Regulacin de la Expresin Gnica en Protozoos Parsitos

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Las infecciones por parsitos protozoarios se asocian con alta carga de morbilidad y mortalidad
en todo el mundo developin g. A pesar de extensos e ff orts para controlar la transmisin de
estos parsitos, la propagacin de poblaciones resistentes a los medicamentos y la falta de
vacunas e ff caces contra ellos contribuyen a su persistencia como los principales problemas de
salud pblica. Los parsitos deben realizar un control estricto sobre la expresin de genes
implicados en su patogenicidad, erentiation di ff, la evasin inmune, o resistencia a los
medicamentos, y la comprensin de los mecanismos implicados en el control que podran
contribuir al desarrollo de nuevas estrategias teraputicas. Sin embargo, hasta ahora estos
mecanismos son poco conocidos en los protozoos. Recientes investigaciones en la expresin
de genes en los parsitos protozoos sugieren que poseen muchas de las maquinarias cannicas
empleados por eucariotas superiores para el control de genes expres Sion en transcripcional,
postranscripcional, y los niveles epigenticos, pero tambin contienen mecanismos exclusivos.
En este artculo examinamos la comprensin actual sobre la regulacin de la expresin de
genes en Plasmodium sp., Tripanosomtidos, Entamoeba histolytica y Trichomonas vaginalis.
1. Introduccin
Para todas las clulas, la regulacin de la expresin gnica es un mecanismo fundamental para
el desarrollo, la homeostasis y la adaptacin al medio ambiente. En eucariotas, cada paso en el
proceso de la expresin gnica est sujeta a regulacin dinmica, incluyendo los cambios
estructurales de la cromatina, la transcripcin de ADN en ARN, el procesamiento de la
transcripcin, su transporte al citoplasma y la traduccin del ARN mensajero (ARNm) en la
protena.
La activacin de la expresin gnica requiere que las clulas aliviar la represin-nucleosoma
mediada por medio de activadores del pro-protenas que modifican la estructura de la
cromatina. El proceso de activacin se desplaza o remodela la cromatina y abre regiones del
ADN para la unin de protenas reguladoras. La cromatina asociada con la transcripcin
(cromatina activa) se asocia generalmente con una serie de modificaciones de las histonas H3
incluyendo acetilacin de la lisina 9 (H3K9) y H3 metilacin de lisinas 4, 36, y 79 (H3K4me,
H3K36me, y H3K79me), mientras que heterocromatina (inactivo cromatina) parece ser
H3 marcada por la metilacin de lisinas 9 y 27 (H3K9me y H3K27me), as como H4 lisina 20
(H4K20me) [1].
La transcripcin es el proceso por el cual una molcula de ARN se sintetiza a partir de un molde
de ADN. Este proceso se puede dividir en tres etapas discretas: la iniciacin, alargamiento de la
cadena de ARN, y terminacin. Aunque cualquier paso de este proceso puede ser controlado,
iniciacin de la transcripcin es la etapa que generalmente es el ms altamente regulado.
Iniciacin de la transcripcin requiere que un complejo de protenas llamadas factores de
transcripcin generales se unen al ADN a travs de elementos llamados promotores. Los
promotores de los genes codificantes de protenas consisten en elementos centrales y
promotor proximal ubicados 20-3000 pares de bases aguas arriba del sitio de inicio de la
transcripcin, dependiendo del organismo. En metazoos, el promotor de ncleo contiene
tpicamente uno o ms motivos de secuencias, incluyendo la caja TATA, INR, TFIIB elemento de
reconocimiento (BRE), y el ncleo elemento promotor aguas abajo (DPE) [2]. Juntos, estos
elementos de ADN reclutan los componentes del complejo de preiniciacin de la transcripcin
(PIC) que facilitan el posicionamiento y montaje de la ARN polimerasa II (ARN pol II) en el
promotor.
Por lo tanto, la iniciacin de la transcripcin est mediada por la accin con-concertada de
factores de transcripcin junto con la ARN pol II maquinaria transcripcional, una diversidad de
coregulators puente que los factores de unin al ADN a la maquinaria transcripcional, factores
di ff remodelacin de la cromatina erent que cambian el nucleosoma estructura, y un grupo de
enzimas que catalizan la modificacin covalente de las histonas y otras protenas [3].
La sntesis de los ARNm se lleva a cabo por la ARN polimerasa, que se asocia transitoriamente
no slo con la plantilla, pero tambin con muchas protenas Erent di FF, incluidos los factores
de transcripcin generales. Por ltimo, la cadena de ARNm que resulta de la transcripcin
directa, llamado el tran-escritura primaria, se somete a modificacin, a veces bastante
ampliamente, antes de que pueda ser traducido por los ribosomas en la protena.
Las infecciones por parsitos protozoarios causan una alta mortalidad y morbilidad en los
pases en desarrollo y causan una amenaza ing increas-para la salud humana. La falta de
vacunas contra la mayora de las principales enfermedades parasitarias ha hecho la
quimioterapia la nica opcin para el tratamiento. Sin embargo, la resistencia a un gran
nmero de frmacos antiparasitarios actualmente en uso es causa de importantes problemas
de salud. Una mejor comprensin de los mecanismos moleculares que controlan la expresin
de genes implicados en el xito parasitarias de transmisin, patogenicidad, la evasin inmune y
la resistencia a frmacos puede ayudar a desarrollar nuevas estrategias teraputicas. El avance
de las tcnicas de transfeccin de ADN y las herramientas asociadas ahora han impulsado fun-
cional analiza en estas microbianos eucariotas. Adems, la secuenciacin de sus genomas y los
ensayos de microarrays o er ff la oportunidad para llevar a cabo la genmica comparativa de
los genes implicados en la regulacin de la expresin gnica. En este artculo examinamos los
conceptos generales que han surgido con respecto a la regulacin de la expresin de genes en
Plasmodium sp. Tripanosomtidos, Entamoeba histolytica y Trichomonas vaginalis.
Regulacin de la expresin gnica en Plasmodium sp.
La malaria humana est causada por la infeccin de cuatro especies dePlasmodium, P. ovale, P.
vivax, P. malariae y P. falciparum, que se transmiten por la picadura de mosquitos Anopheles
hembra. Malaria un ff refleja hacia arriba de 400 millones de personas en todo el mundo y
produce ms de 2,5 millones de muertes al ao [4].
El ciclo de vida de Plasmodium consta de mltiples rondas de replicacin asexual en el ser
humano y ambas reproducciones asexuales y sexuales en los mosquitos. Durante las etapas
Erent di ff, el parsito sufre una serie de cambios morfolgicos necesarios para infectar y
replicarse en al di ff organigramas Erent ans y clulas de ambos mosquitos y los seres
humanos. Las transformaciones morfolgicas realizadas por este parsito durante su ciclo de
vida implican un alto grado de regulacin de la expresin gnica. Adems, los mecanismos de
evasin y de resistencia a frmacos inmunes tambin depe Nd sobre afinado y preciso el
control de la transcripcin del mRNA.
Genomas. Los genomas de Plasmodium se estima que contener 23-27000000 bases, 14
cromosomas, y aproxi-madamente 5.500 genes, entre ellos muchos miembros de las familias
de mltiples genes que podran estar asociados con la evasin inmune y la variacin antignica
[5-8]. genomas de Plasmodium tienen un alto contenido A / T (P . falciparum 79,6%, P. vivax
67,7%), y, posiblemente, los genes que son excepcionalmente rica en A / T contenido m ay ser
ms recombinogenic y ms probabilidades de estar involucrados en la evasin inmune [9].
Alrededor del 77% de los genes se conserva a travs de las especies Erent di ff de Plasmodium.
Sin embargo, hay algunos di ff rencias entre las especies; por ejemplo, en P. falciparum muchas
de las familias Igene mult involucrados en la evasin inmune se encuentran cerca de los
extremos de los cromosomas y con frecuencia son transcripcionalmente silencioso, mientras
que los miembros de las familias de mltiples genes en P. knowlesi, principalmente un parsito
mono, se distribuyen en los cromosomas y no son stri ctly subtelomeric [8].
Transcriptomes. Perfiles de expresin de ARN en todo el ciclo de vida de P. falciparum y P.
berghei, un parsito de los ratones, se han analizado [10 - 12]. Estos estudios mostraron que la
mayora de los ORF predichos se transcriben durante d e etapa intraeritrocitaria [10, 11].
Adems, esta estrategia ha demostrado que aproximadamente 200 genes se transcriben
especficamente en gametocitos, 41 transcripciones son especficos de esporozoitos, mientras
que 20% de los ORFs predichos se caracteriza como especfica para la etapa intraeritrocitaria
[11]. El anlisis de la transcripcin durante la etapa de intraeritrocitaria a intervalos de tiempo
de una hora mostr una agrupacin de genes basado en la acumulacin de transcripcin
temporal [10]; cada grupo contiene genes relacionados ya sea por diversin o ccin proceso
celular. Un anlisis equivalente incluyendo esporozoito y las muestras de gametocitos
describi de manera similar la coaccumulation de ARNm de genes relacionados
funcionalmente [11]. Por lo tanto, el momento de la expresin de la mayora de los grupos se
correlaciona wi una demanda fisiolgica conocida para ese proceso en ese momento, lo que
sugiere un modo de control, por el que los genes slo se activan "just-in-time", como su
funcin biolgica hace necesario al parsito, despus de lo cual los genes son downregulated.
Rentes estudios Subsequ realizados para encontrar una correlacin entre el mRNA y la
acumulacin de protenas en todo el ciclo de vida mostraron un retraso significativo entre la
deteccin mxima de transcripcin y abundancia de protenas [12, 13]. Estos datos, en
concierto con los anlisis iniciales del genoma del parsito que mostraron una ausencia
relativa de factores de transcripcin [14, 15], sugieren un papel ms predominante para
eventos postranscripcionales en el control de la expresin gnica. Sin embargo, los datos
recientes muestran un ms complejo mecanismo de control de la expresin g eno en este
parsito.
General de la transcripcin. En Plasmodium, la transcripcin de genes codificadores de
protenas es generalmente monocistronic, aunque en P. falciparum no se encontr un ARNm
bicistrnico para el gen MAEBL, que codifica un ligando de unin a eritrocitos, junto con una
ATP sintasa mitocondrial putativo (PF11 0485) de genes [16]. La transcripcin de mRNA se lleva
a cabo por una ARN pol II sensible a bajas concentraciones de -amanitin ,y las bsquedas del
genoma encontraron homlogos de todas las 12 subunidades de ARN pol II y muchos, pero no
todos, de los factores de transcripcin generales (FGT) [15, 17]. Curiosamente, muchos de los
GTFs que an quedaban de la ONU identific, como TAF3, TAF4, TAF6, TAF8, TAF9, TAF11 y
TAF13 contienen histona veces dominios (HFD). En otros eucariotas, estas subunidades HFD-
que contienen forman heterodmeros con TFIID y median el reconocimiento promotor. La
ausencia de la adicin de HFD subun su sugiere una arquitectura inusual del complejo TFIID en
este parsito.
La protena de unin a TATA (TBP) de P. falciparum (PfTBP) tiene baja identidad (42%) a nivel
de la secuencia primaria para el homlogo de levadura arquetpico, pero contiene la mayora
de los residuos que se sabe estn implicados en la unin al ADN [18]. Los elementos de caja
TATA reconocidos por PfTBP estn situados ms aguas arriba de los sitios de inicio de
transcripcin que los de otros eucariotas [19], lo que sugiere un mecanismo de exploracin
para el reconocimiento preciso del sitio de iniciacin transcriptio n. Cmo nunca, la gran
mayora de P. genes falciparum contienen mltiples sitios de transcripcin, y la iniciacin se
produce principalmente en los nucletidos adenina [20]. Esta flexibilidad en la transcripcin
ini-cin puede ser explicado por el Rease inc proporcional en las secuencias de la caja TATA-
como se encuentra en AT-ricos secuencias de aguas arriba.
Otra rencia di ff en la transcripcin de genes en Plasmodium con respecto al modelo clsico de
eucariotas superiores es que durante la fase de intraeritrocitaria del parsito, el complejo de
preiniciacin que contiene PfTBP y PfTFIIE es pre-montado en promotores de todos los genes-
intraeritrocticos expresado, independiente de su actividad transcripcional [21].
2.4. Estudios de Elementos y factores de transcripcin reguladores cis. Sev-va- utilizando
regiones aguas arriba en sistemas de transfeccin para dirigir la expresin de genes reporteros
han demostrado que los promotores de Plasmodium contienen -elemen cis ts varios cientos
bases cadena arriba del sitio de inicio de la transcripcin que puede activar o reprimir la
transcripcin [22 - 27]. Estos estudios tambin han identificado regiones de ADN que pueden
estar implicados en el control temporal de la actividad de transcripcin. Todo el id entified cis-
elementos comparten ninguna similitud con los sitios de unin del factor de transcripcin en
otros eucariotas, y la mayora de ellos contiene homopolimricas (dA: dT) extensiones que
aparecieron en un sesgo estadsticamente significativa sobre lo esperado por azar.
