Manual Prácticas Parasitología I

BENMERITA UNIVERSIDAD AUTNOMA
DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS
LCENCATURA EN QUMCO FARMACOBLOGO
AREA: ANLSS CLNCOS
ASGNATURA:
LABORATORIO DE PARASITOLOGA I
MANUAL
MC. MARCELA TORRES Y SOTO
MNERVA: PRMAVERA 2014
REGLAMENTO Y MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO DE
PARASITOLOGA I
El alumno deber:
1- Siempre presentarse con bata blanca, incluso si en la sesin slo se llevan a
cabo seminarios y o exmenes.
2- Cumplir con las actividades y o tareas solicitadas por el profesor.
3- Asistir puntualmente a las sesiones, slo tendr 10 minutos de tolerancia, una
vez que se pase lista, si llega despus, se considerar como falta.
4- Colocar fuera de las mesas de trabajo, mochilas, suteres, chamarras u otros
objetos que no requiera para la realizacin de la prctica.
5- Traer el material biolgico o de otro tipo solicitado por el profesor.
6- Siempre traer guantes, cubreboca y perilla para las pipetas.
7- Siempre traer jabn y papel sanitario para el aseo de las manos y para la
limpieza del material de vidrio y de las mesas de trabajo.
8- Solicitar el material que requiere para las prcticas por medio de un vale, ya sea
a el profesor o a la persona encargada del rea del material y reactivos.
9- Manejar con mucho cuidado el material, las soluciones o reactivos.
10- Manejar con mucho cuidado las muestras fecales ya que son potencialmente
infectantes.
11- Siempre pipetear las soluciones, con la perilla correspondiente y nunca con la
boca.
12- Dejar los frascos de las soluciones en el lugar de donde los tom, despus de su
uso.
13- No desechar soluciones de colorantes, papeles, muestras biolgicas slidas, ni
material de vidrio roto (portaobjetos, cubreobjetos, tubos) en las tarjas.
14- No dejar pipetas contaminadas directamente sobre las mesas.
15- Colocar el material contaminado, as como las muestras fecales, en las bolsas o
recipientes correspondientes, de acuerdo a la NOM-087-SEMARNAT-SSA1-
2002, Proteccin ambiental-Salud ambiental- Residuos peligrosos biolgicos
infecciosos- Clasificacin y especificaciones de manejo. Y de acuerdo a lo
indicado por el profesor.
16- Manejar y cuidar los microscopios de acuerdo a la informacin proporcionada al
inicio del curso.
17- Anotarse en la libreta que est al lado del microscopio que utilice, y en su caso
reportar cualquier anomala o desperfecto hallado en el microscopio antes o
durante su manejo.
18- Limpiar el aceite de inmersin a los objetivos del microscopio, de acuerdo a las
indicaciones dadas por el profesor.
19- Al trmino de la prctica, dejar desconectados los microscopios, cubrir el
microscopio con su correspondiente funda y dejar cerrada la caja con llave.
20- Al trmino de la prctica, dejar limpias y desinfectadas las mesas, libres de
papeles, material biolgico o de otro tipo.
21- Al concluir la prctica, entregar el material que emple segn las indicaciones
de el profesor, as como solicitar la devolucin del vale.
22- En caso de romper algn material, deber reponerlo a la brevedad posible, para
lo cual se le retendr el vale.
23- En caso de algn incidente o accidente, deber informarle a el profesor, para
que se tomen las medidas pertinentes.
24- Antes de retirarse del laboratorio, checar que no se le olvide algo, ya que el
profesor no se har responsable por manuales, celulares, libros, batas, etc,
olvidados.
NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002
Elaborada en forma conjunta por la Secretaria de Salud y de Medio Ambiente y
Recursos Naturales, la norma oficial mexicana NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002,
Proteccin Ambiental - Salud Ambiental - Residuos Peligrosos Biolgico - nfecciosos
Clasificacin y Especificaciones de Manejo, fue publicada en el Diario Oficial de la
Federacin el 17 de Febrero del 2003 y sustituye a la NOM-087-ECOL-199.
Los RPB se consideran como residuos peligrosos y como tal se debe establecer un
plan integral para su manejo, almacenamiento, transporte, tratamiento y disposicin
final.
PRINCIPALES MODIFICACIONES EFECTUADAS EN LA NOM-087-SEMARNAT-
SSA1-2002!
. Criterios para considerar un residuo como RPB
. Nueva clasificacin de los RPB
. Cantidad de sangre o fluido corporal en los RPB
V. Niveles de los establecimientos generadores
V. Periodo de almacenamiento temporal de los RPB en los establecimientos
generadores.
V. Atribucin a la Secretaria de Salud, para la vigilancia de la norma.
I! Los lugares que ofrecen atencin mdica y los centros de investigacin, son
considerados establecimientos generadores de materiales contaminados por
agentes biolgico-infecciosos. Estos desechos se denominan R"#$%&'#
P"($)*'#'# B$'(+)$,'-I-.",,$'#'# /RPBI0#12 su manejo y disposicin
inadecuados, representa un riesgo para la salud del personal que labora en estos
sitios, as como para la salud de la poblacin aledaa, ocasionando adems, el
deterioro del medio ambiente. Los microorganismos patgenos, virus, parsitos y
priones (estructuras proteicas) son ejemplos de agentes biolgicos-infecciosos.
Para que un microorganismo sea capaz de producir enfermedad, es decir, que
sea un A)"-3" B$'(+)$,'-I-.",,$'#', debe ocurrir lo siguiente: tener una
concentracin suficiente (inculo), estar en un ambiente propicio (supervivencia),
en presencia de una va de entrada en un hospedero susceptible.
II! En la Nueva clasificacin, los RPBs son:
1! La sangre y sus componentes 4-$,56"-3" en estado lquido.
2! Los cultivos de agentes biolgico-infecciosos generados en:
a. Los procedimientos de diagnstico e investigacin.
b. La produccin y el control de agentes biolgico-infecciosos.
7! Los utensilios %"#",859("# usados para contener, transferir, inocular y
mezclar cultivos de agentes biolgico-infecciosos.
:! Los tejidos, rganos y partes que se extirpan o remueven durante las
autopsias, las cirugas o algn otro tipo de intervencin quirrgica ;&" -'
"#3<- ,'-#"*=5%'# "- #'(&,$+- %" .'*6'(.
! Las muestras biolgicas empleadas en los anlisis clnicos /">,"?3' (5#
6&"#3*5# %" '*$-5 @ %" ">,*"6"-3'1, y aquellas usadas en los anlisis
patolgicos.
A! En los centros de investigacin, los cadveres y las partes de los animales
que fueron inoculados con 5)"-3"# "-3"*' ?53+)"-'#!
7! Los residuos no anatmicos:
5! Los recipientes %"#",859("# ;&" ,'-3"-)5- #5-)*" (B;&$%5!
9! Los materiales %"#",859("# que contengan fluidos y secreciones
corporales, provenientes de los pacientes de quienes se sospechen
o exista un diagnstico de una enfermedad infecto-contagiosa
como la tuberculosis.
,! Los materiales de curacin "6?5?5%'# de sangre lquida o de
cualquier otra secrecin o lquido corporal.
%! Los materiales absorbentes utilizados en las jaulas de los animales
que hayan sido expuestos a 5)"-3"# "-3"*' ?53+)"-'#!
8! Los materiales punzo cortantes desechables como las hojas de bistur, las
agujas de sutura y los estriles de catter. El 653"*$5( %" =$%*$' %"
(59'*53'*$', que se haya roto al momento de ser manipulado, se deber
%"#$-.",35* ' "#3"*$($C5* @ @5 -' #" ,'-#$%"*5*D ,'6' RPBI0#2 ?'* ('
;&" #" ?'%*D %$#?'-"* ?'#3"*$'*6"-3" ,'6' *"#$%&' 6&-$,$?5(!
La disposicin general para el desecho de RPBs en el laboratorio queda de la
siguiente manera:
TIPO DE
RESIDUO
ESTADO
FISICO
ENVASADO COLOR
Sangre Lquidos
Recipientes
hermticos
Rojo
Cultivos y
cepas de
agentes
infecciosos
Slidos
Bolsas de
polietileno
Rojo
Patolgicos Slidos
Bolsas de
polietileno
Amarillo
Residuos no
anatmicos
Slidos
Bolsas de
polietileno
Rojo
Objetos
punzocortantes
Slidos
Recipientes
rgidos
polipropileno
Rojo
III! Para que un material de curacin se considere como RPBs, debe ser
desechable y estar )'3"5-%'2 ,8'**"5-%' ' "#,&**$"-%' sangre o cualquier
lquido corporal contemplado en la norma.
IV! N$="("# %" ('# E#359(",$6$"-3'# G"-"*5%'*"#
NIVEL I NIVEL II NIVEL III
Establecimientos de
atencin mdica hasta
con 5 camas e insti-
tuciones de investiga-
cin con excepcin de
los sealados en el
Nivel .
Unidades hospitalarias
de 6 hasta 60 camas.
de ms de 60 camas.
Laboratorios clnicos y
bancos de sangre que
realicen anlisis de 1 a
50 muestras al da.
realicen anlisis de 51
a 200 muestras al da.
Centros de produccin
e investigacin experi-
mental en enfermeda-
des infecciosas.
psiquitricas.
Bioterios que se dedi-
quen a la investigacin
con agentes biolgico-
infecciosos.
realicen anlisis a ms
de 200 muestras al
da.
Centros de toma de
muestras para anlisis
clnicos.
Establecimientos que
generen de 25 a 100
kilogramos al mes de
RPBs.
Establecimientos que
generen ms de 100
kilogramos al mes de
RPBs
V! P"*B'%' %" 5(65,"-56$"-3' 3"6?'*5( %" ('# RPBI0# "- ('# "#359(",$6$"-3'#
)"-"*5%'*"#!
NIVEL I NIVEL II NIVEL III
30 das mximos de
almacenamiento tem-
poral.
15 das mximos de
almacenamiento tem-
poral.
7 das mximos de
almacenamiento tem-
poral.
No requiere de rea
especfica para el
almacenamiento tem-
poral.
Si requiere de rea
especfica para el
almacenamiento tem-
poral.
Si requiere de rea
especfica para el
almacenamiento tem-
poral.
Se podrn ubicar los
contenedores espec-
ficos para los RPBs*
en el lugar ms
apropiado dentro de
sus instalaciones, de
manera tal que no
obstruyan las vas de
acceso.
Deber cumplir con las
especificaciones esta-
blecidas en la NOM-
087-SEMARNAT-
SSA1-2002, para el
rea de almacena-
miento temporal.
Deber cumplir con las
especificaciones esta-
blecidas en la NOM-
087-SEMARNAT-
SSA1-2002, para el
rea de almacena-
miento temporal.
*Los contenedores pueden ser plsticos o metlicos, con sealamiento del smbolo universal de
RPBs y no mezclarlos con la basura municipal.
VI! A3*$9&,$+- 5 (5 S",*"35*$5 %" S5(&%! Corresponde a la #",*"35*$5 %" #5(&%
regular y vigilar el equipamiento, instalacin y funcionamiento de los servicios
mdicos que son los principales generadores de los RPBs, por ello participa
complementariamente con la SEMARNAT en la regulacin y vigilancia de la
norma, para lo cual se estableci en el cuerpo de la misma, la disposicin de
crear las bases de colaboracin que firmarn ambas dependencias y que sern
publicadas en el Diario Oficial de la Federacin, en las que se especificarn los
puntos de la norma que vigilarn cada una de ellas.
PRECTICAS DE LABORATORIO.
Prctica No 1: Examen fsico y qumico de las heces.
Prctica No 2: Mtodo coproparasitoscpico (CPS) directo o en fresco.
Prctica No 3: Mtodo CPS de Faust y uso del conservador PAF.
Prctica No 4: Mtodo CPS de Sheater
Prctica No 5: Mtodo CPS de MFC
Prctica No 6: Amiba en fresco
Prctica No 7: Observacin de protozoarios de tubo digestivo y vas genitourinarias
Prctica No 8: Observacin de protozoarios tisulares.
Prctica No 9: Realizacin de tcnicas de tincin, cultivos y mtodos inmunolgicos.
SEMINARIO I
ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD
Conjunto de acciones planificadas y sistematizadas necesarias para asegurar la
reproducibilidad, especificidad, sensibilidad y precisin de una prueba, dentro del
laboratorio.
