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NEUROBIOLOGA DE LA ENFERMEDAD

PI3K-Akt Sealizacin Actia !"OR !e#ia#a E$ile$t%&'ne(i( en


%)&an%t*$ic%( #el +i$%ca!$% ,-lt-)a M%#el% #e P%(t-")a-!atic
E$ile$(ia
.e&en/ Be)#ic+e(k/0 102 Ale3an#)a M4 Seca#%)a0 3 .e)% Sa$%n5ian0 1 Ma)k M4
Ma+%ne/0 6 ,%))in A4 Pi!entel0 6 ,%)ina A4 L-cini0 6 Ma)i5a U(en%ic0 1 / Kein 74
Stale/10 2
8De$a)ta!ent% #e Ne-)%l%&*a0 9%($ital Gene)al #e Ma((ac+-(ett(0 B%(t%n0
Ma((ac+-(ett( :212;02 E(c-ela #e Me#icina #e 9a)a)#0 B%(t%n0 Ma((ac+-(ett(
:212;0 / el #e$a)ta!ent% #e In&enie)*a El'ct)ica / el P)%&)a!a 6Bi%en&inee)in&
In&enie)*a / ,%!$-tacin0 Unie)(i#a# #e Le+i&+0 Bet+le+e!0 Penn(/lania
1<:1=
!"OR (e actia en la e$ile$(ia0 $e)% l%( !ecani(!%( #e actiacin #e !"OR en
la e$ile$t%&'ne(i( $%(t-t)a-!>tic% (%n #e(c%n%ci#%(4 "a!$%c% e(t> cla)% (i la
in+i?icin #e !"OR tiene -n e@ect% anti-e$il'$tic%0 % (i!$le!ente antic%n-l(i%4
El +i$%ca!$% %)&an%t*$ic%( !%#el% #e c-lti% #e la )ata #e la e$ile$(ia $%(t-
t)a-!>tica (e -tiliz $a)a e(t-#ia) l%( e@ect%( #e la)&% $laz% Ac-at)% (e!ana(B la
in+i?icin #e la( *a( #e (ealizacin C-e inte)actDan c%n !"OR4 Actii#a# ictal
(e c-antiEc $%) !e#icin #e la $)%#-ccin #e lactat% / &)a?aci%ne( el'ct)ica(0 /
la !-e)te cel-la) (e c-antiEc c%n lactat% #e(+i#)%&ena(a ALD9B la( !e#ici%ne(
#e #e($)en#i!ient% / l%( )ec-ent%( #e ne-)%na( tei#a( c%n Ni((l4 Me#ici%ne( #e
lactat% / LD9 (e c%))elaci%nan ?ien c%n l%( )ec-ent%( #e actii#a# / #e la(
ne-)%na( elect)%ence@al%&)>Eca(0 )e($ectia!ente4 La in+i?icin #e PI3K / Akt
i!$i#i la actiacin #e !"OR0 / @-e tan eEcaz c%!% la in+i?icin #e la !"OR en
la )e#-ccin #e la actii#a# ictal / la !-e)te cel-la)4 Un in+i?i#%) #%?le #e la PI3K
/ !"OR0 NFP-BEG23=0 ta!?i'n @-e eEcaz4 La in+i?icin #e la !"OR c%n
)a$a!icina )e#-ce la ?)%tacin a3n4 Late inici% #el t)ata!ient% )a$a!icina e)a
eEcaz en la )e#-ccin #e la actii#a# e$il'$tica / la !-e)te cel-la)0 !ient)a( C-e
la te)!inacin antici$a#a #el t)ata!ient% )a$a!icina n% (e t)a#-5% en -na !a/%)
actii#a# e$il'$tica % !-e)te cel-la)4 La( c%ncl-(i%ne( #el e(t-#i% (%n la(
(i&-iente(H A1B el !%#el% #e la c-lt-)a #el +i$%ca!$% %)&an%t*$ic%( #e la
e$ile$(ia $%(t-t)a-!>tica c%!$)en#e -n en(a/% )>$i#% #e la( actii#a#e( anti-
e$ile$t%&'nica( / ne-)%$)%tect%)a( /0 en e(te !%#el% A2B la actiacin #e !"OR
#e$en#e #e PI3K-Akt0 / A3B t)an(it%)i% in+i?icin #e !"OR +a (-@)i#% l%( e@ect%(
(%?)e la e$ile$(ia4
introduccin
E$ile$t%&'ne(i(0 % el #e(a))%ll% #e la e$ile$(ia0 #e($-'( ce)e?)al en 5-)a#% I (e
ca)acte)iza $%) -n a-!ent% &)a#-al / c%ntin-% en (ei I $)%?a?ili#a# G-)e
ASalaza) et al0 1;<=J4 Killia!( et al0 2::;J4 Ra/!%nt et al0 2:1:4B4 Una #e la(
ca)acte)*(tica( #el ce)e?)% e$il'$tic% e( ?)%tacin a3n C-e +a (i#% !e5%)
#e(c)it% en el t)a/ect% #e la E?)a #e !-(&% en el +i$%ca!$% A,)%nin / D-#ek0
1;<<J4 S-t-la et al0 1;<;J Okazaki et al0 1;;=4B4
La *a #e !"OR (e actia #e @%)!a t)an(it%)ia #e($-'( #e le(i%ne( ce)e?)ale(
e$ile$t&ena( e3$e)i!entale( AB-ck!a(te) et al0 2::;J44 Gen& et al0 2::;J4
9-an& et al0 2:1:B / en el (*n#)%!e &en'tic% #e la e(cle)%(i( t-?e)%(a0 en el C-e
la e$ile$(ia int)ata?le e( -na ca)acte)*(tica $)%!inente A,)in%0 2:11J McDaniel /
K%n&0 2:11J4 Stale/ et al0 2:11B4 in+i?icin #e !"OR (-$)i!e E?)a( !-(&%(a(
C-e ?)%ta en !%#el%( #e e$ile$(ia a#C-i)i#a AB-ck!a(te) et al0 2::;4B / )e#-ce
la( c%n-l(i%ne( (in )eta)#% e($%n I en el !%#el% kainat% #e e$ile$(ia c)nica
AGen& et al0 2::;J4 9-an& et al0 2:1:4B4 L%( e@ect%( anti-e$ile$t%&'nica( @-e)%n
!>( a)ia?le( en el !%#el% #e la $il%ca)$ina AB-ck!a(te) et al0 2::;J44 "an& et
al0 2:12B / el !%#el% kin#lin& a&-#a ASliLa et al0 2:12J44 Fan Fliet et al0 2:12B4
A #i@e)encia #e l%( antic%n-l(iante( t)a#ici%nale(0 la )a$a!icina tiene in!e I
#iata e@ect%( (%?)e inca-taci%ne( (in% alte)a l%( ci)c-it%( #el +i$%ca!$%
AMcDaniel / K%n&0 2:11B4 in+i?icin #e !"OR $%#)*a $)eeni) % )ee)ti) l%(
ca!?i%( $%(t-t)a-!>tica( en l%( ci)c-it%( #el ce)e?)% C-e c%n#-cen a -n e(ta#%
e$il'$tic% A,)in%0 2:11J LeL / B-ck!a(te)0 2:11J iel McDan I / K%n&0 2:11B4 Sin
e!?a)&%0 la )a$a!icina0 el !e#ica!ent% C-e (e -tiliza a!$lia!ente $a)a in+i?i)
!"OR0 e( -n $%tente in!-n%(-$)e(%) A,+-e+ / Ka+an0 2::=B0 / la *a !"OR
tiene -n a!$li% $a$el en la )e&-lacin #e la (*nte(i( #e $)%te*na( / %t)%( $)%ce(%(
cel-la)e( )elaci%na#%( c%n el c)eci!ient% ASa)?a((% et al 40 2::=J ,a)%n et al0
2:1:B44 Pa)a #e(a))%lla) t)ata!ient%( !>( e($ec*Ec%(0 (e nece(ita -na !e5%)
c%!$)en(in #e !"OR acti I acin en la e$ile$(ia4
La *a !"OR (e +a e(t-#ia#% a!$lia!ente en el c>nce) A,+ian& / A?)a+a!0
2::MJ G-e)tin / Sa?atini0 2::MJ En&el-!an0 2::;J4 F)%nte)a( et al0 2:1:B4 Ent)e
l%( )e&-la#%)e( #e !"OR C-e c%ntiene0 (en(i?le a )a$a!icina c%!$le5% $)%teic%
A!"OR,1B (%n Ra@ C-ina(a ARAFB actia#a $%) !it&en%( $)%te*na C-ina(a
C-ina(a AMEKB - ERK ARAF-MEK-ERKB / @%(@ati#ilin%(it%l 3-C-ina(a API3KB - *a( Akt0
/ la #i($%ni?ili#a# !eta?%lit% #etecta#% a t)a'( #e la( *a( #e $a)tici$acin #e
la AMPK0 REDD10 / %t)%(4
Sealizacin PI3K +a enc%nt)a#% )eciente!ente C-e e( nece(a)i% $a)a la
actiacin #e !"OR $%) l%( ataC-e( in#-ci#%( $%) $entilentet)az%l AG+an& /
K%n&0 2:12B0 $e)% l%( actia#%)e( a&-a( a))i?a #e !"OR en la $%(t I
e$ile$t%&'ne(i( t)a-!>tica (ien#% en &)an !e#i#a #e(c%n%ci#% AMcDaniel /
K%n&0 2:11B0 / l%( e@ect%( #e !"OR l%( in+i?i#%)e( #e la e$ile$(ia +an a)ia#%
(e&Dn el !%!ent% #e la inte)encin / el !%#el%4 Pa)a el e(t-#i% #e (ealizacin
!"OR en la e$ile$(ia0 (e -tiliz -n !%#el% #e acele)acin I e)ate# in it)% #e la
e$ile$(ia $%(t-t)a-!>tica C-e ca$t-)a ca)acte)*(tica( c)*tica( #e e$ile$t%&'ne(i(
cl*nica0 incl-/en#% &)a#-al en el (et I0 ?)%tacin a3n0 c%n-l(i%ne(
elect)%ence@al%&)>Eca( e($%nt>ne%(0 la a&)-$acin #e c%n-l(i%ne(0 e(ta#%
e$il'$tic%0 / $%(te)i%) !-e)te #e$en#iente #e la actii#a# cel-la)0 la )e($-e(ta a
