ser desinfectado no m de cada sesso, segundo as instrues
do fabricante.
Tecidos
1. Deve utilizar-se xadores de formaldedo.
2. Deve evitar-se cortes em congelao. Quando necessrio, o criostato deve ser
protegido e o trabalhador deve usar uma viseira. Para descontaminao, a
temperatura do instrumento deve subir pelo menos a 20C.
Descontaminao
Para descontaminao recomendam-se os hipocloretos e desinfectantes do melhor
nvel. Solues de hipocloretos preparadas no momento devem conter cloro activo a
1g/l quando so destinadas para uso geral e 5g/l quando so utilizadas para limpar
sangue derramado. Para descontaminar superfcies pode utilizar-se o glutaraldedo
(ver Captulo 14).
Precaues a ter com materiais podendo conter pries
Os pries (tambm conhecidos como vrus lentos ) esto associados a encefalopa-
tias espongiformes transmissveis (TSE), principalmente a doena de Creutzfeldt-
Jakob (CJD, incluindo a nova variante), sndroma Gerstmann-Strussler-Scheinker,
insnia familiar fatal e kuru em seres humanos; scrapie em carneiros e cabras;
encefalopatia espongiforme bovina (BSE) em gado bovino; e outras encefalopatias
80
transmissveis em veados, alces e martas. Embora a doena de Creutzfeldt-Jakob tenha
sido transmitida a humanos, no parece haver casos provados de infeces asso-
ciadas a laboratrios com quaisquer de tais agentes. Contudo, prudente adoptar
certas precaues durante a manipulao de material proveniente de pessoas ou
animais infectados ou potencialmente infectados.
A escolha de um nvel de segurana biolgica para trabalhar com materiais asso-
ciados s TSE depender da natureza do agente e das amostras a estudar, e deve ser
feita em consulta com as autoridades nacionais. no tecido do sistema nervoso central
que se encontram as maiores concentraes de pries. Estudos sobre animais sugerem
a probabilidade de tambm se encontrar grandes concentraes de pries no bao,
timo, ndulos linfticos e pulmo. Estudos recentes indicam que a presena de pries
em tecido muscular da lngua e do esqueleto tambm pode apresentar um risco de
infeco potencial (2023).
Como inactivar completamente os pries difcil de conseguir, importante
privilegiar a utilizao de instrumentos descartveis sempre que possvel, bem como
de uma cobertura protectora descartvel para cobrir a superfcie de trabalho da
cmara de segurana biolgica.
A principal precauo a tomar evitar a ingesto de material contaminado ou a
puno da pele do pessoal de laboratrio. Como os agentes no so destrudos pelos
processos normais de desinfeco e esterilizao utilizados em laboratrio, devem ser
tomadas as seguinte precaues suplementares.
1. A utilizao de equipamento exclusivo, isto , equipamento no compartilhado
com outros laboratrios fortemente recomendada.
2. Deve utilizar-se roupa de proteco de laboratrio (bata e avental) e luvas (para
patologistas, luvas de malha de ao entre luvas de borracha).
3. A utilizao de artigos de plstico descartveis, que podem ser tratados e
eliminados como resduos secos fortemente recomendada.
4. Os processadores de tecidos no devem ser utilizados devido a problemas de
desinfeco. Em vez disso, devem utilizar-se frascos e provetas.
5. Todas as manipulaes devem ser realizadas em CSB.
6. Devem tomar-se as maiores precaues para evitar a formao de aerossis,
ingesto de produtos e cortes e picadelas na pele.
7. Os tecidos xados ao formol devem ser considerados como ainda infecciosos,
mesmo depois de exposio prolongada.
8. Amostras histolgicas contendo pries so largamente inactivadas depois de
expostas a cido frmico a 96% durante uma hora (24), (25).
9. Os resduos de trabalho, incluindo luvas, batas e aventais descartveis, devem ser
desinfectados em autoclave utilizando um esterilizador a vapor a 134137C
durante um nico ciclo de 18 minutos, ou seis ciclos sucessivos de 3 minutos cada,
seguido de incinerao.
10. Instrumentos no descartveis, incluindo luvas de malha de ao, devem ser
recolhidos para descontaminao.
81
11. Resduos lquidos infecciosos contaminados com pries devem ser tratados com
hipocloreto de sdio com cloro activo a 20g/l (2%) (concentrao nal) durante
1 hora.
12. A vaporizao com paraformaldedo no diminui os ttulos de pries os quais
tambm so resistentes a irradiao por ultravioletas. Contudo, as cmaras devem
continuar a ser descontaminadas utilizando os mtodos normais (por exemplo,
com gs formaldedo) para inactivar outros agentes que possam estar presentes.
13. CSB e outras superfcies contaminadas por pries podem ser descontaminadas
com hipocloreto de sdio contendo cloro activo a 20g/l (2%) durante 1 hora.
14. Filtros de partculas de ar de alta ecincia (HEPA) devem ser incinerados a uma
temperatura mnima de 1000C depois de removidos. Outras medidas recomen-
dadas antes da incinerao incluem:
a. pulverizar a face exposta do ltro com laca do cabelo antes da sua remoo,
b. ensacar os ltros durante a remoo, e
c. remover o ltro HEPA da cmara de trabalho para que o plenum (no
acessvel) da cmara no seja contaminado.
15. Os instrumentos devem ser mergulhados em hipocloreto de sdio contendo cloro
activo a 20g/l (2%) durante 1 hora e depois bem passados por gua antes de serem
esterilizados em autoclave.
16. Os instrumentos que no podem ser desinfectados em autoclave podem ser limpos
molhando-os repetidamente com hipocloreto de sdio contendo cloro activo a
20g/l (2%) durante 1 hora. necessrio uma lavagem correcta para remover o
hipocloreto de sdio residual.
Para mais informaes sobre o manuseamento de agentes no convencionais ver refer-
ncias (12), (26) e (27).
82
83
13. Planos de emergncia
e medidas a tomar
Qualquer laboratrio que trabalhe com microrganismos infecciosos deve estabelecer
medidas de segurana apropriadas aos riscos inerentes aos organismos e animais
manipulados.
Um plano de emergncia escrito para acidentes em laboratrio e instalaes para
animais uma necessidade em qualquer servio que trabalhe com ou guarde micror-
ganismos dos Grupos de Risco 3 ou 4 (laboratrio de connamento Nvel 3 de
segurana biolgica e laboratrio de connamento mximo Nvel 4 de segurana
biolgica). As autoridades sanitrias nacionais e/ou locais devem participar na
elaborao do plano de preparao para casos de emergncia.
Plano de emergncia
O plano deve indicar os procedimentos operacionais:
1. Precaues contra desastres naturais, por exemplo, incndio, inundao, tremor
de terra e exploso
2. Avaliao do risco de perigo biolgico
3. Medidas a tomar em caso de exposio acidental e descontaminao
4. Evacuao de emergncia de pessoas e animais presentes nos locais
5. Tratamento mdico de urgncia de pessoas expostas e feridas
6. Vigilncia mdica das pessoas expostas
7. Tratamento clnico das pessoas expostas
8. Investigao epidemiolgica
9. Continuao das operaes depois do acidente.
Ao elaborar este plano, prever a incluso dos seguintes pontos:
1. Identicao de organismos de alto risco
2. Localizao de zonas de alto risco, por exemplo, laboratrios, zonas de
armazenagem, instalaes para animais
3. Identicao de pessoal e populaes a risco
4. Identicao do pessoal responsvel e suas obrigaes, por exemplo, responsvel
da segurana biolgica, pessoal de segurana, autoridade sanitria local, mdicos,
microbiologistas, veterinrios, epidemiologistas, bombeiros e polcia
5. Listas de servios de tratamento e isolamento que podem receber pessoas expostas
ou infectadas
6. Transporte de pessoas expostas ou infectadas
7. Listas de fontes de soro imune, vacinas, medicamentos, material e fornecimentos
especiais
8. Proviso de material de emergncia, por exemplo, roupa de proteco, desinfec-
tantes, conjuntos para derrames qumicos e biolgicos, material e equipamentos
de descontaminao.
Medidas de emergncia em laboratrios microbiolgicos
Ferimentos por picadas, cortes e abraso
A pessoa acidentada deve retirar a roupa de proteco, lavar as mos e qualquer outra
zona afectada, aplicar um desinfectante cutneo apropriado, e se necessrio consultar
um mdico. Deve noticar-se a causa do ferimento e os organismos implicados, e
manter registos mdicos correctos e completos.
Ingesto de material potencialmente infeccioso
Tirar a roupa de proteco e consultar um mdico. Identicar e noticar s autori-
dades o material ingerido e as circunstncias do incidente, e manter registos mdicos
correctos e completos.
Formao de aerossis potencialmente infecciosos (fora de uma cmara de
segurana biolgica)
Todas as pessoas devem evacuar a rea afectada e as que tenham sido expostas devem
ser encaminhadas para um mdico. O supervisor do laboratrio e o responsvel da
segurana biolgica devem ser informados imediatamente. Ningum deve entrar na
sala durante um espao de tempo apropriado (por exemplo, 1 hora), para permitir a
evacuao dos aerossis e o depsito das partculas mais pesadas. Se o laboratrio no
tiver um sistema central de exausto do ar, a entrada deve ser retardada, por exemplo,
de 24 horas.
Devem colocar-se sinais indicando que a entrada proibida. Aps este prazo, a
descontaminao deve continuar controlada pelo responsvel da segurana biolgica.
Deve utilizar-se roupa de proteco apropriada e proteco respiratria.
Recipientes partidos e substncias infecciosas derramadas
Recipientes partidos contaminados com substncias infecciosas e substncias infec-
ciosas derramadas devem ser cobertos com panos ou papel absorvente. Estes so
depois regados com um desinfectante que ca a actuar durante o tempo devido. O
pano ou papel e o material partido so ento retirados; os fragmentos de vidro devem
ser manipulados com pinas. A rea contaminada deve ento ser esfregada com um
desinfectante. Se para retirar o material partido forem utilizados apanhadores, estes
devem ser esterilizados em autoclave ou imersos num desinfectante ecaz. Panos,
papis e esfreges utilizados para limpar devem ser colocados num recipiente de
resduos contaminados. Todas estas aces devem ser efectuadas com luvas.
84
Se formulrios ou outros documentos impressos ou escritos mo estiverem con-
taminados, a informao neles contida deve ser copiada e o original deitado para o
recipiente de resduos contaminados.
Quebra de tubos contendo material potencialmente infeccioso dentro de
centrifugadoras que no tm recipientes estanques
Se ocorrer ou se suspeitar de uma quebra enquanto a mquina est em funciona-
mento, parar o motor e deixar a mquina fechada durante uns 30 minutos para per-
mitir o depsito do material. Se a quebra for descoberta quando a mquina pra,
voltar a fechar a tampa imediatamente e esperar cerca de 30 minutos. Nos dois casos,
o responsvel da segurana biolgica deve ser informado.
Para todas as operaes seguintes devem utilizar-se luvas resistentes (por exemplo,
de borracha espessa), cobertas, se necessrio, com luvas descartveis. Para retirar restos
de vidro, devem utilizar-se pinas guarnecidas ou no de algodo.
Todos os tubos partidos, fragmentos de vidro, recipientes e o rotor devem ser colo-
cados num desinfectante no-corrosivo cuja eccia contra o organismo implicado
conhecida (ver Captulo 14). Os tubos intactos e arrolhados podem ser colocados em
desinfectante num recipiente separado e depois recuperados.
A cuba da centrifugadora deve ser esfregada com o mesmo desinfectante numa
diluio apropriada e esfregada de novo, lavada com gua e seca. Todos os materiais
utilizados na limpeza devem ser considerados como resduos infecciosos.
Quebra de tubos encerrados em recipientes de centrifugao fechados
(copos de segurana)
Todos os recipientes de centrifugadora fechados devem ser carregados e descarregados
numa cmara de segurana biolgica. Se houver suspeita de quebras dentro do recipi-
ente, a tampa de segurana pode ser relaxada e o recipiente esterilizado em autoclave.
Como alternativa, o recipiente de segurana pode ser quimicamente desinfectado.
Incndio e desastres naturais
Os servios de socorros em caso de incndio e outros desastres devem participar
elaborao de planos de preparao para emergncias. Devem ser informados anteci-
padamente da localizao das salas que contm materiais potencialmente infecciosos.
Ser benco organizar uma visita do pessoal desses servios ao laboratrio para car
a conhecer o traado dos locais e seu contedo.
Depois de um desastre natural os servios de emergncia locais ou nacionais devem
ser prevenidos dos riscos potenciais existentes dentro e/ou perto dos edifcios do labo-
ratrio. S devem entrar nos locais acompanhados de um membro devidamente
formado do pessoal. Os materiais infecciosos devem ser recolhidos em caixas
estanques ou sacos descartveis resistentes.
A equipa de segurana biolgica que deve determinar, com base em regulamen-
tos locais, o que deve ser recuperado ou eliminado.
13. PLANOS DE EMERGNCIA E MEDIDAS A TOMAR
85
Servios de emergncia: quem contactar
Os nmeros de telefone e endereos das pessoas e servios abaixo designados devem
estar axados nas instalaes de modo bem visvel:
1. A prpria instituio ou laboratrio (a pessoa que telefona ou o servio que recebe
a chamada pode no conhecer bem o endereo e a localizao)
2. O director da instituio ou laboratrio
3. O supervisor do laboratrio
4. O responsvel da segurana biolgica
5. Os servios de incndio
6. Hospitais/servios de ambulncias/pessoal mdico (nomes de postos de sade,
departamentos, e/ou pessoal mdico se possvel)
7. Polcia
8. Mdico
9. Tcnico responsvel
10. Os servios de gua, de gs e de electricidade.
Material de emergncia
O material de emergncia seguinte deve estar disponvel:
1. Mala de primeiros socorros incluindo antdotos universais e especiais.
2. Extintores de incndio apropriados, cobertores para fogo.
Tambm se sugere o material a seguir, mas que pode variar segundo as circunstncias
locais:
1. Roupa de proteco total (fatos especiais de uma s pea, luvas e touca para
incidentes implicando microrganismos dos Grupos de Risco 3 e 4)
2. Mscaras respiratrias completas com ltros apropriados para produtos qumicos
e partculas
3. Aparelhos de desinfeco das salas, por exemplo, pulverizadores e vaporizadores
de formol
4. Macas
5. Utenslios, como martelos, machados, chaves-inglesas, chaves de parafusos,
escadotes, cordas
6. Equipamento para marcar e sinalizar a rea de perigo.
Para mais informaes ver referncias (12) e (28).
86
87
14. Desinfeco e esterilizao
Para a segurana biolgica do laboratrio crucial um conhecimento bsico de
desinfeco e esterilizao. Como os artigos muito contaminados no podem ser
desinfectados nem esterilizados prontamente, igualmente importante compreender
os fundamentos da limpeza antes da desinfeco (limpeza prvia). A este respeito os
seguintes princpios gerais aplicam-se a todas as classes conhecidas de agentes
patognicos microbianos, com a excepo notvel dos pries que so examinados sepa-
radamente neste captulo.
As exigncias especcas de descontaminao dependero do tipo de experincia e
da natureza do agente ou agentes infecciosos manipulados. A informao genrica
aqui fornecida pode ser utilizada para elaborar tanto procedimentos padres como
outros mais especcos para enfrentar riscos biolgicos num dado laboratrio.
O tempo de aplicao de desinfectantes especco a cada material e fabricante.
Assim, todas as recomendaes para utilizao de desinfectantes devem seguir as
especicaes dos fabricantes.
Denies
Em desinfeco e esterilizao utilizam-se os mais variados termos. Os seguintes esto
entre os mais comuns em segurana biolgica:
Antimicrobiano Agente que mata microrganismos ou impede o seu desenvolvi-
mento e multiplicao.
Anti-sptico Substncia que inibe o crescimento e desenvolvimento de microrga-
nismos sem necessariamente os matar. Anti-spticos so normalmente aplicados
sobre superfcies do corpo.
Biocida Termo geral para qualquer agente que mata organismos.
Germicida qumico Substncia qumica ou mistura de substncias qumicas
utilizadas para matar microrganismos.
Descontaminao Qualquer processo de remoo e/ou eliminao de microrga-
nismos. O mesmo termo tambm utilizado para remoo ou neutralizao de
produtos qumicos perigosos e materiais radioactivos.
Desinfectante Substncia qumica ou mistura de substncias qumicas utilizadas
para matar microrganismos, mas no necessariamente esporos. Desinfectantes so
normalmente aplicados em superfcies ou objectos inanimados.
Desinfeco Meio fsico ou qumico de matar microrganismos, mas no necessari-
amente esporos.
Esporocida Substncia qumica ou mistura de substncias qumicas utilizadas para
matar microrganismos e esporos.
Esterilizao Processo que mata e/ou remove todas as classes de microrganismos e
esporos.
Microbicida Substncia qumica ou mistura de substncias qumicas que matam
microrganismos. O termo muitas vezes utilizado em vez de biocida , germi-
cida qumico ou antimicrobiano .
Limpar materiais de laboratrio
Limpar signica remover o lixo, a matria orgnica e as manchas, e inclui escovar,
aspirar, limpar a seco, lavar ou esfregar com gua contendo sabo ou detergente.
Lixo, terra e matria orgnica podem servir de proteco a microrganismos e podem
interferir com a aco destruidora de produtos de descontaminao (anti-spticos,
germicidas qumicos e desinfectantes).
Para se conseguir uma desinfeco ou esterilizao correcta, essencial proceder a
uma limpeza prvia. Muitos produtos germicidas s so activos em materiais previa-
mente limpos. A limpeza prvia deve ser realizada com cuidado para evitar exposio
a agentes infecciosos.
