INFORME DE LABORATORIO DE GENTICA

(BIO247)
Gentica Clsica- Mendelismo










Autores: Nicols Faria
Sofa Garca
Patricio Olmedo
Fecha de entrega: 07/04/2011
RESUMEN

En este prctico los alumnos fueron discpulos de Mendel, donde, de forma
experimental se aplicaron los conocimientos heredados por l tras aos de estudios. Se
trabajaron y estudiaron los principios Mendelianos, determinando genotipos de Pisum
sativum (arveja) a partir de fenotipos observados, calculando proporciones segn sus
leyes estipuladas, aplicndolas al mono y el dihibridismo y determinando homocigotos
dominantes, homocigotos recesivos y heterocigotos. Se aplicaron estos fundamentos en
la determinacin de genotipos en seres humanos, a partir de distintos fenotipos.

Por ltimo, se estudiaron los alelos mltiples o polialelos, a partir de exmenes
aplicados a sangre humana, se determinaron los posibles genotipos de la poblacin de
alumnos del laboratorio a partir del fenotipo obtenido.





































INTRODUCCIN


La arveja (Pisum sativum) posee caracteres fsicos que son notablemente distinguibles y
variables entre s. Estas variaciones van desde el color de las semillas hasta la posicin
de las flores o el largo del tallo. Gregor Mendel, un monje, se dio cuenta de estas
diferencias dentro de la misma especie y decidi centrar sus estudios en este vegetal.
Adems de sus caractersticas fsicas diferenciables, la arveja presenta la cualidad de ser
una planta que se puede manipular fcilmente su cruzamiento tan slo eliminando el
polen de las anteras al cortarla, pudiendo insertar polen de otra planta deseada. A partir
de esto, Mendel orden y cultiv lneas de arvejas con el fin de obtener lneas
genticamente puras que produciran semillas con dicho carcter puro.

Luego experiment con uno de aquellos caracteres, al principio fue el color de la flor.
Una de sus lneas puras presentaba flores color prpura mientras que otra presentaba
flores color blanco. Cruz ambas plantas, usando polen blanco en una planta prpura y
obtuvo una primera lnea de plantas con flores prpura. De la misma manera poliniz
una planta con flores blancas con polen de flor prpura, obteniendo el mismo resultado.
Luego de mucho tiempo de experimentar con estas plantas, postul sus leyes que fueron
el comienzo de la gentica, las cuales son:

Primera ley o ley de la segregacin, la cual establece que los caracteres recesivos, al
cruzar dos razas puras, quedan ocultos en la primera generacin, reaparecen en la
segunda en proporcin de uno a tres respecto a los caracteres dominantes. Los
individuos de la segunda generacin que resultan de los hbridos de la primera
generacin son diferentes fenotpicamente unos de otros; esta variacin se explica por la
segregacin de los alelos responsables de estos caracteres, que en un primer momento se
encuentran juntos en el hbrido y que luego se separan entre los distintos gametos.
Segunda ley o ley de asociacin, la cual establece que los caracteres son independientes
y se combinan al azar. En la transmisin de dos o ms caracteres, cada par de alelos que
controla un carcter se transmite de manera independiente de cualquier otro par de
alelos que controlen otro carcter en la segunda generacin, combinndose de todos los
modos posibles
1
.






(1) http://www.portalplanetasedna.com.ar/mendel.htm



OBJETIVOS

1. Estudiar y comprender las leyes de Mendel y las proporciones esperadas para
cada cruzamiento gentico.
2. Comprender los conceptos de alelos dominantes y recesivos y heterocigotos.
3. Entender el monohibridismo y el dihibridismo a partir de rasgos fsicos
apreciables a simple vista.
MATERIALES Y METODOS.

