DETERMINACION DE LA CONCENTRACION DE CAFEINA EN

UNA BEBIDA ENERGIZANTE (MONSTER ENERGY) POR

CROMATOGRAFIA HPLC


RESUMEN
Este laboratorio consisti en la determinacin de la concentracin de cafena
en una bebida energizante (MONSTER ENERGY) mediante el rea de la seal
cromatografca. Para ello se realiz una curva de calibracin inyectando en el
HPLC muestras de cafena de concentracin conocida, obteniendo como
resultado una ecuacin de la recta de:

Area [g/L]= 28662 * (masa inyectada [mg]) + 32303

Luego utilizando los valores obtenidos en la curva de calibracin se realiza la
inyeccin en el HPLC de muestra de la bebida energizante existente en el
comercio para analizar su contenido de cafena, obteniendo como resultados:

MONSTER ENERGY 3,10 ppm en una botella de 473 ml
.

PALABRAS CLAVES: cromatografa HPLC, cafena, rea, concentracin.

ABSTRACT
This laboratory was to determine the concentration of caffeine in an energy
drink (MONSTER ENERGY) by the area of the chromatographic signal. This
was achieved by injecting a calibration curve in the HPLC samples of known
concentration of caffeine, resulting in a linear equation of:
Area [g/L]= 28662 * (masa inyectada [mg]) + 32303

Then using the values obtained in the calibration curve is injected into the HPLC
sample of existing energy drink trade to analyze its caffeine content, obtaining
the following results:
MONSTER ENERGY 3,10 ppm in a 473 ml bottle.
KEYWORDS: HPLC, caffeine, area, concentration.

INTRODUCCION
El HPLC (HIGH PERFORMANCE LIQUID CROMATOGRAPHY) o
Cromatografa liquida de alta resolucin, es una tcnica cromatogrfica usada
para separar componentes usando una variedad de interacciones qumicas
entre el analito y la columna cromatogrfica.
Bsicamente es un sistema compuesto de un reservorio de fase mvil, bomba,
inyector, columna de separacin y detector. El analito se pasa a travs de una
columna de la fase estacionaria bombeando la fase mvil liquida con alta
presin. La muestra se introduce en pequeos volmenes a la corriente de la
fase mvil y all se retarda por medio de interacciones qumicas con la fase
estacionaria mientras atraviesa la columna. El retardo se conoce como tiempo
de retencin, nico para analito. Depende de la naturaleza del analito, de la
fase estacionaria y de la composicin de la fase mvil. Los solutos ms
comunes usados en la fase mvil son combinaciones de agua purificada con
lquidos orgnicos, los ms comunes son Metanol y Acetonitrilo, tambin
suelen usarse sales y bufferes para contribuir a la separacin de componentes.
Tambin se usa el cido Trifluoroacetico para actuar como formador de pares
inicos. Estas combinaciones introducen el concepto de gradiente de elucin.
Consiste en la variacin de la composicin de la fase mvil, para adaptarse a
los diferentes analitos y conseguir mejores resultados. El gradiente separa la
matriz del analito en funcin de la afinidad del analito por la composicin de la
fase mvil. Cada analito tiene un gradiente de elucin ptimo para obtener la
mxima separacin de picos en el detector. [1]
Se consideran dentro del grupo de productos estimulantes o fruitivos
principalmente a aquellos tales como el caf, el t, el cacao, sus derivados y la
yerba mate, incluyndose tambin a otros como el guaran y la cola,
actualmente estn comercializndose las llamadas bebidas energizantes.

Estos productos con excepcin del cacao y sus derivados no tienen valor
alimenticio y se consumen slo por las propiedades de ser bebidas
estimulantes y en algunos casos refrescantes. Poseen ciertas caractersticas
en comn, son productos naturales (sin considerar las bebidas energizantes)
que han sido tratados por calor para adquirir aromas caractersticos y contienen
alcaloides tales como cafena (1,3,7-trimetilxantina) y teobromina (3,7-
dimetilxantina). El contenido de cafena es utilizado para evaluar la calidad de
productos tales como caf, t, cacao.


Estructura qumica de la cafena (1,3,7-trimetilxantina)

La cafena estimula el sistema nervioso central y el msculo cardaco y relaja el
msculo liso, especialmente la fibra muscular bronquial, y acta sobre el rin
causando diuresis. La cafena tambin provoca un ligero aumento de la tasa
del metabolismo basal e incrementa la capacidad para el esfuerzo muscular.
Ejerce un efecto fortalecedor y estimulante sobre diversas funciones como la
resistencia fsica, el trabajo individual o el manejo de equipos cuando estas
funciones se ven disminuidas por efecto de la fatiga. La dosis considerada
como teraputica de cafena para un adulto es de aproximadamente 180 mg.
La cafena se ha asociado con la hiperactividad en nios causada por el
consumo de bebidas que la contienen.

