ESCUELA SUPERIOR POLITCNICA DE CHIMBORAZO

INGENIERA EN BIOTECNOLOGA
AMBIENTAL

BIOTECNOLOGA AMBIENTAL

INTEGRANTES:


GUTIRREZ DIANA 2117
PARDO MIGUEL 1944

SEMESTRE: SPTIMO A

DOCENTE: EDGAR IVAN RAMOS SEVILLA
TEMA: BIODEGRADACIN DE COMPUESTOS ORGNICOS
PERSISTENTES (COP): I. EL CASO DE LOS BIFENILOS POLICLORADOS (PCB)


Los contaminantes orgnicos persistentes poseen propiedades txicas, son resistentes a la degradacin, se
bioacumulan y son transportados por el aire, el agua y las especies migratorias a travs de las fronteras
internacionales; en consecuencia se depositan lejos del lugar de su liberacin, acumulndose en ecosistemas
terrestres y acuticos. La remediacin de sitios que presentan contaminantes orgnicos persistentes requiere
consideraciones distintas a las contempladas en la recuperacin por contaminacin de hidrocarburos. La
biodegradacin anaerbica y aerbica de los bifeniles policlorados (PCB) y las posibles estrategias para estimular
dicha biodegradacin.

INTRODUCCIN

Los Contaminantes Orgnicos Persistentes (COP) son un grupo de sustancias sintticas de alto riesgo para la salud
humana y el medio ambiente. Estas sustancias han sido encontradas alrededor del mundo, incluidas algunas zonas
muy alejadas de aquellas en donde se emplearon tales contaminantes, e.g. las zonas polares, adems de
poblaciones humanas e, incluso, en la leche materna. Para atender esta problemtica a nivel mundial, se firm el 23
de mayo de 2001 el Convenio de Estocolmo. En el texto del convenio se describen las propiedades de los COP de la
siguiente forma: los contaminantes orgnicos persistentes tienen propiedades txicas, son persistentes a la
degradacin, se bioacumulan y son transportados por el aire, el agua y las especies migratorias, a travs de las
fronteras internacionales y depositados lejos del lugar de su liberacin, acumulndose en ecosistemas terrestres y
acuticos

Hasta ahora, las caractersticas de los COP incluidos en el Convenio de Estocolmo (esto es, PCB, dioxinas, furanos,
aldrina, dieldrina, DDT, endrin, clordano, hexaclorobenceno, mirex, toxafeno y heptacloro) responden a patrones muy
similares, pues se trata de molculas orgnicas cclicas cloradas; 11 de stas son policclicas. Por lo tanto, es posible
realizar muchas generalizaciones sobre su degradacin y comportamiento ambiental. No obstante, entre los
candidatos a COP que se estn discutiendo en estos momentos se encuentran sustancias con propiedades
diferentes. El caso ms llamativo es el del sulfonato de perfluorooctano (PFOS), no lipoflico, dispersable en agua por
su capacidad tensioactiva, y que no se bioacumula en los tejidos grasos, sino mediante la unin a protenas con una
distribucin muy diferente a la de los COP considerados hasta el momento. Evidentemente, la evaluacin de esta
sustancia requiere un modelo conceptual muy diferente al de los COP incluidos hasta la fecha.

En el campo agrcola grandes cantidades de plaguicidas se han tornado obsoletos, debido a la reduccin del rea
sembrada de ciertos cultivos (por ejemplo, el caso del algodn), y a la prohibicin del uso de algunos plaguicidas
organoclorados. Estos plaguicidas fueron abandonados o enterrados, y posiblemente han contaminados las reas en
donde se encuentran. De igual forma, el manejo inadecuado de transformadores elctricos o aceites dielctricos
contaminados con PCB en talleres de mantenimiento y en bodegas de almacenamiento son la causa de
contaminacin en el sector elctrico. No obstante lo anterior, en el pas an no se ha abordado con suficiente rigor un
inventario que incluya anlisis qumico de suelos, sedimentos o cuerpos de agua para la verificacin de sitios
sospechosos por contaminacin de COP.

