Protena Unicelular

Historia
En 1964 el profesor Wilson del instituto de
Tecnologa de Massachusetts acuo las
palabras Single Cell Protein, SCP
(protena Unicelular), para denominar las
protenas microbianas.
Los microorganismos productores de SCP,
tienen la capacidad de crecer en un
variedad de medios:
Bagazo
Almidn
celulosa
Estos son residuos agrcolas renovables.
Otros que son no renovables:

Alcanos
Etanol
Metanol



Uno de los aspectos ms crticos de un
proceso de fermentacin industrial es la
recuperacin y purificacin del producto.

La seleccin de las etapas apropiadas de
purificacin depende de la naturaleza del
producto final, su concentracin, los
productos laterales presentes, la
estabilidad del material biolgico y el
grado de purificacin necesario.

Cuando se discute la recuperacin del
producto se debe distinguir entre los
conceptos de purificacin y
concentracin.
Ejemplo:

El propio microorganismo puede ser el
producto final deseado, como por
ejemplo en el proceso ICI-Pruteen para
la produccin de biomasa como protena
de origen unicelular (SCP).

En este caso si las clulas son calentadas
se agregan en grandes partculas que
pueden ser fcilmente separadas del
medio de fermentacin por sedimentacin.
La primera etapa en la recuperacin del
producto es, la separacin de la biomasa
celular y los ingredientes insolubles del
sobrenadante.
Para este propsito existen varios
mtodos, que incluyen la floculacin,
flotacin, filtracin o centrifugacin.

Las ltimas etapas en la recuperacin del
proceso implican precipitacin,
cristalizacin y/o desecacin.

Floculacin y flotacin
Las clulas aisladas en el rango de
tamao de 1 a 10 mm sedimentan solo
muy lentamente y son difciles de
precipitar incluso con la centrfuga.

En la mayor parte de los casos se aade
un agente floculante, como una sal
inorgnica, un polielectrolito orgnico o un
hidrocoloide mineral.

El proceso reverso a la floculacin es la
flotacin que es ms fcil de conseguir
introduciendo gas en el lquido. Las
clulas se adsorben a las burbujas de gas
y suben a la capa de espuma en la parte
superior del recipiente donde pueden ser
recogidas y sacadas del biorreactor.
Sistemas de filtros
Los dos principales tipos de filtros son
denominados filtros profundos y filtros
absolutos.
Un filtro profundo se construye a partir de una
matriz filamentosa, como lana de vidrio, papel
de filtro o asbestos, llevndose a cabo el
proceso de filtracin debido a que las partculas
que han de ser removidas quedan atrapadas
dentro de la matriz.

Los filtros absolutos son membranas en
las que el tamao de los poros es ms
pequeo, que las partculas que van a ser
filtradas.
En cualquier caso la eficiencia de la
filtracin est influenciada por numerosos
factores, como el tamao de los
microorganismos, su morfologa, el pH,
viscosidad, presencia de capas mocosas,
temperatura y presencia de otros
organismos como posibles contaminantes.
Otro tipo de filtro, ms adecuado para
soluciones en las que la concentracin de
slidos es ms baja es el filtro de
prensa, en el que una pila de placas
porosas planas se utilizan como soporte
para un filtro, sea de tela o una
membrana.

El volumen de la cmara dentro de las
placas determina la capacidad de biomasa
de este tipo de filtro.


Aunque el micelio (de hongos o de
actinomicetos) puede ser separado con un
filtro de tambor, las bacterias unicelulares
se separan del medio generalmente
utilizando filtros de membrana.

El mtodo de contracorriente se desarroll
para reducir la tendencia a las
obstrucciones. En este mtodo la solucin
se bombea en contracorriente a travs de
una membrana.
El filtrado pasa a travs de la membrana y
la biomasa se separa del filtro y se
transfiere con el material que se retiene.
Con el mtodo de contracorriente puede
obtenerse un aumento de la velocidad de
filtracin de 100veces en comparacin con
la filtracin esttica.

Dependiendo del tamao de las partculas hay:
smosis reversa, para partculas de
0.0001-0.001 mm
ultrafiltracin, para partculas de 0.001-0.1 mm
microfiltracin, para partculas de 0.1-10 mm.
La smosis reversa implica generalmente a
substancias de pesos moleculares menores de
1.000,
la ultrafiltracin a substancias de pesos
moleculares mayores de 1.000.
El proceso de microfiltracin concierne
principalmente a la separacin de clulas
o de fracciones celulares.
Se utilizan membranas fabricadas con
steres de celulosa, polivinilfluoruros,
policarbonatos, polisulfonas y celulosa.
Las membranas se preparan en forma de
cassettes, como mdulos en espiral,
como manojos de tubos de 1-2cm de
dimetro o como capilares.
Adems de su uso en filtracin las
membranas juegan un papel en el propio
proceso de fermentacin. Pueden
funcionar proporcionando aire estril y
pueden ser utilizadas de otras formas en
el fermentador.
Centrifugacin
La centrifugacin no se utiliza solamente
para separar partculas slidas de la fase
liquida (fluido/separacin de la partcula)
sino tambin para la separacin de
fluido/fluido y fluido/fluido/partcula.


