Revisin

Nature Cell Biology 4 (S1), S57_S63 (2002)

Nature Medicine 8 (S1), S57_S63 (2002)

El estado de la Unin: la biologa celular de la fertilizacin

JANICE P. EVANS
1
Y HARVEY M. FLORMAN
2

1
Departamento de Bioqumica y Biologa Molecular de la Divisin de Biologa de la Reproduccin de la Facultad de Salud
Pblica Bloomberg de la Universidad Johns Hopkins, Baltimore, MD21205, USAemail:jpevans@jhsph.edu
2
Departamento de Biologa Celular de la Universidad de Massachusetts Medical School, Worcester, MA01655,
USAemail: harvey.florman @ umassmed.edu

Publicado en Internet: 01 de octubre 2002 | doi: 10.1038/ncb-nm-fertilitys57



Abstracto
"Mira a las canciones, oculto en los huevos." Carl Sandburg enPrairie
La fecundacin es el proceso por el cual el esperma y el vulo se unen. Una comprensin ms amplia de
los mecanismos que subyacen a estos eventos ha arrojado luz sobre un aspecto importante del desarrollo
de la primera y tambin ha demostrado ser un valioso modelo para estudiar la funcin celular. Adems,
muchas estrategias emergentes para la anticoncepcin y para el tratamiento de la infertilidad se basan en
el mecanismo de interaccin de gametos. En este caso, hablamos de la biologa celular y molecular de la
fecundacin en mamferos, resalte seleccionado avances recientes e intente identificar las preguntas
clave sin respuesta.



la reproduccin sexual se produce a travs de la fertilizacin, en el que dos gametos haploides se unen para producir
un individuo genticamente distinto. Los avances en la comprensin de la fertilizacin son significativos desde varias
perspectivas. Los gametos han proporcionado un sistema modelo valioso para el examen de la biologa celular desde
el siglo 19
1
.Para citar varios ejemplos recientes que ponen de relieve la utilidad continua de estas clulas, nuestra
comprensin de la divisin celular ha sido avanzado por el factor de la mitosis-promover (MPF), por la transduccin de
seales a travs de receptores de guanilil ciclasas y ciclos ciclasas solubles, y por las interacciones celulares de ADAM
(una desintegrina y metaloproteinasa) protenas (vase ms adelante); todas las molculas o las actividades descritas
inicialmente en gametos
2 , 3 , 4 , 5
. Adems, las nuevas estrategias para el control de la poblacin mundial, que se
estima ahora haber superado 6200000000
6
, as como para el tratamiento de la infertilidad, que afecta a ms del
10% de las parejas, es probable que surjan a partir de un conocimiento amplio de los mecanismos de interaccin
spermegg. Finalmente, la fertilizacin convierte dos clulas diferenciadas terminalmente en un cigoto totipotente que
pueden formar todos los tipos de clulas en el cuerpo. Una apreciacin de los mecanismos mediante los cuales los
espermatozoides inician estos eventos puede ser esencial para utilizar los procesos de desarrollo, como la tecnologa
de clulas madre, en contextos teraputicos, tales como el tratamiento de enfermedades degenerativas. Esta revisin
se centrar en reas seleccionadas de la investigacin de la fertilizacin en el que se han realizado avances recientes
o controversias persisten. El lector puede consultar otras revisiones para obtener informacin adicional sobre estos u
otros aspectos de la fertilizacin
7 , 8 , 9
.
Descripcin general de la fertilizacin
Comienza Fertilizacin cuando nadan libremente enfoque esperma los huevos en el oviducto. Estos gametos se
producen dentro de los microambientes nicas del folculo ovrico y el epitelio seminfero testicular.El producto final
de la espermatognesis es un espermatozoide altamente polarizada, que consiste en una regin de la cabeza que
contiene el ncleo y un solo grnulo secretor ampliada, o acrosoma, en la regin apical, y un flagelo que contiene una
matriz de 9 2 de los microtbulos y la vaina asociada protenas. Despus de la liberacin del epitelio seminfero en el
testculo, los espermatozoides se transportan a travs del epiddimo, donde se producen modificaciones bioqumicas y
funcionales adicionales. A continuacin, se almacenan dentro de la cola del epiddimo, donde estn en un estado
funcionalmente inactivo, inmviles e incapaz de interactuar con los huevos
8
.
El complejo de huevos de mamferos que se ovulado y entra en el oviducto consta de tres componentes: primero, el
huevo, detenido en la metafase de la meiosis II en seres humanos y la mayora de los otros mamferos;segundo, la
matriz extracelular del huevo, o zona pelcida, que consiste en tres glicoprotenas (ZP1, ZP2 y ZP3) que se sintetiza y
se secreta por el ovocito; tercero, el cmulo oforo, que consiste en varias capas de clulas de la granulosa folicular
ovrica embebidos en una matriz extracelular compuesta de cido hialurnico ( . Fig. 1 )
8 , 9
.
Higo. 1



