Tercera Edwin

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RESUMEN

EFECTO DE TRES CEPAS DE Trichoderma spp. Y SEIS FUNGICIDAS
EN EL CONTROL DE LA PUDRICIN SECA DEL FRIJOL (Phaseolus
vulagris L.)

El presente trabajo de investigacin se realiz en las instalaciones de la
Facultad de Ciencias Agrarias Tropicales (UNSAAC sede Quillabamba),
localizado en la provincia de La Convencin (Cusco), entre Enero y Marzo
del 2013, se estudi el Efecto de tres cepas de Trichoderma spp. y seis
fungicidas en el control de la pudricin seca de frijol (Phaseolus vulgaris L.)
en condiciones in vitro e invernadero. Cuyos objetivos fueron: 1. Realizar el
aislamiento, identificacin y prueba de patogenicidad del agente causal de
la pudricin seca del frijol. 2. Prueba in vitro de fungicidas para el control
del agente causal de la pudricin seca del frijol. 3. Determinar el porcentaje
de antagonismo de los biocontroladores (T. harzianum, T. viride y T.
lignorum) frente al agente causal en la prueba de enfrentamiento a nivel in
vitro. 4. Determinar del porcentaje de control de los biocontroladores (T.
harzianum, T. viride y T. lignorum) y fungicidas sobre el agente causal en
condiciones de invernadero. Con esto se pretende saber que cepa de
Trichoderma spp. y que fungicida provee mejor eficiencia de control.

El aislamiento del agente causal de las plantas enfermas de frijol y de los
esclerotes encontrados en el suelo, sembradas en medio PDA en
condiciones in vitro, present micelio blanco con desarrollo radial y
abundante produccin de esclerotes, a 28C de temperatura. As mismo, la
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identificacin realizada por la Clnica de Diagnosis de Fitopatologa de la
UNALM y la prueba de patogenicidad, confirma que el agente causal de la
pudricin seca del frijol es Sclerotium sp.

A nivel in vitro el efecto de los fungicidas sobre Sclerotium sp. se realiz
por el mtodo del alimento envenenado, cada fungicida se mezcl y
posteriormente fuern vertidos en placas petri y al solidificarse, en el centro
de cada placa se sembr un disco de agar de 5 mm conteniendo micelio
del patgeno, hubo un tratamiento Testigo en el cual el PDA no tuv
fungicida. Los resultados fuern analizados en un Diseo Completamente
al Azar y los promedios mediante la prueba de Tukey. Los fungicidas que
impidiern el desarrollo micelial de Sclerotium sp. fuern: Difenoconazole,
Tebuconazole y Procloraz.

Con la finalidad de determinar el efecto de los biocontroladores sobre el
desarrollo de Sclerotium sp. A los 12 das de la incubacin de los
enfrentamientos de T. viride, T. lignorum y T. harzianum alcanzaron un
18, 13.7 y 6.1% de control lo cual demuestra la capacidad antagonista de
los biocontroladores. Se encontr diferencias significativas entre los
tratamientos y al realizar la prueba de Tukey de los promedios se observ
que T. viride tuvo un desarrollo micelial de 34.60 mm, seguido de T.
lignorum con 36.40 mm y por ltimo T. harzianum con 39.60 mm de
desarrollo micelial con respecto de los testigos.

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En invernadero se realiz las pruebas de control qumico y biolgico, en
macetas de 1 kg. con suelo estril , donde fueron incorporados 15 rodajas
de agar con micelio y esporas de cada biocontrolador y del patgeno
segn los tratamientos. Se mezcl homogneamente el contenido del suelo
estril en la maceta y se procedi a sembrar 4 semillas de frijol tratadas
con los fungicidas previamente y fueron colocados en forma equidistante y
a 1cm de profundidad. Se tuvo testigos para cada fungicida y
biocontroladores. Los resultados indican que el biocontrolador T. viride
obtuvo un 63% de plantas sanas por maceta y el fungicida Difenoconazole
obtuvo 61% de las plantas sanas por maceta.

Los resultados indican la posibilidad de usar el fungicida Difenoconazole y
T. viride a nivel in vitro e invernadero para el control de la inhibicin de
Sclerotium sp. en frijol.

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I. INTRODUCCIN

Quintero (2000) sostiene que entre las especies de leguminosas, el frijol
(Phaseolus vulgaris L.) es el de mayor importancia debido a su adaptabilidad a los
diferentes climas y suelos de nuestro pas. Constituye una fuente proteica de alta
digestibilidad, constituida por varios aminocidos esenciales para el metabolismo
humano entre ellos isoleucina, leucina, fenilalanina, metionina, triptfano y vara
entre 20 y 30%. Adems, puede considerarse tambin como alimento de alto
valor energtico, ya que contiene de 45 a 70% de carbohidratos totales por
aportar cantidades importantes de minerales. En las distintas variedades no
existen diferencias notables de estos contenidos.

Segn el Ministerio de Agricultura y Riego (2014), el Per para el 2013 llego a
ocupar una extensin de 84 mil hectreas de frijol comn grano seco, cont con
una produccin de 98 mil toneladas y el rendimiento promedio nacional fue 1.116
kilogramos por hectrea.

Chumbiauca & Munive (1993) indican que hay varias especies de hongos en el
suelo como: Fusarium sp., Rhizoctonia sp., Pythium sp., Sclerotium sp. y
Sclerotinia sp., que son responsables de causar las pudriciones radiculares de
mayor importancia econmica, pues afecta un gran nmero de cultivos tanto en el
Per como en el mundo. En nuestro pas ocasiona una incidencia de 50% a 60%
en los diferentes cultivos, disminuyendo as la produccin y calidad de estos
generando prdidas hasta ms del 50% del costo de produccin. Asimismo,
mencionan que las zonas del Per en las que est ms ampliamente distribuido el
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agente causal de la pudricin seca del frijol son Caete, Mala, Casma, La Molina,
Piura, San Ramn, entre otras. El control de este patgeno es difcil y existe muy
pocos estudios referentes a nuevas formas de control. Por lo tanto, una alternativa
de control es la utilizacin de biocontroladores, tales como los hongos del gnero
Trichoderma spp. solos o en combinacin con fungicidas.

1.1 OBJETIVOS

1.1.1 Objetivo General
Evaluar el efecto de tres cepas de Trichoderma spp. y seis fungicidas sobre el
agente causal de la pudricin seca del frijol (Phaseolus vulgaris L.).

1.1.2 Objetivos Especficos
Realizar el aislamiento, identificacin y prueba de patogenicidad del
agente causal de la pudricin seca del frijol.
Prueba in vitro de fungicidas para el control del agente causal de la
pudricin seca del frijol.
Determinar del porcentaje de antagonismo de los biocontroladores (T.
harzianum, T. viride y T. lignorum) frente al agente causal de la pudricin
seca de frijol en la prueba de enfrentamiento a nivel in vitro.
Determinar del porcentaje de control de los biocontroladores (T. harzianum,
T. viride y T. lignorum) y fungicidas sobre el agente causal de la pudricin
seca de frijol a nivel de invernadero.

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1.2 HIPTESIS

Trichoderma harzianum tendr un mayor desarrollo micelial en
comparacin a las dems especies de Trichoderma spp. sobre el agente
causal de la pudricin seca del frijol a nivel in vitro?
Trichoderma viride presentara mayor porcentaje de antagonismo frente al
agente causal de la pudricin seca del frijol a nivel in vitro?
Con Trichoderma lignorum se lograra un mayor porcentaje de control en
condiciones de invernadero?
Cul de los fungicidas sistmico o de contacto ser eficaz frente al agente
causal de la pudricin seca del frijol en condiciones in vitro e invernadero?

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II. MARCO TERICO

2.1.- ORIGEN DEL FRIJOL

Valladolid (1993) menciona que las leguminosas se cultivaron desde tiempos
prehistricos, aproximadamente 10 000 aos A.C., actualmente se encuentran un
nmero de especies que estn distribuidas en los diferentes pases del mundo.

Cubero y Moreno (1989) sealan que las investigaciones arqueolgicas han
permitido ubicar restos en diversos sitios de EEUU, Mxico y Per. En la regin
suroeste de los EEUU, en las cuevas Tularosa, BasketMaker II y en Snaketown,
se han encontrado restos cuya antigedad se remonta a unos 2300, 1500 y 1000
aos A.C. En Mxico los restos arqueolgicos de frijol se encuentran en el Rio
Zape y Durango, tienen la misma antigedad de 1300 aos A.C.; los de la Regin
Ocampo y Tamaulipas fluctan entre los 6000 y 4300 A.C; mientras los de la
Cueva de Coexcatlan que se sitan en el Valle de Tehuacn, Puebla 7000 aos
A.C. En el Per se ha encontrado restos con antigedad de 2000 aos A.C. en la
Huaca Prieta, de 2500 aos A.C. en el Valle de Nazca y ejemplo de frijoles
completamente domesticados en la Cueva de Guitarrero, en el Callejn de
Huaylas-Ancash, a los cuales segn la prueba del Carbono 14 se les atribuye una
antigedad de 768+/-280 a 1000+/-300 A.C. Los frijoles encontrados en el
Callejn de Huaylas, aproximadamente 30 especmenes, corresponden a granos
rojo, marrn oscuro y rojo oscuro, tambin haba granos moteados, algunos de
forma redonda, otros planos y otros alargados o arrionados.

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El Centro Internacional de Agricultura Tropical CIAT (1984) para explicar el
proceso de domesticacin y variabilidad existente en el frijol cultivado y aquella
que se qued en estado silvestre, empleando el anlisis electrofortico de
faseolina (protena principal de la semilla de frijol) con apoyo de la Universidad de
Wisconsin en un estudio sistemtico de las formas silvestres y cultivadas de
Phaseolus vulgaris L. en Meso-Amrica y los Andes, pudo establecer poblaciones
silvestres de orgenes distintos por su faseolina. En el Norte de los Andes y
Amrica Central se encontr faseolina tipo T y en Mxico del tipo S que es ms
frecuente; en 1989 se hallaron 7 tipos de faseolina en 25 genotipos silvestres de
Per y Bolivia. Estos resultados aclaran el papel de los Andes del Sur como uno
de los centros de domesticacin.

2.2.- TAXONOMA DEL FRIJOL

Camarena et al., (2009) sealan la siguiente clasificacin taxonmica:
Reino : Vegetal
Divisin : Magnoliophyta
Clase : Magnoliopsida
Subclase : Rosidae
Orden : Fabales
Familia : Fabaceae
Subfamilia : Faboides
Gnero : Phaseolus
Especie : Phaseolus vulgaris L.

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2.3.- MORFOLOGA DEL FRIJOL

2.3.1. Raz
Valladolid (1993) menciona que la etapa inicial est formada por la radcula del
embrin que luego se transforma en raz principal. De ella salen las races
secundarias y de estas las terciarias y as sucesivamente. En los puntos de
crecimiento de estas subdivisiones se encuentran los pelos absorbentes, los
cuales cumplen la funcin importante en la absorcin del agua y nutrientes del
suelo. El mayor volumen del sistema radical se concentra en los primeros 20 cm
de profundidad del suelo. Las races con frecuencia presentan ndulos de forma
polidrica, de 2 a 5 mm de dimetro, colonizados por bacterias del gnero
Rhizobium. Estas fijan el nitrgeno atmosfrico que luego es aprovechado por la
planta y tambin es aportado al suelo.

2.3.2. Tallo
Camarena et al., (2009) indican que es el eje central de la planta y est
constituido por una sucesin de nudos y entrenudos. Un nudo, es el punto de
insercin de las hojas (o los cotiledones) en el tallo. El ngulo formado entre el
tallo y el peciolo de la hoja se denomina axila. En la axila aparece un complejo de
tres yemas que luego se desarrollan como ramas o como inflorescencias, o
ambas.

Valladolid (1993) menciona que la primera parte del tallo comprendida entre la
insercin de las races y el primer nudo se denomina hipoctilo. El primer nudo es
el punto de insercin de los cotiledones. Entre el nudo cotiledonal y el segundo
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donde van insertadas las hojas primarias es el epictilo. El tallo generalmente es
de dimetro mayor que las ramas y puede ser erecto, semi postrado y postrado.
Ello depende del hbito de crecimiento de la variedad.

CIAT (1988) sostiene que el hbito de crecimiento es un carcter morfo
agronmico importante porque est relacionado al manejo del cultivo y el
potencial de rendimiento de la variedad. As en estudios realizados se consideran
4 tipos de hbito de crecimiento:

Tipo I : Habito de crecimiento arbustivo determinado
Tipo II : Habito de crecimiento arbustivo indeterminado
Tipo III : Habito de crecimiento postrado indeterminado
Tipo IV : Habito de crecimiento indeterminado trepador

Camarena et al., (2009) mencionan que los tres primeros tipos de hbito de
crecimiento son comunes en la Costa. En tanto que el tipo IV lo es ms en la
sierra y en la selva, por la predominancia de los sistemas de cultivos asociados,
principalmente con maz.

2.3.3. Ramas y Complejos axilares
Valladolid (1993) indica que las ramas se desarrollan a partir del complejo de tres
yemas ubicadas en las axilas. Los complejos axilares estn constituidos por tres
yemas denominadas triadas. El desarrollo de las triadas puede ser de 3 tipos:
completamente vegetativo, floral y vegetativo, completamente floral.

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1.- Desarrollo completamente vegetativo.- En este caso la yema central se
desarrolla primero y produce una rama. De las dos yemas laterales, solo una
tiende a desarrollarse. Este tipo de desarrollo de las yemas sucede en el tercio
inferior de la planta.

