Preparacin de medios de cultivo

- Medios de cultivo

- Tipos de medio de cultivo
Tipos bsicos de medios de cultivo por consistencia
El tipo de medio de cultivo a utilizar depende del microorganismo de inters y de la necesidad de realizar ese
cultivo. Los medios se pueden utilizar para el crecimiento de una especie o para diferenciar entre cepas o
especies.
Segn su consistencia o estado fsico pueden ser:
Lquidos o caldos: se emplean fundamentalmente para cultivar los microorganismos y obtener grandes
cantidades de los mismos o bien la produccin de metabolitos especficos, estimular y promover la seleccin
de algn o algunos microorganismos e impedir que otros se multipliquen, identificar al microorganismo
estudiado mediante pruebas bioqumicas.
Semislidos Se utilizan para identificaciones bioqumicas y averiguar si el germen estudiado es mvil. Los
medios semislidos tienen una consistencia blanda.
Slidos o Agares Se utilizan para obtener colonias aisladas de microorganismos. A diferencia de los lquidos
se les agrega Agar. El agar es un polisacrido acdico producido por ciertas algas rojas, es un elemento
solidificante que se lica completamente a la temperatura del agua hirviendo y se solidifica al enfriarse a 40
grados. El agar Se usa a una concentracin del 1,5%. Con mnimas excepciones no tiene efecto sobre el
crecimiento de las bacterias y no es atacado por aquellas que crecen en l. La Gelatina es otro agente
solidificante pero se emplea mucho menos ya que bastantes bacterias provocan su licuacin.
Tipos de medios de cultivo por utilidad prctica
No selectivos o generales: permiten el cultivo y crecimiento de una amplia gama de microorganismos. Por
ejemplo, Caldo nutritivo, Agar nutritivo, Agar Soya Tripticasa (TSA), Agar marino 2216 o Zobell. A menudo
estn enriquecidos con materiales como: sangre, suero, Hemoglobina, Factor X, Factor V, glutamina, u otros
factores accesorios para el crecimiento de las bacterias (Agar Sangre, Schaeadler, etc.).
Selectivos: (pueden ser de moderada o de alta selectividad) permiten el aislamiento y crecimiento del
microorganismo o grupo de microorganismos de inters, para lo cual se manipulan factores ya sean de tipo
nutricional o de tipo ambiental. Algunos medios son selectivos porque contienen un producto qumico, como la
azida sdca, el telurito potsico o el cristal violeta, que inhiben el desarrollo de algunos microorganismos pero
no de otros. En el caso de factores nutricionales se aaden al medio sustancias que inhiban el crecimiento de
ciertos grupos de microorganismos, permitiendo a la vez el crecimiento de otros.
Los antibiticos, el cloruro sdico en altas concentraciones, colorantes y algunas sustancias qumicas son
ejemplos de agentes selectivos que se aaden a los medios para inhibir el crecimiento de otros
microorganismos diferentes al de inters.El agar SPS (denominado de esta forma porque contiene
sulfadiacina y sulfato de polimixina) se utiliza para identificar Clostridium botulinum, agente causal de una
grave intoxicacin alimentaria. El medio SPS permite el crecimiento de esta bacteria, pero inhibe el de otras
especies de Clostridium.
Por ejemplo, los colorantes, que se aaden al Agar, inhiben selectivamente determinados microorganismos,
es el caso del verde brillante (Agar verde brillante) utilizado para determinar la presencia de Salmonella en
heces fecales ya que inhibe las bacterias Gram positivas, y la mayora de las bacterias intestinales.
Para el caso de factores ambientales se manipula la temperatura, el grado de humedad, el pH, la
concentracin de oxgeno o la intensidad de la luz. As el Agar glucosado de Sabouraud ajustado a pH 5,6, se
usa para el aislamiento de hongos, que a ese pH crecen mejor que las bacterias. Son ejemplo de este tipo de
medios: Agar Tiosulfato, Citrato, Sales de bilis, Sacarosa (TCBS) para cultivo de Vibrio y Agar Cetrimida para
cultivo de Pseudomonas.
Enriquecidos: suprimen el crecimiento de la flora competitiva normal potenciando el cultivo y crecimiento
deseado (Selenito, medio con Vitamina K).
Para aislamientos especializados: formulaciones nutritivas especiales que satisfacen requerimientos de