EVALUACION INTERNA DE LA CALIDAD
1! FASE PREANALITICA
a) Solicitud de estudios
b) Programa de bioseguridad
c) nformacin y preparacin del paciente (indicaciones de ventanilla)
d) Obtencin directa del producto biolgico
e) Recoleccin, transporte y conservacin del producto biolgico.
f) Recepcin del producto biolgico (criterios de aceptacin o rechazo)
g) Revisin de reactivos (colorantes, sulfato de zinc, etc.)
h) Limpieza de equipos e instrumentos
i) Graficas de control de calidad Levey-Jennings (inmunoparasitologa)
j) Registro de temperaturas de equipos (refrigeradores y estufas)
k) Limpieza de material
2!- FASE ANALITICA
a) Preparacin, almacenamiento y registro de reactivos (bitcoras)
b) Verificacin de instalaciones, equipo y material
c) Realizacin de la prueba (manual de procedimientos)
d) Lectura de la prueba
e) Evaluacin interna de la calidad
f) Almacenamiento de productos biolgicos (bitcoras)
7!- FASE POST-ANALITICA
a) Reporte de resultados( nombre y fase del parasito) en bitcoras de
control interno y en el sistema
b) Confirmacin de los resultados
c) Confidencialidad
d) nformes estadsticos peridicos
e) Archivo de informe
f) Manejo de residuos qumicos (RQ) (manual de procedimientos)
EVALUACION EFTERNA DE LA CALIDAD
a) Programa de evaluacin externa de la calidad
b) Formacin de grupos pares
MATERIAL DE REFERENCIA
Como parte de la evaluacin interna de la calidad en un laboratorio de parasitologa
diagnstica debe de contarse con material de referencia, este corresponde a la
existencia en el lab, de las diferentes fases de los protozoarios, trofozotos, quistes y
ooquistes y de los helmintos, huevos, larvas y adultos, parsitos del hombre, que
puedan ser consultados y comparados (referidos) para emitir un resultado. Tambin
utilizados para la docencia. Este material consiste en:
1) Concentrados de parsitos en forma mltiple (parasiteca)
2) Concentrados de parsitos en forma individual (parasiteca)
3) Laminillas coloreadas semi-permanentes
4) Laminillas coloreadas permanentes
5) Ejemplares microscpicos
6) Diapositivas, fotografas y atlas de parasitologa
PRECTICA NG 1
EFAMEN FSICO Y QUMICO DE LAS HECES!
OBIETIVOS.- Conocer la importancia de realizar el examen fsico-qumico de las
heces, as como el aprender a hacer cada una de las determinaciones.
Comprender la importancia de la informacin que nos proporciona este examen tanto a
nivel mdico general como a nivel parasitolgico.
INTRODUCCIN!- El examen de las heces o ,'?*'(')B5 comprende la observacin
macroscpica, la observacin microscpica y el anlisis qumico.
L5 '9#"*=5,$+- 65,*'#,+?$,5 determina las caractersticas fsicas y la presencia de
parsitos visibles a simple vista.
L5 '9#"*=5,$+- 6$,*'#,+?$,5 comprende el estudio microbiolgico (bacteriolgico,
parasitolgico, virolgico y micolgico).
E( 5-D($#$# ;&B6$,' consiste en la bsqueda de compuestos qumicos tales como;
lpidos, carbohidratos y sangre oculta entre otros.
Estos tres estudios de las heces fecales en su conjunto determinan el estado funcional
e integral del aparato digestivo de un individuo.
En el laboratorio clnico es comn el que se realicen mtodos coproparasitoscpicos,
olvidndose de que previamente debe realizarse un estudio fsico, el cual proporciona
informacin valiosa para orientar hacia qu mtodo coproparasitoscpico es el ideal a
emplear en funcin de lo que se espera hallar de un parsito y de las caractersticas
fsicas de las heces.
Actualmente ste estudio sumado al examen qumico, se ha retomado del pasado y se
le ha considerado relevante para el diagnstico diferencial de muchas enfermedades
tanto infecciosas como no infecciosas.
PRIMERA PARTE
EFAMEN FSICO2 MACROSCPICO U ORGANOLPTICO DE LA MATERIA
FECAL
A la observacin macroscpica de la materia fecal, que es rpida y fcil de hacer,
?'%"6'# #59"* %"#%" "( ?&-3' %" =$#35 %" (5 ?5*5#$3'(')B5, lo siguiente:
1. El tiempo crtico del anlisis
2. El posible agente etiolgico
3. La posible localizacin del dao
4. El estadio del parsito a hallar a nivel microscpico
5. El mtodo coproparasitoscpico a emplear de acuerdo al estadio del parsito
6. El agente etiolgico cuando ste es macroscpico.
CARACTERSTICAS FSICAS NORMALES DE LAS HECES.
La ,'-#$#3"-,$5 debe ser blanda con .'*65 cilndrica y replegada sobre s misma
varias veces, de tal manera que al ser emitidas las heces, stas conserven su forma.
La #&?"*.$,$" debe ser rugosa y opaca.
El ,'('* vara del castao, caf o marrn claro al obscuro.
El '('* aunque es desagradable, debe ser soportable (caracterstico).
N' %"9" ?*"#"-35* moco, sangre, pus, parsitos macroscpicos ni restos burdos de
alimentos.
La ,5-3$%5% de materia fecal que un adulto sano elimina por da es variable en funcin
de la dieta, pero el rango que se considera normal es de 80 a 250 gr repartidas en una
a dos defecaciones por da.
L5 ,'-#$#3"-,$5 de las heces est en funcin de la cantidad de agua, lo que a su vez
determina el estadio de los parsitos a hallar, por lo que:
a) "- 8","# (B;&$%5# encontraremos de preferencia trofozotos de protozoarios y larvas
de helmintos.
b) "- 8","# ?5#3'#5# (semiblandas) encontraremos aunque en menor proporcin,
trofozotos y algunos quistes de protozoarios y tambin larvas de helmintos.
c) "- 8","# 9(5-%5# @ %&*5# se pueden encontrar quistes de protozoarios y
huevecillos de helmintos, que son formas de resistencia de los parsitos.
Como puede observarse a medida que las heces pierden agua, la posibilidad de hallar
sobretodo trofozoitos, disminuye, por lo que la consistencia de las heces determina el
3$"6?' ,*B3$,' %"( 5-D($#$#, que es el tiempo que transcurre desde que la materia fecal
es emitida hasta el momento de su anlisis, que si se respeta, esto asegura el hallazgo
sobretodo de trofozotos, tenindose que:
Para heces lquidas y pastosas el tiempo crtico del anlisis es de 30 min.
Para heces blandas el tiempo crtico del anlisis es de 24 hr.
Para heces duras el tiempo crtico del anlisis es de 48 hr.
Despus de ese tiempo las formas parsitas se destruyen (trofozoitos) o se deforman
(quistes, huevos y larvas).
REQUERIMIENTOS
Una muestra fecal recin emitida, libre de contaminantes y recolectada en un frasco
limpio, seco y con tapa hermtica.
Una lupa y un abatelengua. Cubreboca, guantes desechables y cajas de Petri.
PROCEDIMIENTOJ
a) con los brazos extendidos y colocando el frasco en la mesa, destpelo poco a
poco, sobretodo si est lleno, para evitar que el contenido salga disparado
b) observe a simple vista la muestra fecal y anote el color y la forma que tenga,
tambin anote cmo es la superficie de la muestra.
c) observe tambin si en la superficie hay sangre, moco, pus, restos burdos de
alimentos y/o parsitos macroscpicos.
d) con un abatelengua detecte la consistencia y removiendo la materia fecal busque
sangre, moco, restos burdos de alimentos y/o parsitos macroscpicos, anote los
hallazgos. De preferencia coloque la muestra en cajas de Petri, para la bsqueda
de los parsitos macroscpicos, ayudndose para ello con una lupa.
FORMA DE REPORTAR:
Nombre del mdico que solicit el estudio.
Nombre del paciente.
Sexo y edad del paciente.
Nombre del mtodo realizado.
Nmero de muestra analizada y fecha de emisin y de anlisis.
C5-3$%5% (solo si es toda la emitida en 24 hr).
F'*65J la hallada, siempre y cuando la condicin de la muestra lo permita.
S&?"*.$,$"J la observada.
C'('*J el hallado, si es el normal se puede reportar como "caracterstico.
C'-#$#3"-,$5J la observada.
M','J si no hay se reporta negativo, si lo hay se reporta como positivo, y
adems debe indicarse si se hall mezclado o en la superficie de las heces, y en
este ltimo si fue opaco o brillante, en forma de hilos o corpsculos. La cantidad
se indica con cruces.
S5-)*"J si no hay se reporta negativo, si hay se reporta positivo, pero debe
indicarse si fue sangre fresca o digerida, la cantidad se indica con cruces.
P&#J si no hay se reporta negativo, si hay se reporta como positivo. La cantidad
se reporta con cruces.
P5*D#$3'# 65,*'#,+?$,'#J si no hay se reporta negativo, si hay se reporta
como positivo y debe indicarse el estadio y el nombre genrico y si es posible el
nombre de la especie del parsito, as como la cantidad.
R"#3'# 9&*%'# %" 5($6"-3'#J si no hay se reporta negativo, si hay se reporta
positivo y hay que indicar el tipo de alimento encontrado.
O3*'# 85((5C)'#J en los nios es comn pero anormal, encontrar objetos tales
como monedas y canicas entre otros, se puede hallar restos de insectos. Cuando
la muestra no es recolectada adecuadamente y est contaminada, las
caractersticas fsicas se alteran, y esto debe considerarse para el reporte. Todo
hallazgo anormal debe reportarse.
SEGUNDA PARTE DE LA PRECTICA
EFAMEN QUMICO DE LAS HECES
Comprende la determinacin de diversos componentes:
1- pH 5- Moco fecal o recuento de
2- Sangre oculta leucocitos fecales
3- Azcares reductores
4- Grasa fecal }
REQUERIMIENTOS
Una muestra fecal libre de contaminantes y recolectada en un frasco limpio, seco
y con tapa hermtica.
Papel indicador Merck, para medir el pH
Tabletas de Clinitest, para la determinacin de azcares reductores
Guayacol, bencidina, Hematest, o el reactivo del mtodo con el que se cuente
para la determinacin de sangre oculta.
Solucin salina fisiolgica, pelcula radiogrfica o de gelatina. Para determinar
actividad trptica. O los reactivos del mtodo con el que se cuente.
Colorante Sudn o Rojo Sudn, o reactivo de Saathoff para determinacin de
grasas.
Solucin de colorante azul de metileno o bien de Wright, para el recuento de
leucocitos
Agua destilada
Etanol al 95%
Etanol al 96%
cido actico glacial
Sulfato de azul de Nilo al 1%
cido actico glacial al 36%
Tubos de ensaye
Pipetas volumtricas
Portaobjetos
Cubreobjetos
Abatelenguas
Aceite de inmersin
Gradilla
Microscopio ptico compuesto
PROCEDIMIENTOJ
Siga las instrucciones para cada mtodo de acuerdo a la determinacin que va a
efectuar.
?H
Se examina con el papel indicador Merck que seala el pH aproximado. Las heces
normales son neutras o ligeramente alcalinas entre 6.8 y 7.2, pero la reaccin depende
de mltiples factores, dietticos y endgenos, por lo que se pueden presentar
variaciones, tanto en la salud como en la enfermedad.
La medicin se hace impregnando el papel indicador con las heces con ayuda de una
varilla de vidrio.
SANGRE OCULTA
Para este anlisis es importantsimo que el paciente durante los 2 3 das anteriores a
la toma de muestra se someta a un rgimen riguroso ("blanco), sin carne, pescados,
embutidos, lentejas, espinacas, pltanos, etc., es decir alimentos ricos en peroxidasas.
Tampoco deber tomar medicamentos que contengan hierro o hemoglobina, o que
puedan provocar prdidas sanguneas como salicilatos o esteroides. La alimentacin
permitida consiste en: huevos, papas, cebolla, arroz, garbanzos, pan y leche.
La mayora de las pruebas para detectar hemorragias ocultas en heces se basan en la
determinacin de peroxidasas como indicativo del contenido de hemoglobina.
Para ste estudio se pueden encontrar los kits clsicos de guayacol y bencidina. Y hace
un par de aos, que ya se emplean nuevos kits por mtodos inmunocromatogrficos
para la deteccin de hemoglobina especfica humana, lo que evita en muchos casos los
falsos positivos que se dan en los mtodos tradicionales.