2.- Desarrollo floral y vegetativo.- En este caso la yema central produce una
inflorescencia y las laterales al menos una rama.

3.- Desarrollo completamente floral.- En este caso, solo las yemas laterales se
desarrollan convirtindose en botones florales. La yema central permanece en
estado latente. Este tipo de desarrollo se presenta en el ltimo nudo de las
plantas de hbito I.

2.3.4. Hojas
Camarena et al., (2009) mencionan que la planta de frijol tiene dos tipos de hojas:
simples y compuestas. Las hojas simples, son las hojas primarias. Estn en
posicin opuesta en el segundo nudo y caen antes que la planta alcance su
mximo desarrollo. Las hojas compuestas, son las hojas trifoliadas tpicas del
frijol. El foliolo central es simtrico, en tanto que los dos laterales son asimtricos.

2.3.5. Inflorescencia
Valladolid (1993) indica que las inflorescencias pueden ser terminales o axilares.
Las terminales se dan en hbitos de crecimiento tipo I. En la inflorescencia puede
distinguirse tres componentes: el eje de la inflorescencia que se compone de
pednculo y raquis, las bractolas primarias y los botones florales. Antes de
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abrirse las primeras flores, el pednculo se alarga rpidamente. El raquis es una
sucesin de nudos. Los nudos se distinguen por que en ellos se localizan las
brcteas primarias. As mismo, la axila formada entre la brctea y el raquis existe
un complejo de tres yemas (triada floral). De cada triada floral, generalmente las
dos yemas laterales se transforman en flores.

2.3.6. Flor
Camarena et al., (2009) sostienen que la flor del frijol es una tpica papilioncea.
En su desarrollo se pueden distinguir dos estados: el botn floral y la flor
completamente abierta. El botn generalmente se abre cuando ocurre antesis
(fecundacin). La flor consta de 4 partes: cliz, corola, androceo y gineceo.

El cliz, es de forma acampanulada, con 5 dientes triangulares dispuestos en dos
grupos: 2 completamente soldados y 3 visibles en la parte baja. En la base del
cliz hay 2 bractolas ovoides, de tamao casi dos veces mayor al del cliz.

La corola, es pentmera con dos ptalos soldados en su base y tres libres. De los
ptalos libres, el ms sobresaliente se denomina estandarte; los dos restantes
corresponden a las alas. Los dos ptalos soldados corresponden a la quilla que
envuelve al androceo y al gineceo. La corola puede ser de color blanco, rosado o
purpura.

El androceo, est formado por 9 estambres soldados por su base y uno libre
frente al estandarte.
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El gineceo, incluye el ovario comprimido, el estilo encorvado y el estigma lateral
terminal con agrupaciones de pelos en forma de brochas.

2.3.7. Fruto
Valladolid (1993) indica que es una vaina con dos valvas provenientes del ovario
comprimido, las valvas unidas conforman dos suturas. La sutura placental o
dorsal a la que estn unidas las semillas y la sutura ventral. La presencia de fibra
en las suturas y en la parte interna de las valvas determina la dehiscencia,
carcter morfo agronmico importante que sirve para clasificar las variedades.
Vainas con mucha fibra en las suturas y en las valvas tienden a abrirse a la
madurez de cosecha.

2.3.8. Semilla
Valladolid (1993) menciona que se origina del ovulo fecundado. Puede tener
varios colores y formas: ovoides, esfricos, arrionados, etc. Internamente la
semilla est constituida solamente por el embrin, el cual est formado por la
plmula, las dos hojas primarias, el hipoctilo, los dos cotiledones que concentran
las reservas nutritivas y la radcula.

2.4.- IMPORTANCIA DEL FRIJOL

Singh (1999) indica que el frijol comn es una de las legumbres ms importantes
en el mundo que por sus caractersticas nutricionales y agronmicas es una
fuente importante de protenas, fibra diettica, minerales y vitaminas (tiamina,
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riboflavina, niacina, calcio, hierro y magnesio) para millones de personas a nivel
mundial.

Valladolid (1993) menciona que el gnero Phaseolus comprende 50 especies, de
las cuales cuatro son de importancia econmica: Phaseolus vulgaris, Phaseolus
lunatus, Phaseolus coccineus y Phaseolus acuitifolius; siendo el frijol Phaseolus
vulgaris L. el de mayor inters econmico por ser cultivado en regiones templadas
y tropicales.

FAO (2012) menciona segn cifras estimadas que la produccin a nivel mundial
ha venido en aumento, tanto en Amrica Latina y el resto del mundo. La
produccin mundial de frijol grano seco el ao 2012 alcanzo 21.6 millones de
toneladas con una superficie cosechada que vara de 28.5 a 30.2 millones de
hectreas, destacando como principales productores Brasil con 3.4 millones de
toneladas, India con 3.2 millones de toneladas, China con 2.0 millones de
toneladas y los pases que destacan con las mayores superficies cosechadas son
India y Brasil cuyos registros observados muestran que el primer pas tiene
incrementos de superficie que van de 5.8 millones de hectreas en el ao 2009 y
el ao 2011 con 8.0 millones de hectreas.

El Ministerio de Agricultura y Riego - MINAGRI (2014) indica que la superficie
cosechada de menestras ha ido incrementndose sostenidamente en nuestro
pas; siendo el frijol castilla, el caup, el frijol de palo, el pallar, el haba y la arveja
los cultivos con mayor crecimiento; ubicndose el frijol comn grano seco dentro
de los diez principales cultivos. El Per en 2013 ocup una extensin de 84mil
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hectreas de frijol comn grano seco, conto con una produccin de 98 mil
toneladas y el rendimiento promedio nacional fue 1.116 kilogramos por hectrea.
As mismo la mayor superficie se encuentra concentrada en el departamento de
Cajamarca, con 17 839 hectreas seguido de Amazonas con 7 553 hectreas y
Arequipa con 6 583 hectreas. Cajamarca destaca en la superficie cosechada y
representa el 24% del total nacional, siendo las provincias andinas con mayores
reas sembradas, Cajamarca, Celendn, San Marcos y Amazonas que ocupa el
segundo lugar y representa el 10% en superficie cosechada sembradas en Ceja
de Selva. En Arequipa, se cosechan menores reas que Amazonas pero la
produccin es mayor por el alto rendimiento promedio (0.9 t/ha), esto debido al
uso de semillas certificadas y al manejo adecuado del cultivo.

Camarena et al., (2009) mencionan que en el Per el cultivo de frijol, est
ampliamente difundido con cultivares que se adaptan a las diferentes regiones del
pas y la produccin proviene en su gran mayora de pequeos productores. El
frijol se siembra mayormente en la regin de la sierra, como un cultivo secundario,
en lotes pequeos en asociacin con otros cultivos o despus de un cultivo
principal, se le considera como un cultivo de subsistencia para autoconsumo y su
venta se realiza mayormente en las ferias que son muy usuales en la mayora del
territorio. Sin embargo, hay agricultores que han introducido las variedades
arbustivas y precoces de frijol que alcanzan mayores volmenes de produccin y
tienen acceso al mercado nacional e internacional.

La Direccin Regional de Agricultura Cusco - DRAC (2013) indica que la
produccin agrcola al mes de abril del 2013 se increment en 11.2%
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principalmente en los cultivos de papa, maz choclo y frijol grano seco. La
produccin acumulada de frijol grano seco se increment en 191.1% en
comparacin o similar al perodo del ao del ao anterior, principalmente en los
distritos de: Mollepata que se increment en 172.5% (690 t), en Echarate que se
increment en 0% (292 t), en Chinchaypujio que se increment en 560% (168 t) y
en Limatambo que se increment en 196.3% (106 t).

2.5.- PUDRICIN SECA DEL FRIJOL

Aycock (1966) sostiene que es una enfermedad radical causada por Sclerotium
rolfsii Sacc. (Teleomorfo: Athelia rolfsii (Curzi) Tu & Kimbr) es un hongo
fitopatgeno polfago, habitante del suelo con ms de 500 especies de plantas
entre cultivadas y silvestres, que son de importancia econmica en regiones
tropicales y subtropicales del mundo. Esta enfermedad es conocida con otros
nombres comunes en Amrica Latina y son: pudricin basal del tallo y raz, mal
del esclerocio, aublo sureo o tizn sureo, tizn o podredumbre basal del tallo y
raz. Agrios (1996), indica ataca diversas fases del desarrollo de sus hospederos,
desde la semilla, plntulas, plantas herbceas, plantas leosas, races carnosas,
bulbos o frutos en contacto con el suelo y hasta los productos agrcolas a nivel de
postcosecha.

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2.5.1.- Taxonoma
Agrios (1996), realiza la clasificacin de la siguiente manera:
Reino : Fungi
Phyllum : Basidiomycota
Clase : Basidiomycetes
Subclase : Agaricomycetidae
Orden : Polyporales
Familia : Corticiaceae
Gnero : Sclerotium
Especie : Sclerotium rolfsii Sacc.

2.5.2.- Sntomas y Signos
Agrios (1996) menciona que los sntomas que ocasiona este patgeno en los
tejidos afectados son: amarillamiento en las hojas inferiores, lesiones en las bases
de los hipoctilos de las plantas, caracterizadas por hundimientos,
ablandamientos y decoloraciones de la corteza, justamente debajo de la lnea del
suelo. A medida que la enfermedad avanza, las hojas de las ramas superiores
pueden marchitarse y al final toda la planta cae y se quiebra por la base del tallo.
Asimismo, cuando ataca a las plntulas, el hongo invade todas sus partes hasta
que ocasiona su muerte, la cual ocurre con gran rapidez. Cuando ataca a las
plntulas que ya han formado algn tejido leoso, el hongo no las invade
totalmente, pero se desarrolla en la corteza y rpida o lentamente cubre a las
plantas, las cuales finalmente mueren. Por lo comn, la infeccin empieza como
una lesin caf oscura que aparece sobre el tallo suculento y justo por debajo de
la superficie del suelo. Los primeros sntomas observables se manifiestan en un
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amarillamiento o marchitez de las hojas inferiores o bien en muerte descendente
de las hojas desde su punta hasta el peciolo. Dichos sntomas avanzan
posteriormente hasta las hojas de la parte superior de la planta. Al mismo tiempo,
el hongo avanza hacia la parte superior de la planta y finalmente destruye el
sistema radicular. Su micelio blanco aparece siempre en los tejidos que ha
infectado y desde ah avanza sobre el suelo hasta las plantas vecinas,
produciendo nuevas infecciones. Adems, S. rolfsii produce los sntomas que se
describieron anteriormente en la mayora de los hospedantes, en ocasiones
produce basidiosporas en los bordes de las lesiones cuando el clima es hmedo.
Es decir, su fase perfecta es Athelia rolfsii.

Reyes et al. (2002) mencionan inmediatamente se produce un micelio abundante
de color blanco velloso y ramificado, se presenta la formacin de esclerotes
(signos) que aparecen en grandes cantidades, adheridos a la base de los tallos de
las plantas afectadas, los cuales son esfricos y pequeos, blancos a cremas y
posteriormente se tornan pardos de 1 a 2 mm de dimetro, los cuales finalmente
se vuelven de color caf cuando maduran, y es caracterstico de esta especie.

Cruz et al. (2000) sostienen que el hongo produce diversos sntomas, incluyendo
el damping-off de pre y post emergencia, la podredumbre de la base del tallo y
manchas foliares. En las plntulas y en el tallo, el hongo produce un crecimiento
micelial blanco y algodonoso, sobre la superficie del tallo. Las plntulas infectadas
mueren, en general, prematuramente. El hongo produce abundantes esclerocios
redondeados, de color canela a marrn-rojizo o marrn oscuro, de un tamao
semejante al de las semillas de mostaza. Los esclerocios estn unidos al micelio
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en la superficie de la planta. La infeccin de la hoja es poco comn. Las manchas
foliares son circulares y de color marrn a pajizo, y generalmente concntricas
con un borde angosto y oscuro. As mismo cuando el patgeno penetra el tejido,
produce una masa considerable de micelio en la superficie de la planta. Es un
habitante tpico del suelo, ejerce su mxima agresividad a temperaturas prximas
a los 30 C. Su ataque es favorecido por acumulacin superficial de residuos
orgnicos en el suelo. Coloniza la materia orgnica y si sta est cerca de las
plantas susceptibles, le servir de puente para iniciar la accin patgena. Los
esclerocios son importantes para la persistencia del patgeno en el suelo, en la
ausencia de plantas susceptibles o en condiciones desfavorables puede sobrevivir
como micelio en los tejidos infectados o en desechos de plantas. Los esclerocios
se diseminan por prcticas culturales (suelos infestados o herramientas
contaminadas), plntulas infestadas, agua de irrigacin, vientos y posiblemente
semillas.

2.5.3.- Caractersticas morfolgicas
Aycock (1966) indica que S. rolfsii se caracteriza por presentar micelio blanco y
sedoso con abundante micelio areo, crece sobre substratos conteniendo
azucares simples. Las colonias crecen radialmente y el micelio se presenta denso
y disperso en manojos concntricos. El micelio en algunos aislamientos se
presenta como cordones rizomrficos. Las hifas son hialinas, de pared delgada
cuando jvenes septadas y con dos clampas de conexin en los bordes, a veces
desarrollan ramas. Adems, los esclerotes constituyen un conjunto de hifas que
se unen en forma paralela en nmero de tres a doce, luego toman la forma
esfrica. Estas estructuras pueden desarrollarse en cuatro das, pero los
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esclerotes se forman solo cuando el micelio est completamente cubierto por el
hongo o cuando el desarrollo se encuentra limitado.