grupos especficos de microorganismos, ayudando a su identificacin (Lowenstein). En los diferentes medios
de cultivo se encuentran numerosos materiales de enriquecimiento como hidratos de carbono, suero, sangre
completa, bilis, etc. Los hidratos de Carbono se adicionan por dos motivos fundamentales: para incrementar el
valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de fermentacin de los microorganismos que ayuden a
identificarlos. El suero y la sangre completa se aaden para promover el crecimiento de los microorganismos
menos resistentes.
Diferenciales: permiten distinguir unos microorganismos de otros por las caractersticas que presentan las
colonias. Se elaboran con base en las caractersticas fisiolgicas especficas de los microorganismos, por
ejemplo, nutricin, respiracin entre otras. Algunos medios diferenciales llevan incluido un indicador de pH,
que pone de manifiesto la degradacin de un nutriente especfico (generalmente un azcar) por el cambio de
color que se origina cuando ste es metabolizado, como en el caso del medio CLED. Los colorantes que se
aaden a estos medios actan como indicadores para detectar, por ejemplo, la formacin de cido. Un
ejemplo es el Rojo Fenol es de color rojo en pH bsico y amarillo en pH cido. A travs del cultivo en medio
diferencial se puede distinguir las bacterias que fermentan la lactosa (con produccin de cido) de las no
fermentadoras. Otros colorantes actan como inhibidores del crecimiento de unos microorganismos y no de
otros, por ejemplo la Violeta de Genciana inhibe el crecimiento de la mayora de las bacterias Gram-positivas).
Algunos medios pueden ser a la vez selectivos y diferenciales. El agar Mac Conkey es un ejemplo de
medio selectivo y diferencial. La presencia de sales biliares y cristal violeta inhiben el crecimiento de bacterias
no entricas (accin selectiva); la fermentacin de lactosa con liberacin de productos cidos hace virar un
indicador de pH incorporado en el medio (accin diferencial). El agar sangre es un agar que contiene
hemates y permite reconocer los microorganismos que producen hemlisis por ejemplo para aislar la bacteria
que causa la escarlatina, se utiliza el medio de agar sangre. Las colonias de esta bacteria producen hemlisis,
es decir, muerte y lisis de los hemates generando una zona transparente a su alrededor. El Agar eosina-azul
de metileno(EAM) permite identificar el crecimiento de coliformes y E. coli. Este medio contiene peptona,
lactosa y los colorantes eosina y azul de metileno. En dicho medio se inhibe el crecimiento de otras bacterias,
pero no el de las coliformes (stas desarrollan colonias tpicas). E. coli muestra colonias grandes, oscuras,
negro-azuladas, centro casi negro, con brillo metlico verdoso causado por la luz reflejada. La presencia de
coliformes como Enterobacter se manifiesta en colonias grandes, de color rosado plido, mucosas, con centro
oscuro y sin brillo metlico. Escherichia coli y las bacterias relacionadas con ella se identifican en medios con
un indicador de pH porque originan productos metablicos cidos, que cambian el color del indicador y por
tanto de sus colonias.
Seleccionando los medios adecuados se puede llegar a la identificacin de casi cualquier bacteria (Oxidacin-
Fermentacin).
- Componentes de los medios Lquidos, slidos y semislidos
Variedad De Medios
De Cultivo
Los medios de cultivo que se utilizan el laboratorio
dependen del microorganismo que se pretende cultivar y de la
finalidad de su cultivo. Puede hacerse una descripcin global
de los mismos atendiendo a su composicin qumica, a su
estado fsico y la finalidad del cultivo. Como la distribucin se
hace atendiendo a diferentes criterios un medio de cultivo puede
incluirse en ms de una categora.
Composicin:
definidos/indefinidos
3.1 Segn su composicin qumica Para preparar los medios
de cultivo definidos o sintticos (ej el medio de Koser para la
utilizacin del citrato) se utilizan componentes de alta pureza,
por lo que se conoce su composicin qumica (cualitativa y
cuantitativamente).
Cuando no es decisivo conocer la composicin exacta del medio
de cultivo se utilizan medios indefinidos, naturales o
complejos, como el Agar nutritivo preparados con mezclas de
