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Donde:
DBO
5
= Demanda bioqumica de oxgeno a 5 das (mg.L
-1
)
OD
i
= Concentracin de oxgeno disuelto inicial (mg.L
-1
) en la muestra diluda.
OD
f
= Concentracin de oxgeno disuelto final (mg.L
-1
) en la muestra rplica
incubada hasta el 5
to
da.
fd
1
= V
M
/V
T
= Razn entre el volumen de la muestra empleada (10 mL) y el
volumen total de dilucin (1000mL)
fd
2
= A / V
T
= Razn entre la Alcuota (mL) tomada de la dilucin (D-I) y el volumen
total de dilucin (1000 mL).
B. DETERMINACION DE SOLIDOS SUSPENDIDOS TOTALES (SST).
METODO: Gravimtrico.
REFERENCIA:
APHA-AWWA-WPCF. 1999. Standard Methods for Examination of Water and
Wastewater.20th ed. Part. 2540D. Washington.
IMARPE. 1995. Procedimiento Estndar de Operacin: Metodologa para la
Determinacin de Slidos Suspendidos Totales (SST) en Efluentes. DMPAM. PEO-
SST/MG-001.
PRESERVACION:
Lo recomendable es realizar inmediatamente el anlisis. Para minimizar la
descomposicin microbiolgica se recomienda refrigerar a 4C no ms de 72 horas.
INTEFERENCIAS:
Afectan los resultados, el equipo de filtracin, el material del filtro, el prelavado, el
postlavado del filtrado, la temperatura del secado. Excluir partculas flotantes grandes.
EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS
-Desecador, con indicador de humedad.
-Equipo de filtracin
-Bomba de vaco
-Estufa
-Balanza analtica con sensibilidad de 0,1 mg
-Probetas de 5 y 10 mL
-Placas Petri de 60 x10 mm o lunas de reloj
24
-Papel filtro de fibra de vidrio con tamao de poro nominal de 1,5 m y 47 mm de
dimetro
-Botellas de plstico de boca ancha de 250 mL
-Agua bidestilada
PROCEDIMIENTO ANALITICO
a) Lavar el filtro sucesivamente con tres porciones de 20 mL de agua bidestilada o
equivalente, utilizando la bomba de vaco.
b) Retirar el papel de filtro y llevarlo a sequedad en la estufa a una temperatura de
103-105C por una hora (; enfriar en el desecador. Registrar peso (B).
c) Tomar volmenes de muestra en una probeta, cuyos rangos pueden variar de
acuerdo a su concentracin y facilidades de filtracin. Se recomienda de 5-20 mL para
agua de bombeo. Para otros efluentes, filtrar volumen mayor a 25 mL.
d) Homogenizar la solucin y vaciarla en el embudo que contiene el filtro previamente
preparado, y filtrar con la ayuda de la bomba de vaco (8-10 pulg. Hg).
e) Debe tratarse de di stribuir la muestra en todo el filtro, esto se puede conseguir
usando una bagueta para discurrir por ella la muestra.
f) La probeta usada debe ser enjuagada con agua bidestilada o similar para
asegurarse de arrastrar todos los slidos.
g) Retirar el papel filtro conteniendo la muestra filtrada y llevarlo a sequedad en la
estufa a una temperatura de 103-105C hasta peso constante. Enfriar en el
desecador. Registrar peso (A).
h) Clculos:
La concentracin de slidos suspendidos totales se calcula con la siguiente frmula:
SST = (A-B) x 10
6
/ V
Donde:
SST = Slidos suspendidos totales (mg.L-1).
A = Peso de placa Petri + papel filtro + residuo (g).
B = Peso de placa Petri + papel filtro (g).
V = Volumen de la alcuota agua de bombeo (mL).
C. DETERMINACION DE ACEITES Y GRASAS (AG).
METODO:
Extraccin Soxhlet.
REFERENCIAS
APHA-AWWA-WPCF. 1999. Standard Methods for Examination of Water and
Wastewater.20
th
ed. Method 5520D. Washington.
Environmental Laboratory. 1976. Water Resources Service Department of Environment.
25
IMARPE. 1995. Procedimiento Estndar de Operacin: Metodologa para la
Determinacin de Aceites y Grasas (AG) en Efluentes. DMPAM. PEO-AG/ES-002.
COLECTA Y PRESERVACIN
La muestra se recepcionar en un frasco de vidrio de 500 ml, agregndole
inmediatamente 2,5 ml mL de cido clorhdrico (HCl, 1:1) o tambin cido sulfrico
(H
2
SO
4
, 1:1) por 0,5 L de muestra colectada, tapar y agitar. Preservar en refrigeracin
(4
o
C) hasta su anlisis. El tiempo mximo de almacenamiento es de 72 horas.
EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS
Equipos
-Sistema de extraccin Soxhlet (cartucho de extraccin, condensador Allin y baln de
base plana de 250 mL).
-Balanza analtica, 0,1 mg de precisin
-Estufa: 103-105C
-Rotavapor
-Set de cocinillas para Soxhlet
-Equipo Bao Mara
Materiales
-Desecador con indicador de humedad
-Papel filtro Whatman 42
-Papel aluminio
-Placas Petri
-Balones de boca esmerilada 29/32 de 250 mL
-Pipeta de vidrio de 25 mL
-Pipeta Pasteur de vidrio
-Pinzas, esptulas, baguetas, vasos de 1 y 0,5 L
Reactivos
-Hexano p.a.
-Acido clorhdrico p.a. 1:1
PROCEDIMIENTO ANALITICO
a) Atemperar la muestra en Bao Mara a < 40 C y homogenizarla; verter un volumen de
20 a 25 mL (V) en placas Petri revestida desde el interior con papel de aluminio y
someterlo a sequedad (40 C) hasta la formacin de una capa seca para evaporar el
agua.
b) Luego del secado, separar el papel metlico que contiene la muestra y envolver con
suficiente papel Whatman 42 formando un cartucho, para posteriormente ser introducido
en la cmara de extraccin.
c) Pesar el baln (P
1
= Peso inicial) que corresponde al baln vaco con perlitas.
Codificar y unir a la cmara de extraccin sellando el sistema Soxhlet.
26
d) Preparar un blanco solvente (B). Emplear slo el cartucho (con papel de aluminio y
filtro Whatman 42) y colocarlo como las dems muestras en la cmara de extraccin
correspondiente.
e) En el caso del blanco el peso inicial del baln seco con perlitas ser A
1
(en gramos).
f) Reciclar las muestras y el blanco por lo menos 25 ciclos en 4 horas con 200 mL de
hexano.
g) Concentrar la muestra separando el solvente del extracto orgnico por destilacin al
vaco en equipo rotavapor hasta la formacin de una pelcula de grasa y secar en la
estufa a 105 C a peso constante (1h aproximadamente).
h) Enfriar en el desecador antes de cada pesada. Registrar peso final en la muestra =
P2= P1 + residuo de grasa, en gramos).
i) Clculos:
La concentracin de aceites y grasas se calcula con la siguiente frmula:
AG (mg.L
-1
). = [(P
2
- P
1
) B] x 1000/V
Donde:
AG = Aceites y grasas (mg.L
-1
).
P
1
= Peso del baln (g) + perlitas.
P
2
= P
1
+ residuo de grasa (g). Corresponde a la muestra.
A
1
= Peso inicial del blanco: Peso del baln (g) + perlitas.
A
2
= A
1
+ residuo del solvente (g).
B = Blanco del solvente (A2-A1), (g).
V = Volumen de muestra (L).
1000 =Factor de conversin de g a mg.