1.-Principios Mendelianos:
Luego de recibir la poblacin de semillas de arvejas (Pisum sativum) N 10, estas
fueron depositadas en tres placas y clasificadas segn el carcter fenotpico , ya sea,
textura (lisa y rugosa) y color ( verde y amarilla), estableciendo la cantidad de semillas
con los respectivos caracteres.
En el primer anlisis consideramos un carcter fenotpico (monohibridismo) mientras
que en segundo dos caracteres fenotpicos (dihibridismo). Siguiendo las leyes de
Mendel, se realizaron los clculos y se determino el nmero esperado de arvejas segn
su fenotipo, asumiendo que los padres de esta generacin eran heterocigotos. Luego
estos datos fueron comparados con el valor real observado, utilizando la frmula del
Chi cuadrado.
Donde o es observado y ees esperado.


2.-Rasgos Mendelianos en la especie humana:
Mediante la utilizacin de un gotero, se deposito en la lengua de cada uno de los
alumnos una gota de Feniltiocarbamida (PTC) 0,064 g/l. Si la primera concentracin no
era percibida se proceda nuevamente con otra concentracin de PTC la cual
corresponda a 0,128 g/l.

3.- Alelos mltiples o series allicas:
Se extrajo gotas de sangre de cada persona, mediante la utilizacin de una lanceta.
Las gotas fueron depositadas en un portaobjetos dividido en tres partes, en la primera
parte se deposito antgeno A, en la segunda antgeno B y en la tercera antgeno RH.






RESULTADOS

1. Principios Mendelianos
a) Consideracin de un solo carcter fenotpico (monohibridismo):

Se contabiliz la cantidad de arvejas (Pisum sativum) contenidas en la muestra N 10,
con respecto al fenotipo color amarillo o verde. Obtenindose los siguientes resultados:

Tabla 1. Frecuencia de arvejas segn su color.
Textura Arvejas Nmero Arvejas
Amarillas 74
Verdes 23
Total 97

Asumiendo que el genotipo de la lnea parental de nuestra muestra era heterocigoto para
ambos individuos; se calcul la poblacin esperada, segn los principios mendelianos,
de arvejas amarillas y verdes con un tablero de Punnett:

Carcter dominante: Color amarillo (AA o Aa)
Carcter recesivo: Color verde (aa)

Lnea parental Aa x Aa

A a
A AA Aa
a Aa aa

Del tablero se obtuvo la razn fenotpica 3:1 para carcter dominante y recesivo
respectivamente (1AA, 2 Aa:1aa). De esta manera se esperaba que (75%) del total de
la F
1
contenidas en la muestra manifestara el fenotipo dominante (color amarillo) y
(25%) el recesivo (color verde).
Con un total de 97 arvejas se calcularon los valores esperados para la muestra de la
siguiente manera:

75 . 72
97
% 75
% 100
x
x
25 . 24
97
% 25
% 100
x
x



Utilizando dcimas de hiptesis, se plante lo siguiente:
H
0
: La proporcin fenotpica de las arvejas amarillas y verdes es 3:1
respectivamente.
H
1
: La proporcin fenotpica de las arvejas amarillas y verdes no es 3:1
respectivamente.

Tabla 2. Nmero de arvejas esperado y observado segn su textura.
Textura Arvejas N Arvejas Esperado N Arvejas Observado
Amarillas 72.75 74
Verdes 24.25 23
Total 97 97
Para comparar los datos esperados con los calculados se utiliz una herramienta
estadstica (chi cuadrado) con la siguiente frmula:

(


)

Donde n = 1 (grados de libertad).
Por lo tanto, el Chi
2
calculado para el carcter Liso y Rugoso se determin de la
siguiente manera:

( )

( )

Mientras que el Chi
2
terico obtenido de una tabla estadstica es 3.84
El valor del Chi
2
calculado debe ser menor o igual al terico para ser aceptado, por
lo tanto, se rechaza la hiptesis H
0
.

A continuacin se adjunta una tabla con los datos obtenidos de los grupos restantes
del laboratorio a modo de comparacin:

Tabla 3. Nmero de arvejas esperado y observado segn su textura de cada grupo
con su respectivo Chi
2
calculado.

Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4
A_ (O) 135 80 88 138
aa (O) 44 42 88 42
A_ (E) 134.25 91.5 132 135
aa (E) 44.75 30.5 44 45
Chi
2
calculado 0.017 5.871 58.67 0.26

b) Consideracin de dos caracteres fenotpicos (dihibridismo):

En este caso, los caracteres a estudiar fueron los fenotipos textura (liso y rugoso) y
color (amarillo y verde).
El procedimiento fue el mismo, se separaron y enumeraron las arvejas segn la
siguiente descripcin: Amarilla-Lisa, Amarilla-Rugosa, Verde-Lisa y Verde-
Rugosa.

Tabla 4. Frecuencia de arvejas segn su color y textura.

Color Arvejas Textura Arvejas Nmero Arvejas
Amarillo Liso 63
Amarillo Rugoso 67
Verde Liso 15
Verde Rugoso 21



Asumiendo que las arvejas eran descendientes de padres heterocigotos y segn los
principios de Mendel se calcul la poblacin esperada de arvejas lisas, rugosas,
amarillas y verdes de la siguiente manera:

Arvejas Amarillas Lisas (A_L_)
Arvejas Amarillas Rugosas (A_ll)
Arvejas Verdes Lisas (aaL_)
Arvejas Verdes Rugosas (aall)

AaLl x AaLl
AL Al aL al
AL AALL AALl AaLL AaLl
Al AALl AAll AaLl Aall
aL AaLL AaLl aaLL aaLl
al AaLl Aall aaLl aall

De este tablero de Punnett se obtuvo la razn fenotpica, la cual es 9:3:3:1, 9/16 del
total se esperaba que fueran arvejas lisas y amarillas, 3/16 fueran rugosas y
amarillas, 3/16 fueran verdes y lisas y 1/16 fueran verdes y rugosas. Con una cuenta
final de 176 arvejas, la cantidad esperada de cada carcter se obtuvo utilizando una
regla de tres.

Tabla 5. Nmero de arvejas esperado y observado segn su color y textura.

Color
Arvejas
Textura
Arvejas
N Arvejas
Esperado
N Arvejas
Observado
Amarillo Liso 99 63
Amarillo Liso 33 67
Verde Rugoso 33 15
Verde Rugoso 11 21

Utilizando dcimas de hiptesis, se plante lo siguiente:
H
0
: La proporcin fenotpica de las arvejas amarilla-lisa, amarilla-rugosa, verde-lisa
y verde-rugosa es 9:3:3:1 respectivamente.
H
1
: La proporcin fenotpica de las arvejas amarilla-lisa, amarilla-rugosa, verde-lisa
y verde-rugosa no es 9:3:3:1 respectivamente.

Luego se calcul Chi
2
de la misma forma que en el ejercicio anterior:

(


)

Donde n = 3 (grados de libertad).
Por lo tanto, el Chi
2
calculado para los caracteres Liso-Rugoso y Amarillo-Verde se
determin de la siguiente manera:

( )

( )

( )

( )

Mientras que el Chi
2
terico obtenido de una tabla estadstica es 7.82
El valor del Chi
2
calculado debe ser menor o igual al terico para ser aceptado, por
lo tanto, se rechaza la hiptesis H
0
.

A continuacin se adjunta una tabla con los datos obtenidos de los grupos restantes
del laboratorio a modo de comparacin:

Tabla 6. Nmero de arvejas esperado y observado de cada grupo segn su color y
textura con su respectivo Chi
2
calculado.


Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4
A_L_ (O) 66 55 63 82
A_ll (O) 22 30 67 52
aaL_ (O) 69 25 15 14
aall (O) 22 12 21 28
A_L_ (E) 101 68.625 99 101
A_ll (E) 34 22.875 33 34
aaL_ (E) 34 22.875 33 34
aall (E) 12 7.625 11 11
Chi
2
calculado 60.73 7.64 60.72 51.14

2. Rasgos Mendelianos en la especie humana

Degustacin de PTC (Feniltiocarbamida).