R"5,,$+- %" (5 9"-,$%$-5J
Sobre un papel de filtro se untan las heces, luego se ponen unas gotas de bencidina y
agua oxigenada de 10 volmenes. Si el resultado es (+), como resultado de la
presencia de peroxidasa, se formar un halo de color verde azulado en torno a la
muestra fecal.
DETERMINACIN DE GRASA EN HECESJ
Una persona normal digiere y reabsorbe casi toda la grasa de su dieta. Cuando la dieta
es normal, la grasa en heces constituye hasta un 20% de los slidos totales.
T<,-$,5 %" ,'('*5,$+- %" #&%D- III /,&5($353$=51J
Los lpidos se miden en forma de cidos grasos: (0 6.0 g/24h).
Se requiere materia colectada de 48 o 72 hr, con dieta previa de 100 g de grasa normal
por da, durante 5 6 das
Una pequea cantidad de muestra fecal es mezclada con 2 gotas de agua, 2 gotas de
etanol al 95% y 3 4 gotas de colorante de Sudan , esto aumenta el color amarillo
naranja retrctil de los glbulos de grasa para as identificar las grasas neutras.
Las grasas cidas y de jabn son detectadas por hidrlisis, mezclando la muestra fecal
con 2 3 gotas de Sudan y de 2 3 partes de cido actico glacial al 36 %, seguido
por un calentamiento a hervir por dos veces, antes de observarlo al microscopio.
Luego se coloca una pequea cantidad de la anterior mezcla en un portaobjetos, se
coloca el cubreobjetos cuidando que no se formen burbujas y se observa al
microscopio, la lectura se hace aplicando el siguiente criterio:
G*5#5# -"&3*5#J < de 50 glbulos de grasa por campo en 40X, se reporta como
normal.
G*5#5# D,$%5#J < 100 glbulos de grasa en 40X, se considera normal.
G*5#5# -"&3*5#: se observan como gotas de color naranja o rojo.
G*5#5# D,$%5#J se observan como escamas que se tien ligeramente, o cristales en
forma de agujas largas y finas, que no se tien.
I59'-"#J se observan como escamas o cristales que no se tien.
AKLCARES REDUCTORES
Las heces deben de ser recientes, no debe dejarse pasar ms de una hora desde que
son emitidas hasta que se realiza el examen.
Hay que diluir una parte de heces en dos partes de agua destilada, mezclar bien y
centrifugar a un nmero bajo de revoluciones (1 500 rpm). Se toman 15 gotas del
sobrenadante, se colocan en un tubo de vidrio y se le aaden dos gotas de HCl 1 N.
Luego se calienta para desdoblar la sacarosa.
Una vez que ha enfriado el lquido anterior, se aade una tableta de CLNTEST(Ames)
para azcares reductores y se deja disolver. A continuacin se compara con la escala
de colores que lleva el reactivo.
El resultado se da en gramos por litro. El resultado ser negativo si es inferior a 2.5 g/L.
Entre 2.5 y 5 es dudoso y ser positivo si es mayor de 5 g/L
CITOLOGIA DE MOCO FECAL O RECUENTO DE LEUCOCITOS FECALES
T<,-$,5 5C&( %" 6"3$("-' 56'*3$)&5%' (AMA)
Se toma una pequea porcin de la muestra (de preferencia del moco) y se realiza una
extensin en un portaobjetos.
Se le adiciona una gota del colorante AMA y se coloca el cubreobjetos, se deja reposar
5 min y se observa con objetivo 40X.
En caso de duda se repite la operacin, tomando moco de otra parte de la muestra.
Se realiza un conteo de 100 clulas y se informa el porcentaje de clulas observadas.
R"#&(35%'J
En caso de no encontrarse leucocitos se reporta como "no se observ celularidad.
En caso de encontrarse un nmero escaso de leucocitos polimorfonucleares, se informa
como "escasos polimorfonucleares.
En caso de encontrarse las clulas necesarias para hacer el conteo, se reporta de la
siguiente manera:
Polimorfonucleares: ..... %
Mononucleares: ..... %
Si existe duda sobre la presencia de eosinfilos en la muestra, se realiza un extendido
del moco fecal, se deja secar y se realiza la tincin especial de Hansel, y se realiza el
conteo de 100 clulas, reportando el porcentaje de eosinfilos hallado.
V5('* %" *"."*"-,$5J si hay mayor cantidad de leucocitos, de 10 20 por campo,
principalmente polimorfonucleares, es indicativo de pus y la infeccin es causada por
bacterias, si hay mayor cantidad de mononucleares la infeccin es de tipo viral. Menos
de 10 leucocitos por campo es sugestivo de amibiasis.
PRECTICA NG 2
MTODO COPROPARASITOSCPICO DIRECTO.
OBIETIVOSJ Que el alumno aprenda a realizar un mtodo coproparasitoscpico (CPS)
cualitativo, que conozca las ventajas y desventajas del mismo y que empiece a
familiarizarse microscpicamente con las diferentes estructuras que contienen las
heces, tanto parasitarias como de todo tipo.
INTRODUCCIN!
Esta tcnica parasitoscpica llamada tambin CPS en fresco, es la ms antigua que se
conoce, existen datos acerca de que Anton Van Leewenhoek a mediados del siglo XV,
fue el primero en realizarla al observar sus propias heces y hallar trofozotos del
protozoario Giardia lamblia .
Es uno de los mtodos CPS ms utilizados en cualquier laboratorio de anlisis clnicos,
debido a que es sencillo y rpido de realizar, adems de que es muy econmico por
requerir de poco material y de soluciones en pequea cantidad, usuales en el
laboratorio.
FUNDAMENTO!
Este mtodo se basa en la utilizacin de una solucin salina isotnica para mantener
vivos a los trofozotos de protozoarios. As como en la utilizacin de una solucin de
yodo (lugol) para colorear a los quistes y ooquistes de protozoarios; huevos y larvas de
helmintos, (el lugol destruye a los trofozotos).
REQUERIMIENTOS!
Aplicadores de madera o palillos.
Portaobjetos de 25X76 mm.
Cubreobjetos de 22X22 mm.
Microscopio compuesto ptico.
Solucin salina isotnica.
Solucin de yodo o lugol parasitolgico.
Una muestra fecal recin emitida.
PROCEDIMIENTO!
1- En un portaobjetos colocar una gota de solucin salina isotnica.
2- Con el aplicador de madera tomar una muestra fecal de 1 4 mg, de preferencia de
donde haya moco y sangre.
3- Mezclar con cuidado haciendo una suspensin y no un frote, con ayuda de un
palillo o la punta del cubreobjetos
4- Quitar de la suspensin fibras y otros fragmentos grandes.
5- Poner con cuidado el cubreobjetos, evitando la formacin de burbujas.
6- Observar al microscopio primero con el objetivo seco dbil y luego con ms cuidado
con el objetivo seco fuerte cuando localice formas parasitarias.
7- La observacin debe hacerse de manera sistemtica abarcando toda la superficie
del cubreobjetos, incluso los bordes del mismo.
8- En otro portaobjetos colocar una gota de lugol
9- Luego colocar una muestra de heces de 1 4 mg, con el aplicador de madera.
10- Repetir los pasos del 3 al 8.
11- Reportar lo observado
MTODO CPS DIRECTO
MEDIDAS DE SEGURIDAD.
El material biolgico con el que se trabaja, es potencialmente infectante, por lo que se
recomienda utilizar guantes, cubreboca y abundante detergente para el lavado de
manos, material y rea de trabajo.
INDICACIONES Y LIMITACIONES.
Este mtodo est indicado para la deteccin de trofozotos de protozoarios en heces
que cubran los requisitos para ello.
La muestra fecal empleada es tan pequea que resulta poco representativa.
A la observacin microscpica se observan demasiados detritos, lo cual puede
enmascarar a las formas parasitarias.
PRECTICA NG 7
MTODO COPROPARASITOSCPICO DE FAUST
OBIETIVOSJ Aprender a realizar un mtodo coproparasitoscpico cualitativo de
concentracin por flotacin.
Conocer las ventajas y utilidad por las que este mtodo se emplea de rutina en la
mayora de los laboratorios clnicos tanto privados como pblicos.
Realizar la bsqueda e identificacin de formas parsitas en las heces.
Conocer el manejo y la utilidad del conservador qumico PAF en el trabajo rutinario.
INTRODUCCIN!
Este mtodo coproparasitoscpico (CPS) fue descrito en 1938 basndose en los
siguientes antecedentes:
En 1906 Bass la describi originalmente como una tcnica de flotacin con
salmuera, para la recuperacin de huevos de helmintos.
En 1910 el mismo Bass introdujo la centrifugacin.
En 1924 Lane ide un refinamiento de la tcnica, que consisti en realizar un
lavado del sedimento antes de centrifugar con la salmuera.
En 1930 Faust y cols. realizaron pruebas con diferentes soluciones, y la solucin
de sulfato de zinc con densidad de 1.18 Baum, fue la que result ser un medio
adecuado para la flotacin de quistes de protozoarios y huevos de helmintos.
Es uno de los mtodos CPS ms utilizados y preferidos en cualquier laboratorio de
anlisis clnicos, debido a las ventajas que presenta.
Cabe aclarar que debido a que cada laboratorio y cada analista introducen variaciones
a la tcnica, en la actualidad se ha buscado estandarizarla, para cumplir con las
exigencias de calidad y evaluaciones externas.
FUNDAMENTO!
Este mtodo se basa en una diferencia de densidades entre la solucin que se emplea
y la de las formas parasitarias, es decir, se basa en la utilizacin de una solucin de
sulfato de zinc con densidad de 1.18 Baum que por ser mayor a la densidad de las
estructuras parasitarias (1.05 1.15), ocasiona que stas floten.
Adems, la solucin de sulfato de zinc no produce deformacin de las formas
parasitarias y el proceso de flotacin se agiliza con la centrifugacin.
MATERIAL2 REACTIVOS Y EQUIPO
Muestra fecal recolectada adecuadamente
Aplicadores de madera
Frasco de vidrio de 100 ml
Abatelenguas o varillas de vidrio
Tubos de ensaye de vidrio de 13 X 100 mm
Embudo de 7.5 cm de dimetro
Coladerita de 3.5 a 5 cm de dimetro
Asa de alambre o microbiolgica, terminada en crculo de 3 5 mm de dimetro,
formando ngulo recto con la varilla.
Mechero Bunsen
Gradilla
Solucin de sulfato de zinc con densidad de 1.18 Baum (al 33% en agua)
Solucin de yodo o lugol parasitolgico.
Agua destilada
Centrfuga.
TCNICA /PROCEDIMIENTO1!
1- En un frasco de vidrio colocar aproximadamente un gramo de materia fecal y
agregarle 10 ml de agua destilada. Mezclar con el abatelenguas o varilla de vidrio a
hacer una suspensin homognea.
2- Filtrar la suspensin a travs de la coladerita colocada en el embudo y stas a su
vez colocadas en el tubo de ensayo, teniendo cuidado de no llenar completamente
el tubo, debe dejarse siempre aproximadamente un cm del tubo sin llenar.
3- Centrifugar el tubo a 2,000 2,500 rpm durante 1 minuto.
4- Decantar el sobrenadante en un frasco recolector ex profeso.
5- Resuspender el sedimento con 2 3 ml de agua destilada, ayudndose con un
aplicador de madera y se completa el volumen con ms agua, dejando un cm del
tubo sin llenar, se mezcla nuevamente con el aplicador de madera.
6- Centrifugar nuevamente el tubo a 2,000 2,500 rpm durante 1 minuto.
7- Repetir los pasos 4 6, hasta que el sobrenadante se observe limpio, -' ms de
dos veces.
8- Decantar el sobrenadante en un frasco recolector ex profeso.
9- Resuspender el sedimento con 2 3 ml de solucin de sulfato de zinc, ayudndose
con un aplicador de madera y se completa el volumen con ms solucin de sulfato
de zinc, dejando un cm del tubo sin llenar, se mezcla nuevamente con el aplicador
de madera.
10-Centrifugar nuevamente el tubo a 2,000 2,500 rpm durante 2 minutos.
11- Sacar el tubo de la centrfuga con cuidado sin agitarlo y colocarlo en la gradilla.
12-Quemar el asa con el mechero y dejar enfriar.
13-Colocar el anillo del asa sobre la pelcula del sobrenadante y recolectar una
muestra.