Un enfoque alternativo ap utilizado para identificar elementos reguladores cis putativos en
Plasmodium ha sido a travs de anlisis in silico. La alineacin de las regiones aguas arriba de
18 genes de choque trmico de P. falciparum y la HSP86 secuencias de otras seis especies de
Plasmodium revelaron la pres cia de una secuencia rica en GC ([A / G] NGGGG [C / A]) llama el
G-box, que est presente en mltiples copias aguas arriba de varios calor genes de choque de
Erent di ff especies de Plasmodium [28].
Se han realizado otros estudios basados en la correlacin de la expresin de ARNm y en la
conservacin de secuencias cis-actuando entre las especies divergentes y elementos
reguladores putativos se han encontrado [29, 30]. Un nuevo algoritmo de minera de datos se
llama OPI (basado en ontologas patrn de iden-tificacin) se utiliz para generar grupos
altamente asociados o f potencialmente co-regulados los genes [31]. Con esta estrategia, se
encontraron 34 motivos reguladores putativos. Estos motivos son situado aguas arriba de los
genes co-transcrito que codifican protenas implicadas en una amplia variedad de funciones
celulares incluyendo el desarrollo, la invasin celular y la variacin antignica [32]. Por
ejemplo, un clster OPI de 246 genes de gametocitos asociada revel una secuencia de 10
nucletidos OMIC palindr enriquecido en promotores de la etapa asociada sexuales [31].
Adems, una secuencia que se encuentra aguas arriba del gen que codifica la protena
asociada rhoptry-3 (RAP3) que contiene dos motivos PfM18.1 (ATGCA [N 6] GTGCA) mostraron
unin especfica a extractos nucleares en los ensayos de cambio de movilidad electrofortica
(EMSA) [ 32].
Recientemente, por el uso de programas de descubrimiento de motivos Erent ff tres di, se
identificaron cuatro motivos (ricos en G, C-ricos, CACA y tgtg) [33]. Estos motivos estn sobre-
representados en las regiones re aguas arriba de los genes de 13 grupos expresaron en el ciclo
intraeritrocitaria de P. falciparum [33]. Estos motivos mostraron posiciones similares en
relacin con el sitio de inicio de la traduccin, lo que sugiere que tienen un papel importante
en la regulacin de la expresin [33]. Howev er, los factores de transcripcin que se unen estos
motivos permanecen sin caracterizar.
Inicialmente, el uso de modelos ocultos de Markov (HMM) utilizando 51 motivos comnmente
distribuidos en factores de transcripcin eucariotas para buscar protenas similares en el P.
falciparum Geno me revel que estas protenas representan slo el 1,3% del genoma, mientras
que en otros eucariotas que corresponden al 5,7% [15]. Sin embargo, la identificacin de una
familia ms amplia de factores de transcripcin especficos apicomplexan (ApiAP2) que
contienen al menos un dominio de unin a D NA llamado AP2 indican que la reglamentacin a
nivel de iniciacin de la transcripcin puede ser tambin una funcin crtica en el control de la
expresin de genes en Plasmodium [34 ]. Cada miembro de las 26 protenas de la familia
ApiAP2 contiene al menos una copia de una pequea ( 60 aminocidos) dominio relacionado
con dominios de unin al ADN que se encuentran en los factores de transcripcin respuesta de
la planta Apetala2 / etileno de las plantas [34].
La proyeccin de un conjunto de unin a protenas que contiene todas las variaciones de las
secuencias de ADN de 10-mer identificados putat ive secuencias cis-actuando palindrmicos
por dos fac-tores de transcripcin que contienen dominios de unin a ADN AP2 (PF14 0633 y
PFF0200c) [35]. El anlisis del perfil de la transcripcin durante el desarrollo intraeritrocitaria
mostr que despus de la expresin de PFF0200c, una activacin transcripcional se produce
para la mayora de los genes que contienen los que actan en cis secuencia reconocida por
PFF020c en sus regiones aguas arriba [35], lo que indica un papel importante de esta factor de
transcripcin en el desarrollo del parsito.
Recientemente, anoth factor de transcripcin er de P. berghei que contiene un dominio de
unin al ADN AP2 (AP2-O) se caracteriz [27]. El ARNm AP2-O es sintetizada por los
gametocitos femeninos intraeritrocticos y traducido durante el desarrollo ookinete en el
mosquito. El transcripti en el factor se une especficamente a una secuencia de seis bases
(TAGCTA) situado dentro de un corto 100 - regin de 400 pb del sitio de inicio de la transcrip-
cin de un conjunto de genes implicados en la invasin del intestino medio [27]. La secuencia
de aminocidos del dominio AP2 de AP2-O est altamente conservada entre varias especies de
Plasmodium, y el elemento de los mismos que actan en cis se observ en los promotores de
genes ortlogos de P. falciparum y P. vivax implicada en la invasin del intestino medio [27].
Otros factores de transcripcin identificados en Plasmodium son: un homlogo de Myb1
(PfMyb1) [36], y dos activadores transcripcionales especficos no de secuencias que contienen
el motivo [37, 38] caja de grupo de alta movilidad (HMGB). La cada de expresin Pfmyb1 ts
inhibi desarrollo intraeritrocitaria y produce di ff on diferencial expresin de varios genes con-
que contiene secuencias homlogas elementos para MYB-reguladoras en sus 5 secuencias que
flanquean _ [36]. Los dos factores de transcripcin que contienen el motivo HMG se expresan
en (Pfhmgb2) etapas asexuales (Pfhmgb1) y sexuales de desarrollo del parsito. Knockout del
homlogo HMGB2 en P. Yoelii indujo niveles alterados de una serie de transcripciones de
gametocitos especfica y una reduccin significativa en el desarrollo de ooquistes-ment, pero
la gametognesis y exflagelacin hicieron ocurrir [38].
2.5. Estructura de la cromatina. El control epigentico de genes expresin juega un papel
importante en P. falciparum. Gran parte del trabajo en este parsito se ha centrado en los
mecanismos que controlan la expresin mutuamente excluyente de la familia de genes var.
Cromosomas de Plasmodium, como las de casi todos eucariotas, estn estrechamente
empaquetados en nucleosomas [39]. P. falciparum contiene h eac de las cuatro histonas
bsicos requeridos para el montaje nucleosoma: H2A, H2B, H3 y H4, as como la histona
variantes H2AZ, H2Bv, H3.3 y CenH3 [40]. No gen que codifica la histona H1 enlazador ha sido
identificado en Plasmodium. Los genes para mes ENZY modificacin de las histonas, incluyendo
histona desacetilasas y una histona acetil transferasa-GCN5 similares, han sido identificados en
P. falciparum [41, 42]. De conformidad, se observaron mltiples modificaciones en las histonas
de este parsito [40], lo que indica que en Plasmodium, como en eucariotas superiores,
modificaciones Erent di ff en colas de las histonas trabajo en conjunto para generar un estado
transcripcional.
Los estudios que combinan la inmunoprecipitacin de la cromatina (CHIP) con microarrays
(chip-on-chip) en P. falciparum mostr una correlacin positiva entre una mayor acetilacin de
H3K9 en los genes individuales y los niveles de expresin de genes [43]. De acuerdo, la
inhibicin de la actividad de PfGCN5, la histona acetil transferasa que dirige la acetilacin de
H3K9, los resultados en disminucin de acetilacin H3K9, una disminucin en la actividad de t
ranscriptional de un subconjunto de genes y un progreso de retardo a travs del desarrollo
intraeritrocitaria [44, 45]. En contraste, las agrupaciones de genes silenciados implicados en la
virulencia de P. falciparum se encuentran en la heterocromatina, y H3K9m3 es
especficamente un ssociated con las familias de genes var agrupados en regiones internas del
cromosoma subtelomricas y algunas localizadas en la periferia nuclear [46]. Adems, la
disrupcin del homlogo de la histona desacetilasa a Sir2 (PfSir2) provoca cambios en
H3K9me3 que son ocasionada por la transcripcin monoallelic perturbado [46 - 48], lo que
sugiere que PfSir2 se requiere para el silenciamiento adecuado. Un ortlogo de la protena
HP1, que participa en la formacin de cromatina muy condensada mediante el reconocimiento
de H3K9m2 y H3K9m3, era reciente LY caracterizado P. falciparum [49]. El chromodomain
recombinante de PfHP1 se une a H3K9me2 y H3K9me3, pero no a H3K4m o H3 sin modificar y
en formas vitro homodmeros estables. Chip
Los ensayos mostraron que PfHP1 est vinculada a la heterocromatina de subtelomricas
regiones de repeticin no codificadora [49]. Curiosamente, la presencia de PfHP1 est
directamente relacionada con la baja expresin de los genes diana. En particular, la mayora de
los genes regulados en PfHP1 overe xpression son miembros de variadas familias de genes
[49]. Todos estos resultados muestran la relevancia de la PfHP1 en la regulacin epigentica de
factores de virulencia exportados y variacin fenotpica, y sugieren que en P. falciparum se
conservan los padres Compon elementales del cdigo de histonas en la regulacin de la
expresin gnica.
A fin de evitar la liquidacin esplnica de los eritrocitos infectados, P. expresar una protena
falciparum (PfEMP-1) en la superficie de los eritrocitos infectados que permite su adhesin a
acoger othelium final. El genoma del parsito contiene aproximadamente 60 genes var
polimrficas, cada uno que codifica una forma erent ff di de PfEMP-1. La evasin inmune a
travs de la variacin antignica depende de la capacidad del parsito para expresar
exclusivamente slo un nico gen var a la vez, y para cambiar peridicamente la expresin de
variantes de genes var alternativos, alterando as las propiedades antignicas de la clula
infectada y evitar el reconocimiento de anticuerpos dirigidos contra, expresado anteriormente,
las formas de PfEMP-1 [50]. El mut dualmente expresin exclusiva de los genes var y el
resultado de la variacin antignica de una combinacin de activacin in situ y reversible
silenciamiento gnico. La hibridacin fluorescente in situ (FISH) Los experimentos demostraron
que los genes var presentes en el genoma se agrupan en grupos de 6 -8 perinuclear [51-53].
Las regiones heterocromticas subtelomricas de P. falciparum con genes var silenciosos estn
asociados con altos niveles de H3K9me3 [46]. En contraste, el gen var activo,
independientemente de su localizacin en el cromosoma, se localiza i na subdominio
euchromatic en la periferia normalmente heterocromtica nuclear [51, 52, 54], y que se
enriquece con la marca de activacin H3K9ac [47, 55] . Adems, la modificacin H3K4me3 es
una marca predominante en el gen var activo, pero durante las etapas finales de r del ciclo de
vida, en los que no se expresan los genes var (estado contrapesado), el promotor de la var ms
activo recientemente est enriquecida con dimethylated H3K4 [55].
La presencia de altos niveles de una episomal no regulados var promotor resultados en un ion
downregulat del gen var activo, y cuando se eliminan los parsitos episomas muestran la
activacin de genes var aleatorio [56]. Estos resultados sugieren que en P. falciparum una
transcripcin activa del gen var variante expresado en una poblacin es necesario para la
intenance ma de la memoria celular a travs de numerosos ciclos celulares.
Similares a los genes var, familias de genes subtelomrica de
P. falciparum como rif, stevor o cdigo PFMC-2 para protenas que mostraron variacin
clonal en su expresin, y un programa de epigentica comparable de control ha sido propuesto
para su expresin [57].
2.6. Postranscripcional Reglamento. Traslacional repres-sion es otro mecanismo utilizado por
Plasmodium t o regular su expresin gnica. Una comparacin de los gametocitos tran-
scriptome con los proteomas de gametocitos y ookinetes identific nueve genes para los que
las transcripciones se acumulan en los gametocitos pero no se traducen hasta la etapa
ookinete [12]. Un estudio sub secuente revel que estas transcripciones fueron muy
abundante en el citoplasma de gametocitos femeninos y distribuido como discretos puntuada
compartimentos, similares a th P rganos eucariotas e. El anlisis de la UTR 3 _ a partir de
estas transcripciones revel la presencia de un motivo UUGUU, una secuencia conocidos que
actan en cis para protenas de unin Puf implicadas en la represin de traduccin [58, 59].
Adems, las dos protenas Puf de P. falciparu m se expresan en gametocitos y ookinetes y
exhiben unin a secuencias UUGUU [59].
El anlisis del proteoma de P. berghei gametocitos femeninos identificaron un miembro
abundantemente expresado de las helicasas DEAD-box RNA denominadas Dozi (desarrollo del
cigoto inhibido), tambin implicado en la represin de traduccin a travs de su actividad de
unin de ARN [60]. Dozi interacta con algunos Plasmodium mRNAs y la interrupcin de sus
resultados en un gen que codifica regulacin a la baja de aproximadamente 370 genes,
incluyendo algunos prev que sea importante en la motilidad ookinete temprana, y en el
aborto del desarrollo de la fertilizados gametocitos femeninos [61]. Algunas otras
transcripciones contienen un elemento de respuesta de hierro - una estructura de tallo-bucle
formado en su 5 _ _ UTRs y 3 que se une una protena reguladora de hierro (PfIRPa) para
inhibir la traduccin o para modular la estabilidad del ARNm [62].
Una variante de PfEMP-1 (var2csa) slo se expresa en la presencia de una placenta, lo que
sugiere que su expresin est reprimida en los hombres, nios o mujeres no embarazadas.