27
ANEXO 3
METODOLOGAS ANALITICAS PARA LA DETERMINACION DE PARAMETROS
DE CALIDAD DEL CUERPO RECEPTOR
A. DETERMINACION DE OXIGENO DISUELTO
METODO: Titulomtrico.
REFERENCIAS
EL PERUANO. 1969. LEY GENERAL DE AGUAS. Decreto Ley N 17752.
GRASSHOFF, KREMLING AND EHRHARDT. 1999. Methods of Seawater Analysis. Edit. Pp
75:89. Wiley-VCH.
IMARPE, 2000. Procedimiento Estndar de Operacin. PEO-OD-001: Metodologa para la
determinacin de oxgeno disuelto en agua de mar por valoracin. Area de
Evaluacin de la Contaminacin Marina.
PERRY, R. 1982. Manual del Ingeniero Qumico. 5ta. Edicin. Vol. I. Edit. Mc Graw Hill.
COLECTA Y PRESERVACION
A nivel superficial colectar la muestra en un balde de plstico, mientras que a nivel de
fondo o media agua emplear una botella Niskin de 5 L de capacidad, en este caso este
depsito contiene una manguera de salida.
Para la colecta de muestra se emplear un frasco de vidrio de aproximadamente 115 mL
de capacidad con boca esmerilada para recepcionar la muestra. La muestra superficial se
colectar sumergiendo la botella de oxgeno en el balde en forma inclinada y suave,
evitando la formacin de burbujas de aire. La muestra de media agua se colectar de la
botella Niskin por gravedad. En ambos casos se debe evitar la formacin de burbujas y
luego preservar aadiendo 1 mL de Reactivo I y 1 mL de Reactivo II (ver Anexo 3 para
definicin de reactivos de preservacin), agitar; guardar en un ambiente fresco y oscuro
hasta su anlisis en laboratorio. El tiempo mximo de almacenamiento de la muestra es
de 24 h.
EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS
- Microbureta automtica de 10 mL graduada (escala de 0,05 mL)
- RI (Reactivo I): Solucin preparada al disolver 36,6653 g de Mn Cl
2
.4H
2
O y/o
31,3184 g de MnSO
4
.H
2
O enrasado a 100 mL con agua destilada.
- RII (Reactivo II): Solucin preparada al combinar 60 g de KI y 30 g de KOH
disueltos separadamente en una mnima cantidad de agua destilada y enrasados
hasta 100 mL.
- RIII (Reactivo III): Solucin de cido sulfrico (1:1)
- Solucin de tiosulfato de sodio 0,02 M
28
- 01 Erlenmeyer de 250 300 mL
- 01 gotero con almidn
- Botella de vidrio mbar y/o transparente de boca angosta esmerilada con tapa de
aproximadamente 115 mL de capacidad, previamente calibrado.
PROCEDIMIENTO ANALITICO
a) Clculo del factor de botella f
b
Una botella de vidrio con su tapa respectiva se pesa vaca, luego se llena con agua
destilada y se pesa. La diferencia de pesos es equivalente al volumen (B, mL) que ocupa
el agua destilada en la botella (consideracin: densidad a temperatura ambiente es de
1g.mL
-1
). El clculo del fb se realiza con la siguiente frmula:
fb = 112/B - 2
b) Estandarizacin de la solucin de tiosulfato
- Preparacin del tiosulfato de sodio 0,02 M
Pesar 4,95 g de Na
2
S
2
O
3
.5H
2
O y disolver con agua destilada enrasndolo a 1 L.
- Preparacin del yodato estndar 0,01N
Pesar 0,3567 g de KIO
3
y disolver con agua destilada enrasndolo a 1 L.
- Clculo del f
t
(factor del tiosulfato de sodio):
Medir 50 mL de agua destilada en un erlenmeyer y adicionar 1 mL de RIII, 1mL de RII y 1
mL de RI (entre cada reactivo adicionado hay que agitar) y aadir 10 mL de yodato estndar
0,01 N. El yodo liberado es titulado con la solucin de tiosulfato de sodio 0,02 M hasta color
amarillo plido, se adiciona 2 a 3 gotas de almidn soluble y la solucin cambia a un color
morado o azul intenso (intensidad vara segn su concentracin). El viraje a incoloro
indicar el punto final:
ft = 5/V
donde: V = Volumen de gasto del tiosulfato, mL.
c) Anlisis
Disolver el precipitado formado en la preservacin de la muestra agregando 1mL de R-III,
agitar, esperar 10 minutos antes de iniciar la titulacin.
Transvasar la muestra del frasco en un erlenmeyer e iniciar la titulacin con tiosulfato,
agitando constantemente hasta que la solucin adquiera un tono amarillo plido. Adicionar
3 gotas de indicador almidn con lo cual la solucin se colorear de morado. Seguir
titulando con tiosulfato agitando cuidadosamente hasta que la solucin vire a incoloro.
Anotar el gasto "a" del tiosulfato para los clculos respectivos.
d) Clculos
29
La concentracin del oxgeno disuelto en agua de mar, se calcula con la siguiente
frmula:
C (mL/L) = f
t
* f
b
* a
C (mg.L
-1
) = 1,4289 * f
t
* f
b
* a
Donde:
C : Concentracin de oxgeno disuelto
ft : Factor de tiosulfato
f
b
: Factor de botella
a : gasto de tiosulfato en mL
B. DETERMINACION DE SULFURO DE HIDROGENO
METODO:
Colorimtrico Azul de metileno.
REFERENCIAS
EL PERUANO. 1969. LEY GENERAL DE AGUAS. Decreto Ley N 17752.
GRASSHOFF, K.,K. Kremling, y M. Ehrhardt 1999. Methods of Seawater Analysis.
Determination of hydrogen sulphide. Pp 91:97. Edit. WILEY- VCH.
IMARPE, 2000. Procedimiento Estndar de Operacin. PEO-S
=
-001: Determinacin de
sulfuro de hidrgeno en agua de mar por colorimetra. Area de Evaluacin de la
Contaminacin Marina. DMPAM. PEO-S/MC-001
COLECTA Y PRESERVACION
A nivel superficial colectar la muestra en un balde de plstico, mientras que a nivel de
fondo o a media agua emplear una botella Niskin de 5 L de capacidad con una manguera
de salida.
La muestra se colecta en un frasco de vidrio oscuro de 115 mL de capacidad con boca
esmerilada, evitando la formacin de burbujas de aire, es preservada con 1 mL de acetato
de zinc y almacenada a temperatura ambiente. La muestra preservada de esta manera
puede ser almacenada por un perodo 7 das mientras se guarde en un lugar oscuro y
fresco.
EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS
- Equipo espectrofotmetro UV Visible
- Celdas de 1 y 5 cm
- Frascos de vidrio mbar de boca angosta esmerilada de aproximadamente 115 mL
- Pipetas
30
- R- I = Solucin preparada al disolver 1,00 g de N,N-dimetil-p-fenileno diamino
dihidrocloruro (CH
3
)
2
N.C
6
H
4
.NH
2
.2HCl (1,4) en 500 mL de cido clorhdrico 6M. El
reactivo es estable por varios meses. Almacenar en frasco de vidrio mbar y en
oscuridad.
- R- II = Solucin preparada al disolver 8 g de FeCl
3
en 500 mL de cido clorhdrico
6M. El reactivo es estable indefinidamente. Almacenar en frasco de vidrio mbar y
en oscuridad.
- Preservante. Disolver 5,22 g de acetato de cinc dihidratado en 500 mL de agua
destilada libre de oxgeno conteniendo 1 g de gelatina.
