Laboratorio de Fisiologa Animal II

PROCESOS FSICOS Y QUMICOS DE LA DIGESTIN

Integrantes:
Francisco Dumas
Felipe Herrera


01 de septiembre de 2014




Introduccin

La primera enzima que acta sobre el almidn es la amilasa, la cual se encuentra en la
mayora de los animales. Esta enzima hidroliza el almidn o el glucgeno para formar los
disacridos maltosa e isomaltosa, ms oligosacridos como la maltotriosa. Hay formas
moleculares de amilasa salival en la saliva y en el jugo pancretico de los mamferos; por
lo tanto, la amilasa acta como una enzima intraluminal en la boca, en el intestino
anterior y en el intestino medio. Los disacridos y los oligosacridos resultantes de la
accin digestiva de la amilasa se hidrolizan para formar glucosa libre por la maltosa, un
disacrido, y por otras enzimas.
1
Al ser la amilasa una enzima, esta es dependiente del pH y de la temperatura. Si se
representa grficamente la actividad enzimtica en funcin del valor del pH por lo general
se obtiene una curva con forma de campana ms o menos simtrica. En las enzimas
animales el pH ptimo, es decir el pH en el cual la actividad es mxima, habitualmente se
aproxima al pH de las clulas (alrededor de 7). La dependencia de la actividad enzimtica
de la temperatura en general es asimtrica. Cuando aumenta la temperatura se observa
una aceleracin inicial de la reaccin debido al aumento del calor generado por el
movimiento de las molculas. A determinada temperatura la enzima se torna inestable y
luego de un corto intervalo a esa temperatura su actividad empieza a decrecer por
desnaturalizacin hasta perderse totalmente. La temperatura ptima de las enzimas no
supera los 50 C.
2
En este prctico variaremos el Ph y la temperatura de la amilasa para determinar cules
son los valores ptimos de esta enzima.