nutrientes como peptonas, extracto de carne, extracto de
levadura, agar-agar, etc.
Estado fsico:
Lquidos/ slidos/
semislidos
3.2. Segn su estado fsico . Los medios de
cultivo slidos(como el TSA) contienen el agente solidificante
(generalmente agar al 1,5-2%) y los medios de
cultivo lquidos (como el agua de peptona) no llevan
adicionados agentes solidificantes; los medios de
cultivo semislidos (como el Agar de Hugh-Leiffsoncontienen
el agente solidificante en menor concentracin que los slidos.
Finalidad: Ordinarios/
enriquecidos/
diferenciales/,
selectivos/de
enriquecimiento
3.3. Segn su finalidad Cuando se cultivan microorganismos
que requieren nutrientes comunes, se utilizan medios de
cultivo ordinarios (como el Agua de peptona): sus nutrientes
permiten el crecimiento de gran nmero de microorganismos,
pero no de los que requieren nutrientes particulares. Las
bacterias mas exigentes nutricionalmente se cultivan en medios
enriquecidos (como Agar chocolate que es Agar nutritivo
aadido del 10% de sangre calentada hemolizada-): Contienen
los nutrientes ausentes de los medios ordinarios, como por
ejemplo factores orgnicos de crecimiento.
Cuando se pretende que el propio cultivo de la bacteria
diferencie entre distintos tipos de bacterias se utilizan Medios
de cultivo diferenciales (ej. Medio para la fermentacin de la
lactosa): algn componente del medio proporciona un cambio
visible del cultivo si existen ciertas bacterias (en el caso de la
lactosa la acumulacin de cidos).
Puede favorecerse la probabilidad de seleccionar cierta
bacteria especfica de una mezcla de ellas utilizando medios de
cultivoselectivos o realizando un enriquecimiento de la
bacteria que se pretende seleccionar, en detrimento de otras
bacterias de la mezcla. Los Medios de cultivo
selectivos (como el Agar Mac Conkey) son medios slidos que
contienen sustancias que inhiben el crecimiento de algunas
bacterias, pero permite el de otras. El Agar Mac Conkey
contiene sales biliares antibacterianas pero permiten el
crecimiento de las Enterobacterias cuyo hbitat natural (el
intestino) contiene tales sales antibacterianas. El resultado es el
crecimiento selectivo de las bacterias que resisten las sales
biliares, entre ellas las enterobacterias. El efecto antibacteriano
selectivo de algunos medios de cultivo permite su utilizacin sin
aplicar laesterilizacin convencional
Los cultivos de enriquecimiento se realizan en medios
lquidos (medios de cultivo de enriquecimiento), con alguna
propiedad fsica o qumica que favorecen el desarrollo de un
determinado tipo bacteriano, o se incuban bajo condiciones
especiales: el desarrollo de los microorganismos celulolticos se
favorece en un medio de cultivo que contiene celulosa como
nico sustrato orgnico. Otros microorganismos no podrn
crecer tan eficientemente. V.cholerae es una bacteria que tolera
el pH alcalino, por lo que el Agua de peptona-alcalina (pH 11)
permite el enriquecimiento de Vibrio cholerae de una muestra de
heces
Medio de Koser (por
litro)
Agua de
peptona (por
TSA (Agar de
triptona y
Fosfato sdico
amnico
1,5
g
Fosfato
monopotsico
1,0
g
Sulfato magnsico 0,2
g
Citrato sdico 3,0
g

litro)
Pepton
a
10
g
NaCl 5 g

soja; por litro)
Peptona de
casena
15 g
Peptona de
soja
4 g
NaCl 5 g
Agar 20 g

Composicin de algunos medios de cultivo de uso comn
Peptona 2g
Glucosa 10g
Azul de
bromotimol
0.03g
NaCl 5g
K
2
HPO
4
0.3g
Agar 2.5g
Peptona 10 g
NaCl 5 g

Lactosa 2 g
Prpura de bromocresol 0,025
g








Porque es importante el pH en la preparacin de un medio


Como se realiza una prueba de esterilidad a medios de cultivo
Se toma una muestra representativa de cada lote de medios de cultivo preparados y se introduce en la
incubadora a 37C durante 24 hrs. Una vez cumplido este tiempo se retiran de la incubadora y se revisa cada
cajo o tubo sometido a esta prueba. Un medio de cultivo estril no presentara desarrollo de bacterias y esto
nos indicara que el lote preparado puede ser utilizado. El observar desarrollo bacteriano nos indica que el
proceso de esterilizacin no fue eficaz y por lo tanto el lote preparado no se encuentra estril y debe ser
rechazado para su uso.