Anlisis para enfermedades transmitidas por garrapatas: cmo

y cundo

Rick Alleman, DVM, PhD
University of Florida

C. Guillermo Couto, DVM
The Ohio State University

Las enfermedades transmitidas por garrapatas (ETG) eran bastante frecuentes en
Greyhounds, y algunos creen que todava son muy prevalentes. No pocas personas
invlucradas en el rescate de Greyhounds consideran que es ms rentable tratar los
perros para las ETG que analizarlos y tratar slo a los que son positivos. Este
planteamiento no debera seguirse debido a:

1. No todas las ETG responden a la doxiciclina o el imidocarb.
2. Las reacciones adversas al imidocarb son frecuentes (y a veces severas en
Greyhounds).

En nuestra experiencia con Greyhounds en los ltimos 7 aos, la prevalencia de ETG
ha disminuido marcadamente, probablemente debido al mejor control de las garrapatas.
Por ejemplo, hace 15 aos, aproximadamente la mitad de los Greyhounds retirados de
las carreras que se evaluaban como potenciales donantes de sangre en OSU, eran
positivos por serologa para Babesia canis o Ehrlichia canis, mientras que ahora slo un
1-3% son positivos para cualquier ETG. Sin embargo, en algunos laboratorios
diagnsticos, la prevalencia de perros positivos usando serologa es todava alta, an
cuando los resultados frecuentemente no son reproducibles si la misma muestra es
analizada por un laboratorio o mtodo distinto (el rompecabezas interminable).

La interpretacin de los resultados de las pruebas puede diferir en pacientes sanos
frente a los enfermos, y dependen de si se ha usado serologa o PCR (se usarn
ejemplos en el texto). Los perros con ETG que son sintomticos, normalmente
presentan uno o ms de los siguientes sntomas: prdida de peso, fiebre, anemia,
trombocitopenia, neutropenia, linfadenopata, signos oculares, esplenomegalia o
poliartritis.

Ehrlichiosis monoctica canina (EMC).

Diagnstico serolgico.
No es frecuente diagnosticar la ehrlichiosis monoctica canina mediante la identificacin
de mrulas en las clulas mononucleares circulantes. El diagnstico generalmente se
sospecha por los hallazgos clnicos y laboratoriales de rutina y se confirma usando
serologa. Las pruebas serolgicas ms comnmente usadas son: la Inmuno
Fluorescencia Indirecta (IFI), que est disponible en muchos laboratorios comerciales, y
el snap 3DX (Idexx Laboratorios, Inc., Maine, USA) para uso clnico. El test de IFI no es
especfico para cada especie, por lo que los animales infectados con E. canis, E.
Chaffeenesis y posiblemente otras especies de Erhlichia o de Anaplasma, pueden ser
positivos debido a la reactividad cruzada. Adems, hay que ser cauto al diagnosticar
EMC en animales con ttulos bajos, o en animales positivos pero cuyos hallazgos
clnicos no sean consistentes con EMC. La interpretacin de los resultados, incluso con
personal de laboratorio experimentado, depende de los reactivos usados, estado y
calidad del microscopio, y experiencia del observador. Las recomendaciones actuales,
son que un diagnstico positivo se tiene cuando un ttulo nico es >1:64 con hallazgos
clnicos/laboratoriales consistentes, o cambios en los ttulos en muestras de suero
repetidas en casos agudos.

El snap 3DX (Idexx corporation, MN) es un mtodo de anlisis serolgico para hacer en
la clnica con animales sospechosos de tener erhlichiosis monoctica. La prueba Snap
3DX, que usa anlogos recombinantes de las principales protenas de membrana (p30 y
p30-1), ha mejorado la sensibilidad y especificidad respecto al antiguo Snap canine
combo de IDEXX, que usaba clulas completas de E. canis cepa de Oklahoma como
antgenos. Los anlisis y la comparacin de los resultados con muestras positivas o
negativas analizadas mediante IFI, indican una alta especificidad (cercana al 100%)
pero una sensibilidad algo menor (79.2%), lo que significa que un resultado positivo
implica una probabilidad muy alta de infeccin con E. canis o E. chaffeensis, pero el
20% los animales positivos con IFI resultaron negativos con la prueba snap. Estos
animales a menudo tenan unos ttulos <1:300. de esta forma, si usted usa este test en
un rea con baja prevalencia, tiene un excelente valor predictivo positivo y negativo,
pero si lo usa para analizar una poblacin con alta prevalencia, limitando el anlisis a
los animales con hallazgos clnicos o laboratoriales consistentes con EMC, el valor
predictivo negativo es inferior debido al alto potencial de falsos negativos. Los animales
infectados con E.canis o E. chaffeensis, darn positivos usando ste o cualquiera de las
pruebas serolgicas disponibles actualmente.