- Agua libre de oxgeno. Es preparada a partir de la ebullicin del agua destilada en
un volumen de 2-5 L por 30 a 60 minutos, durante el cual se burbujea una
corriente de gas nitrgeno hasta su enfriamiento a temperatura ambiente. Esta
agua no se puede almacenar y debe ser preparada antes de su uso.
PROCEDIMIENTO ANALITICO
a) Estandarizacin
1. Preparacin del tiosulfato de sodio 0,02 M
Pesar 4,95 g de Na
2
S
2
O
3
.5H
2
O y disolver con agua destilada enrasndolo a 1 L.
2. Estandarizacin de la solucin de trabajo de sulfuros
-Solucin stock de sulfuros
Lavar unos cuantos cristales de sulfuro de sodio nonahidratado (Na
2
S.9H
2
O) con agua
destilada. Secar inmediatamente con papel filtro. Pesar 0,75 g de la sal disolver con agua
libre de oxgeno en una fiola y enrasar a un litro. La solucin no es estable y debe ser
usada al momento.
-Solucin de trabajo de sulfuros
Pipetear 25 mL de la solucin stock de sulfuros en una fiola de 500 mL que contiene agua
libre de oxgeno y 5 mL de solucin de gelatina con acetato de cinc. Enrasar con agua
libre de oxgeno. Esta solucin es estable por varias horas y antes de usarse debe
agitarse vigorosamente, la solucin contiene aproximadamente 5 g de sulfuros por
centmetro cubico (aproximadamente 0,16 microgramos tomo g-at H
2
S-S.cm
-3
). Debido
a la inestabilidad de la solucin se recomienda su estandarizacin.
-Estandarizacin
En 6 erlenmeyers de 300 mL de capacidad se adicionan 10 mL de agua bidestilada y de 1
a 2 g de KI, seguidamente en cada erlenmeyer se adicionan 10 mL de solucin de KIO
3
0,01 N y 1 mL de cido sulfrico (1:1). Posteriormente en tres de los erlenmeyers se
adicionan 50 mL de solucin de trabajo y en los otros tres 50 mL de agua bidestilada,
todos los matraces se agitan y se deja reposar por 10 minutos luego se titula con
tiosulfato usando almidn como indicador. La concentracin corregida C de sulfuros se
calcula por la frmula:
C (g at H2S-S . mL
-1
) = 10 * ft * (A - B)/50
C (g H2S . mL
-1
) = [10 * ft * (A - B)/50]*32
Donde: A = Volumen promedio del gasto de tres soluciones sin sulfuros (mL).
31
B = Volumen promedio del gasto de tres soluciones conteniendo sulfuros (mL).
f
t
= factor de la solucin de tiosulfato.
b) Preparacin de la curva de calibracin
La curva de calibracin se basa en la preparacin de soluciones patrn a partir de la
solucin de trabajo de concentracin corregida C. En la Tabla A.2 se indican los
volmenes de la solucin de trabajo, a los cuales se les aade 1 mL de los reactivos I y II
y se enrasa con agua destilada libre de oxgeno en fiolas de 50 mL evitando la formacin
de burbujas (por sifoneo). Dejar reposar 1 hora y leer con un blanco (agua libre de
oxgeno) a una longitud de onda de 670 nm en celdas de 1 cm y/o celda de 5 cm segn
sea el caso.
Tabla A.2. Volmenes de solucin de trabajo para anlisis de sulfuros.
Celda: 1 cm Celda: 5 cm
Patrn Sol.Trabajo Concentracin Absorbancia Sol.Trabajo Concentracin Absorbancia
(mL) (g H
2
S.mL
-1
) neta (mL) (g H
2
S.L
-1
) neta
1 2,0 0,2
2 4,0 0,4
3 6,0 0,6
4 8,0 0,8
Estas concentraciones tericas se expresan en g H
2
S.mL
-1
(para celda de 1 cm) o g
H
2
S.L
-1
(para celda de 5 cm). Las lecturas de estas soluciones expresadas en unidades de
absorbancia conjuntamente con las concentraciones determinarn la curva de calibracin
respectiva.
Nota : Absorbancia neta = Absorbancia de la muestra Absorbancia del blanco
c) Curva de calibracin en celda de 1 cm
La curva de calibracin es obtenida a travs de la regresin lineal entre la absorbancia vs.
concentracin (g H
2
S.mL
-1
).
Abs. = m C (g H
2
S.mL
-1
) + b
Donde:
Abs. = Absorbancia neta
C = Concentracin (g H
2
S.mL
-1
)
m = Pendiente de la recta
b = Interseccin con el eje de absorbancia.
d) Curva de calibracin en celda de 5 cm
La curva de calibracin es obtenida a travs de la regresin lineal entre la absorbancia vs.
concentracin (g H
2
S.L
-1
).
Abs. = m
1
C (g H
2
S.L
-1
) + b
1
Donde:
32
Abs. = Absorbancia neta
C = Concentracin (g H
2
S.L
-1
)
m
1
= Pendiente de la recta
b
1
= Interseccin con el eje de absorbancia.
e) Lectura de muestras
A la muestra previamente preservada, adicionar 1 mL de RI y 1 mL de RII. Dejar reposar
por una hora a temperatura ambiente en un lugar oscuro y fresco, a fin de que desarrolle
la coloracin respectiva y dar inicio a la lectura.
La lectura en el espectrofotmetro se realiza a una longitud de onda de 670 nm. Se
deber considerar que la celda de 1cm es empleada en la lectura de muestras de mayor
concentracin, esto es para muestras que desarrollen una tonalidad azul intensa a
translucidas segn la concentracin.
f) Clculos
La absorbancia obtenida en la lectura de cada muestra es reemplazada en la ecuacin de
curva respectiva (de 1 cm de 5 cm) segn sea el caso.
La concentracin de sulfuros se calcula con las siguientes frmulas:
-Celda de 1 cm
C (g H
2
S.L
-1
) = [(Abs. - b)/m]*1000
C (g-at H
2
S-S.L
-1
) = [(Abs. - b)/m]*1000* (1/32)
C(mg H
2
S.L
-1
)= C(g-at H
2
S-S.L
-1
)*(0.032)
-Celda de 5 cm
C (g H
2
S.L
-1
) = [(Abs. - b
1
)/m
1
]
C (g-at H
2
S-S.L
-1
) = [(Abs. - b
1
)/m
1
]* (1/32)
C (mg H
2
S.L
-1
) = C (g-at H
2
S-S.L
-1
) * (0,032)
C. DETERMINACION DE SLIDOS SUSPENDIDOS TOTALES (SST).
METODO: Por filtracin.
REFERENCIAS
APHA-AWWA-WPCF. 1999. Standard Methods for Examination of Water and Wastewater.
20
th
ed. Part. 2540D. Washington.
33
IMARPE, 1995. Procedimiento Estandar de Operacin-PEO-SST-001: Metodologa para la
determinacin de slidos suspendidos totales en agua de mar, aguas superficiales,
continentales y potables por gravimetra. Area de Evaluacin de la Contaminacin Marina.
DMPAM. PEO-SST/MF-001.
COLECTA Y PRESERVACION
A nivel superficial colectar la muestra en un balde de plstico, mientras que a nivel de
fondo (o a diversas profundidades) emplear una botella Niskin de 5 L de capacidad.
La muestra previamente homogenizada se colecta en un frasco de 500 mL, evitando el
ingreso de arena o material grueso que sedimente. Llenar hasta el hombro de la botella y
tapar. Guardar en un cooler conteniendo hielo para su preservacin hasta su llegada al
laboratorio.
Las muestras se pueden almacenar por un tiempo mximo de 7 das debidamente
refrigeradas a 4C. Lo recomendable es realizar inmediatamente el anlisis, para minimizar
la degradacin de la muestra.
