Neuromuscular

Objetivos
Estudiar el proceso de contraccin muscular in vivo, y especialmente los fenmenos de
sumacin de estmulos o sumacin de ondas, utilizando la metodologia experimental
necesaria para obtener registros de la contraccin muscular.
Introduccin
Hay tres tipos de tejidos musculares: esqueltico, cardaco y liso. En esta prctica se
estudiar el msculo esqueltico que es el responsable de la locomocin animal. El
msculo esqueltico forma aproximadamente el 40% del peso corporal y est
controlado de manera voluntaria y consciente por el sistema nervioso.
Principios anatmicos y fisiolgicos del msculo
esqueltico
El msculo esqueltico se estructura en fascculos compuestos de varios centenares de
clulas musculares denominadas fibras por su aspecto cilndrico y alargado (Fig. 1, 3).
Cada fibra muscular est rodeada por un nmero variable de capilares sanguneos (Fig.
1, 7) que proporcionan a la fibra el oxgeno necesario para realizar sus funciones
metablicas. Las fibras musculares son multinucleadas (Fig. 1, 4) y poseen en su
interior paquetes de protenas contrctiles que reciben el nombre de miofibrillas. La
interaccin entre los dos tipos principales de protenas contrctiles (filamentos de actina
y filamentos de miosina) es el hecho que, en ltimo trmino, produce la contraccin del
msculo.
Todas las fibras musculares estn inervadas por neurofibrillas (Fig. 2, B:1) que son las
ramificaciones de los axones de las fibras nerviosas motoras provenientes de la mdula
espinal. Al conjunto formado por un axn y las fibras musculares que inerva se le
denomina unidad motora. Cada neurofibrilla termina en una placa motora (Fig. 2, A:1,
B:4), donde se libera un neurotransmisor (la acetilcolina) que despolariza la membrana
de la fibra muscular, excitando a la clula muscular.
A travs de un complejo sistema de comunicacin intracelular, en la fibra muscular
excitada se liberan iones Ca2+ desde el retculo sarcoplasmtico al citoplasma, donde
activan los filamentos de actina y miosina. La molcula de miosina hidroliza ATP
gracias a la presencia de un enzima llamado miosina ATPasa, liberando energa
qumica que ser la responsable de que se acorte la fibra muscular y se produzca la
contraccin. Cuando el estmulo nervioso cesa, los iones Ca2+ vuelven al retculo
sarcoplasmtico y el msculo alcanza el estado de reposo.
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Fuerza muscular y tipos de contracciones musculares
La contraccin muscular genera fuerza en un msculo. La fuerza ejercida en un
msculo sobre una carga externa se denomina tensin muscular. Si la tensin
desarrollada por un msculo es mayor que la fuerza externa ejercida en ste por la
carga, el msculo se acorta. Si la fuerza ejercida por la carga (peso de la misma) es
mayor o igual a la tensin muscular, el msculo no se acorta en su longitud total. Un
msculo puede contraerse con o sin acortamiento, desarrollando tensin en ambos
casos.
Existen dos formas diferentes de medir la respuesta mecnica de la contraccin
muscular. En la denominada contraccin isotnica, el msculo se acorta frente a una
carga menor que la tensin muscular. Durante la contraccin la tensin es constante e
igual a la fuerza ejercida por la carga. En este tipo de contraccin se mide la longitud del
msculo (acortamiento). En la denominada contraccin isomtrica, el msculo acta
sobre un soporte muy rgido y se contrae sin que exista prcticamente acortamiento. En
este caso se mide la tensin (fuerza) que ejerce el msculo.
En una preparacin neuromuscular, un estmulo elctrico aislado sobre el nervio tiene
como consecuencia una contraccin muscular simple, y la fuerza ejercida es entonces
funcin del nmero de unidades motoras activadas. Aumentando el voltaje del estmulo
al nervio, aumenta el nmero de unidades motoras activas y, por lo tanto, el nmero de
fibras musculares que se contraen. Vemos pues que la fuerza de la contraccin puede
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ser aumentada mediante la suma de varias unidades motoras. Se llega al lmite cuando
estn activadas todas las unidades motoras.
Se produce suma temporal aumentando la frecuencia del estmulo. En lugar de una
contraccin simple, se obtienen as una serie de contracciones tan rpidas que cada
contraccin empieza antes de que haya terminado la contraccin precedente. De esta
forma, el msculo se acorta progresivamente. Cuando los estmulos son bastante
prximos unos de otros, se produce una contraccin continua (tetania). La frecuencia
mnima de estimulacin necesaria para producir una contraccin sostenida es la
frecuencia de tetanizacin; este valor vara segn los distintos msculos.
Metodologa
Anestesiar el animal con uretano por via intraperitoneal (ver 1 prctica
Con el animal tendido supino en el lugar de trabajo, se practica una incisin en la piel,
paralela al fmur, a unos dos centmetros de la base de la cola.
Retraer la piel. Se ver una estra paralela y posterior al fmur, que corre entre los dos
msculos: el bceps femoralis y el vastus lateralis.
Profundizando en la estra por separacin de los msculos se expone el nervio citico,
que puede ser fcilmente aislado en un buen tramo. Pasar un lazo a su alrededor y
ocluir la herida con un algodn empapado en salino.
Liberar el tendn de Aquiles. Liberar el msculo gastrocnemio de la piel de la
musculatura superficial de forma que pueda contraerse con libertad. Debern cortarse
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todos los nervios a excepcin del citico.
Pinzar el tendn. Pasar el hilo por la polea y atar el extremo al transductor.
Montar los electrodos en el nervio procurando que no hagan contacto con el msculo.