Devem utilizar-se materiais quimicamente compatveis com os germicidas a aplicar
mais tarde. vulgar utilizar o mesmo germicida qumico para limpeza prvia e
desinfeco.
Germicidas qumicos
H muitos tipos de qumicos que podem ser usados como desinfectantes e/ou
anti-spticos. Como existe um nmero e variedade crescente de produtos comerciais,
as composies devem ser cuidadosamente escolhidas segundo necessidades
especcas.
A actividade germicida de muitos produtos qumicos desenvolve-se melhor e mais
rapidamente com o aumento da temperatura. Contudo, temperaturas altas podem
acelerar a sua evaporao e tambm provocar a sua degradao. Um cuidado especial
necessrio para utilizar e armazenar tais produtos qumicos em regies tropicais
onde a sua validade pode ser mais curta devido s altas temperaturas ambientais.
Muitos germicidas podem ser nocivos para os seres humanos ou para o meio
ambiente. Devem ser escolhidos, armazenados, manipulados, utilizados e eliminados
com cuidado, respeitando as instrues dos fabricantes. Para proteco pessoal,
recomenda-se a utilizao de luvas, aventais e proteces oculares durante a
preparao de diluies de germicidas qumicos.
Para a limpeza regular de solos, paredes, materiais e mobilirio no se exige geral-
mente germicidas qumicos. Contudo, o seu uso pode ser apropriado em certos casos
de controlo de surtos.
88
A utilizao correcta de germicidas qumicos contribuir para segurana no local
de trabalho, reduzindo ao mesmo tempo o risco de agentes infecciosos. Tanto quanto
possvel, o nmero de germicidas qumicos a utilizar deve ser limitado por razes
econmicas e de controlo de inventrio, e para limitar a poluio ambiental.
Descreve-se a seguir classes de germicidas qumicos vulgarmente utilizados, com
informaes genricas sobre as suas aplicaes e pers de segurana. Se no houver
outras indicaes, as concentraes de germicida so dadas em peso/volume (w/v). O
Quadro 12 resume as diluies recomendadas de compostos que libertam cloro.
Cloro (hipocloreto de sdio)
O cloro, oxidante rpido, um germicida qumico disponvel em toda a parte e de
vasto campo de aco. vendido normalmente como lixvia, uma soluo aquosa de
hipocloreto de sdio (NaOCI) que pode ser diluda com gua resultando em vrias
concentraes de cloro activo.
O cloro, especialmente como lixvia, muito alcalino e pode corroer os metais. A
sua actividade fortemente reduzida pela matria orgnica (protena). Reservas ou
solues de lixvia armazenadas em recipientes abertos, especialmente a altas tem-
peraturas, libertam gs de cloro o que enfraquece o seu potencial germicida. A fre-
quncia com que se devem mudar as solues de lixvia para trabalhar depende da
sua concentrao inicial, tipo (por exemplo, com ou sem tampa) e tamanho dos recipi-
entes, frequncia e natureza da utilizao e condies ambientes. De uma maneira
geral, as solues destinadas a materiais com altos nveis de matria orgnica vrias
vezes ao dia, devem ser mudadas pelo menos diariamente, enquanto as utilizadas com
menos frequncia podem chega a durar uma semana.
14. DESINFECO E ESTERILIZAO
89
Quadro 12. Diluies recomendadas de compostos libertando cloro
SITUAO LIMPA
a
SITUAO SUJA
b
Cloro activo necessrio 0,1% (1g/l) 0,5% (5g/l)
Soluo de hipocloreto de sdio 20ml/l 100ml/l
(5% de cloro activo)
Soluo de hipocloreto de clcio 1,4g/l 7,0g/l
P de dicloroisocianureto de sdio 1,7g/l 8,5g/l
Comprimidos de dicloroisocianureto 1 comprimido/l 4 comprimidos/l
de sdio (1,5g de cloro activo/comprimido)
Cloramina (25% de cloro activo)
c
20g/l 20g/l
a
Depois do lixo mais importante ter sido removido.
b
Para deitar directamente, por exemplo, sobre o sangue ou antes do lixo mais importante ter sido removido.
c
Ver texto.
Um desinfectante geral deve ter uma concentrao de 1g/l de cloro activo. Para o
caso de derrames que representem riscos biolgicos e na presena de grandes quan-
tidades de matria orgnica recomenda-se uma soluo mais forte contendo 5g/l de
cloro activo. As solues de hipocloreto de sdio, como a lixvia domstica, contm
50g/l de cloro activo e devem por isso ser diludas a 1: 50 ou 1: 10 para obter con-
centraes nais de 1g/l e 5g/l respectivamente. As solues industriais de lixvia tm
uma concentrao de hipocloreto de sdio de cerca de 120g/l e devem ser diludas de
maneira a obter os nveis acima indicados.
Os grnulos ou comprimidos de hipocloreto de clcio (Ca(CIO)
2
) contm geral-
mente cerca de 70% de cloro activo. Assim, solues preparadas com grnulos ou
comprimidos, contendo 1,4g/l e 7,0g/l, contm respectivamente 1,0g/l e 5g/l de cloro
activo.
A lixvia no aconselhada como anti-sptico mas pode ser utilizada como
desinfectante universal e para mergulhar materiais contaminados que no contenham
metal. Em casos de emergncia, a lixvia tambm pode ser utilizada para desinfectar
a gua de beber, com uma concentrao nal de 12mg/l de cloro activo.
O gs de cloro muito txico e por isso a lixvia deve ser armazenada e utilizada
unicamente em reas bem ventiladas. Tambm no deve ser misturada com cidos
para evitar a libertao rpida de gs de cloro. Muitos produtos derivados de cloro
podem ser nocivos para os humanos e o meio ambiente, e assim deve ser evitado o
uso indiscriminado de desinfectantes baseados em cloro, em particular a lixvia.
Dicloroisocianureto de sdio
O dicloroisocianureto de sdio (NaDCC) sob a forma de p contm 60% de cloro
activo. Solues preparadas com p de NaDCC a 1,7g/l e 8,5g/l tero 1g/l ou 5g/l de
cloro activo respectivamente. Os comprimidos de NaDCC contm geralmente o
equivalente a 1,5g/l de cloro activo por comprimido. Um ou quatro comprimidos dis-
solvidos em 1l de gua daro as concentraes exigidas de 1g/l ou 5g/l de cloro activo
respectivamente. NaDCC em p ou comprimidos mais fcil e seguro de armazenar.
NaDCC sob a forma slida pode ser aplicado sobre derrames de sangue ou outros
lquidos biologicamente perigosos e deixado durante pelo menos 10 minutos antes de
removido. A limpeza da rea afectada pode ento ter lugar.
Cloraminas
As cloraminas existem em p contendo cerca de 25% de cloro activo. Atendendo a
que as cloraminas libertam o cloro mais lentamente que os hipocloretos, as con-
centraes iniciais devem ser superiores para que a eccia seja equivalente dos
hipocloretos. Por outro lado, as solues de cloramina no so inactivadas por matria
orgnica tanto quanto as solues de hipocloreto, sendo recomendado tanto para situ-
aes limpas como para situaes sujas concentraes de 20g/l.
As solues de cloramina so virtualmente sem odor. Contudo, os artigos imersos
nestas solues devem ser muito bem passados por gua corrente para remover
90
qualquer resduo da maioria dos agentes adicionados aos ps de cloramina-T (tosil-
cloramide de sdio).
Dixido de cloro
O dixido de cloro (CLO
2
) um germicida potente e de aco rpida, agente desin-
fectante e oxidante, muitas vezes noticado como activo a nveis de concentrao infe-
riores aos do cloro ou da lixvia. O gs resultante de dixido de cloro instvel e sofre
decomposio em gs de cloro (Cl
2
), oxignio (O
2
), produzindo calor. Contudo, o
dixido de cloro solvel em gua e estvel numa soluo aquosa. Pode ser obtido
de duas maneiras: (1) misturando dois componentes separados, cido hidroclrico
(HCI) e cloreto de sdio (NaCIO
2
); e (2) encomendando a sua forma estabilizada que
depois activada no stio quando necessrio.
Dos biocidas oxidantes, o dixido de cloro o mais selectivo. O ozono e o cloro
so muito mais reactivos do que o dixido de cloro, e sero consumidos pela maior
parte dos compostos orgnicos. Contudo, o dixido de cloro s reage com compos-
tos de enxofre reduzidos, aminas secundrias e tercirias, e outros compostos orgni-
cos muito reduzidos e reactivos. Assim, pode conseguir-se um resduo mais estvel
com dixido de cloro a doses muito mais baixas do que utilizando cloro ou ozono.
Produzido correctamente, o dixido de cloro pode ser usado mais ecazmente do que
ozono ou cloro em casos de maior carga orgnica devido sua selectividade.
Formaldedo
O formaldedo (HCHO) um gs que mata todos os microrganismos e esporos a
temperaturas superiores a 20C. Contudo, no activo contra pries.
O formaldedo actua lentamente e necessita de um nvel de humidade relativa de
cerca de 70%. comercializado sob a forma de polmero slido, o paraformaldedo,
em ocos ou comprimidos, ou como formalina, uma soluo do gs em gua de cerca
de 370g/l (37%) contendo metanol (100ml/l) como estabilizador. Ambas as formas
so aquecidas para libertao do gs que utilizado para descontaminao e desin-
feco de espaos fechados tais como cmaras e salas de segurana (ver seco sobre
Descontaminao do meio ambiente local neste captulo). O formaldedo (5% de for-
malina em gua) pode ser utilizado como desinfectante lquido.
Suspeita-se que o formaldedo seja cancergeno. um gs perigoso, irritante, com
um odor forte e cujos fumos podem irritar os olhos e as membranas mucosas. Assim,
deve ser armazenado e utilizado em salas com chamin ou bem ventiladas. Devem
respeitar-se os regulamentos nacionais sobre segurana qumica.
Glutaraldedo
Tal como o formaldedo, o glutaraldedo (OHC(CH
2
)
3
CHO) tambm activo contra
bactrias vegetativas, esporos, fungos e vrus lipdicos e no lipdicos. no corrosivo
e actua mais depressa do que o formaldedo. Contudo, leva vrias horas a matar
esporos bacterianos.
91
O glutaraldedo geralmente fornecido como uma soluo com uma concentrao
de cerca de 20g/l (2%) e certos produtos podem necessitar, antes da sua utilizao,
de ser activados (tornados alcalinos) pela adio de um composto de bicarbonato
fornecido com o produto. A soluo activada pode ser reutilizada durante 14
semanas dependendo da frmula e do tipo e frequncia da sua utilizao. As tiras reac-
tivas fornecidas com certos produtos s do uma indicao aproximativa dos nveis
de glutaraldedo activo disponvel nas solues utilizadas. Uma vez que se tornam
turvas, as solues de glutaraldedo devem ser eliminadas.
O glutaraldedo txico e irritante para a pele e membranas mucosas, e deve evitar-
se o seu contacto. Deve ser utilizado em salas com chamin ou reas bem ventiladas.
No recomendado para pulverizaes ou como soluo para descontaminao de
superfcies ambientais. Os regulamentos nacionais de segurana qumica devem ser
respeitados.
Compostos fenlicos
Os compostos fenlicos, um vasto grupo de agentes, foram dos primeiros germici-
das. Contudo, preocupaes mais recentes sobre segurana restringem a sua utiliza-
o. So activos contra bactrias vegetativas e vrus lipdicos e, na frmula correcta,
tambm mostram actividade contra micobactrias. No so activos contra esporos
e a sua actividade contra vrus no lipdicos varivel. Muitos produtos fenlicos
so utilizados para descontaminao de superfcies ambientais, e alguns deles (por
exemplo, triclosan e cloroxilenol) esto entre os anti-spticos mais vulgarmente
utilizados.
O triclosan corrente em produtos de lavar as mos. activo principalmente
contra bactrias vegetativas e incuo para a pele e as membranas mucosas. Contudo,
em estudos baseados em laboratrio, bactrias tornadas resistentes a concentraes
fracas de triclosan tambm mostraram resistncia a certos tipos de antibiticos. O sig-
nicado eventual destes resultados no terreno no conhecido.
Certos compostos fenlicos so sensveis a e podem ser inactivados pela dureza da
gua e por isso devem ser diludos com gua distilada ou desionizada.
No se recomenda a utilizao de compostos fenlicos em superfcies em contacto
com alimentos e em reas com crianas pequenas. Podem ser absorvidos pela bor-
racha e tambm podem penetrar na pele. Os regulamentos nacionais de segurana
qumica devem ser respeitados.
Compostos de amnio quaternrio
Muitos tipos de compostos de amnio quaternrio so utilizados como misturas e
muitas vezes em combinao com outros germicidas tal como alcois. So bem activos
contra certas bactrias vegetativas e vrus lipdicos. Certos tipos (por exemplo, cloreto
de benzalkonium) so utilizados como anti-spticos.
A actividade germicida de certos tipos de compostos de amnio quaternrio
muito reduzida com matria orgnica, dureza da gua e detergentes aninicos. Assim,
92
preciso ter cuidado ao escolher agentes para limpeza prvia quando se vai utilizar
na desinfeco compostos de amnio quaternrio. Bactrias potencialmente nocivas
podem desenvolver-se em solues de compostos de amnio quaternrio. Devido
a fraca biodesintegrao estes compostos podem tambm acumular-se no meio
ambiente.
Alcois
O etanol (lcool etlico, C
2
H
5
OH) e o 2-propanol (lcool isoproplico, (CH
3
)
2
CHOH)
tm propriedades desinfectantes similares. So activos contra bactrias vegetativas,
fungos e vrus lipdicos mas no contra esporos. A sua aco sobre vrus no-
lipdicos varivel. Para a maior eccia devem ser utilizados em concentraes
prximas de 70% (v/v) em gua: pode acontecer que concentraes mais altas ou mais
baixas no tenham um poder germicida to elevado. Uma vantagem importante das
solues aquosas de alcois no deixar resduos nos objectos tratados.
Misturas com outros agentes so mais ecazes do que unicamente lcool, por
exemplo lcool a 70% (v/v) com 100g/l de formaldedo, e lcool contendo 2g/l de
cloro activo. Uma soluo aquosa a 70% (v/v) de etanol pode ser utilizada sobre a
pele, em superfcies de trabalho e CSB, e como banho para pequenas peas de instru-
mentos cirrgicos. Como o etanol pode secar a pele, muitas vezes misturado com
emolientes. Para a descontaminao de mos pouco sujas em situaes onde a lavagem
destas inconveniente ou impossvel, recomenda-se esfregar as mos com produtos
base de lcool. Contudo, no se deve esquecer que o etanol inecaz contra esporos
e pode no matar todos os tipos de vrus no lipdicos.
Os alcois so volteis e inamveis e no devem ser utilizados perto de chamas.
As solues de trabalho devem ser armazenadas em recipientes apropriados para
evitar a evaporao dos alcois. Estes podem endurecer a borracha e dissolvem certos
tipos de cola. muito importante que o inventrio e o armazenamento de etanol no
laboratrio sejam correctos, para evitar que seja utilizado para outros ns alm de
desinfeco. Botijas com solues contendo lcool devem ser claramente etiquetadas
para evitar a desinfeco em autoclave.
Iodo e iodoforos
A aco destes desinfectantes semelhante do cloro, embora possam ser ligeiramente
menos restringidos por matria orgnica. O iodo pode manchar tecidos e superfcies
ambientais e no geralmente indicado para utilizao como desinfectante. Por outro
lado, iodoforos e tinturas de iodo so bons anti-spticos. O polividone de iodo um
produto de conana e seguro para lavagem das mos em cirurgia e um anti-sptico
pr-operatrio da pele. Anti-spticos base de iodo no esto geralmente indicados
para uso em aparelhos mdicos/dentrios. O iodo no deve ser utilizado em alumnio
ou cobre.
O iodo pode ser txico. Produtos orgnicos base de iodo devem ser armazena-
dos a 410C para evitar o desenvolvimento de bactrias nocivas.
93
Perxido de hidrognio e percidos
Tal como o cloro, o perxido de hidrognio (H
2
O
2
) e os percidos so oxidantes fortes
e podem ser potentes germicidas de largo campo de aco. Tambm so mais seguros
para o homem e o meio ambiente.
O perxido de hidrognio fornecido, quer como soluo a 3% pronta a ser
utilizada, quer como soluo aquosa a 30% (gua oxigenada) a diluir 510 vezes o seu
volume com gua esterilizada. Contudo, solues a 36% de perxido de hidrognio
unicamente so relativamente lentas e limitadas como germicidas. Os produtos agora
disponveis tm outros ingredientes para estabilizar o contedo de perxido de
hidrognio, acelerar a sua aco germicida e torn-lo menos corrosivo.
O perxido de hidrognio pode ser utilizado para descontaminao de bancadas
de trabalho em laboratrios e CSB, e solues mais fortes podem estar indicadas para
desinfectar aparelhos mdicos/dentrios sensveis ao calor. A utilizao de perxido
de hidrognio ou cido peractico (CH
3
COOOH) em vaporizao para descontami-
nar aparelhos mdicos/dentrios sensveis ao calor exige equipamento especializado.
Perxido de hidrognio e percidos podem ser corrosivos sobre metais tais como
alumnio, cobre, lato e zinco, e tambm podem descolorar tecidos, cabelos, pele e
membranas mucosas. Artigos tratados com estes produtos devem ser muito bem pas-
sados por gua antes de contacto com olhos e membranas mucosas. Devem ser sempre
armazenados longe de fontes de calor e protegidos da luz.
Descontaminao do meio ambiente local
A descontaminao do ar, mobilirio e equipamento de laboratrio exige uma com-
binao de desinfectantes lquidos e gasosos. Para superfcies pode utilizar-se uma
soluo de hipocloreto de sdio (NaOCI); uma soluo contendo 1g/l de cloro activo
pode estar indicada para a salubridade geral do meio ambiente, mas recomendam-se
solues mais fortes (5g/l) para situaes de grande risco. Para descontaminao
do meio ambiente, solues contendo 3% de perxido de hidrognio (H
2
O
2
) so
substitutos apropriados de solues de lixvia.