Recientemente se demostr que el gen que codifica var2csa contiene un pequeo marco de
lectura abierto aguas arriba que acta para reprimir la traduccin de los ARNm resultantes. El
mecanismo que subyace a esta represin de traduccin es reversible, lo que permite altos
niveles de la traduccin de protenas en presencia de placenta [63].


Regulacin de la expresin gnica en Trypanosom atids
Los miembros de la familia Trypanosomatidae constituyen un grupo fascinante de protozoos
flagelados. Colectivamente, estos patgenos causan millones de muertes en las regiones
tropicales y subtropi cal del mundo. Tripanosomas africanos, transmitida por la mosca tsets
es fli, son responsables de la enfermedad del sueo en los seres humanos y la enfermedad en
el ganado nagana. La enfermedad humana tiene dos formas, dependiendo del parsito en
cuestin. Trypanosoma brucei gambiense se encuentra en frica occidental y central y
representa ms del 90% de los casos informe ed de la enfermedad del sueo, causando una
infeccin crnica, mientras que Trypanosoma brucei rhodesiense se encuentra en frica
oriental y meridional, representa menos del 10% de los casos notificados, y causa una
infeccin aguda [64]. Se estima que 300.000 duales Indivi se infectaron en 2000 [65]. Sin
embargo, el acceso al diagnstico y tratamiento en muchos pases donde la tripanosomiasis
africana era endmica result en una reduccin del 68% en el nmero total de nuevos casos
notificados entre 1995 y 2006 [64]. Trypanosoma cr uzi transmitida por insectos triatominos es
el microorganismo causal de la enfermedad de Chagas s, que es endmica en varias regiones
de Amrica Latina. Se estima que alrededor de 75 millones de personas viven en zonas de
riesgo y 13 millones de personas estn infectadas en la actualidad en Amrica Central y del
Sur. La incidencia mundial de la enfermedad se considera que es 300.000 nuevos casos por ao
[66]. Leishmania es un protozoo parsito que alterna las formas de vida entre una fase
amastigote intracelular que reside en los macrfagos de vertebrados y un extracelular etapa
promastigotes vivos en el tracto digestivo de los flebtomos. Infecciones de Leishmania tienen
diversa manifestacin s clnica, incluyendo cutnea (LC), mucocutnea (MCL), el uso ff di
cutnea (DCL), visceral (VL o kala-azar),-postkala azar dermal leishmaniasis (PKDL) y recidivante
(LR) [ 67]. La leishmaniasis es un problema de salud pblica en al menos 88 pases, entre ellos
algunos de t l ms pobre del mundo [68]. La prevalencia global estimada de todas las formas
de la enfermedad es de 12 millones, con 1,5 a 2.000.000 casos agregados anuales de CL y
500.000 de VL [69].
Genomas. El genoma de T. brucei es de 26 megabases y contiene 9068 genes predicen ed,
incluyendo aproximadamente 900 pseudogenes y aproximadamente 1.700 T. genes -SPECIFIC
brucei [70]. Las grandes arrays subtelomricas contienen un archivo de los genes (VSG) 806
glicoprotena variante de superficie utilizados por el parsito para evadir el sistema inmune de
los mamferos [70].
El tamao del genoma de T. cruzi es de 60,3 Mb organizados en 41 cromosomas [71]. El d
genoma iploid contiene 22.570 genes codificadores de protenas, de las cuales 12,570
representan parejas allicas. Los genes que codifican protenas son generalmente dispuestas
en largos racimos de decenas a cientos-de los genes en la misma cadena de ADN. Putativo
funcin podra ser asignado a un 50,8% de los genes codificantes de protenas predichas [72].
Al menos el 50% de la T. cruzi genoma es secuencia repetitiva, que consiste en su mayora de
las grandes familias de genes de protenas de superficie, retrotransposones y subtelomeric
repite [72]. Los ms grandes familias de genes codifican superficiales p roteins como protenas
de la superficie de mucina asociado (MASP), miembros de la trans-sialidasa (TS) superfamilia,
la glicoprotena de superficie gp63 de la proteasa y algunas protenas hipotticas [72].
El tamao del genoma de Leishmania es ~ 34 Mb y los CHRO-mosomes varan en tamao
desde 0,3 hasta 2,5 Mb [73, 74]. El cariotipo se conserva entre especies de Leishmania (aunque
con considerable polimorfismo de tamao) y los genes son syntenic (con la conservacin de la
orden de los genes) [73-76], excepto que las especies del Viejo Mundo tienen 36 cromosomas
[73] un nd las especies del Nuevo Mundo tener 35 (L. braziliensis) o 34 (L. mexicana) [75].
Una comparacin de las rutas metablicas codificadas por los genomas de T. brucei, T. cruzi,
Leishmania major y revela la capacidad metablica global menos en T. brucei y el mayor en L.
importante [70].
Transcriptomes. Un anlisis de microarray que comprende 21,024 di productos PCR erent ff de
T. brucei se utiliz para la identificacin de genes expresados especficamente en el torrente
sanguneo humano y en etapas procclicas de insecto [77]. Aproximadamente el 2% de los
fragmentos genmicos exhibi
significativa di ff rencias entre los niveles de transcripcin en el torrente sanguneo y procclico
formas. De 33 clones que mostraron sobreexpresin en las formas del torrente sanguneo, 15
contenan secuencias similares a las de los sitios de expresin VSG y al menos otros seis
apareci no codificante de la protena. De los 29 clones-procclico especfica, al menos ocho
pareca no ser la codificacin de protenas [77]. Otros estudios de los cambios transcriptoma
en T. brucei utiliz un microarray de oligonucletidos especfica, que representa el sistema
cking FFI fuertemente regulado por el desarrollo-tra membrana y aproximadamente el 10% de
la T. brucei genoma [78]. Los resultados mostraron que el 6% de la cohorte gen est regulado
por el desarrollo, entre ellos varios GTPasas pequeas, las presas, los factores de la capa de
vesculas y protenas quinasas. Por lo tanto, di ff erentiation dependiente remodelacin
sustancial del tomo trascripcin tripanosoma se asocia con el transporte de membrana.
Recientemente Jensen et al. [79] utilizando microarrays que contienen mltiples copias de
mltiples sondas para cada gen mostraron que aproximadamente una cuarta parte de los
genes que se vea di ferencias ff en los niveles de ARNm, lo que sugiere que a pesar de la falta
de regulacin gnica a nivel de iniciacin de la transcripcin, este parsito realizar una una
amplia regulacin de la abundancia de ARNm asociado con etapas de crecimiento erent di ff.
Sin embargo, mientras que los tripanosomas regulan la abundancia de ARNm a e ff ect Los
principales cambios ac companying di ff erentiation, una determinada di ff estado erentiated
aparece transcripcionalmente inflexible porque la sobreexpresin de genes especficos, cada,
las condiciones de cultivo alterados o estrs qumico no provocan cambios detectables a
estacionario niveles de mRNA Estado [78].
Un T. cruzi DNA microarrays se utiliz para comparar los perfiles de transcripcin de seis
aislamientos humanos: tres desde asintomtica y tres de los pacientes cardacos [80]. Siete
seales se expresaron di ff erentially entre las dos clases de los aislados, pero el
aproximadamente 30 veces mayor de la seal en las cepas cardacos para ND7 fue la ms
pronunciada del grupo. El gen ND7 a partir de aislados asintomticos mostr una delecin de
455 pb desde el nt 222 al nt 677 en relacin con ND7 de la cepa de referencia CL Brener. La
supresin ND7 produce un producto truncado que podran perjudicar el funcionamiento del
complejo I mitocondrial [80]. Estos resultados sugieren que ND7 constituye un objetivo valioso
para el di ff diagnstico on diferencial del infecciosa T. cruzi cepa [80]. Recientemente,
Minning et al. [81] observ t abundancia de transcripcin sombrero es tambin un importante
nivel de regulacin de la expresin gnica en T. cruzi . El anlisis de microarrays de expresin
gnica durante el T. cruzi del ciclo de vida mostr que la abundancia relativa transcripcin de
ms del 50% de los genes estn regulados de manera significativa durante el T. cruzi del ciclo
de vida. Entre los di ff genes regulados erentially eran miembros de grupos paralog, casi el 10%
de los que mostraron patrones de expresin divergentes entre los miembros del clster [81].
Los resultados de varios estudios de microarrays en un Leishmani mostraron que hay un nivel
sorprendentemente bajo de di ff genes er-entially expresadas, que van desde 0,2% a 9% del
total de genes, entre los amastigotes y promastigotes de vida etapas [82-87]. Por lo tanto, la
Leishmania genoma puede ser considerado como expre constitutivamente ssed con un
nmero limitado de genes que muestran expresin de etapa especfica. Quan-cuanti- anlisis
protemico de Leishmania relativa expresin de la protena mostr que existe una correlacin
dbil para la expresin de genes [84]. Por lo tanto, Leishmania expresin de la protena es m
ainly regulada a nivel de los mecanismos de post-transcripcional.
3.3. General de la transcripcin. los tres ARN poli-merases clsica, identificados sobre la base
de su resistencia a la -amanitin, se han detectado en T. brucei [88]. La mayor subunidad de
cada una de estas enzimas ha sido clonado [89]. En la mayora de especies de tripanosomas
someterse variante antignica, con la excepcin de T. vivax , dos ligeramente di ff se
encontraron genes Erent de RNA pol II subunidad [90, 91].
En eucariotas, la ARN pol II es un complejo de protenas de ms de 500 kDa que contiene 12
subunidades, de las cuales 5 (RPB5, Rpb6, Rpb8, RPB10 y Rpb12) se comparten con ARN pol I y
III. El RPB1 es la subunidad ms grande de la T. brucei enzima y RPB1, RPB2, RPB3, un RPB11
nd son los homlogos funcionales y estructurales de las subunidades bsicas eubacterial de la
ARN polimerasa [92]. RPB4 a RPB10 Rpb12 y contribuyen a la capacidad de la enzima para
responder a activadores para unirse firmemente con regiones promotoras, iniciar
adecuadamente las transcripciones de ARN, y garantizar e FFI -ciente y tasa de sntesis de ARN
ACCU [92]. Curiosamente, el homlogo RPB5 (TbRPB5) asociado con el ARN Pol II es di ff erent
de la que se encontraron previamente asociado con el ARN Pol I. Tambin dos genes que
codifican para di ff se identificaron isoformas Erent de TbRPB 6 [92], lo que sugiere la
existencia de isoformas-polimerasa especfica para tanto TbRPB5 y TbRPB6.
Un TBP funcional fue identificado en T. . brucei Esta protena, llamada TRF4, era esencial para
la viabilidad celular y fue reclutado para el gen SL RNA pro promotor [93-95]. Sin embargo, el
TBP carece de dos de los cuatro fenilalaninas importantes que son responsables de la flexin
del ADN a cada lado de la caja TATA. La divergencia significativa en la TBP tripanosoma puede
indicar la variacin funcional en su papel en la trans cripcin [93, 94].
Tandem una ffi purificacin nidad ensayos (TAP) se utilizaron para caracterizar las subunidades
que forman el ARN pol II y III en L. importante [96]. Anlisis de espectrometra de masas del
complejo copurified con marcado-TAP LmRPB2 identific siete RNA pol II s ubunits: RPB1,
RPB2, Rpb5, RPB7, RPB10 y RPB11. Con la excepcin de RPB10 y RPB11, y la adicin de Rpb8,
estos tambin se identificaron utilizando un constructo de TAP-etiquetados de una de las dos
orthologues LmRPB6 [96]. Los ltimos experimentos tambin identificaron la RNA pol III
subunidades RPC1, RPC2, RPC3, RPC4, RPC5, RPC6, RPC9, RPAC1 y RPAC2 [96].
Significativamente, el complejo precipitado por TAP-etiquetados LmRPB6 no contena ningn
subunidades I-especficas RNApol, lo que sugiere que, a diferencia de otros eucariotas,
LmRPB6 no se comparte d por las tres polimerasas pero est restringida a RNA pol II y III.
Adems de estas subunidades de ARN pol, varias otras protenas que copurificadas con ARN
pol se identificaron II y III complejos, estos incluyen un factor de transcripcin potencial, sus
varios tonos, el factor de empalme PTSR-1, protenas de unin a ARN, y otros, lo que sugiere
que que pueden estar asociadas fsicamente con el ARN pol II complejo [96].
La familia Trypanosomatidae posee inusuales Mecha-nismos de la expresin gnica, como tra
policistrnica nscription [97, 98], el procesamiento de trans-empalme del pre-mRNA [99], la
edicin de ARN de los transcritos mitocondriales y tran-cripcin de los genes codificantes de
protenas por la ARN pol I [100]. En estos organismos, los mRNAs nucleares maduras se
generan a partir IPTS transcr primaria por trans -empalme, un proceso que aade un miniexon
39 nucletidos capsulado o lder empalmado (SL) a la 5 _ terminales del ARNm [101]. Los
niveles de estado estacionario de la mayora de los ARNm maduros parecen ser regulada
posttranscriptionally por mecanismos que involucran a sus 3 _ secuencias de la regin sin
traducir [102]. En T. brucei , los genes que codifican la glicoprotena variable de superficie
(VSG) y procclica prote repetitivo cido en (PARP) se transcriben por una ARN polimerasa que
es resistente a -amanitin, lo que indica que los tripanosomas pueden transcribir genes
codificantes de protenas por ARN pol I [103 ].