Material
Material quirrgico: pinzas, tijeras, hilo, algodn, salino
Polgrafo
Transductor de fuerza
Electrodos de estimulacin
Estmulo umbral
Ajustar el estimulador a impulsos de 0.1 V y la amplitud o duracin del estmulo a 1 ms.
Dar al nervio una descarga simple.
Si el msculo no reponde, estimular a voltajes crecientes hasta conseguir una respuesta
mnima.
El estmulo que produce esta respuesta se denomina estmulo umbral.

Suma de estmulos
Una vez determinado el estmulo umbral, disminuir el voltaje ligeramente, de manera
que un nico estmulo no produzca respuesta (estmulo subumbral). Seleccionar una
frecuencia de 40-50 impulsos/segundo. Aplicar estmulos durante un tiempo breve (3-4
segundos). Puede ser necesario repetir la operacin para obtener una contraccin.
Tngase en cuenta que la contraccin que se producir ser mnima.

Respuesta a estmulos
Trabajar a una velocidad del papel lenta. Partiendo del estmulo umbral, incrementar el
voltaje y aplicar dos o tres descargas consecutivas despus de cada incremento.
Repetir esta operacin hasta producir una contraccin mxima, que se consigue
cuando posteriores incrementos de voltaje no producen contracciones ms fuertes.
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Estimar la intensidad de las contracciones midiendo la longitud (en mm.) de los picos
generados.

Suma de ondas
Con una preparacin semejante a la del primer apartado, pero con una velocidad del
papel ms alta para que no se solapen las contracciones en el registro, producir
inicialmente estmulos mltiples a razn de 10 estmulos/segundo.
Ir incrementando la frecuencia hasta alcanzar una tetania completa.

Fatiga
En primer lugar debe sacrificarse al animal mediante una sobredosis de anestesia.
Se escoge una velocidad de papel muy lenta. Con el mismo tipo de preparacin,
producir estmulos mltiples a razn de 10 estmulos/segundo. El voltaje debe ser el
adecuado para producir contracciones mximas. Estimular hasta que el msculo est
completamente fatigado (no se produzcan contracciones).
Una vez producida la fatiga, estimular directamente el msculo con los electrodos para
determinar si se trata de fatiga sinptica (agotamiento del neurotransmisor) o fatiga
bioqumica (agotamiento de substrato energtico o de ATP).

RESULTADOS: PRCTICAS NEUROMUSCULAR
1. Cmo modula el msculo la cantidad de fuerza que desarrolla en cada contraccin?
2. Porqu un estmulo subumbral de alta frecuencia provoca contracciones del
msculo, cuando el mismo estmulo aislado no produce ninguna respuesta?
3. Qu ocurre con la fuerza desarrollada por el msculo cuando se da un tren de
estmulos? Porqu?
4. Cmo determinarias si la fatiga muscular se da por agotamiento del neurotransmisor
o por agotamiento de ATP?


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