Por su naturaleza, los compuestos orgnicos persistentes son difciles de degradar. La biodegradacin, que para
muchos contaminantes es el principal mecanismo de degradacin, es limitada en el caso de los COP. La dificultad de
degradacin de COP se atribuye a su estructura qumica estable (gran tamao molecular y alto nmero de cloros), a
su carcter xenobitico y a su baja biodisponibilidad, dada su baja solubilidad en agua y fuerte adsorcin al suelo.
Por lo tanto, el xito de la bioremediacin para tratar compuestos de tipo COP todava es limitado. Por ello, las
tcnicas ms usadas en el control de la contaminacin por estos compuestos son la incineracin, la excavacin y
disposicin en rellenos sanitarios de seguridad y el aislamiento del contaminante en el sitio, mediante capas que
eviten o disminuyan su dispersin y su contacto con organismos del tope de la pirmide trfica.

MECANISMOS DE DEGRADACIN DE MOLCULAS HALOORGNICAS

Los COP se consideran compuestos xenobiticos (que fueron sintetizados por primera vez por el ser humano) y, por
lo tanto, que son forneos del medioambiente y la microbiota. Sin embargo, en los ltimos aos se ha encontrado que
ms de 3.000 molculas rganocloradas se producen naturalmente por organismos tales como bacterias, hongos,
insectos, organismos marinos, plantas y mamferos, as como tambin, mediante procesos abiticos tales como
actividad volcnica e incendios forestales. De esta forma, en los microorganismos han evolucionado varios
mecanismos para la degradacin de compuestos organoclorados. De hecho, se considera que la degradacin
microbiana de dichos compuestos es el mayor mecanismo que previene su acumulacin en el ambiente.









En este sentido, se puede hablar de ciclos biogeoqumicos de compuestos organoclorados, de la misma forma como
se habla del ciclo del carbono o del ciclo del nitrgeno etc. No obstante, en el ltimo siglo, la produccin industrial de
compuestos haloorgnicos increment dramticamente la carga y la variedad de dichos compuestos en el planeta.
Mantener esta tendencia y no compensarla con el incremento de la taza de degradacin, ocasionar acumulacin de
dichos contaminantes, con el consecuente incremento de los riesgos para la salud humana y el medio ambiente. Esta
situacin es especialmente preocupante en los casos de las molculas ms resistentes para la biodegradacin como
los COP.

Ahora bien, son conocidas numerosas bacterias y hongos que pueden degradar compuestos halo orgnico en
diversas rutas metablicas bajo condiciones aerbicas y anaerbicas. La biodegradacin de molculas halo
orgnicos ocurre, por suerte, con enzimas no especficas (co-metabolismo) o mediante enzimas altamente
especficas que tienen como fin el de aprovechar tales molculas como fuente de nutrientes y/o energa que aportan
al crecimiento de dichos microorganismos.
En el cometabolismo el papel natural de la enzima de degradacin es el metabolismo de otra molcula (normalmente
no contaminante), pero, dada la baja especifidad de la enzima, afortunadamente esta podra degradar contaminantes
con estructuras semejantes. Normalmente este proceso es lento, no completo (degradacin parcial) y adems, los
microorganismos que lo realizan no se benefician de tal proceso. Por el contrario, tal proceso podra ser inhibitorio
para los microorganismos, dado que la enzima puede estar ocupada con el sustrato equivocado (inhibicin
competitiva) o el producto de la reaccin ser txico. A pesar de la ineficiencia del co-metabolismo, a veces se usa
este tipo de reacciones en biorremediacin a nivel de campo, siempre y cuando no exista una mejor opcin. Los dos
ejemplos ms importantes de procesos de co-metabolismo de contaminantes haloorgnicos son la oxidacin de
solventes clorados como PCE y TCE, y de bifenilos policlorados (PCB).