Los promotores de ARN pol I han sido Char-racterizado ampliamente en tripanosomtidos
[104-106], como lo han sido algunos promotores pol III [107]. Sin embargo, poco se sabe
acerca de las secuencias que dirigen la expresin de genes que codifican protenas de ARN pol
II. La aparente falta de regulacin de la pol II transcripcin y la observacin de que episomal
molculas de una re transcrito en ambas cadenas han dado lugar a la hiptesis de que en los
tripanosomtidos, RNA pol II tiene muy baja especificidad, y que la transcripcin se puede
iniciar de forma indiscriminada en varios sitios a lo largo del policistrnica unidades [108, 109].
Ahora por lo general se ACCE PTED que los genomas trypanosomatid estn organizados en
unidades de transcripcin polycistronic largas. Los genes suelen estar separados por slo unos
cientos de pares de bases y, con algunas excepciones, que no contienen intrones.
3.4. . Cis-elementos reguladores y factores de trans cripcin Slo unos pocos promotores se
han caracterizado en tripanosomas: los de la ribosomal (rRNA), el procclica protena repetitiva
cido (PARP) y la glicoprotena variable de superficie (VSG) los genes de T. brucei [110, 111] y
los de algunos pequeos genes de ARN. Adems, un cis -actuando elemento regulador capaz
de determinar la CADENA de la transcripcin se ha encontrado aguas arriba de un gen de
resistencia a mltiples frmacos en L. enriettii [112]. No hay homologa de secuencia
significativa entre estos promotores o con cualquier promotor eucaritico conocido.
En el caso del promotor VSG, la regin de 70 pb que precede al sitio de inicio de la
transcripcin es do FFI ciente para asegurar la mxima actividad en la transcripcin [113]. En el
caso de los promotores ribosmicos y procyclin, la - regin de 70-1 pb constituye un elemento
central cuya actividad basal es estimulada por un elemento de control situado aguas arriba
alrededor de la posicin - 200 pb [114]. Estos promotores contienen dos tramos, centradas
aproximadamente a - 60 y - 35 pb, que son esenciales para la actividad promotora y cuya
separacin parece ser crtica. Curiosamente, la unin de protenas especficas requiere que el
ADN diana sea si ngle-flexible [115]. Estos resultados sugieren que estos promotores deberan
estar parcialmente desnaturalizado para ser funcional [116].
Muchos grupos han comparado y contrastado los elementos pro-moter del gen SL RNA en
varios Trypanoso-matids [117-122]. En la mayora de los casos, el promotor del gen de ARN SL
consta de tres elementos cortos estrechamente espaciados que se encuentran aguas arriba de
y proximal al sitio de inicio de la transcripcin. El anlisis mutacional mostr que los
nucletidos cerca del sitio de inicio (1), en la posicin - 10 a 10 pb en L. amazonensi s sirven
para dirigir la iniciacin de la transcripcin correcta del gen ARN SL y un elemento aguas arriba
en el promotor ( - 80 a - 60 pb) es esencial para e FFI expresin ciente SL ARN in vivo
Los genes de ARN SL en L. tarentolae se organizan en dos series en tndem independiente,
Hea-d-a la cola, MINA y MIN.B
El MINA matriz contiene ~ 60 copias de genes con 363 pb longitud de repeticin de los cuales
105 se transcriben, lo que resulta en un 96 nt transcripcin maduro. El MIN.B matriz tiene ~ 40
copias, con una periodicidad de 296 nt. Las regiones transcritas en ambas matrices son
idnticos. Las regiones no transcritas contienen un promotor bipartita en - 67 a - 58 pb (la - 60
elementos) y - 40 a - 31 pb ( - 30 elemento) desde el inicio de la transcripcin en el sitio de
MINA matriz [118, 122].
En Leptomonas seymouri una protena denominada factor de unin promotor-1 (PBP-1) que se
une especficamente al promotor del gen de ARN SL en la regin de - 60 a - 70 pb se identific
[125]. PBP-1, la primera, la protena de unin a ADN especfica de secuencia de doble hebra
aislado en tripanosomas se compone de 57, 46 y 36 kDa subunidades [125]. El 46 kDa es una
protena previamente no caracterizado y puede ser nico en tripanosomas. Su estructura
terciaria predicho sugiere que se une al ADN como parte de un complejo. El 57 kDa subunidad
es ortlogos a la protena humana Activacin Pequeo Nuclear 50 (SNAP 50 ), que es una
subunidad esencial de la SNAP complejo [125]. En las clulas humanas, el complejo de SNAP se
une al elemento de secuencia proximal en ambos ARN polimerasa II-y ARN nuclear pequeo
promotores de genes II I-dependientes.
Un complejo de protena que se une especficamente a la - 60 ele-cin del promotor del gen de
ARN SL de L. tarentolae fue-fic iden por EMSA [126]. El complejo cuenta con un total
estimado de 159 kDa y contiene un homologu correo de TBP (LtTBP). Tanto LtTBP y LtSNAP 50
se encuentran cerca del promotor del gen de ARN empalmados lder y los promotores
importantes para tRNA Ala y / o U2 snRNA transcripcin de genes [126].
El uso del anlisis de chip-on-chip para investigar el factor de transcripcin occ de todo el
genoma upancy sugieren que slo hay 184 sitios de transcripcin de iniciacin para los genes
codificadores de protenas en L. importante [127]. Este anlisis tambin extender la
comprensin de las funciones de TBP y encaje 50 en L. importante de la transcripcin, porque
estas protenas parecen unirse a todos ARN polimerasa II y III promotores y parecen tener
patrones de unin idnticos en todo el genoma, por el que se abre la interesante posibilidad
de que el complejo SNAP puede servir como un factor de transcripcin general para la
transcripcin de codificacin de la protena en estas organismo s [126].
El anlisis de la transcripcin del cromosoma 1 de L. importante Friedlin, la cepa de referencia
de la Leishmania Genome Project, revel la presencia de 79 genes putativos, el primero de los
cuales 29 se encuentran en un clster en la cadena de ADN "de abajo", mientras que los
restantes 50 se encuentran en un clster en el "top" strand [128]. El segmento de ADN entre
los dos grupos se llama la "regin de cambio strand". Es importante destacar que el anlisis de
funcionar-en nuclear del cromosoma 1 mostr que la transcripcin especfica, dando lugar a la
produccin de transcritos estables, iniciada dentro de la regin cadena interruptor y procede
bidireccionalmente hacia los telmeros [98]. Estudios de transfeccin estable-apoyan la
presencia de un promotor bidireccional en esta regin del cromosoma 1. Tambin odos que la
transcripcin no especfica de la aplicacin tiene lugar durante todo el cromosoma 1, pero a un
nivel ~ 10 veces menor que la transcripcin especfica de iniciar en la hebra rea -switch. 5 _
amplificacin rpido del cDNA extremos (RACE) estudios localizados los tes SI iniciacin a un <
100 bp regin [98]. As, mientras que en la mayora de los eucariotas cada gen posee su propio
promotor, una sola regin parece conducir a la expresin de la totalidadel cromosoma 1 en L.
importante Friedlin. Aunque estos resultados mostraron que las unidades de transcripcin de
pol II cromosoma 1, no hay tpicos pol II promotor elementos estn presentes en la regin de
73 pb que separa cada unidad de transcripcin. Por otra parte, hay conservacin de la
secuencia se puede discernir entre el rea de cadena-switch en el cromosoma 1 y la regin
hebra interruptor en otros cromosomas de L. importante Friedlin [98].
El anlisis transcripcional por funcionar-en nuclear de cro-Mosome 3 tambin fue descrito
[129]. Este cromosoma contiene 97 genes que codifican protenas putativas organizados en
dos grupos convergentes largos, que estn separados por un ARNt Lys gen [129]. Adems, un
solo gen divergente est situado en el extremo "izquierda" del cromosoma. Los datos
mostraron que la pol II transcripcin en el cromosoma 3 inicia de forma bidireccional entre el
gen ubtelomeric sola s y el grupo de 67 genes adyacentes y cerca del "derecho" de los
telmeros aguas arriba de la agrupacin 30-gen. El tRNS Lys gen se transcribe por pol III.
Transcripcin en ambas hebras termina en la regin tRNA-gen [129].
Los promotores de ARN pol I h ave sido caracterizado di ff especies Erent de Leishmania . El
anlisis del ARN ribosmico (ARNr) promotor del gen de L. donovani mostr que estos genes
estn organizados en el cromosoma 27 como repeticiones en tndem de aproximadamente
12,5 kb. Cada repeticin contiene los rRNAs nit subu y aproximadamente 39 copias de una
secuencia especfica de la especie de 64 pb [106]. El sitio de iniciacin de la transcripcin fue
asignada a 1020 pb aguas arriba del gen 18S rRNA. Una secuencia de 349-pb situada entre las
repeticiones de 64 pb y el gen 18S rRNA parece co ntain un promotor [106]. Tres dominios ( -
76 a - 57, - 46 a - 27 y - se encontraron para mediar la actividad del promotor, lo que sugiere
que el rRNA no es diferente a la de otros eucariotas [106 6-4 pb, en relacin con el sitio de
iniciacin de la transcripcin) ]. Golpes de aleta similares fueron reportados en los promotores
de ARNr de L. importante Friedlin y L. amazonensis , donde el sitio de iniciacin de la
transcripcin de las unidades de rRNA fueron localizados a 1043 y 1048 pb aguas arriba de los
genes de ARNr, respectivamente [130, 131]. Los cinco repetiti elemento (60 pb para L. major y
63 pb para L. amazonensis ) tambin fue identificado en los espaciadores intergnicas, y
construcciones que contienen los promotores de genes de rRNA fueron capaces de conducir la
expresin de genes informadores [130, 131].
3.5. Estructura de la cromatina. Aunque la expresin gnica en Try-panosomatids es
predominantemente regulado posttranscription-aliado, varias lneas de evidencia apuntan a
un papel importante para la estructura de la cromatina y la modificacin en la expresin
gnica, el control del ciclo celular y di ff erentiation [132-134]. En Try-panosomes, todas las
clases de histonas estn presentes y el ADN se empaqueta en nucleosomas [135].
Anlisis de la organizacin genmica de los genes de ARN de SL L. tarentolae mostr que un
nico nucleosoma se coloca en su regin intergnica, dejando el promotor y la regin del gen
transcrito libre de nucleosomas [136]. La periodicidad gama de uno nucleosoma por 363 pb di
ff Ered desde la disposicin de heterocromatina estndar en esta especie de un nucleosoma
por 230 pb. La matriz se dobla an ms por la inte raccin con factores de transcripcin. Por lo
tanto, la disposicin de nucleosomas puede ser vital para el e ffi iniciacin de la transcripcin
ciente del gen ARN SL. Por otro lado, ensayos de chip-on-chip en L. importante sugiere que las
histonas H3 en los orgenes de polycistronic transcripcin de genes que codifican protenas son
acetilado [127]. As, la regulacin global de la iniciacin de la transcripcin se puede lograr
modificando el estado de acetilacin de la histona H3 en estos orgenes [127].
Acetilacin de histonas, la metilacin y la fosforilacin se han descrito en T. brucei y T. cruzi
[137-139]. Adems, un anlisis detallado de las modificaciones de histonas en T. brucei mostr
la falta de residuo de metionina inicial de H2A, H2B y H4 y TH en la alanina N-terminal de estas
protenas podran ser monomethylated [140]. Estos estudios tambin encontraron que la
histona H4 N-terminal est muy modificada, mientras que, en contraste con otros organismos,
la histona H2A y H2B N-terminales tienen relativamente pocos ns modificatio [140]. T. brucei
expres tres miembros MYST-familia distinta, todos los cuales tienen homlogos en T. cruzi y
Leishmania y se describen las funciones redundantes para cada uno de estos histona
acetiltransferasas en el torrente sanguneo formas de T. brucei [141]. Se requiere HAT1
silenciamiento TES Modula telomrica y para el crecimiento, y, posiblemente, para la
replicacin de ADN; HAT2 se requiere para H4K10 acetilacin y el crecimiento; y HAT3 se
requiere para H4K4 acetilacin y es prescindible para el crecimiento. Los ortlogos en
Leishmania probabilidades tienen papeles sim ilares. Las funciones no redundantes para T.
brucei HAT1-3 parece reflejar sustratos nicos para cada acetiltransferasa y apoyar an ms la
idea de un cdigo de histonas no redundante simplificada en estos parsitos divergentes [141].
3.6. . Post-Transcripcin Reglamento al La Organiza-cin general de tripanosomtidos genes en
unidades policistrnicos significa que la mayora de los genes se transcriben a una tasa
equivalente en grandes racimos policistrnicos; por consiguiente, debe estar presente un
hanism mec post-transcripcional en estos organismos para controlar la expresin gnica.