La nica forma de distinguir entre estas dos infecciones es mediante cultivo in vitro o
anlisis PCR (disponible en el laboratorio de enfermedades transmitidas por garrapatas
de la Universidad Estatal de Carolina del Norte).

Identificacin de los organismos.

Aunque la serologa es probablemente el mtodo ms sensible para diagnosticar la
ehrlichiosis monoctica, es tambin la menos especfica. Por su naturaleza, muchas
pruebas serolgicas detectan anticuerpos circulantes para un agente infeccioso en
particular, que podra significar infeccin activa, exposicin previa, vacunacin previa (si
est disponible) o anticuerpos con reactividad cruzada a un diferente organismo. Debido
a esto, los hallazgos clnicos o clnico-patolgicos deben darse con un ttulo positivo
para confirmar infeccin activa. De forma alternativa, y ms especficamente, el
organismo puede ser identificado en el paciente, lo que confirma un estado infeccioso
independientemente de los hallazgos clnicos. Desafortunadamente, en muchos casos
de las formas monocticas de la ehrlichiosis canina, los organismos no son observados
en las clulas mononucleares circulantes. ste es un hallazgo muy raro y la
identificacin microscpica del organismo no es un mtodo til de diagnstico. Los
mtodos ms sensibles de identificacin son los cultivos y la reaccin en cadena de la
polimerasa (PCR).

E. canis y E. cheffeensis pueden cultivarse in vitro, pero este proceso requiere un cultivo
celular. Por lo tanto, esta tcnica se usa principalmente para investigacin y no para
diagnstico clnico. Sin embargo, el anlisis por PCR se realiza rutinariamente en
muchos laboratorios de investigacin y comerciales. Este mtodo de anlisis requiere
una muestra de sangre en anticoagulante (EDTA). Extrayendo el ADN de la sangre del
paciente y usando primers especficos que identifican y amplifican el ADN del
organismo, la prueba por PCR puede detectar cantidades muy pequeas del organismo
en el animal infectado. Mediante el anlisis por PCR pueden detectarse niveles de
agentes circulantes mucho menores de los que pueden detectarse por examen
microscpico.

Debido a la similitud de los hallazgos clnicos y a la reactividad cruzada asociada con
varios agentes infecciosos, el anlisis por PCR es el medio ms fiable para distinguir
entre distintas especies dentro del gnero Ehrlichia y Anaplasma. Sin embargo, debido
al bajo nmero de organismos circulantes en algunos casos de ehrlichiosis monoltica,
se pueden obtener resultados falsos negativos usando la tcnica de PCR. Esto se ve
ms frecuentemente en portadores infectados de forma crnica o en animales en los
que la muestra de sangre se toma despus de instaurar tratamientos antimicrobianos,
con el resultado de una parasitemia menor al nivel de sensibilidad de la prueba. Los
resultados falsos positivos se deben normalmente a contaminacin accidental de la
muestra con microcantidades de aerosol ADN en el laboratorio.

Ehrlichia granuloctica canina.

(Ehrlichia ewingii y Anaplasma phagocytophilum).
Diagnstico serolgico.
Debido a que el organismo no puede ser cultivado in vitro, actualmente no hay pruebas
serolgicas para el diagnstico de la infeccin con E. ewingii. Algunos animales
infectados con E. ewingii pueden dar positivos con las pruebas de IFI para E. canis,
pero esta reactividad cruzada no es constante. Las pruebas IFI para el diagnstico de
infeccin por A. phagocytophilum estn disponibles en laboratorios comerciales, aunque
la prueba puede aparecer con la antigua nomenclatura, IFI para E. equi. Cuando se pida
esta prueba, el laboratorio debe saber la especie del paciente (canino o equino). Con
esta prueba pueden ocurrir los mismos problemas de resultados falsos positivos que los
descritos anteriormente para la ehrlichiosis monoltica. Algunos animales infectados con
A. phagocytophilum pueden dar positivos con los anlisis por IFI para A. platys (ver ms
abajo), pero esta reaccin cruzada no es consistente. Los animales infectados con A.
phagicytophilum no dan positivos en las pruebas diseadas para diagnosticar
infecciones por E. canis (Snap 3DX).