As salas e o equipamento podem ser descontaminados por meio de fumigao com
gs de formaldedo, quer aquecendo paraformaldedo, quer fervendo formol. Isto so
processos muito perigosos que exigem pessoal especialmente treinado. Todas as aber-
turas da sala (janelas, portas, etc.) devem ser hermeticamente fechadas com ta colante
ou outro meio semelhante antes de principiar a produo de gs. A fumigao deve ser
realizada a uma temperatura ambiente de pelo menos 21C e uma humidade relativa
de 70%. (Ver tambm a seco sobre Descontaminao de CSB neste captulo).
Depois da fumigao, a sala deve ser muito bem ventilada antes que seja permitida
a entrada de pessoal. Qualquer pessoa que entre na sala antes desta ventilada deve usar
mscara respiratria apropriada. Para neutralizar o formaldedo pode utilizar-se
bicarbonato de amnio gasoso.
A fumigao de espaos mais pequenos com vapor de perxido de hidrognio
tambm ecaz mas necessita de equipamento especializado para gerar o vapor.
94
Descontaminao de cmaras de segurana biolgica
Para descontaminar cmaras de Classe I e Classe II existe equipamento que, de
maneira independente, gera, circula e neutraliza o gs de formaldedo. Como alter-
nativa, a quantidade apropriada de paraformaldedo (concentrao nal de 0,8% de
paraformaldedo no ar) pode ser colocada numa vasilha e posta a aquecer numa placa
elctrica. Outra vasilha contendo 10% mais de bicarbonato de amnio do que
paraformaldedo tambm colocada dentro da cmara numa segunda placa. As placas
elctricas so ligadas corrente elctrica fora da cmara para que a operao possa
ser controlada do exterior, ligando e desligando as placas elctricas segundo as neces-
sidades. Se a humidade relativa inferior a 70%, deve colocar-se dentro da cmara
um recipiente aberto com gua quente, antes do painel frontal ser selado com ta forte
(por exemplo, ta de canalizao). A abertura frontal e a sada do exaustor devem ser
tapadas com uma folha de plstico muito resistente para impedir a sada do gs. As
entradas de os elctricos no painel frontal tambm devem ser seladas com ta de
canalizao.
Liga-se a placa elctrica da vasilha de paraformaldedo e desliga-se quando tudo se
tiver evaporado. Durante pelo menos 6 horas no se mexe na cmara. Liga-se ento
a placa elctrica da segunda vasilha, deixando-se evaporar todo o bicarbonato de
amnio. Depois desliga-se a placa e liga-se o ventilador da cmara durante dois curtos
perodos de 2 segundos cada para permitir a circulao do gs de bicarbonato de
amnio. No se mexe na cmara durante 30 minutos antes de remover as proteces
do painel frontal e da sada do exaustor. As superfcies da cmara devem ser limpas
para remover resduos antes de ser utilizada.
Lavagem/descontaminao das mos
Sempre que possvel, devem utilizar-se luvas apropriadas para manipular materiais
apresentando riscos biolgicos. Contudo, isto no elimina a necessidade do pessoal
de laboratrio lavar as mos regularmente e correctamente. As mos devem ser lavadas
depois de trabalhar com materiais apresentando riscos biolgicos, animais e antes de
sair do laboratrio.
Na maioria dos casos, lavar bem as mos com gua e sabo suciente para as
descontaminar, mas em situaes de grande risco recomenda-se a utilizao de sabes
germicidas. As mos devem ser completamente cobertas de espuma de sabo e esfre-
gadas durante pelo menos 10 segundos, passadas por gua limpa e secas utilizando
um papel ou toalha limpos (no caso de existirem, deve utilizar-se secadores de mos
a ar quente).
Recomenda-se torneiras accionadas com o p ou cotovelo. No havendo, deve uti-
lizar-se papel/toalha para fechar a torneira com o m de evitar voltar a contaminar
as mos lavadas.
Tal como j mencionado, podem esfregar-se as mos com produtos base de
lcool se estas esto ligeiramente sujas e no se dispe de meios apropriados para as
lavar.
95
Desinfeco e esterilizao pelo calor
O calor o agente fsico mais vulgarmente utilizado para a descontaminao de
agentes patognicos. O calor seco , que totalmente no corrosivo, utilizado para
tratar muitos objectos de laboratrio que podem suportar temperaturas de 160C
ou superiores durante 24 horas. Combusto ou incinerao (ver mais adiante)
tambm uma forma de calor seco. O calor hmido muito ecaz quando utilizado
em autoclave.
A fervura no mata necessariamente todos os microrganismos e/ou agentes
patognicos, mas pode ser utilizada como tratamento mnimo para desinfeco
quando outros mtodos (desinfeco qumica ou descontaminao, desinfeco em
autoclave) no forem aplicveis ou no estiverem disponveis.
Os artigos esterilizados devem ser manuseados e armazenados de forma a no se
contaminarem at serem utilizados de novo.
Esterilizao em autoclave
A esterilizao por vapor saturado sob presso (autoclave) o meio mais ecaz e
seguro de esterilizar materiais de laboratrio. Na maior parte dos casos, os ciclos a
seguir indicados asseguraro a esterilizao de materiais correctamente carregados em
autoclave:
1. Durante 3 minutos a 134C
4. Durante 25 minutos a 115C.
Exemplos de diversas autoclaves:
Autoclaves de deslocao da gravidade (a vapor directo). A Ilustrao 10 mostra o plano
geral de uma autoclave de deslocao de gravidade. O vapor entra na cmara sob
presso e desloca o ar mais pesado para baixo atravs da vlvula no dreno da cmara
equipado com um ltro HEPA.
Autoclaves de pr-vacuum. Estas mquinas permitem a extraco do ar da cmara antes
da entrada do vapor. O ar extrado evacuado atravs de uma vlvula equipada com
um ltro HEPA. No m do ciclo, o vapor automaticamente extrado. Estas auto-
claves podem funcionar a 134C e por isso o ciclo de esterilizao pode ser reduzido
a 3 minutos. So ideais para artigos porosos, mas no podem ser utilizadas para lqui-
dos devido ao vcuo.
Autoclaves do tipo panela de presso por aquecimento exterior. Estas autoclaves s devem
ser utilizadas se no houver disponibilidade de autoclaves de deslocao de gravidade.
So carregadas por cima e aquecidas a gs, electricidade ou outro tipo de combustvel.
O vapor obtido aquecendo a gua contida na base do aparelho, e o ar deslocado
para cima atravs de um tubo de escape. Uma vez todo o ar removido, a vlvula do
96
tubo de escape fechada e o calor reduzido. A presso e a temperatura aumentam at
que a vlvula de segurana comece a funcionar a um nvel pr-estabelecido. a partir
deste momento que se conta o tempo de espera. No m do ciclo, desliga-se a fonte de
calor e deixa-se a temperatura descer para 80C ou menos, antes de abrir a tampa.
Carregamento de autoclaves
Os materiais a esterilizar no devem car muito juntos uns aos outros para facilitar
a circulao do vapor e a remoo do ar. Os sacos devem estar abertos para que o
vapor possa atingir o seu contedo.
Precaues na utilizao de autoclaves
As regras apresentadas a seguir podem minimizar os perigos inerentes utilizao de
aparelhos sob presso.
1. A responsabilidade pela utilizao e cuidados de rotina deve ser atribuda a pessoal
devidamente formado.
2. Um programa de manuteno preventiva deve incluir inspeco regular, por
pessoal qualicado, da cmara, juntas da porta e todas as vlvulas e instrumentos
de controlo.
97
Ilustrao 10. Autoclave de deslocao da gravidade
3. O vapor deve estar saturado e sem produtos qumicos (por exemplo, inibidores
de corroso) que possam contaminar os materiais a esterilizar.
4. Todos os materiais a esterilizar em autoclave devem estar dispostos em recipientes
que permitam rpida remoo do ar e boa penetrao do calor; a cmara no deve
car demasiado carregada para que o vapor atinja bem toda a carga.
5. Se a autoclave no tiver um dispositivo de segurana que impea a abertura da
porta quando a cmara est sob presso, preciso que a principal vlvula de vapor
esteja fechada e que a temperatura baixe para menos de 80C antes de abrir a
porta.
6. necessrio utilizar um processo de evacuao lenta para esterilizar lquidos
em autoclave pois estes podem transbordar ao ser retirados devido ao super-
aquecimento.
7. Os utilizadores da autoclave devem utilizar luvas e viseiras apropriadas como pro-
teco para abrir a autoclave, mesmo quando a temperatura baixa para menos de
80C.
8. Em qualquer controlo de rotina do funcionamento da autoclave, devem colocar-
se no centro de cada carga indicadores biolgicos ou termopares. fortemente
aconselhado o controlo regular com termopares e dispositivos de registo numa
situao de pior carga possvel para determinar ciclos de funcionamento
correctos.
9. O ltro de esvaziamento da cmara (se existir) deve ser tirado e limpo todos os
dias.
10. Deve ter-se o cuidado de assegurar que as vlvulas de escape de autoclaves tipo
panela de presso no cam obstrudas com papis, etc. contidos na carga.
Incinerao
A incinerao til para eliminar carcassas de animais assim como outros resduos
de laboratrio, com ou sem descontaminao prvia (ver Captulo 3). A incinerao
de materiais infecciosos s uma alternativa a esterilizao em autoclave se o incine-
rador estiver sob controlo laboratorial.
Uma incinerao correcta exige meios ecientes de controlo da temperatura e uma
cmara de combusto secundria. Muitos incineradores, especialmente os que tm
uma nica cmara de combusto, so inadequados para tratar materiais infecciosos,
carcassas de animais e plsticos. A destruio de tais materiais pode no ser completa
e o euente que sai da chamin pode poluir a atmosfera com microrganismos, pro-
dutos qumicos txicos e fumos. Contudo, existem muitas conguraes satisfatrias
para cmaras de combusto. O ideal que a temperatura na cmara primria seja pelo
menos de 800C e na segunda pelo menos de 1000C.
Mesmo se previamente descontaminados, os materiais para incinerao devem ser
transportados para o incinerador em sacos, de preferncia de plstico. O pessoal
encarregado do funcionamento do incinerador deve receber instrues apropriadas
sobre o carregamento e o controlo da temperatura. Tambm preciso notar que o
98
funcionamento eciente de um incinerador depende imenso da mistura correcta de
materiais nos resduos a tratar.
H actualmente uma certa inquietude sobre os possveis efeitos negativos para o
meio ambiente dos incineradores existentes ou em estudo, prosseguindo assim os
esforos para produzir incineradores mais incuos e mais ecientes em relao
energia.
Eliminao
A eliminao de resduos mdicos e de laboratrio regida por vrios regulamentos
regionais, nacionais e internacionais, cujas verses mais recentes devem ser consul-
tadas antes de elaborar e implementar um programa de manuseamento, transporte e
eliminao de resduos apresentando riscos biolgicos. Em geral, cinzas resultantes de
incinerao podem ser tratadas como resduos domsticos normais e removidas pelas
autoridades locais. Os resduos de autoclaves podem ser eliminados num centro de
incinerao exterior ou em aterros sanitrios autorizados (ver Captulo 3).
99
100
15. Introduo ao transporte de
substncias infecciosas
O transporte de materiais infecciosos e potencialmente infecciosos est sujeito a severa
regulamentao nacional e internacional. Tal regulamentao descreve a utilizao
apropriada de materiais de acondicionamento, assim como outros requisitos de
expedio.
O pessoal de laboratrio deve expedir as substncias infecciosas segundo os regu-
lamentos aplicveis a transporte. A observncia destes regulamentos:
1. Reduz a probabilidade das embalagens sofrerem danos e deixarem escapar algum
contedo, o que leva a uma
2. Reduo de exposies que resultem em infeces possveis e
3. Melhor ecincia no transporte de embalagens.
Regulamentos internacionais sobre transportes
Os regulamentos sobre o transporte de materiais infecciosos (qualquer modo de
transporte) baseiam-se nos Regulamentos Modelo das Naes Unidas sobre Transporte
de Mercadorias Perigosas (40). Estas recomendaes so elaboradas pela Comisso
de Especialistas das Naes Unidas sobre o Transporte de Mercadorias Perigosas
(UNCETDG). Para que se tornem legalmente obrigatrios, os Regulamentos Modelo
das Naes Unidas devem ser introduzidos nos regulamentos nacionais e regulamen-
tos modais internacionais pelas autoridades competentes (por exemplo, as Instrues
Tcnicas para o Transporte Seguro de Mercadorias Perigosas por Via Area (41) da Orga-
nizao da Aviao Civil Internacional (OACI) para o transporte areo e o Acordo
Europeu sobre o Transporte Internacional de Mercadorias Perigosas por via Terrestre
(ADR) (42)).
A Associao do Transporte Areo Internacional (IATA) publica todos os anos
Directivas sobre Expedio de Substncias Infecciosas (43). As directivas da IATA devem
conformar-se com as Instrues Tcnicas da OACI, como padro mnimo, mas podem
impor outras restries. As directivas da IATA so aplicveis se a expedio for feita
por um dos seus membros.
Dado que os Regulamentos Modelo das Naes Unidas sobre Transporte de Mer-
cadorias Perigosas so um conjunto dinmico de recomendaes sujeitas a recticaes
bienais, necessrio consultar as ltimas emisses de regulamentos modais nacionais
e internacionais para encontrar os textos reguladores aplicveis.
A OMS tem um papel consultivo junto da UNCETDG. Na 13
a
edio (2003) dos
Regulamentos Modelo das Naes Unidas (40) foram introduzidas alteraes impor-
tantes em relao ao transporte de substncias infecciosas. Orientao sobre o con-
texto das correces adoptadas pode ser obtida junto da OMS (44).
Os regulamentos modais internacionais no so destinados a suplantar requisitos
locais ou nacionais. Contudo, em situaes onde no existam requisitos nacionais,
devem seguir-se os regulamentos modais internacionais.
importante notar que o transporte internacional de substncias infecciosas est
tambm dependente e sujeito aos regulamentos nacionais de importao/exportao.
O sistema bsico de embalagem tripla
Na Ilustrao 13 d-se um exemplo do sistema de embalagem tripla que o mtodo
escolhido para o transporte de substncias infecciosas e potencialmente infecciosas.
Este sistema composto por trs elementos: o primeiro receptculo, a embalagem
secundria e a embalagem exterior.
O primeiro receptculo contendo a amostra deve ser estanque e estar correcta-
mente etiquetado de acordo com o contedo. Este receptculo embalado em mate-
rial absorvente suciente para absorver todo o lquido em caso de quebra ou derrame.
Para embrulhar e proteger o primeiro receptculo ou receptculos utiliza-se
outra embalagem estanque. Nesta embalagem secundria podem colocar-se vrios
primeiros receptculos embrulhados. Certos textos reguladores indicam os limites de
volume e/ou peso para embalagens de substncias infecciosas.
A terceira embalagem protege a segunda contra danos durante o transporte. Dados,
cartas e outros tipos de informaes identicando ou descrevendo a amostra e
que identicam o expedidor e o destinatrio, assim como qualquer outro docu-
mento exigido, tambm devem ser fornecidos de acordo com os regulamentos mais
recentes.
Os Regulamentos Modelo das Naes Unidas determinam o uso de dois sistemas
diferentes de embalagem tripla. O sistema bsico de embalagem tripla aplica-se ao
transporte de vrias substncias infecciosas; contudo, organismos de alto risco devem
ser expedidos de acordo com exigncias mais rigorosas. Para mais detalhes sobre a uti-
lizao de diferentes embalagens segundo os materiais a transportar, aconselhvel
consultar os regulamentos nacionais e/ou internacionais para acesso aos textos
reguladores aplicveis.
Processo de limpeza de derrames
No caso de derrame de material infeccioso ou potencialmente infeccioso, deve
utilizar-se o seguinte processo de limpeza:
1. Utilizar luvas e vesturio protector, incluindo, se necessrio, proteco para a face
e os olhos.
2. Para no deixar espalhar, cobrir o derrame com toalhas de papel ou de pano.
15. INTRODUO AO TRANSPORTE DE SUBSTNCIAS INFECCIOSAS
101
102
Primeiro receptculo
(tubo de ensaio)
Embalagem secundria
(estanque)
Tampa
Material absorvente
Registo da amostra
(incluindo lista do contedo)
Embalagem exterior
Etiqueta indicando
a orientao da
amostra (no
obrigatria se o
primeiro
receptculo no
exceder 50 ml)
Especificao
das NU
Embalagem e etiquetagem de substncias infecciosas de Categoria A
Tampa
impermevel
Material de
embalagem
absorvente
Embalagem
secundria
(estanque)
Etiquetas
destinatrio/expedidor
Marca da
embalagem
Designao da
expedio
Embalagem
exterior rgida
Lista do contedo
(registo da amostra)
Recipiente tipo porta-tubos
(styrofoam ou esponja)
Primeiro receptculo
(estanque)
expedio
Marca da
embalagem embalagem
Embalagem
Lista do contedo
(registo da amostra)
Lista do contedo
Recipiente tipo porta-tubos
(styrofoam ou esponja) (styrofoam ou esponja)
Primeiro receptculo
(estanque) (estanque)
destinatrio/expedidor
Etiquetas
Embalagem
secundria
(estanque) (estanque)
secundria
Tampa
Embalagem e etiquetagem de substncias infecciosas de Categoria B
Ilustrao 11. Exemplos de sistemas bsicos de embalagem tripla
(grcos gentilmente fornecidos por CUH2A, Princeton, NJ, EUA)
p
(tubo de ensaio)
g
(estanque)
Material de
embalagem
absorvente absorvente
Material de
3. Deitar um desinfectante apropriado sobre as toalhas de papel e a rea imediata-
mente circundante (geralmente, esto indicadas solues de lixvia a 5%; mas para
derrames em aeronaves devem utilizar-se desinfectantes de amnio quaternrio).