Figura 1 | La secuencia de los primeros eventos en la fertilizacin de mamferos.

Una interaccin spermegg comienza despus de la capacitacin espermtica. Un espermatozoide penetra primero el cmulo
oforo ( una ), que consiste en clulas del cumulus (clulas somticas del folculo ovrico) embebidos en una matriz
extracelular (ECM). El esperma a continuacin, en contacto con la zona pelcida ( b ), donde la reaccin del acrosoma se
desencadena por ZP3. Esperma tratado mediante reaccin del acrosoma penetrar la zona pelcida, entrar en el espacio
perivitelino, a continuacin, se adhieren a (c ) y se fusionan con ( d ) de la membrana plasmtica del huevo. El huevo ha
extruido el primer cuerpo polar (PB1) y progresado hasta la metafase II. En la mayora de los mamferos, la fusin
spermegg desencadena la finalizacin de la meiosis. Este modelo se basa en in vitro en estudios de interacciones de
gametos y es consistente con in vivo la fertilizacin, que se produce en el oviducto.
Los espermatozoides adquieren la capacidad de fertilizar los vulos a travs del proceso de capacitacin, durante la
migracin a travs del tracto reproductivo femenino. Espermatozoides capacitados penetrar en el cmulo oforo
asistido por PH-20, una hialuronidasa superficie celular ( 1a. Figura )
10
, en contacto con la zona pelcida y se someten
a la reaccin del acrosoma, un evento de exocitosis dependiente de calcio ( . Fig. 1b ).Despus de la terminacin de la
reaccin del acrosoma, esperma penetrar la zona pelcida, finalmente contacto y la fusin con la membrana
plasmtica del huevo ( Fig.. 1c, d ). Resultados de la fusin de gametos en la activacin del huevo, la formacin
pronuclear y singamia
8 , 9 , 11
.
La capacitacin espermtica
Como se seal anteriormente, el esperma de mamfero son incapaces de fertilizar los huevos hasta que se complete
la reprogramacin funcional, o capacitacin, dentro del tracto reproductivo femenino. Del mismo modo, el esperma de
muchas especies de no mamferos son activados por factores que, o bien estn asociados con los huevos o
engendraron con los huevos
12
. Capacitacin consta de un nmero de procesos componentes, incluyendo: el
acoplamiento funcional de las vas de transduccin de seales que regulan la iniciacin de reacciones acrosoma por
ZP3; alteraciones en la motilidad flagelar que pueden ser necesarios para penetrar en la zona pelcida;desarrollo de la
capacidad de fusionarse con los huevos. Esto va acompaado por alteraciones en el metabolismo, las caractersticas
biofsicas de membrana, cambios en el estado de fosforilacin de protenas, las elevaciones de pH intracelular y los
niveles de calcio, y la hiperpolarizacin de la membrana potencial
9 , 13 , 14
. Gran parte de nuestra comprensin de la
capacitacin se deriva de in vitro estudios, donde un nico conjunto de condiciones de incubacin iniciar estos
eventos
13
, aunque es probable que un grupo de molculas estimuladoras controla varios aspectos de capacitacin in
vivo .
Hay varios factores que pueden conducir la capacitacin in vitro : en primer lugar, el eflujo de colesterol de las
membranas espermticas est mediada por protenas de unin con esteroles e inicia muchos aspectos de la
capacitacin
13
. La reorganizacin de la membrana de los espermatozoides despus de la deplecin del colesterol
puede ser un primer paso en el proceso de capacitacin; en segundo lugar, una serie de protenas de espermatozoides
se fosforila tirosina a travs de un mecanismo dependiente de cAMP
13 , 15
. Espermatozoides de mamferos expresan
una forma soluble de bicarbonato-sensible de la guanilato ciclasa
4
que pueden controlar estos eventos de
fosforilacin
15
. La implicacin de este ciclasa adenilato-bicarbonato sensible en capacitacin tambin puede tener en
cuenta el requisito de bicarbonato extracelular en capacitacin; tercero, las elevaciones de los niveles de pH y
bicarbonato intracelular, con el estmulo asociado de la produccin de cAMP, pueden activar los canales dependiente
de nucletidos cclicos que estn presentes en los espermatozoides y los flagelos estn vinculados al control de la
motilidad flagelar
16