Sntesis constitutiva del transcriptoma y seleccin de los mensajes adecuados slo en la etapa
de maduracin, probablemente, permite al parsito para cambiar la expresin de genes
rpidamente para sobrevivir y adaptarse a un nuevo entorno. Aunque este sistema requiere la
degradacin permanente de una fraccin importante del transcriptoma, tripanosomtidos han
evitado la carga de la codificacin de redes de factores de transcripcin especficos y
secuencias diana.
Post-transcripcin al reglamento puede ser ejercida a travs de elementos de la secuencia de
las regiones intergnicas. Evidencia de la funcin primordial de las regiones no traducidas
(UTRs) para determinar la relativa abundancia de ARNm etapa especfica ha acumulado [142,
143]. El 3 _ regin-terminal de un VSG d procyclin transcripciones regula la expresin de un
gen reportero de una manera inversa, dependiendo de la forma del desarrollo del parsito
[143]. En el caso de VSG ARNm, la secuencia de 97 nt aguas arriba del sitio de poliadenilacin
es responsable de estos e ff ECTS. La regulacin se produce a travs de una variacin de la
abundancia de ARNm que no es debido a un cambio en la transcripcin primaria. En la forma
torrente sanguneo este e ff ect se manifiesta por un aumento en la estabilidad del ARN,
mientras que en la forma procclica parece estar relacionada con una reduccin en el e FFI
eficiencia de la maduracin del mRNA [143]. El 3 _ -end VSG de ARNm puede obviar la
estimulacin de 5 a 10 veces de la transcripcin dirigido por el promotor procyclin durante di ff
erentiation desde el torrente sanguneo a la forma procclica [143].
Un anlisis de sesgo codn sinnimo en Trypanoso-matids mostr el enriquecimiento de
codones "preferidos" de los genes ms altamente expresado [144]. De acuerdo con la
traduccin de seleccin, genes de ARNt afines para codones favorecidos estn sobre-
representados [144]. En additio n, codn sesgo relativo se conservan entre los genes ortlogos
de Try-panosomatids divergentes ( T. cruzi , T. brucei , L. major ), incluso en los genes que se
cree que se expresa en el nivel bajo [144]. Tomados en conjunto, los resultados sugieren que el
control del nivel de translati en es un importante mecanismo subyacente di ff protena on
diferencial expresin en tripanosomtidos.
Regulacin de la expresin gnica en Entamoeba histolytica
Entamoeba histolytica , un parsito protozoario entrico, es el agente etiolgico de la
amibiasis humana. Se ha estimado que cada ao se producen 50 millones de casos de
amibiasis invasiva y aproximadamente 110.000 muertes, pero, curiosamente, slo el 10% de
los sntomas de la enfermedad presentes personas infectadas expresadas como la amibiasis
intestinal o extraintestinal [145]. Los mecanismos moleculares que participan en la invasin del
parsito no se entienden completamente. Diversas poblaciones de E. histolytica , incluyendo
los clones derivados de una cepa particular, la visualizacin di ff fenotipos de virulencia erent
[146-148]. Adems, trofozotos cultivados desde hace mucho tiempo, que muestran poca
capacidad para producir abscesos hepticos en animales de experimentacin, recuperan su
virulencia despus de la incubacin con el colesterol o con ciertos tipos de bacterias, o
despus de su paso por el hgado de hmster [149-152]. Este ior behav podra ser debido a
cambios en la expresin de ciertos genes. Adems, el ciclo de vida de este parsito que implica
la conversin reversible de las formas infectantes (quistes) a las clulas invasoras (trofozotos)
se espera que sea debido a la di ff on diferencial expresin de E. histolytica genes.
4.1. Genoma. El genoma de este parsito se compone de 23.751.783 pb distribuidos entre 888
sca ff edad y contiene aproximadamente 9938 genes [153]. Se ha di fi culto para determinar el
nmero de E. histolytica cromosomas, ya que no se condensan [154]. Sin embargo, se ha
reportado la presencia de 14 grupos de ligamiento independientes [155]. Adems, el genoma
de este parsito contiene un nmero de plsmidos como molculas circulares [154]. Las
regiones intergnicas e ar de 400 pb a 2,3 kb, lo que sugiere un apretado embalaje de genes
[154]. Aproximadamente el 25% de la E. histolytica genes contienen intrones, con un 6% de los
genes que contienen mltiples intrones [153]. Secuencias de intrones son relativamente cortos
(46 a 115 pb), y contienen el d inucleotides GU y AG en las zonas donantes y aceptor de
empalme, respectivamente. Alrededor del 10% del genoma de los genes de ARNt consistir
organizados en series en tndem que varan en longitud de la unidad 490 a 1775 pb y que
contienen de 1 a 5 genes tRNA [156]. Los genes de ARNr se encuentran exclusivamente en
molculas de ADN circular extracromosmico con un tamao aproximado de 26 kb [157]. Los
genomas de E. histolytica y otras especies de Entamoeba tienen un alto A / T contenido
(77,6%), con la excepcin de E. moshkovskii , que ha s aproximately10% menos contenido A / T
[154].
4.2. Transcriptome. E. histolytica sufre el reversible cambiar entre los quistes infectantes y los
tropho-zoitos invasivos. Identificacin de genes implicados en la va de desarrollo se examin
por todo-g enome transcripcional de perfiles [158]. Aproximadamente, el 15% de los genes
anotados son potencialmente regulado por el desarrollo. Genes enriquecidas en quistes (672
en total) incluyen cistena proteinasas y protenas quinasas trans-membrana. Genes
enriquecidas en trofozotos (767 en total) incluyen genes implicados en la invasin de tejidos,
reguladores putativos de di ff erentiation, incluyendo posibles receptores acoplados a
protenas G, protenas de transduccin de seales y factores de transcripcin [158]. Un
nmero de E. histolytica genes especficos-etapa tambin fueron regulados por el desarrollo
en el parsito reptil E. invadens [158], lo que indica que probablemente han conservado
funciones en Entamoeba desarrollo.
La mayora de las infecciones humanas con E. histoly-tica permanecen asintomticos. En
algunas infecciones t rophozoites invaden la mucosa intestinal que producen disentera, y en
una pequea fraccin de las infecciones, trofozotos difundir al hgado, donde inducen la
formacin de abscesos. Se supone que la capacidad de E. histolytica trofozotos para sobrevivir
en el husped y destruir los tejidos del husped se lleva a cabo por la regulacin especfica de
una serie de protenas de amebas.
Un anlisis de la transcripcin de todo el genoma de E. histolytica realizado en trofozotos
aisladas de los dos puntos de seis ratones infectados y de la cultura tro vi revel 523
transcripciones (5,2% del total de E. histolytica genes), cuya expresin fue cambiado de
manera significativa en trofozotos aisladas del intestino [159]. Los genes que modifican su
expresin en trofozotos obtenidos de los ratones codifican eins prot implicados en el
metabolismo, la defensa de oxgeno, la sealizacin celular, la virulencia y la actividad
antibacteriana [159]. El control de los cambios observados en el transcriptoma podra
potencialmente descansar con cuatro protenas relacionadas con dominios de ADN que fueron
ciados abajo-Regul en el ambiente intestinal [159] de unin.
Comparacin de la abundancia de ARN entre E. histolytica trofozotos aisladas de abscesos
hepticos de los animales experimentales y los obtenidos a partir del cultivo in vitro
encontraron que al menos siete E. histolytica genes fueron especficamente hasta reguladas y
cinco fueron regulados en trofozotos aislados a partir de hgados [160]. Los genes codifican
protenas especficamente hasta regulados asociados con choque trmico, algunas protenas
ribosomales, la ciclofilina, ferredoxina 2, y el centro GTPasa RAB7D s, mientras que dos de los
genes regulados hacia abajo codifican miembros de una familia de protenas que contienen
tramos de secuencias repetitivas que son ricos en lisina y residuos de cido glutmico [160].
Todos estos resultados apoyan la idea de que la invasin del husped r Requiere la regulacin
y la accin concertada de una variedad de protenas de amebas.
El resultado de la infeccin por variada E. histolytica podra ser debido tambin a di ff rencias
en la virulencia de la E. histolytica aislamientos. La comparacin de los transcriptomes de
cepas HM1: IMSS (altamente virulenta) y Rahman (bajo virulenta) mostraron 353
transcripciones que mostraron al menos una doble di ff rencia entre las cepas; 152
transcripciones se expresaron en niveles ms altos en HM1: IMSS y 201 transcripciones se
expresan en ms Rahman cepa [161]. El genes di ff erentially expresado incluido cistena
proteinasas (CPs), miembros de la familia de AIG, y lecti cadenas n de luz [161]. Los genes de
las proteasas de cistena EhCP4, EhCP6, y EhCP7 se expresaron aproximadamente de tres veces
en HM1: IMSS que en Rahman cepa [161]. En contraste, la expresin de los genes de las
proteasas de cistena EhCP8, EhCP112 y EhCP3 fue mayor en la cepa Rahman que en HM1:
IMSS [161]. El ms llamativo di ff rencia fue visto en la expresin de EhCP3, que fue de
aproximadamente 100 veces mayor en Rahman de HM1: IMSS [161]. Curiosamente, en la
ameba no patognica E. dispar , EhCP3 se expresa en niveles ms altos en comparacin con E.
histolytica [162]. Todos estos resultados validan la hiptesis de que CPs tienen un papel
importante en la E. histolytica virulencia.
Adems, E. histolytica trofozotos requieren di ff protenas Erent para sobrevivir cuando son
expuestos a di ff condiciones ambientales Erent. El patrn de expresin gnica de E. histolytica
trofozotos expuestos a una tensin de choque trmico mostraron un gen abajo masiva
regulacin [163]. De los 1131 genes nicos sondeadas por el microarray, 471 (42%) fueron
reprimidos significativamente durante el tratamiento de choque trmico. Un pequeo nmero
de genes fueron hasta regulada por choque trmico; incluyendo los que codifican las protenas
de choque trmico del hsp90 y la hsp70, algunas protenas hipotticas y factores reguladores
como BRF, y una transcriptasa inversa putativo [163]. Tratamiento de choque trmico tambin
induce la transcripcin de algunos genes CP [163]. El gen EhCP6 fue especialmente hasta
regulada por choque trmico, lo que indica la actividad particular de esta proteasa estrs ng
duri debido a su papel potencial en la degradacin de protenas daadas. Este estudio tambin
encontr que algunos alelos de los genes que codifican para las subunidades de la galactosa /
N-acetil-D-galactosamina-inhibirse lectina pesada (Hgl) y la luz (LGL) (Gal / GalNac Lect in)
estaban involucrados en la respuesta de choque trmico [163].
4.3. Transcripcin general. En E. histolytica muy pocas secuencias y, por lo tanto, se han
identificado factores de transcripcin, aislado, caracterizado y no slo a nivel estructural, pero
en el nivel de funcin al, tambin.
La transcripcin de genes codificadores de protenas es mono-cistrnico y el ARNm es
sintetizado por una RNA polimerasa resistente inusual a -amanitin [164]. El ncleo promotor
de varios genes codificantes de protenas contiene tres motivos conservados [165, 166], y de
acuerdo con el estudio de di ff erent E. histolytica promotores de genes, el tamao de la
funcional regin promotora es entre 200 900 pb [167-173]. TBP es el nico miembro de la
maquinaria de transcripcin basal de este parsito caracterizado hasta el momento. EhTBP
tiene 234 residuos de aminocidos y su dominio funcional mostr 55% de identidad de
secuencia a TBP de Homo sapiens [174]. El EhTBP recombinante formada complejos
especficos con la secuencia de consenso TATA-box de E. histolytica y con otros motivos TATA-
como [175], i ndicating que esta protena es ms promiscu-ous de los PDD de humano y la
levadura. Este comportamiento de EhTBP probablemente se debe a la presencia de
modificaciones en algunos residuos de aminocidos implicados en la unin al ADN.
4.4. Elementos y factores de transcripcin cis-regulador.
A nivel estructural, los principales promotores de E. toriatolytica contiene tres conservan
elementos: laTATA-caja ( ~ -35 a- 25 pb) enriquecido en T y Abases ( TAT / G T / G / A T / G / A
A / G AA C / G): la secuencia del iniciador AAAAATTCA (INR) que se sita el emplazamiento-
cin ini transcripcin, y el elemento de GAAC (AA / TGAACT) [ 165, 176]. El elemento GAAC
controla la velocidad y el sitio de iniciacin de la transcripcin, media la activacin
transcripcional por algunas regiones reguladoras aguas arriba, y funciona de una manera
dependiente del contexto [176].
El desarrollo de ADN mediada por transfeccin de E. histolytica [177, 178] permiti la
caracterizacin de cis -actuando elementos promotores necesarios para la expresin de genes.
Sin embargo, hasta ahora se han analizado algunos promotores aguas arriba de los genes de
codificacin de protenas a nivel estructural y funcional; entre ellos se encuentran los
promotores de genes codifican la subunidad pesada de la lectina Gal / GalNac ( hgl2 y hgl5 ),
las protenas de resistencia a mltiples frmacos EhPgp1 y EhPgp5 , la EhADHCP complejas, y la
pequea GTPasa EhRabB [167- 173].
