REPORTE DE ESTANCIA DE INVESTIGACIN

PROYECTO DE COOPERACIN BILATERAL BRASIL MXICO

UTILIZACIN DE LOS COMPONENTES LIGNOCELULSICOS DE BAGAZO DE CAA DE
AZCAR Y BAGAZO DE AGAVE PARA LA OBTENCIN DE MEMBRANAS POLIMRICAS
COMPUESTAS

M.C. Norma Alicia Bencomo Vargas

1. Obtencin de celulosa a partir de bagazo de Agave Tequilana Weber y
modificacin qumica.

1.1 Experimentos para obtener condiciones de hidrlisis cida para bagazo de agave:
Con base en las condiciones de la hidrlisis cida aplicada al bagazo de caa, se realizaron
tres experimentos de hidrlisis cida para el bagazo de agave, para obtener las mejores
condiciones de hidrlisis, teniendo como variante tres diferentes temperaturas que
fueron 170, 180 y 190C, la condicin del tiempo de reaccin fue de una hora para los
tres experimentos as como tambin fue igual la concentracin de cido sulfrico al 1%
m/v. Se trabaj con reactores de una capacidad de 200 mL como volumen total, donde se
coloc 17 gramos de bagazo seco mezclados con 170 mL de cido sulfrico, en una
relacin slido lquido de 1:10. Con la finalidad de que la reaccin de hidrlisis alcanzara
la temperatura deseada y se generara una presin dentro del rector de 12.8 kg/cm
2
, fue
necesario el empleo de un bao de aceite acondicionado para tal fin, como se muestra en
la figura 1.





Figura 1. Bao de aceite acondicionado para reactores.
Despus del tiempo de reaccin de la hidrlisis para cada experimento, los reactores se
enfriaron completamente en hielo, despus al bagazo pre tratado se le realizaron lavados
con agua destilada para obtener un pH neutro (Fig.2), el bagazo se coloc sobre un filtro
de papel, previamente secado por dos horas en estufa a 105C, y enfriado en un
desecador por media hora, para obtener el peso seco tanto del filtro como del porta filtro.
Los lavados se realizaron con ayuda de una bomba de vaco, es necesario lavar con
aproximadamente de 3 a 4 litros de agua destilada. Posteriormente el bagazo fue
depositado en cajas Petri de vidrio para eliminar el exceso de humedad, dejando el bagazo
sobre una estufa de 105C, por un periodo de uno a dos das. Fue necesario determinar el
peso seco del bagazo natural, utilizando una balanza de determinacin de humedad, en
donde se empleo una muestra de un gramo para cada experimento, el anlisis se llev a
cabo en un tiempo de media hora y a una temperatura de 105 C, determinando la
cantidad de humedad presente en la muestra.

Despus del periodo de reposo del bagazo sobre la estufa se determin el peso seco para
cada experimento, en una estufa a 105 C, donde se coloc el bagazo que fue pre tratado
con cido sulfrico y el filtro de papel utilizado para neutralizar el pH, en el porta filtro
donde fue secado el filtro correspondiente al experimento, se coloc dentro de la estufa
por una hora y se enfri por media hora en desecador, para ser pesado, se repiti esta
actividad las veces que sea necesario segn el experimento lo requiera hasta obtener el
menor peso seco del bagazo tratado, lo cual se indica cuando el peso registrado tiene un
aumento.

1.2 Hidrlisis cida y deslignificacin alcalina para experimentos de obtencin de
condiciones para el blanqueo:
Despus de obtener la mejor condicin de hidrlisis cida para el bagazo de agave, se
llevaron a cabo cuatro experimentos con la finalidad de obtener materia prima pre-
tratada con cido sulfrico y deslignificada con NaOH, para realizar experimentos con
diferentes variantes de blanqueo con la finalidad de conocer la mejor condicin. Se
realizaron cuatro hidrlisis cidas a una temperatura de 190C con un tiempo de reaccin
de una hora y una concentracin de cido sulfrico al 1%. La reaccin se realiz en
reactores de una capacidad de 500 mL, donde se coloc 35 g de bagazo peso seco,
mezclados con 350 mL de cido sulfrico para cada hidrlisis, se repiti el mismo
procedimiento para obtener un pH neutro, que en los experimentos realizados para
obtencin de condiciones de hidrlisis, hasta obtener el pesos seco de cada hidrlisis.