2.5.4.- Epidemiologa
Agrios (1996), el inculo de S. rolfsii est compuesto de esclerocios, micelio y
basidiosporas. Los esclerocios son las estructuras principales de supervivencia.
Para el crecimiento ptimo del hongo se requieren temperatura y humedad alta; el
fitopatgeno no se adapta muy bien a las condiciones de baja temperatura. As
mismo, la germinacin de los esclerotes disminuye al ser mayor la profundidad del
suelo a la que se encuentren, debido a la reduccin de la aireacin.

Aycock (1966); Krups y Domnguez (1978); y Punja (1985) mencionan que la
enfermedad se disemina en el campo por medio de micelio, esclerotes,
basidiosporas, dispersin de rastrojos con estructuras del hongo, por suelo
infestado por el agua de riego, partculas de suelo adheridas a los implementos
agrcolas y animales, a travs de la semilla o por efecto del drenaje superficial
provocado por las lluvias.

Montealegre (1990) refiere que el desarrollo de S. rolfsii se ve favorecido por
temperaturas entre 28-35C, creciendo entre los 8 y los 40C, del mismo modo
crece en un rango de pH entre 1.4 - 8.6 siendo su ptimo de 3.0 - 6.5. este
microorganismo se encuentra como parasito facultativo, pudiendo desarrollarse
saprofticamente en el suelo.

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Aycock (1966); Krups y Domnguez (1978); Bolkam (1980) y Punja (1985)
mencionan si no se presentan condiciones de temperatura, aireacin y humedad
favorables. La sobrevivencia de S. rolfsii se da en forma de esclerotes, los cuales
estn por largos periodos en los residuos de cultivos enfermos o en el suelo.

2.5.5.- Distribucin de la enfermedad
Aycock (1966) menciona que este patgeno es comn en el sur de los Estados
Unidos, Amrica Central, la Regin del Caribe, Amrica del Sur, frica, Asia,
Filipinas y varios pases Europeos.

Olivos (1989) indica que en Amrica Latina es considerada como enfermedad
importante en Brasil, Chile, Colombia, Mxico, Per, Uruguay y Venezuela. En
Chile, durante 1987 S. rolfsii estuvo afectando 150 ha de cultivo de frijol
provocando daos de alta magnitud, anteriormente haba sido detectada en otros
cultivos. Adems ese mismo ao en Per lo reportan afectando a Capsicum
frutescens L., y se contina registrando su presencia en cultivos de cebada, frijol,
arroz, papa, etc. As mismo, en el ao 1987 se report que en los meses de mayo
a junio, afect hasta un 30% de plantas de cebada al estado de macollamiento y
encaado en la zona de Carhuaz.

Vallejos (1988) indica que en Per, en el ao 1929 Abbott ya lo report como uno
de los causantes de pudriciones radiculares de frijol.

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2.6.- CONTROL QUMICO

Latorre (1988) menciona el control del agente causal de la pudricin seca es difcil
debido a que puede atacar un gran nmero de especies vegetales (siendo
muchas de ellas malezas) y por la formacin de esclerotes, pudiendo sobrevivir
en el suelo por muchos aos; sin embargo, la severidad de este hongo puede
disminuir mediante prcticas de control biolgico y qumico. Por ello, indica que
los fungicidas son sustancias qumicas que, aplicados a las plantas, las protegen
de la penetracin y/o posterior desarrollo de hongos patgenos en sus tejidos es
decir, es un compuesto que mata o inhibe el crecimiento del hongo dependiendo
de su modo de accin y al grupo qumico que pertenecen (observar cuadro 1 y 2),
as tenemos a:

a.- Fungicidas protectores: tambin llamados de contacto, se aplican antes de que
lleguen las esporas de los hongos. Actan solamente en la superficie de la planta
donde el fungicida ha sido depositado y evitan que los esporangios germinen y
penetren las clulas. Por ello se recomienda cubrir la mayor parte de la planta con
este tipo de productos. Aqu tenemos a los fungicidas: Propineb 70% WP,
Mancozeb 80% WP y Procloraz 450 g/l CE.

b.- Fungicidas erradicadores: tambin llamados sistmicos, se aplican para el
tratamiento de la planta ya enferma por hongos. Son absorbidos a travs
del follaje o de las races y se movilizan por toda la planta. Otros productos
sistmicos, conocidos como fungicidas translaminares tienen la capacidad de
moverse del lado superior de la hoja al inferior, pero no de hoja a hoja. Los
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MODO DE
ACCIN
SITIO DE ACCIN
NOMBRE DEL
GRUPO
GRUPO
QUMICO
NOMBRE
COMN
Biosntesis de
menbranas
C14- demetilacin en
la biosntesis de
esteroles: Clase I
Fungicidas
inhibidores de la
biosntesis de
esteroles
Imidazoles Procloraz
Accin
contacto Multi-
sitio
Accin de contacto
multi-sitio
En estudio Ditiocarbamatos
Mancozeb,
Propineb
FUNGICIDAS DE CONTACTO
MODO DE
ACCIN
SITIO DE ACCIN
NOMBRE DEL
GRUPO
GRUPO
QUMICO
NOMBRE
COMN
Biosntesis de
menbranas
C14- demetilacin en
la biosntesis de
esteroles: Clase I
Fungicidas
inhibidores de la
biosntesis de
esteroles
Triazoles
Difenoconazole,
Tebuconazole
FUNGICIDAS SISTMICOS
fungicidas sistmicos afectan varias etapas de la vida del hongo, inhibiendo su
desarrollo. Aqu tenemos los fungicidas: Tebuconazole 250 g/l EW,
Difenoconazole 250g/l CE.

Cuadro 1. Caractersticas de los Fungicidas de Contacto

Fuente: Latorre (1988)

Cuadro 2. Caractersticas de los Fungicidas Sistmicos
Fuente: Latorre (1988)

Latorre (1988) indica los fungicidas de proteccin no controlan los patgenos que
estn dentro de las semillas, solo protegen la parte externa de la semilla y las
plntulas contra una amplia variedad de enfermedades causadas por hongos
presentes dentro de la semilla y provenientes del suelo tales como: Fusarium sp.,
Rhyzoctonia sp., Aspergillus sp. , Rhizopus sp. y, Penicillium sp. Sin embargo,
indica que tratamientos con fungicidas sistmicos como el benomil, carboxina,
dicloran, folicur, carbendazima, propiconazol y otros inhibidores de la biosntesis
- 24 -
de esteroles, aplicados despus del transplante y dirigidos a la base de las
plantas pueden reducir la incidencia de esta enfermedad inhibiendo el desarrollo
del patgeno.

Aycock (1966) y Beebe (1983) sealan que al trabajar con fungicidas como
Campogram, Calixin 75, Captafol y Benodamil, en diferentes dosis dan proteccin
efectiva a semillas de trigo y frijol; es as que recomiendan trabajar con dosis
bajas porque se obtienen el mismo resultado.

Bayer (2011) indica, el Propineb es un fungicida que pertenece al grupo de los
Ditiocarbamatos, es preventivo y curativo de amplio espectro, acta dando muerte
a las conidias cuando entran en contacto porque su mecanismo de accin es de
actividad multi-sitio. Controla eficazmente Alternaria sp., Phytophthora sp., Royas,
Cercospora sp. y Botritis sp. en hortalizas, esprrago, frutales, manzano, algodn,
aj, paprika, vid, ctricos. En ctricos controla el Acaro del tostado y en arroz se
utiliza como desinfectante de semillas. Contiene zinc que es tomado fcilmente
por la planta. Se recomienda de 1.5 a 2.5 kg/ha. Clasificacin Toxicolgica: IV (no
txico) y Banda Toxicolgica: verde, Toxicidad aguda: oral DL 50.

Bayer (2011) indica, el Mancozeb es un fungicida que pertenece al grupo de los
Ditiocarbamatos, es preventivo y de contacto. Se caracteriza por tener una gran
micronizacin, lo que le permite aumentar su accin de cobertura sobre el rea
foliar. Puede ser utilizado en diversas condiciones climticas. Debido a su buena
adherencia, an despus de llover, contina controlando las enfermedades
- 25 -
eficazmente. Clasificacin Toxicolgica: IV (no txico) y Banda Toxicolgica:
verde, Toxicidad aguda: oral DL 50.

Bayer (2009) indica el Procloraz es un fungicida de amplio espectro perteneciente
al grupo de los Imidazoles, tiene efecto preventivo, curativo y erradicativo. Acta
inhibiendo la biosntesis del ergosterol. Se recomienda para desinfeccin de
semillas, coronas, bulbos, tubrculos, esquejes y otros rganos de propagacin.
Controla eficientemente Fusarium en esprrago y claveles, Alternaria en tomate y
papa. Se recomienda su uso para el tratamiento post cosecha en mango. Para
frijol se recomienda dosis de 70 a 150 ml/cilindro. Clasificacin Toxicolgica: III y
Banda Toxicolgica: azul (poco txico), Toxicidad aguda: oral DL 50.

Barahona (2001) menciona Difenoconazole es un fungicida sistmico, pertenece
al grupo de los Triazoles, recomendado para el control de venturia, oidio y otras
enfermedades en pomceas (manzana, pera, membrillo), oidio y accin
complementaria en Botrytis en vides y berries (arndano, frutilla, frambuesa,
mora), oidio y tizn temprano en papa y Tizn temprano, Alternariosis, Oidios y
Fulvia en tomate y enfermedades en Tomate de invernadero, Pimiento, Ajo,
Cebolla, Chalota, Meln, Pepino, Sanda, Zapallo, Zapallo italiano, Alcachofa,
Apio, Esprrago, Repollo, Repollito de Bruselas, Brcoli, Coliflor, Lechuga,
Zanahoria y otras hortalizas. Clasificacin Toxicolgica: II (moderadamente txico)
y Banda Toxicolgica: amarillo, Toxicidad aguda: oral DL 50.

Grigoleit (1988) y Bayer (2011); mencionan que Tebuconazole pertenece al grupo
de los Triazoles, con accin preventiva, curativa y erradicativa. El ingrediente
- 26 -
activo es transportado en direccin acroptala (de abajo hacia arriba por el
xilema), interfiriendo en el metabolismo de los hongos, inhibiendo la sntesis de
ergosterol en ms de un punto. La eficacia del fungicida a base de Tebuconazole,
est ampliamente comprobada por la gran cantidad de especies fungosas
controladas. Es muy eficiente para el control de Oidium, Roya, Cercospora,
Botritis, Alternaria, Monilia, Piricularia, Helminthosporium en esprrago, manzano,
vid, leguminosas, cucurbitceas, ajo, cebolla, tomate, arroz y cebada. Se
recomienda 0.75% a 1L/ha. Clasificacin Toxicolgica: IV (no txico) y Banda
Toxicolgica: verde, Toxicidad aguda: oral DL 50.

2.7.- CONTROL BIOLGICO

2.7.1 Trichoderma spp.
Punja (1985) indica que el gnero Trichoderma tiene diversas ventajas como
agente de control biolgico, pues posee un rpido crecimiento y desarrollo,
tambin produce una gran cantidad de enzimas, inducibles con la presencia de
hongos fitopatgenos. Puede desarrollarse en una amplia gama de sustratos, lo
cual facilita su produccin masiva para uso en la agricultura. Su gran tolerancia a
condiciones ambientales extremas y hbitat, donde los hongos son causantes de
diversas enfermedades, le permiten ser eficiente agente de control; de igual forma
pueden sobrevivir en medios con contenidos significativos de pesticidas y otros
qumicos. Adems su gran variabilidad se constituye en un reservorio de
posibilidades de control biolgico bajo diferentes sistemas de produccin y
cultivos. As mismo reporto como un antibitico reciente a la tricodermina,
- 27 -
causante de la lisis de las paredes celulares de los hongos de suelo (Rizoctonia
sp y Sclerotium sp.) que parasita Trichoderma spp.

Olivos (1989) sostiene que Trichoderma, toma nutrientes de los hongos (a los
cuales degrada) y de materiales orgnicos ayudando a su descomposicin, por lo
cual las incorporaciones de materia orgnica y compostaje lo favorecen; tambin
requiere de humedad para poder germinar, la velocidad de crecimiento de este
organismo es bastante alta, por esto es capaz de establecerse en el suelo y
controlar enfermedades. Adems Trichoderma probablemente sea el hongo
beneficioso, ms verstil y polifactico que abunda en los suelos. No se conoce
hasta el momento que dicho microorganismo sea patgeno de ninguna planta; sin
embargo, es capaz de parasitar, controlar y destruir muchos hongos, nemtodos y
otros fitopatgenos, que atacan y destruyen muchos cultivos; debido a ello,
muchos investigadores le llaman el hongo hiperparsito. Ello convierte al
Trichoderma en un microorganismo de imprescindible presencia en los suelos y
cultivos, y de un incalculable valor agrcola.

Elad et al., (1982), Rivera (1995) y Pantoja (1994) mencionan que el gnero
Trichoderma posee buenas cualidades para el control de enfermedades en
plantas causadas por patgenos fngicos del suelo, principalmente de los
gneros Phytophthora, Rhizoctonia, Sclerotium, Pythium y Fusarium entre otros.
Las especies de Trichoderma actan como hiperparsitos competitivos que
producen metabolitos antifngicos y enzimas hidrolticas a los que se les
atribuyen los cambios estructurales a nivel celular, tales como vacuolizacin,
- 28 -
granulacin, desintegracin del citoplasma y lisis celular, encontrados en los
organismos con los que interacta.