El promotor de la hgl2 gen incluye dos elementos reguladores; una secuencia de 100 pb
situado aguas arriba del sitio de inicio de tran-cripcin similar al motivo CCAAT caja que se
encuentra en algunos promotores de genes de eucariotas superiores, y una secuencia de 15 pb
situado en - 520 pb [167]. Este estudio tambin mostr que las mutaciones en la caja TATA
putativa o en el elemento ATTCA redujeron la actividad del promotor de 20 a 56% con
respecto a la mostrada por el promotor de tipo salvaje [167].
La actividad transcripcional completa de la hgl5 promotor del gen se obtuvo a travs de 272 pb
aguas arriba del sitio de iniciacin de la transcripcin [168]. Cinco elementos de regulacin
aguas arriba (Ures) fueron identificados en esta regin; cuatro de ellos actan como elementos
reguladores positivos: URE1 ( - 49 a - 40 pb), URE2 ( - 69 a - 60 pb), URE4 ( - 189 a - 160) y URE5
( - 219 a - 200), mientras que el URE3 motivo ( - 89 a - 80) lleva a cabo una actividad de
regulacin negativa [168]. Sin embargo, las funciones URE3 como un elemento regulador
positivo en la ferredoxina ( fdx1 ) regin promotora [179].
URE4 est formado por dos repeticiones directas de nueve pares de bases y funciona como un
potenciador en el hgl5 gen [180]. Dos polipptidos de 28 y 18 kDa y, nombrados EhEBP1 y
EhEBP2, reconocen la secuencia URE4 [181]. Estas protenas contienen dos (EhEBP1) y uno
(EhEBP2) secuencias de Homol ogous al motivo RRM reconocimiento de ARN. Este dominio se
ha encontrado en un gran nmero de protenas de unin de ARN-y en varias protenas de
unin a ADN especficas de secuencia [182]. La expresin de EhEBP1 en trofozotos disminuy
la expresin de un gen informador bajo el control de la hgl5 promotor [181], lo que demuestra
el papel de la protena EhEBP1 en el control transcripcional de E. histolytica .
Usando una pantalla de un hbrido de levadura, una protena de 22,6 kDa que se une
especficamente a URE3 (URE3-BP) fue identificado [183]. Esta protena contiene dos motivos
EF-mano, que es el motivo de unin a calcio ms comn encontrado en las protenas, lo que
sugiere que la actividad de URE3-BP puede estar regulada por el calcio. De hecho, se demostr
que concentraciones relativamente altas de calcio (100-500 mM) inhibi la actividad de unin
a ADN de URE3-BP [183]. Chip ensayos corroboraron la interaccin dependiente de calcio de
URE3-BP con tanto hgl5 y fdx1 promotores. Recientemente, se demostr que varios genes de
E. histolytica estn regulados por URE3-BP [184]. El motivo URE3 se encontr en las 59
regiones promotoras de los genes modulados por URE3-BP. Estos genes codifican protenas
implicadas en el metabolismo de cidos grasos y protenas en potencial de membrana, lo que
sugiere que URE3-BP podra ser contratado para remodelar la superficie de los trofozotos en
respuesta a una seal de calcio [184].
El anlisis de la EhPgp1 promotor del gen revel que no contiene un motivo de caja TATA, pero
tiene una secuencia Inr putativo y varios sitios de iniciacin de la transcripcin [169]. Por otra
parte, este promotor contiene secuencias similares a algunos cis -regulador elementos de
eucariotas superiores, tales como C / EBP, GATA-1, OCT y motivos HOX. Varios de estos
elementos fueron capaces de competir en el ADN vinculante actividad de extractos nucleares
en EMSA [169]. Anlisis mutacional de algunos de estos elementos demostraron la relevancia
funcional de tres regiones del EhPgp1 ncleo promotor; dos de ellos corresponden a sitios de
regulacin C / EBP ( - 54 a - 43 pb y - 198 a - 186 pb) [185]. Protenas nucleares de los
trofozotos se unen especficamente a estas secuencias C / EBP, y dos polipptidos de 25 y 65
kDa fueron reconocidos por los anti-C / EBP anticuerpos *185]. Estos resultados sugieren la
presencia de C / EBP como protenas en E. histolytica . La otra secuencia funcional identificado
en el EhPgp1 promotor del gen contiene secuencias repetidas y GATA-1, Gal4, Nit-2 y C / EBP
secuencias de consenso [186].
En la emetina resistente clon C2, la EhPgp5 gen muestra un patrn de expresin inducible
cuando trofozotos estn expuestos a la droga. El anlisis estructural de su promotor mostr la
presencia de una caja TATA en - 31 pb y una secuencia de consenso Inr situado slo tres
nucletidos corriente arriba del codn de inicio [170]. Por ensayos de extensin de cebadores,
se detect una nica asignacin de producto en la secuencia de Inr en el ARNm del clon C2
crecido en presencia de 225 M de emetina (C2 225 ). Sin embargo, este producto no se
detect en el ARNm de trofozotos cultivadas en ausencia de la droga; en cambio,
encontramos un producto de extensin del cebador menor a las 16 bases abajo del ATG, que
no tiene ORF [170]. Estos resultados sugieren que EhPgp5 la expresin del gen podra estar
asociada con la seleccin exacta del sitio de iniciacin de la transcripcin. Secuencias de
consenso para la unin de AP-1, HOX, C / EBP, octubre-1, PIT-1, OCT-6, CF-1 y MYC se
detectaron en el EhPgp5 promotor [170]. Gel ensayos de competicin de cambio mostraron
evidencia de que algunas protenas nucleares similares a los factores de transcripcin podran
reconociendo especficamente sitios de unin de ADN. Los ensayos funcionales promotor
mostraron que la EhPgp5 promotor del gen era activo en trofozotos transfectadas del clon C2
en ausencia de emetina, pero su actividad se incrementaron cuando trofozotos se cultivaron
en 40 M de emetina, mientras que la actividad transcripcional fue convertido o ff en la
droga-sensible clon A [170]. Estos resultados sugieren que la emetina es un inductor de la
EhPgp5 ms de expresin en trofozotos de clon C2. Supresin anlisis de la EhPgp5 regin
promotora delimitado un fragmento de 59 pb ( - 170 a - 110 pb) en el que el elemento de
respuesta a la emetina podra estar situado [187].
La protena EhRabB es una GTPasa Rab situado en pequeas vesculas que en de tipo salvaje
trofozotos son trasladadas a la membrana plasmtica y para bocas fagocticas durante la
fagocitosis [188], mientras que, en trofozoitos deficientes en la fagocitosis ms de estas
vesculas permanecen en el citoplasma [189] . El EhrabB gen se localiza cerca de los Ehcp112 y
Ehadh112 genes, cuyos productos formar el complejo EhCPADH, que est implicado en el
mecanismo patognico de la E. histolytica [190]. Estos tres genes abarcan una regin de 4500
pb llamado virulencia locus ( VI ) [172], proporcionando un buen modelo para estudiar la
regulacin de la transcripcin gnica de los genes relacionados con la virulencia. El EhrabB gen
est situado 332 pb corriente arriba de la Ehcp112 gen, pero en la cadena complementaria
[188]. En silico anlisis de la 5 _ -flanking secuencia de la EhrabB gen mostr que no contiene
elementos de Inr o secuencias de consenso TATA-box , pero tiene una secuencia similar al
elemento de GAAC [173]. Estos anlisis tambin mostraron la presencia de secuencias
similares a C / EBP, GATA-1, y los elementos de choque trmico (HSE) de eucariotas superiores,
y una secuencia relacionada con el motivo de la URE1 hgl5 promotor del gen [173]. Los
ensayos funcionales de la EhrabB promotor mostraron que: (i) la C / EBP y GATA-1 secuencias
pueden no ser relevantes para EhrabB la transcripcin de genes, ya que su eliminacin no
mostr significativa e ff ect de la actividad CAT; (Ii) una regin de ADN localizada entre las
posiciones - a 428 - 683 pb controla negativamente la EhrabB transcripcin; y (iii) un fragmento
de ADN situado en - 257 a - 428 pb, donde se detectaron HSE y URE1 motivos, activa el EhrabB
transcripcin [173]. La delecin de la secuencia URE1 mostr una disminucin en la expresin
del gen reportero CAT, lo que indica que es un URE1 cis elemento -activating del EhrabB
transcripcin [173]. Por ltimo, los ensayos de CAT funcionales con una construccin que
incluye siete HSE para transfectar E. histolytica mostr un aumento en la actividad enzimtica
de CAT de aproximadamente dos veces en calor conmocionado trofozotos con respecto a la
actividad mostrada por clulas mantenidas a 37 C *173+. Estos resultados indican que los
motivos HSE presentan en el EhrabB promotor del gen podra ser funcional bajo tensin de
choque trmico. Todos estos resultados muestran que la transcripcin de EhrabB est
coordinado por di ff erent cis -Elementos que son reconocidos especficamente por las
protenas bajo ciertas condiciones ambientales.
Los factores de transcripcin de choque trmico (HSTF), son protenas que bajo condiciones de
estrs activan y se unen al elemento de choque trmico (HSE) presentes en los rpidamente
hsp promotores. Entonces, este factor induce la expresin de hsp genes, cuyos productos
asegurar la supervivencia de la clula durante condiciones de estrs, proporcionando defensa
contra el dao de protenas en general [191]. Recientemente, Gmez-Garc'a et al. *192+ se
describe la identificacin in silico de tres HSTF genes ( Ehhstf1 ,
Ehhstf2 , Ehhstf3 ) en E. histolytica . Las protenas codificadas por estos genes poseen un
dominio de unin a ADN conservado con un 24% de identidad y 37% de similitud con el
dominio de unin al ADN de di ff HSTFs Erent de Homo sapiens ,
Gallus gallus , Mus musculus y Arabidopsis thailiana [192]. El rbol filogentico construido
utilizando la alineacin de los EhHSTFs HSTFs y de otros organismos mostraron una ms
estrecha relacin entre EhHSTF2 y EhHSTF3, mientras EhHSTF1 exhibe una alta similitud con el
HSTF1 de A. thailiana y parece estar derivando de la misma raz que HSTF1 de humano, ratn,
pollo, rana y mosca de la fruta [192].
Otro factor de transcripcin que ha sido identificado en E. histolytica es una protena similar a
la supresor de tumores p53 protena [193]. La protena Ehp53 muestra 30% -54% y 50% -57%
de homologa con los dominios importantes de p53 de humano y Drosophila melanogaster ,
respectivamente. Esta homologa incluye el dominio de tetramerizacin, la seal de
exportacin nuclear y una seal de localizacin nuclear. Ehp53 tambin contiene siete de los
ocho residuos de unin a ADN y dos de los cuatro Zn 2 + -sitios de unin descritos para p53
[193]. Anticuerpos monoclonales heterloga contra p53 (Ab-1 y Ab-2) reconocen un solo
punto 53 kDa en geles de dos dimensiones y que inhiben la formacin de ADN-protena com-
plejos producido por la interaccin de extractos nucleares de E. histolytica con un
oligonucletido que contiene el consenso de secuencia para la unin de p53 humana. Un
polipptido Ehp53 recombinante fue reconocido por Ab-2 anticuerpos y esta protena tambin
se detect en E. moshkovskii y E. invadens [193].
Un miembro del grupo de alta movilidad (HMGB) fue identificado en E. histolytica (HMGB1)
[194]. Su secuencia de aminocidos tiene una homologa significativa con protenas HMGB de
una diversa gama de especies, como P. falciparum (53% y 58% con PfHMGB1and PfHMGB2,
resp.), Schistosoma mansoni (40%), y H. sapiens (50%). Dos residuos han sido predichas a ser
crucial para determinar la especificidad estructural de ADN [37], una serina en la posicin 10 y
un residuo hidrfobo en la posicin 32 de acuerdo con la numeracin de residuos de D.
melanogaster HMG-D. Los correspondientes residuos conservados en EhHMGB1 son treonina
en la posicin 34 y la fenilalanina en la posicin 56 [194]. EhHMGB1 tambin tiene la cola C-
terminal cida visto en otros eucariotas. Por lo tanto, todos estos anlisis computacional
apoyaron la idea de que EhHMGB1 es un genuino protena HMGB. Adems, EHH-MGB1
recombinante comparti la capacidad de HMGB1 humana para aumentar la unin de ciertos
factores de transcripcin al ADN, y se localiza en el ncleo [194]. La sobreexpresin de
EhHMGB1 en trofozotos llev a la modulacin de 33 transcripciones que participan en una
variedad de funciones celulares. De stos, 20 tambin fueron modulados en el modelo de
ratn de la amebiasis intestinal [159, 194]. Cuatro genes conocidos por estar involucrados en
la virulencia fueron modulados por la sobreexpresin de EhMGB1, incluyendo los que codifican
para dos de los cinco Gal / GalNAc lectina subunidades ligeras, la proteinasa de la cistena
EhCP-A7, y un potencial pptido enterotxica [194]. Estos resultados sugieren un papel de
EhHMGB1 en la adaptacin al parsito, y la destruccin de, el intestino del husped.