l%( antic%n-l(i%(0 / la a$a)icin #e antic-e)$%( anti I )e(i(tencia c%n-l(i%
AD/+)@5el#-7%+n(en et al0 2:1:J44 Be)#i I c+e(k/ et al0 2:12B4 9e!%( #e(a))%lla#%
-n n-e% en(a/% #e la actii#a# e$il'$tica en @-ncin #el a-!ent% #e
c%n-l(i%ne( C-e #e$en#en #e la c%ncent)acin #e lac I tate e3t)acel-la)
AD-)ante et al40 1;;6B $a)a c-antiEca) la e$ile$(ia en e(ta $)e$a)acin0 / l%
c%!?ina!%( c%n la( e(ti!aci%ne( #e la !-e)te cel-la) ?a(a#% en la li?e)acin #e
la enzi!a lactat% #e(+i#)%&ena(a ALD9B4
Materiales y Mtodos
L%( c-lti%( %)&an%t*$ic%(4 Gene)a!%( )e?ana#a +i$%ca!$% %)&an%t*$ic%( c-l I
t-)a( #el #*a $%(tnatal M - < )ata( S$)a&-e DaLle/0 / $)inci$al I le( c%nteni#%(
en D-li(ina )ec-?ie)t% c%n $%li-0 N-/ $laca( #e c-lti% #e te5i#%( en -na $lata@%)!a
%(cilante a O1 cicl% P !in0 en 3M Q , / =R #e ,O2 en Ne-)%?a(al-APB2M
AInit)%&en0 $)e$a)a#% c%n@%)!e a la( e($eciEcaci%ne( I cin #el @a?)icanteB0 c%n
Gl-taMAS :0= !M / 3: a& P !l #e &enta!icina AInit)%&enB4 "%#%( l%( $)%t%c%l%(
#e -(% #e l%( ani!ale( @-e)%n a$)%?a#%( $%) el ,%!it' #e ,-i#a#% #e Ani!ale(
in(tit-ci%nal / el -(% en el 9%($ital Gene)al #e Ma((ac+-(ett( / (e c%n I
c%n#-ct%( #e ac-e)#% c%n la P%l*tica #e Se)ici% #e Sal-# PD?lica #e l%( E(ta#%(
Uni#%( el ,-i#a#% 9-!an% / U(% #e Ani!ale( #e La?%)at%)i%4
La( #)%&a( / l%( en(a/%( #e lactat% / LD94 La )a$a!icina0 SP N::12=0 U:12N0 /
L. 2;6::2 (e a#C-i)ie)%n #e "%c)i( Bi%(cience0 / NFP-BEG23= (e a#C-i)i #e
Bi%Fi(i%n4 "%#%( l%( @>)!ac%( (e #i(%lie)%n en #i!et+/l(-l@ 3i#% I ADMSOB / (e
a$lican a la( c-lt-)a( a $a)ti) #el 3 # in it)% ADIFB0 a !en%( C-e (e e($eciEC-e l%
c%nt)a)i%4 L%( c-lti%( #e c%nt)%l (e t)ata)%n c%n :01R #e DMSO c%!% e+*c-l%4
De(#e c-lti%( %)&an%t*$ic%( #e #i@e)ente( ani!ale( #e I Fel%$ e$ile$(ia a
el%ci#a#e( li&e)a!ente #i@e)ente(0 t%#%( l%( e3$e)i!ent%( -tilizan )%#a5a( #e
c%nt)%l #el !i(!% ani!al4 La( c%ncent)aci%ne( #e lactat% / LD9 @-e)%n !ea I
S-)e# en !e#i% #e c-lti% -tiliza#% c%n l%( kit( #e Bi%Fi(i%n4 ,%ncen I t)aci%ne(
#e lactat% (e calc-la)%n en )elacin a l%( e(t>n#a)e( #e lactat% c%n%ci#%(
ABi%Fi(i%nB0 !ient)a( C-e la( c%ncent)aci%ne( #e LD9 (e calc-la)%n en -ni#a#e(
a)?it)a)ia( AAUB0 n%)!aliza#%( al DIF $)%!e#i% N-2< #e la c%ncent)acin #e LD9
en el c%nt)%l Ae$ile$(iaB (%?)ena#ante #e c-lti%4
Elect)%E(i%l%&*a / tincin c%n /%#-)% #e $)%$i#i%4 La actii#a# (e )e&i(t) c%n
!ic)%elect)%#%( #e t-n&(ten% en ca$a $i)a!i#al ,A10 !ient)a( C-e l%( c-lti%(
(e !ant-ie)%n en -na c>!a)a #e inte)@az $e)@-n#i#% c%n Ne-)%?a(al-A a 3M Q ,4
Mat)iz #e elect)%#%( !Dlti$le( c)nica AMEAB &)a?aci%ne( e)an $%) I @%)!a#% c%n
c+i$( #e #i(e% $e)(%naliza#% ABe)#ic+e(k/ et al40 2:12B0 en el C-e (e
!ant-ie)%n c-lti%( %)&an%t*$ic%( c%!% (e #e(c)i?e ante)i%)!ente4 La(
c%ncent)aci%ne( #e lactat% en el (%?)ena#ante #el c-lti% #e($-'( #e 3 % 6 # en
la inc-?a#%)a (e c%!$a)a)%n c%n l%( )e&i(t)%( el'ct)ic%( #e l%( AMUMA #e la(
!i(!a( c-lt-)a(4 "incin #e c'l-la( !-e)ta( (e )ealiz c%n /%#-)% #e $)%$i#i%
APIB AInit)%&enJ
1 !& P !l #e (%l-cin !a#)eB C-e (e aa#e a ii) la( c-lt-)a( $a)a -na #il-cin
1H2=: Enal4 L%( c-lti%( (e inc-?a)%n #-)ante 1 +0 @%t%&)aEa#%( en -n
!ic)%(c%$i% c%n@%cal ine)ti#% AGei((B0 / (e analiza)%n c%!% (e +a #e(c)it%
$)eia!ente ABe)#ic+e(k/ et al40 2:12B4 El nD!e)% #e c'l-la( !-e)ta( (e
c%nta)%n #-)ante ca!?i%( #e !e#i% #e ent)e N / 2= DIF0 / (e c%!$a)a)%n c%n la(
c%ncent)aci%ne( #e LD9 )elati%( en !e#i% #e c-lti% -(a#%( #e l%( !i(!%(
c-lti%( en el !i(!% $e)*%#% #e tie!$%4
"incin #e Ni((l4 L%( c-lti%( (e E5a)%n en $a)a@%)!al#e+*#% al 6R0 $e)!ea?ili#a#
a?ilize# $a)a 1+in :03R ")it%n-S en -na $lata@%)!a %(cilante0 / tei#%( c%n PI
AInit)%&en0 1 !& P !l #e (%l-cin !a#)e0 #il-i#%( 1H2=: en PBSB #-)ante = +4 L%(
c-lti%( (e !%ntan0 / la( i!>&ene( @-e)%n a#C-i)i#a( c%n -n %?5eti% #e 6:S en
-n !ic)%(c%$i% c%n@%cal ALeicaB c%n l%n&it-# #e %n#a #e l>(e) a#ec-a#% / El t)%(
I4 Pila( $tica( C-e at)aie(an t%#% el e($e(%) #e la )e?ana#a @-e)%n )e I c%n
ca?le0 c%n el ta!a% #e la #i)eccin z $a(% #e :3 a4!44
In!-n%+i(t%C-*!ica4 L%( c-lti%( (e E5a)%n / $e)!ea?iliza)%n4 Bl%C-ea) I cin
ta!$n A1:R #e (-e)% #e ca?)a en el :0:=R #e ")it%n-S en PBSB (e a$lic $%)
2 + #e($-'( #e la $e)!ea?ilizacin4 L%( c-lti%( (e inc-?a)%n c%n anti-c-e)$%
$)i!a)i% A1H1:: anti-@%(@%-SN ASe)23=P23NBJ ,ell Si&nalin& "ec+n%l%&/0 % 1H2::
anti-MAP2 / 1H=:: anti-SMI-312J ,%anceB la n%c+e a 6 Q ,0 (e laa)%n / (e
inc-?a)%n c%n antic-e)$%( (ec-n#a)i%( a$)%$ia#%( c%n5- I ce))a#a( c%n Ale3a
Fl-%) 6<<0 =N<0 % N6M ALi@e "ec+n%l%&ie(B #-)ante la n%c+e4 L%( c-lti%( (e laa)%n
a c%ntin-acin0 $%) c%nt)a(te c%n la tincin #e Ni((l A(l% $a)a $-SNB0 !%nta#%(0 /
la i!a&en c%n -n !ic)%(c%$i% #e ?a))i#% c%n@%cal ALeica % Gei((B4
La( t)an(@e)encia( / l%( an>li(i( %cci#entale(4 L%( c-lti%( (e +%!%&eneiza)%n0 /
e3t)act%( #e $)%te*na (e ca)&a)%n en 12R #e ")i(-&licina &ele( #e $%liac)ila!i#a
A&ele( N%e3J Init)%&enB / (e (e$a)a)%n $%) elect)%@%)e(i(4 La( $)%te*na( (e
t)an(E)ie)%n a c%ntin-acin a !e!?)ana( #e PFDF AMilli$%)eB / (e tie)%n c%n
-na !ezcla #e antic-e)$% $)i!a)i% A1H=:: $%licl%nal #e c%ne5% anti-@%(@%-SN ASe)
23=P23NB % anti-@%(@%-SN ASe) 26:P266B0 / 1H =:: !%n%cl%nal #e )atn anti-SN0 ,ell
Si&nalin& "ec+n%l%&/0 en ta!$n #e ?l%C-e%B0 (e&-i#% #e a$ I antic-e)$%(
(ec-n#a)i%( a$)%$ia#% #e LI-,OR4 La( !e!?)ana( @-e)%n i!>&ene( en -n
e(c>ne) #e #%( canale( in@)a))%5%( AO#/((e/J LI-,ORB / la( ?an#a( (e
c-antiEca)%n c%n el (%@tLa)e #e LI-,OR4
An>li(i( elect)%&)>Eca4 Eent%( ictale( Ac%n-l(i%ne( elect)%ence@al%&)>Eca(B (e
#T I !-lta#% c%!% eent%( $a)%3*(tic%( #e !-c+% !a/%) a!$lit-# C-e $lanta la
actii#a# #e !Dlti$le( -ni#a#e( #e n-e% I / C-e #-)a !>( #e 1: (0 % eent%(
$a)%3*(tic%( !>( c%)t%( C-e (e $)%#-5e)%n c%n -na @)ec-encia #e 2 9z c%!%
!*ni!% #-)ante al !en%( 1: ( 4 Inte)ictale( eent%( Aeent%( ent)e c%n-l(i%ne(B
(e #eEnie)%n c%!% eent%( $a)%3*(tic%( #e O2:: !( #e #-)acin C-e %c-))en a