Tabla 7. Individuos degustadores y no degustadores de PTC con su respectivo
genotipo.

Individuo Concentracin PTC Baja Concentracin PTC Alta Genotipo
Camila S S TT
Jos No S Tt
Nicols No S Tt
Graciela S S TT
Elas S S TT
Mayra No No tt
Patricio S S TT
Benito S S TT
Linda No No tt
Patricio R. No No tt
Jos S. S S TT
Leonardo S S TT
Sofa S S TT

Con estos resultados se determin el genotipo de los tres fenotipos resultantes:

Las personas que degustan el PTC a una baja concentracin son homocigotos
dominantes (TT) y son 8 individuos.
Las personas que degustan el PTC a una alta concentracin son heterocigotos (Tt) y
son 2 individuos. Las personas que no degustan el PTC son homocigotos recesivos
(tt) y son 3 individuos.

Para calcular la frecuencia de cada fenotipo se utiliz la siguiente frmula: ()

Donde n es el nmero de individuos que presenta cierto fenotipo y n

t
es el
nmero total de individuos estudiados. Por lo tanto, reemplazando en la frmula se
obtiene:

()

; ()

; ()

Para calcular la frecuencia allica se utilizaron las siguientes frmulas:

() ()

()

() ()

()

Por lo tanto,
Ahora, si ( )

Este cuadrado de binomio se utiliz para calcular la frecuencia genotpica f(TT),
f(Tt) y f(tt).

()

()
()

Los probables genotipos de los progenitores son segn los principios Mendelianos:

Para homocigotos dominantes (TT):
Ambos padres homocigotos dominantes (TT x TT), con un 100% de descendencia
homocigotos dominantes.
Un padre homocigoto dominante y el otro heterocigoto (TT x Tt), con un 50% de
descendencia homocigotos dominantes.
Ambos padres heterocigotos (Tt x Tt), con un 25% de descendencia homocigotos
dominantes.

Para heterocigotos (Tt):
Un padre homocigoto dominante y el otro heterocigoto (TT x Tt), con un 50% de
descendencia heterocigotos.
Ambos padres heterocigotos (Tt x Tt), con un 50% de descendencia heterocigotos.
Un padre homocigoto dominante y el otro homocigoto recesivo (TT x tt), con un
100% de descendencia heterocigotos.
Un padre heterocigoto y el otro homocigoto recesivo (Tt x tt), con un 50% de
descendencia heterocigotos.



Para homocigotos recesivos (tt):
Ambos padres heterocigotos (Tt x Tt), con un 25% de descendencia homocigotos
recesivos. Un padre heterocigoto y el otro homocigoto recesivo (Tt x tt), con un 50%
de descendencia homocigotos recesivos. Ambos padres homocigotos recesivos (tt x
tt), con un 100% de la descendencia homocigotos recesivos.

3. Alelos mltiples o series allicas

Se determin el grupo sanguneo de las personas en el laboratorio y en la tabla
adjunta se resume lo obtenido:

Tabla 8. Aglutinacin de la sangre de los individuos con su respectivo fenotipo.

Individuo Reaccin (+) A Reaccin (+) B Rh Grupo Sanguneo (Fenotipo)
Camila No No S O Rh +
Jos No No S O Rh +
Nicols S No No A Rh -
Graciela No S S B Rh +
Elas S No S A Rh +
Sofa No No S O Rh +
Mayra No No S O Rh +
Patricio S No S A Rh +
Benito No No S O Rh +
Linda No No S O Rh +
Jos S. No No S O Rh +
Leonardo S No No A Rh -

Con estos datos es posible determinar el posible genotipo del individuo como
resumido en la siguiente tabla.

Tabla 9. Posibles genotipos a partir del fenotipo de los individuos.

