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Tabla I. Composicin de clulas tpicas procariotas y eucariotas

Componentes celulares
Por ciento del peso total de clulas
Clulas de E. Coli Clulas de HeLa
Agua 70 70
Iones inorgnicos 1 1
Aminocidos 0.4 0.4
Nucletidos 0.4 0.4
L!pidos 2.2 2."
Prote!nas 1# 22.$
%NA & 1.7
'NA 1 0."#
*El mtodo debe ser eficiente; la mayor parte del A! celular debe aislarse y purificarse.
Tambin debera ser no selecti"o; todas las especies de A! en las clulas deben ser
purificadas con la misma eficacia.

* El mtodo no debe alterar fsica o #umicamente las molculas de A!.

* El A! obtenido debe ser de alto peso molecular y con pocas roturas de cadena sencilla.

* El mtodo debe ser relati"amente rpido y suficiente de #ue no "a a tomar muc$o tiempo o
muc$o esfuer%o para preparar A! de simple. Esto es importante& ya #ue la preparacin de
A! es slo el comien%o de un e'perimento y no un fin en s mismo.
(ay "arios mtodos forisolation de A! #ue& en general& cumplir con la mayora de los
re#uisitos enumerados anteriormente. Todos los mtodos implican cuatro pasos esenciales)
* *otura de CC+.
* Eliminacin de protenas y de A*!.
* ,a concentracin de A!.
* eterminacin de la pure%a y cantidad de A!.
os de los obstculos ms comunes en la obtencin de un alto rendimiento de A! de alto
peso molecular son de ci%allamiento $idrodinmico y la degradacin del A! por A!asas
no especficos. -ara e"itar estos problemas& se deben tomar algunas precauciones
generales. Todas las soluciones deben contener in$ibidores de la !asa y toda la cristalera
2 2 STEI;IAN SURZYCKI
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Table I. Composition of typical prokarvotic and eukarvotic cells
,en rercem ox totax ceu wexgnt
component E. coll ceHs Hea ce!s"""""""""""""""
#ater $%.% $%.%
Inorganic ions &.% &.
%
%.'
%.'
2.(
22.)
*mino acids
+ucleotides
%.'
%.'
ipids 2.2
,rotein &-.%
RNA ..% / / &.$
* T0e met0od s0ould be efficient1 most of t0e ceHular 2+* s0ould be iso3
lated and purified. It also s0ould be nonselective1 all species of 2+* in
t0e cells s0ould be purified wit0 e4ual efficiency.
5 T0e met0od s0ould not p0ysically or c0emicaHy alter 2+* molecules.
5 T0e 2+* obtained s0ould be of 0ig0 molecular weig0t and wit0 few
single3stranded breaks.
5 T0e met0od s0ould be relatively fast and simple enoug0 t0at it will not
take a long time or muc0 effort to prepare 2+*. T0is is important since
preparation of 2+* is 6ust t0e beginning of an experiment and not an
end in itself.
T0ere are several met0ods forisolation of 2+* t0at, in general, fulfl! most
of t0e re4uirements listed above. *H met0ods involve four essential steps7
* CC! breakage.
5 8emoval of protein and 8+*.
5 Concentration of 2+*.
* 2etermination of t0e purity and 4uantity of 2+*.
Two of t0e most common obstacles in obtaining a 0ig0 yield of 0ig0 mo3
lecular weig0t 2+* are 0ydrodynamic s0earing and 2+* degradation by
xonspecific 2+ases. To avoid t0ese problems, some general precautions
s0ould be taken. *ll solutions s0ould contain 2+ase in0ibitors and all glass3
d
9:
3
3
,;
3