Se utilizan dos tipos distintos de
centrfugas, centrfuga de filtro o tamiz, y
centrfuga con deflectores.
En la centrfuga de filtro o tamiz la
separacin se produce a medida que las
partculas son forzadas contra un material
filtrante.
En la centrfuga de deflectores la
separacin se produce debido a la
diferencia de densidad entre las partculas
y el lquido.

El producto puede ser separado continua
o discontinuamente.

Cromatografa

Algunas de las etapas ms caras en la
recuperacin del producto implican el uso
de mtodos cromatogrficos.

Tales mtodos son de especial valor para
la purificacin de materiales biolgicos
sensibles y encuentran un amplio uso en
la preparacin de materiales
farmacuticos, reactivos de diagnstico y
para investigacin.

Segn el mecanismo de separacin tenemos:
a) Filtracin en gel Peso molecular
b) Cromatografa de Interacciones
adsorcin hidrofbicas
c) Cromatografa de Carga
intercambio inico
d) Cromatografa de Actividad
afinidad biolgica
e) Electroenfoque Punto isoelctrico
Extraccin
Muchos productos pueden ser purificados
mediante extraccin con solventes. Se
establece un sistema en dos fases
utilizando un solvente que es inmiscible
con el caldo acuoso de fermentacin.
Para la separacin de protenas no
pueden ser utilizados los solventes
orgnicos pero pueden ser utilizados
sistemas acuosos de dos fases,
preparados en una solucin de sales con
polmeros hidroflicos.
En ambas fases el agua es el componente
principal, pero ambas fases no son
miscibles. Las clulas permanecen en una
de las fases y los componentes de
fermentacin es transferida a la otra fase
sin prdida de actividad.

Cristalizacin y precipitacin

Una vez ha sido separado el producto de
inters puede ser adicionalmente
concentrado por evaporacin o por
transferencia a baja temperatura.
Desecacin
Para materiales biolgicos es esencial
secar el producto final de tal manera que
su actividad no se pierda. La desecacin
implica esencialmente la transferencia de
calor al producto hmedo y el
desprendimiento de la humedad con una
corriente de gas.
La transferencia de calor puede ser por
contacto directo, por conveccin o por
radiacin. Existen en el comercio
numerosos aparatos para llevar a cabo los
procesos de secado.
Incluyen secadores de conveccin (tales
como secadores de pulverizacin,
rotatorios y de bandas) y secadores por
contacto (como secadores de capa fina o
de cmara).

RENDIMIENTO

Las prdidas en la recuperacin dependen
de la sensibilidad de las substancias al
proceso y del nmero de etapas de
purificacin.
La Tabla 6.5 muestra prdidas de
rendimiento tpicas.

La fraccin del coste total atribuido a la
purificacin est en un promedio de
alrededor del 20% pero en casos
extremos, con ciertos tipos de metabolitos
intracelulares, puede ser tan alto como el
90%.
Cuantificacin de protenas
Mtodo de Biuret

Se basa en la formacin de un complejo
coloreado entre el Cu2+ y los grupos NH
de los enlaces peptdicos en medio
bsico. 1Cu2+ se acompleja con 4 NH.
Mtodo de Bradford
Se basa en la unin de un colorante,
Comassie Blue G-250 (tambin Serva
Blue) a las protenas. El colorante, en
solucin cida, existe en dos formas una
azul y otra naranja.
Mtodo de BCA
El cido bicinconnico, sal sdica, es un
compuesto capaz de formar un complejo
prpura intenso con inones Cu1+ en
medio alcalino.
Principales mtodos para la cuantificacin de protenas,
principales ventaja e inconvenientes
Mtodo Ventajas Inconvenientes
Mtodos de
Absorci n
No se pierden las
muestras
Interfieren muchos compuestos que absorben en el UV
Mtodos Derivados Colorimtricos
Biuret Bastante especfico para
protenas
Muestra pocas
interferencias
Es barato
Tiene poca sensibilidad
Lowry Tiene bastante
sensibilidad
No todas las protenas reaccionan igual
Mustra muchas interferencias como detergentes no
inicos, sulfato amnico etc.
Bradford Muy sensible Muestra interferencias con detergentes
BCA Es el mtodo mas sensible
Es el que muestra menos interferencias
Mtodos Derivados Fluorimtricos
o-ftalaldehido Muy sensible La interferencia de aminas contaminantes en la muestra
No todas las muestras reaccionan igual

Gracias