4. Aplicar o desinfectante de uma forma concntrica, principiando pelo exterior da
rea do derrame e avanando para o centro.
5. Depois do perodo de tempo apropriado (por exemplo, 30 minutos), retirar os
materiais. No caso de haver vidro partido ou outros objectos cortantes, utilizar
um apanhador ou um pedao de carto rgido para recolher o material e coloc-
lo num recipiente resistente para eliminao.
6. Limpar e desinfectar a rea do derrame (se necessrio, repetir os passos 25).
7. Descartar os materiais contaminados para um recipiente estanque e imperfurvel
de eliminao de resduos.
8. Uma vez terminada a desinfeco, informar as autoridades competentes de que o
stio foi descontaminado.
15. INTRODUO AO TRANSPORTE DE SUBSTNCIAS INFECCIOSAS
103
PARTE V
Introduo a
biotecnologias
16. Segurana biolgica e
tecnologia de recombinao
de ADN
107
A tecnologia de recombinao de ADN implica combinar material gentico de dife-
rentes fontes criando assim organismos geneticamente modicados (OGM) que
podem nunca ter existido antes. Inicialmente, os biologistas moleculares preocu-
param-se com a possibilidade de tais organismos terem propriedades imprevisveis e
indesejveis podendo, no caso de escaparem do laboratrio, representar um risco
biolgico. Tal preocupao foi o centro de uma conferncia cientca realizada em
Asilomar, CA, EUA em 1975 (45), durante a qual foram discutidas questes de segu-
rana e propostas as primeiras directivas para a tecnologia de recombinao de ADN.
Os 25 anos seguintes de investigao experimental demonstraram que a engenharia
gentica pode ser realizada de maneira segura quando se faz uma avaliao apropri-
ada do risco e se tomam medidas de segurana adequadas.
A tecnologia de recombinao de ADN ou engenharia gentica foi utilizada pela
primeira vez para clonar segmentos de ADN em hospedeiros bacterianos a m de pr
em relevo produtos de genes especcos para estudos mais aprofundados. Molculas
de tecnologia de recombinao de ADN tambm tm sido utilizadas para criar OGM
tais como animais transgnicos e knock-out (animais em que certos genes so
inactivados ou suprimidos) e plantas transgnicas.
A tecnologia de recombinao de ADN j teve um enorme impacto na biologia e
na medicina, e provavelmente ter uma inuncia ainda maior agora que a sequn-
cia nucletida de todo o genoma humano est disponvel. Dezenas de milhares de
genes de funes ainda no conhecidas sero estudados utilizando tal tecnologia. A
terapia gentica poder tornar-se um tratamento de rotina para certas doenas, e
provvel que utilizando a engenharia gentica se possam inventar novos vectores para
transferncia de genes. Plantas transgnicas produzidas por tecnologia de recombi-
nao de ADN tambm podem desempenhar um papel cada vez mais importante na
agricultura moderna.
Experincias implicando a criao ou utilizao de OGM devem ser realizadas
depois de uma avaliao do risco de segurana biolgica. As propriedades patogni-
cas e quaisquer riscos associados a tais organismos podem ser inusitados e no
estar bem caracterizados. As propriedades do organismo doador, a natureza das
sequncias ADN que sero transferidas, as propriedades do organismo receptor, e as
propriedades do ambiente devem ser avaliadas. Estes factores devem ajudar a deter-
minar o nvel de segurana biolgica exigido para a manipulao segura do OGM
resultante, e a identicar os sistemas de connamento biolgico e fsico que devem
ser utilizados.
Consideraes de segurana biolgica para sistemas de expresso biolgica
Os sistemas de expresso biolgica consistem em vectores e clulas hospedeiras. Para
que a sua utilizao seja ecaz e segura preciso que um certo nmero de critrios
sejam respeitados. Um exemplo de um tal sistema de expresso biolgica o plas-
mdeo pUC18. A sequncia do plasmdeo pUC18, frequentemente utilizado como um
vector de clonagem em combinao com clulas K12 de Escherichia coli, foi inteira-
mente estabelecida. Todos os genes necessrios para expresso em outras bactrias
foram removidos do seu precursor o plasmdeo pBR322. A E. coli K12 uma estirpe
no patognica que no pode colonizar permanentemente os intestinos de seres
humanos ou animais saudveis. Experincias de rotina de engenharia gentica podem
ser realizadas com segurana em E. coli K12/pUC18 ao Nvel 1 de segurana biol-
gica, desde que os produtos de expresso de ADN estranha introduzida no exijam
nveis superiores de segurana biolgica.
Consideraes de segurana biolgica para vectores de expresso
Pode haver necessidade de nveis de seguranca biolgica superiores quando:
1. A expresso de sequncias de ADN derivadas de organismos patognicos pode
aumentar a virulncia do OGM
2. As sequncias de ADN introduzidas no esto bem caracterizadas, por exemplo
durante a preparao de bibliotecas de ADN de genomas de microrganismos
patognicos
3. Produtos de genes podem ter actividade farmacolgica
4. Produtos genticos codicam por toxinas.
Vectores virais para transferncia de genes
Para transferir genes para outras clulas utilizam-se vectores virais, por exemplo, vec-
tores adenovrus. Tais vectores no tm certos genes de replicao de vrus e so propa-
gados em linhas celulares que complementam a falha.
Reservas de tais vectores podem ser contaminadas com vrus capazes de replicao,
gerados por acontecimentos raros de recombinao espontnea nas linhas celulares
de propagao, ou que possam derivar de uma puricao insuciente. Tais vectores
devem ser manipulados ao mesmo nvel de segurana biolgica que os adenovrus dos
quais derivam.
Animais transgnicos e knock-out
Os animais portadores de material gentico estrangeiro (animais transgnicos) devem
ser manipulados a nveis de connamento apropriados s caractersticas dos produ-
tos dos genes estrangeiros. Animais a quem foram suprimidos determinados genes
108
especcos (animais knock-out ) no apresentam geralmente riscos biolgicos
particulares.
Exemplos de animais transgnicos incluem animais que apresentam receptores de
vrus normalmente incapazes de infectar tais espcies. Se tais animais escaparem dum
laboratrio e transmitirem o gene transgnico aos seus congneres selvagens, teori-
camente possvel que se constitua no seio de tal populao animal um reservatrio
para esse dado vrus.
Esta possibilidade tem sido discutida em relao a poliovrus e especialmente per-
tinente no contexto da erradicao da poliomielite. Ratos transgnicos que apresen-
tavam o receptor do poliovrus humano gerados em diferentes laboratrios eram
susceptveis a infeco por poliovrus por vrias vias de inoculao e a doena resul-
tante era do ponto de vista clnico e histopatolgico semelhante poliomielite
humana. Contudo, o rato difere do ser humano na medida em que a replicao no
trato digestivo de poliovrus administrados por via oral ineciente ou no tem lugar.
Assim, muito pouco provvel que a fuga de tais ratos transgnicos para a natureza
possa resultar no estabelecimento de um novo reservatrio animal de poliovrus.
Contudo, este exemplo indica que, para cada nova linha de animais transgnicos,
devem realizar-se estudos detalhados para determinar as vias de infeco dos animais,
a quantidade do material inoculado necessrio para provocar infeco, e a amplitude
da propagao do vrus pelos animais infectados. Alm disso, devem tomar-se todas
as medidas para assegurar o connamento rigoroso de ratos transgnicos receptores.
Plantas transgnicas
Plantas transgnicas exprimindo genes que conferem tolerncia a herbicidas ou
resistncia a insectos geram actualmente uma grande controvrsia em muitas partes
do mundo. As discusses concentram-se sobre a inocuidade alimentar de tais plantas,
e as consequncias ecolgicas a longo prazo do seu cultivo.
Plantas transgnicas exprimindo genes de origem animal ou humana so utilizadas
para desenvolver produtos medicinais e nutricionais. Uma avaliao do risco deve
determinar o nvel adequado de segurana biolgica para a produo de tais plantas.
Avaliaes de risco para organismos geneticamente modicados
As avaliaes de risco para trabalhar com OGM devem entrar em linha de conta com
as caractersticas dos organismos doadores e dos receptores/hospedeiros.
Exemplos de caractersticas a considerar incluem os seguintes.
Riscos directamente resultantes do gene introduzido (organismo doador)
Em situaes em que o produto do gene introduzido tem propriedades biolgicas
ou farmacolgicas activas conhecidas podendo originar perigo necessrio uma
avaliao, por exemplo:
1. Toxinas
2. Citocinas
16. SEGURANA BIOLGICA E TECNOLOGIA DE RECOMBINAO DE ADN
109
3. Hormonas
4. Reguladores de expresso de genes
5. Factores ou reforadores de virulncia
6. Sequncias de genes oncognicos
7. Resistncia a antibiticos
8. Alrgenos.
A considerao de tais casos deve incluir uma estimativa do nvel de expresso
necessrio para atingir actividade biolgica ou farmacolgica.
Riscos associados ao receptor/hospedeiro
1. Susceptibilidade do hospedeiro
2. Patogenicidade da estirpe hospedeira, incluindo virulncia, infectividade e pro-
duo de toxinas
3. Modicao da gama de hospedeiros
4. Estado de imunidade do recipiente
5. Consequncias da exposio.
Riscos resultantes da alterao das caractersticas patognicas existentes
Muitas modicaes no implicam genes cujos produtos so inerentemente perigosos,
mas podem surgir efeitos secundrios devido a alterao de caractersticas patogni-
cas ou no patognicas existentes. A modicao dos genes normais pode alterar a
patogenicidade. Numa tentativa para identicar estes riscos potenciais, podem ser
considerados os seguintes pontos (a lista no exaustiva).
1. H um aumento da infectividade ou patogenicidade?
2. Uma qualquer mutao incapacitante no recipiente pode ser superada como resul-
tado da insero do gene estrangeiro?
3. O gene estrangeiro codica uma determinante de patogenicidade de outro
organismo?
4. Se a ADN estrangeira inclui uma determinante de patogenicidade, de prever que
este gene possa contribuir para a patogenicidade do OGM?
5. H disponibilidade de tratamento?
6. A susceptibilidade dos OGM a antibiticos ou outra forma de terapia ser
afectada como consequncia da modicao gentica?
7. A erradicao dos OGM possvel?
Outras consideraes
A utilizao de animais ou plantas na sua integridade para ns de experimentao
tambm exige uma anlise cuidadosa. Os investigadores devem acatar os regulamen-
tos, restries e exigncias para a realizao de trabalhos com OGM nos pases e
instituies que os acolhem.
110
Os pases podem ter autoridades nacionais que estabelecem directivas para traba-
lhar com OGM, e podem ajudar os cientistas a classicar o seu trabalho ao nvel apro-
priado de segurana biolgica. Em certos casos, a classicao pode divergir entre
pases, ou o pas pode decidir classicar o trabalho a um nvel inferior ou superior
quando surgem novas informaes sobre um sistema determinado de vector/
hospedeiro.
A avaliao de riscos um processo dinmico que toma em considerao novos
desenvolvimentos e o progresso da cincia. A realizao de avaliaes de risco cor-
rectas assegurar que os benefcios da tecnologia de recombinao de ADN conti-
nuaro disposio da humanidade nos anos futuros.
16. SEGURANA BIOLGICA E TECNOLOGIA DE RECOMBINAO DE ADN
111
PARTE VI
Segurana em relao
a produtos qumicos,
incndio e electricidade
17. Produtos qumicos perigosos
115
O pessoal de laboratrios de microbiologia est no s exposto a microrganismos
patognicos como a produtos qumicos perigosos. Assim, importante que conhea
bem os efeitos txicos de tais produtos, as vias de exposio e os riscos que possam
estar associados sua manipulao e armazenagem (ver Anexo 5). Os fabricantes e/ou
fornecedores de produtos qumicos fornecem folhas de dados sobre a segurana do
material ou outras informaes sobre riscos qumicos. Tais folhas devem estar
disponveis em laboratrios onde estes produtos qumicos so utilizados, por
exemplo, como parte de um manual de segurana ou de operaes.
Vias de exposio
A exposio a produtos qumicos pode ocorrer por:
1. Inalao
2. Contacto
3. Ingesto
4. Picadas de agulhas
5. Cortes na pele.
Armazenagem de produtos qumicos
No laboratrio s devem ser armazenadas as quantidades de produtos qumicos
necessrias para uso dirio. Os stocks devem ser armazenados em salas ou edifcios
especialmente destinados para tal m.
Os produtos qumicos no devem ser armazenados em ordem alfabtica.
Regras gerais relativas a incompatibilidades qumicas
Para evitar incndios e/ou exploses, as substncias mencionadas na coluna da
esquerda do Quadro 13 devem ser armazenadas e manipuladas de maneira a no
entrarem em contacto com as substncias da coluna da direita.
Efeitos txicos dos produtos qumicos
Certos produtos qumicos so nocivos para a sade das pessoas que os manipulam ou
que inalam os seus vapores. Alm dos venenos notrios, um certo nmero de produ-
tos qumicos so conhecidos como tendo vrios efeitos txicos. O sistema respiratrio,
o sangue, os pulmes, o fgado, os rins e o sistema gastrintestinal, assim como outros
rgos e tecidos, podem ser afectados ou gravemente danicados. Certos produtos
qumicos tm propriedades cancergenas ou teratognicas conhecidas.
Certos vapores de solventes so txicos quando inalados. Alm dos efeitos mais
graves acima assinalados, a exposio pode provocar danos que no mostram efeitos
imediatos na sade, mas que podem incluir perda da coordenao, sonolncia e
sintomas semelhantes, o que aumenta o risco de acidentes.
A exposio prolongada ou repetida fase lquida de muitos dissolventes orgni-
cos pode resultar em leses cutneas o que pode ser devido a um efeito de dissoluo
das gorduras, mas tambm pode provocar sintomas alrgicos e corrosivos.
Para informaes detalhadas sobre os efeitos txicos dos produtos qumicos ver o Anexo 5.
Produtos qumicos explosivos
A azida, muitas vezes utilizada em solues antibacterianas, no deve entrar em con-
tacto com o cobre ou o chumbo (por exemplo, em canalizaes) pois estas podem
explodir violentamente quando sujeitas mesmo a um impacto ligeiro.
Os teres que envelheceram e secaram em cristais so extremamente instveis e
potencialmente explosivos.
O cido perclrico quando seca sobre madeira, tijolo ou tecido, explode e inama-
se sob o efeito de um impacto.
O cido pcrico e os picratos explodem sob o efeito do calor e de choques.
Derrames de produtos qumicos
A maior parte dos fabricantes de produtos qumicos utilizados em laboratrio fornecem
instrues sobre a maneira de proceder em caso de derrame. Instrues e material a uti-
lizar em tais casos tambm se encontram no comrcio. Nos laboratrios, estas instrues
devem ser colocadas bem vista. Deve igualmente estar disponvel o seguinte material:
1. Conjuntos de material para derrames
2. Roupa de proteco, como por exemplo, luvas de borracha espessa, proteces de
sapatos ou botas de borracha, respiradores
3. Ps e apanhadores
4. Pinas para apanhar estilhaos de vidro
116
Quadro 13. Regras gerais sobre incompatibilidades qumicas
CATEGORIA DA SUBSTNCIA SUBSTNCIAS INCOMPATVEIS
Metais alcalinos como sdio, potssio, csio Dixido de carbono, hidrocarbonetos
e ltio clorados, gua
Halogneos Amonaco, acetileno, hidrocarbonetos
cido actico, sulto de hidrognio, anilina, Agentes oxidantes como cido crmico, cido
hidrocarbonetos, cido sulfrico ntrico, peroxidos, permanganatos
5. Esfreges, panos e papel absorvente
6. Baldes
7. Soda calcinada (carbonato de sdio, Na
2
CO
3
) ou bicarbonato de sdio (NaHCO
3
)
para neutralizar cidos e produtos qumicos corrosivos
8. Areia (para cobrir derrames alcalinos)
9. Detergente no inamvel.
No caso de derrame importante de produtos qumicos, proceder da seguinte maneira:
1. Noticar o responsvel da segurana.
2. Evacuar da zona o pessoal no essencial.
3. Prestar cuidados s pessoas que possam ter sido contaminadas.
4. Se o material derramado inamvel, apagar todas as chamas vivas, desligar o gs
na sala e nas zonas vizinhas, abrir as janelas (se possvel), e desligar da corrente o
equipamento elctrico que possa produzir fascas.
5. Evitar de respirar os vapores produzidos pelo material derramado.
6. Ligar o exaustor se tal operao no representar perigo.
7. Arranjar o material necessrio para limpar o derrame (ver mais acima).
Gases comprimidos e liquefeitos
O Quadro 14 fornece informaes sobre a armazenagem de gases comprimidos e liquefeitos.
17. PRODUTOS QUMICOS PERIGOSOS
117
Quadro 14. Armazenagem de gases comprimidos e liquefeitos
RECIPIENTES INFORMAES SOBRE ARMAZENAGEM E MANUSEAMENTO
Cilindros de gs comprimido e Devem ser solidamente presos (por exemplo, com uma
recipientes de gs liquefeito
a,b
corrente) parede ou a uma estrutura slida para que
no possam ser deslocados inadvertidamente
Devem ser transportados numa carreta com rodas, bem
tapados com as tampas protectoras.
Devem ser armazenados em conjunto num outro edifcio
a certa distncia do laboratrio. Essa zona deve ser
fechada chave e devidamente identicada.