En otros casos el contaminante puede servir a los microorganismos como una fuente de uno o ms elementos
esenciales para su crecimiento (carbono, nitrgeno, fsforo, o energa). En este escenario la biodegradacin est
relacionada con el crecimiento de los microorganismos. Para este tipo de degradacin las enzimas son normalmente
especficas y, por tanto, la tasa de reaccin es mucho ms rpida. Adems, en tales casos la contaminacin da una
ventaja ecolgica a los microorganismos que llevan a cabo el proceso de degradacin, pues al hallar una fuente de
energa su poblacin ir en aumento y, a su vez se incrementar la tasa de degradacin en mayor medida.

Para la estimulacin de la degradacin de un contaminante se puede considerar la ruta metablica de la degradacin
y sus requerimientos; as como la fisiologa de la bacteria que produce la degradacin. Entre los factores ms
importantes encontramos: 1) el papel del contaminante en la reaccin, e.g. fuente de carbono, donador de electrones,
aceptor final de electrones, inhibidor (como en co-metabolismo); 2) sustratos adicionales de la reaccin e.g. oxgeno;
3) el donador y aceptor final de electrones para capturar energa; 4) condiciones ptimas para el crecimiento de los
microorganismos que degradan el contaminante (potencial rdox, temperatura, pH, etc.) y 5) las caractersticas del
sitio contaminado (pH, nutrientes, potencial rdox, temperatura, etc.).
Mencionaremos tres ejemplos para mostrar el efecto de la ruta metablica sobre los mecanismos de estimulacin de
los procesos de degradacin. Los dos primeros ejemplos se relacionan con la deshalogenacin oxidativa y
deshalogenacin hidroltica. En ambos casos, la etapa clave en la degradacin es la incorporacin de uno o dos
grupos de hidroxilos. En la deshalogenacin oxidativa, la fuente de oxgeno es molecular (O2) y por tanto ocurre
estrictamente en condiciones aerbicas, mientras que en la deshalogenacin hidroltica la fuente del oxgeno es la
molcula de agua y puede ocurrir bajo diversas condiciones rdox, segn el requerimiento del aceptor de electrones
de la bacteria responsable por esta reaccin (respiracin aerbica, desnitrificacin, etc.).
Un tercer ejemplo tiene que ver con la deshalogenacin reductiva, en donde el tomo de cloruro se reemplaza por un
tomo de hidrgeno y dos electrones. Esta reaccin puede ocurrir en condiciones aerbicas o anaerbicas. En
muchos casos de deshalogenacin reductiva el compuesto haloorgnico juega el papel de aceptor final de electrones
en respiracin anaerbica, donde la energa liberada en la oxidacin del donador de electrones se utiliza para formar
gradiente de protones y posteriormente para sintetizar ATP. Este proceso se conoce con el nombre de
halorespiracin o deshalorespiracin y las bacterias implicadas en l normalmente son anaerbicas obligatorias. En
este sentido, para estimular la halorespiracin es necesario asegurar las condiciones anaerbicas y adicionar fuentes
de carbono y un donador de electrones (e.g. hidrgeno).

Entre las generalizaciones de la biodegradacin de compuestos rganoclorados se ha determinado que los
compuestos que presentan menor nmero de cloros son ms susceptibles a degradacin aerbica (e.g.
deshalogenacin oxidativa y deshalogenacin hidroltica) y, por el contrario, entre mayor nmero de cloros es ms
alto el grado de susceptibilidad a degradacin anaerbica (deshalogenacin reductiva.

De hecho, para algunos compuestos como los PCB, dioxinas y furanos, altamente clorados, la nica manera para ser
degradados completamente es a travs de una etapa anaerbica en la cual ocurre la declorinacin reductiva. Solo
entonces el producto menos clorado puede degradarse aerbicamente, en ocasiones hasta alcanzar su
mineralizacin completa. Por lo tanto, en el caso de muchos de los COP parece ms atractiva la posibilidad de
emplear un proceso anaerbico-aerbico combinado.



