Universida de sonora.

Quimico Biologo.
Enzimologia diagnostica.
Proteinas: Precipitacin, dialisis y detreminacin.
Prof. Dagoberto Urbina illiams.
E!uipo "o. #.
$costa %eriget &oberto.
&amirez 'alenzuela (arla B.
)antacruz *omez (arla +.
,- de "oviembre de ,..-. /ermosillo, )onora, 012ico.
3b4etivo.
Utilizar metodoligia para que el alumno aprenda a llevar a cabo la precipitacin, dialisis
y determinacin de proteinas.
0aterial.
Primera parte.
1 Vaso de precipitado de 1 o 2 Lt..
1 Vaso de precipitadod e 25 mL.
1 !gitador.
1 "mbudo.
1 Pipeta de 5 mL.
1 Probeta de 2 o 1 mL.
#egunda parte
1 $radilla.
1 %ubos de ensaye de 1& ' 1.
2 Pipetas de 5 mL.
2 Pipetas de 1 mL.
#egunda parte( )eaccin de biuret.
1. *oloque en su gradilla & tubos de ensaye de 1& ' 1 y numerolos.
2. Pipetee 2. mL. de agua destilada al tubo numero 1.
&. Pipetee 2. mL. de solucin de ovoalbumina al tubo numero 2, y 2. mL de
solucin de ovoglobulina al tubo numero &.
+. !gregue 2. mL. del reactivo de ,iuret a cada uno de los tres tubos. !gite bien y
de-e reposar por 15 minutos.
5. .bserve el color desarrollado en los tubos dos y tres, que deben ser positivos
para la reaccn de ,iuret.
!note sus obsevaciones.
#i se decea /acer el e'perimento cuantitativamente, se /ace primero una gra0ica de
re0erencia de proteina pura, siguendo las instrucciones del cuadro resumen dado a
continuacin. #e mide la densidad optica de todos los tubos a 55 milimicras, y se
gra0ica en papel milimetrico. La densidad optica de los tubos con ovoalbumina y
ovoglobulina se c/eca contra esa gra0ica de re0erencia, y se calcula as1
cuantitativamente la cantidad de prote1na.
Preparacin de la gra0ica de re0erencia.
%ubo
n2mero.
1 2 & + 5 3 4 5 6
#ol. "st.
de prot.
.1 .2 .+ .3 .5 1. 1.5 2. 7
#ol.
#alina.
1.6 1.5 1.3 1.+ 1.2 1. .5 7 2.
)eact. 8e
,iuret.
+. +. +. +. +. +. +. +. +.
9ezclar bien y de-ar reposar por 15 a & minutos. "l tubo n2mero 6 es el blanco.
Utilizando este tubo 6 como blanco se leen todos los tubos a 55 nanmetros. #e gra0ica
en papel milim:trico, densidad ptica contra concentracin de prote1na en miligramos,
sabiendo que la solucin est;ndar de prote1na tiene 1< de prote1na.
3bservaciones y resultados.
%ubo. .bservacin !bsorvancia a 55 nm.
1 =,lanco>. !zul transparente. 7
2. =>. *olor morado. .&53
&.=>. 9orado ligero. .&14
*oncentracion de estandar
?ormula(!bs. *onc. =*onc. #td.>
=!bs. #td >
*oncentracion de la muestra= .voglobulina>
5onclusiones.
#e logro conocer la utilidad de la precipitacion y dialisis de las proteinas , para
determinar la concentacion proteinas, presentes en una muestra.
)oberto !costa Leriget
5onclusiones.
#e cumplio con el ob-etivo.
)amirez Valenzuela @arla ,
5uestionario.
1. *ual es, en general, la solubilidad de las prote1nas globularesA
#on solubles en sistemas acuosos, su 0uncin dentro de la c:lula es mvil y
din;mica.
2. La desnaturalizacin proteica, aumenta o disminuye la solubilidad de la
prote1naA
Una dr;stica disminucin de su solubilidad, ya que los residuos /idro0bicos del interior
aparecen en la super0icie.
&. Bue di0erencia /ay entre C#alting inD y C#alting outDA
La cantidad de sal que se le agrega, en el salting in se utiliza una cantidad menos de
sal para aumentar la interaccin entre las prote1nas y estas precipiten, y en el salting
in para aumentar la solubilidad de la prote1na y disminuir la interaccin entre ellas,
+. Bue signi0ica y como se /ace una precipitacin di0erencial de las prote1nasA
Bue adi0erentes cantidades de la sal van precipitando di0erentes proteinas.
5. *ual es el 0undamento de la reaccin de ,iuretA
*onsiste en tratar una prote1na o p:ptido con *uEE en medio alcalino,
produci:ndose una coloracin viol;cea por 0ormacin de un comple-o de
coordinacin entre el *uEE y los pares electrnicos libres de los nitrgenos de los
grupos imino de la unin pept1dica, siendo la intensidad de color de este comple-o,
proporcional a la concentracion de prote1na presente en la muestra. #on necesarias
por lo menos dos uniones pept1dicas para que tenga lugar la reaccin.
3. Bue quiere decir di;lisis, como se lleva a cabo, y para que sirve en el caso
concreto de nuestro e'perimentoA
"n muc/os casos, la precipitacin provocada por el aumento de la 0uerza inica es
reversible. 9ediante una simple di;lisis se puede eliminar el e'ceso de soluto y
recuperar tanto la estructura como la 0uncin original.
Bibliografia.
FFF.um.esGbbmbiG!yudas8ocentesGPracticasGBuimicaGPractica2GPractica2./tm
FFF.e/u.esGbiomoleculasGP).%GP).%2./tm
FFF.monogra0ias.comGtraba-os15GproteinasGproteinas.s/tml