. Esto puede explicar el interruptor a la motilidad hyperactivated que es caracterstico de los
patrones de natacin de espermatozoides capacitados
17
; cuarto, la hiperpolarizacin del potencial de membrana se
produce durante la capacitacin, cuando los canales de calcio de tipo T se liberan de la inactivacin dependiente de la
tensin y por lo tanto capaz de participar en la transduccin de seal de ZP3 (ver ms abajo)
18
. La hiperpolarizacin
es causada, al menos en parte, por un aumento de la contribucin de los canales de potasio en el establecimiento de
la membrana espermtica potencial
14
.
In vivo , mltiples factores de cooperacin son los probables mediadores de capacitacin. Protenas de unin a esterol,
tales como lipoprotena de alta densidad, estn presentes en el oviducto y pueden acelerar el eflujo de colesterol a
partir de esperma
19
. Adems, la progesterona puede regular algunos aspectos de capacitacin: este esteroide est
presente en el medio del oviducto, derivados tanto de lquido folicular y de la secrecin por las clulas del cumulus
oophorus asociados con los huevos
20
. Un objetivo central para futuros estudios es ampliar nuestra comprensin de la
capacitacin de in vitro sistemas a la in vivo situacin.
Spermzona pelcida adhesin
La capacitacin es un requisito previo para el paso de espermatozoides para unirse a la zona pelcida en una forma
especfica saturable. Spermzona inicial pelcida adhesin est mediada por ZP3, una glicoprotena constituyente de la
zona pelcida que se une a los receptores en la cabeza anterior del esperma-acrosoma intacto. ZP3 Aislado tiene
varias de las caractersticas esperadas de una molcula de adhesin, incluyendo la capacidad de unirse directamente a
los espermatozoides
21
y para funcionar como un inhibidor competitivo de la adhesin
22
. Por el contrario, las otras
glicoprotenas zona pelcida, ZP1 y ZP2, carecen de estas actividades
7
.Adhesin a la zona pelcida se basa en
procesos de reconocimiento proteincarbohydrate, a travs de la asociacin de oligosacridos O-ligados (es decir,
cadenas de carbohidratos unidas a polipptido por serinil / threoninyl: vnculos N-acetilgalactosaminil) de ZP3 con un
receptor afn en el esperma
23 , 24
. Oligosacridos de reconocimiento de esperma han sido parcialmente purificada
23
y
la aplicacin de mtodos de espectrometra de masas sensibles pronto pueden proporcionar una definicin molecular
de estas secuencias
25
. Adems, varios de alta afinidad protenas de unin ZP3 se han identificado en el esperma,
incluyendo al menos una protena de unin a carbohidratos y otra protena que muestra las especies /-para la unin
selectiva a la zona pelcida
11 , 26 , 27
. Sin embargo, un receptor de esperma para ZP3 an no ha sido identificado de
manera inequvoca.
Activacin de la reaccin del acrosoma
ZP3 estimulacin desencadena reacciones acrosoma en espermatozoides unidos a la zona pelcida. Cadenas de
oligosacridos ZP3 representan para la adhesin, como se discute anteriormente, pero no son suficientes para
conducir reacciones acrosoma. ZP3 puede ser polivalentes con respecto a la adhesin cadenas de oligosacridos
28
, y
la reticulacin resultante y la multimerizacin de los receptores de esperma inicia la exocitosis. Este modelo se apoya
en observaciones de que la adhesin de oligosacridos cadenas se conjugan con ZP3 en mltiples sitios
28
; que la
reticulacin _-1 ,4-galactosiltransferasa, una protena de esperma implicado en la interaccin de gametos,
desencadena reacciones acrosoma
29 , 30
; y que las estructuras de oligosacridos polivalentes tambin pueden
desencadenar reacciones acrosoma en espermatozoides de invertebrados marinos
31 , 32
.Los primeros eventos de
transduccin de seales ZP3 en espermatozoides incluyen la apertura de tipo T, los canales de calcio activados por
voltaje bajo
33
, dando como resultado una entrada de calcio transitoria y la activacin de las protenas G
heterotrimricas, G
i1
y G
I2
( . Fig. 2 )
34
.Estas respuestas iniciales producen una activacin de la fosfolipasa C
(PLC)
35 , 36 , 37
y la elevacin del pH intracelular
38 , 39
, lo que resulta en un influjo de calcio sostenido que acciona
directamente la exocitosis
38 , 40
.