Posterior a la hidrlisis cida se llev a cabo la deslignificacin del bagazo, donde se
utilizaron reactores de 500 mL, con un tiempo de reaccin de una hora a una temperatura
de 100 C, y una dilucin del hidrxido de sodio e 1% m/v, con una relacin solido
lquido de 1:10, en cada reactor se coloc un mximo de bagazo peso seco de 35 g y un
volumen de NaOH de 350 mL diluido, los reactores se colocaron en bao de aceite para
llevar a cabo la reaccin de una hora, posteriormente se enfriaron en hielo al igual que en
la hidrlisis cida, y se realizaron los lavados necesarios con agua destilada para
neutralizar el pH de la masa, slo que a diferencia de la hidrlisis se utiliz en lugar de
filtro de papel un filtro de tela para realizar ms rpido el proceso de lavados con agua
destilada. Despus de terminada cada deslignificacin, el bagazo se coloc en cajas Petri
de vidrio para dejarse secar sobre estufa a 115C por uno o dos das, posteriormente se
determin la humedad de cada muestra en la balanza de determinacin de humedad, esto
debido a que la cantidad de masa tratada es grande y no es posible determinar peso seco
en estufa.



Figura 2. Proceso de lavado de la celulosa, con agua destilada, hasta obtener un pH neutro
retirando el cido sulfrico o el hidrxido de sodio.


1.3 Blanqueamiento con perxido de hidrogeno:
Previo al blanqueamiento con perxido de hidrgeno, se realiz el secuestro de metales
pesados que pudieran encontrarse en la pulpa, para lo cual se emple EDTA al 0.5%y agua
destilada. Primeramente se determin la humedad de la pulpa para poder obtener el peso
seco del material a tratar y poder as calcular la cantidad de EDTA para la masa. Despus
de determinar la humedad se coloc en una balanza; un vaso de precipitado, una bolsa de
plstico resistente, el bagazo a blanquearse, EDTA al 0.5 %y agua destilada con una
relacin de 1:10, se homogeniz la mezcla y se cerr la bolsa para ser colocada en bao
Mara a una temperatura de 70 C por una hora, posteriormente se filtr con dos litros de
agua destilada a 70C para remocin de EDTA y metales pesados, con ayuda de un bomba
de vaco. Despus de la quelacin, la masa se deposito en cajas Petri de vidrio y se dej
secar sobre estufa de 115 C por un da, para en seguida determinar peso seco del
material para ser blanqueado.

Para el blanqueamiento con perxido de hidrogeno, se prepar una solucin 3%v/v del
perxido, para una consistencia 5%m/v de la masa de bagazo a blanquearse. La masa y el
perxido fueron mezclados perfectamente en una bolsa de plstico y se someti a bao
Mara a temperatura de 70C por una hora, despus de este tiempo se lav la masa con
agua destilada a temperatura ambiente con ayuda de una bomba de vaco, nuevamente
se coloc la masa en caja Petri y se dej secar sobre la estufa por un da, para poder
determinar el peso seco de la masa.

1.4 Blanqueamiento con perxido de hidrgeno e hipoclorito:
Despus del blanqueamiento con perxido que se le aplic al material celulsico, se
realiz un blanqueamiento con hipoclorito, en este blanqueo el hipoclorito fue diluido en
una relacin 1:1, y se utiliz para cada gramo de bagazo modificado qumicamente, un
mililitro de la solucin de hipoclorito, se realizaron tres diferentes pruebas para conocer la
mejor condicin de blanqueo; en la primera al bagazo tratado qumicamente se le
adicion hipoclorito en las relaciones antes descritas a temperatura ambiente por 10
minutos y no se le aplic agitacin, en la
segunda prueba se agreg igualmente el hipoclorito, solo que a una temperatura de 70C
por 10 minutos y sin agitacin alguna, y por ltima prueba de blanqueo; se agreg el
hipoclorito de igual forma que en las pruebas anteriores, a una temperatura de 70C y con
agitacin manual por 10 minutos.

Despus de estas tres pruebas de blanqueo se realiz otra para bagazo slo tratado
qumicamente, no blanqueado con perxido de hidrgeno, en esta prueba se aplic
agitacin mecnica por 10 minutos y se utiliz hipoclorito de sodio 17 g/L, con la misma
dilucin que las pruebas anteriores y a temperatura ambiente. El material tratado
present mejor blanqueamiento por esta prueba, por lo cual se seleccion para el
blanqueo del posterior material a obtenerse.


