FILIAL NORTE

BIOQUMICA
GUA DE PRCTICAS
SEGUNDO AO
Profesores: Q.F. Del Castillo Cotillo, Helda, Mg (Reso!sa"le#
I!g.Q$%&. 'e!el Fer!(!de), Do*le, Mg (Coordi!ador#
'i+l. Q$i!ta!a C(,eda, Milagros, M-,.
I!g.Q$%&. Q$i.o!es C/ao.(!, Lilia!a.
'i+l. Loa*)a Estrada, Caroli!a.
'i+l. Le)a&a 0igo, H1l&er, M-,.
'i+l. Nolas,o C(rde!as, Os,ar, M-,.
M1d. Mar%a R$i) 0ela),o
'i+l. M$rr$garra 'ri!gas, 0i,toria.
'i+l. A"a!to D%a), Carlos, Mg
23456II
1
INTRODUCCIN
La Bioqumica es la ciencia de la vida que estudia el metabolismo de los
organismos vivos, es decir el conjunto de todas las reacciones qumicas, y sus
diferentes mecanismos, vas y regulacin que hacen posible la vida. Las
aplicaciones de la investigacin bsica en bioqumica son numerosas, siendo
indispensable el conocimiento del metabolismo para el desarrollo de cualquier
medicamento, su aplicacin y la determinacin de sus efectos.
La gua de prcticas del curso de Bioqumica tiene como objetivo entrenar al
estudiante con los procedimientos llevados a cabo en el laboratorio y
desarrollar su pensamiento cientfico que lo lleve comprender los trminos
bsicos de la Bioqummica.
l estudiante debe emplear esta gua en cada prctica de laboratorio y estar
informado sobre la prctica que se llevar a cabo en cada sesin.
l alumno debe cumplir con los objetivos planteados al final de cada prctica.
!s mismo debe presentar su gua de prctica terminada la misma.
2
"#$%#!&!'()* + '$*,*(+$
-ema*. CONTENIDO
/ (ntroduccin y organi0acin de grupos de prctica.
1 Bioseguridad
2 (nstrumentacin3 'entrifugacin
4 (nstrumentacin3 'olorimetra
5 (nstrumentacin3 "otenciometra
6 'intica en0imtica
7 SEMANA DE LA MEDICINA
7 +igestin de carbohidratos
9 PRACTICA CALIFICADA PARCIAL
/8 #epaso
// !bsorcin de carbohidratos
/1 %liclisis
/2 Lipoprotenas sanguneas
/4 ,ransaminasas y cromatografa
/5 valuacin nutricional
16 PRACTICA CALIFICADA FINAL
3
PRCTICA GUIADA N 1
BIOSEGURIDAD
l trabajo en el Laboratorio requiere la observacin de una
serie de normas de seguridad que eviten posibles accidentes debido al
desconocimiento de lo que se est haciendo o a una posible negligencia de los
alumnos que estn en un momento dado, trabajando en el Laboratorio.
! continuacin alistamos una serie de medidas e indicaciones de seguridad
que deben tomarse durante las prcticas de laboratorio.
*$#&!- "#-$*!L-
1. Lea con atencin, antes de cada prctica, las indicaciones de su gua. -iga
todas las instrucciones a menos que el profesor realice alguna
modificacin.
2. 'ada grupo de prcticas se responsabili0ar de su 0ona de trabajo y de su
material. -e trabajar con cuidado y de manera organi0ada. !s mismo se
mantendr cada mesa de trabajo limpia, seca y ordenada.
3. s obligatorio la utili0acin de mandil que le cubra bra0os, piernas, torso y
pies. stn prohibidos el uso de sandalias, pantalones cortos, faldas, polos
cortos, etc. en el laboratorio. La persona inapropiadamente vestida para
trabajar en el laboratorio le ser negado el ingreso.
4. *o deben llevarse las manos a la boca ni a la cara pues pueden estar
contaminadas.
5. -i tienes el pelo largo, es conveniente que lo lleves recogido.
6. st terminantemente prohibido fumar, tomar bebidas ni comidas.
7. n caso de derrame, accidente o da9o avise inmediatamente al profesor.
8. !l trmino de cada prctica limpiar el rea de trabajo y lavar los materiales
utili0ados con agua de ca9o. Lavarse las manos meticulosamente con agua
y jabn. :inalmente cerciorares que las llaves de gas y agua estn
cerradas.
#!',(;$- <=(&('$-
1. =sar lentes de seguridad cuando trabaje con reactivos qumicos peligrosos
que puedan salpicar o derramarse.
2. !ntes de utili0ar un compuesto, asegurarse bien de que es el que se
necesita, fijarse bien el rtulo.
4
3. 'omo regla general, no coger ning>n producto qumico. l profesor o
profesora te lo proporcionar.
4. *unca devuelva los sobrantes de los productos a los frascos de origen sin
consultar con el profesor.
5. s muy importante que cuando los productos qumicos de desecho se
viertan en la pila de desag?e, aunque estn debidamente neutrali0ados,
debe dejarse que circule por la misma, abundante agua.
6. *o tocar con las manos y menos con la boca, los productos qumicos.
7. *o pipetear con la boca. =tili0ar una bombilla de succin.
8. Los cidos requieren un cuidado especial. 'uando queramos diluirlos,
siempre echaremos el cido sobre agua.
9. Los productos inflamables @gases, alcohol, ter, etc.A deben estar lejos de
fuentes de calor. -i hay que calentar tubos con estos productos, se har al
ba9o &ara, nunca directamente a la llama.
10. &anipule con precaucin los solventes voltiles e inflamables como el
ter, acetona y metanol. *unca evapore estos solventes en una hornilla al
abierto. =tilice siempre un sistema de condensacin eficiente.
11. -i se vierte sobre ti cualquier cido o producto corrosivo, lvate
inmediatamente con mucha agua y avisa al profesor.
12. !l preparar cualquier disolucin se colocar en un frasco limpio y
rotulado convenientemente.
13. ncienda fuego en el laboratorio solo si no eBisten solventes inflamables
en la vecindad. La persona que encienda el fuego debe primero verificar
que no eBista otra persona que este trabajando con solventes inflamables
en el laboratorio.
&!,#(!L + ;(+#($
/ =se material de vidrio limpio y no rajado.
1l vidrio caliente no se diferencia a simple vista del vidrio fro. "ara evitar
quemaduras use guantes o trapos.
2 -i tienes que calentar a la llama el contenido de un tubo de ensayo,
observa cuidadosamente estas dos normas3
C,en sumo cuidado y ten en cuenta que la boca del tubo de ensayo no
apunte a ning>n compa9ero. "uede hervir el lquido y salir disparado, por lo
que podras ocasionar un accidente.
C'alienta por el lateral del tubo de ensayo, nunca por el fondoD agita
suavemente @mira la figuraA.
<=("$- LE',#('$-
5
/ &anipule cualquier equipo elctrico con las manos secas y aseg>rese que el
rea de trabajo tambin este seca.
1 *ing>n cordn electrifico debe colgar fuera de la mesa de trabajo.
2 'uando desconecte alg>n equipo de tomacorriente, jlelo por el enchufe
y no por el cordn.
=,(L(F!'($* + B!L!*F!-
/ 'uando se determinan masas de productos qumicos con balan0a, se
colocar papel sobre los platos de la misma y si el producto fuera corrosivo,
se utili0ar una luna de reloj.
1 -e debe evitar cualquier perturbacin que condu0ca a un error, como
vibraciones debidas a golpes, aparatos en funcionamiento, soplar sobre los
platos de la balan0a, etc.
&!*("=L!'()* + -"'G&*-
/ &anipule los microorganismos crecidos en una placa petri o tubo de cultivo
con eBtremo cuidado. -iempre utilice tcnicas de esterilidad @a la llama del
mechero, guantes, palillos estriles, etc.A.
1 *unca llevar a la boca plantas o partes de ellas como semillas, frutos y
hojas.
NIVELES DE RIESGO BIOLOGICO EN UN LABORATORIO
'lasificacin de microorganismos por grupos de riesgo para el trabajo de
laboratorio3
Grup !" r#"$% 1 @riesgo individual y poblacional escaso o nuloA
&icroorganismos que tienen pocas probabilidades de provocar enfermedades
en el ser humano o los animales.
Grup !" r#"$% & @riesgo individual moderado, riesgo poblacional bajoA
!gentes patgenos que pueden provocar enfermedades humanas o animales
pero que tienen pocas probabilidades de entra9ar un riesgo grave para el
personal de laboratorio, la poblacin, el ganado o el medio ambiente. La
eBposicin en el laboratorio puede provocar una infeccin grave, pero eBisten
medidas preventivas y teraputicas eficaces y el riesgo de propagacin es
limitado.