14-Depositar la muestra en una gota de lugol previamente colocada en el
portaobjetos, lavando el anillo del asa en el lugol.
15-Tomar otras dos asadas de la pelcula del sobrenadante y repetir el paso 14.
16-Mezclar con la punta del cubreobjetos y cubrir la preparacin con el mismo,
cuidando que no se formen burbujas.
17-Observar la preparacin primero con el objetivo 10X y luego con ms cuidado con
el objetivo 40 45X.
18-La observacin debe hacerse de manera sistemtica abarcando toda la superficie
del cubreobjetos, incluso los bordes del mismo.
19-Reportar lo observado
FAUST
VENTAIAS Y DESVENTAIAS
V"-35M5#
a- Es sencillo y fcil de realizar.
b- No se invierte mucho tiempo para su realizacin.
c- Es relativamente econmico por requerir de reactivos no costosos, material y
equipo con el que generalmente cuenta el laboratorio.
d- Hace una buena concentracin de las estructuras parasitarias en la superficie del
sobrenadante debido al proceso flotacin centrifugacin.
e- Y algo muy importante es que se recuperan la mayora de las estructuras
parasitarias tales como; quistes y ooquistes de protozoarios, larvas y huevecillos de
helmintos.
D"#="-35M5#
a. Los huevos de helmintos como Taenia sp, Ascaris lumbricoides no fertilizados y
de trematodos como Fasciola hepatica y Paragonimus mexicanus, as como los
quistes de Balantidium coli, por ser pesados tienden a sedimentar, por lo que
ste mtodo no los recupera.
b. No es posible recuperar trofozotos de protozoarios, ya que se destruyen por la
concentracin del sulfato y por el proceso de centrifugacin.
PRECAUCONES
La solucin de sulfato de zinc debe prepararse cada tercer da o bien checar
peridicamente la densidad, segn el volumen de trabajo diario.
La toma de muestra de la superficie del sobrenadante debe hacerse en seguida
de la centrifugacin, ya que despus de una hora se pueden sedimentar y/o
deformar las estructuras parasitarias.
El material biolgico con el que se trabaja, es potencialmente infectante, por lo
que se recomienda utilizar guantes, cubreboca y abundante detergente para el
lavado de manos, material y rea de trabajo (en ste caso usar desinfectantes
como el benzal).
PRACTICA NO! :
MTODO COPROPARASITOSCPICO DE FAUST Y USO DEL
CONSERVADOR PAF
INTRODUCCIN!
Cuando se tiene un volumen de trabajo diario grande, o bien se realizan muestreos a
gran escala, ocasiona que no se tenga tiempo suficiente para procesar todas las
muestras y se corre el riesgo de que se deformen o destruyan algunas estructuras
parasitarias.
Lo mismo sucede cuando el laboratorio por la distancia no es accesible para las
personas.
Por ello es que surgi la necesidad del uso de ('# ,'-#"*=5%'*"# ' ?*"#"*=5%'*"#
;&B6$,'# ya sea una sustancia qumica o una mezcla de stas, que contribuyen a
prolongar el tiempo crtico del anlisis de das a meses, dependiendo de la sustancia
qumica y los estadios de los parsitos a conservar.
Uno de los conservadores qumicos que ms se emplea en el trabajo rutinario de
Parasitologa es el PAF porque presenta las siguientes caractersticas:
N'69*" ,'64- C'6?'-"-3"# E#35%$'# %" ('#
?5*D#$3'# ;&"
,'-#"*=5
T$?' %" 6&"#3*5 %"
8","# ?5*5 (5 ;&"
#" *",'6$"-%5
PAF (fenol-alcohol-
formol)
Fenol, solucin
salina isotnica,
formol, alcohol
etlico al 95% y agua
destilada
Trofozoitos, quistes,
ooquistes,
huevecillos y larvas
Para todo tipo de
consistencia de
heces
V!- FORMA DE RECOLECTAR LA MUESTRA
Debe usarse un frasco con las siguientes caractersticas; que sea de vidrio de
preferencia (o de plstico que previamente se haya demostrado que no reacciona con
el PAF), que sea de boca ancha, con tapa hermtica, y con capacidad de 100 - 150 ml.
Se recomiendan los frascos Gerber 2da etapa.
Se colocan 50 ml del conservador PAF en el frasco, se agrega la primera muestra de
heces del tamao de una haba y se mezcla perfectamente con ayuda de un
abatelenguas se tapa el frasco y se guarda en un lugar seco y lejos del sol.
La segunda muestra se recolecta de la misma manera y la tercera de la misma
manera. Todas las muestras se recolectan en el mismo frasco.
Las muestras pueden recolectarse en 3 das sucesivos o en das alternados de
preferencia.
El frasco guardado en las condiciones indicadas arriba, permite que el PAF conserve a
la muestra hasta por un mes o ms tiempo, dependiendo de las estructuras parasitarias
que contenga.
VI!- TCNICA /PROCEDIMIENTO1!
1. Mezclar con el abatelenguas o varilla de vidrio a hacer una suspensin
homognea, el contenido del frasco (PAF-materia fecal).
2. Filtrar la suspensin a travs de la coladerita colocada en el embudo y stas a
su vez colocadas en el tubo de ensayo, teniendo cuidado de no llenar
completamente el tubo, debe dejarse siempre aproximadamente un cm del tubo
sin llenar.
3. Centrifugar el tubo a 2,000-2,500 rpm durante 1 minuto.
4. Decantar el sobrenadante en un frasco recolector ex profeso.
5. Re suspender el sedimento con 2-3 ml de PAF, ayudndose con un aplicador de
madera y se completa el volumen con ms PAF, dejando un cm del tubo sin
llenar, se mezcla nuevamente con el aplicador de madera.
6. Centrifugar nuevamente el tubo a 2,000-2,500 rpm durante 1 minuto.
7. Repetir los pasos 4-6, hasta que el sobrenadante se observe limpio, -' ms de
dos veces.
8. Decantar el sobrenadante en un frasco recolector ex profeso.
9. Re suspender el sedimento con 2-3 ml de Sol'n de sulfato de zinc, ayudndose
con un aplicador de madera y se completa el volumen con ms sol'n de sulfato
de zinc, dejando un cm del tubo sin llenar, se mezcla nuevamente con el
aplicador de madera.
10. Centrifugar nuevamente el tubo a 2,000-2,500 rpm durante 2 minutos.
11. Sacar el tubo de la centrfuga con cuidado sin agitarlo y colocarlo en la gradilla.
12. Quemar el asa con el mechero y dejar enfriar.
13. Colocar el anillo del asa sobre la pelcula del sobrenadante y recolectar una
muestra.
14. Depositar la muestra en una gota de lugol previamente colocada en el
portaobjetos, lavando el anillo del asa en el lugol.
15. Tomar otras dos asadas de la pelcula del sobrenadante y repetir el paso 14.
16. Mezclar con la punta del cubreobjetos y cubrir la preparacin con el mismo,
17. Observar la preparacin primero con el objetivo 10X y luego con ms cuidado
con el objetivo 40-45X.
18. La observacin debe hacerse de manera sistemtica abarcando toda la
superficie del cubreobjetos, incluso los bordes del mismo.
19. Reportar lo observado.
V.- VENTAJAS Y DESVENTAJAS
V"-35M5#
Adems de las propias del mtodo, al usar el PAF se obtienen las siguientes:
a. Se pueden recolectar 3 o ms muestras en el conservador, lo que permite
realizar un CPS seriado.
b. Al ser mayor la cantidad de heces, la muestra es ms representativa, es decir
hay mayor probabilidad de encontrar formas parasitarias, an cuando la
parasitosis sea leve o moderada.
c. Se hace un solo procesamiento de la muestra en lugar de 3, que redunda en un
ahorro de tiempo y econmico para el laboratorio.
d. Se facilita el manejo de la muestra ya que con el conservador se desinfecta y
desodoriza la misma.
e. Se puede procesar la muestra en otro da, cuando en el presente se tengan
demasiadas muestras.
f. La persona a analizar, no tiene que acudir al laboratorio en tres ocasiones, sobre
todo si el laboratorio se encuentra lejos de su domicilio, beneficindole en ahorro
de tiempo y dinero.
g. A nivel comunitario se pueden hacer muestreos a gran escala y luego procesar
las muestras de acuerdo al tiempo que se tenga.
h. Se puede realizar otro preparado de la muestra para su verificacin o
investigacin, en el caso de encontrarse con parsitos no comunes o no
frecuentes en el medio. E incluso se puede remitir la muestra a un centro de
investigacin.
D"#="-35M5#
En cuanto al uso del PAF, a pesar de que puede preservar trofozotos, durante la
realizacin del mtodo CPS, stos pueden deformarse o destruirse.
En cuanto al mtodo CPS, las mismas que para el mtodo sin uso del
conservador.
PRECTICA NG
MTODO CPS DE CONCENTRACIN POR FLOTACIN DE SHEATHER
concentracin por flotacin.
Conocer las ventajas y utilidad de ste mtodo, en el diagnstico de coccidiosis.
INTRODUCCIN
Esta tcnica se ha empleado con buenos resultados en el rea veterinaria, y
recientemente se ha introducido en el laboratorio de parasitologa mdica, como un
apoyo importante en el diagnstico de las coccidiosis.
Debido al tamao pequeo y a la morfologa similar entre los ooquistes de
Cryptosporidium spp y Cyclospora cayetanensis, as como a la cantidad baja de los
mismos que se observan en los coproparasitoscpicos (CPS) de rutina, es que se ha
hecho necesario introducir mtodos CPS que hagan una mejor concentracin de los
ooquistes, as como el que sea ms fcil su recuperacin. Siendo el CPS de Sheather
el que ha demostrado tener dichas ventajas.
Los ooquistes as recuperados y concentrados posteriormente se someten a la tcnica
de tincin de Ziehl-Neelsen modificado, lo que a su vez permite identificar y diferenciar
a Cryptosporidium spp y a Cyclospora cayetanensis
FUNDAMENTO!
Se basa en la flotacin de quistes, ooquistes y huevos de parsitos en una solucin de
azcar que posee mayor densidad que ellos.
REQUERIMIENTOS!
- Tubos de ensayo 13 x 100.
- Portaobjetos std
- Cubreobjetos de 22X22 mm
- Aplicador.
- Solucin saturada de azcar con densidad de 1.18 Baum
- Asa de platino.
- Gradilla para tubos de ensayo.
- Suero fisiolgico
- Embudo de vidrio.
- Gasa o coladerita
PROCEDIMIENTO!
1.- Homogeneizar 1 a 2 g de materia fecal en suero fisiolgico.
2.-- Colocar un embudo de vidrio con una gasa doblada en la abertura del tubo de
ensayo y filtrar el material homogeneizado.
3.- Centrifugar el tubo con el material homogeneizado a 1500 r.p.m. durante 2 a 5
minutos.
4.- Eliminar el sobrenadante, y agregar la solucin de azcar hasta 1 cm del borde del
tubo, agitar hasta disolver el sedimento..
5.- Centrifugar como en el paso anterior.
6.- Completar con la solucin de azcar hasta el borde y esperar de 2 a 5 minutos la
formacin de un menisco.
7.- Con la ayuda del asa de platino, tomar una muestra de la superficie del menisco y
colocarla en portaobjetos.
8.-Agregar lugol, cubrir con un cubreobjetos y observar al microscopio.
9.-En el caso de observar coccidios, %" (5 #&?"*.$,$" %"( ?*"?5*5%', tomar con la asa
de platino o con una pinza curva, una muestra para preparar un frotis para teir por el
mtodo de Ziehl Neelsen modificado.
UTILIDAD
Esta tcnica es til para la concentracin de quistes y ooquistes de protozoos y huevos
de helmintos y se usa como mtodo preferencial en el diagnstico de los coccidios:
Cryptosporidium, Cyclospora, Isospora, etc.
PRECTICA NG A
MTODO COPROPARASITOSCPICO DE CONCENTRACIN POR
SEDIMENTACIN DE MIFC
concentracin por sedimentacin que adems utiliza el conservador qumico MF.
Conocer las ventajas, utilidad y desventajas de este mtodo.
INTRODUCCIN!
Esta tcnica coproparasitoscpica fue descrita en 1955 por Blagg y cols., y es
semejante en gran parte a la tcnica de formol ter (de Ritchie, 1948), slo que en
ste caso se utiliza el conservador MF en lugar del formol, por lo que es uno de los
mtodos CPS de concentracin por sedimentacin ms utilizados y preferidos en
cualquier laboratorio de anlisis clnicos, debido a las ventajas que presenta.