Papavizas et al., (1982) menciona que las especies del gnero Trichoderma son
los antagonistas ms utilizados para el control de enfermedades de plantas
producidos por hongos, debido a su ubicuidad, a su facilidad para ser aisladas y
cultivadas, a su crecimiento rpido en un gran nmero de sustratos y a que no
atacan a plantas superiores. As mismo, los mecanismos por los que las cepas del
gnero Trichoderma desplazan al fitopatgeno son fundamentalmente de tres
tipos: Competicin directa por el espacio o los nutrientes, produccin de
metabolitos y/o antibiticos, ya sea de naturaleza voltil o no voltil y parasitismo
directo de determinadas especies de Trichoderma sobre los hongos
fitopatgenos.

Olivo y Mont (1993) indican que T. viride ejerci mayor biocontrol sobre S. rolfsii,
caracterizndose por su fcil cultivo in vitro, alta densidad reproductiva, por
parasitar internamente micelio y esclerotes mediante estaquillas o clavijas que
matan al patgeno.

Stefanova (2000) menciona que el gnero Trichoderma es un tipo de hongo
anaerobio facultativo que se encuentra de manera natural en un nmero
importante de suelos agrcolas y otros tipos de medios. De este microorganismo
existen ms de 30 especies, todas con efectos benficos para la agricultura y
otras ramas. Adems, estudios realizados en Cuba con la cepa A-34 de T.
harzianum indican que se emplean en cultivos hortcolas y otros como arroz,
- 29 -
man, frijol, cucurbitceas, gladiolos, etc. contra fitopatgenos contra R. solani, P.
aphanidermatum, P. parastica, P. capsici, S. rolfsii y otros.

Rivera (1995) menciona que este gnero Trichoderma se encuentra ampliamente
distribuido en el mundo, y se presenta en diferentes zonas y hbitat,
especialmente en aquellos que contienen materia orgnica o desechos vegetales
en descomposicin, as mismo en residuos de cultivos, especialmente en aquellos
que son atacados por otros hongos. Su desarrollo se ve favorecido por la
presencia de altas densidades de races, las cuales son colonizadas rpidamente
por estos microorganismos. Esta capacidad de adaptacin a diversas condiciones
medioambientales y sustratos confiere a Trichoderma spp. la posibilidad de ser
utilizado en diferentes suelos, cultivos, climas y procesos tecnolgicos. Estudios
realizados en La Molina - Lima indican, que el mejor tratamiento en invernadero
fue con T. viride aplicado al suelo, porque impidi la germinacin de los esclerotes
y el desarrollo micelial de S. rolfsii, asimismo la aplicacin de T. viride slo y en
forma simultnea con fungicidas, permite disminuir significativamente el ataque de
S. rolfsii. Y el fungicida solo que mejor control la enfermedad de S. rolfsii fue
Moncut.

Vallejos (1998) indica que estudios realizados en Lambayeque, el T. viride
controla eficientemente varias especies de Pythium sp., R. solani y S. rolfsii; este
biocontrolador puede ser usado para ejercer un efecto antagnico sobre Armillaria
mellea que afecta las races de los ctricos.

- 30 -
Beebe (1983) en estudios realizados en Colombia, menciona que T. viride,
parasita micelio de S. rolfsii actuando por medio de clavijas alrededor de la hifa de
su hospedero y luego penetra por lisis enzimtica de la pared celular, parasitando
internamente las clulas hifales o invadiendo la capa melanica y el tejido pseudo-
parenquimtico del esclerote por medio de la B-(1-3) gluconasa y quitinasa o por
aglutininas presentes en S. rolfsii y que se consideran como posibles sustancias
para el reconocimiento de la interaccin del fenmeno del micoparasitismo entre
Trichoderma y S. rolfsii.

Saudo et al., (1976) mencionan que en estudios realizados en el departamento
de Nario Colombia, se utiliz cepas de T. viride y B. subtilis donde encontr
que T. viride ejerci antagonismo hacia S. rolfsii. En trabajos realizados en
invernadero en cultivos de frijol comprueban que Trichoderma tiene mayor
efectividad y permite un alto porcentaje de germinacin y mayor nmero de
plantas vivas.

Pantoja (1994) al realizar estudios en La Molina Lima, indica que T. viride
control a P. capsici en condiciones de laboratorio, as mismo para estas
condiciones los fungicidas que se usaron fueron: Propiconazole, Thiabendazelo,
Propineb-Cymoxanil, Clorolatonil, Metalaxil, Triadimenol a dosis de 1/ 1000 donde
no permiti el desarrollo de P. capsici y a nivel de invernadero el fungicida
Metalaxil a dosis 1/1000 fue efectivo contra P. capsici.

Jarecca (2006) menciona que especies de Trichodermas spp. estn siendo
estudiados recientemente por tener dentro de sus mecanismos de supresin la
- 31 -
produccin de enzimas quitinolticas, actualmente se ha reportado la purificacin y
caracterizacin de quitinasas y beta 1,3 glucanasas jugando un rol importante en
el control de S. rolfsii, R. solani y Fusarium sp. As mismo en La Molina Lima
reporto que el producto comercial Custom GP a base de Trichoderma sp. bajo
condiciones in vitro e invernadero tuvo un efecto inhibidor sobre el desarrollo de L.
Theobromae. As mismo probo diferentes dosis (0.05%, 0.1% y 0.15%) del
producto comercial Custom GP donde se observ que estimulo el crecimiento de
las plantas y los mejores crecimientos fueron a dosis de 0.1% y 0.15%.

Paricoto (2008) reporto en un estudio realizado en Cusco que la Cepa de T. viride
mostr un alto nivel de antagonismo hacia S. sclerotiorum con un 12.05 % de
inhibicin, seguido de T. harzianum con un 10.86 % a nivel in vitro. As mismo la
cepa de T. viride mostr ser mejor biocontrolador para S. sclerotiorum seguido de
la cepa de T. lignorum en condiciones de invernadero y a nivel de campo fue T.
viride quien produjo plantas de mayor altura y con mayor cantidad de vainas y
granos en comparacin a T. lignorum, T. harzianum y al testigo.

Carhuavilca (2011) al realizar estudios en Cusco indica que con T. viride y T.
harzianum solos o en combinacin; el mejor resultado lo obtuvo con la
combinacin de T. viride + T. harzianum; por lo tanto recomienda aplicar con una
frecuencia de 7 das, debido a que esta nos ayudara a romper el ciclo biolgico de
Mycena citricolor (Berk. & Curtis) Sacc. que es de 8 das.

- 32 -
2.7.1.1. Taxonoma
Segn Barrn (1972) describe la clasificacin taxonmica de la siguiente manera:
Reino : Fungi
Divisin : Ascomycota
Subdivisin : Deuteromycetes
Clase : Hypomycetes
Orden : Hypocreales
Familia : Hypocreaceae
Gnero : Trichoderma
Especies: T. harzianum, T. viride, T. lignorum

2.7.1.2 Especies de Trichodermas spp.

a. Trichoderma harzianum Rifai.
Hermosa et al., (2000) menciona que a Trichoderma harzianum Rifai, se le puede
encontrar en diferentes materiales orgnicos y suelos, estn adaptados a
diferentes condiciones ambientales lo que facilita su amplia distribucin. Algunas
especies prefieren localidades secas y templadas y otras templadas y fras. Estos
hongos son ampliamente conocidos por su produccin de toxinas y antibiticos.
Se encuentran diferentes especies y cepas de T. harzianum (Rifai). As mismo, en
estadios tempranos T. harzianum (Rifai), tiene micelio de color blanco y
eventualmente desarrolla un color verde oscuro despus de la esporulacin. Las
colonias de T. harzianum (Rifai), crecen y maduran rpidamente a los cinco das
de incubacin en medio de cultivo agar de dextrosa y papa (PDA) a 25C. Posee
conidiforos que sostienen en la parte apical a las clulas conidigenas tipo
- 33 -
filides. Estas van a dar origen a las colonias o fialosporas; las cuales son verdes,
subglobosas a obovoides, de 2.4 3.2 um de longitud x 2.2 2.8 um de dimetro.

b. Trichoderma viride Pers.
Montealegre et al., (1990) mencionan que T. viride Pers. es la especie tipo de este
gnero. Tiene amplia diseminacin en el suelo; por ello las conidias de T. viride
Pers. al entrar en contacto con el suelo y detectar la presencia del hongo
fitopatgeno, genera hifas o hilos que crecen paralelamente a la hifa del hongo
daino, despus de reconocerlo se adhieren y lo penetran enrollndolo hasta
estrangularlo, consumindolo (parasitismo) y compitiendo con l por el espacio,
energa y luz. La produccin de antibiticos por parte de T. viride hace que el
rea donde se desarrolla este hongo est libre de otros hongos dainos al cultivo.
Adems, las colonias son de rpido desarrollo en el medio de cultivo malta agar o
agar dextrosa (PDA), las cuales cubren las placas petri en 5 das a 30C. Y se
caracteriza por presentar: colonias algodonosas al inicio y luego se compactan y
esporulan tomando color verde- amarillento de textura granular formando parches
concntricos. Presenta hifas hialinas septadas, conidiforos, filides y conidios.
Los conidiforos son hialinos, ramificados y pueden ocasionalmente disponerse
en forma piramidal. Las filides son en forma de botella unidas a los conidiforos
en ngulo recto. Las filides pueden encontrarse solitarias o en dispuestas en
grupo. Las conidias miden 3 m de dimetro aproximadamente de forma redonda
u ovalada.

- 34 -
c. Trichoderma lignorum.
Montealegre et al., (1990) mencionan a Trichoderma lignorum como una especie
anaerbica facultativa cosmopolita. Es un habitante natural de suelos agrcolas y
otros medios, especialmente aqullos que contienen materia orgnica, desechos
vegetales en descomposicin o residuos de cultivos. Su desarrollo es favorecido
en presencia de altas densidades de races, a las cuales coloniza para establecer
relaciones simbiticas con varias especies de plantas. Adems, esta especie
parasita, controla y destruye hongos, nemtodos y otros fitopatgenos. No
produce daos en las plantas; por el contrario, produce sustancias que estimulan
el desarrollo vegetal. Su mecanismo de accin se basa en la produccin de
toxinas (antibiticos) y de enzimas lticas que destruyen la pared celular de los
esclerocios (estructuras de resistencia) de varios hongos fitopatgenos.
Asimismo, T. lignorum compite por los nutrientes y la dormancia de la rizsfera
con dichos fitopatgenos. Smith (1960) menciona las especies de T. lignorum y T.
viride, se diferencian por el color y tamao de las colonias, conidias; por ello,
cuando se examinaron un gran nmero de aislamientos las diferencias eran
mnimas considerndose a T. viride como la especie tipo.

2.7.1.3 Mecanismos de accin
Harman (2006) y Howell (2003) mencionan numerosos aislamientos de este
gnero conocidos como competidores de la rizsfera, son capaces de degradar
hidrocarbonos, compuestos clorofenlicos, polisacridos y pesticidas xenobiticos
usados en la agricultura. Los principales mecanismos de biocontrol que utiliza el
gnero Trichoderma en confrontaciones directas con patgenos fungales son el
micoparasitismo, antibiosis y competencia.
- 35 -
Micoparasitismo
Harman (2006) indica el micoparasitismo es un proceso complejo que consiste
de varios eventos como: reconocimiento, penetracin y muerte del
hospedante. As mismo Howell (2003) menciona que durante este proceso
Trichoderma secreta enzimas que hidrolizan la pared celular del hongo
hospedante (patgeno), de donde se liberan oligmeros. Se cree que
Trichoderma secreta enzimas hidrolticas a un nivel constitutivo y detecta la
presencia de otro hongo, percibiendo las molculas liberadas del hospedante
por la degradacin enzimtica.

Antibiosis
Howell (2003) menciona el gnero Trichoderma produce una abundancia de
metabolitos secundarios con actividad biolgica. El termino metabolito
secundario incluye un grupo heterogneo de compuestos naturales y
qumicamente diferentes que posiblemente estn relacionados a funciones de
supervivencia para el organismo productor como: la competencia contra otros
micro y macro organismos, simbiosis, transportadores de metales,
diferenciacin, etc. Dentro de este grupo los antibiticos son productos
naturales capaces de inhibir el crecimiento microbial.

Harman (2006) y Howell (2003) mencionan que la produccin de antibiticos
esta frecuentemente correlacionada con la habilidad de biocontrol; la
aplicacin de antibiticos purificados muestra efectos sobre el patgeno
hospedante similares a los obtenidos cuando se us el correspondiente
microorganismo que los produce. La produccin de metabolitos secundarios
- 36 -
por las especies de Trichoderma spp. depende del aislamiento. Se incluyen
sustancias antifngicas pertenecientes a una gran variedad de compuestos
qumicos clasificados en tres categoras: i. Antibiticos voltiles, ii.
Compuestos solubles al agua, y iii. Peptaibols. La estructura qumica de los
antibiticos de Trichoderma puede sugerir dos diferentes mecanismos de
accin. La produccin de compuestos de bajo peso molecular, no polares y
voltiles, que conllevan a una alta concentracin de antibiticos en el
medioambiente del suelo, tiene un efecto de larga duracin sobre la
comunidad microbial. Mientras que, se puede dar un efecto de corta duracin
por los antibiticos polares y peptaibols debido a los que actan en cercana
proximidad a la hifa que los produce.