Grup !" r#"$% ' @riesgo individual elevado, riesgo poblacional bajoA
!gentes patgenos que suelen provocar enfermedades humanas o animales
graves, pero que de ordinario no se propagan de un individuo a otro. Bisten
medidas preventivas y teraputicas eficaces.
Grup !" r#"$% ( @riesgo individual y poblacional elevadoA
!gentes patgenos que suelen provocar enfermedades graves en el ser
humano o los animales y que se transmiten fcilmente de un individuo a otro,
6
directa o indirectamente. *ormalmente no eBisten medidas preventivas y
teraputicas eficaces.
B!###!- + '$*,*'($*
Los laboratorios presentan diversas barreras de contencin que previenen el
escape y dispersin de agentes biolgicos de riesgo.
B)rr"r) pr#*)r#)+ s aquella que protege al personal y al ambiente inmediato
del agente de riesgo @vestimenta de uso eBclusivo, cabina de bioseguridad y
equipos provistos de dispositivos de seguridadA.
B)rr"r) $",u-!)r#)+ s aquella que protege el ambiente eBterno contra los
agentes de riesgo @dise9o del laboratorio e implementacin de equipos de
seguridad de acuerdo al nivel de BioseguridadA.
B)rr"r) *#,r.#/0%#,)+ s un dispositivo o sistema que evita o limita la
migracin de microorganismos entre los espacios situados a ambos lados del
mismo y permite controlar la concentracin de microorganismos en el
ambiente, dentro de lmites prefijados. ,iene como objetivo proteger al
operador o al operador y al proceso.
B)rr"r) *#,r.#/0%#,) p)r,#)/+ s un dispositivo o sistema que limita la
migracin de microorganismos entre los ambientes situados a ambos lados del
mismo. n este tipo de barrera se recomiendan "refiltros, :iltros H"! @:iltros
de alta eficiencia para el control de partculas en suspensinA as como
cabinas de bioseguridad clase ( o ((, lo cual depender del tipo de trabajo que
se efect>a en un determinado laboratorio.
B)rr"r) *#,r.#/0%#,) ).$/u1)+ s un dispositivo o sistema hermtico, a
prueba de filtraciones de aire o gas, que evita en forma total la migracin de
microorganismos entre el ambiente confinado por la barrera y el ambiente
eBterior de la misma. La barrera microbiolgica absoluta puede confinar al
producto o proceso, dejando al operador fuera de la misma o viceversa. n
este caso se recomienda una cabina de bioseguridad de tipo (((.
B)rr"r) 2u3*#,)+ -on dispositivos o sistemas que protegen al operador del
contacto con substancias irritantes, nocivas, tBicas, corrosivas, lquidos
inflamables, sustancias productoras de fuego, agentes oBidantes y sustancias
eBplosivas. n este caso se recomiendan una cabina de seguridad qumica.
B)rr"r) 43$#,)+ -on dispositivos o sistemas de proteccin individual o colectiva
que protegen contra las radiaciones ioni0antes, no ioni0antes, ruidos, carga
calrica, quemaduras y vibraciones eBcesivas.
*(;L- + B($-%=#(+!+
+e acuerdo con el nivel de riesgo, el tipo de laboratorio, la barrera de
contencin requerida, los procedimientos y tcnicas a usar, se han establecido
los siguientes niveles de Bioseguridad.
7
N#5"/ !" B#$"%ur#!)! I+ s aquel que corresponde a las actividades
desarrolladas en un laboratorio bsico, por personal adiestrado en los
procedimientos que se ejecutan en l. n este nivel se trabaja con agentes
clasificados en el %rupo de riesgo ( por presentar un peligro mnimo para el
personal del laboratorio y para el ambiente. n el nivel de Bioseguridad ( no se
requiere equipo especial ni un dise9o especfico de las instalaciones. l
personal de estos laboratorios es generalmente supervisado por un cientfico
con entrenamiento en microbiologa.
N#5"/ !" B#$"%ur#!)! II+ s aquel que corresponde a las actividades
desarrolladas en un laboratorio bsico, por personal adiestrado en el manejo de
agentes de riesgo del grupo ((. s similar al nivel ( y en l se manejan agentes
de peligro moderado hacia el personal y el ambiente, pero difiere del nivel ( en
las siguientes caractersticas3
/. l personal de laboratorio tiene entrenamiento especfico en el manejo de
agentes patgenos.
1. l acceso al laboratorio es restringido cuando se est reali0ando alg>n
trabajo.
2. -e toman precauciones eBtremas con instrumentos pun0o cortantes
contaminados.
4. 'iertos procedimientos en los cuales pueden salpicar los agentes o
aerosoles se llevan a cabo en cabinas de trabajo microbiolgico.
N#5"/ !" B#$"%ur#!)! III+ s aquel que corresponde a las actividades
desarrolladas en el laboratorio de contencin. l personal debe contar con
adiestramiento especfico para el manejo de agentes de alto riesgo clasificados
en el grupo de riesgo (((. n el laboratorio se reali0a trabajo con agentes que
pueden causar un da9o serio y potencialmente mortal como resultado de la
inhalacin o eBposicin a los mismos. l laboratorio cuenta con un dise9o y
caractersticas especiales tendientes a proteger al operador y al ambiente.
,odos los materiales son manipulados utili0ando vestimenta y equipo de
proteccin siguiendo protocolos rigurosos. Los laboratorios se mantienen con
una presin de aire negativa, lo cual ayuda a impedir que los agentes nocivos
escapen al ambiente.
N#5"/ !" B#$"%ur#!)! IV3 s aquel que corresponde a las actividades
desarrolladas en el laboratorio de contencin mBima. ste nivel es el que se
utili0a para trabajar con agentes biolgicos clasificados en el grupo de riesgo (;
por representar un alto riesgo individual de contagio y que adems son un
riesgo para la vida. Los agentes nuevos que presentan caractersticas
antignicas, patognicas u otras similares a agentes de nivel ((( y (; son
confinados a nivel (; hasta que eBista suficiente informacin cientfica para
establecer a cual grupo de riesgo pertenecen.
l personal que trabaja en los laboratorios de nivel (; tiene entrenamiento
especfico y eBtensivo en el manejo de agentes infecciosos, y cuenta con
entrenamiento para trabajar en el ambiente estril y controlado. l laboratorio
cuenta con un dise9o y caractersticas especiales tendientes a proteger al
operador y al ambiente. ,odos los materiales son manipulados utili0ando
vestimenta y equipo de proteccin de caractersticas superiores a las eBigidas
para el trabajo en un laboratorio de nivel (((. Los trajes estn dise9ados para
8
cubrir la totalidad del cuerpo, presentan un sistema de respiracin individual
asociado y una leve sobrepresin interna para evitar as la entrada accidental
de partculas infecciosas. Los laboratorios se mantienen con una presin de
aire negativa, lo cual ayuda a impedir que los agentes nocivos escapen al
ambiente.
,("$- + L!B$#!,$#($-
n relacin con el grado de riesgo los laboratorios combinan las caractersticas
de dise9o, construccin, medios de contencin, equipo, prcticas y
procedimientos de operacin necesarios para trabajar con agentes patgenos
de los distintos grupos de riesgo. +e esta manera los laboratorios se clasifican
en 2 categoras3
L).r)1r# .6$#,3 +ividido en dos grupos, el de nivel de bioseguridad /Dy el
de nivel de bioseguridad 1D
L).r)1r# !" ,-1"-,#0-+ con nivel de bioseguridad 2, y
L).r)1r# !" ,-1"-,#0- *67#*)+ con nivel de bioseguridad 4.
PRCTICA GUIADA N8 1
/.C'omplete los nombres de los distintos smbolos de bioseguridad que
se presentan a continuacin.
/.C complete el recuadro 3
NIVEL DE
BIOSEGURIDAD
CARACTERISTICAS E9EMPLOS DE
PATOGENOS
9
10
PRACTICA N7 2
INSTRUMENTACIN+ CENTRIFUGACION
rocedimiento por el cual se aplica la FUERZA CENTRFUGA para
separar partculas que se encuentran en suspensin en un medio
lquido. l incremento de la fuer0a centrifuga condicionar que las
partculas migren alejndose del eje de rotacin de la centrifuga. l
proceso migratorio de las partculas se denomina sedimentacin y la velocidad
con que sedimentan es proporcional a la fuer0a centrifuga eBpresada como
incrementos de la gravedad @%A.
