Estudo da velocidade da reao

enzimtica e como ela se altera em

funo de diferentes parmetros
Parmetro mais importante para
comparar a atividade e o tipo de reao
das enzimas a concentrao do
substrato
Importante abordagem para o
entendimento do mecanismo de ao
de uma enzima.
Vrios fatores afetam a atividade de uma
enzima pH, temperatura e substrato
Atividade enzimtica afetada pelo pH
O pH pode influenciar a atividade de uma enzima atravs de maneiras
distintas. Primeiramente, o pH pode levar desnaturao proteica.

O pH tambm pode interferir na atividade de uma enzima alterando o
padro de cargas de um determinado stio ativo ou cataltico, ou alterando
a conformao geral da protena.
Atividade enzimtica afetada pela temperatura
O aumento de temperatura aumenta a taxa de reao enzimtica devido
ao aumento de energia cintica das molculas participantes da reao.

A temperatura pode interferir nas interaes que mantm as estruturas
secundrias e tercirias (pontes de hidrognio e interaes hidrofbicas),
podendo levar desnaturao protica.
enzima
A concentrao do substrato afeta a velocidade das
reaes catalisadas por enzimas
Curva que relaciona [S] e V
0
uma hiprbole
Concentraes
baixas de
substrato ocorre
aumento linear
entre
Velocidade(V
0
)

e o
Substrato [S]


[S] V
0

aumenta cada vez
menos at atingir
um patamar (V
max
)

Curva relacionando [S] e V
0
pode ser expressa algebricamente
Constante de Michaelis
Equao de Michaelis-Menten
TAREFA Fazer para entregar a deduo da equao de Michaelis-Menten
O que K
m
?
a concentrao do substrato
onde se obtm metade da
velocidade mxima da reao
TAREFA Demonstrar algebricamente o que Km usando a equao de
Michaelis-Mentem e a definio de Km.
K
m
e a V
max
varia de enzima para enzima caracterizando-
as e pode variar tambm com o substrato
K
m
no uma medida de afinidade da enzima
pelo substrato mas sim a concentrao do
substrato onde se obtm a metade da
velocidade mxima da reao
Rubisco
Km CO
2
- 9M
Km O
2
- 350 M
Hexoquinase Glicose Km - 0,05 M
Frutose Km -1,5 M
Transformaes da equao de Michaelis-Menten
Equao de Lineweaver-Burk ou duplo-recproco
Inverso dos dois lados da equao de Michaelis-Menten
Separao dos componentes do lado direito.
Equao de Michaelis-Menten
Equao de Lineweaver-Burk ou duplo-recproco


K
m

1
y a x b
=
+
inverter
Separar
componentes e
resolver
y
x
Com essa
transformao
matemtica passa-se
a trabalhar com uma
reta e no com uma
hiprbole, mais fcil.
Vrias informaes
podem ser obtidas
com esse grfico
y=0
x = 0
a = coeficiente angular
b = coeficiente linear
y = 0
x = 0
Atravs da anlise da cintica da reao pode-se descobrir qual
o mecanismo de ao da reao com relao ao substrato
A atividade de todas as enzimas pode ser
inibida por determinadas molculas

Inibidores enzimticos
So molculas que interferem com a
catlise diminuindo ou interrompendo a
reao enzimtica
Como so classificados os inibidores de
acordo com seu mecanismo de ao?
Reversveis
Irreversveis
Inibio competitiva
Inibio incompetitiva
Inibio mista ou no competitiva
Como eles atuam?
Reversveis - Inibio competitiva
Inibidor tem estrutura molecular semelhante do substrato
Inibidor compete com o substrato pelo sitio ativa da enzima
[S] deslocar inibidor do
stio ativo e manter V
max
V max constante na presena do inibidor devido
grande quantidade de substrato
Reversveis - Inibio incompetitiva
Inibidor se liga em um
stio diferente do centro
ativo, impede a reao do
complexo ES.
Independente da concentrao do substrato o Km e a
Vmax esto alterados
Reversveis - Inibio mista ou no competitiva
Inibidor se liga tanto ao
complexo ES como
enzima, em um stio
diferente do centro ativo
Independente da concentrao do substrato o
Km e a Vmax esto alterados
Inibio irreversvel
Inibidor se liga de maneira estvel ou covalente
com um grupo funcional importante para a
atividade enzimtica
Utilizados experimentalmente para definir os
aminocidos essenciais do centro ativo das
enzimas
Inativar determinadas enzimas em situaes
biolgicas importantes
Reagem com o resduo S1 de serino-enzimas, formando um complexo irreversvel.
Uma das enzimas altamente sensvel a esses compostos a
acetilcolinesterase, responsvel pela metabolizao do neurotransmissor
acetilcolina em neurnios centrais e perifricos (envenenamento por
organifosforados)
Este o mecanismos de ao dos inseticidas organofosforados, como o
malathion e o parathion.

Salicina, extrada da casca do Salgueiro Branco ou Choro (Salix alba) - hoje sintetizada
No metabolismo celular
grupos de enzimas
trabalham em conjunto
onde o produto de uma
o substrato da outra
Via metablica
Nessas vias existe
sempre uma enzima que
determina a velocidade
com que o grupo vai
trabalhar enzimas
reguladoras
Regulam a velocidade das reaes metablicas
So reguladas por determinados sinais
Tipos:
Enzimas alostricas
Enzimas reguladas por modificaes
covalentes reversveis
Enzimas reguladas por protelise
Sofrem modificaes
conformacionais em
resposta ligao do
modulador (positivo ou
negativo)
Enzimas alostricas
Possui stios reguladores
para a ligao do
modulador especifico

Maiores e mais
complexas que as no
alostricas (mais que uma
cadeia polipeptdica)
Enzimas reguladas por modificaes
covalentes reversveis
Diferentes grupos podem se ligar
molcula enzimtica e regular sua atividade
Grupos ligados covalentemente e
removidos pela ao de outras enzimas
Enzimas reguladas por protelise
Enzimas proteolticas mecanismo de proteo
Bothrops (Jararacas)
87% acidentes no
Estado de SP janeiro
a abril sexo
masculino






1 - Procurar o mecanismo de ao do
glifosato e descrever como esse
herbicida exerce sua funo sobre a
atividade da 5-enolpiruvilshiquimato-3-
fosfato sintase (EPSPS), que tipo de inibio
essa.

TAREFA
TAREFA Fazer para entregar a deduo da equao de Michaelis-Menten
TAREFA Demonstrar algebricamente o que Km usando a equao de
Michaelis-Mentem e a definio de Km.