1.5 Hidrlisis cida seleccionada:
El bagazo de agave en forma natural fue pre tratado con una solucin de cido sulfrico,
donde la lignina hidrolizada es obtenida durante la hidrlisis del bagazo de agave a una
temperatura de 190 C por un tiempo de 1 hora, generndose una presin dentro del
reactor de 12.8 kg/cm
2
, con una solucin de H
2
SO
4
diluido al 1%m/v. Debido a las
condiciones de extraccin, ocurre una transformacin de la materia prima vegetal, donde
los polisacridos son convertidos a monosacridos (pentosas y hexosas). Despus del
tiempo de reaccin, se enfriaron completamente los reactores en hielo para proceder a
obtener pentosas y hexosas, fue necesario secar y pesar un filtro de papel en un porta
filtro, en una estufa a 115C por 2 horas y se dej enfriar en un desecador por 40 minutos,
para realizar una secuencia de lavados con agua destilada hasta que se obtuvo un pH
neutro con ayuda de una bomba de vaco (Figura 3), el bagazo tratado con H
2
SO
4
, se
coloc encima de una estufa de 115C, por uno o dos das, con la finalidad de retirar
humedad hasta obtener una media de humedad de 10% aproximadamente,
posteriormente se determin el peso seco de cada hidrlisis.








Figura 3. Bomba de vaco empleada tanto en la hidrlisis cida como en la deslignificacin
alcalina.

1.6 Deslignificacin alcalina:
El bagazo pre tratado qumicamente en varias hidrlisis cidas se mezcl perfectamente
hasta obtener una homogeneidad de las muestras, y se separ una muestra de la mezcla
para la posterior caracterizacin. La deslignificacin alcalina del bagazo pre tratado se
realiz con NaOH al 1%m/v, con una relacin solido/liquido de 1:10, en reactores de 500
ml donde se mezcl 35 g de bagazo seco pre tratado con el hidrxido de sodio, para una
reaccin de 1 hora a 100C, posterior a la reaccin se dej enfriar en hielo el reactor para
proceder a lavar con agua destilada hasta obtener pH neutro, y dejar secar sobre estufa a
115C , uno o dos das, con la finalidad de retirar humedad hasta obtener una media de
humedad de 10%aproximadamente, posteriormente se determin el peso seco de cada
hidrlisis.

1.7 Blanqueamiento con hipoclorito:
Con el objetivo de remover la lignina residual contenida en la pulpa bruta, se blanque el
bagazo pre tratado y deslignificado, con hipoclorito en dilucin 1:1, se coloc por cada
gramo de bagazo seco 10 mL de la solucin de hipoclorito en un vaso de precipitado para
realizar una agitacin con un agitador mecnico (figura 4), por 10 minutos, despus de la
agitacin el bagazo fue lavado con agua destilada hasta un pH neutro, utilizando un filtro
de tela.








Figura 4. Agitador mecnico empleado en el blanqueamiento con hipoclorito.

1.8 Separacin de impurezas del bagazo de agave blanqueado:
Debido a la presencia de impurezas en el bagazo blanqueado, se procedi a la extraccin
realizando sedimentaciones y lavados del bagazo, se lav con aproximadamente 12 litros
de agua destilada por cada 25 g de bagazo seco.

Figura 5. Impurezas retiradas de la celulosa obtenida despus del proceso de blanqueo.

1.9 Modificacin Qumica de la Celulosa por Acetilacin:
El objetivo de la acetilacin fue disminuir la polaridad de las fibras, por la insercin de
grupos acetilo, tornndolas ms compatibles con la matriz apolar. La celulosa (66 g) fue
colocada en un matraz de vidrio, en conjunto con 334.43 g de cido actico glacial. El
sistema fue cerrado y mantenido a constante temperatura de 35C por 45 min, con
agitacin mecnica y mezclado manual constantemente para homogenizar la mezcla. En
esa temperatura fueron adicionados 410 mL de cido actico glacial conteniendo 1.24 mL
de cido sulfrico concentrado. El bao Mara fue mantenido a temperatura de 35C,
agitando por 2 y media horas. Despus de esa etapa, la mezcla fue enfriada a 18C para la
posterior adicin (gota a gota) de anhdrido actico (193.62 g) conteniendo 2.64 mL de
cido sulfrico concentrado, durante 3 h, sobre constante agitacin y mezclado manual.
Posteriormente se adicionaron 130.69 g de anhdrido actico mezclados con 1.78 mL de
cido sulfrico concentrado, agitando por 2 horas.

La mezcla se dej reposar una noche y posteriormente se adicionaron 200 g de cido
actico glacial conteniendo 0.19 mL de cido sulfrico concentrado, mezclando por un
tiempo de 1h y media. La preparacin de acetato primario se llev a cabo con un flujo
bajo, en una solucin de cido actico al 10%(8,8 L), agitando vigorosamente. El producto
fue filtrado y lavado con agua destilada, hasta quedar libre de cido, usndose un proceso
de filtracin continua con una duracin de 24 horas, para remover el cido antes de
colocar a secar. La obtencin de celulosa acetilada a partir de bagazo de agave, incluy
cuatro etapas principales (Fig. 6) (pre-tratamiento cido, deslignificacin alcalina,
blanqueo y acetilacin) anteriormente descritas, en cada una de estas etapas el objetivo
principal es el fraccionamiento de los tres componentes macromoleculares del bagazo de
agave; la celulosa, lignina y hemicelulosa, para de esta forma obtener nuestro material de
inters, la celulosa.



