La constante gravitatoria es proporcional a la velocidad de giro del rotor I
soporte del medio que se centrifuga I y del radio del mismo. l radio del rotor
de la centrifuga depende si sta es del tipo ngulo fijo o flotante. n el primer
caso es un promedio entre el radio mnimo y el mBimo, y en el segundo es la
distancia entre fondo del tubo y el eje.

La velocidad de la sedimentacin se altera por la fuer0a centrfuga, pero
adems por la forma de las partculas, y por la viscosidad del medio lquido que
las suspende. ,ambin depende de la temperatura en cuanto sta altere la
viscosidad del medio o de las cargas elctricas de las partculas.
Los equipos que permiten la centrifugacin se llaman centrfugas y constan de
un motor con controles, que mueven un rotor que sostiene los tubos de
centrifugacin. Los rotores son de dos clases, de ngulo fijo y flotantes, tal
como se ve ms arriba.
La mayora de la centrfugas de laboratorio alcan0an las 5888 rpm, aunque
algunas alcan0an los /6 888 rpm. !lgunas centrfugas tienen refrigeracin lo
que permite separar partculas biolgicamente activas tales como factores de
coagulacin, en0imas, etc.
"
11
Las ultracentrfugas son centrfugas con vaco, refrigeracin y velocidades de
ms de 588 888 B g. "ermiten la separacin de los componentes tisulares, tal
como se aprecia en el cuadro adjunto y poder estudiar cada uno de ellos a
partir del homogeni0ado de un tejido cualquiera.
"ara evaluar con certe0a la capacidad de una centrfuga para separar los
componentes celulares debemos manejar gravedades en lugar de revoluciones
por minuto, por lo que frecuentemente usamos el nomograma de +ole y 'ot0iar
que presentamos a continuacin.
12
Suspender el tejido al 10%
Homogenizar en otter !.
"entri#ugar a 600g $ 10%
Sedimento& n'(leos) restos
(elulares
"entri#ugar el so*renadante
a 4000g $ 15%
Sedimento&
mito(ondrias
"entri#ugar el so*renadante
a 16 500g $ 15%
Sedimento&
lisosomas
"entri#ugar el so*renadante
a 100 000g $ 40%
Sedimento&
mi(rosomas
So*renadante& (itosol

TIPOS DE CENTRIFUGACIN
1. D#4"r"-,#)/+ separa de acuerdo a las diferentes velocidades de
sedimentacin de distintas partculas. La usamos en la clnica para
separar sedimentos de orina, o componentes del plasma.
2. :-)/3 usando una gradiente de densidad lograda con un soluto denso,
la ms usada la sacarosa, las molculas sedimentan de acuerdo a su
coeficiente de sedimentacin. La sacarosa densa evita que las bandas
se me0clen.
La gradientes pueden ser discontinuas I preparadas mediante la colocacin de
soluciones de diversa densidad una sobre otraC y continuas I preparada
mediante un equipo de me0cla de soluciones, que va incrementando la
densidad progresivamente.
TUBOS DE CENTRIFUGACIN3
13
+,-,./0-0 1! "02"32, 4!2,"5101 6 /015, 1! "07!802 1! "!+9/:;3.0
Bisten tubos de centrfuga de diversa composicin3
/. P/#,)r.-)1+ vidrio transparente, autoclavable y resistente a los
cidos y bases de baja dilucin.
1. Br#$#/#,)1+ vidrio muy resistente a qumicos de alta concentracin .
2. P/#"1#/"-3 plstico muy resistente a los qumicos, pero sensible a la
temperatura.
4. Prp#/"-3 plstico bastante resistente a la temperatura I autoclavableC
y resistente a casi todos los qumicos.
PORTATUBOS
-on de plstico o de metal y poco resistente a cidos y bases fuertes. +eben
ser conservados muy limpios.
:irma del alumno :irma del profesor
14
PRACTICA N7 5
INSTRUMENTACIN+ COLORIMETRIA
s el anlisis de la concentracin de una muestra por el color que presenta.
,odos hemos tenido la eBperiencia de valorar la concentracin de sustancias
coloreadas en solucin, por observacin directa, una ta0a de caf o t, un vaso
de refresco, son apreciados de esa manera. l eBamen se funda en la mayor o
menor absorcin de lu0 de acuerdo al mayor n>mero de molculas y tonalidad
depender de la capacidad de absorber una u otra longitud de onda de lu0,
especficamente. La fotocolorimetra manipula las variables de este fenmeno
controlando la lu0 incidente proveniente de un foco luminoso y su pure0a, de
modo tal que slo incida aquella lu0 que es especficamente absorbida por la
partcula que medimos.
Los cuerpos luminosos como el sol o las lmparas elctricas emiten un gran
espectro electromagntico que comprende amplias longitudes de onda, de las
cuales muy pocas corresponden al espectro visible. n el cuadro anterior se
aprecian todas las radiaciones electromagnticas conocidas.
Los cuerpos coloreados, absorben lu0 de determinada longitud de onda y
reflejan el resto del espectro luminoso visible e invisible @colores
complementariosA sta lu0 reflejada es la que observamos como color propio
del cuerpo coloreado. *o interesa particularmente los colores que absorbe la
solucin que queremos medir. La selectividad de absorcin que queremos
medir. La selectividad de absorcin de una partcula por una longitud de onda
se basa en el hecho de que cada longitud de onda de lu0 corresponde a un
distinto nivel de energa, y para eBcitar los electrones de cada partcula
necesitamos un particular nivel de energa.
15
450nm
540nm
640nm
3ltra<ioleta&
400nm a 1nm
/a=os >
1nm a 1pm
/a=os ?
@ 1pm
5n#rarrojo&
750nm a 25 um
-i(roondas&
25um a 1mm
,ndas de radio
A 1mm
-i consideramos que cada molcula absorbe lu0 de acuerdo a la concentracin
en que se encuentre dentro de la solucin, a mayor absorcin de lu0 y menor
lu0 trasmitida. stos factores estn considerados en la ley de Lambert y Beer.
L-%#1u! !" -!) C/r C/r"$ ,*p/"*"-1)r#$
488C425 violeta amarilloCverde
425C478 a0ul amarilloCverde
478C4J8 verdeCa0ul anaranjado
4J8C588 a0ulCverde rojo
588C568 verde purpura
568C578 amarilloCverde violeta
578C5J5 amarilloCverde a0ul
5J5C6/8 anaranjado verdeCa0ul
6/8CK58 rojo a0ulCverde
Los cuerpos coloreados, absorben lu0 de determinada longitud de onda y
reflejan el resto del espectro luminoso visible e invisible @colores
complementariosA. sta lu0 reflejada es la que observamos como color propio
del cuerpo coloreado. (nteresa particularmente los colores que absorben la
solucin que queremos medir. La selectividad de absorcin de una partcula por
una longitud de onda se basa en que cada longitud de onda de lu0 corresponde
a un distinto nivel de energa y para eBcitar los electrones de cada partcula se
necesita un particular nivel de energa.
- consideramos que cada molcula absorbe lu0 de acuerdo a la concentracin
en que se encuentre dentro de la solucin, a mayor concentracin de
sustancia, mayor absorcin de lu0 y menor lu0 trasmitida. stos factores estn
considerados en la Ley de Lambert y Beer, que es la siguiente3
Log (
o
L(
t
M e.l.c
+onde3 (
o
M Lu0 incidente, (
t
M Lu0 transmitida, ' M concentracin, L M
longitud de paso, e M constante.
FOTOCOLORIMETRIA ; ESPECTROFOTOMETRIA
La fotocolorimetra es la medida de la lu0 absorbida por una solucin mediante
un aparato que es un fotocolormetro. l equipo consta de una fuente de lu0
artificial, un monocromador que separa eBclusivamente lu0 de una sola longitud
de onda @la que sea preferente para la medidaA, un recipiente o tubo de vidrio
@que alberga la solucin a medirA, una clula fotoelctrica que transforma la lu0
trasmitida en corriente elctrica y una unidad de medida de la corriente
elctrica o galvanmetro.
16
La calificacin de colormetro o espectrofotmetro depende del
monocromador, s ste es un filtro tendremos un fotocolormetro, pero si es un
prisma, o cualquier aditamento que proporcione lu0 de diversas longitudes de
onda tendremos un espectrofotmetro.
Los fotocolormetros y los espectrofotmetros reportan sus resultados bajo dos
formas3 absorbancia o lu0 absorbida por las partcula de la solucin y
transmitancia a o lu0 transmitida luego de atravesar el tubo con la solucin. La
transmitancia se eBpresa en valores numricos entre 8 y /88N, es decir que
una solucin que no tiene particular trasmitir el /88N y una perfectamente
opaca el 8N. La absorbancia, tambin llamada densidad ptica +$, se eBpresa
en valores semilogartmicos entre 8 y 1 correspondiendo el 8 a la solucin que
no tiene partculas y por lo tanto no absorbe la lu0.