BIODEGRADACIN DE BIFENILOS POLICLORADOS (PCB)

Los Bifenilos Policlorados (PCB) fueron utilizados ampliamente desde 1929 hasta 1978 en equipos elctricos como
transformadores, condensadores, intercambiadores de calor, sistemas hidrulicos, as como tambin en la fabricacin
de pinturas y plsticos. Aproximadamente, se han producido en el mundo 1324.000 toneladas de PCB que en gran
cantidad han ocasionado contaminacin al medio ambiente. Al respecto, se estima que solamente en el ro Hudson
en Estados Unidos fueron liberados entre 95 a 603 toneladas de PCB.

Las molculas de PCB se componen de dos anillos de fenilos con 1 a 10 tomos de cloro (Fig. 1).


Fig. 1

Existen 209 posibles congneres de los PCB, de acuerdo a la cantidad y posicin de los cloros. Aproximadamente
189 congneres fueron identificados en mezclas comerciales, 36 de los cuales estn considerados como los ms
significativos por su abundancia y alta toxicidad. Es importante mencionar que los PCB fueron comercializados en
diferentes mezclas, caracterizadas por el grado de clorizacin, e.g., Aroclor 1221, 1242 y 1260 contienen
respectivamente, 21%, 42% y 60% de cloros en peso. Existe, sin embargo, gran diferencia entre los distintos
congneres de PCB en cuanto a su comportamiento ambiental (persistencia, sorcin, transporte y bioacumulacin) y
toxicidad. En este sentido, los PCB con mayor cantidad de cloros son ms resistentes, se adsorben con ms fuerza al
suelo o sedimento y tienen mayor tendencia a bioacumularse. Por ejemplo, la solubilidad de PCB cambia de 6 ppm
en monoclorobifenil a 0,007 ppm en octaclorobifenil. Los congneres ms txicos presentan una conformacin co-
planar.

Dichos congneres no tiene cloros en posicin orto, por el contrario, tienen cloros en las dos posiciones para y, por lo
menos, en las dos posiciones meta. Estas molculas se parecen estereo-qumica y toxicolgicamente a 2,3,7,8
tetraclorodibenzo-p-dioxin (TCDD) y, por lo tanto, se denominan como-dioxin. Segn la lista, elaborada por la
Organizacin Mundial de la Salud, de las Toxicidades Equivalentes a Dioxinas (TEQ por su siglas en ingls) de varios
compuestos de como-dioxin, la TEQ de distintos congneres de PCB vara de 0,00001 a 0,1, en comparacin con la
mxima TEQ de 1,0 que fue asignada a 2,3,7,8-TCDD.

Para llevar a cabo la remediacin de un sitio contaminado con PCB hay que tener en cuenta que la contaminacin es
una mezcla de congneres. Esto es especialmente clave cuando se trata de degradacin biolgica. Las enzimas que
catalizan la degradacin presentan un rango limitado de molculas que pueden ser degradadas y hasta la fecha, an
no ha apareci la Sper-Bacteria, de tal suerte que para la biorremediacin de sitios contaminados con PCB es
mejor contar con la comunidad microbiana.

La degradacin secuencial anaerbica-aerbica es especialmente importante para PCB, ya que los congneres con
mayor nmero de cloros se transforman exclusivamente en condiciones anaerbicas en procesos de
deshalogenacin reductiva y los productos de declorinacin, congneres de menor nmero de cloros, se degradan
exclusivamente en condiciones aerbicas. Esta combinacin es mucho ms importante en las mezclas comerciales
de mayor clorizacin del PCB, e.g, la incubacin anaerbica (cuatro meses) antes de la incubacin aerbica con la
cepa LB400 fue indispensable para la degradacin de Aroclor 1260, mientras que mejor solo un poco (70% versus
67%) la degradacin aerbica de Aroclor 1248 con la misma cepa. Aunque la investigacin sobre la biodegradacin y
biorremediacin de PCB se ha adelantado consideradamente en los ltimos 25 aos todava existen mltiples
barreras que han de superarse para lograr un tratamiento eficaz que pueda disminuir las concentraciones de PCB a
niveles aceptables. Las barreras son: 1) la baja solubilidad y biodisponibilidad de PCB; 2) la baja eficiencia de
deshalogenacin anaerbica; 3) la baja eficiencia de degradacin aerbica; 4) ambos procesos (anaerbicos y
aerbicos) degradan preferiblemente PCB sin substitucin de cloro en posicin de orto, lo que resulta en la
acumulacin de productos orto. En lo que sigue discutiremos cada barrera y las estrategias para superarlas.

