"Laboratorio Integral de Farmacologa Avanzada" M en SHO. Jaime Guerrero Daz del Catillo PRACTICA 1 "MANEJO DE ANIMALES DE EXPERIMENTACON EN ESTUDIOS PRECLINICOS" EQUIPO 3 Integrantes: Antolino Lpez Consuelo Gonzlez Gmez Mara de los ngeles Hernndez Endau Gustavo Martnez Martinez Ana Rosa Snchez Csares Julio
Fecha de realizacin: 14 de Agosto 2014 Fecha de entrega: 18 de Agosto 2014
UNIVERSIDAD DE IXTLAHUACA CUI Incorporada a la UAEMex. OBJETIVOS Observar la diferencia en la absorcin y distribucin de sustancias administradas por diferentes vas, as como reconocimiento interno y comparacin de la anatoma de roedores empleados en el estudio farmacolgico. obtener experiencia en la manipulacin de los animales de los laboratorios, el clculo y administracin de una dosis o a travs de diferente vas y el reconocimiento de la anatoma comparada de los animales de laboratorios. INTRODUCCION El uso adecuado de los frmacos constituye la piedra angular en la teraputica de la enfermedad. La investigacin en el laboratorio de sustancias de diferente origen que Reaccionan con los receptores qumicos, que se encuentran asociados a estructuras celulares que han permitido el descubrimiento y desarrollo de nuevos frmacos. El primer paso de la investigacin consiste de estudios in vitro que ponga en relieves los posibles efectos deseados, despus se determinan en animales experimentados los efectos txicos sobre las dosis letales, si la tolerancia de los animales es aceptable se inician ensayos clnicos controlados. El empleo de animales en la investigacin y enseanza involucra responsabilidad de quienes lo utiliza: por lo tanto debe evitar la crueldad y procurar el bienestar. Es obligatorio de quienes manipulan animales con fines de estudio procurar darles un trato y cuidado apropiado y digno, desde los procedimientos de captura previo al manejo en el laboratorio. Para trabajar con animales de laboratorio es necesario tener en cuenta como mnimo, se cumpla lo siguiente: Garanta de parmetros de calidad gentica y ambiental adecuadas para la experimentacin (agentes patgenos, alimenticios, fsicos, nutricional, habitacional, sistema inmune) Modelo Experimental claro y adecuado para la especie utilizada Calculo preciso del tamao de la muestra a utilizar de acuerdo con el tipo de estudio Factores a considerar en la seleccin de un modelo de experimentacin animal Costo y cuidado del animal Disponibilidad Tolerancia a la cautividad Facilidad de Enjaular Pocos cuidados de mantenimiento Resistencia a infecciones y a enfermedades Homogeneidad Tolerancia a procedimientos quirrgicos Caractersticas biolgicas anlogas al hombre Tamao adecuado para realizar el experimento Informacin y conocimiento de las caractersticas del animal
DIAGRAMA DE FLUJO
RESULTADOS Presencia de fluoroscena en los rganos internos. Grupo No. 1 Va de administracin: Intravenosa Animal No. Tiempo (min) P.C HIG BAZO PULM. COR R.I R.D EST INT OV 1 5 +++ +++ ++ +++ +++ ++ ++ ++ +++ +
Se dividira en 2 partes el trabajo de laboratorio a) Parte teorica audiovisual del manejo en general de animales de laboratorio y revision de la NOM-87 B) parte experimental se formaran 4 grupos de animaescada 1 constara de 6 animales se pesaran cada 1 de los animales el primer grupo se adminastrara via oral, por medio de canuila, fluroceina la dosis depende de los calculos el segundo grupo se administrara via peritoneal por medio de una jeringa fluroceina dosis depende de calculos tercer grupo via subcutanea por medio de una jeringa a los 5 min despues de la administracion de la fluroceina se sacrificaran la mitad de los animaes y se les colocara en una tabla dediseccion y la otra mitad a los 15 min y se realizara lo mismo. se abre longitudinalmente cada uno y se procede a identificar con ayuda de la lampara UV la distribuciuon de la fluroceina, se extraeran los organos y se pesaran anotar resultados. Grupo No. 2 Va de administracin: intraperitoneal (ip) Animal No. Tiempo (min) P.C HIG BAZO PULM. COR R.I R.D EST INT OV 2 15 +++ ++ ++ ++ ++ + + + ++ + Peso absoluto del animal y de cada rgano Grupo No. 1 Va de administracin: intravenosa Animal No. Tiempo (min) P.C HIG PULM. COR RI EST INT OV 1 5 57.0411g 3.3934g 0.8814g 0.4689g 0.4017g 2.3678g 7.0680g 0.3203g
Grupo No. 2 Va de administracin: intraperitoneal (ip)
Porcentaje en peso de cada rgano Grupo No. 1 Va de administracin: intravenosa Animal No. Tiempo (min) P.C HIG PULM. COR RI EST INT OV 1 5 100% 5.9485% 1.5452% 0.8220% 0.7042% 4.1510% 12.39% 0.5615%
Grupo No. 2 Va de administracin: intraperitoneal (ip)
