LE SERODIAGNOSTIC DE LA SYPHILIS

VDRL - TPHA





Elabor par : YASMERO





2O14













PLAN DE TRAVAIL


Introduction
I. Dfinition de la syphilis
II. Les symptmes et les phases dvolution de la syphilis
III. Les ractions de la srologie
IV. Linterprtation des rsultats
Conclusion








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Introduction
1

Le diagnostic srologique repose sur la mise en vidence des anticorps induits par linfection et
retrouvs dans le srum, celui-ci est trait pour retirer certaines substances qui peuvent gner la technique ce
qui aboutit une certaine dilution

Le patient doit tre de prfrence jeun.


I. Dfinition de la syphilis
2


La syphilis est une maladie infectieuse relativement frquente. En recrudescence, elle se trouve au
3me rang aprs les candidoses et les chlamydioses. Cause par un spirochte, le trponme ple
(Treponema pallidum). La syphilis se transmet par les rapports sexuels, par voie transplacentaire ou
exceptionnellement par contacts sanguins (piqre, transfusion).

Le srodiagnostic de la syphilis est un examen consistant rechercher dans le sang des anticorps
spcifiques la maladie. Celui-ci permettra de dterminer le stade de l'infection.



II. Les symptmes et les phases dvolution de la syphilis :
3, 4


La syphilis volue en 3 phases sur plusieurs mois (voire plusieurs annes), entrecoupes de phases
asymptomatiques pendant lesquelles seul le diagnostic srologique est possible.
Quant La priode dincubation (temps entre le contact et lapparition des symptmes), celle-ci varie
habituellement entre 10 et 90 jours. Les symptmes peuvent passer inaperus ou tre mal reconnus,
et peuvent mme ne pas se manifester du tout. Mais lorsquils sont prsents, les symptmes se
manifestent en trois stades:

Stadeprimaire
Trois quatre semaines aprs le contact, un chancre (ulcre trs superficiel, bords rguliers, dont la
base est enfle et qui peut mesurer jusqu 1 cm de diamtre) apparat au site dentre du microbe
(bouche, pnis, vagin ou anus). Le chancre ne cause gnralement pas de douleur et peut tre associ

1
Otto Braun-Falco, Dermatology, 2000, 282 p.
2
ADAM WYNTER, the Rosen Publishing Group, 2007, 64 p.
3
Didier Bessis, C. Francs, B. Guillot, Manifestations dermatologiques des maladies infectieuses mtaboliques et
toxiques, 2009
4
Michel Vaubourdolle, infectiologie 3eme ed. 2007, 334p.




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des ganglions (petites bosses non douloureuses). Cest par contact direct avec ce chancre que
linfection se transmet. La gurison du chancre se produit spontanment (sans traitement) en 3 8
semaines. Cependant, l'individu reste contagieux et le test sanguin de dpistage est souvent ngatif
ce stade.
Stadesecondaire
Non traite, la syphilis volue et quelques semaines (de six semaines six mois) plus tard, des
rougeurs apparaissent sur la peau et les muqueuses, accompagnes de fivre, de fatigue, de maux de
tte et de douleurs musculaires. Ces symptmes disparaissent d'eux-mmes sans traitement. La
syphilis passe alors dans une phase de latence. Cest une priode dite silencieuse pendant laquelle
linfection volue sans manifestation aucune. Seul un test de sang peut rvler la prsence du
microbe. La personne demeure contagieuse. Le test sanguin sera gnralement positif ce stade,
mais peut tre faussement ngatif chez les individus infects par le VIH.

Stadetertiaire
Aprs plusieurs annes, parfois 10 30 ans, des complications srieuses peuvent affecter la peau, les
os, ainsi que les organes vitaux tels que le systme nerveux et le systme cardio-vasculaire.


III. Les ractions srologiques :















A - Raction antigne non trponmique : VDRL (Veneral Disease Research Laboratory)

Principe du VDRL :

Raction dagglutination passive sur lame en verre.
Lantigne utilis est dorigine cardiolipidique constitu de microcristaux de cholestrol sur
lesquels sont adsorbs les molcules de cardiolipide = Haptne de Wasserman.
Des particules de charbon sont piges dans la combinaison Ac-Ag pour faciliter la lecture.
Rsultat du dpistage est rendu positif ou ngatif.
Rsultat est rendu en titre en cas de dpistage positif

Selon lorigine de lantigne utilis

Raction antigne
non trponmique (Ag
cardiologique)

Raction antigne
trponmique

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Technique du VDRL :

Elments de la raction :

Srum frais.
Eau physiologique.
Antigne VDRL prs lemploi.

Matriel:
Centrifugeuse
Micropipettes rglables (5-50L)
Plaques en verre
Portoir pour tubes hmolyse
Agitateur rotatif de Kline
Container de dchets contamins
Eau de Javel

Mode opratoire :












a. La raction qualitative

Distribuer 50L de srum sur chaque puits de la plaque en verre.
Ajouter 16 L dAntigne VDRL
Placer la plaque sur lagitateur de Kline pendant 8 mn
Lire immdiatement au microscope











Deux types de ractions

Raction qualitative
(Dpistage)

Raction quantitative
(Dpistage Positif)

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a. 1. Manipulations pour le test qualitatif

PUITS
Tmoin + Tmoin - Tmoins Ag
VDRL
Srum
inconnu
Srum 50 L du srum + 50 L du srum - 50 L deau
physiologique
50 L du
srum
inconnu
Antigne VDRL 16 L 16 L 16 L 16 L
Placer sur un plateau rotatif (agitateur de kline) pendant 8 mn
Lecture + - -

a. 2. Lecture du VDRL




b. La raction quantitative :

Lorsque la raction quantitative est positive on ralise la mme raction avec une srie de
dilution du srum au (1/2, , 1/8, 1/16, 1/32) avec de leau physiologique.