Para determinar el contenido de cafena existen procedimientos clsicos que
por lo general se basan en una extraccin seguida de la determinacin de
nitrgeno por Kjeldahl; tambin es posible realizar la medida
espectrofotomtrica UV. Los mtodos modernos se basan en separaciones
cromatogrficas entre los que tiene especial relevancia la cromatografa lquida
de alta performance (HPLC). [2]


.
METODOLOGIA
En la parte experimental se utiliz distintas soluciones a diferentes
concentraciones (0, 10, 20, 30, 40,50 y 100 ppm) de cafena y luego se
inyectaron en el HPLC para obtener la curva de calibracin absoluta.
Se toman aproximadamente 20 ml de muestra se agita constantemente con
una agitador de vidrio hasta desaparecer las burbujas producidas por el gas de
la bebida. Luego se lleva al equipo de ultra sonido durante 15 minutos para
eliminar por completo el gas de la bebida, seguidamente se toma una alcuota
de 3 ml se lleva a u baln de 25 ml y se afora con una solucin de 80:20 Agua
HPLC y Etanol la fase mvil antes de inyectar en el cromatgrafo se realiza una
filtracin al vaco utilizando un filtro de membrana de poro de 4,5m;
posteriormente se toma una alcuota de 2 ml con una jeringa que tiene un filtro
de GD/X, 13 mm se deposita en un vaso de precipitado, posteriormente se
toma una alcuota de 15 L con una micro jeringa para cromatografa, y
finalmente se inyectan en la columna estacionaria del cromatgrafo HPLC.


RESULTADOS Y ANALISIS
Tabla N
0
1: Datos curva de calibracin patrn cafena









Grafica N
0
1: Curva de calibracin patrn cafeina



y = 28662x + 32303
R = 0.9972
0
500000
1000000
1500000
2000000
2500000
3000000
3500000
0 20 40 60 80 100 120
A
R
E
A

CONCENTRACION CAFEINA (ppm)
CONCENTRACION (ppm) Vs AREA
Conc.(ppm) rea
0 0
10 591990
20 641765
30 930582
40 1135890
50 1405082
100 2927006
Clculos:

Teniendo en cuenta la curva de calibracin y la lectura de la dilucion
correspondiente de la muestra, el resultado final se expresa en g de cafena
por 100 g de producto, segn la legislacin vigente.

A = a x c + b

Ecuacin de la curva de calibracin
A = rea
c = concentracin de cafena de la solucin inyectada (mg/l)
a = pendiente de la curva de calibracin
b = ordenada al origen de la curva de calibracin

Despejando tenemos que:






Por lo tanto:

25, 84 ppm


=3,10 ppm cafena

Por ende:


V = volumen final de la solucin
f = factor correccin de volumen de acuerdo a las diluciones realizadas
m = masa o volumen inicial del producto analizado (segn Tabla

Este estudio describe la cuantificacin de cafena presente en la bebida
energizante MONSTER ENERGY de 473 ml de contenido; analizado por
HPLC. La longitud de UV-Vis se fij a 254 nm para cafena. Bajo las
condiciones de HPLC utilizadas obtuvo un tiempo de retencin para la cafena
de 0,5341 min. La identificacin de los picos de cafena se logr por
comparacin de tiempos de retencin con patrones cafena.
El anlisis por HPLC es muy usado y ampliamente respaldado, de modo que
entrega valores slidos y confiables, por lo cual los errores estn directamente
relacionados con la manipulacin, preparacin e inyeccin de las muestras,
debido a esto es que para entregar un anlisis optimo es que se deben realizar
varias inyecciones de las muestras y obtener valores de un mismo rango para
asegurar un resultado reproducible.
La concentracin de cafena en la bebida energizante fue determinada con
base a las diluciones realizadas para preparar patrones y utilizando la curva
de calibracin estndar de cafena (r
2
= 0.9972, grafica 1).





CONCLUSIONES:
La cuantificacin de cafena en la bebida energizante fue posible determinarla
en las condiciones probadas, en tiempos cortos, con una buena resolucin,
precisin y exactitud. El HPLC es uno de los mtodos analticos ms usados en
la industria farmacutica por lo que el uso y manejo de los estudiantes les abre


BIBLIOGRAFIA
[1] GMEZ-ULLATE; SERRANO LVAREZ. Cromatografa principios y
aplicaciones [En lnea]: http://es.scribd.com/doc/11642417/Cromatografia-Fundamentos-
y-Aplicaciones

[2] Departamento de Qumica Orgnica-Area Bromatologa Facultad de
Ciencias Exactas y Naturales Universidad de BuenosAaires Trabajos
prcticos-laboratorio [En linea]: http://www.qo.fcen.uba.ar/Cursos/TecnoIII/guia.pdf

[3]