La introduccin del uso de ('# ,'-#"*=5%'*"# ' ?*"#"*=5%'*"# ;&B6$,'# en el
trabajo rutinario de la parasitologa clnica, no slo contribuyen a prolongar el tiempo
crtico del anlisis de das a meses, sino que tambin ha permitido disear otras
tcnicas coproparasitoscpicas o modificarlas, logrando con ello la mejor recuperacin
e identificacin de las formas parasitarias.
El MF es uno de los conservadores qumicos que en segundo lugar se emplea en el
trabajo rutinario de parasitologa (despus del PAF) porque presenta las siguientes
caractersticas:
N'69*" ,'64- C'6?'-"-3"# E#35%$'# %" ('#
?5*D#$3'# ;&"
,'-#"*=5
T$?' %" 6&"#3*5
%" 8","# ?5*5 (5
;&" #" *",'6$"-%5
MF (merthiolate-
iodo-formol)
Solucin de mer-
thiolate rojo, solucin
madre de yodo-
yoduro al 5% 10%
respectivamente, gli-
cerina y agua
destilada
Trofozoitos, quistes,
ooquistes, huevos y
larvas
Para todo tipo de
consistencia de
heces
FUNDAMENTO DEL USO DE LOS CONSERVADORES QUMICOS
La mayora de estas sustancias son fijadoras, es decir que actan a nivel de los grupos
carboxilo y amino de las protenas de membranas de las formas parasitarias,
ocasionando una precipitacin o coagulacin de esas protenas y endureciendo dichas
membranas, por lo que se conserva la forma original del parsito (caracterstica clave
para su identificacin).
En el caso del MF, el formol es el fijador.
FUNDAMENTO DEL MTODO MIFC
Este mtodo se basa en una diferencia de densidades entre la solucin que se emplea
y la de las formas parasitarias, es decir, se basa en la utilizacin del ter etlico anhidro
con densidad menor o igual a 1, que por ser menor a la densidad de las estructuras
parasitarias (1.05 1.15), ocasiona que stas precipiten o sedimenten y ste proceso
se agiliza con la centrifugacin.
Adems, tambin la acetona que contiene el merthiolate rojo contribuye a reducir la
densidad de toda la solucin.
El ter acta tambin como un saponificador, por lo que al eliminarse los corpsculos
de grasa se facilita la identificacin microscpica de las formas parasitarias.
Por otro lado la eosina que contiene el merthiolate y el lugol que contiene la solucin de
MF, colorean las estructuras parasitarias, facilitando su identificacin. Aunado a la
accin del formol como fijador.
Muestra fecal recolectada adecuadamente
Frasco de vidrio de 100 ml
Abatelenguas
Tubos de ensaye cnicos, graduados, para centrfuga, de 15 ml
Tapn de caucho para el tubo cnico
Pipeta Pasteur de punta larga
Algodn
Embudo de 7.5 cm de dimetro
Coladerita de 3.5 a 5 cm de dimetro
Gradilla
Solucin de MF
ter etlico 5-8$%*' /"# $6?'*35-3" <#35 ,5*5,3"*B#3$,5 ?'* (5 %"-#$%5%1
Centrfuga
FORMA DE RECOLECTAR LA MUESTRA
Para la solucin MF (merthiolathe,formol, glicerina y agua destilada) debe usarse un
frasco con las siguientes caractersticas; que sea de vidrio, de boca ancha, con tapa
hermtica, y con capacidad de 100 150 ml. Se recomiendan los frascos Gerber
2da etapa.
Para la solucin madre de lugol debe usarse un frasco con las siguientes
caractersticas; que sea de vidrio y de color mbar, de boca ancha de preferencia,
con tapa hermtica, y con capacidad de 10 20 ml.
Se pueden usar tubos de ensaye para las soluciones, pero para el lugol es muy
importante proteger el tubo del sol, y hay que usar tapones adecuados para evitar el
derrame de las soluciones.
Las cantidades de las soluciones a usar dependen de la cantidad de la muestra
fecal y del nmero de muestras a recolectar, como se indica a continuacin:
C5-3$%5% %" 8","# S'(N- MF S'(0- 65%*" %" (&)'(
Mediana O 0.50 g 4.7 ml 0.30 ml
Grande O 1.00 g 9.4 ml 0.60 ml
Las soluciones MF y de lugol #" 6"C,(5- $-6"%$5356"-3" 5-3"# de colocar la
muestra fecal (se recomienda lavar el frasco que contena el lugol, con la mezcla de
las dos soluciones, para evitar prdidas de lugol, por ser pequeo el volumen).
Se mezcla perfectamente con ayuda de un abatelengua, se tapa el frasco y se
guarda en un lugar seco y protegido del sol.
Si se van a recolectar ms de una muestra, stas se recolectan por separado, de la
misma manera que la primera. Rotulando cada una de ellas con el nmero
correspondiente.
Las muestras pueden recolectarse en 3 das sucesivos o en das alternados de
preferencia.
El frasco(s) guardado(s) en las condiciones indicadas arriba, permite que la muestra
con el MF se conserve hasta por una semana, dependiendo de las estructuras
parasitarias que contenga y de la calidad del merthiolate.
Es importante dejar reposar la muestra mnimo 24, para que el MF pueda llevar a
cabo su funcin, sobre la de colorear a las formas parasitarias.
Se recomienda no dejar pasar ms de dos das posterior a la colecta de la muestra,
para obtener mejores resultados al analizar la muestra.
1- Mezclar bien la suspensin de MF- materia fecal, con ayuda de un
abatelenguas.
2- Filtrar la suspensin a travs de la coladerita colocada en el embudo y stas a su
vez colocadas en el tubo de ensayo cnico, teniendo cuidado de no rebasar la
marca de 10 mililtros.
3- Si la cantidad de muestra no es suficiente para llegar a la marca de 10 ml, se
completa con soln de MF (recin mezcladas las dos soluciones), y se
homogeniza con un aplicador de madera.
4- Se agregan 3 ml de ter etlico anhidro y se tapa el tubo con el tapn de caucho.
5- Agitar vigorosamente pero con cuidado durante un minuto, hay que sujetar el
tapn con un dedo para evitar que se bote el contenido del tubo.
6- Despus de agitar y sin quitar el tapn, se deja reposar el tubo durante 5 10
segundos, para evitar la expulsin del contenido del tubo.
7- Quitar el tapn con cuidado y centrifugar el tubo a 1500 2,000 rpm durante 2
minutos.
8- Sacar con cuidado el tubo de la centrfuga, sin agitar y colocarlo en una gradilla.
9- Observar la formacin de 4 capas en el tubo, de arriba hacia abajo: a) ter con
grasa, b) tapn de restos fecales, c) solucin de MF y d) sedimento con las
formas parasitarias, si es que las hay.
10-Preparar un aplicador de madera, un 8$#'?' )*&"#' y un frasco para decantar
el sobrenadante.
11- ntroducir el aplicador de madera pegado a la pared del tubo, hasta rebasar
aproximadamente 1 1.5 cm el tapn de restos fecales, y sin despegar el
aplicador de la pared del tubo, se gira hasta desprender todo el tapn fecal, se
retira con cuidado el aplicador de madera.
12-Decantar el sobrenadante en un frasco ex profeso, dejando slo el sedimento.
13-nmediatamente antes de enderezar el tubo, con un hisopo grueso, se limpian las
paredes del tubo de manera circular, sin tocar el precipitado.
14- Colocar el tubo en una gradilla.
15-Tomar de la parte superior del sedimento una muestra pequea con ayuda de la
pipeta Pasteur.
16-Depositar la muestra en una gota de solucin MF (recin mezcladas las dos
soluciones) previamente colocada en el portaobjetos.
17-Mezclar con la punta del cubreobjetos y cubrir la preparacin con el mismo,
18-Observar la preparacin primero con el objetivo 10X y luego con ms cuidado
con el objetivo 40 45X.
19-La observacin debe hacerse de manera sistemtica abarcando toda la
superficie del cubreobjetos, incluso los bordes del mismo.
20-Reportar lo observado
VENTAJAS Y DESVENTAJAS
V"-35M5#
a) Es sencillo y fcil de realizar.
b) No se invierte mucho tiempo para su realizacin.
c) Hace una buena concentracin de las estructuras parasitarias en el fondo del
tubo cnico debido al proceso de sedimentacin centrifugacin.
d) Se recuperan estructuras parasitarias tales como; quistes de protozoarios, larvas
y huevecillos de helmintos.
e) Los huevos de helmintos como Taenia sp, Ascaris lumbricoides no fertilizados y
de trematodos como Fasciola hepatica y Paragonimus mexicanus, as como los
quistes de Balantidium coli, por ser pesados tienden a sedimentar, por lo que
ste mtodo es ideal para su recuperacin.
f) Algunos analistas con mucha experiencia en el manejo de sta tcnica han
reportado el hallazgo de trofozotos de protozoarios, sobre todo de Giardia
lamblia, debido al uso del conservador MF, sin embargo, algunos investigadores
dicen que el ter y la centrifugacin pueden destruir los trofozotos.
g) Los componentes del MF como el lugol y la eosina que contiene el merthiolate
rojo, colorean a las formas parasitarias en tonos amarillo, naranja, rosado-rojizo,
dependiendo de la madurez y tipo de la estructura parasitaria y del tiempo que
tenga sta en el conservador. Las estructuras -' ?5*5#$35*$5# tales como
clulas vegetales, fibras vegetales, etc., tienden a teirse de caf, por lo que se
pueden diferenciar muy bien de las parasitarias.
D"#="-35M5#
a. Es relativamente caro por requerir de varios reactivos, los tubos cnicos son
ms caros que los que generalmente se usan en laboratorio y no tan fcil de
conseguir en el mercado.
b. Por el tamao de los tubos y su dimetro, se requieren de centrfugas con
camisas adecuadas para ellos.
c. Algunos investigadores dicen que el ter y la centrifugacin pueden destruir los
trofozotos.
PRACTICA N'! 7
AMIBA EN FRESCO
OBIETIVOSJ Conocer el mtodo de laboratorio para la toma de muestra en el estudio
de la amiba en fresco.
Realizar la bsqueda de trofozoitos y quistes de amibas.
INTRODUCCION
El diagnstico de la amibiasis se realiza demostrando la presencia de trofozoitos o
quistes de Entamoeba histolytica. En el caso de amibiasis intestinal aguda, se debern
buscar a los trofozoitos en una serie de al menos tres muestras sucesivas de materia
fecal, las muestras sern obtenidas de evacuaciones recientemente emitidas (frescas) o
mediante examen de toma de muestra directa, sin administrar purgantes y debern ser
observadas de inmediato sin haberlas sometido a cambios bruscos de temperatura,
porque es posible que se lisen los trofozoitos y ya no se observe nada (soportan hasta
5 % de presin parcial de oxgeno). Cuando se trata de lactantes, no es conveniente
obtener la muestra del paal, porque con frecuencia ya se habrn destruido los
trofozoitos.
Un paciente infantil
1 par de guantes
Materia fecal recin emitida o recolectada directamente del intestino.
Portaobjetos de 7.5X2.5 cm 7.5X5 cm
Cubreobjetos de 22X22 mm, #1 #2
Sonda de alimentacin nasogstrica K 30 del No 7.
Jeringa de 10 ml
Solucin salina fisiolgica (0.85%)
AMA (azul de metileno)
Marcador
Microscopio
Tubo de 13 x 100
Contenedor con solucin desinfectante (Cloro al 5%) para descartar material
P*"?5*5,$+- %" *"5,3$='#
Solucin salina fisiolgica
Cloruro de sodio........ 0.85 g
Agua destilada........ 100 ml
Mezclar hasta disolucin completa de los cristales. Guardar en frasco rotulado. Para
uso diario mantener en frasco de gotero rotulado.
T$-,$+- %" L&)'( .&"*3" /?5*5#$3'(+)$,'1!
odo metlico........ 1 parte
oduro de potasio..... 2 partes
Agua destilada...... 30 partes
Debe prepararse semanalmente.
odo........... 1 g
oduro de potasio...... 10 g
Agua destilada....... 100 ml
T$-,$+- %" 5C&( %" 6"3$("-' 56'*3$)&5%' /AMA1
La tincin de (AMA) es una tcnica rpida que se utiliza en preparaciones hmedas,
cuando se sospecha la existencia de trofozotos en las preparaciones con solucin
salina, los cuales han perdido su movilidad y tienden a redondearse haciendo difcil su
identificacin.