-na @)ec-encia #e O2 9z AD/+)@5el#-7%+n(en et al0 2:1:J44 Be)#ic+e(k/ et al0
2:12B4 En aC-ell%( ca(%( en C-e (e $)ece#i#a % (e&-i#a #e la actii#a# inte)ictal
eent%( ictale(0 inici% / Enal #e -n eent% ictal (e #eEnie)%n c%!% $-nt%( #e
tie!$% #%n#e la @)ec-encia Pa)%3 I /(!al eent% (-$e) % #i(!in-i) O2 9z0
)e($ectia!ente4
A3%n ?)%tacin c-antiEcacin4 "%!a!%( !ic)%&)a@*a( #e c%nt)a(te #e @a(e #e la
)e?ana#a / al)e#e#%)e( c%n a3%ne( &e)!ina#a( en 2:S I !a&niEca4 Se
nece(itan a$)%3i!a#a!ente 3:-6: !ic)%&)a@*a( $a)a c-?)i) el >)ea #e
&e)!inacin4 ,%(i!%( la( i!>&ene( 5-nta( en A#%?e P+%t%(+%$ ,S20 -tilizan#%
-na +e))a!ienta a-t%!atiza#a c%(t-)a l%te(4 A c%ntin-acin0 t)az el c%nt%)n%
)e?ana#a0 / &ene)a!%( c%nt%)n%( e3$an(in eC-i#i(tante( #e(#e el c%nt%)n%
)e?ana#a en 2:: $a(%( #e $*3ele(0 -tilizan#% Fi5i Ae3ten(in #el (%@tLa)e I!a&e7J
Na I ci%nale( In(tit-te( %@ 9ealt+0 Bet+e(#a0 MDB4 La( ne-)ita( C-e c)-zan la(
&i)a( c%n I @-e)%n !a)ca#%( / (e c%nta)%n -(an#% c%nta#%) #e c'l-la( $l-&-in en
Fi5i4 9e!%( (elecci%na#% a l%( )ec-ent%( #e c)-ce en el c%nt%)n% a ;:: a! la
#i(tancia #e(#e el ?%)#e #e la )e?ana#a #e c-antiEca) el nD!e)% #e a3%ne(
&e)!ina#a(0 /a C-e ?)%tan #en#)ita( n% (%n l% (-Eciente!ente la)&a( $a)a
e3ten#e)(e tan le5%( #el (%!a ne-)%nal A"a/l%) et al40 2::=B4 ,)-ce( A3%n (e
(-?#ii#ie)%n $%) $)%3i!al #el >)ea #el +i$%ca!$%H ,A1 / (-?ic-l-!0 ,A3 % &i)%
#enta#% ADGB4
El an>li(i( e(ta#*(tic%4 Se -tiliz la $)-e?a t #e St-#ent $a)a c%!$a)aci%ne( +i5%(
#e #%( a)ia?le( I0 / ANOFA #e -na *a c%n 9%l!-Si#ak an>li(i( $%(t +%c #e
c%!$a)aci%ne( $le( a)ia?le( !-l I4 Pa)a el an>li(i( #e c%))elacin0 (e -tiliz
Pea)(%n $)%#-ct%-!%!ent% #e calc-la) l%( c%eEciente( #e c%))elacin / l%(
al%)e( #e $4
Resultados
Las concentraciones de lactato y LDH refejan la actividad ictal y la
muerte celular ictal
En c-lti%( #e +i$%ca!$% %)&an%t*$ic%(0 actii#a#e( inte)ictal / ictal (i&-en -n
$e)i%#% #e latencia #e U M le(i%ne( #i(eccin #a@te) AFi&4 1AB4 Se !i#i la
c%ncent)acin #e lactat% / #e LD9 en l%( !e#i%( #e c%!-nicacin a $a)ti) #e
c-lti%( %)&an%t*$ic%( C-e @-e)%n t)ata#%( c)nica!ente $%) 1:: @enit%*na aM0 3
!M #e >ci#% C-in-)'nic% AK.NAB0 % e+*c-l%4 L%( #at%( #e l%( M0 1:0 160 1M0 210
260 2<0 / 32 DIF (e c%!?ina)%n en c-at)% $-nt%( #e tie!$% $%) !e#ia a)it!'tica0
DIF OVM01:WX0 OV1601MWX0 OV210 26WX0 / OV2<032WX AFi&4 1 B0 ,B4
,%ncent)aci%ne( #e lactat% / LD9 c%n I en l%( c-lti%( #e c%nt)%l Ae+*c-l%B
@-e)%n (i&niEcatia!ente !a/%)e( C-e en l%( c-lti%( t)ata#%( $%) c-alC-ie)a #e
@enit%*na % K.NA An Y 12 c-lt-)a( #e t)e( ani!ale(0 ca#a c%n#icinB4
En l%( c-lti%( #e c%nt)%l #e e$ile$(ia0 c-an#% la actii#a# ictal e(ta?a $)e(ente0
la $)%#-ccin #e lactat% @-e #e 10<< Z :03< !M P # AFi&4 LF0 !e#ia Z SD0 n Y <
$e)i%#%( ent)e ca!?i%( #e !e#i%0 (iete c-lt-)a(B0 !ient)a( C-e en la a-(encia #e
eent%( ictale(0 lactat% @-e $)%#-ci#% a 1012 Z :022 !! P # A$ O:0::10 $)-e?a #e
la tJ !e#ia Z SD0 n Y 1N $e)*%#%( ent)e ca!?i%( #e !e#i% en (iete c-lti%( #e
c%)te(B4 La $)%#-ccin / la #-)acin #e la actii#a# el'ct)ica #e lactat% @-e)%n
@-e)te!ente c%))elaci%na#%( AFi&4 1D0 n Y M c-lt-)a(0 Pea)(%n ) Y :0N220 $
O:0:1B0 al i&-al C-e la( c%ncent)aci%ne( #e LD9 / )ec-ent% #e PI AFi&4 1E0 n Y N
c-lt-)a(0 #at%( #e (iete ca!?i%( #e !e#i%0 ) Y :0N3=0 $ O:0::1B4 D-)ante la
li?e)acin #e LD9 I cin $e)*%#%( #e tie!$% en C-e %c-))ie)%n l%(
ac%nteci!ient%( ictale( @-e (i&niEcatia!ente !a/%) C-e la li?e)acin #e LD9 en
l%( $e)*%#%( c%n nin&Dn eent% ictal AFi&4 1G0 $ O:0::10 n Y N c-lti%(B4
Figura 1. Measurementsas ValidationofactateandLDH
biomarkersforepilepticactivityand la muerte celular. JFL, curso temporal
Representante ofepileptoenesisinan cultura !ipocampo oranot"picos. Los
colores corresponden a la frecuencia de ocurrencia de eventos paro#"sticos en $%
s contenedores, con e&emplos 'ue se muestran a la derec!a. , La actividad
multiunit Deep blue (tra)o superior*+ la lu), la actividad interictal a)ul o amarillo
(tra)o medio*+ , convulsiones electroencefalor,-cas ro&os (eventos ictales, tra)a
de fondo*. ., /, transcurso de tiempo de lactato (.* y LDH (/* la concentraci0n y
la producci0n acumulada en los controles epil1pticos (* y cultivos tratados con
fenito"na (2*, y 3452 (D*+ n 6 $7 cada condici0n. Las barras de error indican la
89M. La sini-caci0n estad"stica se muestra para los controles epil1pticos frente
a cultivos tratados con 3452, con : p ;%,%<, :: p ;%,%$, y ::: p ;%,%%$. Las
diferencias estad"sticamente sini-cativas entre los controles epil1pticos y
culturas fenito"na tratados fueron los mismos 'ue en comparaci0n con el control
3452, a e#cepci0n de lactato a D=V ;>7?,@7AB y LDH en D=V ;>7$,7CAB y
;>7?,@7AB , donde Derefound no !ay diferencias estad"sticamente
sini-cativas. D, Relaci0n ofactate actividad concentrationand, durante el
tiempo de periodsD!en Enica actividad -siol0ica o interictal estaba presente (F*
o cuando la actividad ictal estaba presente (G*. Las concentraciones de lactato se
representaron frente a la duraci0n de la actividad el1ctrica, con cada punto de
datos tot!etime entre mediumc!anes correspondiente. Line 9#ponential-t
iss!oDn.9, Relaci0n entre la concentraci0n de LDH en la cultura supernatantand
la c1lulas (HlIpositivos* numberofdead. /oncentraciones de LDH y las c1lulas
muertas teJidas con Hl numbersof se midieron en los mismos cultivos, con cada
punto de tiempo de nuevo tot!etime entre cambios de medio (LDH acumula en
el mediumsince cultura Eltima mediumc!ane vsnumberofH= cellsatt!etime
ofmediumc!ane* correspondiente. Linear-t l"nea iss!oDn.f, la producci0n de
lactato (media K D9, ::: p ;%, %%$* durante periodsDit! momento y sin
respiraderos ictales, a partir de datos 'ue se muestran en la D. L, liberaci0n de
LDH (media K D9, ::: p ;%, %%$* a partir de cultivos durante per"odos de tiempo
con y sin eventos ictales, a partir de datos en 9.