Figura 2 | Activacin de la reaccin del acrosoma.








Se muestra un modelo de los eventos involucrados en la transduccin de seales ZP3. En la cabeza del espermatozoide, la
activacin del receptor TRPC2ZP3 durante la adhesin a la zona pelcida se traduce en la entrada de calcio a travs de los
canales de tipo T, causando una elevacin transitoria de la concentracin de calcio citoslico y activacin de PLC a travs de
un G i1 y / o G i2mediada por protenas va, lo que resulta en la produccin de InsP 3 y diacilglicerol. PLC y la funcin de
elevacin del calcio transitoria en concierto para producir la entrada de calcio persistente a travs de un canal de TRPC2 que
acciona directamente la reaccin del acrosoma, provocando la fusin de la membrana acrosmica externa con la membrana
plasmtica y la liberacin de contenidos acrosomal. Ver texto para ms detalles.
Estudios recientes se han centrado en la identificacin de la canal que media la fase sostenida de la entrada de calcio
evocadas-ZP3. La Drosophila melanogaster potencial receptor transitorio ( TRP gen) codifica un canal catinico
activado por la luz en las clulas fotorreceptoras
41
. Los siete miembros de los mamferos TRP (TRPC) de la familia
clsica son homlogos de este gen y dpteros son subunidades de candidatos de los canales de entrada de calcio PLC-
dependientes
41
. Los mecanismos de activacin peridica que enlazan la accin del PLC a la apertura de los canales
TRPC an no han sido resueltos. Se han propuesto modelos alternativos, ya sea a base de productos de lpidos o PLC
hidrlisis, o en la generacin de inositol-1 ,4,5-trifosfato (INSP
3
) y la activacin de un calcio-tienda de agotamiento
que funciona con entrada va
41
. Un nmero de TRPC genes se expresan en el mamfero linaje germinal
masculina
42 , 43 , 44
y TRPC2 especficamente se ha demostrado que es una subunidad del canal de entrada de calcio
sostenido en el esperma del ratn que se activa por ZP3 (ref. 43 ). En este sentido, INSP
3
receptores estn presentes
en el acrosoma de esperma
45
y pueden participar en la activacin de los canales TRPC2 por ZP3. Sin
embargo, TRPC2 es un pseudogen en los seres humanos
46 , 47
, y posiblemente tambin en los sistemas de la especie
bovina
42
. Por lo tanto, este papel en la transduccin de seales ZP3 debe ser asumida por otro canal de iones en el
esperma de las especies. Particular atencin se centrar en el papel de otros miembros de la familia TRPC en la
mediacin de la transduccin de seales ZP3 en las especies que carecen de TRPC2. Un nmero de receptor de la
protena factor de unin a N-etilmaleimida sensible solubles (SNARE) protenas estn presentes en la regin
acrosomal de mamfero y esperma de erizo de mar
48 , 49 , 50
, y estos pueden entrada pareja de calcio para la
exocitosis.
En conclusin, la reaccin del acrosoma es un interruptor funcional crtico.Antes de la exocitosis, espermatozoides
capacitados pueden penetrar en el cmulo oforo y se adhieren selectivamente a la zona pelcida
51
, pero la reaccin
acrosmica es un paso requisito previo necesario para el esperma para ser capaces de fusionarse con la membrana
plasmtica de huevo
9 , 14
.
Spermegg adherencia y la fusin de membranas
Despus de la penetracin de la zona pelcida, los espermatozoides se adhieren a y se fusionan con la membrana
plasmtica del huevo ( . Fig. 3 ).La participacin de los espermatozoides fertilina-_ (tambin conocida como una
desintegrina y un dominio de metaloproteasa 1 (Adam1)), fertilina-_ (ADAM2) y cyritestin (adam3), as como CRISP1
(protena secretora rica en cistena 1), en el esperma la adhesin del huevo se indican mediante los estudios que
utilizan anticuerpos, pptidos y protenas naturales o recombinantes
52 , 53
. Adems, el esperma de fertilina-_ y
ratones knockout cyritestin Mostrar reduce considerablemente las capacidades a que se adhieran a la membrana del
huevo, aunque algunos de los pocos espermatozoides que se adhieran pueden pasar a fusionarse con el
vulo
54, 55
. Estudios Structurefunction han identificado motivos funcionales especficos en los mbitos fertilina-_ y
disintegrin cyritestin
56 , 57 , 58
. Las integrinas se encuentran en la superficie de los huevos se cree que son receptores
para los espermatozoides Adams, aunque que miembro (s) de la familia de las integrinas permanece a ser
definitivamente identificado. La evidencia inicial sugiere que _
6
_
1
integrina era un receptor de huevo para fertilina-_
(refs 5961 ), a pesar de la demostracin de que los huevos de _
6
ratones knock-out puede ser fecundado
62
, y otros
datos de
63 , 64 , 65
, sugieren que _
6
_
1
integrina no se requiere para la fertilizacin o fertilina-_-mediada por la
adhesin. La evidencia reciente implica _
9
_
1
integrina como una pareja de unin para fertilina-_ (refs 64 , 65 ), y
otras integrinas de huevo tambin puede estar implicado
63
.