INTEFERENCIAS
Afectan los resultados, el equipo de filtracin, el material del filtro, el prelavado, el
postlavado del filtrado, la temperatura del secado. Material flotante que pueda obstruir el
filtro debe ser eliminado manualmente.
EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS
- Desecador, con indicador de concentracin de humedad.
- Equipo de filtracin
- Bomba de vaco
- Estufa
- Balanza analtica con sensibilidad de 0,1 mg
- Probeta de 250 mL
- Probeta de 25 mL
- Placas Petri de 60 x10 mm o lunas de reloj
- Papel filtro de fibra de vidrio con tamao de poro nominal de 1-1,5 m
- Botellas de plstico de boca ancha
PROCEDIMIENTO ANALITICO
a) Preparacin del papel de filtro de fibra de vidrio. Lavar el filtro sucesivamente con tres
porciones de 20 mL de agua destilada, utilizando la bomba de vaco.
b) Retirar el papel de filtro y llevarlo a sequedad en la estufa a una temperatura de 103-
105C por una hora. Enfriar en el desecador y pesar (P1).
34
c) Filtracin de la muestra:
Previo al anlisis se debe agitar la botella para homogenizar la muestra y filtrar al
vaco un volumen de 150 a 250 mL (V; mL). En muestras ms concentradas filtrar un
menor volumen considerando siempre que no se pierda representatividad.
d) Retirar con una pinza el papel con los slidos colocarlo sobre el Petri correspondiente
y llevarlo a estufa por 1 h mnimo hasta peso constante. P
2
.
e) Clculos
La concentracin de los slidos suspendidos se expresa en mg de residuos no filtrables por
litro de agua de mar y se calcula con la siguiente frmula:
SST (mg.L
-1
) = [(P2 P1)/V]*10
6
Donde:
SST = Slidos suspendidos totales (mg.L
-1
)
P
2
= Peso de Petri + papel de filtro + residuo seco en gramos
P
1
= Peso de Petri + papel de filtro en gramos
V = Volumen de muestra en mL.
D. DETERMINACION DE ACEITES Y GRASAS
METODO:
Extraccin directa.
REFERENCIAS
APHA-AWWA-WPCF. 1999. Standard Methods for Examination of Water and
Wastewater.20
th
ed. Method 5520B. Washington.
EL PERUANO. 1969. LEY GENERAL DE AGUAS. Decreto Ley N 17752.
ENVIRONMENTAL LABORATORY, 1976. Water resources Service Department of Environment.
IMARPE, 2000. Procedimiento Estandar de Operacin. PEO-AG-001: Metodologa para la
determinacin de aceites y grasas en agua de mar, aguas superficiales, continentales y
potables por gravimetra. Area de Evaluacin de la Contaminacin Marina. PEO-AG/ED-
001.
COLECTA Y PRESERVACION
A nivel superficial colectar la muestra en un balde de plstico.
La muestra se recepciona en un frasco de vidrio de 1 L, y se le agrega inmediatamente
HCl o H2SO4 (1:1) hasta pH < 2, homogenizar bien la muestra y mantener en refrigeracin
hasta su anlisis. Se considera un periodo mximo de preservacin de 28 das, sin
embargo se recomienda realizar el anlisis en el mas breve plazo cuando se trate de
muestras que son colectadas durante la etapa de produccin y correspondan a estaciones
35
prximas al punto de descarga, con una mayor cantidad de materia orgnica en
suspensin.
EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS:
Equipos
- Balanza analtica digital 0,1mg de precisin.
- Estufas: Heraeous, Thelco
- Sistema rotaevaporador Buchi.
- Bomba de vaco Gast. Presin de trabajo: 10 pulg Hg.
Material de muestreo
- Botellas de vidrio de 1,0 L de capacidad de boca ancha,
- Cooler
- Hielo
- Balde de plstico
Materiales para el anlisis
- Embudo de separacin de 1 L
- Desecador
- Papel filtro Whatman 42
- Balones de boca esmerilada 29/32 de 250 mL
- Sistema de refrigeracin
- Pipeta de vidrio de 25 mL
- Pipeta Pasteur de vidrio.
Reactivos
- Hexano triclorotrifluoroetano (1,1,2 tricloro-1,2,2-trifluoroetano)
(1)
p.a.
- Sulfato de sodio anhidro (granular fino)
- Metanol p.a.
- Acido clorhdrico acido sulfrico (1:1). Solucin preservante.
(1)
Los solventes tienen diferente grado de afinidad con los compuestos orgnicos,
dependiendo de su polaridad.
PROCEDIMIENTO ANALITICO
Las muestras seleccionadas deben ser atemperadas a medio ambiente para su anlisis.
Se correr un blanco (B) empleando agua destilada con el grupo de muestras.
a) Homogenizar la muestra a temperatura ambiente y medir 1 L o un volmen aproximado.
Trasvasar a una pera de separacin y extraer 3 veces con porciones de 30 mL de
hexano. En cada extraccin, agitar por 5 minutos. Dejar separar la fase acuosa del
solvente.
b) Separar la fase acuosa regresando al frasco de origen. Si se presentan emulsiones ,
romperlas con unas gotas de metanol p.a.
c) La fase orgnica se recibe en un baln pre-pesado (Peso inicial del baln = P1 en
gramos) el cual contiene un embudo con papel filtro Whatman N 42 con sulfato de
sodio anhidro suficiente (1- 2 g) para captar el agua o emulsiones en la interfase.
36
d) En el caso del blanco el peso inicial del baln seco ser A
1
(en gramos).
e) Para la 2 y 3 ex tracciones se procede como en el punto c.
f) Enjuagar la pera de separacin con 5 mL de hexano, el cual se recibe en el baln que
contiene la muestra (previa filtracin con sulfato, punto c).
g) Concentrar la muestra separando el solvente por destilacin al vaco con un rotavapor
hasta aproximadamente 1 mL y secar en la estufa a 105 C a peso constante (Peso
final: P
2
). Condiciones del rotavapor: 68 C (bao mara) y 10 pulg Hg (vaco).
h) Para el blanco se procede de la misma manera. Una vez separado el solvente, registrar
peso constante A2 (g).
i) Clculos:
La concentracin de los aceites y grasas se calcula con la siguiente frmula :
AG (mg.L
-1
) = [(P
2
-P
1
) - B] x 1000/V
Donde:
AG = Aceites y grasas (mg.L
-1
).
P
2
= Peso del baln + residuo (g) .Corresponde a la muestra.
P
1
. = Peso inicial del baln (g) .
A
2
= Peso final del blanco : Peso del baln + residuo del solvente (g)
A
1
= Peso inicial del blanco: Peso del baln (g).
B = Blanco del solvente (A
2
-A
1
) en el baln g.
V = Volumen de muestra (L).
E. DETERMINACION DE LA DEMANDA BIOQUIMICA DE OXIGENO (DBO
5
)
METODO
Determinacin de la Demanda Bioqumica de Oxgeno (DBO5) en agua de mar, aguas
superficiales y zona de mezcla por dilucin simple.
REFERENCIAS
APHA-AWWA-WPCF. 1992. Standard Methods for Examination of Water and
Wastewater.18
th
ed. Part 5210B. Washington. 1134 p.
IMARPE, 1995. Procedimiento Estndar de Operacin: Metodologa para la determinacin
de Demanda Bioqumica de Oxigeno (DBO
5
) en agua de mar, aguas superficiales y zona de
mezcla. rea de Evaluacin de Impacto Ecolgico. DMPAM. PEO-DBO
5
/DS-001.