S'(&,$+- A /#'(&,$+- %" D,$%' 5,<3$,'1
1 cido actico glacial 1.2 mL
2 Agua destilada 98.8 Ml
Preparacin
Depositar el agua destilada en un matraz, aadir el cido actico y mezclar guardar
bien tapado. Esta solucin es estable durante un mes
S'(&,$+- B /#'(&,$+- %" 5,"353' #+%$,'1
1 Acetato sdico (CH3C00Na) 1.6 g.
Si se usa acetato sdico cristalino (CH3C00Na.3H
2
0) 2.6 g.
2 Agua destilada 100 mL
Preparacin
Disolver el acetato sdico en 100 mL de agua destilada, mezclar y guardar en frasco
bien tapado. Esta solucin es estable durante 6 meses
S'(&,$+- %" 3*595M' ?5*5 (5 3$-,$+-
1 Solucin A 46.3 mL
2 Solucin B 3.7 mL
3 Colorante azul de metileno 0.5 g.
4 Agua destilada 50.0 mL
Preparacin
Colocar los 50 mL de agua destilada en un matraz y aadir las soluciones A y B mezclar
perfectamente, posteriormente agregar el azul de metileno y agitar hasta que se
disuelva. Guardar en frasco mbar.
Esta solucin es estable indefinidamente, si se sedimenta un poco el colorante se
recomienda filtrar la solucin.
1.- Se llena una jeringa de 10 ml con SS, a la jeringa se le conecta una sonda de
alimentacin nasogstrica K 30.
2.- Se purga la songa con la solucin salina
3.- Se llena nuevamente la jeringa
4.- Se pide al paciente, o en su caso a la mam que coloque al infante en posicin
supina (boca abajo) se le introducen unos 5 10 cm del extremo libre de la sonda por el
recto y se le inyecta suavemente la solucin contenida en la jeringa.
5.- Si el paciente est muy deshidratado, se vuelve a llenar la jeringa con otros 10 ml de
SS y se le aplica al paciente.
6.- Una vez que se ha vertido toda la SS se deja reposar al paciente sin sacarle la
sonda por unos 3 4 minutos, con la finalidad de que la SS entre en contacto con la
ltima porcin del intestino.
7.- Transcurrido el tiempo se aspira la SS que ha estado en contacto con el intestino a
travs de la sonda, rotando un poco la sonda para evitar que los orificios de la sonda
entren en contacto con las paredes del intestino y se tape la sonda y evite la succin de
la SS.
8.- Si no se aspira liquido, retirar la jeringa de la sonda (sin retirar la sonda del recto)
9.- Llenar nuevamente la jeringa y se vuelve colocar en la sonda
10 -nyectar el agua
11.- Aspirar el lquido, que vendr con la materia fecal
12.- Ya que se hayan succionado unos 3 a 5 ml de SS se retira la sonda poco a poco,
luego una vez afuera del ano se absorbe aire de manera que todo el lquido contenido
en la sonda pase a la jeringa.
13.- Una vez que est llena la jeringa con la solucin con materia fecal, depositar sta
solucin en el tubo de 13x100.
14.- Pasar este tubo a bao mara a 37
o
C.
15.- Se colocan 2 gotas en un portaobjetos, una de las cuales se observa directamente
y a la otra gota con AMA.
P*',"%$6$"-3' %" 3$-,$+- @ ?*"?5*5,$+- %" (5 6&"#3*5!
1. Colocar una gota de colorante de azul de metileno (AMA) y otra de solucin
salina sobre un portaobjetos
2. Con una pipeta pasteur colocar aproximadamente 50 L. de la muestra
problema.
3. Agregar otra gota de solucin salina al 0.85% y homogeneizar.
4. Cubrir la preparacin con cubreobjetos
5. Dejar reposar la preparacin durante 10 m minutos para el AMA y 1 minuto para
la SS
6. Observar al microscopio con objetivo de 10 a 40X.
I-3"*?*"35,$+-:
Las muestras obtenidas debern ser observadas de inmediato. Buscar los trofozoitos,
stos son mviles. La identificacin se realiza diferenciando a los trofozoitos de los
macrfagos, los trofozoitos presentan pseudpodos hilinos, son ms grandes (20 30
micromtros) que los macrfagos (12 14 micrmetros).
PRECTICA NG 8
OBSERVACIN DE PROTOKOARIOS DE TUBO DIGESTIVO Y VAS
GENITOURINARIAS
OBIETIVOS
Aprender a realizar la bsqueda e identificacin de protozoarios de tubo digestivo y vas
genitourinarias ms frecuentes en nuestro medio.
Conocer las caractersticas morfolgicas de algunas especies de protozoarios de tubo
digestivo y de vas genitourinarias, de los grupos de los sarcodinos, flagelados, ciliados
y coccidios en sus diferentes etapas de desarrollo; trofozotos, quistes u ooquistes.
Conocer la importancia y las ventajas del uso de algunas tcnicas de tincin
permanente, as como de cortes histolgicos y los coproparasitoscpicos, en el
diagnstico de las protozoosis.
INTRODUCCIN
Los protozoarios fueron descubiertos por Leeuwenhoek en el ao 1674 conjuntamente
con la invencin del microscopio, y a la fecha se reconocen cerca de 50 000 especies
de protozoarios. Aproximadamente 60 especies son parsitas del humano y cerca de 15
son comensales.
C'-,"?3' %" ?*'3'C'5*$'J el protozoario es un organismo unicelular, eucaritico y
hetertrofo, capaz de llevar a cabo por si solo sus funciones vitales de reproduccin,
nutricin respiracin, excrecin y movimiento.
Los protozoarios de importancia mdica presentan un tamao microscpico que oscila
entre 2 a 200 . Su forma es diversa; esfricos, ameboideos, alargados, piriformes, etc.
Presentan ncleo(s), diversos orgnulos y citoesqueleto. Su reproduccin puede ser
asexual o sexual, o de los dos tipos, y puede ser sencilla (divisin binaria) o compleja
(esquizogonia, gametogonia, esporogonia).
Se pueden localizar prcticamente en cualquier parte de nuestro organismo, y producir
cuadros clnicos diversos con sintomatologa poco aparente, o en otros casos las
lesiones pueden ser graves, deformantes e incluso mortales.
Por ejemplo la amibiasis es la tercera enfermedad parasitaria ms importante del
mundo y su agente etiolgico Entamoeba histolytica, causa 40 000 100 000 muertes
por ao por complicaciones.
La giardiosis se calcula que afecta a 16 millones (15%) de personas en las zonas
rurales de Amrica Latina, y su agente etiolgico Giardia lamblia, ha sido identificado
como uno de los principales responsables de episodios diarreicos en guarderas y
asilos.
Los ?*'3'C'5*$'# #" ?&"%"- ,(5#$.$,5* desde diversos puntos de vista, adems de la
clasificacin 35>'-+6$,5 (reino, phylum, orden, familia, gnero y especie), en:
Clasificacin ?'* +*)5-'# %" (','6',$+-:
a) ciliados
b) flagelados
c) sarcodinos
d) esporozoarios
e) microsporidios.
Por su microhabitat o (',5($C5,$+- "- "( 8'#?"%"*', se clasifican en:
a) protozoarios de tubo digestivo o intestinal
b) protozoarios tisulares
c) protozoarios sanguneos
d) protozoarios de otras localizaciones; genitourinarias, vas respiratorias y bucales.
Por #& ".",3' "- "( 8'#?"%"*' los protozoarios pueden ser:
a) ,'6"-#5("#: no producen enfermedad, pero no deben estar en el humano.
b) ?5*D#$3'#J producen enfermedad.
C5*5,3"*B#3$,5# )"-"*5("# %" ('# ?*'3'C'5*$'# %" 5,&"*%' 5 (5 ,(5#$.$,5,$+- ?'*
+*)5-'# %" (','6',$+-J
G*&?'
*)5-'# %"
(','6',$+-
T$?' %"
*"?*'%&,,$+-
E#?",$"#
?5*D#$35#
?5*5 "(
8&65-'
O3*5# ,5*5,3"*B#3$,5#
E#35%$'# ;&"
?*"#"-35-
Sarcodinos
(amibas)
Seudpodos Fisin binaria
Algunas
Otras son
comensales y
otras de vida
libre
Membrana celular fina, pueden
presentar diferenciacin del
citoplasma en ecto y endoplasma,
algunas carecen de mitocondrias.
Las caractersticas nucleares son
taxonmicas.
Trofozotos
Quistes
Ciliados Cilios
Conjugacin
Fisin binaria
Slo una
Presentan; dos ncleos;
citostoma, citoprocto, as como
vacuolas contrctiles.
Trofozotos
Quistes
Esporozoarios
o
Aphycomplexa
No presentan
Endodiogenia
Esporognica
Esquizogonia
Todas las que
lo infectan
Generalmente son intracelulares
Presentan una estructura
caracterstica llamada complejo
apical, con capacidad para
penetrar clulas hospederas.
Trofozotos
Quistes
Ooquistes
Esporozotos
Gametocitos
Esquizontes
Merozotos
*Microsporidios
*Microsporidios:
Fisin binaria o
mltiple.
Produccin de
esporas.
*Organismos primitivos.
ntracelulares obligados.
El esporoplasma es inoculado
directamente en la clula
hospedera por el tubo polar.
Esporas
Esporoplasma
Flagelados
Flagelos
Membrana
ondulante
Fisin binaria
longitudinal
Algunas.
Otras son
comensales
Algunos presentan axostilo
(rudimento de esqueleto).
Otros presentan kinetoplasto
(organelo formado a partir de
mitocondrias modificadas), con
importancia taxonmica
Trofozotos
Quistes
Amastigotes
Promastigotes
Epimastigotes
Tripomastigotes
C(5#$.$,5,$+- 35>'-+6$,5 %" ('# ?*'3'C'5*$'# ;&" 5.",35- 5( 8&65-'
REINO PROTISTA A()&-'# )<-"*'# %" $6?'*35-,$5 6<%$,5
S&9*"$-' P*'3'C'5
P8@(&6 S5*,'65#3$)'?8'*5
S&9?8@(&6
S5*,'%$-5
Entamoeba, Naegleria, Acanthamoeba,
Balamuthia
S&9?8@(&6 M5#3$)'?8'*5
Giardia, eishmania, Trypanosoma,
Trichomonas, !ientamoeba
P8@(&6 A?$,'6?(">5
Cyclospora, Isospora, "arcocystis,
Plasmodium, Toxoplasma, Cryptosporidium
P8@(&6 C$($'?8'*5 Balantidium
P8@(&6
M$,*'#?'*5
Enterocyto#oon, Encephalito#oon, Nosema,
otros
R"$-'
S&9*"$-'
S&9?8@(&6
C8*'6$#35
C8*'6'9$'35
O?5($-535
Blastocystis
Fuente: Dra. Teresa Uribarren Berrueta. Protozoos. Modificacin a Clasificacin taxonmica. UNAM
DESARROLLO DE LA PRECTICA!
1.- Coloque en el microscopio con mucho cuidado cada una de las laminillas que le
proporcione su maestra(o), recordando los pasos a seguir para el enfoque.
2.- Recuerde que aunque vaya a observar con el objetivo de inmersin, primero debe
enfocar con el objetivo de 10X, luego con el de 40X y luego con el de 100X.
3.- Con el apoyo de algn esquema o atlas, realice las observaciones de la siguiente
manera:
4.- Observe de cada protozoario; el estadio, la forma, las caractersticas tintoriales, los
orgnulos que pueda identificar y el tamao (con respecto al rea del campo del
objetivo con que est observando).
5.- Compare las caractersticas entre las especies de amibas observadas: Entamoeba
histolytica, Entamoeba coli, Endolimax nana y/o Iodamoeba butschlii$
6.- Compare las caractersticas entre las especies de flagelados observados: Giardia
lamblia, Trichomonas %aginalis, Chilomastix mesnili y/o Enteromonas hominis$
7.- Compare las caractersticas entre las especies de coccidias observadas:
Cryptosporidium par%um, Cyclospora cayetanensis y/o Isospora belli$
8.- Observe el estadio, la forma, las caractersticas tintoriales, los orgnulos que pueda
identificar y el tamao (con respecto al rea del campo del objetivo con que est
observando), de los siguientes protozoarios; Blastocystis hominis y Balantidium coli$
9- Anote el estadio (forma, fase o etapa) del protozoario observado, as como el
mtodo, material biolgico y tcnica de tincin, que se emplearon para obtener cada
laminilla.