Los transductores de seal y activadores de transcripcin (STAT) factores son protenas
citoplasmticas que despus de forma fosforilacin de la tirosina homo o heterodmeros que
se translocan al ncleo, donde se unen a ADN dentro de una secuencia de consenso bien
definido llamado SIE [195]. E. histolytica contiene factores de transcripcin STAT de la familia,
en el que potencialmente podran funcionar aguas abajo de los receptores de quinasas en
procesos relacionados con la patognesis [196]. La interaccin de los trofozotos con colgeno
tipo I y calcio induce la expresin y la activacin de las protenas homlogas a STAT1 y STAT3
[197]. El colgeno induce un aumento dependiente del tiempo en la fosforilacin de tirosina
tanto STAT1K y STAT1L. Estas protenas se convierten en tirosina fosforilados a los 15 minutos
de estimulacin con colgeno, alcanzando una estimulacin mxima despus de 120 minutos
de tratamiento con colgeno [197]. Cuando se explor el estado de fosforilacin de STAT3, una
vez ms, ambas isoformas (K y L) aumentan su contenido de fosforilacin despus de la
exposicin al colgeno y calcio [197]. Entonces, hay una asociacin entre fosfo-STAT1 y STAT3
fosfo-; estos het-erodimers estn dirigidos a los ncleos y se unen a la SIE [197].
El dominio Myb es un dominio de unin a ADN especfica de secuencia que se identific
originalmente en los vertebrados. Myb es uno de la familia ms grande factor de transcripcin
en las plantas [198]. Myb protenas contienen dominios de unin al ADN componen de una,
dos o tres motivos repetidos de aproximadamente 50 aminocidos rodeadas por tres residuos
de triptfano conservados
Un gen ( Ehmyb ) que codifica para un 145 aminocidos pro-tena que contiene un dominio
Myb fue identificado en E. histolytica
EhMyb protena pertenece a la familia SHAQKY por la presencia de un solo dominio de unin al
ADN Myb (aa 80 a 130), as como el motivo THAKQF [200]. La sobreexpresin de la protena
EhMyb result en un transcriptoma que se superponen significativamente con el perfil
expressio n de quistes amebianos [158, 200]. El anlisis de varios promotores de genes
regulados por EhMyb identific un motivo CCCCCC a la que las protenas nucleares se unen en
una manera especfica de secuencia [200]. Todos los resultados en conjunto sugieren
fuertemente que EhMyb est involucrado en el E. histolytica desarrollo.
Estructura de la cromatina. La cromatina de E. histolytica se envasa en estructuras
nucleosoma-como no muy diferente de la cromatina metazoos; Sin embargo, las regiones de
enlazador entre Nucle-osomes adyacentes parecen ser irregular en longitud en comparacin
con la media de 40 pb observado en metazoos [201]. E. histolytica genoma codifica todas las
cuatro protenas que comprenden el ncleo de histonas [202-204]. Los dominios amino-
terminales de las histonas aunque divergente a partir de secuencias de metazoos, son altos LY
bsico con varios residuos de lisina que son objetivos potenciales para la acetilacin de histona
acetiltransferasas (HAT)
Adems, E. histolytica tiene algunos miembros de la familia HAT como GNAT y MYST con una
importante similitud a GCN5, MYST, TAFII250, Hat1 y Elp3 [205]. La protena tiene un dominio
EhGCN5 acetiltransferasa (motivo GNAT) y residuos conservados que participan en la
interaccin con el cofactor CoA as como con la histona H3 [205]. La protena EhMYST contiene
dos dominios, en el ino-terminal que tiene un dominio AgeNet de funcin desconocida y en el
extremo carboxi-proximal un dominio MOZSAS que es un dominio comn de los HAT [205] am.
Una histona deacetilasa (HDAC) llamado EhHDAC fue identificado en este parsito [205]. Esta
protena es miembro de la familia d e la clase I de las HDAC, que son subunidades o co-
represores que funcionan en aso-cin con los represores conocidos en respuesta a di ff
eventos Erent
Aunque este parsito contiene genes para la acetilacin y desacetilacin de histonas, hasta
ahora no desconocen los mecanismos de acetilacin y desacetilacin en E. histolytica . Sin
embargo, esperamos que estas protenas desempean una actividad relevante implicado en el
control de la transcripcin.
E. histolytica expresa un ADN metil transferasa-citosina-5 (Ehmeth), y 5-metilcitosina (m5C) se
encuentra predominantemente en elementos repetitivos. El 5 _ regin del gen que codifica
para la E. histolytica protena de choque trmico 100 ( EHsp100 ) fue aislado por un FFI
cromatografa nidad con anticuerpos 5-metilcitosina como ligando [206]. La expresin de
EHsp100 fue inducida por choque trmico, 5-azacitidina (5-AzaC), un inhibidor de la ADN
metiltransferasa y la tricostatina A (TSA), un inhibidor de la histona deacetilasa [206]. Th datos
ESE sugieren que la expresin EHsp100 se puede regular, adems del nivel de transcripcin de
iniciacin, por un mecanismo epigentico.
Lavi et al. [207] identific una protena de 32 kDa nuclear (EhMLBP) que se une a la forma
metilada de un segmento de ADN enc Oding una transcriptasa inversa de una repeticin
retrotransposn no largo-terminal autnomo (RT LINE). Anlisis de mapeo Dele-cin localizada
la regin de unin en la parte C-terminal de la protena ADN. Esta regin es do fi ciente para
asegurar la toma LINE RT unin a metilato d con una alta ffi Comunidad [207]. Por una un FFI
tcnica basada en el uso de la Comunidad C-terminal de EhMLBP como ligando se aislaron
secuencias de ADN que contienen un motivo de consenso 29 nucletidos que incluye un tramo
de diez adeninas [208]. Anlisis de retardo en gel mostr en EhMLBP se une al motivo
consenso con una preferencia por su forma metilada [208]. Estos resultados sugieren que
EhMLBP puede servir como un sensor de ADN metilado.
Silenciamiento transcripcional del gen que codifica para la amoebapore un ( Ehap-a ) se
produjo despus de la transfeccin de los trofozotos con un plsmido que contiene el 5 _
regin promotora de Ehap-A , as como un segmento truncado de un vecino, SINE1 elemento
aguas arriba que se transcribe de la vertiente opuesta [209]. Pequeas cantidades de ort sh se
detectaron (aproximadamente 140 nt) molculas de ssRNA con homologa con SINE1 en la
ameba silenciada pero no siRNA. Chip ensayos utilizando un anticuerpo contra K4 metilado de
la histona H3 mostraron una desmetilacin de K4 en el dominio de la Ehap gen, lo que indica la
inactivacin transcripcional
Las transfecciones de E. histolytica trofozotos que
ya tena un silenciado Ehap-A , con un plsmido que contiene un segundo gen ligado al 5 _
regin aguas arriba de Ehap-A , permiti el silenciamiento,-en trans, de otro gen es de eleccin
El fenotipo no virulenta de la ameba genes silenciados se demostr en varios ensayos y los
resultados sugieren que pueden tener un uso potencial para la vacunacin
4.6. Regulacin post-transcripcional. En E. histolytica , el 5 ' regin no traducida (5 _ UTR) de
los ARNm son tpicamente cortos en longitud (de 5 a 20 nucletidos) [165]. Slo unos pocos
ARNm con prolongado 5 _ UTR se han reportado: Ehmcm3 (126 pb), Ehpak (265 pb), EhTBP
(420 pb), y Ehcp112 (280 pb) [174, 190, 212].
Anlisis computacional de la 3 _ UTR de un gran EST y las secuencias genmicas coleccin de E.
histolytica revel la presencia de elementos conservados como un dominio rico en AU
correspondiente al consenso UA (A / U) de seal UU polyadenyla-cin que podran estar
involucrados en pre-mRNA polyadeny-cin [213]. Curiosamente, la organizacin molecular de
3 _ -UTR cis -elementos reguladores de la pre-mRNA parece ser conservadas ms o menos a
travs de la escala evolutiva, mientras que la seal de poliadenilacin parece ser especfica de
la especie en parsitos protozoarios y un elemento novedoso A-rica es nico para la eucariota
primitiva E. histolytica [213].
Medida de la vida media del ARNm de EhPgp5 en trofozotos de clon C2 cultivadas en di ff
Erent concentraciones de emetina mostr que la estabilidad de este ARNm se incrementa a
altas concentraciones del frmaco [214]. En trofozotos cultivadas en ausencia del frmaco, la
vida media experimental de la EhPgp 5 transcripcin se estim en 2,1 horas, mientras que en
trofozotos cultivados en 90 (C2 90 ) y 225 M (C2 225 ) de emetina la vida media de la
transcripcin de 3.1 horas, y 7,8 horas, respectivamente, lo que confirma las variaciones
significativas en las tasas de descomposicin de la EhPgp5 mRNA en las tres condiciones [214].
Adems, el EhPgp5 ARNm contiene una (A) cola ms larga poli en el clon C2 225 [214], y es
bien sabido que las grandes colas de poli (A) dan mayor estabilidad al ARNm y pro-mote un
ms e ffi traduccin ciente. Estos resultados ndica TE que los niveles ms altos de protena
EhPGP5 en trofozotos resistentes a mltiples frmacos (clon C2) podran ser influenciados,
adems de la activacin transcripcional, por un aumento de la estabilidad del mRNA.
Regulacin de la Expresin en Trichomonas vaginalis
Tricomonosis es una comn, pero se pasa por alto la infeccin humana sexualmente trans-
mitted causada por Trichomonas vaginalis , un protista flagelado que reside en el tracto
urogenital de ambos sexos y puede causar vaginitis en mujeres y uretritis y prostatitis en los
hombres. El impacto de este parsito en las mujeres no se limita slo a la vaginitis, pero es
tambin un factor importante en la promocin de la transmisin del VIH, en la causa de bajo
peso y parto prematuro, y en la predisposicin de las mujeres a la pelvis atpicos enfermedad
inflamatoria, er canc cervical y la infertilidad [215]. T. vaginalis causa un estimado de 174
millones de infecciones de transmisin sexual cada ao en todo el mundo [216]. Entre las
mujeres, la prevalencia de tricomonosis se estima que tiene un rango de 3% - 48%. Sin
embargo, T. vaginalis infeccin rara vez se diagnostica en hombres, sobre todo debido a la
prueba de diagnstico insensible [217].
5.1. Genoma. El T. vaginalis genoma se estima en 160 Mb y cerca de dos tercios del genoma
contiene varias repeticiones y elementos de transposicin [218]. Un conjunto bsico de ly
aproximadamente 60.000 genes codificadores de protenas se predijo, que se organiza en seis
cromosomas [218, 219]. El anlisis de las distribuciones de edad de familias de genes con cinco
o menos miembros indican que el genoma se someti a un perodo de aumento de la
duplicacin, y p ossibly uno o ms eventos de duplicacin del genoma a gran escala [218].
Aunque T. vaginalis tiene una inusual gran repertorio de genes, slo ~ 65 de ellos parecen
tener un intrn [218, 220]. Las posiciones de estos intrones son a menudo conservan en genes
ortlogos, lo que indica que estaban presentes en una ancestro comn de tricomonas,
levadura y metazoos. Los intrones que han sido identificados en T. vaginalis son cortas y se
caracteriza de manera uniforme por una secuencia de 12 nt conservada (5 _ -Acta A CACACAG-
3 _ ) en el 3 _ -sitio de empalme que incluye el punto de ramificacin (subrayado) [220].
Recientemente se han identificado los cinco T. la vagina lis spliceosomal ARNsn U1, U2, U4, U5
y U6 ARNsn [221]. Aproximadamente 250 unidades de ADNr se identificaron a uno de los seis
T. vaginalis cromosomas [218].
Transcriptome. Con el fin de identificar los genes que estn regulados durante la interaccin
con las clulas diana, una biblioteca de cDNA sub-traccin enriquecido para di ff se obtuvo
expres erentially genes de los parsitos que estaban en contacto con las clulas epiteliales
vaginales [222]. Esta estrategia demostr
que los genes que codifican las adhesinas AP65 y AP33, -actinina, enolasa, un supuesto gen
PDI, un fosfoglucomutasa, y una protena de unin a GTP conservada (GTP-BP) fueron hasta
reguladas en los parsitos que estaban en contacto con las clulas diana [ 222]. Los genes
implicados en t ranscription y traduccin de protenas, adems de seis genes con funciones
desconocidas tambin se upregulated [222].
El anlisis filogentico basado en el rRNA y clase II secuencias de genes fumerase han
demostrado que Trichomonas especies estrechamente formaron un clado relat ed, incluyendo
cepas de T. gallinae , T. tenax , y T. vaginalis [223]. Para identificar los genes expresados de
forma nica-de T. vaginalis que pueden representar factores determinantes que contribuyen a
la virulencia y patogenia urogenital, genes di ff expres erentially en T. vaginalis con respecto a
T. tenax , generalmente considerado como un comensal inocuo de la cavidad oral humana,
fueron identificados a travs de:
(I) la proyeccin de tres bibliotecas de cDNA resta independientes enriquecido para T. vaginalis
genes; y (ii) la proyeccin de una T. vaginalis biblioteca de expresin de cDNA con sueros de
pacientes que fueron pre-adsorbido con un extracto de T. tenax antgenos [224]. Digno de
mencin, clones identificados por ambos se encontraron procedimientos para ser regulados
hasta en la expresin en T. vaginalis al entrar en contacto con va ginal clulas epiteliales [222],
lo que sugiere un papel para estos productos gnicos en la colonizacin de acogida. Semi-
cuantitativos de anlisis RT-PCR de clones seleccionados mostr que los genes no eran
exclusivas de T. vaginalis y que estos genes tambin estaban presentes en T. tenax , albei t a
muy bajos niveles de expresin [224]. De las transcripciones cuya abundancia relativa fue
encontrado a variar de manera significativa, el AP65, GAPDH y la protena hipottica 2 se
secretan o liberan durante el crecimiento de T. vaginalis [225]. Estos resultados sugieren que T.
v aginalis y T. tenax tiene identidad gentica notable y que T. vaginalis tiene niveles ms altos
de expresin gnica en comparacin con la de T. tenax . Los datos sugieren que pueden T.
tenax podra ser una variante de T. vaginalis [224].