LA BAJA BIODISPONIBILIDAD DE PCB

La biodisponibilidad de compuestos orgnicos se considera una de las ms importantes causas que influyen en la
tasa de degradacin, adems de que la baja disponibilidad es considerada como un factor importante que hace a un
compuesto recalcitrante. Este factor podra limitar tanto la degradacin aerbica como la anaerbica. Adicionalmente,
se considera que la baja disponibilidad es uno de los factores primordiales que explican porqu las metodologas que
funcionan en el laboratorio, no funcionan en el campo. En este sentido, la adsorcin de compuestos orgnicos al
suelo con el tiempo va fortalecindose y, por lo tanto, la descontaminacin de sitios que fueron contaminados aos
atrs es ms compleja y difcil.

Algunos intentos de superar esta barrera se han concentrando en la aplicacin de surfactantes. Sin embargo, el xito
de dicho mtodo an se encuentra limitado. Esto puede explicarse debido a la toxicidad de varios surfactantes para
los microorganismos y por el entrampamiento de PCB en las micelas que no genera ningn aumento de la
biodisponibilidad. Adicionalmente, la inhibicin de la degradacin puede atribuirse al hecho de que los surfactantes
pueden cambiar la composicin de la comunidad microbiana, estimulando bacterias que pueden degradar tales
surfactantes. Adems, el surfactante puede disociar las bacterias que estn adsorbidas junto a los contaminantes en
la matriz y, por lo tanto, alejarlas de estos. En condiciones anaerbicas es posible que la adsorcin de bacterias y
PCB en el mismo slido estimule su deshalogenacin, y existen especulaciones acerca de que compuestos como los
PCB se deshalogenan, tambin, en su forma adsorbida o slida, tal vez de una manera semejante a la reduccin de
hierro slido.

Varios estudios han mostrado que los surfactantes de la familia Tween son menos txicos que otros. Adems, se
encontraron que los surfactantes Tween 60, 61 y 65 pueden servir como fuente de carbono y donadores de
electrones para la deshalogenacin reductiva de hexaclorobenzeno (HCB;). Tween 80 estimul la deshalogenacin
reductiva de HCB (hasta cinco veces ms) en concentraciones bajas o iguales a la concentracin micelar crtica (30-
1200 mg/L), pero, inhib el proceso en concentraciones significativamente mayores (1,500-5,000 mg/L). Por otro
lado, Tween 80 inhibi varias cepas de Dehalococcoides spp. Aunque el ltimo estudio fue dirigido para realizar
deshalogenacin de tetracloroetileno (PCE), diferentes estudios han mostrado la importancia de dicho gnero y otros
relacionados en la deshalogenacin de PCB. Es posible que los biosurfactantes tengan mayor xito en la
remediacin, dado que tienen menor toxicidad y son ms biodegradables y, al menos, un estudio ha mostrado que el
biosurfactante rhamnolipid estimul la deshalogenacin reductiva de PCB. Con todo, un mayor conocimiento sobre la
compleja interaccin entre suelo, surfactante, contaminante y microorganismos puede ayudar en el diseo de
mejores estrategias para la aplicacin de surfactantes en la remediacin de sitios contaminados.