"ara encontrar la concentracin de una solucin pr./"*)< debemos comparar
su lectura frente a un blanco I agua destilada o reactivos sin modificarse I con
la lectura de un patrn o solucin estndar bajo las mismas condiciones. =na
solucin estndar es generalmente una que contiene el problema con una
concentracin perfectamente medida en el laboratorio.

CLCULO DE LA CONCENTRACIN DE UN PROBLEMA
17
Lu0 (ncidente (
o
Lu0 trasmitida (
t
F$e!te de l$) "la!,a M$estra: A"sor,i+!
Celda
8al9a!+&etro
Mo!o,ro&ador
"ara hallar la concentracin de una muestra problema tenemos dos
procedimientos3
/. :actor de 'alibracin
1. 'urvas de calibracin
F),1r !" ,)/#.r),#0-3 es la concentracin de sustancia que corresponde a
una unidad de medida, generalmente 8,88/ de absorbancia.
-e obtiene :actor de calibracin3
concentracin del patrn
Lectura del patrn @en absorbanciaA
sta frmula deriva de la densidad ptica o absorbancia del problema3
+$
"
M e
"
l
"
c
"
-i el coeficiente de eBtincin @eA es el mismo en ambos casos y el dimetro del
tubo de lectura@lA es el mismo, la >nica diferencia est en la concentracin.
Luego3
+$
st '-
M
+$
p '"
+espejando la concentracin del problema cp, se obtiene3

cs
cpM+p B CCCCCCCC
+ost
'oncentracin del problema M +ensidad )ptica del "roblema O :actor de
calibracin
La curva de calibracin consiste en la obtencin de las lecturas de absorcin 8
de N de trasmitancia que corresponde a una secuencia creciente de
concentraciones, estas son graficadas en un papel milimtrico si se trata de
absorbancia o densidad ptica y de papel semilogartmico si se trata de N de
transmitancia.
PARTE E=PERIMENTAL
PREPARACIN DE UNA CURVA DE CALIBRACIN
l eBperimento consiste en preparar tubos de concentracin creciente de un
colorante y leerlos al fotocolormetro o al espectrofotmetro, llevando a cero @8A
el aparato con agua destilada. 'onstruir una grfica usando papel milimetrado
para las lecturas hechas en +$ @densidad pticaA o papel semilogartmicos
para las lecturas hechas en N transmitancia.
18
"ara el efecto, preparar cinco tubos de acuerdo al esquema y leer las
soluciones al espectrofotmetro a 548 nm de longitud de onda. "racticar esta
lectura tanto en +$ como en N de transmitancia.
'onstruir dos curvas de calibracin, una en papel milimetrado y otra en papel
semilogartmico.
C-1"-#!
Tu. N8
/ 1 2 4 5
*L A>u/ *"1#/"- )/ ?@ *%A*LB 1 4 6 7 /8
*L A%u) !"$1#/)!) 7 6 4 1 8
C-,"-1r),#0- ?*%A*LB C T A ?AD&E/%TCB
D"$,-,#! 1
D"$,-,#! &

COMENTARIO
PPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPP
PPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPP
PPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPP
PPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPP...
=sando los valores obtenidos en % de trasmitancia, grafique usando el papel
semilogartmico de esta pgina.
19
COMENTARIO
PPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPP
PPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPP
PPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPP
PPPPP.
:irma del alumno :irma del profesor
PRACTICA N7 :
20
Batera
FV 1V
AA%GA)
H,/%C/GHC/GV#!r#
IC/GH%&C/&GH%
S/u,#0-
Pr./"*)
G
INSTRUMENTACIN+ POTENCIOMETRIA
La potenciometra es el procedimiento de eleccin para la medida del pH. l pH
en una eBpresin numrica que corresponde al logaritmo de la inversa de la
concentracin de iones HQ. La potenciometra se basa en la diferencia de
potencial @voltajeA entre dos electrodos, el de medida y el de referencia, ambos
sumergidos en la solucin y bajo condiciones de equilibrio.
l instrumento consta de un ELECTRODO DE REFERENCIA que se mantiene
constante durante la medida, un ELECTRODO DE MEDIDA que varia de
acuerdo a la concentracin de hidrgeno de la solucin y un !#$p$#1#5
p1"-,#0*"1r que mide la diferencia de potencial. l electrodo de referencia
puede ser de dos clase3 de calomel, mercurio metlico y cloruro mercurioso y
de plata plata y cloruro de plata. l potencial de ese electrodo depende de la
solucin de cloruro de potasio en que est sumergido internamente.
l electrodo de medida, es tambin llamado electrodo de vidrio, est constituido
por un tubo de vidrio cuyo eBtremo es particularmente selectivo al paso de
iones hidrgeno. n su interior hay cido clorhdrico H'l 8,/ & y un alambre de
plata, cloruro de plata,
n el potencimetro, un voltaje variable se opone al de la celda de medida. =n
galvanmetro act>a como detector del punto nulo para indicar que es igual al
voltaje opuesto de la celda de medida. 'onectando la celda desconocida al
21
circuito se produce un desnivel de voltaje que debe corregirse hasta alcan0ar el
punto nulo. La magnitud de la correccin puede leerse como fuer0a
electromotri0 o como pH directamente.
n la prctica se ha usado los electrodos de pH para medir la concentracin de
otros iones. Los electrodos tienen una membrana adicional que slo es
selectiva al paso de determinado electrolito, sodio, potasio, calcio son medidos
bajo esta manera con facilidad. ,ambin eBiste el electrodo de '$1 que deja
pasar molculas se este gas las que modifican el pH y por lo tanto son medidas
con el electrodo de vidrio de pH.
PARTE E=PERIMENTAL
TITULACIN DE UN CIDO DJBIL CON UNA BASE FUERTEG
-e trata de determinar el pH de un grupo de tubos con varios niveles de
titulacin de cido actico con hidrBido de sodio. 'uando se titula un cido
dbil con una base fuerte se produce un aumento de pH inicialmente rpido
para luego hacerse lento, dentro de ciertos mrgenes y al final se alcalini0a
rpidamente. La identificacin del cambio de pH en cierto perodo de la
titulacin, se debe a la formacin transitoria de una combinacin de cido dbil
y la sal correspondiente. n el caso del eBperimento ser la combinacin de
cido actico y acetato de sodio y son los componentes ordinarios de una
solucin amortiguadora o solucin buffer.
"ara la eBperiencia preparar // tubos de acuerdo al siguiente esquema3
Tu. N *L ),K1#, F<1 N *L N)OH F<1 N *L )%u) !"$1#/)!)
/ 5,8 8,8 5,8
1 5,8 8,5 4,5
2 5,8 /,8 4,8
4 5,8 /,5 2,5
5 5,8 1,8 2,8
6 5,8 1,5 1,5
K 5,8 2,8 1,8
7 5,8 2,5 /,5
J 5,8 4,8 /,8
/8 5,8 4,5 8,5
// 5,8 5,8 8,8
Leer los tubos en el potencimetro y graficar los resultados
22
'$&*,!#($
PPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPP
PPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPP
PPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPP
PPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPP
PPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPP
:irma del alumno :irma del profesor
PRACTICA N7 ;
23
CINETICA EN:IMATICA
Las en0imas son protenas que aceleran las reacciones qumicas hasta su
punto de equilibrio.
La ecuacin general de las en0imas es3
Q - - Q "
'R 'SS
La actividad en0imtica se manifiesta y mide por3
+esaparicin de sustrato
:ormacin de producto
&odificacin de cofactor
&uchos factores modifican la actividad en0imtica3
pH
,emperatura
'oncentracin de sustrato
'oncentracin de en0ima
,iempo de incubacin
n nuestra prctica observamos el efecto de la pepsina sobre la alb>mina del
huevo. La actividad en0imtica se apreciar por la prdida de la turbide0
proteica. La actividad en0imtica reportar en funcin del N de formacin de
producto par ello hacer uso de la siguiente ecuacin3
C Fr*),#0- !" pr!u,1 ?FCB D 1FF ; ?A.$
1u.$
AA.$
)/.L*#-)
BM1FF
+onde3 !bs
tubo
M !bsorbancia de los tubos despus del incubado.
!bs
alb>mina
M !bsorbancia de la alb>mina @!bs M 8.JJ5A
'G E=PERIMENTOGE E4",1 !"/ pH
l pH act>a sobre los grupos ioni0ados que pertenecen a los centros activos
de las en0imas. Los grupos que pierden la ioni0acin pierden la capacidad de
interaccionar con el sustrato. 'ada en0ima tiene un pH ptimo de trabajo.