Competencia
Howell (2003) indica que la competencia por el carbono, nitrgeno y otros
factores de crecimiento, junto con la competencia por el espacio o sitios de
infeccin especifico, pueden ser tambin usados por los agentes de biocontrol
para reducir la actividad de patgenos de plantas. Se ha demostrado que la
competencia por nutrientes es el principal mecanismo usado por las especies
de Trichoderma spp. porque tienen una gran capacidad para movilizar y
absorber (capturar) nutrientes del suelo. Esto lo hace ms eficiente y
competitivo que muchos otros organismos del suelo. Los componentes
biticos del medioambiente del suelo tienen efectos relevantes en la actividad
de biocontrol de Trichoderma como patgenos de planta. Este efecto puede
ser asociado con un fenmeno conocido como fungistasis del suelo, el cual es
- 37 -
grandemente dependiente de la composicin de la comunidad microbial del
suelo.

2.7.2 Propleo
Bankova et al., (2000) mencionan que el propleo es un biofungicida compuesto
por un conjunto de sustancias resinosas, gomosas y balsmicas de consistencia
viscosa que es recolectado por las abejas de ms de 15 das, con sus
mandbulas, toman las partculas resinosas que hay sobre las yemas de
diferentes plantas, rboles y arbustos, principalmente: lamo, sauce, abedul,
aliso, castao silvestre, pino, encina, enebro y algunas plantas herbceas. Estas
resinas poseen diversidad de metabolitos secundarios txicos que algunas
plantas pueden producir para proteger las partes ms activas de crecimiento, y
que antagonizan, as, con posibles patgenos biticos y plagas. Pruebas de
laboratorio han demostrado su efectividad contrastando sus propiedades
bacteriostticas, bactericidas y fungicidas, aparte de las propiedades anestsicas,
antiflamatorias y cicatrizantes. Adems el producto no presenta ninguna
fitotoxicidad como tal. Es biolgico, siendo un fungicida natural que controla
microorganismos patgenos en una accin obstaculizante que evita que se
reproduzcan al tiempo que induce a la planta al aumento de sus defensas
naturales contra la adversidad. Numerosas aplicaciones prcticas de los
profesionales han demostrado la eficacia de su accin en el control de: Oidio sp,
Fusarium sp, Phytophthora sp, Sclerotium sp, Bacteriosis sp, Peronospora sp,
Botrytis sp, Alternaria sp, etc. Y dosis recomendada de 2-3 cc por litro.

- 38 -
Cortes (2008) indica que el extracto etanlico de prpolis (EEP) obtenido a partir
de una maceracin alcohlica de prpolis bruto, aplicado a una concentracin de
50ml por cada 1L de agua, ha presentado actividad fungicida frente a Alternaria
solani, tanto en condiciones de campo sobre el cultivo de tomate, como en
condiciones in vitro.

- 39 -
III. MATERIALES Y MTODOS

El presente trabajo de investigacin se llev a cabo en dos fases, la primera fase
fue realizada en el Laboratorio de Fitopatologa de la Facultad de Ciencias
Agrarias Tropicales (UNSAAC-sede Quillabamba), y la segunda fase fue
ejecutada en el vivero de la misma facultad, el cual se encuentra ubicado en la
provincia de la Convencin-Cusco.

3.1. UBICACIN GEOGRFICA Y CLIMTICA
Altitud : 990 m.s.n.m
Coordenadas UTM : x: 0748657
y: 8581528
Zona de vida : Bosque seco sub tropical (Bs-St)
Temperatura : 23C
Humedad Relativa : 89%
Fuente: Elaboracin propia (2014)

3.2. MATERIALES
3.2.1 Fase de Laboratorio
a. Insumos
- Cepas de biocontroladores de Trichoderma viride, Trichoderma lignorum y
Trichoderma harzianum procedentes de la Clnica de Diagnosis de la
Universidad Nacional Agraria La Molina.
- Biofungicida: Propleo procedente de Quillabamba.
- Fungicidas de contacto: Procloraz 450 g/l CE, Mancozeb 80% WP y
Propineb 70% WP.
- 40 -
- Fungicidas sistmicos: Difenoconazole 250 g/l CE y Tebuconazole 250 g/l
EW.

b. Materiales
- Bolsas de polipropileno - Plumones indelebles
- Dextrosa - Regla
- Agar agar - Algodn
- Papa 2 kilos - Sacabocado
- Alcohol 96 - Probeta
- Agua destilada - Placas petri descartables
- Esptulas - Ligas
- Parafilm - Tubos de ensayo
- Horno microondas - Trigo 3 kilos
- Vaso de precipitacin - Botellas
- Botellas - Estufa
c. Equipo de Laboratorio
- Microvoid - Esterilizador
- Microscopio electrnico - Estereoscopio

3.2.2 Fase de Invernadero
- Suelo estril - Semillas de frijol
- Botellas - Agua estril
- Sacabocado - Macetas
- Placas petri con biocontroladores de Trichoderma viride, Trichoderma
lignorum y Trichoderma harzianum.
- 41 -
3.3. MTODOS

3.3.1 FASE DE LABORATORIO
3.3.1.1 Realizar el Aislamiento, identificacin y prueba de patogenicidad del
agente causal de la pudricin seca del frijol

El aislamiento del agente causal de la pudricin seca del frijol, fue obtenido a
partir de plantas afectadas de frjol y de suelo infestado provenientes del campo
experimental de la Facultad de Ciencias Agrarias Tropicales UNSAAC. El
procedimiento seguido se describe a continuacion:

1.- En las plantas de frijol y en el suelo se encontraron esclerotes los cuales
fueron extrados por el mtodo de flotamiento, los esclerotes se lavaron con
abundante agua potable, luego se sumergieron a una solucin de
hipoclorito de sodio al 1% por 5 minutos y posteriormente se lavaron con
agua destilada estril.
2.- Los esclerotes desinfectados se dejaron secar dentro del microboit, los
cuales fueron sembrados en placas petri conteniendo el medio de cultivo
Papa Dextrosa Agar (PDA).
3.- La siembra se realiz, poniendo un esclerote al medio de la placa.
4.- Las placas petri se incubaron a 28C por cinco dias para permitir el
crecimiento del hongo.
5.- Una vez desarrollado el hongo, se efectuaron repiques hasta obtener el
cultivo puro, el cual fue sembrado en seis tubos de ensayo con PDA, para
- 42 -
posteriormente unos almacenarlo en refrigeracion y otros para enviarlo a la
Clinica de Diagnosis de la Universidad Nacional Agraia la Molina.
6.- A partir de este cultivo se efectuaron los repiques necesarios para las
diversas pruebas que se realizaron en el estudio.

La identificacin fue llevada a cabo en la Clinica de Diagnosis de la Universidad
Nacional Agraria la Molina para esto se realiz la preparacin de cultivos puros en
placas petri, tubos de ensayo con PDA y cmaras hmedas del agente causal, las
cuales fuern enviados por la agencia OLVAcourier directamente a la Clinica de
Diagnosis de Fitopatologa de la UNALM.

La prueba de patogenicidad se realiz de acuerdo a los postulados de Koch, que
tuvo como objetivo verificar si el agente causal aislado reproduca la
sintomatologa de la pudricin seca. Se realizo en plntulas de frijol sanas. Para
realizar esta prueba se procedio de la siguiente manera:

1.- El hongo aislado anteriormente se multiplic en placas petri conteniendo
PDA.
2.- De estas placas con ayuda del sacabocado se procedio a la extracin
de rodajas de agar de 0,5 cm de dimetro conteniendo micelio y esporas
del hongo, las que fueron sembradas en trigo precocido y estril que
estaban dentro de bolsas de polipropileno (7x10 cm) previamente.
3.- una vez realizada la siembra en las bolsas de trigo, se incubo a
temperatura del medio ambiente (28C) bajo luz artifical durante 7 das
para que llene la bolsa de trigo con el agente causal, quedando asi listo
- 43 -
para inocular al sustrato de la maceta donde se sembraran las semillas de
frijol.
4.- La inoculacin se realiz por el mtodo del pullado, donde se incorpor
5g. del agente causal y se mezcl homogeneamente con el suelo para
luego sembrar las cuatro semillas de frijol que fueron colocadas en forma
equidistante y a 1 cm de profundida.
5.- Las macetas sembradas fueron cubiertas con una bolsa polipropileno
para originar humedad y a los 7 das se empez a observar los mismos
sntomas y signos (esclerotes y micelio) de la enfermedad generado por el
agente causal en estudio que present la planta de donde se aislo
inicialmente.
6.- Finalmente, se procedi a realizar el reaislamiento y la reidentificacin
del agente causal, a partir de estas plantas inoculadas las cuales fueron
comparadas con el primer aislamiento.

Asimismo, se adquiri las cepas de los biocontroladores T. viride, T. lignorum y T.
harzianum procedentes de la Clnica de Diagnosis de Fitopatologa de la UNALM.

3.3.1.2 Prueba in vitro de fungicidas para el control del agente causal de la
pudricin seca del frijol

Se evaluaron fungicidas de contacto (Procloraz 450 g/l CE, Mancozeb 80% WP y
Propineb 70% WP) y sistmicos (Difenoconazole 250 g/l CE y Tebuconazole 250
g/l EW), a fin de determinar la eficacia de cada uno de ellos en el control de
Sclerotium sp. aislado de plntulas de frijol. Para este experimento se utiliz la
- 44 -

Tcnica del Medio de Cultivo Envenenado (French y Herbert, 1980), emplendose
diferentes dosis baja, media y alta (%) segn lo recomendado por la casa
comercial.

El procedimiento fue el siguiente:

1.- Se prepar el medio de cultivo envenenado: para lo cual, previo al plaqueo,
se pes (Propineb 70% WP, Mancozeb 80% WP y Difenoconazole 250 g/l CE)
y se estim el volumen (Tebuconazole 250 g/l EW, Procloraz 450 g/l CE) de
cada uno de los 5 fungicidas y tambin se estim el volumen para el
biofungicida Propleo, en dosis diferentes recomendada por la casa comercial.
2.- Se prepar erlenmeyers conteniendo 100 ml de medio PDA para cada
fungicida respectivamente, luego se esteriliz y cuando estuvo a punto de
plaqueo fue mezclado y homogenizado con cada uno de los fungicidas.
3.- Se procedi al plaqueo, se esper que se solidifique y enfri para la
respectiva siembra del hongo.
4.- Una vez que se solidific y enfri el medio envenenado, se coloc una
rodaja con crecimiento micelial del hongo, extrada con un sacabocado de 0.5
cm de dimetro. La rodaja se coloc al centro de la placa.
5.- Encima de la placa petri, se marcaron dos rayas perpendiculares entre s,
siendo estas AB y CD, siendo dos dimetros que la dividieron en cuatro
cuadrantes iguales (Grfico 1).

- 45 -

Grfico 1. Placa petri luego de ser marcada para su evaluacin in
vitro a nivel de fungicidas
6.- El testigo fue sembrado de la misma forma, pero en placas petri con medio
PDA sin fungicida.
7.- Las placas petri fueron incubadas a 28C.
8.- Todos los das se procedi a medir el crecimiento del hongo en los
dimetros AB y CD de las placas petri, para lo cual se utiliz una regla
milimtrica. La evaluacin termin cuando el hongo sembrado en la placa petri
sin fungicida (testigo) cubri completamente el medio de cultivo.
9.- Los mejores fungicidas y dosis sern seleccionados para la prueba en
invernadero.

La eficacia de los fungicidas evaluados fue determinado por clculo del porcentaje
de inhibicin en el crecimiento radial de colonia usando la siguiente formula (Platt
y Redin, 1996):

Dnde:
PI = Porcentaje de inhibicin %
C = Crecimiento radial en el testigo (mm o cm)
T = Crecimiento radial en cada tratamiento (mm o cm)
- 46 -
BAJA MEDIA ALTA
T1 Sclerotium sp. (Testigo) 0.0 0.0 0.0
T2 Propineb 0.5 g 2.5 g 4.5 g
T3 Mancozeb 0.5 g 2.5 g 4.5 g
T4 Tebuconazole 0.5 ml 2.5 ml 4.5 ml
T5 Difenoconazole 0.5 g 2.5 g 4.5 g
T6 Prochloraz 0.5 ml 2.5 ml 4.5 ml
T7 Propoleo 4 ml 8 ml 12 ml
DOSIS
TRATAMIENTOS DESCRIPCIN
3.3.1.2.1 DISEO ESTADSTICO
El diseo estadstico utilizado en el ensayo experimental a nivel in vitro es el
Diseo Completamente al Azar (DCA) y la Prueba de Tukey para la comparacin
de medias, con 7 tratamientos y 5 repeticiones cada uno a un nivel de
significacin de 0.05.

3.3.1.2.2 TRATAMIENTOS EN ESTUDIO
Los tratamientos que se aplicaron a nivel in vitro fueron los siguientes:

Cuadro 3. Tratamientos in vitro usados para el control de la pudricin seca del
frijol.


- 47 -
Tratamientos
Dosis D.B D.M D.A D.B D.M D.A D.B D.M D.A D.B D.M D.A D.B D.M D.A D.B D.M D.A D.B D.M D.A
Repeticin 1
Repeticin 2
Repeticin 3
Repeticin 4
Repeticin 5
T7 T1 T2 T3 T4 T5 T6
Cuadro 4. Distribucin fsica de los tratamientos a nivel in vitro usados para el
control de la pudricin seca del frijol.