Animal No. Tiempo (min) P.C HIG PULM. COR RIN EST INT OV 2 15 144.42g 6.704g 1.6363g 1.0009g 0.5018G 4.2718g 9.8842g 0.3612g Animal No. Tiempo (min) P.C HIG PULM. COR RIN EST INT OV 2 15 100% 46420.% 1.1330% 0.6930% 0.3474% 2.9579% 6.8440% 0.2501% Valores promedios de los pesos rgano Peso absoluto rata 1 Peso absoluto rata2 HIGADO 3.3934g 6.704g PULMON 0.8814g 1.6363g CORAZON 0.4689g 1.0009g RIONES 0.4017g 0.5018g ESTOMAGO 2.3678g 4.2718g INTESTINO 7.068g 9.8842g OVARIOS 0.3203g 0.3612g
Grfica, que presenta los pesos absolutos de cada rata problema
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 1 2 3 4 5 6 7 Peso absoluto rata2 Peso absoluto rata 1 Resultados de pesos absolutos: comparacin de los dos animales problema. Variable 1 Variable 2 Media 2.128785714 3.480028571 Varianza 6.102808705 13.36277601 Observaciones 7 7 Coeficiente de correlacin de Pearson 0.979950342
Diferencia hipottica de las medias 0
Grados de libertad 6
Estadstico t -2.689725591
P(T<=t) una cola 0.018032921
Valor crtico de t (una cola) 1.943180281
P(T<=t) dos colas 0.036065842
Valor crtico de t (dos colas) 2.446911851
DISCUCIN DE RESULTADOS Para que un frmaco acte es necesario que llegue a su sitio de accin. Para ello, la sustancia tiene que absorberse, esto es, alcanzar el compartimiento acuoso del organismo. As, la distribucin del frmaco dentro del cuerpo puede variar de acuerdo con el flujo sanguneo o la vascularizacin regional de cada tejido u rgano, y la cantidad de droga que cada tejido reciba depende de la concentracin del frmaco en la sangre. A su vez, la magnitud del efecto vara por la velocidad con la que el frmaco penetra al tejido hasta alcanzar niveles suficientes. 1 Por lo tanto al realizar la experimentacin por diferentes vas parenterales, se pudo observar que dichas vas al tener caractersticas especficas presentan cierto tipo de ventajas y desventajas que a la larga se presentarn en el paciente, hablando fuera de la experimentacin puesto que encontramos que la administracin del frmaco mediante la va intravenosa, es una va de urgencia, cuando se requiere principalmente la obtencin de una respuesta inmediata; ya que permite lograr la concentracin sangunea deseada y una respuesta muy rpida; sin embargo esta debe de aplicarse lentamente debido a que se puede crear un shock por velocidad ; es decir una intoxicacin aguda por administracin rpida, 1 afortunadamente no fue el caso de la rata problema nm. 1, en donde la administracin de la fluoroscena fue exitosa y al paso del tiempo se logr una distribucin homognea e instantnea, debido a que dicha va (IV), garantiza que toda la dosis acceda inalterada a la circulacin sistmica, ya que evita el proceso de absorcin 3 corroborando
en la necropsia del animal , puesto que al abrirlo y observar su esqueleto con rayos UV, pudimos notar la distribucin de la fluoroscena en todo el cuerpo del roedor, incluso antes de realizar la necropsia, se observaba la distribucin de la fluoroscena presente en ojos, patas y orejas del animal. As mismo en nuestra rata problema 2, al ser de igual manera una administracin parenteral, se logr una distribucin favorable dentro del sistema del animal, dado a las condiciones que presenta la va de administracin, que en este caso fue intraperitoneal, la cual anlogamente con la VI, es casi tan rpida como esta, debido al contacto directo de la sustancia con los vasos y la zona vascularizada del organismo; sin embargo se emplea muy poco a consecuencia de que puede provocar peritonitis y perforacin de asas 1 ; en dicho problema, la absorcin y distribucin de la fluoroscena fue veloz, aunque no tanto como la IV, y al observarla a rayos UV los rganos expuestos en la necropsia figuraron fluorescencia, sin embargo con la concentracin expuesta en el problema 1; pudiendo adjudicar a que esta distribucin se not menos debido al peso de la rata, ya que en comparacin al problema 1, la rata problema nmero dos pesaba aproximadamente el doble de gramos (145.5g) por lo tanto existi un volumen de distribucin mayo. PESO DE ORGANOS EL POR QUE???? CONCLUSIONES En suma a todo lo realizado con los animales problema, se pudo constatar de que las sustancias administradas en los problemas (rata 1 y 2), cumplen su funcin en base a la zona en la que estas se administren, es decir ya sea intravenosa o intraperitoneal, constatando que existen diversos factores en cuanto a la absorcin y distribucin de la fluorosena, como lo son el tiempo, la va de administracin, el peso del animal, etc.