"reparar cinco tubos con3
TUBO N8 1 & ' ( @
pH 1<F 1<@ 6<F 9<@ 11
mL alb>mina @<F @<F @<F @<F @<F
24
mL H'L /* &<F F<@ F<F F<F F<F
mL '$
2
*a
1
F<F F<F F<F F<@ &<F
mL agua destilada F<F 1<@ &<F 1<@ F<F
"reincubar los cinco tubos ms un tubo conteniendo 18 mL de pepsina al /N
a 2K.' por 5 minutos. Luego a9adir rpidamente 2 mL de la pepsina
preincubada a cada uno de los tubos /I5. &e0clar e incubar a 2K.' por /8 min.
$bservar la diferencia o leerla en fotocolormetro con filtro a0ul @418 nmA.
(G E=PERIMENTO+ E4",1 !" /) 1"*p"r)1ur)G
,odo aumento de temperatura incrementa la actividad en0imtica por aumento
de la energa de activacin. "ero paralelamente se va produciendo una
desnaturali0acin parcial de la en0ima que la inactiva.
"reparar cinco tubos con3
TUBO N8 1 & ' ( @
mL alb>mina @<F @<F @<F @<F @<F
mL H'L /* F<@ F<@ F<@ F<@ F<@
mL agua destilada '<@ '<@ '<@ '<@ '<@
"reparar otros cinco tubos con3
TUBO N8 6 7 N 9 1F
mL pepsina /N 1<F 1<F 1<F 1<F 1<F
(ncubar por 5 minutos de acuerdo al siguiente esquema de temperatura3
TUBO N8 1 O 6 & O 7 ' O N ( O 9 @ 1F
,emperatura O 8C A*.G '7 8C 7F 8C '7

8C 1FF 8C
!gregar los respectivos tubo *. 6 al *. /8 a los que hay que incubar a las
temperaturas a que se preCincuban los tubos / I 5.
@G E=PERIMENTOG EE4",1 !" /) ,-,"-1r),#0- !" /) "->#*)
!unque las en0imas no se destruyen ni con las reacciones, el aumento de ellas
en la cubeta de reaccin incrementa la velocidad.
"reparar 5 tubos con3
TUBO N8 1 & ' ( @
25
mL alb>mina @<F @<F @GF @<F @<F
mL H'L /* F<@ F<@ FG@ F<@ F<@
mL agua destilada 1<@ &<@ 'G@ (<F (<@
mL pepsina F<F F<F FGF F<F F<F
(ncubar los 5 tubos a 2K.' por 5 minutos y enseguida a9adir3
TUBO N8 1 & ' ( @
mL pepsina incubada '<F &<F 1<F FG@ F<1
(ncubar por cinco minutos a 2K.'. $bservar al fotocolormetro a 418 nm
@filtro a0ulA, contra una lectura de agua.
6G E=PERIMENTOGEE4",1 !" /) ,-,"-1r),#0- !"/ $u$1r)1
-i es una reaccin en0imtica incrementamos progresivamente la
concentracin del sustrato, aumentar la velocidad en0imtica @velocidad
inicialA hasta un punto en que la velocidad llega a una meseta plana que no
modifica aunque sigamos aumentando el sustrato, habremos saturado la
en0ima.
"reparar 6 tubos con3
TUBO N8 1 & ' ( @ 6
mL alb>mina &<F '<F (<F @<F 6<F 7<F
mL H'L /* F<@ F<@ F<@ F<@ F<@ F<@
mL agua destilada 7<F 6<F @<F (<F '<F &<F
mL pepsina /N F<F F<F F<F F<F F<F F<F
Leer a 418 nm @filtro a0ulA. !notar los resultados3 incubar a 2K.'. 'olocar 8,5
mL que pepsina preCdirigida. (ncubar por otros 5 minutos a 2K.'. Leer al
fotocolormetro a 418 nm @filtro a0ulA. #estar la segunda lectura de la primera.
%raficar y comentar los resultados.
26
C*"-1)r#+
PPPPPPPPPPPPPPPPPPP
PPPPPPPPPPPPPPPPPPP
PPPPPPPPPPPPPPPPPPP
PPPPPPPPPPPPPPPPPPP
PPPPPPPPPPPPPPPPPPP
C*"-1)r#+
PPPPPPPPPPPPPPPPPPP
PPPPPPPPPPPPPPPPPPP
PPPPPPPPPPPPPPPPPPP
PPPPPPPPPPPPPPPPPPP
PPPPPPPPPPPPPPPPPPP
C*"-1)r#+
PPPPPPPPPPPPPPPPPPP
PPPPPPPPPPPPPPPPPPP
PPPPPPPPPPPPPPPPPPP
PPPPPPPPPPPPPPPPPPP
PPPPPPPPPPPPPPPPPPP
C*"-1)r#+
PPPPPPPPPPPPPPPPPPP
PPPPPPPPPPPPPPPPPPP
PPPPPPPPPPPPPPPPPPP
PPPPPPPPPPPPPPPPPPP
PPPPPPPPPPPPPPPPPPP
:irma del alumno :irma del profesor
PRACTICA N7 <
27
DIGESTION DE CARBOHIDRATOS
l carbohidrato ms importante en la alimentacin es la glucosa, la cual
ingerimos bajo la forma de disacridos @maltosa, sacarosa y lactosaA o de
almidn, polisacridos formado por muchas molculas de glucosa. l almidn
es el constituyente esencial de cereales, leguminosa, tubrculos y races. La
digestin del almidn se produce en el intestino delgado gracias a la presencia
de en0imas digestivas producidas por las glndulas salivares, el pncreas y la
pared intestinal. stas en0imas son3
La alfa amilasa salivar
La alfa amilasa pancretica
La amilo /,6 glucosidasa de la pared intestinal
Las alfa amilasas son en0imas que act>an a pH neutro y en presencia de iones
cloro. #ompen los enlaces amilo /,4 dando como resultado oligosacridos y
glucosa.
Biste dos formas de evaluar la actividad en0imtica de la amilasa3
"or desaparicin de sustrato3 forma como desaparece el almidn el que
se aprecia por la reaccin del lugol.
"or formacin de producto3 forma como aparecen carbohidratos
reductores @glucosaA en el medio, los que se aprecian por reduccin del
cobre.
n nuestra prctica evaluaremos la actividad en0imtica de la amilasa sobre el
almidn mediante la reaccin del remanente de almidn frente al yodo a mayor
decoloracin, mayor actividad en0imtica.
1G E=PERIMENTO.C D#%"$1#0- !"/ )/*#!0- pr /) )*#/)$) $)/#5)r.
"ara la eBperiencia preparar cuatro tubos de ensayo de acuerdo al siguiente
esquema.
TUBO
1 & ' (
ml almidn /N & & & &
ml Buffer fosfato pH 6,6 1 1 1 F
ml H'L 8,2* F F F '<(
ml -uero fisiolgico ' &<( F F
ml !gua destilada F F &<( F
'olocar en ba9o de &ara a 2K.' por 5 minutos. !gregar3
ml solucin de saliva F F<6 F<6 F<6
'olocar en ba9o de mara a 2K.' por 18 minutos
P)$)! "$1" 1#"*p 1*)r F<@*/ !" ,)!) 1u. O pr"p)r)r ,u)1r 1u.$
*6$ !" ),u"r! )/ "$2u"*)
TUBO
1 & ' (
28
ml digestin tubo /
F< @ F F F
ml digestin tubo 1
F F<@ F F
ml digestin tubo 2
F F F<@ F
ml digestin tubo 4
F F F F<@
ml H'L 8,85*
@ @ @ @
ml -olucin yodada
F<@ F<@ F<@ F<@
D"P)r "- r"p$ pr 1@ *#-u1$G L""r )/ 41,/r3*"1r ,- 4#/1r rP
?66F-*B
INFORME DE LA PRCTICA III
*ombre3
%rupo 3 :echa3
E7p"r#*"-1 7GE D#%"$1#0- !"/ )/*#!0- pr /) )*#/)$) $)/#5)r

COMENTARIO+
PPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPP
PPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPP
PPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPP
PPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPP
PPPPP.