Fenotipo Genotipo Posible
A I
A
I
A
; I
A
I
O

B I
B
I
B
; I
B
I
O

AB I
A
I
B

O I
O
I
O


La denominacin alelos mltiples se refiere a que existen ms de dos alelos para el
mismo gen, como en el caso de los grupos sanguneos A, B y O (no funcional).
Debido a que los seres humanos son organismos diploides, slo pueden tener dos de
estos alelos, generando distintos genotipos derivando en distintos fenotipos (grupos
sanguneos).




DISCUSIN.

Tras haber realizado los procedimientos experimentales, para nuestro primer objetivo
sobre el estudio de las leyes de Mendel y las proporciones esperadas, junto con entender
y diferenciar un cruce monohbrido de un dihbrido, pudimos observar que segn
nuestros propios clculos con el mtodo del Chi
2
, obtuvimos un valor muy alejado del
Chi
2
de la tabla referencial, siendo el nuestro de 58.66 versus 3.84 de la tabla para el
caso de caracteres fenotpicos por separado, vale decir, cruce monohbrido (arvejas
rugosas/arvejas lisas). Por lo tanto, al no cumplirse las proporciones esperadas para este
caso, nosotros rechazamos la hiptesis de que los progenitores sean heterocigotos para
el carcter de textura. Cuando realizamos el conteo pudimos determinar que la
proporcin era ms bien 1:1, o en otras palabras la mitad eran arvejas rugosas y la otra
mitad arvejas lisas, y esto nos llev a formular una nueva hiptesis que cumple de
manera satisfactoria con los resultados obtenidos, que los progenitores sean un
heterocigoto y un homocigoto recesivo.
Para el caso del anlisis del color de las arvejas (amarillas/verdes), se realiz el mismo
conteo, luego hicimos el clculo del Chi
2
, sin embargo, en esta ocasin nuestro
resultado fue mucho ms cercano a lo que apareca en la tabla del Chi
2
, siendo el
nuestro de 1.93 versus 3.84 de la referencia. Por lo tanto, nuestras proporciones fueron
cercanas a las determinadas por Mendel para un cruce heterocigoto, de esta forma
nosotros aceptamos la hiptesis.
Finalmente, para esta primera etapa, se procedi a combinar ambos caracteres,
dihibridismo (textura y color), se volvi a realizar conteo y clculo de Chi
2
resultando
60.72 versus 7.82 de la tabla (para 3 grados de libertad), esto claramente fue muy lejano
al valor referencial, es por ello que rechazamos la hiptesis de que los progenitores
seran heterocigotos para ambos caracteres. Basndonos en los resultados anteriormente
obtenidos podramos inferir que los padres seran de la forma AaLl x aaLl, con A/a
rugoso/liso y L/l amarillo/verde.
Con respecto a Chi
2
, pudimos observar por medio de una tabla comparativa los
resultados de los otros grupos, y nos encontramos con valores variados, algunos
alejados, y alguno ms cercano al valor real del Chi
2
referencial. Esto nos lleva a
suponer, que una de las posibles razones sea que la poblacin de semillas de arvejas
estudiadas era muy pequea, por ende poco representativa, lo que produjo valores muy
inciertos en los clculos, adems de esto, tambin pudimos notar que si bien las
proporciones de Mendel pueden ser tiles, no abarcaran todas las diversas
combinaciones posibles, por ello, las proporciones observadas no siempre coinciden con
las esperadas.
Como nuestro siguiente objetivo consista en estudiar los conceptos de dominancia y
recesividad, realizamos de forma experimental el estudio de un fenotipo gustador de una
sustancia qumica llamada feniltiocarbamida (PTC).
Adems, es sabido que homocigotos dominantes son gustadores de bajas
concentraciones de feniltiocarbamida (PTC1), heterocigotos son gustadores de altas
concentraciones de esta sustancia (PTC2) y los homocigotos recesivos son no
gustadores de feniltiocarbamida. La poblacin que correspondi a los 13 integrantes del
laboratorio, se someti a probar las correspondientes dosis. Segn los resultados, en
conjunto con los conocimientos previos y clculos de frecuencia allica y frecuencia
genotpica obtuvimos que la frecuencia del allo dominante fue 9 y del allo recesivo 4,
de esta forma la frecuencia de los individuos homocigotos dominantes fue 81,
frecuencia de individuos heterocigotos 72 y la frecuencia de los individuos homocigotos
recesivos 16.
Podemos ver que la gran mayora de la poblacin son individuos gustadores de la PTC,
mientras que los no gustadores corresponderan a una notable minora, con esto
podemos postular que quizs en nuestros antepasados, la presencia del alelo dominante
era casi absoluta y que con el tiempo pudo haber aparecido algn agente o condicin
externa que provocara un cambio y as el aumento del alelo recesivo, el cual quizs
podra ir aumentando en nmero con los aos. Adems, inferirimos posibles
progenitores para homocigoto dominante (TT) que seran TT x TT, Tt x Tt, TT x Tt.
Para heterocigotos seran TT x tt, Tt x Tt, TT x Tt. Finalmente para homocigotos
recesivos seran tt x tt, Tt x Tt, Tt x tt.
Como tercer y ltimo anlisis, realizamos determinacin de grupos sanguneos, en los
cuales pudimos observar la presencia de ms de dos alelos, lo que se denomina serie
allica. La poblacin experimental correspondi a 12 alumnos del laboratorio de
gentica, y para llevar a cabo el proceso se obtuvieron las 12 muestras de sangre y se
realiz un proceso de aglutinacin segn correspondiera que reaccionar el antgeno
(Anti A, Anti B, Anti Rh) con el gen, y en caso de no reaccionar ni con A ni con B
corresponde al grupo O.
Los resultados obtenidos por mtodo de aglutinacin arroj que 7 de los individuos
correspondieron al fenotipo ORh
+
, con un genotipo OORh
+
, luego 2 alumnos fueron del
fenotipo ARh
-
, de lo cual podemos suponer que su genotipo podra ser del tipo AORh
-