Una realizacin correcta de clculos, expondr una dosis adecuada para determinado problema.
Una buena administracin de las sustancias a los animales problema, determinara una buena absorcin y distribucin de la fluoroscena.
Los animales empleados para el uso de experimentacin deben de ser tratados con la mejor calidad de vida posible antes de su deceso, evitando estresarlos y lastimarlos, para as cumplir con lo sugerido en la NOM-062, logrando una manipulacin de los mismos de manera satisfactoria.
BIBLIOGRAFA 1. Cotillo P. Atencin farmacutica. Bases farmacolgicas.1 edicin, Lima, Per, Fondo editorial UNMSM. 2004. 2. Brailoesky, S. Farmacocintica. (sede web). La ciencia para todos. 1995 (actualizado en marzo de 2000, acceso 16 agosto de 2014), disponible en http://bibliotecadigital.ilce.edu.mx/sites/ciencia/volumen3/ciencia3/130/html/sec_12.html 3. Snchez a, Merino M, et al. Farmacologa, conceptos bsicos. Mxico. Sefh,es, 2004.PDF. 16 agosto de 2014. 4. Vsquez A. Pautas bsicas para el manejo de animales de experimentacin en investigacin Biomdica. Facultad de Ciencias de la Salud, Universidad del Cauca. 2007; 138 (3): 19-26. ANEXOS Resumen EXPERIMENTAL MODELS FOR THE EVALUATION OF THE HEALING ACTION OF DRUGS. * Raimara Gonzlez Escobar Summary. To repair lesions induced by local assault begins with the process of inflammation, and finally conclude with the repair, this occurs as a sequential cascade of overlapping and closely related processes. Our organism possesses protective mechanisms, such as inflammation and repair, without which the injury would heal. Healing begins very early in the course of inflammation when macrophages start digesting microorganisms; the fibroblasts and endothelial cells form a specialized tissue (granulation tissue) that looks like a granular soft on the surface of the wound. By means of mechanisms involved in the healing of wounds by: repair of parenchymatous cells, migration and proliferation of parenchymatous and conjunctive, cells synthesis of proteins of the extracellular matrix, remodeling of connective tissue and parenchymal elements, colagenization and increased resistance of the scar. There are numerous factors that can influence the failure of clinical trials, in contrast to this, all of these conditions can be controlled in the studies with experimental animals; the Ecumenical show less variability in the thickness of the skin. After being anesthetized occurs them a burn, with an area of 16 cm 2 , which covers 3% of the body surface. The burn is achieved by direct contact to 250 C; a biopsy to the central part of the surface of each burn is performed on the sixth day, cultures for bacterial quantification of burns are and the parameters that are measured are for total healing time. Aseptic wounds in pigs. The main objective of this experimental model is to investigate the ability of the test substance to remove necrotic tissue. As experimental animal pigs of 20 kg of body weight; the remaining tissue becomes necrotic by the application of 20% trichloroacetic acid. The wounds are covered with chiffon hydrophilic and guards against trauma, treated during 3 d, to ensure the desired effect of the acid. The treatment is applied twice a day, for 7 d with tablets of chiffon; for histopathological, before treatment and on days 4, 7 and 11, are carried out biopsies of 6 mm under total anesthesia. These samples are processed histologically for routine observations; for fibrin, collagen stains; differentiation between new fabric and old fabric. In 4 animals, after 7 d of treatment, is administered 1 g 5-bromodeuxiridina (substance is incorporated into the DNA of cells on proliferation) in the vein jugular 1 h before taking samples for biopsies. The domestic pig is considered an animal appropriate for healing studies, the structure of your skin seems to of the human skin more than any other animal laboratory. Promotion of healing. Using rats of the Wistar line of 300 g of body weight, anesthetized and shave in the dorsal area, the treatments are distributed randomly, so that each pass through the different positions of the wounds in each animal. The distribution of a medication applied topically to wounds. Known that the ability of solutes applied topically to penetrate the stratum corneum of the skin barrier, absorption of solute through the wound site is known to be faster through normal skin, for the loss of the primary skin's barrier properties. The rats were anesthetized with intraperitoneal injection (60 mg/kg) of sodium pentobarbital, samples of these tissues from the contralateral side of the abdomen for the determination of the extent of systemic distribution of marked solutes are taken. These experimental models offer different possibilities to study the process, so they are very important tools for the researcher in the evaluation of the mechanism of action by the specific characteristics of each species.