No devem ser colocados perto de radiadores, chamas
vivas ou outras fontes de calor, equipamento elctrico
que produza fascas ou directamente expostos ao sol.
Pequenas botijas de gs de uso No devem ser incineradas.
nico
a,b
a
A principal vlvula de alta presso deve ser fechada quando o equipamento no est a ser utilizado e
quando a sala no est ocupada.
b
As salas onde se utilizam e/ou se armazenam cilindros de gs inamvel devem estar devidamente assi-
naladas com avisos nas portas.
Para mais informaes ver referncias (1) e (4951), e Anexo 5.
118
18. Outros tipos de risco
em laboratrio
O pessoal de laboratrio pode ser exposto a riscos ligados a certas formas de energia
e nomeadamente a fogo, electricidade, radiaes e barulho. Neste captulo apresentam-
se informaes bsicas sobre cada um deles.
Risco de incndio
Uma colaborao estreita entre os responsveis da segurana e os responsveis
locais da preveno de incndios essencial. Alm dos riscos de natureza qumica,
deve levar-se em conta os efeitos de um incndio numa disseminao eventual de
material infeccioso. Isto pode determinar se prefervel extinguir o incndio ou
circunscrev-lo.
desejvel pedir a colaborao de responsveis locais da preveno de incndios
para formar o pessoal de laboratrio em preveno e aco imediata em caso de incn-
dio, e utilizao de material de luta contra incndios.
Cartazes com instrues sobre a maneira de proceder em caso de incndio e que
indiquem as sadas de socorro devem estar bem visveis nas salas, corredores e vestbulos.
As causas mais correntes de incndio em laboratrio so:
1. Circuito elctrico sobrecarregado
2. M manuteno do sistema elctrico, por exemplo, isolao dos cabos defeituosa
ou em mau estado
3. Tubos de gs ou os elctricos demasiado longos
4. Equipamento deixado ligado desnecessariamente
5. Equipamento que no foi concebido para trabalho em laboratrio
6. Chamas vivas
7. Tubos de gs deteriorados
8. Erros na manipulao e armazenagem de materiais inamveis ou explosivos
9. Erros na separao de produtos qumicos incompatveis
10. Aparelhos que produzem fascas na proximidade de substncias ou vapores
inamveis
11. Ventilao mal adaptada ou insuciente.
O material de combate a incndios deve ser colocado perto das portas das salas e em
pontos estratgicos de corredores e vestbulos. Tal material deve incluir mangueiras,
baldes (de gua ou areia) e extintores. Os extintores devem ser objecto de inspeco
e manuteno peridicas e devem estar dentro do prazo de validade. O Quadro 15
apresenta diversos tipos de extintores e sua utilizao.
Para mais informaes, ver a referncia (49).
Riscos elctricos
essencial que todas as instalaes e equipamentos elctricos sejam vericados e con-
trolados regularmente, incluindo os sistemas de ligao terra.
Disjuntores e interruptores diferenciais devem ser instalados nos circuitos elctri-
cos de laboratrio. Os disjuntores no protegem as pessoas; destinam-se a proteger os
circuitos de uma sobrecarga elctrica e assim evitar incndios. Os interruptores
diferenciais protegem as pessoas de choques elctricos.
Todos os aparelhos elctricos de laboratrio devem estar ligados terra, de prefe-
rncia com tomadas tripolares.
Todos os aparelhos e circuitos elctricos de laboratrio devem ser conformes aos
padres e normas nacionais de segurana elctrica.
Rudo
Os efeitos de uma exposio a rudo excessivo so, com o decorrer do tempo,
insidiosos. Alguns aparelhos de laboratrio, como por exemplo, certos sistemas de
laser, assim como instalaes para animais, podem expor os trabalhadores a um rudo
considervel. Para determinar o risco de exposio a rudo podem fazer-se medies
acsticas. Quando justicado pelos dados obtidos, podem tomar-se certas medidas,
como a colocao de vedaes ou barreiras anti-rudo volta do equipamento ruidoso
ou entre as zonas ruidosas e outras zonas de trabalho. Quando no possvel baixar
o nvel de rudo e o pessoal de laboratrio est permanentemente exposto a um rudo
excessivo, deve ser institudo um programa de proteco auditiva incluindo a utiliza-
o de protectores auriculares para os trabalhos em ambiente ruidoso e um controlo
mdico para determinar o efeito do rudo sobre o pessoal.
18. OUTROS TIPOS DE RISCO EM LABORATRIO
119
Quadro 15. Tipos de extintores e sua utilizao
TIPO UTILIZADO PARA NO UTILIZADO PARA
gua Papel, madeira, tecido Fogos de origem elctrica, lquidos
inamveis, metais incandescentes
Gases extintores de Lquidos e gases inamveis, Metais alcalinos, papel
dixido de carbono fogos de origem elctrica
(CO
2
)
P Lquidos e gases inamveis, Material e instrumentos
metais alcalinos, fogos de origem reutilizveis pois os resduos so
elctrica muito difceis de eliminar
Espuma Lquidos inamveis Fogos de origem elctrica
Radiaes ionizantes
A radioproteco tem por objectivo proteger os seres humanos contra os efeitos
nocivos das radiaes ionizantes, nomeadamente:
1. Efeitos somticos, por exemplo, sintomas clnicos observveis em indivduos
expostos. Tais efeitos incluem cancros induzidos por radiaes como leucemias ou
cancro dos ossos, dos pulmes e da pele, que podem s aparecer muitos anos
depois da irradiao. Outros efeitos menos graves incluem leses cutneas, perda
de cabelo, decincias sanguneas, leses gastrintestinais e cataratas.
2. Efeitos hereditrios, por exemplo, sintomas observados em descendentes de indi-
vduos expostos. Os efeitos hereditrios da exposio das gnadas a radiaes
incluem dano nos cromossomas ou mutao gentica. A irradiao em fortes
doses das clulas germinativas nas gnadas tambm pode causar a morte celular,
provocando problemas de fertilidade nos dois sexos ou alteraes menstruais na
mulher. A exposio do feto durante o seu desenvolvimento, em especial entre a
8
a
e a 15
a
semana de gravidez, pode aumentar o risco de malformaes congni-
tas, atraso mental ou cancros induzidos por irradiao, anos mais tarde.
Princpios de radioproteco contra a irradiao ionizante
Para limitar os efeitos nocivos da irradiao ionizante, preciso que a utilizao de
radioistopos seja controlada e respeite as normas nacionais pertinentes. A radiopro-
teco apoia-se em quatro princpios:
1. Reduzir ao mnimo o tempo de exposio a radiaes
2. Manter-se o mais longe possvel da fonte de irradiao
3. Blindar a fonte de irradiao
4. Substituir a utilizao de radionclidos por tcnicas no radiomtricas.
As actividades de proteco incluem:
1. Tempo. O tempo de exposio durante as manipulaes de material radioactivo
pode ser reduzido:
Exercitando-se em tcnicas novas e no familiares sem utilizar radionclidos
at estar perfeitamente apto
Trabalhando com radionclidos no momento oportuno, de maneira segura e
sem precipitaes
Assegurando-se que todas as fontes radioactivas voltam imediatamente para o
seu local de armazenagem depois de utilizadas
Eliminando frequentemente do laboratrio os resduos radioactivos
Passando o menos tempo possvel na zona de irradiao do laboratrio
Procurando gerir e planear ecazmente as manipulaes em laboratrio de
substncias radioactivas e a sua durao.
Quanto menos tempo se passar no campo de irradiao, mais fraca a dose rece-
bida individualmente, como demonstra a seguinte equao:
120
2. Distncia. A taxa de dosagem para a maior parte das radiaes g ou X varia como
o inverso do quadrado da distncia a uma fonte de ponta:
Multiplicando por 2 a distncia a uma fonte de radiao resultar numa exposio
reduzida a um quarto durante o mesmo perodo de tempo. Para aumentar tal dis-
tncia utilizam-se vrios dispositivos e mecanismos, por exemplo, pinas com
cabos compridos, tenazes, ganchos e auxiliares de pipetar distncia. No esque-
cer que um pequeno aumento da distncia pode resultar numa reduo impor-
tante da taxa de dosagem.
3. Blindagem. Colocar entre a fonte e o operador ou outros ocupantes do laboratrio
proteces capazes de absorver ou de atenuar a energia irradiada ajudar a limitar
a exposio. A escolha de qualquer proteco e da sua espessura depende da
capacidade de penetrao da radiao (tipo e energia). Barreiras em resina acrlica,
madeira ou metal ligeiro, de uma espessura de 1,3 a 1,5cm, protegem contra
partculas de grande energia, mas para proteger contra a irradiao g e X de alta
energia preciso utilizar barreiras de chumbo de densidade elevada.
4. Substituio. No se devem utilizar radionclidos quando existem outras tcnicas.
Se a substituio no possvel, deve utilizar-se o radionclido cuja radiao seja
a menos penetrante ou a menos energtica possvel.
Regras de segurana para trabalhar com radionclidos
As regras para trabalhar com substncias radioactivas devem incluir consideraes em
quatro reas:
1. rea de irradiao
2. rea de trabalho
3. rea de resduos radioactivos
4. Registos e resposta em casos de emergncia.
Algumas das regras mais importantes incluem:
1. rea de irradiao
Utilizar substncias radioactivas unicamente em reas especialmente desti-
nadas a tal efeito.
S permitir a presena do pessoal indispensvel.
Utilizar equipamento de proteco individual, incluindo batas, culos de pro-
teco e luvas descartveis.
Utilizar um dosmetro pessoal para controlo da exposio a irradiaes.
Os laboratrios onde se manipulam radionclidos devem ser concebidos de
maneira a simplicar a conteno, a limpeza e a descontaminao. A rea de tra-
18. OUTROS TIPOS DE RISCO EM LABORATRIO
121
122
Ilustrao 12. Smbolo internacional
de risco de irradiao
PERIGO
MATERIAL
RADIOACTIVO
balho com radionclidos deve ser localizada numa sala pequena contgua ao
laboratrio principal ou numa zona exclusiva dentro do laboratrio afastada das
outras zonas de actividade. Na entrada da rea de irradiao devem ser colocados
painis com o smbolo internacional de risco de irradiao (Ilustrao 12).
2. rea de trabalho
Utilizar tabuleiros com materiais absorventes descartveis para recolha de
derrames.
Limitar as quantidades de radionclidos utilizados.
Colocar proteces volta das fontes de irradiao, das reas de trabalho e de
resduos radioactivos.
Marcar nos recipientes de produtos radioactivos o smbolo de radioactividade,
e indicar igualmente a identidade do radionclido, a sua actividade e a data da
experincia.
Utilizar radimetros para controlar zonas de trabalho, roupa de proteco e
mos, uma vez o trabalho terminado.
Utilizar contentores de transporte correctamente blindados.
3. rea de resduos radioactivos
Eliminar frequentemente da rea de trabalho os resduos radioactivos.
4. Registos e resposta em casos de emergncia
Manter registos precisos sobre a utilizao e eliminao de materiais
radioactivos.
Vericar os registos de dosmetros para detectar qualquer produto que tenha
eventualmente excedido a dose limite.
Estabelecer e experimentar regularmente planos de aco para situaes de
emergncia.
Em caso de emergncia, ocupar-se em primeiro lugar dos feridos.
Limpar muito bem as zonas contaminadas.
Se disponvel, pedir auxlio ao servio de segurana.
Fazer relatrios dos casos de incidente e conserv-los nos arquivos.
PARTE VII
Segurana: organizao
e formao
19. Responsvel da segurana
biolgica e comisso de
segurana biolgica
125
indispensvel que todos os laboratrios tenham uma poltica de segurana global,
um manual de segurana e programas para a sua implementao. A responsabilidade
pertence normalmente ao director ou ao chefe do instituto ou laboratrio, o qual
poder delegar certas tarefas no responsvel da segurana ou noutros membros
competentes do pessoal.
A segurana em laboratrio igualmente da responsabilidade de todos os super-
visores e empregados, e cada trabalhador responsvel pela sua prpria segurana e
pela segurana dos seus colegas. Espera-se que os empregados desempenhem o seu
trabalho segundo as regras de segurana e que comuniquem ao seu supervisor
qualquer acto, condio ou incidente que comportem riscos.
Seria desejvel mandar executar por agentes externos ou internos inspeces
peridicas das condies de segurana.
Responsvel da segurana biolgica
Sempre que possvel, deve nomear-se um responsvel de segurana biolgica encar-
regado de assegurar que as polticas e programas de segurana biolgica so respeita-
dos sistematicamente em todo o laboratrio. Este responsvel executa estas tarefas em
nome do director do instituto ou laboratrio. Em unidades pequenas, o responsvel
da segurana biolgica pode ser um microbiologista ou um membro do pessoal
tcnico que poder desempenhar tais tarefas numa base determinada a tempo parcial.
Seja qual for o grau de participao na segurana biolgica, a pessoa designada deve
possuir a competncia prossional necessria para sugerir, examinar e aprovar activi-
dades especcas que respeitem procedimentos apropriados de conteno e segurana
biolgicas. O responsvel da segurana biolgica deve aplicar as regras, regulamentos
e directivas nacionais e internacionais pertinentes, assim como ajudar o laboratrio a
elaborar normas de trabalho padro. Esta pessoa deve ter uma formao tcnica em
microbiologia e bioqumica com conhecimentos bsicos em cincias fsicas e biolo-
gia. O conhecimento de prticas laboratoriais, clnicas e de segurana, incluindo
material de conteno e princpios tcnicos relacionados com a concepo, o fun-
cionamento e a manuteno dos servios, muito desejvel. O responsvel da segu-
rana biolgica tambm deve ser capaz de comunicar ecazmente com o pessoal
administrativo, tcnico e auxiliar.
O responsvel da segurana biolgica deve:
1. Participar em reunies tcnicas sobre segurana biolgica, proteco biolgica e
observncia de tcnicas.
2. Organizar auditorias peridicas internas de segurana biolgica sobre mtodos
tcnicos, prticas e protocolos, agentes biolgicos, materiais e equipamento.
3. Examinar com as pessoas implicadas as violaes de protocolos ou procedimen-
tos de segurana biolgica.
4. Vericar se todo o pessoal recebeu formao apropriada em questes de segurana
biolgica.
5. Assegurar formao contnua em segurana biolgica.
6. Investigar incidentes que impliquem a fuga eventual de material potencialmente
infeccioso ou txico, e noticar as concluses e recomendaes ao director do
laboratrio e comisso de segurana biolgica.
7. Cooperar com o pessoal mdico em relao a eventuais infeces adquiridas em
laboratrio.
8. Assegurar a descontaminao apropriada aps derrames ou outros incidentes que
impliquem material infeccioso.
9. Assegurar o processamento apropriado dos resduos.
10. Assegurar a descontaminao apropriada de qualquer aparelho antes de uma
reparao ou um controlo.
11. Informar-se sobre as atitudes da comunidade em relao a questes de sade e
meio ambiente.
12. Estabelecer medidas apropriadas para a entrada/sada de material patognico, de
acordo com os regulamentos nacionais.
13. Analisar os aspectos de segurana biolgica de todos os planos, protocolos e pro-
cedimentos operacionais do trabalho de investigao que envolvem agentes infec-
ciosos, antes da implementao de tais actividades.
14. Estabelecer um sistema para enfrentar emergncias.
Comisso de segurana biolgica
conveniente constituir uma comisso de segurana biolgica para elaborar polticas de
segurana biolgica e cdigos de procedimento. Esta comisso tambm deve examinar
os protocolos de investigao para trabalhos que envolvam agentes infecciosos, utiliza-
o de animais, tcnicas de recombinao da ADN e organismos geneticamente modi-
cados. Outras funes da comisso podem incluir avaliaes de risco, elaborao de
novas polticas de segurana e arbitragem em conitos sobre questes de segurana.
A composio da comisso de segurana biolgica deve ser representativa dos
diversos ramos prossionais da organizao assim como das suas especialidades cien-
tcas. A composio de uma comisso bsica de segurana biolgica pode incluir:
1. Um ou mais responsveis de segurana
2. Cientistas
126
3. Pessoal mdico
4. Um ou mais veterinrios (no caso de experimentaes com animais)
5. Representantes do pessoal tcnico
6. Representantes da direco do laboratrio.
A comisso de segurana biolgica deve consultar os responsveis de segurana dos
diversos servios e especialidades (por exemplo, especialistas em radioproteco,
segurana industrial, preveno contra incndios, etc.) e pode eventualmente pedir
assistncia a especialistas independentes em vrios domnios ans, bem como a
autoridades locais e organismos nacionais reguladores. No caso de um protocolo
particularmente litigioso ou sensvel, pode ser igualmente til procurar o conselho de
membros da comunidade.
19. RESPONSVEL DA SEGURANA BIOLGICA E COMISSO DE SEGURANA BIOLGICA
127
128
20. Segurana do pessoal auxiliar
O bom funcionamento e a segurana de um laboratrio dependem muito do pessoal
de manuteno e de limpeza, e essencial que tal pessoal receba formao adequada
sobre segurana.
Servios de manuteno de aparelhos e instalaes
Os engenheiros e os operrios qualicados responsveis pela manuteno e reparao
das instalaes e equipamento, devem ter certos conhecimentos sobre a natureza do
trabalho realizado no laboratrio e os regulamentos e procedimentos de segurana.
A experimentao de aparelhos aps a sua reviso, por exemplo, vericao da
eccia das cmaras de segurana biolgica depois da instalao de novos ltros, deve
ser realizada pelo responsvel da segurana ou sob o seu controlo.
Os laboratrios ou instituies que no tenham os seus prprios servios tcnicos
devem ter boas relaes com os fornecedores locais desses servios e familiariz-los
com o equipamento e o trabalho do laboratrio.