Manipulacin de la sealizacin de mTOR: eectos so!re la actividad
ictal y la muerte celular ictal
9e!%( $)%?a#% l%( e@ect%( #e la in+i?icin #e C-ina(a( A"a?la 1B (%?)e el
#e(a))%ll% #e la e$ile$(ia AFi&4 2A-F0 n Y 3 ca#a c%n#icinB4 En I $)%+i?icin #e
7NK n% t-% e@ect% (i&niEcati%0 !ient)a( C-e la in+i?icin #e MEK n% t-% nin&Dn
e@ect% (i&niEcati% (%?)e la $)%#-ccin #e lactat% ante( #e 2: DIF4 Sin e!?a)&%0
la in+i?icin #e PI3K0 Akt0 !"OR0 / la in+i?icin #-al #e PI3K-!"OR #i(!in-/
(i&niEcatia!ente la $)%#-ccin #e lactat% a $a)ti) @)%!NDIF A$ O:0:=B0 la
li?e)acin a $a)ti) an#LD9 ;-1: DIF A$ O:0:=B4 9e!%( )e$eti#% l%( e3$e)i!ent%(
c%n L. 2;6::2 / )a$a!icina An Y 3B / #e n-e% enc%nt) -na in+i?icin
(i&niEcatia #e la $)%#-ccin #e lac I "ate A#e N DIF0 $ O:0:=B / la li?e)acin #e
LD9 A#e 1: DIF0 $ O:0:=B )e($ect% a l%( c%nt)%le(4 "a!?i'n $)%?a!%( la #%(i(-
)e($-e(ta #e la API-2 / NFP-BEG23= An Y 3 $%) c%n#icinB0 / enc%nt)a!%( la
in+i?icin #e$en#iente #e la #%(i( tant% #e lactat% / LD9 AFi&4 3B4 Se calc-l
lactat% / c%ncent)aci%ne( #e LD9 en c-lti%( t)ata#%( c%n el @>)!ac% c%!%
$%)centa5e #e l%( c%nt)%le( e!$a)e5a#%( en el #*a #e la c%ncent)acin #e lactat%
$ic% A!>3i!a actii#a# ictalJ4 Fi&4 2GB4 N% (e enc%nt)a)%n #i@e)encia( (i&niE
catia( I ent)e l%( c%nt)%le( / )a$a!icina An Y N0 $ O:0::1B0 :0= [ M API-2 An Y
30 lactat% #e $ O:0:10 LD9 $ O:0::1B0 L. 2;6::2 AN Y N0 $ O:0::1B0 / 6: nM #e
NFP-BEG23= An Y 30 $ O:0::1B4
Se )e&i(t) la actii#a# elect)%ence@al%&)>Eca en )a$a!icina0 L. 2;6::20 / l%(
c-lti%( #e c%nt)%l ent)e 1: / 1= DIF AFi&4 6A-EB4 Actii#a# ictal e(ta?a $)e(ente
enX <=R #e l%( c-lti%( t)ata#%( / #e c%nt)%l4 Sin e!?a)&%0 +-?% )e#-cci%ne(
(i&niEcatia( #e N2 / 6=R en el nD!e)% #e eent%( ictale( $%) +%)a en la
)a$a!icina An Y 1NB / la( c-lt-)a( L. 2;6::2 t)ata#%( An Y 16B0 )e($ectia!ente0
en c%!$a)acin c%n l%( c%nt)%le( An Y 130 $ O:0::1B 4 D-)aci%ne( ictale( n%
ca!?ia)%n A$ Y :021B ent)e l%( c%nt)%le( A3N0M Z 303 (B0 )a$a!icina A320; Z 30<
(B0 c-lt-)a( an#L. 2;6::2 t)ata#a( A2< Z 206 (e&0 $)%!e#i% Z SEMB4 El tie!$%
t%tal #e la( c-lt-)a( $a(an en ict-( $%) +%)a a-!ent (i&niEcatia!ente en
c%!$a)acin c%n l%( c%nt)%le( #e la )a$a!icina / L. c-lt-)a( A$ O:0::1B 2;6::2-
t)ata#a4
,a$a( ne-)%nale( $i)a!i#ale( e(ta?an ?ien %)&aniza#%( en l%( c-lti%( #e c%nt)%l
ile$tic e$ I a 2< DIF AFi&4 6FBJ Sin e!?a)&%0 el nD!e)% #e ne-)%na(
(-$e)iiente( ,A3c a 2< DIF e)aX =:R !a/%) en l%( c-lti%( t)ata#%( c%n
)a$a!icina % L. 2;6::2 @)ente a l%( c%nt)%le( AFi&-)a 6 G0 $ O:0:10 n Y 3B4 El
nD!e)% #e ne-)%na( (-$e)iiente( ,A1 en )a$a!icina / c-lt-)a( L. 2;6::2
t)ata#a( @-eX 1::R !>( alt% C-e en l%( c%nt)%le( A$ O:4:10 n Y 3B4 En -n
e3$e)i!ent% (e$a)a#%0 (e enc%nt) -n nD!e)% (i!ila) #e ne-)%na(
(-$e)iiente( en l%( c-lti%( #e c%nt)%l0 $e)% M:-23:R !>( ne-)%na( C-e
(%?)eien en la( c-lt-)a( NFP-BEG23= t)ata#%( en c%!$a)acin c%n l%(
c%nt)%le( en ,A3c A$ O:4:10 n Y 3B / en ,A3? A$ O:0:=0 n Y 3B4
"ecto de la rapamicina lavar#in y de lavado en la actividad epilptica
Target name Target
abbreviation
Drug name Concentrat
ion
c-Jun N-terminal kinase JNK SP600125 10 /XM
!P kinase kinase "K #0126 20 $M
ammalian target o%
ra&am'cin
mT() )a&am'cin 20 nM
Protein kinase * !kt !P+-2 0,5 XM
P-os&-oinositi.e /-kinase P+/K 01 223002 10 XM
Dual in-ibitor P+/K-mT() N4P-
*"52/5
30 nM
"a?le 14 In+i?it%) na!e(0 c%ncent)ati%n(0 an# ta)&et(
Ra$a!/cin t)ata!ient% #el 3 al 2< DIF ten*a el !i(!% e@ect% C-e (e +a #e(c)it%
ante)i%)!ente An Y N c-lt-)a( #e #%( e3$e)i!ent%( I !ent%( a#ici%nale(J4 Fi&4
=AB4 Late a$licacin #e la )a$a!icina #el 1: al 2< DIF )e(-lt en c%ncent)aci%ne(
#e lactat% (i&niEcatia!ente !>( ?a5%( en c%!$a)acin c%n l%( c%nt)%le( #el 1M
al 2< DIF0 / en la( c%ncent)aci%ne( #e LD9 (i&niEcatia!ente !>( ?a5%( #el 1M al
26 DIF An Y NJ4 Fi&4 =BB4 Nacin te)!i I te!$)ana #el t)ata!ient% )a$a!icina
A)a$a!icina a$lica 3-1M DIFJ4 Fi&4 =,B n% a-!ent la el%ci#a# #e -na $%(te)i%)
cin I ac-!-lacin #e lactat% A141; Z :4316 !M P # el 1M DIF0 141N Z :466< !M P
# el 2< DIF 0 !e#ia Z DE0 n Y N0 $ Y :0;B % ac-!-lacin #e LD9 A:42; Z :42 a- P
# el 1M DIF0 :42; Z :41N a- P # el 2< DIF0 !e#ia Z DE0 n Y N0 $ Y :0;MB4
N% lle&a!%( a e) -n ca!?i% (i&niEcati% en el $%#e) #e la actii#a# &)>Eca
elect)% I t)a( 1 + #e la )a$a!icina laa) Sali#a #e($-'( #el t)ata!ient%
)a$a!icina c)nica A16-26 DIFB en c%!$a)acin c%n elec I actii#a# t)%&)a$+ic
en )a$a!icina AFi&4 =D0 E0 n Y 30 $ Y :01220 $)-e?a #e t $a)ea#aB4 A(i!i(!%0 n%
e!%( ca!?i%( (i&niEcati%( en el tie!$% inca-tacin A#-)acin #e la actii#a#
ictal $%) +%)a #e &)a?acinB en c-l I t-)a( t)ata#%( c%n )a$a!icina #e 3 a 1M DIF
/ )e&i(t)a#% el 1M #e DIF en c%!$a)acin c%n l%( c-lti%( t)ata#%( c%n
)a$a!icina #e 3 a 1M DIF / &)a?a#% #e($-'( 11 # #e La(+-%-t Ae( #eci)0 la(
c%n#ici%ne( #e c%nt)%lB en 2< DIF AFi&4 =FJ !i(!% #i(e% e3$e)i!ental c%!%
E&-)a =,J4 n Y 1< 1M DIF c-lt-)a( t)ata#%( c%n )a$a!icina / N Y 1; 2< DIF
c-lt-)a( en el C-e (e inte))-!$i el t)ata!ient% )a$a!icina el 1M DIF A11 # #e
laa#%B0 $ Y :066M0 Mann-K+itne/ )an&% (-!a #e $)-e?aB4
Rapamycin tratamiento crnico disminuye sur$imiento a%n 9e!%(
c-antiEca#% el nD!e)% #e a3%ne( &e)!ina#a( a < DIF AFi&4 NB4 Se c%nE)! C-e