Donde:

T1: PDA + Sclerotium sp. (testigo)
T2: Propineb + Sclerotium sp.i (testigo)
T3: Mancozeb + Sclerotium sp. (testigo)
T4: Tebuconazole + Sclerotium sp. (testigo)
T5: Difenoconazole + Sclerotium sp. (testigo)
T6: Procloraz + Sclerotium sp. (testigo)
T7: Propoleo + Sclerotium sp. (testigo)
D.B: Dosis baja
D.M: Dosis media
D.A: Dosis alta
: Placa petri con medio envenenado segn el fungicida y el patgeno
Sclerotium sp.

- 48 -
3.3.1.3 Determinacin del porcentaje de antagonismo de los
biocontroladores (T. harzianum, T. viride y T. lignorum) frente al agente
causal (Sclerotium sp.) en la prueba de enfrentamiento a nivel in vitro

A fin de evaluar la actividad antagnica de las cepas de los biocontroladores se
realiz la tcnica del enfrentamiento en placas petri con medio PDA.

El procedimiento se describe a continuacin:

1.- Se prepar el medio PDA y se plaque. Se tomaron placas petri con el
aislamiento del agente causal y biocontroladores, los cuales se colocaron
dentro de un Microvoid, para su respectiva siembra.
2.- La siembra consisti en poner con ayuda del sacabocado rodajas de
0.5 cm de dimetro de manera equidistante y en forma opuesta al
patgeno-patgeno, biocontrolador-biocontrolador (testigos) y patgeno-
biocontrolador.
3.- Las placas se sellaron con parafilm y se incubaron a 28 C para su
crecimiento.
4.- Encima de la placa petri, se marc una lnea horizontal para su
respectiva evaluacin de testigos (patgeno-patgeno/biocontrolador-
biocontrolador) y biocontrolador-patgeno (Grfico 2).

- 49 -

Grfico 2. Placa petri luego de ser marcada para su evaluacin in
vitro en la determinacin del porcentaje de antagonismo.

5.- Todos los das se procedi a medir el crecimiento de los hongos en la
lnea horizontal de la placa petri, para lo cual se utiliz una regla
milimtrica. La evaluacin termin cuando los testigos (biocontrolador-
biocontrolador y patgeno-patgeno) sembrados equidistantes y opuestos
llegaron a la mitad de la placa petri, esto para obtener el porcentaje de
inhibicin con respecto a los biocontroladores-patgeno.

Con los resultados obtenidos, se determin el porcentaje de inhibicin de
crecimiento radial (ICR) mediante la frmula de Dennis y Webster (1971):

ICR (%) = (R1-R2) 100/R1

Dnde: R1 es la distancia ms lejana recorrida por el patgeno.
R2 es la distancia recorrida por el patgeno hacia el antagonista.

El diseo estadstico utilizado en el ensayo experimental en la prueba de
enfrentamiento biocontroladores y agente causal fue un Diseo Completamente al
- 50 -
TRATAMIENTOS
BIOCONTROLADORES (T. harzianum, T. viride y T. lignorum)
FRENTE AL AGENTE CAUSAL (Sclerotium sp. ) EN LA
PRUEBA DE ENFRENTAMIENTO A NIVEL IN VITRO
CARACTERSTICAS CLAVE
N
REPETICIN
T1 Trichoderma harzianum vs Sclerotium rolfsii Biocontrolador-patgeno T.h x S.r 5
T2 Trichoderma viride vs Sclerotium rolfsii Biocontrolador-patgeno T.v x S.r 5
T3 Trichoderma lignorum vs Sclerotium rolfsii Biocontrolador-patgeno T. l x S.r 5
T4 Trichoderma harzianum vs Trichoderma harzianum (Testigo) Biocontrolador-biocontrolador T.h x T.h 5
T5 Trichoderma viride vs Trichoderma viride (Testigo) Biocontrolador-biocontrolador T.v x T.v 5
T6 Trichoderma lignorum vs Trichoderma lignorum (Testigo) Biocontrolador-biocontrolador T. l x T.l 5
T7
Sclerotium rolfsii vs Sclerotium rolfsi (Testigo)
Patgeno-patgeno S.r x S.r 5
Azar (DCA) y la Prueba de Tukey para la comparacin de medias, con 7
tratamientos y 5 repeticiones cada uno a un nivel de significacin de 0.05.

Los tratamientos que se aplicaron in vitro, para el enfrentamiento de
biocontroladores y el agente causal fueron los siguientes:

Cuadro 5. Tratamientos in vitro utilizados para determinar la capacidad
antagnica de los biocontroladores sobre el agente causal.


- 51 -
Tratamientos T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7
Repeticin 1
Repeticin 2
Repeticin 3
Repeticin 4
Repeticin 5
Cuadro 6. Distribucin fsica de los tratamientos a nivel in vitro utilizados para
determinar la capacidad antagnica de los biocontroladores sobre el agente
causal.
Donde:
T1: Trichoderma harzianum vs Sclerotium sp.
T2: Trichoderma viride vs Sclerotium sp.
T3: Trichoderma lignorum vs Sclerotium sp.
T4: Trichoderma harzianum vs Trichoderma harzianum (testigo)
T5: Trichoderma viride vs Trichoderma viride (testigo)
T6: Trichoderma lignorum vs Trichoderma lignorum (testigo)
T7: Sclerotium sp. vs Sclerotium sp. (testigo)
: Placa petri con biocontrolador y patgeno en estudio

- 52 -
3.3.2. Fase de Invernadero

3.3.2.1 Determinacin del porcentaje de antagonismo de los
biocontroladores (T. harzianum, T. viride y T. lignorum) y fungicidas sobre el
agente causal en condiciones de invernadero

En esta fase de invernadero se probaron los biocontroladores (T. harzianum, T.
viride y T. lignorum) y los fungicidas (Difeconazole, Tebuconazole y Procloraz).

El procedimiento se describe a continuacin:

1. Los biocontroladores (T. harzianum, T. viride, T. lignorum) y el agente
causal (Sclerotium sp.) fueron propagados en 30 placas petri estriles
conteniendo medio PDA e incubados a 28C por siete das para que llenen
el total de la placas y de esta manera obtener el mayor nmero de rodajas
para la siembra en cada una de las macetas segn los tratamientos
dispuestos.
2. La siembra de cada uno de los biocontroladores, del agente causal y del
testigo se realiz en macetas de acuerdo a los tratamientos conteniendo
suelo estril (se desinfesto al vapor durante 2 horas).
3. Las macetas de 1 kilo de capacidad luego de ser de desinfestadas en una
solucin de hipoclorito de sodio al 2% fueron llenadas con el suelo estril;
posteriormente y de acuerdo a los tratamientos se colocaron en forma
homognea y con ayuda de una pinza estril las 15 rodajas de agar con
- 53 -
micelio y esporas de cada biocontrolador y del patgeno segn los
tratamientos.
4. Una vez que se incorpor cada uno de los biocontroladores y el patgeno
se mezcl homogneamente el contenido del suelo estril en la maceta y
se procedi a sembrar 4 semillas de frijol tratadas con los fungicidas y
fueron colocados en forma equidistante y a 1cm de profundidad. Por cada
tratamiento se dispuso un total de 10 macetas.
5. Se utiliz 50 semillas de frijol para cada fungicida (Difenoconazole,
Tebuconazole y Procloraz), los cuales se remojaron en una concentracin
de 0.1% para ser sembradas y posteriormente los tratamientos solo con
estos fungicidas fueron regados.
6. Una vez tratadas las semillas incluyendo las del testigo, se sembraron en
las macetas ubicadas en invernadero, las macetas sembradas fueron
regadas diariamente. La primera observacin se realiz a los 15 das de la
siembra, anotando el porcentaje de plantas muertas y si haban plantas
afectadas por S. rolfsii.
7. Finalmente porciones de tejido afectadas por S. rolfsii fueron sembrados en
medio PDAO con la finalidad de reaislar al patgeno y comparar su
presencia en dichos tejidos con las muestras y la identificacin que se
realiz en la Clnica de Diagnosis de la UNALM.

El diseo estadstico utilizado en el invernadero es un Diseo Completamente al
Azar (DCA) y se us la Prueba de Tukey para la comparacin de medias, con 14
tratamientos y 10 repeticiones cada uno a un nivel de significacin de 0.05.
- 54 -
TRATAMIENTOS CLAVE
PRUEBA DE CONTROL DE FUNGICIDAS
Y BIOCONTROLADORES
N REPETICIONES
T1 S r Sclerotium rolfsii (testigo) 10
T2 T A Testigo absoluto 10
T3 T h Trichoderma harzianum (testigo) 10
T4 Tv Trichoderma viride (testigo) 10
T5 Tl Trichoderma lignorum (testigo) 10
T6 Di Difenoconazole (testigo) 10
T7 Te Tebuconazole (testigo) 10
T8 Pro Prochloraz (testigo) 10
T9 Pro+Sr Prochloraz + Sclerotium rolfsii 10
T10 Te+Sr Tebuconazole + Sclerotium rolfsii 10
T11 Di+Sr Difenoconazole + Sclerotium rolfsii 10
T12 Th+Sr Trichoderma harzianum + Sclerotium rolfsii 10
T13 Tv+Sr Trichoderma viride + Sclerotium rolfsii 10
T14 Tl+Sr Trichoderma lignorum + Sclerotium rolfsii 10
Para esta fase se registr un nmero de plantas vivas que fueron transformados
por la formula x para su anlisis estadstico.

Los tratamientos que se aplicaron a nivel de invernadero fueron los siguientes:

Cuadro 7. Tratamientos para determinar el porcentaje de control de los
agente causal (Sclerotium sp.) en condiciones de invernadero.


- 55 -
T.A T.h T.v T.l
T.h
x
S.r
T.v
x
S.r
T.l
x
S.r
S.r Di Te Pro
Di
x
S.r
Te
x
S.r
Pro
x
S.r
x x x x x x x x x x x x x x
x: plantas a evaluar por maceta
Tratamientos
Cuadro 8. Distribucin fsica para determinar el porcentaje de control de los
agente causal (Sclerotium sp.) en condiciones de invernadero.


Donde:

T.A= semillas de frijol
T.h= semillas de frijol + 15 rodajas con micelio de T. harzianum
T.v= semillas de frijol + 15 rodajas con micelio de T. viride
T.l= semillas de frijol + 15 rodajas con micelio de T. lignorum
Th x Sr= semillas de frijol+ 15 rodajas con micelio de T. harzianum + 15 rodajas
con micelio de Sclerotium sp.
- 56 -
Tv x Sr= semillas de frijol+ 15 rodajas con micelio de T. viride + 15 rodajas con
micelio de Sclerotium sp.
Tl x Sr= semillas de frijol+ 15 rodajas con micelio de T. lignorum + 15 rodajas con
micelio de Sclerotium sp.
Sr = semillas de frijol + Sclerotium sp.
Di= semillas de frijol remojadas con fungicida difenoconazole.
Te= semillas de frijol remojadas con fungicida tebuconazole.
Pro= semillas de frijol remojadas con fungicida procloraz.
Di x Sr= semillas de frijol remojadas con fungicida difenoconazole + Sclerotium sp.
Te x Sr= semillas de frijol remojadas con fungicida tebuconazole + Sclerotium sp.
Pro x Sr= semillas de frijol remojadas con fungicida procloraz + Sclerotium sp.

- 57 -
IV. RESULTADOS Y DISCUSIN
4.1 Resultados

4.1.1. Aislamiento, identificacin y prueba de patogenicidad del agente
causal de la pudricin seca del frijol.

Los aislamientos de Sclerotium sp. obtenidos de las plantas enfermas de frijol y
de suelo infestado presentaron caracteristicas similares.

Los esclerotes se caracterizarn por su forma redonda, color pardos a caf y con
un tamao de 1 a 2 mm. Los esclerotes cultivados en medio PDA estril e
incubados a 28C iniciarn la germinacn a las 24 horas, el micelio desarroll
radialmente sobre el medio de cultivo y al quinto da cubri toda la superficie de la
placa y comenzarn a formarse los primeros esclerotes de tamao muy pequeos
de color blanco y a partir del noveno da se observ los esclerotes maduros de
mayor tamao y de color marrn oscuro. Se comprob que la temperatura ptima
de Sclerotium sp. fue de 28C por el rpido desarrollo que tuvo.

La identificacin del agente causal enviado a la Clnica de Diagnosis de
Fitopatologa de la UNALM fue mediante un examen microscpico a la cmara
hmeda que se envio y dio como resultado Sclerotium sp. Ver anexo 4.

La prueba de patogenicidad confirm que al inocular Sclerotium sp. obtenidas de
las plantas enfermas y de los esclerotes a las plantas sanas de frijol se produj la
misma sintomatologa, observandose hundimientos en la base de los hipoctilos
- 58 -
de las plantas, marchitamiento y crecimiento de micelio y al pasar unos das se
observo los esclerotes, lo que confirma que se trata de Sclerotium sp.

La propagacin de cada uno de los biocontroladores en medio PDA a 28C
present un rapido crecimiento radial del micelio, las colonias hialinas se iban
tornando de verde claro a uno mas intenso para el caso de T. harzianum y T.
lignorum en formas concntricas bien definidas; y para el caso de T. viride las
colonias hialinas se iban tornando verde-amarillento con formas concentricas. Los
biocontroladores llenaron la placa petri totalmente a los 4 das de la siembra,
fueron facilmente cultivados .

4.1.2. Prueba in vitro de fungicidas para el control del agente causal de la
pudricin seca del frijol

Los resultados del anlisis de variancia (Cuadro 9) indican diferencias
estadsticamente significativas entre los promedios de los tratamientos,
fungicidas, dosis e interaccin a un nivel de confianza de 0.05. Se tuvo un
coeficiente de variabilidad es de 8.29 %, debido a que se trabaj bajo condiciones
controladas (asepsia) y un promedio de 21.73 .