Os engenheiros e o pessoal de manuteno s devem entrar nos laboratrios de
nvel 3 ou 4 de segurana biolgica com autorizao do responsvel da segurana e/ou
do chefe do laboratrio e sob a sua superviso.
Servios de limpeza
A limpeza dos laboratrios de Nvel 3 e 4 de segurana biolgica deve ser feita pelo
pessoal do laboratrio. O pessoal de limpeza s deve entrar em tais laboratrios com
autorizao do responsvel da segurana e/ou do chefe do laboratrio e sob a sua
superviso.
129
21. Programas de formao
Uma formao contnua no local de trabalho essencial para manter o pessoal do
laboratrio e o pessoal auxiliar sensibilizados para o problema da segurana. Os chefes
de laboratrio, com a ajuda do responsvel da segurana biolgica e outras pessoas
competentes, desempenham o principal papel na formao do pessoal. A eccia
desta formao, assim como qualquer formao em sade e segurana, depende do
empenho da direco, de factores de motivao, boa formao prossional inicial, boa
comunicao e por m as metas e objectivos da organizao. Os elementos a seguir
apresentados so vitais para um programa ecaz de formao em segurana
biolgica.
1. Avaliar as necessidades. Este processo inclui a denio das tarefas a desempe-
nhar, a ordem de importncia (em termos de frequncia, necessidade e complexi-
dade) e detalhes das medidas necessrias para as realizar.
2. Estabelecer objectivos de formao. Estes so comportamentos observveis que se
espera o pessoal adoptar no trabalho, depois da formao. Estes objectivos podem
levar em linha de conta as condies em que decorrem certas actividades ou com-
portamentos e o nvel de competncia exigido.
3. Especicar o contedo da formao e os meios utilizados. O contedo representa
os conhecimentos ou competncias que a pessoa deve conhecer a fundo para
poder atingir os objectivos de comportamento. O contedo do programa de for-
mao em segurana biolgica normalmente denido pelas pessoas que co-
nhecem melhor o trabalho e as suas exigncias. Outras abordagens utilizadas
podem concentrar-se nos resultados de exerccios de resoluo de problemas ou
na concepo de medidas de aprendizagem para corrigir erros cometidos ao
utilizar uma dada tcnica. No est provado que um determinado mtodo
pedaggico (conferncias, ensino atravs da televiso, ensino por computador,
vdeo interactivo, etc.) seja superior a um outro. Tudo depende das necessidades
especcas de formao, da composio do grupo em formao, etc.
4. Levar em linha de conta as capacidades individuais para aprender. Uma for-
mao ecaz deve levar em linha de conta as caractersticas ou atributos das
pessoas em formao. Indivduos e grupos podem diferir em aptides, grau de
instruo, cultura, maneira de se exprimir e nveis de competncia antes da for-
mao. A abordagem adoptada poder ser ditada pela maneira como as pessoas
em formao vem o programa em termos de melhoria da sua competncia pros-
sional ou da sua segurana pessoal. Certas pessoas aprendem de uma maneira mais
visual ou prtica, enquanto outras preferem documentos escritos. Tambm se
deve levar em considerao qualquer necessidade especial do pessoal, como por
exemplo adaptar os cursos para as pessoas com problemas de audio. Alm de
levar em conta todos estes elementos, recomenda-se a todas as pessoas que
preparem programas de formao em segurana que se familiarizem com os
princpios de formao de adultos.
5. Especicar as condies de aprendizagem. O meio de instruo (por exemplo,
curso, videocassete, documentos escritos, etc.) no deve inibir nem estar em con-
tradio ou sem relao com a aprendizagem da tcnica ou tpico ensinado. Por
exemplo, se a instruo tem por objectivo desenvolver aptides em tcnicas de
resoluo de problemas, a abordagem pedaggica deve privilegiar a reexo e a
dialctica mais do que a simples memorizao. A formao prestada deve exigir
comportamentos produtivos e/ou resultados apropriados (positivos, exactos,
crveis). Por outro lado, todos os elementos da formao que forneam oportu-
nidades para aplicao prtica em condies anlogas s do trabalho reforaro a
transferncia da competncia para o trabalho efectivo.
6. Avaliao da formao. Esta componente fornece informaes que ajudam a
determinar se a formao atingiu o objectivo esperado. Esta avaliao faz-se
geralmente de quatro formas:
medindo a reaco dos participantes formao prestada
medindo a memorizao e/ou os resultados dos participantes
avaliando as alteraes de comportamento no posto de trabalho
medindo os resultados tangveis em termos dos objectivos ou metas da
organizao.
A avaliao mais completa de uma aco de formao inclui avaliaes de cada
uma das quatro reas. O meio de avaliao menos ecaz o de s levar em conta
as reaces do participante formao, dado que isso pode ter pouca relao com
o mbito da formao em si; este meio no dever ser utilizado como a nica
forma de medir a eccia da formao.
7. Reviso da formao. As avaliaes de uma formao raramente indicam se um
programa de formao um xito ou um fracasso total dado que para medir
os resultados se utilizam mltiplos critrios. Geralmente, os dados indicam que
certas partes do curso foram melhor compreendidas, memorizadas ou aplicadas
do que outras. Depois da formao, variaes ou lacunas nos conhecimentos ou
competncias desejadas podem reectir a necessidade de prolongar a formao,
de mudar as tcnicas pedaggicas ou de recrutar instrutores mais competentes.
A OMS fornece vrios meios para formao em segurana microbiolgica.
130
PARTE VIII
Lista de controlo
de segurana
22. Lista de controlo de segurana
133
Esta lista de controlo destina-se a facilitar a avaliao do grau de segurana e de pro-
teco microbiolgicas de laboratrios biomdicos.
Locais
1. Na construo das instalaes ou em avaliaes ulteriores levou-se em linha de
conta as directivas da scalizao e certicao?
2. Os locais esto em conformidade com as exigncias nacionais e locais para obras
pblicas, incluindo as relacionadas com precaues para o caso de desastres
naturais?
3. Os locais esto geralmente em ordem e sem obstrues?
4. Os locais esto limpos?
5. Os solos tm defeitos de estrutura?
6. Os solos e os degraus das escadas so uniformes e antiderrapantes?
7. O espao de trabalho adequado para trabalhar sem perigo?
8. Os espaos de circulao e os corredores so adequados para o movimento de
pessoas e de grandes aparelhos?
9. As bancadas de trabalho, o mobilirio e as instalaes esto em boas condies?
10. As superfcies de trabalho so resistentes a dissolventes e produtos qumicos
corrosivos?
11. H um lavatrio em cada sala do laboratrio?
12. A construo e a manuteno das instalaes impedem a entrada e refgio de
animais roedores e artrpodes?
13. Todas as canalizaes de vapor e de gua quente vista esto isoladas ou res-
guardadas para proteger o pessoal?
14. O laboratrio dispe de um grupo electrogneo para o caso de uma falta de corrente?
15. O acesso aos locais do laboratrio pode ser limitado ao pessoal autorizado?
16. Foi feita uma avaliao dos riscos para assegurar que o laboratrio dispe de
equipamento e instalaes apropriadas para a execuo do trabalho a que est
destinado?
Armazenagem
1. As instalaes de armazenagem, prateleiras, etc. esto arranjadas de maneira que
o material armazenado no possa escorregar, desabar nem cair?
2. As instalaes de armazenagem no tm acumulao de lixo, materiais inteis e
objectos nos quais se pode tropear e que representem perigo de incndio, de
exploso ou de abrigo de animais nocivos?
3. Os congeladores e os locais de armazenagem podem ser fechados chave?
Saneamento e instalaes para o pessoal
1. Os locais so mantidos em boas condies de limpeza, ordem e higiene?
2. Dispem de gua potvel?
3. Tm instalaes sanitrias limpas e correctas para homens e mulheres separadamente?
4. Dispem de gua quente e fria, sabo e toalhas das mos?
5. Tm vestirios separados para homens e mulheres?
6. Os membros do pessoal dispem de armrios (por exemplo, cacifos) onde podem
deixar a sua prpria roupa?
7. O pessoal dispe de uma sala para almoar, etc.?
8. O nvel sonoro aceitvel?
9. O sistema de recolha e eliminao do lixo corrente satisfatrio?
Aquecimento e ventilao
1. A temperatura do local de trabalho agradvel?
2. As janelas viradas ao sol tm persianas?
3. A ventilao adequada, por exemplo, ar renovado pelo menos seis vezes por hora,
especialmente nas salas com ventilao mecnica?
4. O sistema de ventilao est munido de ltros HEPA?
5. A ventilao mecnica compromete os uxos de ar no interior e volta das CSB
e cmaras de ventilao?
Iluminao
1. A iluminao geral adequada (por exemplo, 300400 lux)?
2. As bancadas de trabalho tm iluminao prpria?
3. Todas as reas esto bem iluminadas sem cantos sombrios nas salas e corredores?
4. Os tubos uorescentes esto paralelos s superfcies de trabalho?
5. Os tubos uorescentes tm um espectro de cores equilibrado?
Servios
1. Cada sala de laboratrio est equipada com um nmero suciente de bancas,
torneiras de gua e de gs e tomadas elctricas para trabalhar sem perigo?
2. Existe um programa adequado de inspeco e manuteno de fusveis, lmpadas,
cabos, canalizaes, etc.?
3. As avarias so reparadas num espao de tempo razovel?
4. Existem servios tcnicos e de manuteno internos, com engenheiros e operrios
competentes com alguns conhecimentos da natureza dos trabalhos efectuados no
laboratrio?
134
5. O acesso do pessoal tcnico e de manuteno a vrias reas do laboratrio con-
trolado e registado?
6. No existindo servios tcnicos e de manuteno internos, engenheiros e cons-
trutores locais foram contactados e familiarizados com o equipamento e o
trabalho do laboratrio?
7. O laboratrio dispe de servios de limpeza?
8. O acesso do pessoal de limpeza a vrias reas do laboratrio controlado e
registado?
9. Existem servios informticos e esto protegidos?
Segurana
1. Foi feita uma avaliao qualitativa de riscos e ameaas possveis para denir os
riscos que o sistema de segurana deve controlar?
2. Foram denidos os riscos aceitveis e os parmetros de planicao da resposta a
incidentes?
3. Quando no est ningum no edifcio, ca este fechado com segurana?
4. As portas e as janelas podem resistir a actos de vandalismo?
5. As salas onde se encontram materiais perigosos e equipamento caro cam
fechadas chave quando no h ningum dentro?
6. O acesso a tais salas, ao equipamento e aos materiais devidamente controlado e
registado?
Preveno e proteco contra incndios
1. Existe um sistema de alarme de incndio?
2. As portas anti-fogo esto em boas condies?
3. O sistema de deteco de incndios est em boas condies de funcionamento e
regularmente vericado?
4. Os postos de alarme de incndio so acessveis?
5. Todas as sadas esto marcadas com sinais luminosos adequados?
6. O acesso s sadas est indicado quando no imediatamente visvel?
7. As sadas no esto obstrudas com decoraes, mveis ou equipamento, nem
fechadas quando o edifcio est ocupado?
8. O acesso s sadas est organizado de maneira a que, para fugir, no seja necessrio
passar atravs de uma rea de alto risco?
9. Todas as sadas do para o exterior?
10. Os corredores, passagens e reas de circulao esto livres e no obstrudos
de maneira a permitir movimentos de pessoal e de material de combate a
incndios?
11. O material e o equipamento de combate a incndios facilmente identicvel
graas a um cdigo de cores apropriado?
12. Os extintores portveis esto sempre cheios, em bom estado e colocados nos
lugares previstos?
22. LISTA DE CONTROLO DE SEGURANA
135
13. As salas de laboratrio onde existem riscos potenciais de incndio esto equipadas
com extintores e/ou cobertores anti-fogo para casos de emergncia?
14. Se numa sala se utilizam lquidos e gases inamveis, a ventilao mecnica
suciente para remover os vapores antes que estes atinjam uma concentrao
perigosa?
15. O pessoal est formado para responder a casos de incndio?
Armazenagem de lquidos inamveis
1. As reservas de lquidos inamveis so armazenadas num local separado do
edifcio principal?
2. O local est claramente identicado como rea de risco de incndio?
3. Tal local est equipado de um sistema de ventilao natural ou mecnica distinto
do sistema do edifcio principal?
4. Os interruptores da luz so estanques ou esto colocados no exterior do edifcio?
5. O sistema de iluminao interior est protegido para impedir a inamao dos
vapores ao contacto de fascas?
6. Os lquidos inamveis esto armazenados em recipientes apropriados e ventila-
dos, feitos de materiais no combustveis?
7. O contedo dos recipientes est correctamente indicado nas etiquetas?
8. H extintores e/ou cobertores anti-fogo apropriados colocados no exterior mas
perto do armazm de lquidos inamveis?
9. H cartazes Proibido fumar bem visveis no interior e no exterior do armazm
de lquidos inamveis?
10. A quantidade de substncias inamveis conservadas nas salas de laboratrio a
mais pequena possvel?
11. Tais substncias esto armazenadas em armrios devidamente fabricados para
conter produtos inamveis?
12. Tais armrios esto devidamente etiquetados com avisos Lquido inamvel
Perigo de incndio ?
13. O pessoal foi preparado para utilizar e transportar correctamente lquidos
inamveis?
Gases comprimidos e liquefeitos
1. Cada botija de gs porttil claramente etiquetada indicando o seu contedo e o
respectivo cdigo de cor?
2. Os cilindros de gs comprimido e as suas vlvulas reguladoras de presso so
regularmente vericadas?
3. A manuteno de tais vlvulas feita regularmente?
4. Quando se utiliza um cilindro, liga-se ao mesmo um dispositivo de reduo da
presso?
5. Quando os cilindros no esto a ser utilizados ou so transportados, esto fecha-
dos com as tampas de proteco?
136
6. Todos os cilindros de gs comprimido esto arrumados de maneira a no cair,
especialmente no caso de catstrofe natural?
7. Os cilindros e reservatrios de gs de petrleo lquido esto colocados longe de
fontes de calor?
8. O pessoal foi formado para utilizar e transportar correctamente gases com-
primidos e liquefeitos?
Riscos elctricos
1. Todas as instalaes novas e todas as substituies, modicaes ou reparaes so
feitas e mantidas segundo as normas nacionais de segurana elctrica?
2. A instalao elctrica interior est ligada terra (por exemplo, um sistema de trs os)?
3. Todos os circuitos do laboratrio tm disjuntores e os de terra?
4. Todos os aparelhos elctricos foram aprovados por um laboratrio de testes?
5. Os cabos de ligao exveis de todos os aparelhos so to curtos quanto possvel,
esto em boas condies, e no esto gastos, estragados ou emendados?
6. Cada tomada s utilizada para um aparelho (sem qualquer adaptador)?
Proteco individual
1. Para o seu trabalho normal, todos os membros do pessoal dispem de roupa de
proteco com modelos e tecidos aprovados tais como batas, fatos, aventais, luvas?
2. Para trabalhar com produtos qumicos perigosos e substncias radioactivas e can-
cergenas o pessoal dispe de roupa de proteco suplementar tal como aventais
e luvas de borracha para limpar derrames, e luvas resistentes ao calor para esvaziar
autoclaves e fornos?
3. O pessoal dispe de culos de proteco e viseiras?
4. Existem locais para lavagem dos olhos?
5. Existem chuveiros de emergncia?
6. A proteco contra radiaes conforme s normas nacionais e internacionais,
incluindo o fornecimento de dosmetros?
7. O laboratrio dispe de mscaras respiratrias que so regularmente limpas,
desinfectadas, vericadas e guardadas em condies de limpeza e higiene?
8. Tais mscaras so providas de ltros apropriados, por exemplo, ltros HEPA para
reteno de microrganismos e ltros especiais para gases e partculas?
9. As mscaras so bem adaptadas aos utilizadores?
Sade e segurana do pessoal
1. Existe um servio de sade ocupacional?
2. H caixas de primeiros socorros em locais estratgicos?
3. O laboratrio dispe de socorristas qualicados?
4. Tais socorristas esto formados para enfrentar emergncias prprias ao labo-
ratrio, como por exemplo, contacto com produtos qumicos corrosivos, ingesto
acidental de venenos e material infeccioso?
137
5. O pessoal que no trabalha no laboratrio (de limpeza e administrativo) est
informado dos riscos potenciais que podem provir do laboratrio e dos
materiais nele manipulados?
6. H avisos axados de maneira visvel com informaes claras sobre a localizao
dos postos de primeiros socorros, os nmeros de telefone de servios de emergn-
cia, etc.?
7. As mulheres em idade de reproduo so informadas das consequncias possveis
do trabalho com certos microrganismos, agentes cancergenos, mutagnicos e
teratognicos?
8. Diz-se s mulheres em idade de reproduo que se esto ou suspeitam estar grvi-
das, devem informar o membro indicado do pessoal mdico/cientco para que,
se necessrio, se tomem medidas alternativas para o seu trabalho?
9. Existe um programa de vacinao pertinente com o trabalho do laboratrio?
10. H disponibilidade de testes cutneos e/ou exames radiolgicos para o pessoal que
trabalha com material eventualmente infectado com bacilos tuberculosos ou
outros materiais que exijam tais medidas?
11. Existem registos seguros de doenas e acidentes?
12. Utilizam-se sinais de alerta e de preveno de acidentes para reduzir os acidentes
de trabalho?
13. O pessoal est formado para adoptar prticas apropriadas de segurana biolgica?
14. O pessoal de laboratrio encorajado a assinalar riscos de exposio?
Equipamento de laboratrio
1. Todos os aparelhos esto certicados como seguros?
2. Existem protocolos para descontaminao do material antes da manuteno?
3. As CSB e as cmaras de ventilao de fumo so regularmente vericadas?
4. As autoclaves e outros aparelhos que funcionam sob presso so regularmente
inspeccionados?