LA BAJA EFICIENCIA DE DESHALOGENACIN ANAERBICA

El metabolismo anaerbico de PCB se produce mediante deshalogenacin reductiva.
Actualmente se conocen ocho procesos distintos de declorinacin reductiva de PCB segn su selectividad, la
posicin del cloro y de los cloros vecinos. Estos procesos han sido descritos con ms detalle en otras revisiones.
Varios estudios indican que diversos procesos son realizados por distintos grupos de bacterias. El proceso ms
comn es la desclorizacin de un cloro en posicin meta o para situados entre dos cloros. El que lo sigue es la
declorizacin de cloro en posicin meta o para situados al lado de un cloro. Y menos comunes que los anteriores es
la declorizacin de los cloros sin otros cloros al lado en posiciones meta o para. La declorizacin menos comn se
desarrolla en posicin orto. Este proceso fue observado en el laboratorio, aunque para congneres de menor
importancia en mezclas comerciales de PCB. Teniendo en cuenta lo anterior, la combinacin de dos o ms procesos
complementarios es ideal para lograr mayor desclorizacin. Este tipo de combinacin ha sido observada en algunos
sitios. Los productos dominantes (pero no exclusivos) de esta etapa son PCB con menos cloros: entre uno a tres
cloros en posiciones orto y orto + para. Por ejemplo, 2-, 4-, 2,4-, 2,6-, 2,2-, 2,4-, 2,2,4-, y 2,4,4-clorobifeniles fueron
70 a 85% (molar) de los productos de desclorizacin anaerbica de Aroclor 1242.

La investigacin sobre la deshalogenacin reductiva de PCB ha presentado por muchos aos dificultades al cultivar
las bacterias que llevan a cabo dicha deshalogenacin. Sin embargo, se ha logrado un gran avance en los ltimos
aos, inicialmente al ser identificadas las cepas o-17 y DF-1, filogenticamente cercanas a Dehalococcoides, como
las responsables de la desclorizacin de PCB en cultivos de enriquecimiento. Posteriormente, se descubri que los
cultivos puros de Dehalococcoides cepa 195 y cepa CBDB1 pueden deshalogenar PCB, dioxinas policloradas y
furanas policloradas. Finalmente, algunos estudios que emplearon mtodos moleculares con muestras ambientales
han establecido la importancia del gnero Dehalococcoides y otras filogenticamente cercanas en la
deshalogenacin reductiva de PCB y dioxinas clorados.

Una de estas cepas, DF-1, ha sido aislada recientemente y su genoma est en proceso de secuenciacin. Estos
nuevos resultados seguramente van a ampliar el conocimiento sobre la deshalogenacin reductiva de PCB en los
prximos aos y, en gran medida, esto redundar en el mejoramiento del proceso de biorremediacin en el campo.
Ahora bien, se han propuesto varias estrategias para estimular la deshalogenacin reductiva de PCB: 1) adicin de
fuente de carbono y donador de electrones; 2) adicin de surfactantes; 3) adicin de otro compuesto halogenado; 4)
adicin de FeSO4; 5) adicin de un consorcio microbiano con capacidad de deshalogenacin reductiva de PCB. Estas
estrategias se discutirn en lo que sigue.

1.Adicin de fuente de carbono y donador de electrones. En condiciones naturales (suelo, sedimento etc.) el carbono
se considera como el nutriente limitante para el crecimiento bacteriano. Dado que en el proceso anaerbico el PCB
sirve como aceptor de electrones, y los anillos aromticos quedan intactos, las bacterias que preforman la
halorespiracin necesitan una fuente adicional de carbono y donador de electrones para estimular el proceso.

Adems, la adicin de una fuente de carbono estimular el consumo de aceptores de electrones alternativos que
podran inhibir la deshalogenacin. Por lo tanto, el primer nutriente para lograr la biostimulacin de la
deshalogenacin reductiva es probablemente el carbono.
Varios estudios han mostrado que la adicin de fuentes de carbono estimula la dehalogenacin reductiva.
Normalmente, los halorespiradores pueden utilizar sustratos de uno a tres carbonos, aunque es posible agregar
fuentes de carbono ms complejas como glucosa, molasa o almidn. En condiciones anaerbicas dichas fuentes de
carbono sern fermentadas a alcoholes, cidos grasos e hidrgeno que pueden alimentar los halorespiradores.


Actualmente no hay una nica fuente de carbono que se considere ideal ,












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