la( ne-)ita( C-e c)-zan c%nt%)n%( ;:: [ ! #e #i(tancia #e(#e el ?%)#e #e la
c-lt-)a %)&an%t*$ic% (e a3%ne( !e#iante la tincin #e SMI-312 A!a)ca#%) a3nJ4
UlE& et al0 1;;<J4 ,+-n& et al0 2::3B / MAP-2 A!a)ca#%) #en#)*tica(B 4 A!?%( #e
e(t%( !a)ca#%)e( a la( !anc+a( %nl/ne- )%nal0 / n% &liale(0 $)%ce(%(4 Se
!-e(t)an i!>&ene( )e$)e(entatia( $a)a -n >)ea ce)ca #el ?%)#e #e la )e?ana#a
AFi&4 NDB0 / -n >)ea ;:: [ ! #e #i(tancia #e(#e el ?%)#e #e la )e?ana#a AFi&4 NEB4
Un &)an nD!e)% #e $)%ce(%( a3%nale( SMI-312-$%(iti%(0 $e)% (l% -n%( $%c%(
MAP-2 I $)%ce(%( #en#)*tica( $%(itia(0 #e5an e(t)at% %)ien( / (e e3tien#en +acia
@-e)a I la#% #e la )e?ana#a AFi&4 NDB0 l% C-e c%nE)!a C-e la !a/%)*a #e l%(
$)%ce(%( #e &e)!ina#%( @-e)a #e la )e?ana#a (%n a3%ne(4 M>( le5%( #e la
)e?ana#a0 t%#%( l%( $)%ce(%( (%n $%(itia( $a)a SMI-3120 / nin&-na e( $%(itia
$a)a el MAP-2 AFi&4 NEB0 l% C-e c%nE)!a C-e l%( a3%ne( C-e ?)%tan (l% c)-zan la
;:: [ ! c%nt%)n%4 A3%n ?)%tacin @-e (i&niE I (i&niEcatia!ente )e#-ci#a en l%(
c-lti%( t)ata#%( c%n )a$a!icina en c%!$a)acin c%n l%( c%nt)%le( AFi&4 NF0
!e#ia Z SEM0 n Y < c-lt-)a(0 $ O:0:=B4 Ra$a!/cin t)ata!ient% n% )e#-5%
(i&niEcatia!ente a3n ?)%te I cin #e ,A1 / (-?ic-l-! A$ Y :03<1B0 $e)% )e#-5%
(i&niEcatia!ente la ?)%tacin #e ,A3 / DG >)ea( A$ O:0:1 en ,A30 $ O:0:= en
la Di)eccin Gene)alJ4 Fi&4 NGB4 La @alta #e e@ect% en a)ea,A1 $-e#e )e\e5a) la
!-c+% !a/%) #en(i#a# ne-)%nal en e(ta >)ea en l%( c-lti%( t)ata#%( c%n
)a$a!icina AFi&4 6F0 GB4 "e)!inacin #e la )a$a!icina c%nite I cin #-)ante 11
#*a( n% $)%#-5% n-ea( a3n (i&niEcatia ?)%tacin An Y < c-lt-)a(0 la
c%!$a)acin #e la( c-lt-)a( t)ata#%( c%n )a$a!icina a l%( 1M DIF0 / l%( !i(!%(
c-lti%( a 2< DIF #e($-'( #e 11 # #e la )a$a!icina laa) I a ca?%0 $ Y :0N<N0
te(t t e!$a)e5a#%J4 Fi&4 N9B4
L& '()**' y rapamicina reducen la osorilacin de la prote+na
ri!osmica ,-
La @%(@%)ilacin #e SN ASe) 23=P23NB (e inc)e!ent (i&niEcatia!ente en el #*a 1
#e($-'( #e la #i(eccin @)ente in!e#iata!ente #e($-'( #e la #i(eccin AFi&4 MA0
n Y 60 $ O:0:1B4 La )elacin %@$SN a SN a c%ntin-acin0 #i(!in-/ en M DIF0 /
(i&niEcatia!ente a-!ent #e n-e% $%) 21 DIF A10:: Z :03: (
.i$ura '4 Hantalla de in!ibidores. 2, 8H M%%$7<, in!ibidor de J53. ., N%$7M,
in!ibidor de M93. /, rapamicina, in!ibidor de mOFR. D, 2H=I7, in!ibidores de 2kt.
9, L4 7PC%%7, in!ibidor de H=@3. F, 5VHI.9Q7@<, in!ibidor dual H=@3RmOFR. n 6 @
por punto de datos, para los cultivos con ve!"culo (G* y el tratamiento in!ibidor
(F* lactato, y para los cultivos con ve!"culo (F* y el tratamiento in!ibidor (* de
LDH. 2cumulativa productionare LDH averaesofactateand tra)a en l"nea ris
eac!-ureassolid (culturas tratadas con ve!"culo* ordas!edrayline. L,
producci0n (in!ibidorItreatedcultures* 8ummaryoft!edata att!edayofpeak
lactato. 5 6 @ para los controles y las rebanadas tratadas para todos los rupos,
e#cepto la rapamicina (n 6 M* y L4 7PC%%7 (n 6 M*. Las barras de error indican
8D.
10<< Z :0630 M / 21 DIF0 )e($ectia!ente0 !e#ia Z S"D0 n Y 60 $ O:0:=B4 La
@%(@%)ilacin #e SN en la Se) 23=P23N (e )e#-5% (i&niEcatia!ente en la( c'l-la(
$i)a!i#ale( en la )a$a!icina / L. c-lti%( a M DIF 2;6::2-t)ata#%( en
c%!$a)acin c%n l%( c%nt)%le( AFi&4 M B0 n Y 3B4 La )elacin #e @%(@%-SN ASe)
23=P23NB e)(-( t%tal #e SN (e )e#-5% en )a$a!icina / c-lt-)a( 2;6::2 t)ata#a(-
L. A;6 / <1R0 )e($ec I tia!ente0 $ O:0::10 n Y ;0 E&4 M,B4 La )elacin #e @%(@%-
SN ASe) 26:P266B e)(-( t%tal #e SN ta!?i'n (e )e#-5% (i&niEcatia!ente en
)a$a-!icina / c-lt-)a( L. 2;6::2 t)ata#a( A;; / ;1R0 )e($ectia!ente0 $
O:0::10 n Y NJ4 Fi&4 MDB
D/,01,/23
4rincipales conclusiones
9e!%( enc%nt)a#% C-e el lactat% / LD9 en(a/%( #e !e#i%( #e c-lti% (a! I
#ecla)a)%n a l%( ca!?i%( #e !e#i%( #%( ece( $%) (e!ana $)%$%)ci%na)%n
e(ti!aci%ne( Dtile( #e actii#a# ictal / la !-e)te cel-la) ictal en %)&an%t*$ic%
+i$%ca!$% I
c-lt-)a( $al0 /a C-e (e c%ni)ti en el $)i!e) e$il'$tic% 1: DIF4 La in+i?icin #e
PI3K / !"OR )e#-ce la @%(@%)ilacin #e SN0 / la in+i?icin #e PI3K0 Akt0 !"OR0 /
c%!?ina#% !"ORPPI3K )e#-ce la !-e)te cel-la)0 &e)!inacin a3n0 / la &)ae#a#
#e la e$ile$(ia4 Lae I a ca?% e3$e)i!ent%( in#ican C-e la in+i?icin #e !"OR
n% ten*a #i I )ect e@ect% antic%n-l(i%0 / C-e l%( e@ect%( anti-e$ile$t%&'nica( /
ne-)%$)%tect%)e( #e la in+i?icin #e !"OR $e)(i(tie)%n #-)ante 11 #*a( #e($-'(
#e laa#%4
"nsayos de lactato y LDH
En el !%#el% #e la c-lt-)a #el +i$%ca!$% %)&an%t*$ic%( #e $e#iat)*a e$ile$(ia
$%(t)a-!>tica0 actii#a#e( inte)ictal e ictal a$a)ecen #-)ante la (e&-n#a (e!ana
#e($-'( #e la le(in inicial AD/+)@5el#-7%+n(en et al40 2:1:B4 Actii#a# ictal (e
ac%!$aa $%) -n a-!ent% (i&niEcati% en la !-e)te cel-la) #e$en#iente #e la
actii#a#0 / tant% la actii#a# ictal / la !-e)te cel-la) (e eita $%) K.NA /
@enit%*na AP%zz% Mille) et al0 1;;64J
Las concentraciones de la Figura 3. Lactato y LDH muestran la dosisIrespuesta a
concentraciones variables de in!ibidores. Nna, la dosisIrespuesta para el
tratamiento cr0nico de la 2H=I7, n 6 @ por punto R condiciones. ., de dosisI
respuesta al tratamiento cr0nico 5VHI.9Q7@<, n 6 @ por punto R condici0n. Las
concentraciones se muestran en la -ura. Las barras de error indican 8D.