PRECTICA NG 9
OBSERVACIN DE PROTOKOARIOS TISULARES
OBIETIVOS
Aprender a realizar la bsqueda e identificacin de protozoarios tisulares comunes en
nuestro medio.
Conocer las caractersticas morfolgicas de algunas especies de protozoarios tisulares
de los grupos de; los flagelados y de los esporozoarios en sus diferentes etapas de
desarrollo.
Conocer la importancia y las ventajas del uso de algunos mtodos de diagnstico para
protozoarios sanguneos y de otros tejidos, tales como; frotes y tincin, hemocultivo
corte histolgico e impronta.
INTRODUCCIN
Continuando con la introduccin de la prctica anterior, otro grupo de protozoarios de
inters mdico son los flagelados y los esporozoarios de localizacin en sangre y otros
tejidos.
Dentro de la familia Tripanosomatidae existen dos gneros importantes, el gnero
Trypanosoma, con varias especies, y el gnero eishmania que incluye muchas
especies.
Los ciclos vitales de los protozoarios de ambos gneros, involucran dos hospederos,
uno vertebrado que puede ser el humano, y uno invertebrado que es un artrpodo, que
a la vez es el vector o transmisor de los protozoarios. Por lo que durante el ciclo
biolgico se pueden desarrollar cuatro estadios que reciben los siguientes nombres;
amastigote, promastigote, epimastigote y tripomastigote.
En el caso del gnero eishmania, slo dos etapas se reconocen, el amastigote y el
promastigote.
Las especies de eishmania causan diferentes enfermedades llamadas Leishmaniosis,
ya sea a nivel cutneo, mucocutneo o visceral, que pueden ser incapacitantes y
mutilantes.
Las especies de Trypanosoma tambin causan diferentes enfermedades; Trypanosoma
cru#i causa la enfermedad de Chagas; Trypanosoma gambiense y Trypanosoma
rhodesiense causan la enfermedad del sueo, ambas llegan a ser mortales.
Dentro del grupo de los esporozoarios tisulares, se encuentran los gneros Plasmodium
y Toxoplasma$
En el caso del gnero Plasmodium, existen muchas especies, pero slo cuatro se
reconocen como importantes para el humano; Plasmodium %i%ax, Plasmodium o%ale,
Plasmodium malarie y Plasmodium &alciparum, todos ellos son los causantes de la
enfermedad llamada paludismo o malaria, que puede llegar a ser mortal dependiendo
de la especie involucrada.
El ciclo vital de los plasmodios involucra dos hospederos; un artrpodo, que es el
hospedero definitivo y a la vez el vector del protozoario, y un hospedero definitivo que
es el humano. Durante el ciclo biolgico se desarrollan muchos estadios, siendo ms
importantes los que se forman dentro de los eritrocitos humanos; trofozotos,
esquizontes y gametocitos.
En el caso del gnero Toxoplasma, slo se conoce una especie que afecta al humano,
Toxoplasma gondii, que causa la enfermedad llamada toxoplasmosis con dos
modalidades, la adquirida y la congnita, siendo ms relevante la segunda porque se
pueden presentar abortos o malformaciones congnitas.
El ciclo de ste protozoario involucra tambin dos hospederos; un felino, que es el
hospedero definitivo y el hombre u otro animal, que es el hospedero intermediario.
Durante el ciclo se forman varias etapas, de las cuales dos se pueden identificar en el
humano; el trofozoto y el quiste.
El diagnstico por el laboratorio de las enfermedades mencionadas anteriormente no es
fcil por diversas razones; la ubicacin del parsito es intracelular, las enfermedades se
presentan en etapas, y los parsitos cambian de forma y a veces de lugar en el
hospedero, durante esas etapas, y la toma de muestra biolgica representa un riesgo
de infeccin para el que la realiza.
DESARROLLO DE LA PRECTICA!
1.- Coloque en el microscopio con mucho cuidado cada una de las laminillas que le
proporcione su maestra(o), recordando los pasos a seguir para el enfoque.
2.- Recuerde que aunque vaya a observar con el objetivo de inmersin, primero debe
enfocar con el objetivo de 10X, luego con el de 40X y luego con el de 100X.
3.- Con el apoyo de algn esquema o atlas, realice las observaciones de la siguiente
manera:
4.- Observe de cada protozoario; el estadio, la forma, las caractersticas tintoriales, los
orgnulos que pueda identificar y el tamao (con respecto al rea del campo del
objetivo con que est observando).
5.- Compare las caractersticas entre las especies de eishmania observadas:
eishmania dono%ani y eishmania mexicana$
6.- Compare las caractersticas entre las especies de Plasmodium observadas:
Plasmodium %i%ax, Plasmodium &alciparum y Plasmodium malarie$
7.- Observe el estadio, la forma, las caractersticas tintoriales, los orgnulos que pueda
identificar y el tamao (con respecto al rea del campo del objetivo con que est
observando), de los siguientes protozoarios; Trypanosoma cru#i y Toxoplasma gondii$
8- Anote el estadio (forma, fase o etapa) del protozoario observado, as como el
mtodo, material biolgico y tcnica de tincin, que se emplearon para obtener cada
laminilla.
9.- R"?'*3" las observaciones de acuerdo al formato que le indique su maestro(a).
PRECTICA NG 10
REALIKACIN DE TCNICAS DE TINCIN2 CULTIVOS Y MTODOS
INMUNOLGICOS!
Se incluye a las tcnicas de Tricrmico de Gomori, Ziehl-Neelsen modificado y
Giemsa.
De cultivos, se incluye a los descritos para Trichomonas %aginalis, amibas de vida libre,
Trypanosoma cru#i$
De los inmunolgicos, se incluye a los descritos para amibiasis, toxoplasmosis,
enfermedad de chagas.
MTODOS DE COLORACIN PARA PROTOKOARIOS
MTODO DE KIEHL-NEELSEN /MODIFICADO PARA OBSERVACIN DE
COCCIDIOSJ CRYPTOSPORIDIUM Y OTROS1
FUNDAMENTO!
Se basa en el comportamiento cido resistente de la cubierta de estos parsitos, los
cuales se tien de rojo y destacan sobre un fondo verde o azul, dependiendo del
colorante de contraste usado.
REQUERIMENTOS
- Lminas portaobjetos.
- Laminillas cubreobjetos.
- Soporte de varillas de vidrio para coloracin de lminas portaobjeto.
- Estiletes o pinzas punta curva.
- Fuscina fenicada
- Verde de malaquita o azul de metileno acuoso
- Metanol.
- Hidrxido de sodio al 4%.
- Alcohol cido
PROCEDIMIENTO!
- Colocar las lminas portaobjetos sobre el soporte de las varillas de vidrio.
- Con el estilete o pinza curva hacer un frotis de heces en la lmina portaobjeto y dejar
secar.
- Fijar la lmina con alcohol metlico de 2 a 5 minutos y dejar secar.
- Agregar hidrxido de sodio sobre el preparado por un minuto, eliminar el exceso y
lavar con agua.
- Cubrir la lmina con la fucsina fenicada (previa agitacin del frasco) por 5 minutos,
diluida previamente en agua al tercio (1 mL colorante y 2 mL de agua).
- Lavar suavemente la lmina portaobjeto con agua corriente.
- Decolorar con alcohol cido, cubriendo el portaobjeto por unos segundos hasta
quitar el colorante.
- Lavar suavemente el portaobjeto con agua.
- Colocar como colorante de contraste verde de malaquita 1% o azul de metileno 1
1,4% durante 5 minutos, diluidas previamente al tercio.
- Lavar la lmina suavemente con agua corriente y dejar secar a temperatura ambiente.
- Realizar el montaje con cytoseal, blsamo de Canad o Permount, usar una laminilla
cubreobjeto y observar el microscopio.
OBSERVACIN!
Los ooquistes de Cryptosporidium, sospora y Cyclospora aparecen de un color rojo
fucsia sobre un fondo verdoso (con verde de malaquita) o azul (con azul de metileno).
En algunos casos, no se colorean bien, pero la refringencia caracterstica permite
diferenciarlos.
RESULTADO!
nformar los estadios evolutivos de los parsitos encontrados
COLORACIN GRAM Y COLORACIN TRICRMICA /PARA
MICROSPORIDIOS1!
FUNDAMENTO!
Se basa en la identificacin de esporas de Enterocytozoon, Encephalitozoon, etc. por la
combinacin de las coloraciones Gram y tricrmica.
REQUERIMENTOS
- Colorante chromotrope
- Coloracin Gram
- Pinza o estilete punta curva.
- Alcoholes 85% y 95% y xilol.
- Mechero de alcohol.
- Microscopio binocular.
- Placas petri 10 x 150 mm.
PROCEDIMIENTO!
- Preparar el set de placas petri 10 x 150 mm.
- Realizar un frotis fino en una lmina o laminilla y dejar secar.
- Fijar el frote pasndolo 3 veces por una llama, un segundo de tiempo por vez.
- Agregar el colorante cristal violeta y esperar 1 minuto.
- Enjuagar en agua corriente y eliminar totalmente el agua.
- Adicionar el yodo de Gram por 30 segundos, remover el exceso con el decolorante y
enjuagar con agua.
- Agregar el colorante chromotrope por 5 minutos de 50C a 55 C.
- Pasar por el decolorante (alcohol 90% y cido actico 1%) de 1 a 3 segundos.
- Pasar por alcohol 95% y por alcohol etlico absoluto por 1 minuto.
- Pasar un minuto por xilol buscando que la coloracin sea adecuada para visualizar el
parsito.
- Realizar el montaje y observar al microscopio.
OBSERVACIN!
Observar al microscopio a 10X y 40X. Para observar al microscopio a 100X, cubrir con
aceite de inmersin.
Se observan las esporas de Enterocytozoon, Encephalitozoon, Nosema, etc., que
aparecen de un color rosado o rojo tenue o fucsia sobre el fondo verde o azul.
RESULTADO!
nformar los parsitos encontrados
COLORACIN TRICHROME /GOMORI PHEATLEY1!
FUNDAMENTO!
Permite colorear las estructuras internas de los protozoos para su caracterizacin. Esta
tcnica utiliza muestras de heces frescas, preservadas con PVA o fijadas con
Schaudinn. Es un mtodo rpido y de utilidad en el estudio de Entamoeba, Giardia,
Balantidium, Cyclospora y otros protozoarios.
REQUERIMENTOS
- Asa de platino.
- Estilete curvo o pinza curva.
- Agua destilada.
- Tintura de Yodo.
- Cytoseal o blsamo de Canad.
- Alcoholes 85%, 90% y 95% y absoluto.
- Xilol.
- Colorante chromotrope.
- Acido actico.
- Solucin Schaudinn.
- Frascos coplin o placas Petri.
PROCEDIMIENTO!
- Preparar un set de placas Petri 15 x 150 mm con los reactivos correspondientes,
sujetar la laminilla con el porta-laminillas y con el estilete o pinza curva hacer el frote
fino de la muestra sobre la laminilla.
- Fijar la muestra con solucin Schaudinn por 2 a 5 minutos.
- Pasar por alcohol 70% con 2 3 gotas de tintura de yodo.
- Pasar por un minuto por alcohol 70%.
- Pasar por el colorante chromotrope de 8 a 15 minutos.
- Pasar por alcohol 90% con cido actico al 1% de 10 a 15 segundos y ver tono de
coloracin.
- Pasar por alcohol 95% y alcohol absoluto durante 3 minutos.
- Pasar por xilol de 1 a 5 minutos. No debe verse opaco.
- Realizar el montaje con cytoseal, blsamo de Canad o Permount.
OBSERVACIN!
Observar con objetivo de inmersin 100X. El citoplasma de los parsitos se tien de
color verde y el ncleo de color rosado
RESULTADO!
nformar el nombre del parsito y su estadio evolutivo
ENSAYOS INMUNOENKIMATICOS /ELISA1
FUNDAMENTO!