Identificacin de los organismos.
A diferencia de la ehrlichiosis monoltica, en las formas granulocticas de estas
enfermedades, los organismos se pueden encontrar en neutrfilos circulantes en la
sangre perifrica y/o lquido sinovial de animales infectados. Sin embargo, estas dos
especies no pueden diferenciarse por los hallazgos clnicos o las pruebas laboratoriales
de rutina. Como se mencion anteriormente con la ehrlichiosis monoctica, se requiere
el anlisis PCR para la identificacin de la especie. Las pruebas son similares para las
descritas anteriormente.

Anaplasma platys.
Anaplasma platys (anteriormente Ehrlichia platys) causa la trombocitopenia cclica
infecciosa en perros. Este agente es nico en el sentido que es el nico agente
infeccioso intracelular descrito en el hombre o los animales que infecta especficamente
plaquetas.



Diagnstico serolgico.
Este organismo no puede ser cultivado in vitro, y sin embargo, una prueba IFI para
anticuerpos contra A. platys ha sido desarrollada (disponible en el laboratorio de
diagnstico en la Louisiana State University, School of Veterinary Medicine). Aunque los
datos no estn an disponibles, hay probablemente reaccin cruzada con los animales
infectados con A. phagocytophilum.

Identificacin de los organismos.
El diagnstico de la infeccin clnica de con A. platys puede hacerse observando los
organismos dentro de las plaquetas. El anlisis por PCR est tambin disponible para
este agente (ver ehrlichiosis monoctica).

Babesiosis canina.
Babesia canis

Diagnstico
El diagnstico definitivo de infeccin por B. canis se hace identificando los organismos
en un frotis sanguneo teido. El diagnstico serolgico puede hacerse usando pruebas
de IFI, pero se produce algo de reaccin cruzada entre las especies de babesia. Ttulos
altos sugieren infeccin activa, pero las pruebas por IFI pueden ser negativas en
animales infectados de forma aguda, especialmente cachorros. Si el parsito no se
observa en el frotis, es difcil diferenciar la babesiosis de la anemia hemoltica
autoinmune, porque ambas alteraciones pueden ser positivas al test de Coombs.

Babesia gibsonii.
Diagnstico
El diagnstico clnico de infeccin por B. gibsonii se hace a menudo por el examen
microscpico de la extensin de sangre perifrica. Las piroplasmas pequeas (1-2.5
um) redondas u ovales son identificables normalmente en los eritrocitos de los animales
infectados. Los organismos se detectan a la semana post-infeccin y los picos de
parasitemias se ven a las 3-4 semanas. Estos picos en muchos perros suponen un 2-
6% de los eritrocitos infectados, aunque en algunos casos el nmero de parsitos
puede ser mucho ms alto. Muchos animales infectados son positivos en el test de
Coombs. Por lo tanto, el diagnstico debe diferenciarse de AHIM. La identificacin
especfica de especie se obtiene por anlisis PCR de sangre entera infectada. El
anlisis por PCR est actualmente disponible en el Laboratorio de Enfermedades
Transmitidas por Garrapatas de la Universidad Estatal de Carolina del Norte o en el
Departamento de patobiologa de la Universidad de Auburn. La parasitemia en
portadores subclnicos (especialmente visto en pit bull y staffordshire terriers) es
demasiado baja para ser detectada microscpicamente y el anlisis por PCR debe
hacerse para confirmar el estado de portador.

La serologa usando IFI demuestra la presencia de anticuerpos en suero contra estos
organismos, pero ocurren algunas reacciones cruzadas entre especies de babesia. Los
ttulos >1:80 se consideran positivos, pero muchos animales infectados tienen ttulosan
mayores >1:320. Con la prueba por IFI pueden darse tanto falsos positivos como falsos
negativos. Slo usando en anlisis por PCR podemos conocer la especie.