6 (e!ana( in it)% AE&4 1AB4 El c-)(% te!$%)al #e e$ile$-t%&ene(i( en la( c-lt-)a(
#e #i@e)ente( ani!ale( a)i li&e)a!ente0 (i! I ila) a la( a)iaci%ne(
enc%nt)a#a( $)eia!ente en e$ile$t%&'ne(i( en ani!ale( in#ii#-ale( / (ie!$)e
C-e el !i(!% in(-lt% AKillia!( et al0 2::;J44 Ka#a! et al0 2:1:B4 P%) e(ta )azn0
t%#%( l%( e3$e)i!ent%( @-e)%n c%nt)%la#%( !e#iante la c%!$a)acin-/ e+*c-l%(
)e?ana#a( t)ata#a( in+i?i#%)-#el !i(!% ani!al4
Enc%nt)a!%( -na !a/%) $)%#-ccin #e lactat% #e?i#% a la actii#a# ictal0 /
a-!ent% #e la li?e)acin #e LD90 #e?i#% a la !-e)te cel-la) #e$en#iente #e la
actii#a#4 La ac-!-lacin #e lactat% ictal (e $)%#-ce en l%( (e)e( +-!an%(
AD-)ante et al0 1;;6J4 ,a(till% et al0 2::1J44 Me)ci!ek-Ma+!-t%&l- et al0 2:12B /
en !%#el%( ani!ale( #e e$ile$(ia A,+a$!an et al0 1;MMJ44 F-5ikaLa / c%l0 1;<< J4
Ka(te)lain et al0 2:1:B4 La li?e)acin #e LD9 e( -n !a)ca#%) a!$lia!ente
-tiliza#% #e la !-e)te cel-la) ADecke) / L%+!ann-Matt+e(0 1;<<J4 B%n@%c% et al0
1;;=B4 La( !e#ici%ne( #e lactat% / c%ncent)aci%ne( #e LD9 I en c-lti%( #e
+i$%ca!$% %)&an%t*$ic%( (%n !>( )>$i#%( / !en%( !an% #e %?)a C-e la(
&)a?aci%ne( elect)%ence@al%&)>Eca( / )ec-ent%( #e c'l-la( !-e)ta(0 l% C-e
$e)!ite -n )>$i#% an>li(i( #e #)%&a( c)nic% e@ I #e@ect%( incl-/en#% #%(i(-
)e($-e(ta AFi&4 3B4 L%( niele( #e lactat% / #e LD9 (e )e#-5e)%n
(i&niEcatia!ente $%) @enit%*na / >ci#% K.NA0 in+i?i#%)e( c%n%ci#%( #e la
actii#a# ictal / la !-e)te cel-la) en %)&an%t*$ic%(
c-lt-)a( ABe)#ic+e(k/ et al40 2:12B4 En(a/%( #e lactat% / #e LD9 ta!?i'n @-e)%n
c%n&)-ente( c%n I !ent%( elect)%ence@al%&)>Eca( / Ni((l !e#i#a #e la
)a$a!icina / L. 2;6::2 e@ect%( (%?)e la actii#a# e$ile$ti@%)!e / la
(-$e)iencia ne-)%nal4 E(t%( +allaz&%( a$%/an -til I #a# #el lactat% / la(
!e#ici%ne( #e LD9 c%!% ?i%!a)ca#%)e( #e la $)%&)e(in #e la e$ile$(ia en e(te
!%#el%4
La $)%#-ccin t%tal #e lactat% $%) -n +i$%ca!$% t-)a I calle5n (in %)&an%t*$ic%(
#e$en#e #el nD!e)% #e ne-)%na( (-$e)iiente( en el c-lti%4 Se +a #e!%(t)a#%
$)eia!ente C-e la( c%n-l(i%ne( e($%nt>nea( en c-lti%( n%t/$ic I %)&a #an
c%!% )e(-lta#% la !-e)te ne-)%nal en c-)(% AP%zz% Mille) et al0 1;;6J44
Be)#ic+e(k/ et al0 2:12B0 #e5an#% !en%( ne-)%na( $a)a +ace) lactat%4 E(t%
$-e#e )e(-lta) en la #i(!in-cin #e la $)%#-ccin #e lactat%0 tale( c%!% la
%?(e)a#a en c-lti%( t)ata#%( c%n e+*c-l% en la( Fi&-)a( 1= / 2A-F ent)e 3 / 6
(e!ana( in it)%4 Pa)a inte)$)eta) (i e(ta #i(!in-cin c%))e($%n#e a -na
#i(!in-cin en la actii#a# e$il'$tica % -n $lie&-e #e I en el nD!e)% #e
ne-)%na(0 l%( en(a/%( #e LD9 #e la !-e)te cel-la) (%n nece(a)i%(4 El c-)(%
te!$%)al #e la $)%#-ccin #e LD9 en c-lti%( e$il'$tic%( t)ata#%( c%n e+*c-l%
en la( Fi&-)a( 1, / 2A-F !-e(t)a (i&niEcatia en l%( $lie&-e( #e I en la !-e)te
cel-la) #e($-'( #el Enal #el $e)*%#% #e latencia4 La !-e)te cel-la) #e?i#% a
c%n-l(i%ne( e(t> en c-)(% / ac-!-latia AFi&4 1,B0 / $%) 2< DIF )e(-lta en -na
)e#-ccin #)a!>tica en el nD!e)% #e (%?)eii) )%n( I ne- AFi&4 6F0 GJ4
Be)#ic+e(k/ et al0 2:12B4 En e(ta( c-lt-)a(0
Figura 4. Los reistros el1ctricos y recuentos neuronales con-rme 'ue L4
7PC%%7 (L4* y rapamicina (R2H2* tratamientos reducen el nEmero de eventos
ictales y promover la supervivencia neuronal. 2, t"pica inanepilepticcontrolculture
evento ictal. ., Representante de control recordinsfrom el1ctrica, la rapamicina
y culturas L4 7PC%%7 tratadas. Rapamycinand L4 7PC%%7 tratamientos
reducesei)urefre'uency (f*, pero no la duraci0n de las crisis (D*, con el efecto
eneral de reducir el tiempo empleado en el estado ictal (S*. :: p ;%,%$, ::: p
;%,%%$. F, =m,enes representativas de las culturas del !ipocampo oranot"picos
5isslImanc!ado en 7? D=V. Las barras de escala, <% T m. L, recuentos
neuronales revel0 'ue m,s neuronas sobreviven en /2@c y /2$ de la rapamicina
y L4 7PC%%7 culturas tratadosIen comparaci0n con los controles epil1pticos, n 6
@ por condici0n, :: p ;%,%$, ::: p ;%,%%$.
Figura 5. 9fectos de diferentes cursos de tiempo de la rapamicina (R2H2* de
tratamiento sobre la proresi0n de la epilepsia. 2, rapamicina isapplied @ al 7?
D=V, $%I7? D=V (.*, @I$U D=V (/*. Las concentraciones de lactato de control se
representan como G, mientras 'ue las concentraciones de lactato en el rupo
e#perimental rapamicina se representan como concentraciones F. LDH se
representan como para el rupo de control, y % para el rupo de la rapamicina.
5 6 M por condici0n, por punto de datos, : p ;%,%<, :: p ;%,%$, ::: p ;%,%%$. D,
reistro el1ctrico Representante de una cultura 'ue fue tratado cr0nicamente
con rapamicina, sin ninEn cambio en la actividad a la rapamicina de lavado. 9,
resultados de lavado rapamicina en tres culturas, F representa el poder de la
actividad el1ctrica en la rapamicina, y G poder de la actividad despu1s de lavarI
out. F, /omparaci0n de la actividad convulsiva en cultivos tratados con
rapamicina en $U D=V (c"rculo vac"o*, y culturas en los 'ue se suspendi0 el
tratamiento rapamicina a partir de las $U D=V durante $$ d"as (c"rculo relleno*.