bien AARh
-
, los siguientes 2 individuos eran del fenotipo ARh
+
, lo cual podra ser
posible con un genotipo AARh
+
AORh
+
, y finalmente slo uno tuvo el fenotipo BRh
+
,
y para este caso inferimos que su posible genotipo sera BBRh
+
bien BORh
+
. Lo que
en el fondo nos llev a plantear la hiptesis de los posibles fenotipos es el hecho de que
los alelos A y B son codominantes entre si, por lo tanto si estuviesen ambos presentes,
en su fenotipo se manifestaran ambos antgenos, adems A y B son dominantes sobre el
alelo O, esto nos permiti entonces pensar que si se expresaba A, tambin poda haber
un alelo O presente en el gen, y lo mismo para el caso de B. Pudimos comprobar
entonces que efectivamente son 3 los alelos que pueden determinar un grupo sanguneo,
y adems segn lo visto la mayor parte de la poblacin no presentaba antgenos A B.



CONCLUSION.

El trabajo realizado nos permiti cumplir de manera casi satisfactoria con los objetivos
planteados en un comienzo. Esto porque bsicamente, las proporciones esperadas por
Mendel no se cumplieron a cabalidad, slo en uno de los casos se acerc ms, a esto
conclumos que no es del todo efectiva ante las muy diversas combinaciones de los
alelos. Sin embargo, para el estudio de la dominancia y recesividad si fue de gran
utilidad el anlisis con la feniltiocarbamida, adems cabe mencionar que el experimento
en s es muy prctico y fcil de realizar y nos otorga resultados precisos y claros. Por
ltimo el trabajo experimental para determinar los grupos sanguneos fue satisfactorio,
aunque quizs menos preciso que el trabajo anterior porque es probable que en ms de
algn caso por error humano se hayan visto afectado los resultados, por ejemplo por
utilizar muy poca muestra de sangre, o bien utilizar muy mnima cantidad de Anti A
Anti B, e incluso no haber esperado el tiempo suficiente para que aglutinara. En el
fondo, todo se pudo haber visto mnimamente alterado por error humano.