:irma del alumno :irma del profesor
PRACTICA N7 =
29
ABSORCION DE CARBOHIDRATOS
+espus de la digestin de los carbohidratos por efecto de amilasas salivar y
pancretica, amilo 1,6 glucosidasa, y disacarasas tenemos como resultado
monosacridos3 glucosa, fructosa, galactosa, que debern ser absorbidos por
la mucosa intestinal para su ingreso a la circulacin sangunea. Los
carbohidratos se absorben en el yeyuno mediante dos mecanismos, la simple
difusin favorecida por la gradiente de concentracin y el transporte activo, a>n
contra la gradiente. l orden de facilidad en la absorcin es de galactosa
glucosa3 ribosa.
l borde en cepillo de las clulas intestinales tiene varios sistemas
trasportadores. =n transportador de glucosa dependiente del sodio @-L%,/A se
enla0a tanto a la glucosa como al sodio en sitios separados aumentando el
tenor de sodio intracelular.
La energa necesaria para este transporte se obtiene de la hidrlisis del !,"
vinculado a una bomba de sodio que intercambia sodio con potasio.

,ambin participa un transportador facilitador independiente del sodio llamado
GLUT @G La hidrlisis de los polisacridos, oligosacridos y disacridos es muy
rpida por lo que usualmente los procedimientos de absorcin se saturan con
rapide0.
1G E=PERIMENTOGEA.$r,#0- !" /) %/u,$) pr "/ #-1"$1#- !" /) r)1)
30
/. -e usan ratas con 14 a 26 horas de ayuno. -e les anestesia con eter
bajo una campana de vidrio. !brirles el abdomen y se retira una porcin
de 5 cm de intestino, de modo que no puede mesenterio adherido.
1. -e lava la lu0 intestinal varias veces mediante una jeringa con solucin
#inger :osfato pH K,4 &ediante el uso de una baqueta de vidrio se
empuja un eBtremo del intestino dentro del mismo buscando evertir la
porcin mucosa hacia fuera. &antener el intestino en solucin #inger
:osfato pH K,4 a temperatura ambiente.
2. 'errar un eBtremo del intestino con hilo y dejar otra ligadura suelta en el
otro eBtremo del intestino.
4. (ntroducir en el saco intestinal formato 1 ml de solucin #inger :osfato
pH K,4 con 8,1N de glucosa. 'errar la ligadura suelta y revisar que no
haya prdida de lquido.
5. (ntroducir el saco lleno en un tubo con 1 ml solucin #inger :osfato pH
K,4 con glucosa 8,1N (ncubar a 2K.' por 28 minutos. "asado del tiempo
sacar el saquito, secarlo por fuera con papel de filtro. 'ortarlo con tijera
y vaciar el contenido en u tubo de ensayo.
6. +iluir /3/8 con agua destilada, tanto el contenido del saquito, como el del
tubo que lo recibi durante la incubacin. Luego proceder a preparar 4
tubos de acuerdo al siguiente esquema.
TUBO
1 & ' (
ml reactivo para glucosa
& & & &
Tl agua destilada
@F F F F
Tl patrn 18 mgLdL
F @F F F
Tl solucin diluida intra saco
F F @F F
Tl solucin diluida eBtra saco
F F F @F
I-,u.)r ) '78C pr 1F *#-u1$G E-4r#)r O /""r "- "/ 41,/r3*"1r )
@&F-*G U$)-! "/ 1u. 1 ,* ./)-,
COMENTARIO+
PPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPP
PPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPP
PPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPP
PPPPPPPPPPPPPPPPPPPPP.
:irma del alumno :irma del profesor
PRACTICA N7 >
31
GLICOLISIS
La va metablica ms importante para la glucosa es la va glicoltica o de
mbden &eyehof. sta presente, naturalmente, en todos los tejidos y es
responsable del aprovechamiento energtico de la glucosa y a>n de otros
carbohidratos. ,iene dos formas de manifestarse3 /) 4r*) )-)"r0.#,) cuando
la concentracin de oBgeno es baja, produce cido pir>vico y cido lctico, y
genera escasamente !$ */K,u/)$ !" ATP, tal como se aprecia en la
siguiente frmula global.
%L='$-! Q 1!+" Q "i 1 lactato Q 1!," Q 1H1$
'uando la gliclisis transcurre "- pr"$"-,#) ).u-!)-1" !" 73%"-, tiene
como producto final el cido pir>vico, el cual se transforma en actil 'o!
mediante el proceso de decarboBilacin oBidativa, en ingresa al 'iclo de Urebs
donde produce 'N */K,u/)$ !" ATPG
1G E=PERIMENTOGE G/#,0/#$#$G
32
La gliclisis anaerbica @parcialmenteA se demuestra por el aumento
de compuestos cidos @pir>vico y lcticoA en el tubo de reaccin.
"ara el efecto preparar cuatro tubos de acuerdo al esquema.
TUBO
1 & ' (
ml solucin de "otter pH K,4
&<@ &<@ &<@ &<@
ml %lucosa 8,/ m
F<@ F<@ F<@ F<@
ml *!+ /8m gLml
F<& F<F F<& F<&
ml !," 5m gLml
F<& F<& F F<&
ml *icotinamida 8,4m
F<1 F<1 F<1 F<1
ml Vodoacetato 8,/m
F F F F<1
ml !gua destilada
F<1 F<' F<' F
'olocar en ba9o de mara 2K.' por 5 minutos
%otas de rojo de fenol
I# I# ## I#
ml homogeni0ado de hgado
F<@ F<@ F<@ F<@
T)p)r " #-,u.)r 1 Qr) ) '78C
T#1u/)r ,)!) 1u. ,- N)OH F<F1N Q)$1) "/ ,/r r#%#-)/
COMENTARIO+
PPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPP
PPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPP
PPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPP
PPPPPPPPPPPPPPPPPPPPP.
RESPIRACIN TISULAR
La respiracin tisular es el proceso por el cual
se aprovecha la energa almacenada en los
nutrientes @glucosa, cidos grasos,
aminocidosA a travs del !ctil 'o!,
mediante procesos de oBidacin.
+urante el proceso de oBidacin del !cil 'oa
se forman equivalentes reductores en forma
de hidrgeno o electrones que ingresan a la
cadena respiratoria, locali0ada en las
mitocondrias y genera muchas molculas de
!,". 'omo puede apreciarse en el esquema
adjunto hay tres fuentes de generacin de
electrones que producen 2 molculas de !,",
el isocitrato, el cetoglutarato y el malato y una
que slo proporciona dos !," que es el
succinato, debido a que ingresa al ciclo de
Urebs a nivel de la 'oen0ima < y no del *!+
como las otras.
33
l punto final del transporte de los electrones por la cadena respiratoria es
el oBgeno. +os tomos de hidrgeno se unen a W molcula de oBgeno
para forma una molcula de agua. l proceso oBidativo de los nutrientes se
puede seguir por el consumo de oBgeno. .
&G E=PERIMENTO+ R"$p#r),#0- T#$u/)r
l eBperimento estudia la respiracin tisular mediante la manometra. =n
manmetro es un instrumento que mide los cambios en la presin de los
gases. sta basado en el principio de vasos comunicantes, si colocamos un
lquido en dos recipientes que se comunican entre s, ambas ramas sern
iguales siempre que sobre ellas eBista la misma presin sobre una de ellas
disminuye los niveles de lquido se desigualan. Los equipos que usaremos
sern iguales o semejantes a los que se observan en el grfico, es decir
constan de un ambiente cerrado para la reaccin, un medio de absorcin de
'$
1
que puede combinar
"reparar dos frascos de acuerdo al siguiente esquema3
FRASCO N8 1
ml -olucin de "otter pH K,4
'
ml -uccinato de potasio 8,5m
F<'
ml !gua destilada
F<7
ml Homogeni0ado
F<@
'errar bien los frascos. (ncubar a temperatura ambiente. &edir cada 1 minutos
la modificacin del nivel del manmetro. "repara un grfico de consumo de
oBgeno vs tiempo.
34
'omentario3
PPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPP
PPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPP
PPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPP
PPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPP
:irma del alumno :irma del profesor
35
PRACTICA N7 ?
COLESTEROL DE FRACCIONES LIPOPROTEICAS
Las protenas son lpidos complejos resultado de unir la grasa con protenas.
Los lpidos sanguneos se encuentran bajo esta forma y divididos en cuatro
tipos de lipoprotena3
!lfa lipoprotena @H+LA ricas en protenas y fosfolpidos
"re Ibeta lipoprotenas @;L+LA3 ricas en triglicrido
Beta lipoprotenas @L+LA3 ricas en colesterol
<uilomicrones @<A3 ricos en triglicridos dietticos
,oda las lipoprotenas tienen colesterol, triglicridos, fosfolpidos y protenas,
pero en distinta concentracin relativa.
l colesterol es la grasa que genera la arterioescleroris al depositarse en las
paredes de los vasos sanguneos. l colesterol de las betalipoprotenas est en
actitud de depositarse en los vasos constituye la mayor parte del colesterol
sanguneo. l colesterol de las alfa lipoprotenas @H+LA es aquel que est
siendo retirado de los vasos, por lo que su presencia es beneficiosa.