Transcripcin General. mayora de los estudios con respecto a la expresin gnica en T.
vaginalis se han centrado en la regin promotora de genes codificadores de protenas. Los
genes que codifican protenas en T. vaginalis se transcriben por una ARN polimerasa II
resistente a -amanitin [226]. Un elemento TATA-metazoos como parece estar ausente en
tricomonas promotores [227]. Sin embargo, una secuencia de (Inr) iniciador ha sido
identificado como el elemento promotor de ncleo nico conocido en este o ganismo. Este
elemento tiene un diseo arquitectnico y func-nalmente equivalente a su homlogo
metazoos [227, 228]. Adems, el elemento promotor Inr se encontr en ~ 75% de 5 _ regin
no traducida (UTR) secuencias de los genes codificantes de protenas, apoyando su centr al
papel en la expresin de genes [218]. El hallazgo de la secuencia Inr en esta temprana
eucariota ramificado indican firmemente que este elemento promotor se desarroll temprano
en eucariotas evolucin, y es probable que la maquinaria de transcripcin tricomonas es
altamente o ptimized para la funcin Inr.
5.4. Elementos y factores de transcripcin reguladores cis. El elemento Inr se encuentra
dentro de los 20 nucletidos corriente arriba del codn de inicio y puede estar tan cerca como
6 nucletidos. Este motivo, con la secuencia de consenso TCA + 1PY (T / A), do rrounds el sitio
de inicio de la transcripcin de todos los genes estudiados [228]. Una protena Inr vinculante,
un nuevo polipptido 39 kDa (IBP39), de T. vaginalis se aisl ADN una ffi cromatografa
Comunidad [229]. IBP39 muestra ninguna secuencia similar a cualquier conocidos tas protenas
y los contras de dos dominios que estn conectados por un enlazador proteolticamente
sensible; el dominio N-terminal que es responsable de la unin Inr (EII) y el dominio C-
terminal, que se une al dominio II de ARN pol subunidad grande C-terminal (CTD) [230, 231]. La
bsqueda de secuencias similares a la EII revel una familia de al menos 100 protenas en T.
vaginalis contiene un motivo EII con la arquitectura comparable a IBP39, lo que sugiere que la
EII define un dominio de unin al ADN de linaje especfico que es utilizado por los factores de
iones transcripcin especficos en este organismo [196]. Divergencia de secuencia en la hlice
de reconocimiento, as como el N-terminal de bucle cargado positivamente a travs de la
familia de IBD sugieren que los di ff versiones Erent del dominio potencialmente se han
especializado ponerse en contacto con una serie de sitios objetivo, aparte de Inr [196].
En T. vaginalis , el hierro es un nutriente esencial para el crecimiento, metabolismo y como
factor determinante en la modulacin de la expresin de mltiples fenotipos de virulencia,
tales como cytoadherence, la variacin fenotpica y la resistencia a la lisis [232-235]. Sin
embargo, la concentracin de hierro en la vagina humana est cambiando constantemente
durante todo el ciclo menstrual. Por lo tanto, T. vaginalis puede responder a diferentes
suministro de hierro por medio de di ff mecanismos de expresin gnica on diferencial con el
fin de sobrevivir, crecer y co lonize el ambiente hostil vaginal. Los estudios sobre el papel del
hierro en la expresin de la ap65-1 gen, que codifica una enzima de 65 kDa mlico que est
implicado en cytoadherence, demostraron que este elemento juega un papel crucial en la
transcripcin. Transcriptio n de ap65-1 se regula crticamente por la coordinacin de los dos
similares pero opuestas regiones reguladoras de ADN orientados, MRE-1 / MRE-2R y MRE-2F,
ambos de los cuales son sitios para mltiples protenas-Myb como [236] vinculante. Protena
Myb1 exhibi variaciones en la concentracin nuclear con los cambios en el suministro de
hierro [237]. La sobreexpresin de Myb1 en T. vaginalis result en la represin o activacin de
ap65-1 transcripcin en clulas de hierro agotado en una temprana y una fase tarda del
crecimiento celular, respectivamente, mientras que el hierro-inducible ap65-1 transcrip-cin
fue reprimida constitutivamente. Myb1 protena se encontr a ocupar constantemente el
cromosmica ap65-1 promotor en una
El sitio proximal, pero tambin seleccionarse slo dos sitios ms distales en la etapa de
crecimiento tardo [237]. Lou et al. [238] defini recientemente el dominio de unin al ADN
mnima de Myb1, que consiste en la secuencia de Lys35 a Ser141 (tvMyb 35-141). Otra
protena Myb (Myb2) se une preferentemente a la ERM-2f que a MRE-2r [239]. La presencia de
hierro caus la represin de la myb2 gen, y el temporal de activacin / desactivacin de la
entrada promotor Myb2, que tambin fue activado por el agotamiento de hierro prolongada
[239]. La e Xpression de Myb2 en T. vaginalis durante las condiciones de hierro agotado
facilitados basal y relacionado con el crecimiento ap65-1 la transcripcin a nivel similar al
observado en las clulas de hierro repleta, mientras que el hierro-inducible ap65-1
transcripcin fue abolida con desmontables de Myb2 [239]. Adems, otra protena nuclear de
hierro inducible (Myb3) que se une slo al elemento MRE-1 se identific recientemente [240].
Los cambios en el suministro de hierro dieron lugar a entradas temporales y suplentes de
Myb2 y Myb3 en el ap65-1 promotor [240]. La expresin de Myb3 activa el basal y hierro
inducible ap65-1 transcripcin, y de comn acuerdo, la inhibicin de la expresin Myb3 en una
disminucin de ap65-1 transcripcin [240]. En trofozotos que sobreexpresan Myb3, un
aumento de la entrada promotor de esta protena se detect con disminucin concomitante
en Myb2 entrada promotor bajo condiciones especficas, mientras que Myb3 entrada
promotor fue inhibida bajo todas las condiciones de ensayo en clulas que sobreexpresan
Myb2. En contraste, concomitantes entradas promotor por Myb2 y Myb3 disminuido en
clulas que sobreexpresan Myb1, excepto que la entrada promotor Myb3 fue ligeramente un
ff eja en el agotamiento de hierro prolongada [240]. Todos estos resultados sugieren que
Myb2 y Myb3 pueden coactivate basal y hierro inducible ap65-1 transcripcin contra Myb1
travs de entradas condicionales y competitivos promotoras.
La existencia de un gran nmero de genes de histonas de ncleo en T. vaginalis genoma se
utiliz para la identificacin de los elementos comunes de nucletidos que pueden estar
implicados en su transcripcin. La bsqueda de ms elementos de la secuencia de nucletidos
representada en la 5 _ secuencia ascendente de T. vaginalis genes histona bsico revelado que
estas regiones tenan tres sobre motivos representados caracterizados por una cadena de
nucletidos conservados: Motif I (TCAYWAKTT), Motif II (TTTTGGCGSS), y Motif III
(TGHCAWWWWRRRYY) [241]. Cuatro T. vaginalis principales familias de genes de histona
(H2A, H2B, H3 y H4) tienen una arquitectura motivo comparable independientemente de si
estn o no estn organizados como pares de genes [241]. El 9 pb de longitud con motivos I es 3
- 7 pb aguas arriba del codn de iniciacin ATG y una longitud de sub-motivo 5 pb (TCAYW) es
muy similar a la INR (TC 1 PAA) [241]. Motivo II localiza predominantemente en las regiones de
- 20 a - 40 pb y se trata de 15 pb aguas arriba de motivos I. Motivo III est situado en - 40 a - 80
aguas arriba. En particular, la direccin de III con motivos relacionados con la transcripcin de
genes en H2A / H2B es opuesta a aquella en H3 / H4, lo que indica que motivo III puede
funcionar en una manera independiente de la direccin [241]. Estos motivos son
aparentemente enriquecidos en la regin oter baile de graduacin de varios T. vaginalis genes
y las posiciones de motivos II y III con motivos relacionados con la traduccin codn de inicio
son similares a las de las regiones promotoras de los genes histona bsico, lo que sugiere que
los motivos sealados son biolgicamente significa elementos reguladores transcripcionales ful
[241].
Estructura de la cromatina. T. vaginalis genoma contiene un gran nmero de genes de las
histonas, y la mayora de ellos organizan como pares de genes de una manera de cabeza a
cabeza [241, 242]. Cuenta con un total de 74 funcionales ncleo h istones, incluyendo 11 H2A /
H2B pares de genes, 6 H2A solitario, 3 H2B solitario, 19 H3 / H4 pares de genes, 2 H3 solitario y
3 solitaria H4 [241]. La comparacin de las secuencias de aminocidos de la T. vaginalis
histonas H3 y H4 con secuencias de otros organismos revelaron una divergencia significativa
no slo de las secuencias en los organismos multicelulares, sino tambin de las secuencias en
otros protistas [242].
T. vaginalis genoma tiene tambin una expansin de genes codifican tanto, sombreros y
deacetylases HDAC [196], pero su papel en la generacin e expresin en este parsito se
desconoce.
Regulacin post-transcripcional. Los de hierro sensible elementos promotores que controlan la
iniciacin de la transcripcin de la ap-65-1 no se han encontrado hasta ahora en otros genes
que codifican las protenas reguladas por hierro, lo que sugiere que los mecanismos de
regulacin de hierro mediada a nivel post-transcripcional puede existir en T. vaginalis .
En eucariotas superiores, el sistema IRE / IRP es un mecanismo post-transcripcional de la
regulacin del hierro basado en la unin de protenas reguladoras de hierro (IRP citoplsmica)
a los elementos de respuesta de hierro (IRES) situados en las regiones de ARNm de un poco de
hierro untrans-lada protenas -regulated.
En condiciones de bajo contenido de hierro IRP se unen a IR Es el bloqueo de la traduccin de
mRNAs que contienen IREs en su 5 _ -finaliza o el aumento de la estabilidad de los ARNm que
tiene a su IREs 3 _ -finaliza [243]. TvCP4 es una cistena proteasa de T. vaginalis , cuyo monto
se encuentra a 3 veces mayor en rica en hierro que en los parsitos de hierro -agotadas. Sin
embargo, la transcripcin Tvcp4 se expresa a nivel similar en ambas condiciones, lo que
sugiere que la expresin regulada por hierro de TvCP4 se lleva a cabo en una etapa
postranscripcional [244]. La bsqueda de estructuras de IRE en el ARNm de Tv cp4 revel que
la primera 23-nt aguas abajo del codn de inicio formar una estructura tallo-bucle estable IRE-
similares. El IRP-1 humana recombinante de une especficamente a la estructura IRE-como de
la Tvcp4 ARNm, y extractos citoplasmticos de T. vaginalis forma complejos de protenas de
ARN con la secuencia IRE del ARNm de la ferritina humana [244], lo que sugiere que este
parsito poseer un sistema IRE / IRP que controlan la expresin de algunas protenas reguladas
por hierro.



6. Comentarios finales
Desarrollo de un organismo depende finamente afinado y preciso control de la expresin
gnica. Estudios recientes han identificado varios procesos biolgicos implicados en la
regulacin de la expresin de genes en los parsitos protozoarios. Estos procesos requieren
varios componentes, tales como cis -elementos reguladores, factores de transcripcin, la
transcripcin , protenas cofactores modificacin de la cromatina y protenas implicadas en la
regulacin post-transcripcional. La lista de estos componentes va a seguir creciendo, ya que los
estudios futuros Identificacin entify ejemplos adicionales de comunicacin directa entre las
protenas-reg ulatory, y revelar cmo se regulan las redes de genes coordinadamente a travs
de estas interacciones. Otros anlisis de estos mecanismos de regulacin en los parsitos
protozoos deben continuar proporcionando informacin ampliamente aplicable sobre sus
funciones conservadas en vivo y nuevos conocimientos sobre los procesos especficos cal
biolgicament en los que estn involucrados. Adems, las secuencias del genoma ensamblados
ya estn disponibles para di ff parsitos Erent, inclusive para algunos de acogida y los vectores
que forman parte de su ciclo de vida. Estas asambleas constituyen una herramienta de gran
alcance para los comparati cinco anlisis de las redes de regulacin gnica. Como siempre, los
nuevos conocimientos plantea nuevas preguntas. Pero estas preguntas esperan su resolucin
ordenada