Figura 3 | interacciones de membrana de gametos y la activacin del huevo





una adhesin est mediada por una ADAM esperma interaccin con integrinas de huevo a travs de su dominio desintegrina
(azul oscuro). Al menos tres ADAMs puede participar en la adhesin de los gametos de ratn (fertilina-_,-_ fertilina y
cyritestin). Ligandos de esperma adicionales, incluyendo CRISP1, pueden estar presentes. Protenas asociadas a integrinas
(incluyendo CD9, tal vez otras tetraspaninas y CD98) estn presentes en los huevos, donde parecen facilitar las
interacciones de membrana de gametos. B, la activacin del huevo se inicia despus de que el establecimiento de la
continuidad de la membrana entre los gametos. Un acontecimiento clave en el mecanismo de activacin es la generacin de
InsP 3 , que resulta en la liberacin de calcio desde las reservas intracelulares. El mecanismo a travs del cual InsP 3 se
genera sigue sin resolverse y puede implicar la introduccin de un factor estimulante de PLC (s) de los espermatozoides en
el vulo durante la fusin de los gametos, o la estimulacin de la PLC huevo a travs de las vas de transduccin de seales
(vase el texto para ms detalles). InsP3 a continuacin, se une a la InsP 3 receptor en el retculo endoplasmtico, la
induccin de la liberacin de calcio en el citoplasma de huevo. En equinodermos y ascidia huevos, InsP 3 se genera a travs
de la activacin de un PLC, un proceso que est posiblemente mediado a travs de la fosforilacin de la tirosina por una
quinasa de la familia Src de tirosina (que no se muestra). Este mecanismo no se ha observado en los huevos de mamferos.
Estas protenas de adhesin que median en ambos gametos son propensos a funcionar en el contexto de complejos
multimricos en las membranas plasmticas. En el huevo, una protena asociada a integrinas, la tetraspanina CD9, es
claramente importante para interacciones spermegg.Los espermatozoides no se fusionan con los huevos de ratones
knockout CD9
66 , 67 , 68
, una forma recombinante de una porcin extracelular de CD9 inhibe la fusin spermegg
69
, y
anticuerpos anti-CD9 inhibir la fusin spermegg y la unin de esperma y espermatozoides ADAM a los
huevos
58 ,59 , 62 , 64 , 70
. Otras protenas asociadas a integrinas tambin pueden facilitar la adhesin de
espermatozoides
58
. Esto es consistente con modelos en los que tetraspanins y otra membrana accesorio y protenas
citoslicas modulan la funcin de molculas de adhesin celular
71 , 72
. En los espermatozoides, conocimientos sobre la
importancia de los complejos de protenas de membrana multimricas han llegado a partir de anlisis de perfiles de
expresin proteica de los espermatozoides de los ratones fertilina-_ y knockout cyritestin. Los espermatozoides de
estos ratones han reducido considerablemente las cantidades de otras protenas ADAM
55
y estas deficiencias
moleculares puedan contribuir a los defectos en las interacciones de membrana de gametos.
Despus de la adhesin, fusible de espermatozoides con la membrana plasmtica de huevo. Sin embargo, la base
molecular de este proceso de fusin intercelular sigue siendo difcil de alcanzar. Contrariamente a la hiptesis de
partida
73
, no se piensa fertilina-_ estar involucrado en la fusin de membranas
55 , 74
. Del mismo modo, CRISP1 fue
pensado para mediar la fusin de los gametos, pero ahora se cree que la funcin antes de la fusin de la
membrana
53
. CD9 est implicado en ciertos tipos de fusin de la membrana
71 , 72
, pero no se sabe si CD9 en el
huevo facilita la fusin de gametos (ya sea directa o indirectamente), o en lugar funciones aguas arriba mediante la