International Organization for Standarization. 1983. Water Quality Determination of
Biochemical Oxygen Demand after n days (BODn). Dilution and Seeding Method. First
Edition. ISO5815. 1983-10-01D.
COLECTA Y PRESERVACION
Las muestras superficiales o de fondo colectadas a travs de un balde o botellas Niskin
respectivamente, se recepcionan en frascos de vidrio o plstico limpio de 1 L. Para evitar la
37
descomposicin de la muestra por accin microbiana, mantener la muestra entre 0 a 4C
hasta un perodo mximo de 24 horas desde su colecta.
INTERFERENCIAS
Las que se indican para la determinacin de oxgeno disuelto por el mtodo de Winkler-
Azida (ISO 1983) causadas por sustancias oxidantes, reductoras y material suspendido.
EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS
Equipos
- Incubador DBO 20 1C
- Estufa de 50 a 150 C
- Potencimetro
- Destilador
- Oxmetro polarogrfico y sensor con accesorios
- Bureta automtica de 10 mL
- Difusor de aire (blower)
- Refrigeradora
Materiales
- Frascos de DBO de 250 a 300 mL con tapa esmerilada y con tapa de plstico de
seguridad
- Fiolas de 100 mL, 500 mL
- Pipetas graduadas de 1, 5 y 10 mL
- Probetas de 100 mL y otros materiales para la determinacin de oxgeno disuelto.
Reactivos
a) Sales de dilucin:
- Solucin Buffer Fosfato: KH2PO4, 8,5 g; K2HPO4, 21,75 g; Na2HPO4. 7H2O, 33,4 g y
NH
4
Cl, 1,7 g enrase a 1 litro
- Solucin de nutrientes:
Sulfato de Magnesio Heptahidratado: 22,5 g/L
Cloruro de Calcio: 27,5 g.L
-1
Cloruro frrico Hexahidratado: 0,25 g/L
b) Solucin estndar de control:
150 g de glucosa en 1 L
150 g de cido glutmico en 1 L
Mezclar ambas soluciones en proporcin 1:1
c) Reactivos para determinacin de oxgeno disuelto (Anexo 3.A)
PROCEDIMIENTO ANALITICO
a) Preparacin del agua de dilucin
- A partir del agua destilada se prepara el agua de dilucin, agregar 1 mL de cada una
de las soluciones nutrientes y de la solucin buffer por litro de agua destilada.
38
- Airear (empleando blower) hasta la saturacin de oxgeno (~10 mL.L
-1
) por una hora.
Emplear la solucin inmediatamente de ser preparada o a ms tardar dentro de las 8
horas. Estos dos pasos son suficientes (en la preparacin del agua de dilucin) antes
de iniciar los anlisis de muestras de agua de bombeo.
b) Preparacin de blancos de control
- Colectar el agua de dilucin en dos frascos de vidrio DBO
5
de 300 mL.
- Determinar el oxgeno disuelto inicial (ODi) en el primer frasco mediante el mtodo de
Winkler azida o el oxmetro polarogrfico.
- Incubar el segundo blanco a 20 C +/- 1C por 5 das. Al cabo del quinto da
determinar el oxgeno disuelto final (OD
f
).
- El consumo de oxgeno en el blanco no debe exceder 0,2 mg.L
-1
para considerar
vlido el anlisis de muestras.
c) Tratamiento de muestras
1. Medir el pH de la muestra, que debe estar entre 6-8. En caso contrario
neutralizar con NaOH 20 g.L
-1
o HCl 0,5 mol.L
-1
(evitar una dilucin mayor al
0,5 %).
2. Las muestras de agua de mar distantes a zonas con influencia de descargas,
no necesitan diluirse. La muestra se incuba directamente en frasco de 300 mL.
Trabajar con muestras rplicas.
3. Para las muestras provenientes de zona de mezcla se realiza una dilucin
simple utilizando un factor de dilucin (fd) de acuerdo a la Tabla A.3. Trabajar
con muestras rplicas.
4. Determinar el oxgeno disuelto inicial (0 das) del primer grupo de muestras
rplicas, mediante el mtodo Winkler azida o el oxmetro polarogrfico.
5. Incubar el segundo grupo de muestras rplicas a 20C 1C, y proceder a
evaluar el oxgeno disuelto final al quinto da de incubacin con el mtodo
respectivo.
Tabla A.3. Diluciones recomendadas para la determinacin de DBOn
CLASIFICACION FACTOR DE
DILUCION (fd=A/V
T
)
RANGO DE
ALICUOTAS (A, mL)
OBSERVACIONES
Agua de mar 5 x 10
-1
- 1 150-300 Zona distante y sin
influencia de descargas
Zona de mezcla o
influencia
3 x 10
-2
1
3 x 10
-2
5x10
-1
10-300
10-150
Zona con influencia de
descargas
d) Clculos
- Sin dilucin:
DBO
5
(mg.L
-1
) = [ (C
1
C
2
)]
Donde:
DBO
5
= Demanda bioqumica de oxgeno a 5 das (mg.L
-1
)
39
C
1
= Concentracin de oxgeno disuelto de la muestra, tiempo inicial, en mg.L
-1
C
2
= Concentracin de oxgeno disuelto de la muestra, tiempo = 5 das en mg.L
-1
.
- Con dilucin simple:
DBO
5
(mg.L
-1
) = [ (C
1
C
2
)] / fd
Donde:
DBO5 = Demanda bioqumica de oxgeno a 5 das (mg.L
-1
).
C
1
= Concentracin de oxgeno disuelto de la muestra diluida, tiempo inicial.
C2 = Concentracin de oxgeno disuelto de la muestra diluida, tiempo = 5 das.
fd = (A/V
T
) = Fraccin volumtrica decimal de la muestra empleada en la
dilucin.
A = Alcuota de la muestra empleada para preparar la dilucin (mL).
VT = Volumen final en el frasco de dilucin (300 mL).
F. DETERMINACION DE NITRATOS
METODO:
Espectrofotomtrico
REFERENCIAS
STRICKLAND, J. D. and T.R. PARSONS 1968. A manual of seawater analysis. Research
Board of Canada. Bull. N 125.
GRASSHOFF K., K. KREMLING and M. EHRHARDT 1999. Methods of seawater Analysis.
COLECTA Y PRESERVACION
La colecta de agua de mar para muestras de superficie se realiza mediante un recipiente
plstico (balde), y para las de profundidad se utilizan las botellas Niskin. El agua es
colectada en botellas de polietileno de 100 mL, previamente enjuagadas con el agua de mar
a ser analizada. Si la muestra tiene mucho material particulado en suspensin se
recomienda filtrar (filtro de 0,45 um y de acetato de celulosa) y refrigerar inmediatamente, si
el anlisis se realiza dentro de las 24 horas. En caso contrario, congelar la muestra por un
tiempo mximo de 72 horas hasta su anlisis .
INTERFERENCIAS
En aguas muy costeras, concentraciones altas de fosfatos pueden interferir en su anlisis.
Concentraciones de 25 mol/L de fosfato disminuyen la reduccin en un 40 % y 2,5
mol/L de fosfato pueden inhibir la reduccin en un 10 %. En general, las concentraciones
de fosfato presentes normalmente en el agua de mar son bajas para no ocasionar
problemas de interferencia significativos.
EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS
40
Equipos
-Espectrofotmetro UV Visible
-Balanza analtica (0,1 mg)
-Bomba de vaco elctrica
-Destilador elctrico
Materiales
-Columna de reduccin de vidrio de 20-25 cm con 8 a 10 cm de dimetro interno, con
llave de doble paso
-Pipetas graduadas de 5 y 10 mL
-Pipetas volumtricas de 1, 2, 5 10, 20, 25 y 50 mL tipo A
-Fiola de 1 L tipo A
-Fiolas de 100 mL tipo A
-Probetas de 50 mL tipo A
-Embudo de vidrio
-Esptulas
-Pipeteadores de 1 a 10 mL
-Celdas de absorcin de luz de 1 cm y 5 cm
-Matraz erlenmeyer de 125 mL
-Algodn de fibra de vidrio
-Papel de filtro de acetato de celulosa de 0.45 um.
Reactivos
-Cadmio granulado (Cd)
-Cobre en lmina (Cu)
-Cloruro de Amonio concentrado 350 g.L
-1
(NH
4
Cl)
-Cloruro de Amonio diludo (25 mL NH
4
Cl concentrado.L
-1
)
-Acido clorhdrico 1% (v/v) HCl
-Acido Ntrico 1% (v//v) HNO
3
-Sulfato de Cobre pentahidratado 2% (w/v)
-Nitrato de Potasio p. a. (KNO
3
)
-Sulfanilamida 10 g.L
-1
(C6H8N2O2S)
-Dihidrocloruro de N-(1-naftil)etilendiamina 1 g.L
-1
(C
12
H
14
N
2
.2HCl)
PROCEDIMIENTO ANALITICO
a) Tratamiento previo de cadmio granulado
- Lavar con cido ntrico 1 % (v/v) y enjuagar con bastante agua destilada.
- Lavar con cido clorhdrico 1 % (v/v) y enjuagar con abundante agua destilada.
- Lavar con sulfato de cobre pentahidratado 2 % (w/v) y enjuagar con agua
destilada.
b) Preparacin de la columna
En los extremos de la columna de vidrio se coloca algodn de vidrio y lminas de cobre,
mientras que en la parte central, el cadmio granulado es empaquetado en forma
homognea, evitando la formacin de burbujas.
c) Clculo del factor de la columna de reduccin
41
- Secar aproximadamente 2 g de nitrato de potasio p.a., a una temperatura de 105 C
durante 2 horas.
- Preparar una solucin estndar (I), pesando 1,02 g de KNO
3
y enrasando a 1 L.
- Preparar una solucin estndar (II) de 10 mol.L
-1
, a partir de la solucin estndar
(I), debe prepararse diariamente.
- A 500 mL de esta solucin, agregar 10 mL de cloruro de amonio concentrado y
agitar.
- Verter a la columna de reduccin, la solucin antes preparada y regular el flujo de
salida entre 10 y 12 mL/minuto.
- Recoger de la columna los ltimos 25 mL de solucin y agregarle 0,5 mL de la
solucin de sulfanilamida, agitar y esperar entre 2 y 8 minutos.
- Agregar 0,5 mL de la solucin de N-(1-naftil)-etilendiamina, agitar y esperar por lo
menos 10 minutos.
- Leer la absorbancia en el espectrofotmetro, con una celda de 1 cm y a una
longitud de onda de 543 nm.
d) De la muestra
- A 50 mL de agua de mar agregar 1 mL de la solucin concentrada de cloruro de
amonio.
- Verter la muestra en la columna reductora.
- Recibir los primeros 20 mL de la muestra y desecharlos
- Colectar los subsiguientes 25 mL de muestra y aadir inmediatamente 0,5 mL del
reactivo sulfanilamida, mezclar y dejar reposar 2 a 8 minutos.
- Aadir 0,5 mL del reactivo dihidrocloruro de N-(1-naftil) etilendiamina, agitar y
esperar 10 minutos para que la solucin logre su mxima intensidad de color. El
color es estable durante 2 horas.
- Medir la absorbancia de la muestra en el espectrofotmetro, a una longitud de onda
de 543 nm, usando una celda de 1 cm para muestras concentradas y de 5 cm para
muestras diludas.
- Hacer un blanco de reactivos con agua destilada para corregir la absorbancia
medida por sustraccin.
e) Determinaci n de la concentracin de nitritos
- Solucin estndar: a partir de una solucin estndar de 10 mol/L de nitrito de
sodio, se prepara una serie de concentraciones para determinar su factor de
calibracin.
- Muestra: a 25 mL de la muestra aadir inmediatamente 0,5 mL del reactivo sulfanilamida,
mezclar y dejar reposar 2 a 8 minutos.
- Aadir 0,5 mL del reactivo dihidrocloruro de N-(1-naftil) etilendiamina, agitar y
esperar 10 minutos para que la solucin logre su mxima intensidad de color. El
color es estable durante 2 horas.
- Medir la absorbancia de la muestra en el espectrofotmetro, a una longitud de onda
de 543 nm, usando una celda de 1 cm para muestras concentradas y de 5 cm para
muestras diludas.
- Hacer un blanco de reactivos con agua destilada para corregir la absorbancia
medida por sustraccin.
- Clculo de la concentracin de nitritos:
42
C = (Ac x F
1
)
Donde:
C = Concentracin de nitritos en la muestra (mol NO
2
.L
-1
)
Ac = Absorbancia corregida
F
1
= Factor de la curva de calibracin
f) Clculos
- Factor de la columna de reduccin (F
2
):
F
2
= 10 / (As-Ab)
Donde:
As = Absorbancia del estndar de columna (estndar de 10 mol.L
-1
de KNO
3
)
Ab = Absorbancia del blanco
La eficiencia de la columna para una solucin estndar de 10 mol.L
-1
, se
determina porque su absorbancia no debe ser menor que 0,450. Si 20 < F
2
< 22.2,
entonces la columna de reduccin est lista para ser utilizada.
- La concentracin de nitratos se calcula con la siguiente frmula:
N (mol.L
-1
) = (Ac x F
2
) C
Donde:
N = Concentracin de nitratos (mol NO
3
.L
-1
)
Ac = Absorbancia corregida
F
2
= Factor de la columna de reduccin
C = Concentracin de nitritos en la muestra (mol NO2.L
-1
)
N (mg NO3.L
-1
) = N (mol.L
-1
) * (0,014)
G. DETERMINACION DE FOSFATOS
METODO:
Espectrofotomtrico.
REFERENCIAS
STRICKLAND, J. D. and T.R. PARSONS 1968. A manual of seawater analysis. Research
Board of Canada. Bull. N 125.
GRASSHOFF K., K. KREMLING and M. EHRHARDT 1999. Methods of seawater Analysis.
COLECTA Y PRESERVACION
La colecta de agua de mar para muestras de super ficie se realiza mediante un recipiente
plstico (balde), y para las de profundidad se utilizan las botellas Niskin. El agua es
43
colectada en botellas de polietileno de 100 mL, previamente enjuagadas con el agua de mar
a ser analizada. Si la muestra tiene mucho material particulado en suspensin se
recomienda filtrar (filtro de 0,45 um y de acetato de celulosa) y refrigerar
inmediatamente si el anlisis se realiza dentro de las 24 horas. En caso contrario,
congelar la muestra por un tiempo mximo de 72 hor as hasta su anlisis
INTERFERENCIAS
Los iones arsenato producen un color similar al fosfato, pero puesto que su concentracin
natural en el mar es de slo 0,01-0,03 mol.L
-1
, no interfieren seriamente en la
determinacin de fosfato.
Puesto que un alto contenido de sulfuro de hidrgeno est generalmente asociado con un
alto contenido de fosfato, puede eliminarse el efecto del sulfuro por simple dilucin de la
muestra con agua destilada. Si acaso la concentracin de fosfato fuera tan baja que hiciera
imposible diluir, debe oxidarse el sulfuro con agua de bromo al 0,9 % agregada a la muestra
acidificada (0,2 mL de cido 4,5 mol.L
-1
por cada 100 mL de muestra).
EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS
Equipos
-Espectrofotmetro UV-Visible
-Balanza Analtica (0,1 mg)
-Destilador Elctrico
-Bomba de vaco elctrica
Materiales
-Erlenmeyer 125 mL
-Pipeta Graduada de 10 mL
-Pipetas volmtricas de 1, 2, 5, 10, 20 mL tipo A
-Fiolas de 100 mL tipo A
-Probetas de 50 mL
-Embudo de vidrio
-Kitasato de 1 L
-Esptulas
-Bombillas Succionadoras
-Celdas de absorcin de luz de 1 y 5 cm
-Papel de filtro de acetato de celulosa de 0.45 um
Reactivos
-Acido sulfrico p.a. (140 mL/900 mL agua destilada)
-Acido ascrbico p.a. 54 g.L
-1
-Tartrato antimonil p.a. 1,36 g.L
-1
-Molibdato de Amonio p.a. 30 g.L
-1
-Fosfato dihidrgeno de potasio p.a.
-Agua destilada
-Mezcla de reactivos (Tabla A.4)
PROCEDIMIENTO ANALITICO
a) Curva de Calibracin
44
- Secar aproximadamente 2 gr de fosfato dihidrgeno de potasio p.a., a 105 C
durante 2 horas.
- Pesar 0,816 g de KH
2
PO
4
y enrasar a 1 L (solucin estndar I).
- Preparar una solucin con 60 mol.L
-1
, a partir de la solucin anterior (solucin
estndar II).
- Preparar soluciones de concentraciones: 0,6; 1,2; 1,8; 2,4; 3,0; 3,6 y 4,2 mol.L
-1
a
partir de la solucin estndar II.
- Tomar 25 mL de cada solucin y agregar 2,5 mL de la mezcla de reactivos (Tabla
- A.4), agitar y esperar entre 30 minutos y 2 horas.
- Leer la absorbancia en el espectrofotmetro a una longitud de onda de 885 nm,
utilizando una celda de 1 cm.
- Hallar el factor F por regresin lineal.
b) De la muestra
- Preparar la mezcla de reactivos, de acuerdo a la Tabla A.4, calculada para 25
muestras.
- A 25 mL de agua de mar agregar 2,5 mL de la mezcla de reactivos y agitar.
- Despus de 30 minutos y dentro de 2 horas, se mide la extincin de la muestra a
885 nm empleando un espectrofotmetro y usando una celda de 1 cm de paso
para muestras concentradas y celda de 5 cm para muestras diludas.
- Hacer un blanco de reactivos con agua destilada para corregir la extincin medida
por substraccin.
Tabla A.4. Volumen de solucin necesario para preparar la mezcla de reactivos.
REACTIVOS VOLUMEN (mL)
Molibdato de amonio 12,50
Acido sulfrico 31,25
Acido ascrbico 12,50
Tartrato antimonil potsico 6,25
c) Clculos
La concentracin de fosfatos se calcula con la siguiente frmula:
P (mol.L
-1
) = Ac x F
Donde:
P = Concentracin de fosfatos (mol PO4.L
-1
)
Ac = Absorbancia corregida
F = Factor de calibracin del equipo (curva de calibracin).
P (mg PO
4
.L
-1
) = P ((mol.PO
4
.L
-1
) * (0,031)
H. DETERMINACION DE MACROBENTOS DE FONDO BLANDO
45
METODO
Mediante identificacin de especies, conteo de individuos y pesado hmedo.
REFERENCIAS
CARBAJAL, W. 1998. Deteccin de los efectos ambientales sobre las comunidades
marinas. Manual curso de entrenamiento. Instituto del Mar del Per.
CARRASCO, D. F. y V. GALLARDO. 1989. La contaminacin marina y el valor de la
macroinfauna bentnica en su evaluacin y vigilancia: casos de estudio en el litoral de
Concepcin, Chile. Biologa Pesquera, 18: 15-27.
PEARSON, T.H. and R. ROSENBERG. 1978. Macrobenthic succession in relation to
organic enrichment and pollution of the marine environment. Oceanography and Marine
Biology, An. Annual Review, 16: 229 311.
COLECTA Y PRESERVACION
- La muestra es colectada mediante una Draga tipo Van Veen de 0,05 m
2
de rea de
mordida, la cual es lanzada desde la embarcacin. En cada estacin de muestreo se debe
tomar la muestra por triplicado.
-Tras la recoleccin de la muestra del fondo, se vierte todo el contenido de la draga a las
bolsas tamiz de 500 m de tamao de poro y se lava con agua de mar cuidadosamente
eliminando todo el fango.
- Luego el material retenido es trasladado con cuidado a los frascos muestreo de plstico
de 0,5 L previamente rotulados. Enseguida las muestras deben ser fijadas con una
solucin de formalina al 10 % tamponada con brax. Los frascos deben ser llenados con
la solucin de formalina hasta casi el tope del frasco. No hay tiempo de caducidad de la
muestra.
- Los frascos de muestreo deben ser etiquetados o rotulados anotando lo siguiente:
Nmero de estacin y nmero de rplica, lugar de muestreo, fecha, volumen de muestra
(porcentaje de llenura de la draga), responsable de la colecta.
EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS
Equipos
- Microscopio estereoscopio y microscopio compuesto
- Balanza Analtica: rango de medida 0,0001 200 g.
Materiales
- Draga Van Veen con 0,05 m
2
de rea de mordida
- Frascos de plstico (boca ancha) con 0,5 L de capacidad
- Bolsas tamizadores con 500 m de tamao de poro
- Juego de Tamices de 300 500 m de tamao de poro
- Pinzas de punta fina
- Esptulas
- Papel Canson
- Bandejas de plstico
46
Reactivos
- Formalina comercial (40%)
- Brax
- Azul de Metileno
- Rosa de Bengala
- Alcohol (96)
PROCEDIMIENTO ANALITICO
a) Anlisis de la muestra
-Verter el contenido de los frascos en tamices de 300 m y lavar las muestras varias
veces con agua corriente para eliminar toda la formalina.
-Examinar las muestras con un microscopio estereoscopio y separar los organismos por
categoras taxonmicas (p.e. moluscos, crustceos, poliquetos, equinodermos, otros).
Para facilitar la separacin de los poliquetos se pueden teir adicionando rosa de bengala
(200 mg.L
-1
) en el preservante de formol durante 24 horas como mnimo. Para facilitar la
identificacin de los moluscos se puede emplear el azul de metileno.
-Identificar los organismos con ayuda del microscopio estereoscopio o un microscopio
compuesto segn sea el caso hasta el mnimo nivel taxonmico posible.
-Posteriormente se procede a contar y pesar (peso hmedo) la cantidad de individuos por
especie presentes por cada rplica. Para el recuento de los individuos slo considerar
aquellos especmenes que posean regin ceflica.
b) Clculos:
Con los datos de densidad, biomasa y nmero de especies, se procede a la
determinacin cuantitativa de los siguientes parmetros comunitarios:
- Riqueza especfica:
d = (S 1) / log N donde: S: nmero de especies
N: nmero de individuos.
- Densidad o abundancia relativa (N ind/0,05m
2
)
A = n
i
/ N donde: n
i
: abundancia de la especie i
N: nmero total de individuos
- Biomasa relativa (g/0,05 m
2
)
B = w
i
/ W donde: w
i
: peso en g. de la especie i
W: peso total de los individuos
- Diversidad especifica de Shannon y Wiener (bits/ind.):
H = - (P
i
log2 P
i
) donde: P
i
: = n
i
/ N
- Equidad de Pielou:
J = H / H
max
donde: H
max
= log
2
S
S : numero de especies
H: Indice de diversidad.