Le titre danticorps est exprim par linverse de la dernire dilution donnant une raction
positive nette.






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b. 1. Manipulations pour le test quantitatif

PUITS
1 2 3 4 5
Eau
physiologique
50 L 50 L 50 L 50 L 50 L
Dilution 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32
Srum
analyser en
L
50 L
Reporter
50
Reporter 50
L
Reporter 50
L
Reporter 50
L
Jeter 50 L
dans leau
de Javel
Ag VDRL 16 L 16 L 16 L 16 L 16 L
Agitation pendant 8 mn
Lecture






B - Raction antigne trponmique : TPHA (Treponema Pallidum Hemagglutination Assay)

Principe du TPHA :

Raction dhemmagglutination passive ralise sur des microplaques.
LAntigne utilis est un lysat de trponema pallidum adsorb sur des hmaties.
Le dpistage consiste tester le srum la dilution de 1/80.
Des dilutions sont effectues pour le titre dans le cas du dpistage positif.



Technique du TPHA :

Elments de la raction :

Srum frais.
Coffret de ractif prs lemploi.

Matriel :
Centrifugeuse
Micropipettes rglables (5-50L), (50 200 L)
Pipette multicanaux
Plaques de microtitration fond en U
Cnes pour micropipettes
Portoir pour tubes hmolyse
Container de dchets contamins
Eau de Javel


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Mode opratoire :












a. La raction qualitative

Distribuer le diluant dans les puits de microtitration comme suit dans le 1
er
, 3
me
, et 4
me
puits
mettez 25 L, dans le 2
me
puits mettez 100 L.
Ajouter 25 L du srum tester dans le puits numro 1.
Diluer lchantillon 1/20.
Ajouter 75 L de la suspension dHNS au puits 3, et le mme volume de suspension dHS au
puits 4
La dilution finale des puits 3 et 4 est 1/80.
Couvrir la microplaque et laisser reposer pendant 45 60 min.
Effectuer la lecture lil nu.

a. 1. Manipulations pour le test qualitatif




















Deux types de ractions

Raction qualitative
(Dpistage)

Raction quantitative
(Dpistage Positif)

3
me

puits
1
er

puits
2
me

puits
4
me

puits
25 L 25 L
25 L
25 L
25 L du
diluant
+ 25 L du
srum

100 L du
diluant
25 L du
diluant
+ 75 L
dHS

25 L du
diluant
+ 75 L
dHNS
Schma illustrant le mode opratoire du test TPHA
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a. 2. Lecture du TPHA

1
er
Puits : voile uniforme couvrant tout le puits
Fortement positif.

2
me
Puits: voile couvrant le 2/3 du puits
Moyennement positif.

3
me
Puits: voile couvrant le 1/3 du puits
Faiblement positifs.

4
me
Puits: Anneau trs serr bord nets
(absence de voile) Ngatif.






b. La raction quantitative :

Lorsque la raction qualitative est positive (1/80) on ralise une srie de dilution du srum
(1/80, 1/160, 1/320, 1/640, 1/1280, 1/2560)
Le titre danticorps est exprim par linverse de la plus haute dilution donnant encore une raction
positive








Cupule
A B C D E F G H
Tampon en
L
25 25 25 25 25 25 25
Srum 1/20
en L
25 25* * * * * * **
HS en L 75 75 75 75 75 75 75 75
Dilution 1/80 1/160 1/320 1/640 1/1280 1/2560 1/5120 1/10240
Lecture + + + + + - - -


Titre retenu 1280 ( dernire cupule prsentant une hmagglutination nette ).

* : reporter 25 l dans la cupule suivante gauche.
**: jeter 25 l dans l'eau de javel
Srum n1
Srum n1
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IV. Linterprtation des rsultats :


VDRL TPHA Diagnostic Examens
complmentaires
- -
Syphilis exclue ou
contamination trs
rcente
Refaire une srologie
10 15 jours plus tard
+ + Forte probabilit de
syphilis
Situer le stade de
linfection par une
srologie quantitative
-
+ Syphilis rcente
traite ou ancienne
(traite ou non
traite)
Une srologie
quantitative
+ - Il faut confirmer le
TPHA ngatif par une
autre raction (FTA)
Si la raction FTA est
ngative, il sagit dun
faux positif en VDRL



Conclusion :

Le dpistage syphilitique repose sur la combinaison VDRL-TPHA en raison de:
- La grande efficacit pour la dtection de T. Pallidum et lexclusion de toute autre forme
dinfection trponmique.
- La lecture des rsultats peut seffectuer aprs une dure courte de la ralisation des
tests.
- Ce sont les meilleurs tests pour effectuer un dpistage de routine

Pour poser le diagnostic, un bilan srologique complet est conseill afin de mieux situer
lanciennet de linfection, surtout en labsence de signes cliniques.