Las placas de los diferentes tratamientos con fungicidas se mantuvieron por dos
semanas ms, a fin de observar si se produca desarrollo mecelial de Sclerotium
sp.

- 59 -
20 104251.6583 5212.5829 1605.34 1.70 *
Fungicidas 6 103971.8250 17328.638 5336.78 2.21 *
Dosis 2 93.7476 46.8738 14.44 3.11 *
Fungicidas*dosis 12 186.0857 15.5071 4.78 1.87 *
84 272.7500 3.247
104 104524.4083
F
CALCULADO
Tratamiento
Error
Total
CV (%) 8.29
Promedio 21.73
FUENTE DE VARIACIN G.L. S.C. C.M.
F TERICO
5%
Los fungicidas Propineb, Mancozeb y el biofungicida Propleo, por su poca
efectividad para la inhibicin del desarrollo de Sclerotium sp. a nivel in vitro, ser
descartado para las pruebas posteriores.

Cuadro 9. Anlisis de variancia in vitro del desarrollo micelial promedio de
Sclerotium sp. con diferentes fungicidas.


En el Cuadro 10 y Grfico 3, se observan los resultados de la prueba de Tukey de
la prueba del alimento envenenado donde los fungicidas utilizados como:
Tebuconazole (T4), Difenoconazole (T5) y Procloraz (T6) inhibiern
completamente el desarrollo micelial de Sclerotium sp. Pero los fungicidas:
Propineb (T2) y Mancozeb (T3) no inhibiern el crecimiento de Sclerotium sp.
porque al tercer da empez a crecer el micelio. El biofungicida Propleo tampoco
inhibi el crecimiento, este creci desde el segundo da de realizada la siembra de
Sclerotium sp. Se observ un rpido desarrollo radial del tratamineto Testigo (T1),
al sexto da el micelio haba cubierto toda la superficie de la placa a diferencia de
los otros tratamientos.

- 60 -
DESARROLLO
MICELIAL
Promedio (mm)
T4 TEBUCONAZOLE 0.00 a
T5 DIFENOCONAZOLE 0.00 a
T6 PROCHLORAZ 0.00 a
T2 PROPINEB 5.78 b
T3 MANCOZEB 7.25 b
T7 PROPOLEO 54.10 c
T1 TESTIGO 85.00 d
TRATAMIENTOS CARACTERSTICAS SIGNIFICACIN
Cuadro 10. Prueba de Tukey (0.05) para el desarrollo micelial promedio de
Sclerotium sp. con diferentes fungicidas.


Grfico 3. Desarrollo micelial promedio de Sclerotium sp. (mm) en los
diferentes fungicidas.

En el Cuadro 11 se observa la prueba de comparacin Tukey para el desarrollo
micelial promedio de Sclerotium sp. para los tratamientos con diferentes dosis;
donde la mejor dosis que logr inhibir completamente el desarrollo de Sclerotium
sp., es la dosis alta (D3), seguido de las dosis media (D2) y dosis baja (D1).
- 61 -
DESARROLLO
MICELIAL
Promedio (mm)
D3 Alta 20.58 a
D2 Media 21.71 b
D1 Baja 22.90 c
TRATAMIENTOS DOSIS SIGNIFICACIN
Cuadro 11. Prueba de Tukey (0.05) para el desarrollo micelial promedio de
Sclerotium sp. en tratamientos con diferentes dosis.


En el Cuadro 9, se observ la interaccin entre fungicidas y dosis la cual fue
significativa, esto indica que se debe realizar un ANVA de efectos simples. Por
tanto en el Cuadro 12, se observa que los fungicidas Mancozeb (T3), Propineb
(T2) y el biofungicida Propleo (T7) estadsticamente son significativos, esto nos
indica que a una dosis baja, media y alta la inhibicin del desarrollo de Sclerotium
sp. es diferente; es decir tuvo diferente desarrollo micelial tanto a dosis alta,
media y baja. Mientras los fungicidas Tebuconazole (T4), Difenoconazole (T5) y
Prochloraz (T6) estadsticamente son no significativos; quiere decir que el
desarrollo de Sclerotium sp. es inhibido completamente por estos fungicidas, tanto
a dosis baja, media y alta. Por lo tanto las difrenetes dosis de estos fungicidas en
estudio inhibiern completamente el desarrollo de Sclerotium sp. Por ello de
acuerdo a estos resultados se seleccionarn para las pruebas posteriores los
tratamientos con dosis bajas de los fungicidas Tebuconazole (T4), Difenoconazole
(T5) y Prochloraz (T6) porque al igual que las dosis altas controlan a Sclerotium
sp.

- 62 -
2 0.0000 0.0000 0.0000 3.11 n.s
Mancozeb en dosis 2 94.3750 47.1875 14.53 3.11 *
Difenoconazole en dosis 2 0.0000 0.0000 0.0000 3.11 n.s
Testigo en dosis 2 0.0000 0.0000 0.0000 3.11 n.s
Propineb en dosis 2 14.658333 7.329167 12.26 3.11 *
2 170.8000 85.4 26.3 3.11 *
2 0.0000 0.0000 0.0000 3.11 n.s
6 35332.00 5888.60 1813.54 2.21 *
6 34961 5826.84048 1794.52 2.21 *
6 33865 5644.20714 1738.27 2.21 *
84 272.7500 3.247 Error
Propoleo en dosis
Procloraz en dosis
Dosis baja en fungicidas
Dosis media en fungicidas
Dosis alta en fungicidas
S.C. C.M.
F
CALCULADO
F TERICO
5%
Tebuconazole en dosis
FUENTE DE VARIACIN G.L.
Cuadro 12. Anlisis de variancia in vitro del desarrollo micelial promedio de
efectos simples de la interaccin (Fungicidas en diferentes dosis, y diferentes
dosis en fungicidas).


4.1.3. Determinacin del porcentaje de antagonismo de los biocontroladores
(T. harzianum, T. viride y T. lignorum) frente al agente causal de la pudricin
seca del frijol en la prueba de enfrentamiento a nivel in Vitro

Los resultados correspondientes a esta prueba se observan en el Cuadro 13
donde a los 12 das de la incubacin de los enfrentamientos, los biocontroladores
T. viride (T2), T. lignorum (T3) y T. harzianum (T1) alcanzaron un 18, 13.7 y 6.1 %
de control sobre Sclerotium sp. El anlisis de variancia (Cuadro 15), indica
diferencias significativas entre promedios para la inhibicin micelial a un nivel de
confianza de 0.05 con un coeficiente de variacin de 2.8; es por ello que se
realizar la prueba de Tukey (Cuadro 16).

- 63 -
1
2
3
4
5
PROM.
T.v T.l
T3
43 42 41 42 4.8 14.3 9.5
REP
INHIBICIN DEL DESARROLLO DE Sclerotium sp. EN PRESENCIA DE LOS
BIOCONTROLADORES (T.harzianum, T. viride y T. lignorum)
Testigos (mm) % Inhibicin micelial (mm)
T4 T5 T6 T7 T1 T2
T.h x T.h T.v x T.v T.l x T.l S.r x S.r
S.r
T.h
16.3
42 44 43 43 4.7 16.3 18.6
44 42 43 43 9.3 20.9
12.2
43 43 43 42 7.1 19.0 11.9
40 42 41 41 4.9 19.5
13.7 42.4 42.6 42.2 42.2 6.1 18.0
Cuadro 13. Porcentaje de inhibicin del desarrollo micelial de Sclerotium sp. en
presencia de T. harzianum, T. viride y T. lignorum a nivel in vitro.


As mismo en el Cuadro 14 se observa, la inhibicin de Sclerotium sp. enfrentados
a los biocontroladores: T. viride, T.lignorum y T. harzianum lograrn una inhibicin
de 34.6, 36.4 y 39.6 mm con respecto al Testigo (T7) con 42.2 mm de desarrollo
micelial alcanzado por Sclerotium sp. Esto demuestra la capacidad antagonista de
los diferentes biocontroladores sobre Sclerotium sp., porque afect el desarrollo
micelial y la formacin de esclerotes en forma significativa aunque no lo impidi
totalmente, pero tampoco lo dejo avanzar, lo rodeo y al pasar los das los
biocontroladores: T. viride y T. lignorum invadieron y crecieron encima de
Sclerotium sp. y posteriormente colonizaron toda la superficie de la placa,
mientras T harzianum fue lento al invadir y crecer sobre Sclerotium sp.

La mayora de las especie de Trichoderma presentaron zona de interseccin
visible con las hifas del patgeno Sclerotium sp. y entre mayor es el rea de
contacto y/o sobrecrecimiento, mayor es la agresividad por parte del hongo
antagnico.
- 64 -
F
CALCULADO
6 322.4000 53.733 42.26 2.45 *
28 35.6000 1.271
34 358.0000
Tratamiento
Error
Total
CV (%) 2.81
Promedio 40.00
FUENTE DE VARIACIN G.L. S.C. C.M.
F TERICO
5%
1
2
3
4
5
PROM.
T.h x T.h T.v x T.v T.l x T.l S.r x S.r
S.r
REP
INHIBICIN DEL DESARROLLO DE Sclerotium sp. EN PRESENCIA DE LOS
BIOCONTROLADORES (T.harzianum, T. viride y T. lignorum)
T4 T5 T6 T7 T1
T.h T.v T.l
44
42
43
T2 T3
Testigos (mm) Inhibicion micelial (mm)
43
44
42.4 42.6 42.2 42.2
36
34
36
33
34
41
43
43
41
43
42
43
43
41
42
42
40
43
42
42
34.6 39.6
38
36
35
36
37
36.4
40
39
41
39
39
Cuadro 14. Inhibicin del desarrollo micelial de Sclerotium sp. en presencia de los
biocontroladores T.viride, T lignorum y T. harzianum a nivel in vitro.


Cuadro 15. Anlisis de variancia de la inhibicin del desarrollo micelial de
Sclerotium sp. en presencia de los biocontroladores T.viride, T lignorum y T.
harzianum.


Realizando la prueba de comparacin de Tukey en el parmetro inhibicin del
desarrollo micelial, se observa el Cuadro 16 y Grfico 4, que T. viride y T.
lignorum presentaron mayor porcentaje de antagonismo frente a Sclerotium sp.
Por lo tanto se recomienda usar una de estas dos cepas.
- 65 -
DESARROLLO MICELIAL
Promedio (mm)
Tv x Tv 42.60 a
T h x T h 42.40 a
T l x T l 42.20 a
S r x S r 42.20 a
T h x S r 39.60 b
T l x S r 36.40 c
T v x S r 34.60 c
TRATAMIENTOS SIGNIFICACIN
Cuadro 16. Prueba Tukey de la inhibicin del desarrollo micelial de Sclerotium sp.
en presencia de los biocontroladores T. viride, T.lignorum y T. harzianum.


Grfico 4. Inhibicin del desarrollo micelial promedio (mm) de Sclerotium
sp. en presencia de T. viride, T.lignorum y T. harzianum.

- 66 -
4.1.4. Determinacin del porcentaje de control de los biocontroladores (T.
harzianum, T. viride y T. lignorum) y fungicidas sobre el agente causal de la
pudricion seca del frijol en condiciones de invernadero

En el Cuadro 17 se observan los resultados de los tratamientos llevados a la
transformacin x para hallar el porcentaje de control de los biocontroladores: T.
harzianum, T. viride y T. lignorum y fungicidas sobre Sclerotium rolfsii. El anlisis
de variancia (Cuadro 18) indica diferencias significativas entre los tratamientos, es
por ello que se realizar la prueba de comparacin Tukey a un nivel de
significancia de 0.05.

En el Cuadro 19 y Grfico 5, se observa que a los 15 das de la evaluacin el
tratamiento con fungicida Difenoconazole (T6) y los biocontroladores T. viride
(T4), T. lignorum (T5) son estadsticamente iguales con un 98% de plantas sanas
por maceta. Seguido del Testigo absoluto (T2), el biocontrolador T. harzianum
(T3), y los fungicidas Tebuconazole (T7), Procloraz (T8) que son
estadsticamente iguales con 95% de plantas sanas, para estos tratamientos se
observ que las semillas que no germinaron fueron porque estaban podridas. A
todos estos tratamientos se les considero testigos.