"ara investigar el colesterol de las alfa lipoprotenas usamos un reactivo
precipitante @fosfot>ngsticoCcloruro de calcioA que precipita a las betas y
prebetalipoprotenas dejando en solucin a las alfa, sobre las que se reali0a la
reaccin de color tpica del colesterol.
1G E=PERIMENTO +osaje colesterol total y colesterol H+L en sangre.
36
-e toma una muestra de sangre del paciente en ayuno de por lo menos 14
horas. La sangre se coloca en tubo limpio sin anticoagulante.
"reparar un tubo al que se le coloca3
/ml de suero lmpido
8./ ml de reactivo precipitante H+L o (( gotas
!gitar y dejar en reposo por minutos al ambiente 'entrifugar a 2 888 por /8
minutos separar el sobrenadante.
"reparar cuatro tubos lmpidos y colocar3
TUBO N8 1 & ' (
ml -uero lmpido
F<F& F F F
ml -obrenadente anterior
F F<F& F F
ml "atrn de colesterol
F F F<F& F
ml !gua destilada
F F F F<F&
ml #eactivo de color
& & & &
!gitar3 (ncubar por /5 minutos a 2K.'.
Leer al fotocolormetro a 518 mu los tubos /,1 y 2, llevando a cero con el
blanco @tubo4A
'lculos
188
'olesterol mgLdlM CCCCCCCC O +.$.@/ 1A
+.$ @2A
&G E=PERIMENTO + +osaje de triglicridos
"reparar tres tubos con3
TUBO N8 1 & '
ml -uero
F F<F& F
ml "atrn de triglicridos
F F F<F&
ml #eactivo de color
& & &
!gitar, incubar a 2K.' por /5 minutos
37
Leer al fotocolormetro a 518 nm los tubos 1 y 2 llevando a X$Y con el tubo /
'onc. patrn
,riglicridos mgLdl M CCCCCCC B +.$.@1A
+.$ @2A
INFORME DE LA PRCTICA + RIESGO CORONARIO
N*.r"+
...............................................................................................................................
...............................................................................................................................
...............................................................................................................................
....................................
Bperimento 23 +osaje de colesterol total y colesterol H+L en sangre
"atrn3
Lectura3
'oncentracin3
:actor de 'alibracin3
'olesterol total3
2. E=PERIMENTO + V)/r),#0- !" /)$ /#ppr1"3-)$ pr "/",1r4r"$#$
"- ),"1)1 !" ,"/u/$)
La electroforesis es una tcnica para la separacin de molculas @protenas o
cidos nucleicosA sobre la base de su tama9o molecular y carga elctrica. Los
cidos nucleicos ya disponen de una carga elctrica negativa, que los dirigir al
polo positivo, mientras que las protenas son molculas cuya carga neta
depende del contenido de una serie de aminocidos @fundamentalmente cido
glutmico, cido asprtico, lisina, arginina e histidinaA. "ara la separacin se
usa un gel de agarosa, poliacrilamida o acetato de celulosa. !l poner la me0cla
de molculas y aplicar un campo elctrico, stas se movern y debern ir
pasando por el papel, por la que las peque9as se movern mejor y
rpidamente. !s, las ms peque9as avan0arn ms y las ms grandes
quedarn cerca del lugar de partida.
n resumen, puede decirse que cuando una molcula cargada se coloca en un
campo elctrico se mover hacia uno u otro electrodo dependiendo de3
/A su carga elctrica
1A su tama9o
2A la intensidad del campo elctrico y
4A la temperatura del medio.
Las protenas estn compuestas de aminocidos que poseen grupos ioni0ables
@principalmente C'$$
C
y C*H2
Q
A, pueden encontrarse cargadas positiva o
negativamente, o bien permanecer elctricamente neutras seg>n la proporcin
de los diversos grupos ioni0ados a un determinado pH.
38
n suero humano la composicin normal es3
"rotena total3 6,4 a 7,2 gLdL
!lb>mina3 2,5 a 5,8 gLdL
!lfaC/ globulina3 8,/ a 8,2 gLdL
!lfaC1 globulina3 8,6 a /,8 gLdL
Beta globulina3 8,K a /,1 gLdL
%ammaglobulina3 8,K a /,6 gLdL

ELECTROFORESIS EN ACETATO DE CELULOSA

-e usa para la separacin y caracteri0acin de protenas y otras molculas. l
soporte consiste en tiras delgadas de acetato de celulosa, con propiedades de
adsorcin mnimas, por lo que se evita la formacin de colas y los solutos
pueden ser separados en bandas bien definidas. $tras ventajas son3
/A La separacin es muy rpida
1A -e pueden anali0ar cantidades de muestra peque9as
2A Las tiras pueden hacerse transparentes
4A La tira se puede disolver, recuperando los componentes separados
5A "resentan un fondo bajo cuando se separan compuestos radiactivos
MATERIAL R REACTIVOS
&aterial
C ,iras de acetato de celulosa @X'ellogelYA
C "apel de filtro para secar las tiras de acetato
C 'ubeta de electroforesis
C !plicador
C :uente de electroforesis
R"),1#5$
C,ampn ,risCH'l /8 m& y +,! / m& pHM7,6
C-olucin de tincin3 8./N @pLvA ponceau - stain en cido actico /N
C-olucin de lavado3 cido actico /N
C-uero
PROCEDIMIENTO E=PERIMENTAL
lectroforesis3
B Humedecer en tampn las tiras de acetato de celulosa /8 minutos antes de su
uso, para su equilibrado.
B Btender las tiras sobre el puente de la cubeta de modo que la superficie
B penetrable quede hacia la parte superior. l lado penetrable es el que se ve
cuando la tira se coloca en vertical delante de nosotros con el corte en la
esquina inferior derecha
B +epositar la muestra de suero en la tira de acetato de celulosa, en el eBtremo
prBimo al ctodo.
B 'onectar la corriente, aplicando una diferencia de potencial de /88 voltios
durante 68 minutos.
#evelado3
39
B :inali0ada la separacin, depositar las tiras en una cubeta con solucin de
tincin, de modo que queden cubiertas por el lquido, durante /8 minutos.
B Lavar las tiras en solucin de destincin hasta que se observen bien las
bandas de protena @rojoA sobre un fondo blanco.
TRATAMIENTO R DISCUSION DE LOS RESULTADOS
+ibujar el patrn de bandas que se ha obtenido tras la electroforesis de
protenas sricas, indicando la posicin de nodo y ctodo as como el punto
de aplicacin de la muestra. (dentificar las protenas que corresponden a cada
banda y justificar el orden.
'omentario3
PPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPP
PPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPP
PPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPP
PPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPP
PPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPP
PPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPP
:irma del alumno :irma del profesor
PRACTICA N7 43
40
TRANSAMINACION
=na de las reacciones generales de los aminocidos es la transaminacin o
trasporte de un grupo amino de un aminocido a un cetocido, trasformado al
primero en cetocido y al segundo en aminocido.
sta transformacin posibilita la formacin de carbohidratos a partir de
aminocidos, esto es el fenmeno de la neoglucognesis.
L! ecuacin general de estas reacciones es3
#M'HC'$$H Q #C'C'$$% #C'C'$$HQ#C'HC'$$H

*h1 $ $ *H1
n el caso de nuestro eBperimento la transaminasa que estudiaremos es la
transaminasa glutmico pirvica que transforma el alfa cetoglutrico @cetocidoA
en glutmico @aminocidoA y a la alanina @animocidoA en per>vico @cetocidoA.
sa en0ima que es particularmente rica en el tejido heptico es un eBcelente
herramienta de estudio clnico de ese rgano, en problemas como la hepatitis o
la cirrosis heptica.
l procedimiento de anlisis se llevar a cabo mediante la cromatografa en
capa fina.
PROCEDIMIENTO CROMATOGRFICOS
La cromatografa es un procedimiento de anlisis por el cual una me0cla de
molculas es separada en sus componentes mediante el uso de una fase
estacionaria y una mvil.
La fase estacionaria o soporte da nombre al tipo de cromatografa3 papel,
columna, capa fina y la fase mvil es lquida o gaseosa.
La separacin de componentes se produce por el fenmeno de particin por
solventes, esto es ante una me0cla de lquidos no miscible entre s, algunos
componentes tendrn mayor posibilidad de locali0arse en uno u otro
41
componente, aquellos que se localicen en el componente ms lejano del
soporte migraran ms y aquellos cercanos sern adsorbidos por el soporte.
