CARBOXIPEPTIDASES

Marcos Pereira
Bioinorgnica, UFSC

Carboxipeptidases foram as primeiras das protases descobertas. Em 1929,
Waldschmidt-Leitz and Purr descobriram no soro pancretico bovino uma molcula que
clivava os carbonos terminais de aminocidos de peptdeos acilados. Desde ento um
estudo profundo mostrou que estas enzimas tm uma grande funo no organismo,
auxiliando na degradao de polipeptdios em monmeros especficos para a utilizao
em molculas importantes para o ser vivo.
A carboxipeptidase A e B so de fundamental importncia para a qumica
inorgnica, devido ao seu centro metlico de Zn
2+
. O centro da enzima, onde se
encontra o on, possui um formato de bipirmide trigonal devido ao seu nmero de
coordenao de cinco tomos, e tambm um mecanismo complicado de ao na
degradao de peptdeos. Porm isso no impede que cada vez haja estudos mais
aprofundados sobre sua funo, tendo em vista o conhecimento necessrio para sua
aplicao em frmacos.
























CARBOXIPEPTIDASES

Marcos Pereira
Bioinorgnica, UFSC

Peptidase qualquer enzima que gera a protelise, ou seja, inicia o catabolismo
proteico pela hidrlise de ligaes peptdicas que liga os aminocidos junto cadeia
polipeptdica formando a protena. A protease pode ser encontrada em animais, plantas,
bactrias, archea e vrus.
Metalopeptidase qualquer enzima protease na qual o mecanismo de catalise
envolve um metal. A maioria das metalopeptidases requerem zinco, como a
carboxipeptidase A, carboxipeptidase B, glicil-glicina e dipeptidase, mas algumas usam
tambm mangans, como polidase e iminodipeptidase. H dois grupos de
metaloproteases: exopeptidases e endopeptidases
Uma exopeptidase a peptidase que catalisa a clivagem de uma ligao
peptdica terminal (ou a penltima). O processo libera um nico aminocido ou
dipeptdeo da cadeia de aminocidos. Dependendo se o aminocido liberado do
terminal amino ou carboxi, uma peptidase classificada como uma aminopeptidase ou
uma carboxipeptidase, respectivamente.
A carboxipeptidase A uma enzima produzida no pncreas de animais
superiores com um composto de trs cadeias polipeptdicas, que por ativao com
tripsina, gera a enzima com uma nica cadeia polipeptdica, contendo 307 resduos de
aminocidos e massa molecular de aproximadamente 34,5 kDa. O pncreas produz
tambm outro zimogneo, que por ativao produz carboxipeptidase B. As duas
enzimas so muitos similares nos detalhes gerais do mecanismo cataltico: ambas
requerem que o grupo carboxlico do resduo carboxi-terminal seja livre e ambas
possuem Zn2+ no stio ativo, essencial para a atividade cataltica. Entretanto, possuem
especificidades bem diferentes: carboxipeptidase B hidrolisa ligaes peptdicas
contendo arginina e lisina carboxi-terminais, enquanto carboxipeptidase A requer que os
resduos carboxi-terminais no sejam arginina, lisina ou prolina.
Na carboxipeptidase A, o on Zn
2+
est coordenado com trs resduos de
aminocidos, His
196
, His
69
e Glu
72
e uma molcula de gua; entretanto dependendo do
tamanho e natureza do substrato, este on tambm pode interagir com Arg
71
, Tyr
198
e
Phe
279
. O on Zn
2+
pode ser removido por fortes agentes quelantes, como por exemplo,
EDTA e 1-10 fenantrolina, e substitudo por Co
2+
, Ni
2+
e Pb
2+
. No entanto, a enzima
ter atividade menor que a original.
O mecanismo de ao desta enzima pode ser explicado da seguinte forma. A
cadeia lateral do resduo carboxi-terminal a ser liberado liga-se a uma cavidade
hidrofbica expulsando molculas de gua. Essa interao hidrofbica a base da
preferncia desta enzima por cadeias laterais aromticas ou alifticas volumosas. No
caso da hexopeptidase B, especfica para lisina e arginina carboxi-terminais, a cavidade
hidrofbica contm um resduo aspartato.
O oxignio carbonlico da ligao peptdica susceptvel coordena-se com o on
zinco, que atua como um cido de Lewis e polariza o grupo carbonila da ligao
peptdica susceptvel, facilitando o ataque de carbono polarizado pelo grupo carboxlico
Glu270, ou por uma molcula ativada de gua.
Grandes mudanas conformacionais ocorrem na etapa de ligao do substrato. O
grupamento guanidina da Arg145 move-se 2 para se ligar ionicamente ao grupo
carboxilato terminal do substrato. O grupo hidroxila da Tyr
248
move-se 12 , a partir da
superfcie da molcula, para formar uma ligao de hidrognio com o NH da ligao
peptdica susceptvel e uma ligao com o NH da penltima ligao peptdica. Uma
importante consequncia deste movimento o fechamento da cavidade do stio ativo,
expulsando a gua, e por ltimo, o movimento de 2 do grupo carboxilado do Glu
270
.
O Glu
270
forma um anidrido com o tomo de carbono polarizado da ligao
peptdica susceptvel (ou o Glu
270
promove o ataque da molcula de gua sobre esse
tomo de carbono polarizado). A carga negativa do tomo de oxignio no intermedirio
tetradrico estabilizada por uma interao eletrosttica com a cadeia lateral, carregada
positivamente, da Arg
127
, que se moveu para uma posio estratgica prxima. O
substrato ligado envolvido por todos os lados pelos agrupamentos catalticos da
enzima. O intermedirio anidrido carboxlico formado torna a ligao cindvel pronta
para o ataque por uma molcula de gua que est ligada ao Zn
2+
. A molcula de gua
altamente polarizada transfere um prton para o agrupamento NH, quebrando a ligao
cindvel.
A cadeia polipeptdica que sobrou deixa o stio ativo, as mudanas
conformacionais so revertidas e o resduo carboxi-terminal deixa a cavidade
hidrofbica, permitindo a reentrada das molculas de gua.
Devido s muitas maneiras nas quais pequenos peptdeos podem influenciar a
ao dos hormnios, o estudo do mecanismo das carboxipeptidases auxiliou na busca de
inibidores da metalopeptidases contendo tomos de Zinco, tais como a enzima
conversora da angiotensina (ECA), que resultaram em um desenvolvimento bem
sucedido de produtos farmacuticos sob medida para o tratamento e controle da presso
alta.


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