Figura 6. =n!ibici0n de mOFR reduce la brotaci0n a#0n. 2, =)'uierda,
microraf"as cosidos muestran la cultura del !ipocampo oranot"picos y
alrededores con a#ones erminadas. 9l recuadro muestra la brotaci0n a#ones
con marcadores de cuanti-caci0n a diferentes distancias de la cultura. ., /, Rep
V sentante im,enes de una cultura de control (.* y la cultura rapamicinaI
tratado (/ se muestran a ? D=V, con markscorrespondin a a#onscrossin la /2@
aDayfrom contourP%% T m (a)ul*, DL (verde* o /2$ y . subiculum (amarillo*
frontera D, Representante 8M=I@$7 (verde* y M2HI7 (ro&o* tinci0n de los procesos
en el borde (l"nea blanca* de una cultura de ? D=V oranot"pico+ imaen de la
derec!a se fusion0 8M=I@$7 y M2HI7 (estrato oriens, 8F* tinci0n. e,
Representante 8M=I@$7 (verde, leftimae* y M2HI7 (ro&os, middleimae* y
fusionadas 8M=I@$7RM2HI7 (imaen derec!a* tinci0n de los procesos de P%% m T
aDayfrom la borde de una cultura ? D=V oranot"pico. F, /omparaci0n entre el
nEmero de a#ones 'ue cru)an P%% m T contorno de rapamicina o culturas
tratadas con ve!"culo (n 6 ?, p ;%,%<*, L, el nEmero de a#ones procedentes de
diferentes ,reas del !ipocampo cultura,
p ;%,%<. H, /omparaci0n entre el nEmero de a#ones 'ue cru)an P%% m T
contorno en cultivos tratados con rapamicina a los $U D=V (c"rculos vac"os* frente
a los a#ones en las mismas culturas $$ d despu1s de desco V continuaci0n del
tratamiento de la rapamicina (c"rculos rellenos*.
la $)%#-ccin #e lactat% (e )e#-ce #e?i#% a la !en%) canti#a# #e ne-)%na(0 $e)%
la actii#a# ictal n% +a ce(a#%4 En c%nt)a(te0 l%( c-lti%( t)ata#%( c%n K.NA0
@enit%*na0 % in+i?i#%)e( #e la )-ta #e PI3K-Akt-!"OR +an )e#-ci#% % nin&-na
actii#a# ictal0 / c%))e($%n#iente!ente0 n% la !-e)te cel-la) #e$en#iente #e
c%n-l(in Ac%!% (e !-e(t)a $%) en(a/%( #e LD9B4 9ance# (-$e)iencia
ne-)%nal In I en e(ta( c-lt-)a( AFi&(4 6F0 GB (e t)a#-ce en !a/%)e( ta(a( #e
$)%#-ccin #e lactat% E(i%l&ica0 $%)C-e +a/ !>( ne-)%na( $a)a +ace) lactat%4
En l%( $-nt%( #e tie!$% $%(te)i%)e( Ac-a)ta (e!ana in it)%B0 la $)%#-ccin #e
lactat% a $a)ti) #e -na )e?ana#a c)nica!ente e$il'$tic% c%n -n !en%) nD!e)%
#e ne-)%na( (-$e)iiente( $-e#e (e) la !i(!a C-e la ta(a #e $)%#-ccin #e
lactat% l&ica E(i% I en -na )e?ana#a t)ata#a4 P%) l% tant%0 la( #i@e)encia( en la
$)%#-ccin #e lactat% #i(!in-/en c%n el tie!$%0 / el an>li(i( #e la !-e)te cel-la)
a t)a'( #e en(a/% #e LD9 e( nece(a)i% $a)a la inte)$)etacin #e en(a/% #e
lactat% c%!% -n !a)ca#%) #e actii#a# ictal4
mTOR y la epilepsia
L%( niele( #e lactat% / LD9 (e )e#-5e)%n #)a!>tica!ente -na ez C-e l%(
eent%( ictale( c%!enza)%n a %c-))i) A;-1M DIFB en c-lti%( t)ata#%( c%n it%)( I
IN9IB #e PI3K0 Akt / !"OR4 La( )e#-cci%ne( en el lactat% / LD9 #e?i#% a la
)a$a!icina A!"ORB0 API-2 AAktB0 / L. 2;6::2 API3KB t)ata!ient%( @-e)%n (i!ila)e(
/ c%nE)!a#% $%) !e#ici%ne( #i)ecta( #e la actii#a# elect)%ence@al%&)>Eca / la
(-$e)iencia cel-la)0 l% C-e (-&ie)e C-e la (ealizacin #e PI3K-Akt @-e
)e($%n(a?le $a)a la !a/%) $a)te #e la actiacin #e !"OR c%!% (e !i#e $%) l%(
e@ect%( E(i%l&ic%( (%?)e la e$ile$(ia / la !-e)te cel-la)4 El niel #e @%(@%)ilacin
#e la $)%te*na )i?%(%!al SN Aa a?a5% I e@ect%) c%))iente #e la *a !"OR
@%(@%)ila#a t)a'( SNKB e( -n !a)ca#%) a!$lia!ente -tiliza#% #e la actiacin #e
!"OR AG-e)tin / Sa?a I tini0 2::MJ4 B-ck!a(te) et al0 2::;J4 Gen& et al0 2::; B4
F(@%)% I ilacin #e SN +a (i#% in@%)!a#% a a-!enta) #e($-'( #e la le(in
ce)e?)al e$ile$t%&'nic% AB-ck!a(te) et al0 2::;J4 Gen& et al0 2::;J4 9-an& et al0
2:1:J4 G+an& / K%n&0 2:12B / c%n-l(i%ne( +i$3ica( A"al%( et al4 0 2:12B4
,-)i%(a!ente0 la @%(@%)ilacin #e SN e)a ?i@>(ica en n-e(t)%( e3$e)i!ent%(H -n
a-!ent% t)an(it%)i% in!e#iata!ente #e($-'( #e la le(in inicial A#i(eccinB
(e&-i#% $%) -n (e&-n#% a-!ent% #-)ante el RIOD I PE #e actii#a# ictal / la
!-e)te cel-la) ictal4 E(t%( #at%( (-&ie)en C-e la le(in0 /a (ea ca-(a#a $%) -n
t)a-!a @*(ic% % $%) la actii#a# ictal0 $-e#e a-!enta) la actiacin #e !"OR4 P%)
%t)% la#%0 SN (e !ant-% I !%# #a!ente @%(@%)ila#%( #-)ante t%#% el $e)*%#% #e
latencia0 l% C-e (-&ie)e C-e la actiacin #e !"OR $-e#e 5-&a) -n $a$el en la
)e%)&anizacin #e ci)c-it% ante( #e la a$a)icin #e c%n-l(i%ne( e($%nt>nea(4
,)nica t)ata!ient% L. 2;6::2 )e#-ce la @%(@%)ilacin #e SN a M DIF Ace)ca #el
Enal #el $e)*%#% #e $)e-ictalB tan eEcaz!ente c%!% I cin t)ata!ient%
)a$a!icina c)nica0 #e n-e% l% C-e (-&ie)e C-e la !a/%) $a)te #e la actiacin
#e !"OR #-)ante el $e)*%#% $)e-ictal (e $)%#-ce a t)a'( #e PI3K4 P%) Dlti!%0 -n
in+i?i#%) #e PI3K-!"OR #-al NFP-BEG23= AMai)a et al40 2::<B )e#-5% lac tate I /
la( c%ncent)aci%ne( #e LD9 tant% c%!% PI3K % in+i?i#%)e( #e !"OR (%l%4 La
a-(encia #e e@ect%( a#iti%( % (in')&ic%( c%nE)!a C-e l%( e@ect%( anti-e$il'$tic%(
#e la in+i?icin #e PI3K (%n #e?i#% a la inactiacin #e la !"OR4 N-e(t)%(
)e(-lta#%( #e!-e(t)an C-e la actiacin #e !"OR en e$ile$t%&'ne(i(
$%(t)a-!>tic% e( @-e)te!ente #e$en#iente #e PI3K #e I0 l% C-e (-&ie)e C-e la
actiacin #e PI3K $%) @act%)e( #e c)eci!ient% $-e#e (e) -n i!$%)tante @act%)
C-e c%nt)i?-/e al #e(a))%ll% #e la e$ile$(ia #e($-'( #e -n t)a-!ati(!%4 "enien#%
en c-enta la c%!$le5i#a# / eal-aci%ne( $)e(ente en la (ealizacin !"OR
AG-e)tin / Sa?atini0 2::MB / la i!$licacin #e PI3K / Akt en la actiacin #e
!"OR0 )e( I in+i?i#%)e( #-ale( c%!% NFP-BEG23= - %t)%( @>)!ac%( c%n
!ecani(!%( (i!ila)e( !%( I AEn&el!an0 2::;J B%)#e)( et al40 2:1:B $-e#e
)e(-lta) $)e@e)i?le a la )a$a!icina en el t)ata!ient% #e la e$ile$(ia4
Los eectos anti#epilepto$nicas de la in5i!icin de mTOR
la in+i?icin #e !"OR $%#)*a (e) c-alC-ie)a #e anti-e$il'$tic% A$)eencin #el
#e(a))%ll% #e la e$ile$(iaB0 % (i!$le!ente antic%n-l(i%4 L%( #at%( #e la(
