PREPARACIN DE UN FROTIS BACTERIANO

Se denomina frotis a la extensin que se realiza sobre un portaobjetos de una muestra o cultivo con
objeto de separar lo ms posible los microorganismos, ya que si aparecen agrupados en la
preparacin es muy difcil obtener una imagen clara y ntida. Este frotis debe ser posteriormente
fijado al vidrio del portaobjetos para poder aplicar los mtodos !abituales de tincin que permiten la
observacin al microscopio de las bacterias sin que la muestra sea arrastrada en los sucesivos
lavados. "a fijacin de una extensin bacteriana !ace que las bacterias queden inactivadas y
ad!eridas al vidrio alterando lo menos posible la morfologa y bacteriana y las posibles
agrupaciones de clulas que pudiera !aber.
REALIZACIN DEL FROTIS
#. $olocar una peque%a gota de agua en el centro de un portaobjetos limpio. Es necesaria muy
poca cantidad de agua, por lo que se puede usar el asa de siembra, ya que en el extremo curvo
de su filamento queda retenida una mnima gota de agua, que resulta suficiente.
&. 'lamear el asa de siembra, tomar, en condiciones aspticas, una peque%a cantidad del cultivo
bacteriano en medio slido y transferirlo a la gota de agua. (emover la mezcla con el asa de
siembra !asta formar una suspensin !omognea que quede bastante extendida para facilitar su
secado.
Si la muestra se toma de un cultivo en medio lquido, no es necesario realizar los dos primeros
pasos ya que basta con colocar y extender una gota de la suspensin bacteriana, que se toma con
el asa de siembra, directamente sobre el portaobjetos.
). Esperar !asta que el lquido se evapore o acelerar su evaporacin acercando el porta a la llama
del mec!ero. En este caso !ay que tener muc!a precaucin de no calentar demasiado el porta
pues las clulas pueden deformarse o romperse.
FIJACIN DE LAS BACTERIAS AL PORTAOBJETOS
*. +or calor, +asar cinco veces el portaobjetos por la llama durante unos segundos. -ejar enfriar el
porta entre los pases.
.na vez realizado el frotis y fijadas las bacterias, las preparaciones pueden ser observadas al
microscopio, aunque carecen de contraste. "o normal es continuar con el proceso de tincin.
TINCIN DEL FROTIS BACTERIANO
/. $ubrir el frotis con abundante colorante y dejarlos actuar durante el tiempo que indique el
protocolo de cada tincin concreta. Suele oscilar entre # y / minutos. En ocasiones el colorante
ti%e slo en caliente, por lo que el tiempo que dure su actuacin se deber sostener el
portaobjetos con unas pinzas sobre la llama del mec!ero para que !umee el colorante, pero
teniendo muc!o cuidado de que no llegue a !ervir ya que se producira la destruccin de las
clulas.
0. "avar la preparacin con agua para eliminar el colorante. Esta operacin se realiza inclinando el
portaobjetos y aplicando el c!orro de agua en su parte superior de manera que resbale sobre el
frotis, pero sin que vaya dirigido directamente sobre l, pues podra arrastrar parte del frotis
consigo. Eliminar la mxima cantidad de agua de los portaobjetos golpendolos por su canto
con cuidado contra la superficie de la mesa de trabajo.
1. Secar el porta, en ning2n caso se debe frotar el porta.
3. 4bservar la preparacin al microscopio llegando !asta el mximo aumento. Si se quiere montar
de forma definitiva no se debe usar a!ora el aceite de inmersin.
MONTAJE DEFINITIVO DE LA PREPARACIN
"a tcnica siguiente es de aplicacin para cualquier preparacin microscpica que se desee montar
de forma definitiva. Se anotar en un extremo del portaobjetos el contenido de la preparacin, la
fec!a y, en su caso, el nombre del alumno.
5. +asar sucesivamente los portaobjetos por las siguientes soluciones mantenindolos un mnimo
de / minutos en cada ba%o. "a serie de alco!oles puede modificarse en funcin de la
disponibilidad de los reactivos, pero el objetivo es que la preparacin quede totalmente
des!idratada. Escurrir bien el reactivo antes de introducirlo en el siguiente ba%o.
a 6lco!ol de 178
b 6lco!ol de 5/8
c 6cetona pura
d 6cetona9xilol :#,#;
e <ilol
#7. =ontar la preparacin. Emplear blsamo de $anad, euparal o alg2n medio de montaje
sinttico. .tilizar preferiblemente cubreobjetos de &&x&& mm.