Materiales y mtodos
Para la ejecucin de este prctico utilizamos el software PhysioEx 6.0. El cual simula
experimentos fisiolgicos en favor del tiempo.
El procedimiento es el descrito en el prctico:
1.- Pulsa sobre el tubo de ensayo que cuelga ms cerca de la incubadora, arrastrndolo a
la ranura nmero 1 en la parte superior de la incubadora y suelta el botn del ratn. El
tubo de ensayo se colocar en su lugar. Repite esta accin, llenando la ranura nmero 2,
la ranura 3, etc, hasta que las siete ranuras en la parte superior de la incubadora
contengan tubos de ensayo.
2.- Llena los siete tubos de ensayo con tres sustancias cada uno:
- tubo de ensayo n1: almidn (starch), agua desionizada (deionized water), tampn pH 7
(pH7 Buffer)
- tubo de ensayo n2: amilasa (amylase), agua desionizada (deinized water), tampn pH 7
(pH7 Buffer)
- tubo de ensayo n3: almidn (starch), amilasa (amylase), tampn pH 7 (pH7 Buffer)
- tubo de ensayo n4: almidn (starch), amilasa (amylase), tampn pH 7 (pH7 Buffer)
- tubo de ensayo n5: maltosa (maltose), agua desionizada (deionized water), tampn pH
7 (pH7 Buffer)
- tubo de ensayo n6: almidn (starch), amilasa (amylase), tampn pH 2 (pH2 Buffer)
- tubo de ensayo n7: almidn (starch), amilasa (amylase), tampn pH 9 (pH9 Buffer)
Para hacer esto, pulsa sobre el cuentagotas de la sustancia deseada, arrastrndolo encima
del tubo de ensayo correspondiente y suelta el botn del ratn.
3.- Pulsa el nmero <<3>> debajo del tubo n3. El tubo bajar en la unidad de incubacin.
Entonces pulsar Hervir (Boil). El tubo hervir y despus volver a subir. Observa que la
nica diferencia entre el tubo n3 y el n4 es que el n3 ha hervido.
4.- Asegrate de que la temperatura de incubacin est fijada a 37C y el temporizador
(timer) est fijado en 60 minutos. Si no es as, pulsa los botones (+) o (-) para ajustarlo.
5.- Pulsa incubar (incubate). Los siete tubos de ensayo bajarn al interior de la unidad de i
cubacin y sern agitados suavemente mientras se incuban. Al final del perodo de
incubacin, los tubos de ensayo volvern a subir, y la puerta del armario de anlisis se
abrir.
Observars que en el armario de anlisis hay 7 tubos de ensayos vacos y dos botellas
cuentagotas. Las dos botellas cuentagotas contienen los reactivos IKI y de Benedict. La
prueba de IKAI detecta la presencia de almidn, mientras que la prueba de Benedict
detecta la presencia de azcares tales como, glucosa, o maltosa. Aadirs estos reactivos
a tus 7 tubos de ensayo experimentales para determinar si ha habido o no digestin.
6.- Pulsa sobre el tubo de ensayo n1 de la ranura 1 de la incubadora. Vers cambiar el
cursor a un tubo de ensayo en miniatura. Arrstralo al borde del primer tubo del armario
de anlisis, despus suelta el botn del ratn. El contenido del tubo de ensayo en
miniatura se vaciar en el tubo de anlisis.
7.- Repite el paso 6 para los tubos de ensayo restantes. Asegrate de hacer esto
secuencialmente (tubo de ensayo n2, n3, luego el n4, etc.)
8.- Una vez que las soluciones de cada uno de los tubos de la incubadora se han
transferido a los tubos del armario de anlisis, pulsa sobre el tapn de la botella
cuentagotas del reactivo IKI, arrastrndolo a la boca del primer tubo del armario de
anlisis y suelta el botn del ratn. Se vertern las gotas del reactivo de IKI. Repite esto
para todos los tubos de ensayo del armario de anlisis y observa cualquier cambio de
color. Un color azul oscuro o gris indica una prueba positiva para el almidn; un color
amarillo indica una prueba negativa. Anota tus resultados de la prueba IKI en la tabla que
hay ms adelante.
9.- Despus, pulsa sobre el tapn de la botella cuentagotas de Benedict, arrstralo a la
boca del tubo de ensayo n1, (en la ranura 1 de la incubadora) y suelta el botn del ratn.
Las gotas del reactivo de Benedict se aadirn al tubo de ensayo. Reptelo para los
restantes tubos de ensayo de la incubadora.
10.- Despus de que el reactivo de Benedict se haya aadido a cada tubo de ensayo, pulsa
Hervir (Boil). Todos los tubos de ensayo descendern a la unidad de incubacin, hervirn y
volvern a subir. Examina los cambios de color de los tubos. Un color verde, naranja o
rojizo indica la presencia de maltosa, considerando positivo el resultado de la prueba de
Benedict. Un color azul indica que no hay maltosa y el resultado de la prueba de Benedict
se considera negativo.







Resultados
Tubo n 1 2 3 4 5 6

7

Sustancia
Almidn
Agua
desionizada
Tampn pH7

Amilasa
Agua
desionizada
Tampn
pH7
Almidn
Amilasa
Tampn
pH7
Almidn
Amilasa
Tampn
pH7
Maltosa
Agua
desionizada
Tampn
pH7
Almidn
Amilasa
Tampn
pH2
Almidn
Amilasa
Tampn
pH9


Condiciones
de incubacin


37C 37C
Hervido y
luego
incubado a
37C
37C 37C 37C 37C

Prueba del
reactivo IKI




+

-


+

-

-

+

+

Prueba del
reactivo
Benedict


-

-

-

+

+

+

+

Prueba del reactivo IKI: cuando es positivo (+) determina la presencia de almidn, es decir
no acta la enzima amilasa.
Prueba del reactivo Benedict: las pruebas positivas (+) detectan los azucares reductores,
es decir acta la enzima amilasa.