47
c) Criterios para interpretacin de los resultados
Se considera que el incremento en los niveles de perturbacin ambiental producen:
- Aumento de la abundancia de algunas especies (especies oportunistas).
- Disminucin de la biomasa total de la comunidad.
- Disminucin de la diversidad (H). La magnitud del impacto en las comunidades
macrobentnicas de fondo blando, medida a travs de la diversidad (Shannon y
Wiener) se puede dividir en 4 niveles:
Compatible : > 3 bits/ind.
Medio : 2 - 3 bits/ind.
Severo : 1 - 2 bits/ind.
Crtico : < 1 bits/ind.
- Disminucin de la riqueza de especies (d).
- Disminucin de la equidad (J).
- Cambios en la relacin abundancia, biomasa y especies (curvas SAB de Pearson y
Rosenberg, 1978).
I. DETERMINACION DE MATERIA ORGANICA EN SEDIMENTOS
METODO
Prdida por ignicin.
REFERENCIAS
Journal of Sedimentary Petrology. Vol. 44, N 1, p. 242-248. March. 1974
COLECTA Y PRESERVACION
La colecta se realiza empleando una draga tipo Van Veen, de 0,05 m
2
, separar slo los
primeros 3 cm del sedimento superficial.
Una vez colectada la muestra, sta debe mantenerse congelada hasta su respectivo
anlisis, a fin de minimizar la descomposicin microbiolgica.
INTERFERENCIAS
Las posibles interferencias que afectan los resultados son: la temperatura de secado y la
perdida de material pulverizado durante la pesada etc.
EQUIPOS Y MATERIALES
- Balanza analtica
- Estufa
- Mufla
- Mortero con piln
48
- Crisoles de cermica
- Desecador
- Pinzas
- Esptula (plstica o metlica)
- Bolsas Zipper
- Frascos plsticos de 250 mL de boca ancha
PROCEDIMIENTO ANALITICO
a) Pulverizar la muestra de sedimento previamente secado y pesar de 1 a 2 g en un
crisol cermico
b) La muestra pulverizada contenida en un crisol de cermica previamente pesado es
secada durante una hora en una estufa de 90 a 100C
c) Enfriar la muestra a temperatura ambiente en un desecador; el crisol con la muestra
es pesado. Una vez determinada el peso seco de la muestra se procede a realizar los
clculos de la perdida de peso (P
1
).
d) El crisol con la muestra son colocados en una mufla y calentados a 550C durante una
hora. Despus del enfriamiento a la temperatura ambiente se vuelve a pesar la
muestra (P
2
). La diferencia entre este peso (P
2
) y el peso seco es la cantidad de
materia orgnica incinerada.
e) Clculos:
El porcentaje de materia orgnica total en el sedimento se calcula con la siguiente
frmula:
% MOT = (P
1
- P
2
) * 100 / P
1
Donde:
%MOT = Porcentaje de materia orgnica total
P
1
= Peso muestra seca a 100C
P
2
= Peso despus de incinerar a 550C
49
ANEXO 4 FORMATO PARA REPORTE DE EFLUENTES Y CUERPO MARINO RECEPTOR
DE LA INDUSTRIA PESQUERA PARA EL CONSUMO HUMANO INDIRECTO
1. - DATOS DE LA EMPRESA
Razn Social :
Direccin :
Ubicacin de la Planta :
Telfono de la Planta :
Responsable de la Planta :
Responsable del Muestreo
.
.
Responsable del anlisis
.
Fecha ..
2. - DATOS DE MATERIA PRIMA
Embarcaci n Pesquera
1
Nombre Matrcula
Especi e
Talla Promedi o
( cm)
Zona de captura
Fecha y hora de
pri mera cal a
Fecha y hora de inicio de
descarga
1
Sol o de aquel l as embarcaciones que se obtuvo muestras para l a muestra compuesta
3. - PRODUCCION (
2
)
Materi a Pri ma Reci bi da
( Tm)
Harina Producida
( Tm)
Tipo de Harina
Rendi mi ent o
(m. p. / Producci n)
Acei te Produci do
( Tm)
Acei t e recuperado del
tratamiento de espumas (Tm)
2
Produccin referida al da de muestreo.
4. - AGUA DE BOMBEO Y TRATAMIENTO
Ti po de t rat ami ent o Cdigo del
Compuesto (
3
)
Fecha y Hora de la muestra
compuest a
Caudal m
3
/s
Relacin
Agua / Pescado
N de Filtros :
Trat ami ent o de
Espumas
N Si st. de Fl otac. con Mi corburbuj as : SI NO
Coagul antes y Fl ocul antes :
N de Emi sores :
(
3
) Hace ref erenci a a l a muest r a compuest a
5. - OTROS EFLUENTES
Ti po de t rat ami ent o : Cdigo de
Muest r a
Fecha
Hor a de Muest r eo
Caudal m
3
/s
Ti po de ef l uent e
descargado
N de puntos de descarga :
50
6. - CONTROL DE MUESTRAS DE EFLUENTE Y AGUA RECEPTORA Fecha de Muestreo:
Coordenadas
Geogrfi cas Punt os de
Muest r eo
LAT LONG
Profundidad
( m)
Oxigeno
Di suel to
( mg/ L)
DBO5
( mg/ L)
SST
( mg/ L)
Acei tes y
grasa
( mg/ L)
pH
Temperatura
(C)
Fosfatos
( mg/ L)
Ni tratos
( mg/ L)
Sul furos
( mg/ L)
1
er a
Muest r a
--------------
--------------
--------------
--------------
--------------
2
da
Muest r a
--------------
--------------
--------------
--------------
--------------
A
g
u
a
d
e
B
o
m
b
e
o
3
er a
Muest r a
--------------
----- ---------
--------------
--------------
--------------
Otros Efl uentes --------------
--------------
--------------
--------------
--------------
Orilla de Playa --------------
--------------
--------------
Superficie --------------
--------------
--------------
Medi a
agua
4
--------------
--------------
- - - - - - - - - - - - - -
--------------
--------------
C
h
a
t
a
Fondo
- - - - - - - - - - - - - -
--------------
Superficie
--------------
--------------
--------------
Medi a
agua
4
--------------
--------------
- - - - - - - - - - - - - -
--------------
--------------
F
i
n
a
l
d
e
l
E
m
i
s
o
r
Fondo
- - - - - - - - - - - - - -
--------------
Superficie
--------------
--------------
--------------
Medi a
agua
4
--------------
--------------
- - - - - - - - - - - - - -
--------------
--------------
A
2
0
0
m
e
t
r
o
s
d
e
l
f
i
n
a
l
d
e
l
E
m
i
s
o
r
Fondo
- - - - - - - - - - - - - -
--------------
Superficie
--------------
--------------
--------------
Medi a
agua
4
--------------
--------------
- - - - - - - - - - - - - -
--------------
--------------
A
g
u
a
s
a
b
a
j
o
(
m
u
e
s
t
r
a
d
e
r
e
f
e
r
e
n
c
i
a
)
Fondo
- - - - - - - - - - - - - -
--------------
(
4
) Solo para estaciones con ms de 10 metros de profundidad.
7. - CONTROL DE MUESTRAS DE SEDIMENTO (
5
) Fecha de Muestreo:
Puntos de muestreo Granulometra Materia orgnica Macrozoobentos de fondo bl ando
Chata
Final del emisor
A 200 m del final del emisor
Aguas abaj o (muestra de ref erenci a)
(
5
) Cuando Corresponda el muest reo ( 1 vez cada dos aos)