5. Os cestos de centrifugao e os rotores so regularmente inspeccionados?
6. Os ltros HEPA so mudados regularmente?
7. Utilizam-se pipetas em vez de agulhas hipodrmicas?
8. Os objectos de vidro que estejam rachados e lascados so sempre deitados fora e
nunca reutilizados?
9. Existem recipientes seguros para vidros partidos?
10. Quando possvel, utiliza-se plstico em vez de vidro?
11. Existem recipientes especiais para objectos cortantes e so realmente utilizados?
Materiais infecciosos
1. As amostras so recebidas em boas condies de segurana?
2. Conservam-se registos dos materiais que chegam?
3. As amostras so desembaladas em CSB com cuidado e ateno para o caso de
eventuais quebras ou derrames?
138
4. Utilizam-se luvas e outra roupa de proteco para desembalar amostras?
5. O pessoal foi formado para expedir substncias infecciosas segundo os regula-
mentos nacionais e/ou internacionais em vigor?
6. As bancadas de trabalho so mantidas limpas e arrumadas?
7. Os resduos de material infeccioso so removidos diariamente ou com mais fre-
quncia e eliminados segundo as normas de segurana?
8. Todos os membros do pessoal sabem como proceder em caso de quebra e derrame
de culturas e materiais infecciosos?
9. O funcionamento dos esterilizadores controlado por meio de indicadores qumi-
cos, fsicos e biolgicos apropriados?
10. Existem procedimentos para descontaminar as centrifugadoras regularmente?
11. Dispe-se de cestos estanques para centrifugadoras?
12. Utilizam-se desinfectantes apropriados? So utilizados correctamente?
13. Existe uma formao especial para o pessoal que trabalha em laboratrios de con-
namento Nvel 3 de segurana biolgica e laboratrios de connamento
mximo Nvel 4 de segurana biolgica?
Produtos qumicos e substncias radioactivas
1. Os produtos qumicos incompatveis so efectivamente armazenados ou manipu-
lados separadamente?
2. Todos os produtos qumicos so correctamente etiquetados com nomes e
advertncias?
3. Os avisos de risco qumico esto bem vsiveis?
4. So fornecidos conjuntos para limpeza de derrames?
5. O pessoal est preparado para se ocupar de derrames?
6. Os produtos inamveis esto armazenados correctamente, em segurana e em
pequenas quantidades em armrios aprovados?
7. Existem carrinhos para transportar botijas?
8. H um responsvel de proteco contra radiaes ou um manual de referncia
que se possa consultar?
9. O pessoal est devidamente formado para trabalhar com materiais radioactivos
em condies de segurana?
10. Mantm-se registo dos stocks e da utilizao de substncias radioactivas?
11. O laboratrio dispe de blindagens de proteco contra a radioactividade?
12. A exposio do pessoal a radiaes controlada?
139
PARTE IX
Referncias,
anexos e ndex
Referncias
143
1. Safety in health-care laboratories. Geneva, World Health Organization, 1997, (http://whqlib-
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13. Health Canada. Laboratory biosafety manual, 2nd ed. Ottawa, Minister of Supply and
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15. Biological safety cabinets laminar ow biological safety cabinets (Class II) for personnel, envi-
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Sydney, Standards Australia International, 2000 (Standard AS/NZS 2647:2000).
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(http://www.unece.org/trans/danger/publi/adr/adr2003/ContentsE.html).
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(http://www.who.int/csr/resources/publications/WHO_CDS_CSR_LYO_2004_9/en/).
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1998, L330:1331.
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Organization, 1993, 71:497502.
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50. Lenga RE. The Sigma-Aldrich Library of Chemical Safety Data, 2nd ed. Milwaukee, WI,
Aldrich Chemical Company, 1988.
51. Lewis RJ. Saxs dangerous properties of industrial materials, 10th ed. Toronto, John Wiley and
Sons, 1999.
REFERNCIAS
145
ANEXO 1
Primeiros socorros
146
Os primeiros socorros consistem na aplicao correcta e imediata de princpios aceites
de tratamento mdico no local de um acidente. o mtodo aprovado de tratamento
de uma pessoa acidentada at esta poder ser tratada por um mdico para receber o
tratamento denitivo das suas leses.
O material de primeiros socorros compe-se no mnimo de uma caixa de primeiros
socorros, vesturio de proteco e equipamento de segurana para o socorrista, e dis-
positivo de irrigao ocular.
Caixa de primeiros socorros
A caixa de primeiros socorros deve ser feita de materiais que protejam o seu contedo da
poeira e da humidade. Deve estar bem vista e ser facilmente reconhecida. Segundo uma
conveno internacional, deve estar marcada com uma cruz branca em fundo verde.
A caixa de primeiros socorros deve conter:
1. Uma cha de informao com conselhos gerais
2. Pensos adesivos esterilizados em embalagens individuais e de vrios tamanhos
3. Pensos oculares esterilizados com meios de xao
4. Ligaduras triangulares
5. Compressas esterilizadas para cobrir feridas
6. Alnetes de segurana
7. Diversas ligaduras esterilizadas mas no impregnadas de substncias medicinais
8. Um manual de primeiros socorros reconhecido, por exemplo, publicado pela Cruz
Vermelha Internacional.
O equipamento de proteco para o socorrista inclui:
1. Proteco bocal para o boca-a-boca
2. Luvas e outras proteces mecnicas contra exposio a sangue
1
3. Conjunto para limpeza de derrames sanguneos (ver Captulo 14 do Manual).
Tambm preciso haver disposio equipamento de irrigao ocular e o pessoal
deve estar preparado para o utilizar correctamente.
1
Garner JS, Hospital Infection Control Practices Advisory Committee. Guideline for isolation precautions in
hospitals.American Journal of Infection Control,1996,24:2452 (http://www.cdc.gov/ncidod/hip/isolat/isolat.htm).
ANEXO 2
Vacinao do pessoal
147
Os riscos inerentes ao trabalho com certos agentes infecciosos devem ser discutidos
em detalhe com cada investigador. Antes do incio do trabalho sobre tais agentes,
preciso considerar a disponibilidade local, a autorizao de venda e a utilidade de pos-
sveis vacinas e/ou medicamentos (por exemplo, antibiticos) em caso de exposio.
Certos membros do pessoal podem j estar imunizados devido a uma vacinao ou
infeco anteriores.
Se uma dada vacina ou toxide est localmente disponvel e autorizado venda, a
sua administrao deve ser proposta uma vez realizada uma avaliao do risco de
exposio possvel e um exame clnico da pessoa.
preciso igualmente poder dispor de servios para tratamento clnico especco
aps infeces acidentais.
ANEXO 3
Centros Colaboradores da OMS
para a Segurana Biolgica
148
Informaes sobre a disponibilidade de cursos, meios e materiais pedaggicos podem
ser obtidas escrevendo a qualquer dos seguintes organismos:
Biosafety programme, Department of Communicable Disease Surveillance and
Response, World Health Organization, 20 Avenue Appia, 1211 Geneva 27, Sua
(http://www.who.iny/csr.).
WHO Collaborating Centre for Biological Safety, Swedish Institute for Infectious
Disease Control, Nobels Vg 18, S-171 82 Solna, Sucia (http://www.smittsky-
ddsinstitutet.se/English/english.htm).
WHO Collaborating Centre on Biosafety Technology and Consultative Services,
Ofce of Laboratory Security, Health Canada, 100 Colonnade Road, Loc.: 6201A,
Ottawa, Ontario, Canad K1A 0K9 (http://www.hc-sc.gc.ca/pphb-dgspsp/ols-bsl).
WHO Collaborating Centre for Applied Biosafety Programmes and Training,
Ofce of Health and Safety, Center for Disease Control and Prevention, 1600
Clifton Road, Mailstop F05, Atlanta, GA 30333, EUA (http://www.cdc.gov/).
WHO Collaborating Centre for Applied Biosafety Programmes and Research, Divi-
sion of Occupational Health and Safety, Ofce of Research Services, National Insti-
tutes of Health, Department of Health and Human Services, 13/3K04 13 South
Drive MSC 5760, Bethesda, MD 20892-5760, EUA (http://www.nih.gov/).
WHO Collaborating Centre for Biosafety, Victoria Infectious Diseases Reference
Laboratory, 10 Wreckyn St, Nth Melbourne, Victoria 3051, Australia. Postal address:
Locked Bag 815, PO Carlton Sth, Victoria 3053, Australia (http://www.vidrl.
org.au/).
ANEXO 4
Segurana na utilizao
do equipamento
149
A utilizao de certos aparelhos e instrumentos pode implicar riscos microbiolgicos.
Outros so especialmente concebidos para evitar ou reduzir riscos biolgicos (ver
Captulo 11).
Equipamento capaz de criar riscos
No Quadro A4-1 encontra-se uma lista dos equipamentos e manipulaes que podem
criar riscos e sugestes sobre a maneira como tais riscos podem ser eliminados ou
reduzidos.
Quadro A4-1. Equipamento e manipulaes que podem criar riscos
EQUIPAMENTO RISCO COMO ELIMINAR OU REDUZIR O RISCO
Agulhas Inoculao No voltar a inserir no invlucro nem partir as
hipodrmicas acidental, agulhas.
aerossol ou Utilizar um tipo de seringa que evita a separao
derrame da agulha e seringa, ou um tipo descartvel em
que a agulha parte integral do conjunto.
Utilizar boas tcnicas de laboratrio, isto :
encher a seringa com cuidado para evitar ao
mximo a formao de bolhas e de espuma
evitar a utilizao de seringas para misturar
lquidos infecciosos; no caso de no poder,
assegurar-se que o bico da agulha est sob a
superfcie do lquido do recipiente e evitar de
exercer fora excessiva
antes de retirar uma agulha introduzida num
frasco atravs duma rolha de borracha,
embrulhar a agulha e a rolha numa compressa
de algodo impregnada de um desinfectante
apropriado
mantendo a seringa na vertical, rejeitar o
excesso de lquido e as bolhas de ar para uma
compressa de algodo impregnada de um
desinfectante apropriado ou para um pequeno
frasco que contenha algodo.
150
Utilizar uma CSB para todas as manipulaes com
matria infecciosa.
Colocar os animais num dispositivo de conteno
para os inocular. Utilizar agulhas grossas e curtas
ou cnulas para inoculao intranasal ou oral.
Utilizar uma CSB.
Depois da utilizao, descontaminar a autoclave e
assegurar eliminao correcta. Se utilizar um
conjunto agulha-seringa descartvel, no o
desmonte antes de o descontaminar na autoclave.
Centrifugadoras Aerossis, Utilizar copos de centrifugao (copos de
projeces e segurana) ou rotores fechados. Abrir os copos
quebra de tubos ou os rotores depois de estes repousarem cerca
de 30 minutos ou numa CSB.
Ultracentrifugadoras Aerossis, Instalar um ltro HEPA entre a centrifugadora e a
projeces e bomba de vcuo.
quebra de tubos Manter um registo das horas de utilizao de cada
rotor e estabelecer um programa de manuteno
preventiva para reduzir o risco de avaria mecnica.
Encher e esvaziar os copos ou rotores dentro de
uma CSB.
Garrafas Exploso, Vericar se o cesto metlico volta do catalisador
anaerbias disperso de est em bom estado.
matria
infecciosa
Dissecadores Imploso, Colocar numa caixa metlica slida.
disperso de
fragmentos
de vidro e
matria
infecciosa.
Homogeneizadores, Aerossis, Fazer funcionar e abrir o equipamento numa CSB.
separadores de escoamentos e Utilizar modelos especialmente concebidos para
tecidos quebras evitar escoamentos a nvel dos rolamentos do
rotor e juntas circulares, ou utilizar um separador
de tecidos tipo stomacher.
Antes de abrir a cuba do misturador, esperar 30
minutos para que o aerossol tenha tempo de
assentar. Refrigerar para condensar os aerossis.
Se utilizar um separador manual, segurar o tubo
com um tampo de matria absorvente.
ANEXO 4. SEGURANA NA UTILIZAO DO EQUIPAMENTO
151
Geradores de Aerossis, Fazer funcionar e abrir o equipamento numa CSB
ultra-sons, leses do ou num local connado.
limpadores a aparelho auditivo, Assegurar o isolamento para proteger contra os
ultra-sons dermites ultra-sons.
Usar luvas para proteger a pele contra os efeitos
qumicos de detergentes.
Misturadores Aerossis, Trabalhar numa CSB ou num local de
de culturas, projeces e connamento primrio especialmente concebido.
agitadores derrames Utilizar frascos de cultura slidos munidos de
rolhas de rosca, com uma sada protegida com
ltro, se necessrio, e bem seguros.
Congeladores Aerossis e Utilizar ligaes circulares para manter o aparelho
(liolizadores) contaminao hermeticamente fechado.
por contacto Utilizar ltros de ar para proteger o circuito de
directo vcuo.
Utilizar um mtodo satisfatrio de
descontaminao, por exemplo, por via qumica.
Fornecer um captador de humidade inteiramente
metlico e um condensador de vapor.
Vericar com cuidado todos os frascos de vidro
para ver se no esto estragados. Utilizar
unicamente frascos de vidro concebidos para
utilizao no vcuo.
Aparelhos para Proliferao de Limpar e desinfectar regularmente.
banho-maria microrganismos. No utilizar azida de sdio para evitar a
A azida de sdio proliferao de microrganismos.
forma
compostos
explosivos
com certos
metais.
Alm dos riscos microbiolgicos, tambm preciso prever e evitar os riscos associa-
dos a equipamento. O Quadro A4-2 d uma lista de exemplos de algumas causas de
acidentes.
152
Quadro A4-2. Causas correntes de acidentes relacionados com o equipamento
ACIDENTE CAUSA DO ACIDENTE ELIMINAR OU REDUZIR O RISCO
Defeito de concepo ou construo
Incndio de origem Falta de interruptor de excesso Respeitar as normas
elctrica em de temperatura nacionais
incubadoras
Electrocusso Falta de ligao terra
apropriada
Utilizao incorrecta
Acidente com Falta de equilbrio dos copos de Formar e dirigir o pessoal
centrifugadora centrifugao sobre os rotores
de oscilao livre
Exploso de uma Utilizao de gs no indicado Formar e dirigir o pessoal
incubadora
anaerbia
Adaptao incorrecta
Exploso numa Ms condies de transporte do Utilizar equipamento
garrafa vazia de azoto lquido especialmente concebido.
utilizao domstica
Exploso num Produto qumico perigoso no Guardar os dissolventes e
frigorco de tipo guardado em recipiente prova extractos a ponto de centelha
domstico de fascas/exploso, por baixo unicamente em
exemplo, ter dietlico num frigorcos ou cmaras
recipiente que verte pela rolha prova de fascas/exploses.
Falta da manuteno devida
Incndio num Montagem incorrecta dos Formar e dirigir o pessoal
fotmetro de chama componentes durante a
manuteno
ANEXO 5
Produtos qumicos:
perigos e precaues
153
Este anexo apresenta as informaes bsicas de sade e segurana assim como dados
e precaues apropriadas para um certo nmero de produtos qumicos correntemente
utilizados em laboratrios de anlises biolgicas e de investigao. A lista no exaus-
tiva e a ausncia de qualquer produto qumico especial no signica que tal produto
no seja perigoso. Todos os produtos qumicos utilizados em laboratrio devem ser
manipulados com cuidado e de maneira a reduzir ao mnimo a exposio.
