UNIVERSIDAD NACIONAL DE CUYO

FACULTAD DE CIENCIAS APLICADAS A LA INDUSTRIA

Ctedra: CATLISIS
Prctico de Laboratorio
Enzimas. Amilasa
La amilasa: es una hidrolasa que tiene como sustrato(S) al almidn, glucgeno, dextrinas. Es
elaborada en nuestro organismo por glndulas salivales pncreas.
Actividad prctica
Material necesario:
!robeta de "## ml, embudo, erlemmeer de "## ml, tubos de ensao, ba$o mar%a, varilla de
vidrio, gasa, pipetas, gradillas, mechero, termmetro, papel indicador, me&cla 'rigor%'ica.
Reactivos:
"( Solucin de amilasa: colocar en una probeta de "## ml, ) ml 'iltrar por gasa en
erlemmeer. *iluir seg+n experiencias.
,( Solucin de lugol: odo iodurada.
-( Solucin de almidn : al "."###.
/( Solucin 'isiolgica: 0a1l al 2."###.
Variacin de la actividad enzimtica con el p.
1ada en&ima necesita para actuar de una concentracin ptima de 3
4
. La amilasa
act+a normalmente a p3 aproximadamente 5,#. 6bservaremos el comprtamiento de la
amilasa a distintos p3 (cido, neutro alcalino).
"( Se prepara una gradilla de tubos de la siguiente 'orma:
7ubo 08 En&ima 9eactivo Sustrato
" ) ml " ml de 3
,
6 ) ml
, ) ml " ml 0a36 al ,# : ) ml
- ) ml " ml de 31l al ,# : ) ml
/ ) ml " ml de S.; ) ml
,( <gregar los reactivos siguiendo siempre el mismo orden.
-( =ncubar los / tubos en >? a -@81 durante ,# minutos.
/( En'riarlos colocndolos en un recipiente con hielo sal.
)( <l tubo 08 , se lo neutrali&a con 31l al ,# :, usando un papel indicador, a que la
solucin de odo 'rente al almidn no act+a en medio alcalino por haberse
trans'ormado en hipoiodito.
A( < cada tubo se le agregan "# gotas de lugol.
Si la en&ima amilasa desarrolla su actividad, el tubo no tendr color. En caso
negativo, por el almidn presente, permanecer a&ul.
=nterpreta cada tubo:
7ubo 08 ":BBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBB.
7ubo 08 , :BBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBB.
7ubo 08 -:BBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBB.
7ubo 08 /:BBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBB.
Catlisis !""# $ Esp. =ng. Laura 0aCar ?gter. =ng. <driana DuaCardo Lic. Stella ?aris <lcant+


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Variacin de la actividad enzimtica con el tiempo.
< maor tiempo maor actividad en&imtica hasta un cierto l%mite en que los productos de
reaccin pueden inhibir la reaccin.
Se prepara una gradilla de tubos de la siguiente 'orma:
7ubo 08 <lmidn al
". "###
Solucin ;isilgica <milasa 7iempo
(minutos)
" ) ml #,) ml #,) ml #
, ) ml #,) ml #,) ml )
- ) ml #,) ml #,) ml ")
/ ) ml #,) ml #,) ml ,)
) ) ml #,) ml #,) ml -)
"( =ncubar los tubos a -@81.
,( 9etirar cada uno a medida que van cumpliendo los tiempos respectivos.
-( =nmediatamente a$adir "# gotas de lugol a cada tubo.
/( <gregar los reactivos siguiendo siempre el mismo orden.
Se pueden adicionar ms tubos cada "# minutos. La dilucin de la en&ima debe ser in'erior al
):.
=nterpreta cada tubo:
7ubo 08 ":BBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBB.
7ubo 08 ,:BBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBB.
7ubo 08 -:BBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBB.
7ubo 08 /:BBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBB.
7ubo 08 ):BBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBB.
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E%ecto de la temperat&ra sobre la actividad enzimtica
La actividad en&imtica aumenta al incrementarse la temperatura hasta llegar a un a un
valor mximo que corresponde a la temperatura ptima. !or en&ima de esta la actividad cae
rpidamente. Las altas temperaturas desnaturali&an la en&ima debido a su carcter proteico.
Se prepara una gradilla de tubos de la siguiente 'orma:
7ubo 08 <gua En&ima Sustrato
" " ml ) ml ((((((
, (((((( ((((((( ) ml
- " ml ) ml (((((
/ (((((( (((((( ) ml
) - ml - ml - ml
"( Se colocan los tubos " , en me&cla 'rigor%'ica durante "# minutos.
,( Los tubos - / a -581 (ba$o ?ar%a) durante "# minutos.
-( El tubo ) se mantienen a temperatura ambiente "# minutos.
/( En 'orma posterior se vierte el tubo , sobre el tubo " en me&cla 'rigor%'ica el tubo /
sobre el - en >a$o ?ar%a.
)( *eCar los - tubos durante ") minutos a sus respectivas temperaturas.
A( <gregar una gota de lugol.
=nterpreta cada tubo:
7ubo 08 ":BBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBB.
7ubo 08 , :BBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBB.
7ubo 08 -:BBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBB.
Catlisis !""# $ Esp. =ng. Laura 0aCar ?gter. =ng. <driana DuaCardo Lic. Stella ?aris <lcant+