El metodo de ELlSA debe este nombre a sus siglas en ingls: Enzime Linked
mmunosorbent Assay, utiliza como principio una reaccin antgeno-anticuerpo
especfica, que se hace evidente con el empleo de anti- inmnunoglobulinas acopladas a
una enzima (peroxidasa, fosfatasa alcalina). Este conjugado gG-enzima reacciona de
manera especfica con su antgeno, sin perder sus caractersticas de reactividad
inmunolgica o enzimtica. La accin de la enzima sobre un sustrato genera productos
de reaccin coloridos, lo que permite la realizacin de pruebas cualitativas interpretadas
por la intensidad del color desarrollado y de pruebas cuantitativas utilizando un
colormetro o espectrofotmetro (lector de ELSA),
La tcnica de ELlSA tiene dos variantes:
1. Para determinacin de anticuerpos
2. Para captura de antgeno
En parasitologa la tcnica de ELlSA tiene gran aplicacin en el diagnstico, tanto en
parasitosis intestinales como extraintestinales.
'$ Determinacin de anticuerpos.-En algunas parasitosis es difcil demostrar
la presencia del parsito, pero podemos detectar la respuesta inmune del
paciente (anticuerpos) frente a la presencia del agente extrao como en el caso
de infecciones por Toxoplasma gondii, Taenia solium (fase larvaria-cisticerco),
Toxocara canis y Entamoeba histolytica. La prueba se realiza en muestras de
suero, leche, saliva, lgrimas, humor acuoso y LCR.
($ Captura de antgeno.- Molculas antignicas de parsitos presentes en
diversos productos biolgicos pueden ser identificadas con el empleo de
anticuerpos especficos. La tcnica que se utiliza para este fin es la captura de
antgeno en heces, coproantgeno, para el caso de infecciones intestinales por
Giardia lamblia, Cryptosporidium par%um y Entamoeba histolytica$
BANCO DE PREGUNTAS PARA LAS PRECTICAS DE LABORATORIO DE
PARASITOLOGA I
EFAMEN FSICO2 ORGANOLPTICO O MACROSCPICO DE LA MATERIA FECAL!
1- Qu es la materia fecal?
2- Qu elementos constituyen a la materia fecal?
3- Qu aspectos deben considerarse para la recoleccin y obtencin de las heces?
4- Desde el punto de vista parasitolgico, qu informacin nos proporciona el examen
fsico de las heces?
5- Cules son las caractersticas fsicas, organolpticas o macroscpicas normales de
las heces?
6- A qu se debe el color normal de la materia fecal ?
7-A qu se debe el olor normal de las heces?
8-Qu significa la presencia de sangre en la materia fecal?
9-Qu significa la presencia de moco en las heces?
10-A la observacin macrosc)pica de la materia fecal, qu parsitos (gnero y
especie) y qu estadios de los mismos, se pueden encontrar?
11-Con qu sustancias se pueden contaminar las heces si no son recolectadas
adecuadamente?
12-De qu manera pueden interferir en el examen fsico de las heces, las sustancias
mencionadas en la respuesta anterior?
MTODO COPROPARASITOSCPICO DIRECTO
1-Etimolgicamente, qu significa el trmino coproparasitoscpico?
2-Qu es un mtodo coproparasitoscpico?
3-Por qu se le llama tambin CPS en fresco a ste mtodo?
4-Qu es la solucin salina isotnica? y por qu mantiene vivos a los trofozoitos?
5-Qu es la solucin de yodo o lugol parasitolgico? y por qu colorea a las formas
parasitarias?
6-Diga el concepto de trofozoito, quiste y ooquiste de los protozoarios.
7-Diga el concepto de huevo, larva y adulto de los helmintos.
8-Qu otras estructuras aparte de las formas parasitarias, tanto normales como
anormales se encuentran en las heces a nivel microsc)pico?
9-Cules son las ventajas y las desventajas de ste mtodo?
12- Cmo debe reportarse el resultado de un coproparasitoscpico?
MTODO COPROPARASITOSCPICO DE FAUST
1-A qu tipo de CPS pertenece ste mtodo?
2-Qu finalidad tiene el hacer la suspensin de las heces?
3-Qu finalidad tiene el realizar el colado de la suspensin de las heces?
4-Cul es la finalidad de los lavados con agua de la materia fecal?
5-Para qu y por qu se utiliza la solucin de sulfato de zinc a densidad de 1.18
Baum?
6-Qu %enta*as presenta ste mtodo con respecto a otros CPS, razones por las que
se utiliza de rutina en la mayora de los laboratorios clnicos?
7-Qu formas parasitarias se pueden recuperar con ste mtodo?
8-Qu des%enta*as presenta ste mtodo con respecto a otros CPS?
9-Actualmente, cmo se realiza el mtodo?
10-Qu es un conservador qumico?
11-Cules son los componentes del conservador PAF y cmo actan cada uno de
ellos en la materia fecal?
12-Qu ventajas nos proporciona ste conservador en el trabajo rutinario?
13-Qu formas parasitarias preserva el PAF?
MTODO COPROPARASITOSCPICO PARA MUESTRAS PRESERVADAS CON MIF
/MIFC1!
1-A qu tipo de mtodos CPS pertenece el MFC?
2-Qu funcin desempea el ter etlico anhdro en este mtodo?
3-Qu funcin desempea el conservador MF en este mtodo y cules son sus
componentes?
4-Qu formas parasitarias se pueden recuperar con este mtodo?
5-Qu ventajas y desventajas presenta este mtodo con respecto al CPS de Faust?
OBSERVACIN DE PROTOKOARIOS INTESTINALES Y CAVITARIOS
1-Describa la morfologa de los trofozotos y quistes de los siguientes protozoarios:
Entamoeba histolytica, Entamoeba coli y Balantidium coli $
2-ndique cul es el microhabitat en el hospedero humano, de cada uno de los
protozoarios anteriores.
3-Qu enfermedad producen cada uno de los protozoarios arriba mencionados?
4-De manera breve explique el ciclo vital de cada uno de los protozoarios anteriormente
mencionados.
5-Diga los m+todos de diagn)stico directo que pueden utilizarse para la identificacin
de los protozoarios anteriores, as como la muestra biolgica y las etapas o formas
diagnsticas que se hallaran con cada uno de ellos.
6-Diga qu otras amibas intestinales pueden establecerse en el humano y describa la
morfologa de la etapa diagnstica de las mismas.
7-Cul es la diferencia entre un protozoario parsito y uno comensal?
8-Qu ventajas presentan el uso de las tcnicas de tincin permanente en la
identificacin de los protozoarios intestinales?
9-Diga qu tcnicas de tincin permanente existen para la identificacin de los
protozoarios anteriormente mencionados.
10-Clasifique a los protozoarios anteriores de acuerdo a sus rganos de locomocin.
', Describa la morfologa del trofozoto de Trichomonas %aginalis$
(, Describa la morfologa del quiste y del trofozoto de Giardia lamblia$
-, ndique el microhabitat en el hospedero humano de cada uno de los parsitos
mencionados.
., Qu enfermedad producen cada uno de los protozoarios arriba mencionados?
/, De manera breve explique el ciclo vital de cada uno de los protozoarios
anteriormente mencionados.
0, Diga los m+todos de diagn)stico directo que pueden utilizarse para la identificacin
de los protozoarios anteriores, as como la muestra biolgica y las etapas o formas
1, Diga qu otros protozoarios flagelados intestinales y cavitarios pueden establecerse
en el humano y describa la morfologa de la etapa diagnstica de las mismas.
2, Diga qu tcnicas de tincin permanente existen para la identificacin de los
protozoarios anteriormente mencionados.
3, Cules son las caractersticas tintoriales de Giardia lamblia y de Trichomonas
%aginalis con las tcnicas de tincin mencionadas anteriormente?

OBSERVACIN DEPROTOKOARIOS TISULARES
1-Describa la morfologa del tripomastigote, del epimastigote y del amastigote de
Trypanosoma cru#i$
2-Cul es el microhabitat de Trypanosoma cru#i en el hospedero humano?
3-De manera breve explique el ciclo vital de Trypanosoma cru#i$
4-Qu enfermedad produce Trypanosoma cru#i4
de Trypanosoma cru#i, as como la muestra biolgica y las etapas o formas
6-Qu es un nido de amastigotes?
7-Cules son las caractersticas tintoriales del tripomastigote en el frotis sanguneo
teido con Giemsa?
8-Describa las caractersticas morfolgicas del transmisor de este parsito y mencione
las etapas por las que pasa durante su ciclo vital.
1-Describa la morfologa del amastigote y del promastigote de eishmania sp$
2-Cul es el microhabitat de ste parsito en el humano?
3-De manera breve explique el ciclo vital de eishmania sp$
4-Qu tipo de Leishmaniasis se presentan en nuestro pas?
de las diferentes especies de eishmania sp, as como la muestra biolgica y las etapas
o formas diagnsticas que se hallaran con cada uno de ellos.
6-Describa las caractersticas morfolgicas del transmisor de ste parsito.
1- Cules son las especies de Plasmodium sp que se presentan en nuestro pas?
2- De manera breve explique el ciclo vital de los parsitos del paludismo.
3- Cul es el microhabitat en el humano, de stos parsitos?
4- Describa la morfologa de las diferentes etapas de desarrollo que se presentan en el
ciclo eritroctico, de cada una de las especies arriba indicadas.
5- Diga los m+todos de diagn)stico directo que pueden utilizarse para la identificacin
de las diferentes especies de Plasmodium sp, as como la muestra biolgica y las
etapas o formas diagnsticas que se hallaran con cada uno de ellos.
6- Cules son las caractersticas tintoriales de los Plasmodios en un frotis sanguneo
teido con Giemsa?
7- Cules son las caractersticas morfolgicas del transmisor de este parsito?
BIBLIOGRAFIA
1) Atas Antonio. Parasitologa mdica. Edit. Mediterrneo. ltima edicin.
2) Becerril Flores Romero Cabello. Parasitologa mdica, de las molculas a la enfermedad.
Edit. Mc Graw Hill. Primera edicin.
3) Lpez Pez Myriam Consuelo. Atlas de parasitologa. Edit. Manual Moderno. Primera edicin.
4) Rodrguez Prez Elba. Atlas de parasitologa mdica. Edit. Mc Graw Hill.
5) Salazar Schettino - Haro Arteaga - Cabrera Bravo. Diagnstico morfolgico de las parasitosis.
Edit. Francisco Mndez Cervantes. 2 edicin o la ltima. (Se recomienda su compra)
6) Shore Garca- Ash. Diagnstico parasitolgico, manual de laboratorio clnico. Edit. Mdica
panamericana. ltima edicin.
7) Tay-Lara-Velasco-Gutirrez. Parasitologa mdica. Edit. Francisco Mndez Cervantes. ltima
edicin
8) W. Peters y H. M. Gilles. Atlas a color de medicina tropical y parasitologa. Edit. Year Book
Medical Publishers.
9) Zaman Viqar. Atlas de Parasitologa mdica. Edit. Mdica panamericana. ltima edicin.
10) Aprendizaje de la parasitologa basado en problemas. Ana Flisser & Ruy Prez Tamayo
Edit. Editores de Textos Mexicanos 2006
11) Garca LS, Bruckner DA. Diagnostic medical parasitology American society microbiology.
Washington, DC USA 1993 (2a Edicin) 1997 (3a Edicin)
12) Giono CS, Escobar GA, Valdespino GJL. Diagnostico de laboratorio de infecciones
gastrointestinales. Unidad V Diagnostico parasitologico. Unidad V Bioseguridad y control de
calidad. Unidad V Red nacional de laboratorios de diarrea. nstituto Nacional de Diagnostico y
Referencia Epidemiolgico (NDRE) SSA MEXCO 1994
13) rene de Haro Arteaga & Aurora Candil Ruiz. Diagnostico de las parasitosis en:
parasitologa mdica. De las molculas a la enfermedad. Becerril Flores Marco & Romero
Cabello Ral. EDS. Editorial MC GRAW HLL 2004
14) Tay ZJ, Gutirrez QM, Lpez MR, Manjarrez Zme, Molina LS. Microbiologa y parasitologa
mdicas. Mndez Editores 3a Edicin Mxico 2003
15) Organizacin mundial de la salud. Tablas de identificacin de protozoarios y helmintos
intestinales 2002.
16) National comittee for clinical laboratory estndar (NCCLS). Procedures for the recovery and
identification of parasites from the intestinal tract approved guideline. Pennsylvania 1997.
A()&-'# #$3$'# %" $-3"*-"3!
www.facmed.unam.mx (facultad de medicina de la UNAM)
www.estafilococo.com
www.portalesmdicos.com
www.scielo.cl
www.angelfire.com
www.monografias.com
www.microbiologiaclinica.com
www.parasitologia.uchile.cl
quimicosclinicosxalapa04.spaces.live.com

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