Bisten una forma identificatoria de medir la migracin de las molculas
anali0adas y es el #f. ste valor corresponde a la relacin entre los cm
migrados por la molcula y aquellos migrados por el medio mvil.
1G E=PERIMENTO+ D"*$1r),#0- !" 1r)-$)*#-),#0- pr ,r*)1%r)43)
"reparar 4 tubos de acuerdo la esquema3
TUBO N8 1 & ' (
ml cetoglutarato 8,1 &
F<' F<' F F
ml alanina 8,1&
F<' F<' F F
ml piruvato 8,1&
F F F<' F<'
ml glutamato 8,1&
F F FG<' F<'
ml arsenito 8,/&
F<( F<( F<( F<(
ml n0ima activa
F 1 F 1
ml n0ima inactiva
1 F 1 F
42
/; CBBBBBBBBBBBBBBBBB
a
*
a
*
a
(ncubar todos los tubos por 45 minutos a 2K.'. #etirar los tubos del ba9o de
&ara y agregar 6ml de alcohol etlico a cada tubo. !gitar y esperar por dos
minutos. 'entrifugar y usar los sobrenadantes para la cromatografa.
Cr*)1%r)43)
&arcar a 2 cm del borde una lnea suave con un lpi0, tratando de no da9ar la
slica gel. &arcar en esa lnea seis puntos separados por 1 cm cada uno.
'olocar en cada punto cinco gotas del respectivo sobrenadante y en las dos
>ltimas 5 gotas de alanina y cinco de glutamato respectivamente. +ejar secar
'olocar la cromatoplaca en una cmara de cromatografa con una me0cla de
propanol3 agua en la proporcin de 73 +ejar correr hasta que el nivel lquido le
falte / cm para llegar al eBtremo de la placa. &arcar el nivel al que alcan0 el
lquido con un lpi0 y dejar secar.
!plicar con un spray una solucin de ninhidrina al 8,/N e butanol. 'olocar a la
estufa por /8 minutos. &arcar las manchas obtenidas.
$btener el #f de cada mancha mediante la frmula3
+istancia de origen al punto medio de la mancha
#f3
+istancia de origen al nivel mBimo del solvente
'omentario3
PPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPP
PPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPP
PPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPP.
:irma del alumno :irma del profesor
PRACTICA N7 44
43
EVALUACION NUTRICIONAL
E7p"r#*"-1 1GE M)-"P !" T)./)$ !" C*p$#,#0- !" A/#*"-1$
La forma ms eBacta de evaluar la ingesta de nutrientes por un sujeto es a
travs del clculo de la ingesta alimentaria, bien documentada y eBacta y
mediante las ,ablas de 'omposicin de !limentos. n la presente prctica
anali0aremos3
/. Las necesidades calricas de un sujeto3 tomando en cuenta, peso y
trabajo. !s conocemos que una persona gasta como &etabolismo Basal
/ Zcalora LZg. "esoLhora. ! ello a9adimos aproBimadamente un 58N por
trabajo de mediana intensidad.
1. Las necesidades protecas de un sujeto3 tomado su peso, aceptamos
una necesidad de /gLZg de pesoLda@ en condiciones mnimas 8,5LZg
pesoLdaA.
2. Las necesidades de nutrientes @protena, carbohidratos y grasaA de un
da al a0ar. 'on ello podemos establecer su ingesta calrica y proteca y
por lo tanto su dficit o adecuacin.
"ara el efecto usaremos la siguiente ,abla de 'omposicin de !limentos
resumida.
TABLA DE COMPOSICIN DE ALIMENTOS
%A1FF% !" )/#*"-1
A/#*"-1 Pr1"3-) L3p#! C)r.Q#!r)1$
A1L- ?,-$"r5)B &9<F (<N F<F
B),)/) ?$",B N1<N &<N F<F
C)/)*)r 16<( F<9 F<F
C)*)r0- 17<' F<& &<@
C)r-" ?,"r!B 1@<F 1@<1 F<F
C)r-" ?P)5B &F<1 &F<& F<F
C)r-" ?p//B 1N<& 1F<& F<F
C)r-" ?pu/p)B &1<' 1<6 F<F
C)r-" S",) (N<1 9<( F<F
CQ#,Q)rr-"$ 11<' 61<( F<F
CP#-5) &F<& F<7 F<F
Cr5#-) 19<9 F<9 F<F
H3%)! 19<@ 6<6 '<6
Hu"5 ?11)/B 1&<N 11<N 1<F
9)*0- !"/ P)3$ 1@<9 &6<6 F<F
9)*0- I-%/K$ &@<N &F<@ F<F
L",Q" 4r"$,) &<9 '<' 7<F
L"-%u)! 19GF F<@ F<F
M"r/u>) 19<' F<N F<F
44
P"P"rr"O 1N<7 1<& F<F
Qu"$ Fr"$, 16<F 1F<' '<7
Qu"$ *)-1",$ &@<N &F<& 7<(
T,#- 9<1 6@<F 1<6
Tru,Q) 1N<& 1<F F<F
A/#*"-1 Pr1"3-) L3p#! C)r.Q#!r)1$
Arr> ?$",B 6<@ F<7 7N<1
Ar5"P) ?5"r!"B N<' F<7 &(<&
A5"-) 1F<6 F<9 6N<@
B#>,,Q N<N 6<9 6(<(
C)*1" 1<& F<& &7<1
F#!"$ N<7 F<' 7N<'
Fr"P/ -"%r &1<& 1<7 @'<'
Fr"P/ $O) ''<( 16<( '@<@
Fr"P/ 1)rQu# (F<9 1'<( &7<'
G)//"1)$ ?$!)B 9<( 1(<7 67<9
G)//"1)$ ?V)#-#//)B 6<F 1&<7 7@<F
G)r.)-> 19<1 @<1 61<(
A/#*"-1 Pr1"3-) L3p#! C)r.Q#!r)1$
L"-1"P)$ &&<N 1<& @9<(
M)3> ?,)-,Q)B 6<7 &<7 79<N
M)3> ?,Q,/B '<' F<N &7<N
M)-3 &NGN (6<9 1N<1
Nu"> 1'<7 67<& 1'<&
O//u, F<N F<1 1(<&
P)//)r"$ 19<9 1<1 61<N
P)- ?4r)-,"$B 9<& F<' 6N<&
P)p) ./)-,) &<1 F<' &&<(
P)p) S",) N<' F<@ 7'<&
Qu#-u) 11<9 (<7 67<6
Ru,) F<N F<& '9G'
A,"#1u-)$ 1<& ''<& 6<N
B/)-2u#// F<6 F<1 17<1
C".//) F<9 F<1 7<(
C, '<N 1N<9 19<7
C/ 1<( F<F @G&
C/#4/r &<F F<6 @<N
L",Qu%) 1<( F<& '<'
N). F<N F<& @<&
P"p#-) F<@ F<1 &<7
R).)-#1$ F<N F<F '<1
45
T*)1" F<N F<& (<F
:)-)Qr#) F<6 F<( 9<@
:)p)// F<7 F<& 6<(
A/#*"-1 Pr1"3-) L3p#! C)r.Q#!r)1$
A,"#1" F<F 1FF F<F
A>u,)r F<F F<F 99<@
CQ,/)1" &GF 'F<F 6F<F
C,) 9<F 19<F '1<F
G"/)1#-)?$",)BM N@<6 F<1 F<F
L#*0- FG@ F<F 11<&
M)#>"-) N<F '<F 7(<F
M)r%)r#-) F<6 N1 F<(
N)r)-P) 1G& F<F 11<&
P)/1) 1<7 1&<6 6<@
P)p)O) F<( F<1 N<'
P/)1)- #$/) F<N F<& &'<N
U5) -"%r) F<' F<1 17<9
[ -e usan al 2C4gN
GASTOS DE ENERGIA DE ACUERDO A ACTIVIDAD R SE=O
ACTIVIDAD MU9ER +
I,)/ AS%AQr)
HOMBRE +
I,)/ AS I%AQr)
Dur*#"-! /,/ /,8 I /,1 ,JC
MuO L#%"r)3 manejo de auto,
laboratorio, mecanografa, coser
y planchar
1,8 /,1 I 1.5
/,/C
L#%"r)+ ,aminar, carpintera,
mecanica, lavado de ropa
2,J 1,5C4,J
1,8C
M!"r)!)+ fregar pisos,
ciclismo, tenis, baile
5,J 5,8CK,4
4,8C
P"$)!)+ alba9il, natacin, f>tbol,
bsquetbol.
/8,8 K,5C/1,8
6,8C
:irma del alumno :irma del profesor
46