mejora de la adhesin de esperma o haciendo que el entorno membrana del huevo 'fusin- competente . Avances
significativos en el proceso de fusin de la membrana se han hecho a partir de estudios de fusin viruscell y la fusin
de vesculas intracelulares. Aunque se sabe menos acerca de los eventos de fusin cellcell, nuevas ideas estn
surgiendo a partir de estudios de erizo de mar y el abuln espermatozoides
75 , 76
.
La activacin del huevo
La activacin del huevo se produce despus de la fecundacin y se inicia el desarrollo embrionario
77
. En todos los
animales y plantas en las que esto ha sido investigados, un evento temprano en la activacin del huevo implica un
aumento en la concentracin de calcio citoslico a aproximadamente 1 _M. Este aumento tiene caractersticas
espaciales y temporales distintas en cada especie. El aumento en la concentracin de calcio citoslico parece ocurrir
entre varios segundos y unos pocos minutos despus de que el establecimiento de la continuidad de la membrana
entre los gametos, y a menudo se produce como una 'onda' que viaja a travs del huevo
77 , 78
.En los mamferos, una
oscilacin de baja frecuencia en la concentracin de calcio citoslico (aproximadamente 12 min de duracin espiga y 1
espiga por 10 min) se genera por InsP
3
, a travs de la activacin de INSP
3
receptores en el retculo endoplasmtico y
la posterior liberacin de calcio secuestrado ( . Fig. 3 ). Oscilaciones persisten durante varias horas anteriores a la
fecha de entrada en la primera mitosis embrionario
79
. El aumento en la concentracin de calcio citoslico induce
salida de detencin y la progresin meitica en la mitosis, y la exocitosis de grnulos corticales, los contenidos de los
cuales modificar la zona pelcida para prevenir la fertilizacin por el esperma adicional
9 , 80
. Estas dos respuestas
difieren en la "dosis" de las oscilaciones de calcio que necesitan
81
. Respuestas de activacin de huevo posteriores
incluyen el reclutamiento de mRNAs materna para la traduccin, los cambios en la sntesis de protenas, y la
activacin del genoma cigticos
9 , 80
.
En las especies de no mamferos, esta respuesta de la concentracin de calcio citoslico puede estar mediada por PLC-
_. Esta isoforma PLC est normalmente activado por la fosforilacin de tirosina, a menudo a travs de una interaccin
de PLC-_ Src de homologa 2 (SH2) con una tirosina quinasa o protenas adaptadoras. Candidato de la familia Src de
tirosina quinasas que pueden estar implicados en esta va se han identificado en equinodermos y ascidias
huevos
82 , 83 , 84 , 85 , 86
. Adems, la inyeccin de PLC-_ dominios SH2 recombinante en estos huevos inhibe la liberacin
de calcio y la activacin del huevo respuestas
86 , 87 , 88
. Sin embargo, PLC-_ dominios SH2 recombinantes y los
inhibidores de kinasa 3-OH fosfatidilinositol-no tienen efecto sobre la activacin del huevo inducida espermatozoides
en vulos de ratn
89 , 90
. La hiptesis alternativa de que el PLC-_ mediar la activacin del huevo es poco
probable. Esta isoforma se estimula tpicamente a travs de un G va dependiente de la protena heterotrimrica; sin
embargo, la perturbacin de la funcin de la protena G no parece inhibir la activacin de los huevos de mamfero por
el esperma
91, 92
.
La investigacin en la activacin del huevo se ha centrado en el mecanismo por el cual el esperma evocan oscilaciones
de las concentraciones de calcio citoslicas en el huevo, y ha examinado en gran parte dos modelos. En un caso, la
unin de un ligando a un receptor de esperma de huevo pueden iniciar una cascada de transduccin de seal que da
como resultado la liberacin de calcio. Sperm Adams y integrinas de huevo se han considerado efectores