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ANEXO 5. PRODUTOS QUMICOS: PERIGOS E PRECAUES
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lcool/produtos base de lcool 93, 95
alergia, ltex 69
2-aminoetanol 173
amostras 73
recolha 79
recipientes 73, 79, 102
etiquetagem 79
com informaes limitadas 8
abertura de embalagens 73
abertura de tubos e contedos de 79
recepo 73
precaues padro 79
transporte 73, 79
sistema de embalagem tripla 101,
102
amonaco ver solues de
ampolas de materiais infecciosos
abertura 78
armazenagem 79
anidrido actico 162
anilina 162
animais
eliminao de carcaas 32
no destinados a experincias 10,
32
transgnicos e knock-out 108109
ansas de transferncia
descartveis 16, 65, 67
microincineradores 65, 67
utilizao segura 74
antecmaras 22, 32, 33
antimicrobial 87
anti-spticos 87, 92, 93
aparelhos de banho-maria 151
ar, exaustor ver exaustor de ar
rea de irradiao 121
reas de trabalho, laboratrio 11
abraso 84
caros 35
acesso
instalaes para animais 31, 32, 33
laboratrio 10, 22, 27
acetaldedo 154
acetato de tlio 154
acetileno 155
acetona 155
acetonitrilo 156
acidentes 11
relacionados com equipamento 152
ver tambm primeiros socorros;
ferimentos; derrames
cido actico 156
cido clordrico 157
cido crmico 157
acido fosfrico 158
cido ntrico 158
cido oxlico 159
cido perclrico 116, 159
cido pcrico/pricatos 116, 160
cido sulfrico 160
cido tricloroactico 161
acrolena 161
aerossis
actividades geradoras de 53
cmaras de segurana biolgica 1516,
53
equipamento de segurana e 64
potencialmente infecciosos, libertao de
84
riscos de pipetagem 66
agulhas, hipodrmicas 11, 80, 149150
eliminao 18
alarmes 22, 62
lcool 93
195
ndice remissivo
196
armagenagem
ampolas de materiais infecciosos 78
espao, laboratrio 12
gases comprimidos e liquefeitos 117,
136
instalaes, lista de controlo 133134
lquidos inamveis 136
produtos qumicos 115
artrpodes
controlo de 12, 32
instalaes anti- 35
Associao de Transporte Areo
Internacional (IATA) 100
auramina 163
autoclaves 66, 9698
carregamento 97
de deslocao da gravidade 96, 97
de pr-vacuum 96
disponibilidade 14, 16, 22, 29
instalaes para animais 33, 34
passagem com duas portas 27, 29
precaues na utilizao 97
tipo panela de presso por aquecimento
exterior 96
validao 16
avaliao de risco, microbiolgico 2, 78
instalaes para animais 3031
organismos geneticamente modicados
109110
aventais 68, 69
azida de sdio 163
azidas 116, 163
bancadas 12
batas 68, 69
batedores 67, 77
beber 11, 13, 32
benzeno 164
benzidina 164
bicarbonato de amnio 95
bicarbonato de sdio 117
bicos de Bunsen 74, 75
1,1bifenil-4,4-diamina 164
biocida 87
bisselenito de sdio 165
blusas 68, 69
boas tcnicas microbiolgicas (GMT) 912,
7382
brometo de cianognio 165
bromo 166
caixa de primeiros socorros 146
caixas isolantes 32, 34
caixas/gaiolas
animais 32, 33
insectos voadores 3435
calado 11, 21, 26, 68
calor
desinfeco e esterilizao 96, 98
hmido 96
seco 96
cmara de exaustor mximo 59
cmaras de segurana biolgica (CSB)
5363, 64
certicao 61
classe I 5355, 58
classe II 5455, 58
classe III 57, 58
contaminao por pries 8182
descontaminao 62, 95
escolha 54, 59
funcionamento e manuteno 60
laboratrio 2628
ligaes de ar 59
localizao 22, 59
tipo A1 5556
tipos A2, B1 e B2 56, 57
utilizao exigida 16, 22, 23
utilizao segura 5962, 75
cmaras de vcuo 27, 28, 33
cmaras horizontais e verticais de
escoamento 53
capas ver equipamento/vesturio de
proteco pessoal
carbonato de sdio 117
4,4-carbonimidoilbis (N,N-
dimetilbenzenamina) 163
carraas 35
carto de contacto mdico 2324, 25
centrifugadoras 7677, 150
acessrios de connamento 23
quebra de tubos 8485
utilizao incorrecta 152
Centros Colaboradores da OMS para a
Segurana Biolgica 148
NDICE REMISSIVO
197
certicao
cmaras de segurana biolgica 61
laboratrio/instalao 3940
chamas, abertas 61, 74
chuveiros 27, 33
cianeto de sdio 167
citochalasina 167
cloraminas 89, 90
cloreto de hidrognio 157
cloro 8991, 168
clorofrmio 169
cobre 169
cdigos de prticas
Nvel 1 e 2 de Segurana Biolgica
912
Nvel 3 de Segurana Biolgica 2122
comer 11, 13, 32,
comida 11
Comisso de Especialistas das Naes
Unidas sobre o Transporte de
Mercadorias Perigosas
(UNCETDG) 100
comisso de segurana biolgica 126
compostos de amnio quaternrio 92
compostos fenlicos 92
compostos que libertam cloro 8991
concepo, laboratrios
Nvel 1 e 2 de Segurana Biolgica
1214, 16
Nvel 3 de Segurana Biolgica 2223,
24
requisitos de scalizao e 36
connamento primrio 2627
connamento, primrio a Nvel 4 de
Segurana Biolgica 2526
congeladores 7879
congeladores (liolizadores) 151
controlo de roedores 12, 31
cortes 84
cosmticos/maquilhagem 11
crianas 10
CSB ver cmaras de segurana biolgica
derrames
em cmaras de segurana biolgica 61
materiais infecciosos 11, 84, 101103
sangue 80
desastres naturais 83, 85
descontaminao
cmaras de segurana biolgica 62, 94
denio 87
euentes 11, 28
mos 95
materiais contaminados por pries 80
meio ambiente local 94
resduos 18, 23
sangue/udos corporais 80
ver igualmente limpeza; desinfeco
descontaminao das mos 95
desinfeco 8797
calor 9698
denio 87
derramamentos 101103
limpeza prvia 87, 88
resduos 19
ver igualmente descontaminao;
esterilizao
desinfectantes 87, 8894
dicloroisocianurato de sdio 89, 90
3,3-dimetil-(1,1-bifenil)-4,4-diamina
191
dimetilamina 170
dimetilbenzeno 194
2,4-dinitrofenil-hidrazina 170
dioxana 171
dixido de carbono, slido (gelo seco) 171
dixido de cloro 91, 172
dixido de dietileno 171
director de laboratrio 12, 125
disjuntores 119
disperso de materiais infecciosos, evitar 74
dissecadores 150
doena Creutzfeldt-Jakob (CJD) 80
drenos de conteno 29
euentes, contaminados 11, 28
emergncias 8386
laboratrio 84, 86
nvel 4 de segurana biolgica 26, 29
planos de 83
engenharia gentica 107
198
encefalopatia espongiforme transmissveis
(TSE) 80
equipamento
de proteco pessoal ver equipamento/
vesturio de proteco pessoal
emergncia 86
laboratrio bsico 1416
laboratrio de connamento 23
riscos 149152
segurana 6470
lista de controlo 138
equipamento de ar limpo 53
equipamento/vesturio de proteco pessoal
6769
laboratrio de base 1011
laboratrio de conteno mxima 26,
27
laboratrio de conteno 2122
pries 8082
escafandro/fato pressurizado 27
Escherichia coli K12 102
escudo contra salpicos 62
esfregaos para microscopia 80
esporocida 88
esterilizao 29, 8799
calor 9698
denio 87
materiais contaminados por pries 80
ver igualmente descontaminao;
desinfeco
esterilizao em autoclave 18, 9698
etanol (lcool etlico) 93, 172
etanolamina 173
teres 116
ter dietlico 173
etiquetagem, amostras 79
exaustor de ar
cmaras de segurana biolgica 23, 28,
53, 5457, 59
laboratrio de conteno mxima 26,
27
laboratrio de conteno 21, 22
excrees, precaues de base 7980
extintores de incndio 118119
fatos, de laboratrio 68, 69
N-fenil--naftilamina 180
N-fenil--naftilamina 180
fenol 174
ferimentos
medidas de emergncia 84
pessoal em instalaes para animais 32
preveno 7576
ferimentos com agulhas, evitar 76
fervura 96
ltros de ar particulado de alta ecincia
(HEPA)
cmaras de segurana biolgica 53, 55,
59
contaminao por pries 82
ltros de ar ver ltros HEPA Ar
Particulado de Alta Ecincia
ltros HEPA ver ltros de ar particulado de
alta ecincia
scal 3637
scalizao, laboratrio/instalao 3638
udos corporais, precaues de base
7980
uxo de ar, direccional
alarmes 22, 62
cmaras de segurana biolgica 55, 57
nvel 3 de segurana biolgica 22
formao 129130
proteco biolgica 49
trabalhadores de laboratrio 17
trabalhadores em instalaes para
animais 32, 33
utilizao de cmaras de segurana
biolgica 63
formaldedo 91, 94, 175
formalina 91, 94
fornecimento de gua 14, 23
fornecimento de electricidade 14, 29
forro, animais 32, 34
NDICE REMISSIVO
199
fotmetro de chama 152
frigorcos 78, 152
fumar 11, 32
fumigao 94
garrafas anaerbicas/incubadoras 150, 152
garrafas com tampa de rosca 16, 66
garrafas vazias 152
gases
comprimidos e liquefeitos 117, 136
fornecimento a laboratrio 14
geradores de ultra-sons 67, 77, 80, 151
germicidas qumicos 87, 8894
glutaraldedo 175
grupos de risco, microbiolgico
classicao 12
laboratrios de base 9
nveis de segurana biolgica e 22
1-hidrazino-2,4-dinitrobenzeno 170
hidrxido de potssio 176
hidrxido de sdio 176
hipocloreto de clcio 89
hipocloreto de sdio (lixvia) 8990, 94,
177
homogeneizadores 67, 77, 150
iluminao 13, 14, 134
imunizao, do pessoal 147
incndios 19, 118119
causas 118, 152
lista de controlo de preveno e
proteco 135136
medidas de emergncia 84
incinerao 19, 9899
incineradores 33, 98
ingesto de material infeccioso 75, 84
inoculao, acidental 7576
insectos, voadores 34
inspeco, laboratrio 3940
Nvel 1 de Segurana Biolgica: 31
nveis de connamento 30
invertebrados 34
instalaes para descanso 13
instalaes, laboratrio
classicao dos nveis de segurana
biolgica 1
nvel 1 e 2 de segurana biolgica
1214
nvel 3 de segurana biolgica 2223,
24
interruptores diferenciais 119
invertebrados 34
iodo 93, 178
iodoforos 93
irradiao, ionizante 19, 120122
bancada de trabalho 122
efeitos nocivos 120
lista de controlo de segurana 139
princpios de proteco 120122
isoladores de presso negativa em plstico
exvel 64, 66
isopropanol (lcool isoproplico) 93, 186
janelas
instalaes para invertebrados 34
laboratrio
reas de trabalho 11
certicao 3940
scalizao 3638
formulrios de vistoria da segurana
4146
instalaes ver instalaes,
laboratrio
locais, lista de controlo de segurana
133
nveis de segurana biolgica ver nveis
de segurana biolgica
proteco biolgica 4950
servios, lista de controlo de segurana
134135
tcnicas 7382
ver igualmente laboratrio de base;
laboratrio de connamento;
laboratrio de connamento
mximo
200
laboratrio bsico (Nveis 1 e 2 de
Segurana Biolgica) 1, 920
cdigo de prticas 912
concepo e instalaes 1214, 16
equipamento 1416
formao 17
formulrios de vistoria 4145
manuseamento de resduos 1819
segurana qumica, elctrica, do
equipamento e contra incndios e
radiaes 20
vigilncia sanitria e mdica 4145
laboratrio com cmaras de Classe III
2628
sistema de ar controlado 2728
laboratrio com escafandro 27
sistema de ar controlado 2728
laboratrio de connamento (Nvel 3 de
Segurana Biolgica) 1, 3, 2124
cdigo de prticas 2122
concepo e instalaes 2123, 24
equipamento 23
formulrios de vistoria 46
vigilncia sanitria e mdica 2324, 25
laboratrio de connamento mximo (nvel
4 de segurana biolgica) 1, 3,
2628
cdigo de prticas 26
concepo e instalaes 2628
lmpadas ultravioleta 61
ltex, alergia 69
lavagem das mos 10, 70, 95
instalaes 14, 22, 32
pessoal de instalaes para animais 32
lentes de contacto 11
limpadores a ultra-sons 151
limpeza
frigorcos e congeladores 78
materiais de laboratrio 88
pessoal de 128
limpeza, derramamentos 101103
linhas de vcuo 23, 66
liolizadores 151
lquidos/euentes contaminados 11, 28
lquidos inamveis, armazenagem de 136
lixvia (hipocloreto de sdio) 8990, 94,
177
luvas 10, 62, 68, 69
materiais infecciosos
contacto com a pele e os olhos 75
derramamentos 11, 84, 101103
descontaminao em autoclave e
utilizao ulterior 19
descontaminao de, ver
descontaminao
eliminao 18, 19, 23
evitar a disperso 74
ingesto 75, 84
lista de controlo de segurana
138139
material contaminado ver material
infeccioso
material cortante 19
evitar ferimentos 69, 7576, 79
recipientes para eliminao de 19, 66
material de emergncia 86
material de segurana ver equipamento,
segurana
material infeccioso liolizado, abertura de
ampolas 78
meios de arrefecimento, artrpodes 34
meios de comunicao 26
mercrio 179
metanol 180
metilbenzeno 192
microbicida 88
microincineradores 65, 67
microrganismos infecciosos, grupos de
risco ver grupos de risco,
microbiolgico
microscopia, esfregaos para 80
misturadores 67, 77
mobilirio, laboratrio 13
mulheres em idade de reproduo 17, 138
Naftilamina 180
Nidrina 181
nitrato de prata 181
nitrobenzeno 182
NDICE REMISSIVO
201
Nvel 1 de segurana biolgica: 1, 3, 920
concepo do laboratrio 1214
formulrio de vistoria de segurana
biolgica 4143
ver igualmente laboratrio bsico
concepo do laboratrio 1214, 16
biolgica 4445
ver igualmente laboratrio bsico
biolgica 46
ver igualmente laboratrio de
connamento
Nvel 4 de segurana biolgica: 1, 3,
2629
ver igualmente laboratrio de
connamento mximo
nveis de connamento, instalaes para
animais 30
ver igualmente nveis de segurana
biolgica
nveis 1 de segurana biolgica
grupos de risco microbiolgico e 13
instalaes para animais (NSBIA) 30
requisitos de instalaes 3
culos de proteco 6869
culos de segurana 6869
OGM ver organismos geneticamente
modicados
organismos geneticamente modicados
(OGM) 101104
avaliaes de risco 109110
outras consideraes 110
tipos 108109
Organizao da Aviao Civil Internacional
(ICAO) 100
Organizao Mundial da Sade (OMS)
Centros Colaboradores em Segurana
Biolgica 148
programa de segurana biolgica 26
xido de crmio VI 157
xido de dietileno 190
oxido de tetrametileno 190
oxignio 182
paraformaldedo 91, 94
paredes 12, 22
pavimentos (solos) 12, 22
pele
contacto com 75
ferimentos por picadelas, cortes e abraso 84
ver igualmente ferimentos
pentxido de fsforo 183
pracidos 94
perodos de garantia, laboratrio/instalao
36
permanganato de potssio 184
perxido de hidrognio 94, 95, 184
pessoal
apoio 128
controlo da segurana biolgica 12
instalaes, lista de controlo 134
objectos pessoais/vesturio 13
questes de proteco biolgica 49
responsabilidade pela sua prpria
segurana 125
vacinao 147
ver igualmente formao
ver igualmente vigilncia mdica e
sanitria
pessoal auxiliar 128
pessoal de manuteno 128
pipetagem 74
auxiliares de 15, 65, 66, 74
com a boca 11, 63
pipetas 16, 74
piridina 185
planos de emergncia 83
plantas transgnicas 107, 109
plasmdio pUC18 108
portas
202
prata 186
precaues de base 7980
precaues de proteco 15, 135
precaues universais 7982
primatas, no humanos 29
primeiros socorros 14, 146
pries 8082
produtos para lavar as mos, base de
lcool 93, 95
produtos qumicos (perigosos) 20, 115117
armazenagem 115
derrames 116117
efeitos txicos 115116
especcos 153
explosivos 108, 152
incompatveis, regras gerais 115116
vias de exposio 115
produtos qumicos explosivos 116, 152
propano-2-ol (2-propanol) 93, 186
proteco auditiva 119
proteco biolgica 4950
proteco de produtos 53, 55
proteco facial 11, 6869
proteco ocular 11, 6869, 75
radionclidos
prticas de trabalho seguras 120122
substituio 121
ratos susceptveis a poliovrus 109
recipientes
amostras 73, 79, 101
estanques 65
material cortante 19, 66
partidos 84
resduos contaminados 1819
redes prova se artrpodes 34
regra das duas pessoas 26, 33
regulamentos sobre transportes
internacionais 100101
resduos 1819
contaminados com pries 80
descontaminao 18, 23
eliminao 1819, 2324, 99
instalaes para invertebrados 34
radioactivos 122
resduos radioactivos 122
respiradores (equipamento de proteco
respiratria) 22, 6869
responsvel da segurana biolgica 17,
125126
riscos elctricos 20, 119, 152
roupa de laboratrio 67, 68
rudo 119
saneamento 134
sangue, precaues de base 7980
sapatos ver calado
segurana biolgica
controlo 12
versus proteco biolgica 49
selnio 187
separadores de tecidos 78, 142
seringas 11, 17, 19
servios de emergncia 86
servios de manuteno de instalaes 128
servios tcnicos 128
smbolo de risco de irradiao 122
sinal de risco biolgico 108
sistema de aquecimento, ventilao e ar
condicionado (HVAC) 22
sistemas de ar
cmaras de segurana biolgica 5354,
5556, 5859
escafandro 27
ver igualmente sistemas de ventilao
sistemas de embalagem 101, 102
sistemas de embalagem tripla 101, 102
sistemas de expresso biolgica 108
sistemas de ventilao
laboratrio de connamento mximo
27
laboratrio de connamento 22
soda calcinada 117
solos (pavimentos) 12, 22
NDICE REMISSIVO
203
solues de amonaco 161
soro, separao 76
sulfeto de hidrognio 188
superfcies de trabalho
laboratrio 11, 12
supervisor de laboratrio 12, 125
papel de formador 17, 129
surtos, doenas de etiologia desconhecida 8
tampa de rosca, garrafa/tubo 16, 66
tecidos
contendo pries 80
precaues de base 80
tecnologia recombinante ADN 107111
tectos 12, 22
telurite de potssio 188
tetracloreto de carbono 189
tetra-hidrofurano 190
tetrxido de smio 191
o-tolidina 191
tolueno 192
transferncia de genes 107, 108
transporte 12, 100103
amostras 73, 79
regulamentos internacionais 100101
resduos infecciosos 19, 23
sistema de embalagem tripla 101, 102
tricloroetileno 193
triclosan 92
2,4,6-trinitrofenol (cido pcrico) 116, 160
tubos
com tampa de rosca 16
partidos em centrifugadoras 85
ultracentrifugadoras 150
validao, equipamento 16
vectores 108
vectores de expresso 108
vectores virais 108
vesturio/roupa, de proteco ver
equipamento/roupa de proteco
pessoal
vidro 80
manuseamento de vidro partido 84, 85,
103
precaues em utilizao 76, 80
vigilncia mdica ver vigilncia sanitria e
mdica
vigilncia sanitria e mdica
laboratrio de connamento 2324,
25
viseiras 11, 6869
vistoria, segurana em laboratrio 3940
formulrios 4146
xileno 194

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