Figura 6. Diagrama de obtencin de celulosa a partir de bagazo de agave.
Bagazo de agave
Pre-tratamiento con H
2
SO
4
al
1%m/v
Licor rico en
pentosas
Celulignina
Deslignificacin con NaOH 1%
Licor rico en lignina Celulosa Bruta
Blanqueo con Cloruro de
Sodio 17 g/L
Efluente Pulpa pre-blanqueada
Acetilacin de la Pulpa pre-blanqueada
T=190C
Tiempo=1h
Relacin s/L 1:10


2. Determinacin de carbohidratos y cidos orgnicos por HPLC

Los porcentajes de celobiosa, glucosa, xilosa, arabinosa y cido actico presentes en el
hidrolizado obtenido en la etapa de determinacin de lignina se analizaron por
cromatografa lquida de alta eficiencia (HPLC). Se filtr una pequea muestra de la
solucin en filtro Sep Pak C
18
y se analiz por HPLC en un cromatgrafo Shimadzu modelo
CR 7A empleando un detector de ndice de refraccin Shimadzu modelo RID-6A. Y una
columna Aminex HPX 87H (300x7, 8 mm, BIO-RAD). La fase mvil utilizada es H
2
SO
4
0.005
mol.L
-1
con flujo de 0.6 mL.min
-1
a 45C.

Las reas medias de los cromatogramas para celobiosa, glucosa, xilosa, arabinosa y cido
actico se convirtieron en equivalentes de celulosa, hemicelulosa y grupos acetilo,
respectivamente. Se dividieron las masas por el peso seco del material inicial y se
multiplic por el factor de hidrlisis. Los factores de conversin de glucosa y celobiosa
para celulosa son 0.90 e 0.95, respectivamente. De forma similar, xilosa y arabinosa
fueron convertidas a hemicelulosa usando el factor de 0.88. El factor de conversin de
cido actico a grupo acetilo es 0.72.
Las concentraciones de los compuestos se determinaron a partir de curvas de calibracin
trazadas para cada componente.

2.1 Determinacin de lignina total
Para determinar lignina soluble e insoluble, se hidrolizaron muestras de cada fraccin.
Transfiriendo una muestra de 2 g a un vaso de 100 mL y se adicion 10 mL de H
2
SO
4
72%
bajo vigorosa agitacin, en un bao termostatizado (45.0 0.5C) por 7 minutos. Se
interrumpi la reaccin adicionando 50 mL de agua destilada. Inmediatamente la muestra
fue transferida cuantitativamente a un Erlenmeyer de 500 mL elevndose el volumen de
agua a 275 mL. Para la hidrlisis completa de los oligmeros restantes, el Erlenmeyer se
cerr con papel aluminio y autoclavado por 15 min a 1.05 atm. Despus de la
descompresin, el frasco se retir de la autoclave y enfri hasta la temperatura ambiente.

El material hidrolizado se separ de los slidos por filtracin, utilizando papel filtro para
slidos gelatinosos, previamente tarado. El hidrolizado se colect en baln volumtrico
500 mL y el slido contenido en el papel filtro lavado con porciones de 50 mL de agua
destilada hasta alcanzar el volumen del baln, lo que se almacen para su posterior
anlisis. La lignina retenida en el papel filtro se lav con agua destilada hasta la
eliminacin de sulfatos (aproximadamente 1500 mL) y se sec en estufa a 105C hasta
peso constante. Para la determinacin de lignina soluble, una parte de 5mL del hidrolizado
obtenido se alcaliniz con 1 mL de NaOH 6 mol.L
-1
hasta alcanzar pH 12 y se diluy en
baln volumtrico de 50mL. Esta solucin se analiz por espectroscopia de UV,
determinndose la absorbancia de la solucin en longitud de onda de 280nm, utilizando
NaOH como referencia.

2.2 Determinacin del total de cenizas
Para la determinacin del porcentaje de cenizas en las fracciones del bagazo, se pes en
balanza analtica aproximadamente 2 g del material (+- 0,1mg) con humedad conocida, en
un crisol de porcelana previamente tarado y calcinado en una mufla a 800
o
C por 2 h.
Despus de la calcinacin, se enfri el crisol en desecador y se determin la masa de
cenizas.