a$licaci%ne( #e a&-#%( #e la )a$a!icina in it)% n% (-&ie)en -n e@ect%
antic%n-l(iante I (ant #i)ecta ADa%-# et al0 2::MJ44 R-e&& et al0 2::MB4 L%(
ca!?i%( e(t)-ct-)ale(0 tale( c%!% la )e#-ccin #e la( E?)a( !-(&%(a( ?)%tacin
#e($-'( #e la in+i?icin #e !"OR c)nica (-&ie)en -n e@ect% anti I
e$ile$t%&'nic% AB-ck!a(te) et al0 2::;J4 Gen& et al0 2::;J4 9-an& et al0 2:1:4B4
En n-e(t)% !%#el%0 la in+i?icin #e !"OR c%n )a$a!icina ta!?i'n c%n#-5% a -na
)e#-ccin #e la &e)!inacin a < DIF4 En el !%#el% #e la c-lt-)a #el +i$%ca!$%
%)&an%t*$ic%( #e e$ile$t%-&'ne(i(0 < DIF e( el Dlti!% $-nt% #e tie!$% en el C-e
e(ta c%!$a)acin $-e#e +ace)(e c%n I a c%n@-(in $%) la a$a)icin #e
c%n-l(i%ne( / la !-e)te cel-la) ictal0 l% C-e $-e#e $)%#-ci) la &e)!inacin
a#ici%nal4 N-e(t)%( )e(-lta#%( (-&ie)en C-e la in+i?icin #e la (ealizacin #e
!"OR #e($-'( #e la le(in0 $e)% ante( #e la a$a)icin #e c%n-l(i%ne(0 RE
$)%#-ce I in#-ci#a $%) la le(in a3%nal #e &e)!inacin4 La (-$)e(in #e la(
E?)a( !-(&%(a( ?)%tacin )e I C-i)e# t)ata!ient% c%ntin-% c%n cin I )a$a!/
AB-ck!a(te) et al40 2::;B0 l% C-e (-&ie)e C-e la in+i?icin #e !"OR te!$%)al n%
+a?e) (-@)i#% anti-e$ile$t%&'nica( e@ect%(4 Sin e!?a)&%0 enc%nt)a!%( C-e
#e($-'( #e la te)!inacin antici$a#a #el t)ata!ient% )a$a!icina0 la $)%#-ccin
#e lac I tate0 / la li?e)acin #e LD9 )e I $e)!aneci#% )e$)i!i#% #-)ante al
!en%( 11 #4 E( i!$%)tante (eala) C-e en l%( $-nt%( #e tie!$% $%(te)i%)e(0 l%(
c-lti%( t)ata#%( c%n )a$a!icina $)%#-cen ?a5%( niele( #e lactat% a $e(a) #e
)etene) !-c+a( !>( ne-)%na( C-e l%( c-lti%( #e c%nt)%l Ae$il'$tica(B C-e +an
e3$e)i!enta#% (i&niEcatia la !-e)te cel-la) ictal4 La $)%#-ccin #e lactat% e(
(i! I ila) en )a$a!/cin t)ata#%( / c-lt-)a( t)ata#%( c%n el e+*c-l% en $-nt%( #e
tie!$% $%(te)i%)e( Ac-a)ta (e!anaB in it)% #e?i#% a la !-e)te ne-)%nal
(i&niEcatia en la( c-lt-)a( t)ata#a( c%n e+*c-l% #e c%n-l(i%ne(0 / la
(-$e)iencia ne-)%nal !e5%)a#a en l%( c-lti%( t)ata#%( c%n )a$a!icina0 c%!%
(e #i(c-te ante)i%)!ente4 Ba5a $)%#-ccin #e lactat% a $a)ti) #e -n &)an nD!e)%
#e ne-)%na( e( tien#a I c%n(i(tente c%n -na @-e)te aten-acin #e ictal #a# I
actii#a# en c-lti%( t)ata#%( c%n )a$a!icina0 incl-(% #e($-'( #e la )a$a!icina
laa)-%-t4 La( )e#-cci%ne( en la &e)!inacin / el a3n z-)e( (ei elect)%&)>Eca I
$e)(i(tie)%n #e($-'( #e la )a$a!icina #e laa#% / l%( )e(-lta#%( #e l%( en(a/%(
#e lactat% / LD9 c%nE)!a)%n4
E(t%( )e(-lta#%( i!$lican C-e en n-e(t)% !%#el%0 la in+i?icin t)an(it%)ia #e
!"OR +a (-@)i#% l%( e@ect%( (%?)e la e$ile$(ia4 P%) Dlti!%0 (e in@%)! #e C-e la
)a$a!icina )e#-ce la actii#a# c%n-l(ia0 incl-(% c-an#% (e a#!ini(t)a #e($-'(
#el #e(a))%ll% #e c%n-l(i%ne( )ec-))ente( e($%nt>nea( A9-an& et al40 2:1:B4
N-e(t)%( +allaz&%( @-e)%n LAR I Si!iH actii#a# e$ile$ti@%)!e / la !-e)te cel-la)
)e(-ltante @-e)%n tant% SIG I (i&niEcatia!ente )e#-ci#a $%) el t)ata!ient%
)a$a!icina ta)#e Aa $a)ti) #el 1: DIFB en c%!$a)acin c%n l%( c%nt)%le(
e$il'$tic%( AFi&4 =BB0 l% C-e (-&ie)e C-e la )a$a!icina e)a eEcaz incl-(% en e(ta
eta$a )elatia!ente ta)#*a #e e$ile$-t%&ene(i(4 A-nC-e e(t%( +allaz&%( $-e#en
tene) i!$licaci%ne( cl*nica( $a)a el t)ata!ient% #e la e$ile$(ia a#C-i)i#a0
(-&ie)en C-e e$ile$t%&'ne(i( $-e#e (e) -n $)%ce(% !>( #in>!ic% #e l%
i!a&ina#%4 M-e)te Ictal cel-la) ABe)#ic+e(k/ et al40 2:12B $-e#e alte)a) la(
)e#e( e$il'$tic%( #e -na !ane)a C-e )eC-ie)e $la(tici#a# ci)c-it% c%ntin-% $a)a
!antene) la e$ile$(ia0 / e(t% e$ile$t%&'ne(i( c-)(% $%#)*a (e) ?l%C-ea#a $%) la
in+i?icin #e !"OR ta)#e4
Figura 7. Fosforilaci0n de la prote"na ribos0mica 8M se reduce con rapamicina
cr0nica o L4 7PC%%7 tratamiento. 2, /ambios en 8M
fosforilaci0n con el tiempo in vitro. OopW Las transferencias Xestern
representativas de fosfoI8M (8er 7@<R7@M* y el total de 8M, de % a U D=V, y UI7U
D=V. 9n pocas palabras, Ratios de fosfoI8M (8er 7@<R7@M* con el total de 8M se
representan (n 6 C, la media Y R I 8OD, : p ;%,%<, :: p ;%,%$*. .,
microfotoraf"as de inmuno!isto'u"mica de culturas con diferentes tratamientos,
5issl manc!a se muestra en ro&o y f0sforoI8M est, en verde. /,
inmunotransferencia de tipo Xestern Representante de p8M (8er7@<R7@M* y el
total de 8M y comparaci0n de p8M (8er 7@<R7@M* R 8M relaci0n en cultivos tratados
con ve!"culo, rapamicina, o L4 7P@%%7. D, Xestern blot Representante de p8M
(8er 7C% R 7CC* y el total de 8M, y la comparaci0n de p8M (8er 7C%R7CC* R relaci0n
8M en cultivos tratados con ve!"culo, rapamicina, o L4 7PC%%7
(::: p ;%,%%$*.
1tilidad y limitaciones de la preparacin de cortes or$anot+picos para la
sealizacin de mTOR
,-lti%( #e c%)te( %)&an%t*$ic%( #e +i$%ca!$% $)%$%)ci%nan -n !%#el%
e3ce$ci%nal!ente )>$i#% #e e$ile$t%&'ne(i( C-e c%n(e)a la( ca)acte)*(tica(
clae #e e(te $)%ce(% AD/+)@5el#-7%+n(en et al0 2:1:J44 Be)#ic+e(k/ et al0 2:12J4
Sa?%lek et al0 2:12B4 De?i#% a C-e la( )e?ana#a( (e c)ean en PM0 e(te e( -n
!%#el% #e la e$ile$t%&'ne(i( #e($-'( #e la le(in ce)e?)al $e#i>t)ic%0 / al&-n%(
#e n-e(t)%( )e(-lta#%( $-e#e (e) e($ec*Eca $a)a la $%?lacin $e#i>t)ica4 L%(
c-lti%( #e c%)te( tienen la !ic)%&lia0 $e)% al&-n%( %t)%( ele!ent%( #el (i(te!a
in!-ne / nin&-na ?a))e)a (an&)e-ce)e?)%0 $%) l% C-e l%( e@ect%( anti-
in\a!at%)i%( / a(c-la)e( #e la in+i?icin #e !"OR (e $-e#en e3cl-i) en &)an
!e#i#a4 La acce(i?ili#a# #e la $)e$a)acin (e $)e(ta a en(a/%( )>$i#%( #e tant%
la actii#a# c%n-l(ia / la ne-)%$)%teccin4 El alt% )en#i!ient% #e e(te en@%C-e
e( $a)tic-la)!ente i!$%)tante $a)a la e3$l%)acin #e la en I inte)accin #e la
le(in ce)e?)al0 la e$ile$(ia0 / el e@ect% #e la !ani$-lacin #e l%( (i(te!a( #e
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