Discusin
Cul era el propsito de los tubos n1 y n2?
En el tubo 1 es para determinar el efecto del reactivo IKI el cual detecta almidn. En el
tubo 2 como no hubo almidn, no se deba detectar nada, como ocurri.
Qu puedes concluir de los tubos n3 y n4?
En el tubo 3 se encuentra almidn y amilasa, al ser hervido la amilasa, la cual es una
enzima se desnaturaliza, por lo tanto el almidn no es degradado, dando positivo a la
prueba de IKI y negativo a Benedict.
El tubo 4 tiene las mismas caractersticas del tubo 3 con la excepcin de no ser hervido,
con lo cual la enzima (amilasa) si acta. La prueba de Benedict detecta la maltosa, el
producto de la reaccin enzimtica.
Qu indican los tubos n4, n6 y n7 sobre la actividad de amilasa y el pH?
En estos tubos las condiciones son iguales a excepcin del pH:
El tubo 4 tiene un pH neutro (7) con lo cual la enzima trabaja de forma ptima.
En los tubos 6 y 7, se trabaja con pH 6 y 7 respectivamente, con los cuales la enzima
trabaja deficientemente, por lo tanto la reaccin del almidn no es completa, detectando
almidn y maltosa en la muestra, esto es demostrado por que tanto la prueba de IKI como
la de Benedict dan positivo.
Cul es el pH ptimo para la amilasa?
El pH ptimo para la amilasa es cercano a 7 (neutro) esto es demostrado por las pruebas y
descrito anteriormente.
3

Accin de la enzima, actuando de forma eficiente.
La amilasa acta a pH diferentes al ptimo?
Segn las pruebas acta, pero no degrada totalmente el almidn siendo su accin
enzimtica deficiente.
Cul es el producto final de la digestin del almidn?
Glucosa, un azcar reductor.
4
En qu tubos detectaste la presencia de maltosa al final del experimento?
En los tubos 4, 5, 6 y 7.
Por qu la maltosa no estuvo presente en los otros tubos?
En el tubo 1 porque el almidn no fue degradado, en el tubo 2 porque no se aadi
almidn, y en el tubo 3 porque se hirvi la muestra, desnaturalizando la muestra.
La amilasa salival sera desactivada casi por completo en el estmago. Sugiere una razn
del porqu, basado en los resultados.
Debido a la acidez del estmago, el HCl le confiere a este rgano un pH cercano a 2,
siendo la enzima desnaturalizada, suspendindose la accin de esta enzima.
5


Conclusin
Gracias al trabajo realizado podemos entender de una manera ms clara y sencilla las
funciones que tienen el aparato o sistema digestivo en el primer compartimento que es
la boca.
Aprendimos que las enzimas son de una gran importancia y trascendencia para lograr la
liberacin de nutrimentos y que no actan por si solas ni en cualquier condicin. En el
aula, podemos acercar este conocimiento de manera prctica ya sea utilizando este
mismo programa (PhysioEx 6.0) o bien bajo condiciones en laboratorio.
De manera prctica y a modo de ejemplo, podramos recrear la condicin de una protena
desnaturalizada y una que no lo est (hirviendo un huevo, y observando que al ponerse
duro este no vuelve a su estado original, ocurriendo un cambio irreversible de la protena)
y relacionarlo con la accin de las enzimas que en realidad son protenas.
Por lo tanto, es de suma importancia conocer el funcionamiento de las diferentes enzimas
tanto en su accin con el sustrato correspondiente como tambin las condiciones de PH y
temperatura optimas en las cuales es funcional. Esto nos dice que la maquinaria de la
digestin es de una precisin nica y que sin todos los procesos adicionales de
preparacin del alimento a medida que avanza por el tubo digestivo, no podra
aprovecharse todas las propiedades que estos tienen.
Bibliografa
1.- Hill, R. (2006). Fisiologa Animal. Ed. Mdica Panamericana, 132.
2.- Koolman, J. (2004). Bioqumica. Ed. Mdica Panamericana, 94.
3.-Gal B. (2007). Bases de la Fisiologa. Editorial Tebar, 275.
4, 5.- Pena, A. (1988). Bioqumica. Editorial Limusa, 256.