candidatos. Sin embargo, aunque existen informes de que los pptidos sintticos que imitan ligandos pueden inducir
la liberacin de calcio en los huevos de las especies bovina y rana
93 , 94 , 95
, no hay otros ligandos de esperma
purificadas que se unen a los huevos han sido demostrado que evocan la activacin del huevo.
Un modelo alternativo sugiere que la fusin de los gametos introduce un factor (s) desde el espermatozoide en el
vulo que inicia la activacin del huevo
77
. La inyeccin de lisado de espermatozoides en vulos induce oscilaciones de
fertilizacin-como de las concentraciones de calcio intracelular. El uso de la inyeccin intracitoplasmtica de
espermatozoides para fertilizar huevos tambin demuestra que el contacto spermegg extracelular no es necesario
para activar los huevos, y los controles y los anlisis se han realizado suficientes para demostrar que no es
simplemente el acto de inyeccin o la introduccin de calcio de la los medios de comunicacin que inicia la activacin
del huevo
96
. Actividad huevo-activacin parece estar asociada con el ncleo de los espermatozoides
97
, posiblemente
en la teca perinuclear
98
, y se desarrolla durante la espermatognesis
96
. Se han propuesto varios candidatos, entre
ellos oscillin (glucosamina-6-fosfato isomerasa)
99
y una forma truncada de la tirosina quinasa c-Kit
100
, pero tambin
hay datos que ponen en duda la participacin de estas molculas en la activacin del huevo
89 , 101 , 102
.La sintasa de
xido ntrico ha sido propuesto para participar en la liberacin de calcio mediada por xido ntrico en huevos de erizo
de mar
103
, aunque esto es un modelo poco probable para explicar cmo se inicia la liberacin de calcio en ascidia y
huevos de mamferos
104
. Un PLC de esperma se puede introducir en el huevo durante la fusin de gametos. Lisados
de espermatozoides de mamferos tienen InsP
3
actividad generadora de
105
;Sin embargo, ninguno de los miembros
de la familia PLC conocidos cofractionate con esta actividad
106 , 107
, y no est claro si hay suficiente actividad de PLC
en un solo espermatozoide para iniciar la liberacin de calcio en los huevos
90 , 105
. PLC-_4 no es un candidato, como
el esperma de los ratones knockout de PLC-_4 puede activar huevos
36
, aunque otras isoformas estn presentes en
los espermatozoides y puede funcionar de esta manera. El mecanismo general por el que un espermatozoide se activa
un huevo sigue siendo en gran medida desconocido y muy controvertida.
Preguntas sin respuesta y direcciones futuras
Esta revisin pretende proporcionar una sinopsis condensada de nuestra comprensin de la fecundacin en
mamferos, con especial nfasis en puntos de acceso y controversias actuales. En aras de la concisin, por lo tanto, no
hemos podido abordar muchos aspectos interesantes de la biologa de los gametos. Adems, hay numerosas
preguntas sin respuesta y las controversias no resueltas en los temas que se revisaron aqu. Muchos de los jugadores
moleculares crticos sobre gametos an deben ser identificados: se completan con los receptores de los
espermatozoides para ZP3, los receptores de huevo para los ligandos de membrana de espermatozoides, as como la
fusin factores mediadores y huevo de activacin de los espermatozoides transmitidas. Los roles mecanicistas de
complejos multimricos en los espermatozoides y de membranas de huevos en la adhesin y la sealizacin estn
slo comenzando a examinar. Con estas cuestiones biolgicas fundamentales pendientes de respuestas y con las
amplias aplicaciones de la biologa celular de los gametos, sta ser un rea frtil de investigacin durante algn
tiempo por venir.