El tratamiento del biocontrolador T. viride + Sclerotium sp. (T13) con 63% de
plantas sanas y el tratamiento con fungicida Difenoconazole + Sclerotium sp.
(T11) con 61% de plantas sanas, fueron diferentes a los dems tratamientos y los
mejores en cuanto a la inhibicin del desarrollo micelial de Sclerotium sp. As
mismo los tratamientos con fungicidas Tebuconazole + Sclerotium sp. (T10) y
- 67 -
T2 T3 T4 T5 T13 T14 T12 T1 T6 T7 T8 T11 T10 T9
T.A T.h T.v T.l T.v x S.r T.l x S.r T.h x S.r S.r Di Te Pro Di x S.r Te x S.r Pro x S.r
1 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 1.7 1.7 1.0 2.0 2.0 1.7 1.7 1.7 1.4
2 2.0 2.0 2.0 1.7 1.7 1.6 1.4 0.0 2.0 1.7 2.0 1.4 1.4 1.4
3 2.0 2.0 2.0 2.0 1.4 1.7 1.7 1.2 1.7 2.0 2.0 1.6 1.4 1.0
4 1.7 1.7 2.0 2.0 1.7 1.4 1.4 0.0 2.0 2.0 2.0 1.0 1.7 1.4
5 1.7 2.0 1.7 2.0 1.7 1.7 1.0 1.0 2.0 2.0 2.0 1.4 1.7 1.7
6 2.0 2.0 2.0 2.0 1.7 1.4 1.7 0.0 2.0 2.0 2.0 1.4 1.4 1.4
7 2.0 2.0 2.0 2.0 1.4 1.7 1.0 1.0 2.0 2.0 2.0 1.4 0.0 1.4
8 2.0 2.0 2.0 2.0 1.4 1.0 1.7 1.0 2.0 1.7 2.0 1.7 1.4 1.7
9 2.0 2.0 2.0 2.0 1.4 1.7 1.4 1.4 2.0 2.0 2.0 1.0 1.4 0.0
10 2.0 1.7 2.0 2.0 1.0 1.4 1.7 1.0 2.0 2.0 1.7 1.4 1.4 1.4
Promedio 1.9 1.9 2.0 2.0 1.6 1.5 1.5 0.8 2.0 1.9 1.9 1.4 1.4 1.3
N DE PLANTAS POR MACETA
REP
Procloraz + Sclerotium sp. (T9) son significativamente iguales con 58 y 53% de
plantas sanas por maceta. Y los tratamientos con biocontroladores T. lignorum +
Sclerotium sp. (T14) y T. harzianum + Sclerotium sp. (T12) son estadsticamente
iguales, pero en algunas macetas con T. harzianum se observ un poco
desarrollo micelial en las plantas con sntomas de marchitamiento con tan solo
51 y 48% de las plantas sanas, respecto a los testigos solos sea de los
biocontroladores o fungicidas que obtuvieron un 98 y 95% de las plantas sanas.
Esto confirma que las diferentes especies de Trichodermas spp. no matan a las
plantas y son hongos antagonistas de este patgeno. As mismo, el tratamiento
Testigo (T1) al cuarto da se observ mayor desarrollo de micelio, necrosis en las
semillas y la aparicin de esclerotes en la parte superficial.

Cuadro 17. Nmero de plantas de frijol sanas por maceta transformadas a x en
el control de Sclerotium sp. por medio de los biocontroladores T. viride,
T.harzianum, T. lignorum y los fungicidas Difenoconazole, Tebuconazole y
Procloraz a nivel de invernadero.


- 68 -
F
CALCULADO
13 14.95542857 1.8429011 24.46 1.81 *
126 10.09000000 0.07534921
139 25.04542857
F TERICO
5%
G.L. S.C. C.M.
Promedio 1.65
Tratamiento
Error
Total
CV (%) 17.09
FUENTE DE VARIACIN
Di 1.97 98 a
Tv 1.97 98 a
Tl 1.97 98 a
TA 1.94 95 a b
Te 1.94 95 a b
Th 1.94 95 a b
Pro 1.94 95 a b
Tv x Sr 1.54 63 a b c
Di xSr 1.53 61 b c
Te xSr 1.47 58 c
Pro xSr 1.40 53 c
Tl xSr 1.35 51 c d
Th x Sr 1.28 48 c d
Sr 0.84 21 d
TRATAMIENTOS SIGNIFICACIN
NMERO DE
PLANTAS
SANAS POR
MACETA
% DE PLANTAS
SANAS POR
MACETA
Cuadro 18. Anlisis de variancia para el nmero de plantas de frijol sanas por
macetas, previa transformacin a x.


Cuadro 19. Prueba Tukey para el nmero de plantas de frijol sanas por macetas,
en el control de Sclerotium sp. por medio de los biocontroladores T. viride,
T.harzianum, T. lignorum y los fungicidas Difenoconazole, Tebuconazole y
Procloraz a nivel de invernadero.

- 69 -

Grfico 5. Porcentaje de plantas vivas por macetas.

4.2 Discusin
La identificacin realizada por la Clnica de Diagnosis de Fitopatologa de la
UNALM de las muestras enviadas concuerda con los sntomas descritos por
Agrios (1996), Reyes et al., (2002). Y al realizar la prueba de patogenicidad,
cumpliendo los postulados de Koch descritos por Agrios (1996) se confirma que el
agente causal de la pudricin seca del frijol es Sclerotium sp.

A nivel in vitro, los fungicidas sistemicos: Tebuconazole (T4) y Difenoconazole
(T5) y el fungicida de contacto: Procloraz (T6) inhibieron el desarrollo del
patgeno durante la prueba del alimento envenenado, lo cual indica que son
igualmente efectivos; porque impiden o inhiben el desarrollo del patgeno. Esto
concuerda con Latorre (1988), Grigoleit (1988) y BAYER (2009, 2011) porque
tienen el mismo modo de accin en la biosntesis de las membranas, atacando el
C14-demetilacin en la biosntesis de esteroles y de la misma manera
- 70 -
pertenencen al grupo de los inhibidores de la biosntesis de esteroles, por ms
que sean de grupos qumicos diferentes cumplen el mismo propsito. Por otro
lado tenemos a los fungicidas Mancozeb (T3) y Propineb (T2) quienes redujern
significativamente el desarrollo del patogeno, aunque no lo impid totalmente, a
diferencia de los otros fungicidas; esto debido a que son fungicidas de contacto
que tienen otro mecanismo de accin llamado multi-sitio que actan solo en la
superficie de la planta evitando que los esporangios penetren a las clulas y al
pasar los das pierden su capacidad de residualidad. Y el biofungicida Propleo
(T7) tuvo mayor desarrollo de Sclerotium sp., Per no tiene reportes con este
biofungicida pero Cortes (2008) menciona su actividad fungica para Alternaria
solani que es un hongo de suelo y dio buenos resultados a nivel in vitro. Por
ltimo el Testigo (T1) tuvo un desarrollo total del patgeno.

A nivel in vitro, en la prueba de porcentaje de antagonismo de los diferentes
biocontroladores frente al agente causal de la pudricin seca del frijol los
resultados obtenidos fueron que T. viride present un rea de desarrollo mayor
con un 18% de inhibicin del crecimiento del patgeno, seguido de T. lignorum
con 13.7% de inhibicin del crecimiento del patgeno, esto coencide con los
estudios realizados por Paricoto (2008) quien tambin menciona que T. viride
mostr un alto nivel de antagonismo hacia S. sclerotiorum con un 12.05 % de
inhibicin, seguido de T. harzianum con un 10.86 % a nivel in vitro, debido a que
estas especies de Trichoderma spp. poseen un rpido crecimiento y desarrollo, al
producir metabolitos antifngicos y difrentes enzimas hidrolticas que lo hacen
agresivos; adems la mayoria presentan zona de interseccin con las hifas del
patgeno; es decir hacen contacto a diferentes tiempos y mientras menor sea el
- 71 -
tiempo de contacto, mayor es la inhibicin por parte del hongo antagnico, esto
debido a los mecanismo de competencia por espacio, nutrientes. Esto concuerda
con Punja (1985), Elad et al., (1982), Rivera (1995), Pantoja (1994), Papavizas et
al., (1982), Montealegre et al., (1990), Harman (2006) y Howell (2003). As mismo,
estudios realizados por Vallejo (1998), Beebe (1983) y Olivo & Mont (1993)
demuestran que T. viride fue el que mejor resultado dio debido a los mecanismos
que posee contra el hongo fitopatgeno.

A nivel de invernadero, Scelrotium sp. afecto la germinacin del frijol. El micelio
cubri la semilla y hubo formacin de esclerotes prximos y en contacto a las
semillas que impidieron la germinacin y causo la muerte de stas. En las plantas
de frijol se observaron sntomas de hundimientos, amarillamiento, marchitez y
muerte. Al extraer estas plantas afectadas tambin se observ a nivel de cuello
una lesin hundida de color caf y en algunos casos micelio y esclerotes, lo cual
concuerda con Agrios (1996).

En invernadero al trabajar slo con fungicidas inhibidores de la biosntesis de
esteroles (Ergosterol) dieron buenos resultados entre 95 y 98% de plantas sanas
y demuestran que no afectan algn mecanismo de la fisiologia del frijol como
indica Grigoleit (1988) y Bayer (2011) salvo las observaciones de algunas semillas
podridas por ser sembrarlas a mucha profundidad. En cuanto a las diferentes
dosis usadas se escoge la dosis baja para evitar fitotoxicidad asi como lo sealan
Aycock (1966) y Beebe (1983). As mismo, los biocontroladores T. viride, T.
lignorum y T. harzianum al actuar solos dieron tambin un 95 y 98% de las
plantas sanas, lo que indica que Trichoderma no mata a las plantas como
- 72 -
menciona Olivos (1989). El mayor porcentaje de plantas sanas se observ al
trabajar los fungicidas Difenoconazole, Tebuconazole y Procloraz con respecto a
Sclerotium sp. fue de 61, 58 y 53% debido al modo de accin de estos fungicidas
como indica Latorre (1988), para el caso de los biocontroladores respecto a
Sclerotium sp. fue el T. viride con 63% de plantas sanas, seguido de T. lignorum
y T. harzianum con 51 y 48% en comparacin con los testigos solos; es decir
Trichoderma de una u otra manera es un hongo antagonista del suelo, y se
concuerda con Paricoto (2008) donde, T. viride mostr ser mejor biocontrolador
para S. sclerotiorum seguido de la cepa de T. lignorum en condiciones de
invernadero y a nivel de campo tambin fue T. viride quien produjo plantas de
mayor altura y con mayor cantidad de vainas y granos en comparacin a T.
lignorum, T. harzianum y al testigo. Por otro lado, Carhuavilca (2011) indica que al
trabajar con T. viride y T. harzianum solos o en combinacin; el mejor resultado lo
obtuvo con la combinacin de T. viride + T. harzianum; lo que indica que al
trabajar con las diferentes especies de Trichoderma solas o en combinacin, se
obtienen buenos resultados en hongos del suelo. Mientras el Testigo tuvo solo
21% de plantas sanas con respecto del Testigo absoluto con 95%, es decir
Sclerotium sp. tuvo condiciones ptimas para desarrollar y causar la muerte de
plantas en gran nmero, como lo sealan Rivera (1995) y Agrios (1996).

- 73 -
V. CONCLUSIONES

Al realizar el aislamiento del agente causal de la pudricin de las plantas de
frijol, se identifico que el patogeno es Sclerotium sp.

En las pruebas a nivel in vitro, los mejores fungicidas que inhibieron
completamente el crecimiento de Sclerotium sp. fueron tres: Tebuconazole,
Difenoconazole y Procloraz. Estos fungicidas son inhibidores de la
biosintesis de esteroles. Asimismo, los fungicidas Propineb y Mancozeb
dejaron crecer en 5.78 y 7.25 mm respectivamente, seguido del
biofungicida Propoleo con 54.10 mm con respecto del Testigo que
desarrollo completamente con 85.00 mm.

En las pruebas in vitro, el porcentaje de antagonismo de los
biocontroladores: T. harzianum, T. viride y T. lignorum evaluados contra
Sclerotium sp. mostraron para T. viride 18% de la inhibicin del crecimiento
seguido de T. lignorum con 13.7% y T. harzianum con 6.1% respecto a
Sclerotium sp. Es decir, que T. viride dejo crecer 34.60 mm a Sclerotium
sp. seguido de T. lignorum con 36.40 mm y T. harzianum con 39.60 mm
respectivamente. De aqu podemos decir que T. viride mostr ser un mejor
antagonista efectivo para Sclerotium sp. frente a T.lignorum y T.
harzianum.

En las pruebas a nivel de invernadero, el porcentaje de control de los
biocontroladores y fungicidas sobre Sclerotium sp. fueron para: T. viride y
T. lignorum de 98% de plantas vivas por maceta, seguido de T. harzianum
con 95% y de la misma manera T. viride x Sclerotium sp. con 63%, T.
- 74 -
lignorum x Sclerotium sp. con 51% y T. harzianum x Sclerotium sp. con
48% de plantas vivas por maceta. Asimismo, para los fungicidas el
Difenoconazole obtuvo 98% de las plantas vivas por maceta seguido de
Tebuconazole y Procloraz con 95%, Difenoconazole x Sclerotium sp. con
61%, Tebuconazole x Sclerotium sp. con 58% y Procloraz x Sclerotium sp.
con 53% de plantas vivas por maceta. Tambien se observa que el
Tratamiento absoluto con 95% de plantas vivas por maceta respecto del
Testigo con 21%, obteniendo el mayor nmero de plantas muertas. Por ello
que se dice que el mejor fungicida y biocontrolador a nivel invernadero es
Difenoconazole y T. viride porque permite disminuir significativamente el
ataque de Sclerotium sp. con respecto de los otros tratamientos.

- 75 -
VI. RECOMENDACIONES

Realizar pruebas a nivel de campo usando Difenoconazole a diferentes
dosis y probando momentos de aplicacin, asociado a los biocontroladores.

Realizar a nivel de campo utilizando T. viride y fungicidas solos y en
combinacin en el control de Sclerotium sp. para determinar el nivel de
eficiencia y la persistencia del biocontrolador.

Realizar trabajos para ver el efecto de la aplicacin de materia orgnica
sobre el desarrollo y eficiencia de los Trichodermas a nivel de invernadero
y campo.

Desarrollar una mtodologia para realizar un control integrado de
Sclerotium sp. en base a los datos existentes y trabajos en estudio
realizados en la zona.

Probar dosis ms altas de concentracin del biofungicida Propoleo a nivel
in vitro e invernadero y asi recabar mas informacin.

- 76 -
VII. BIBLIOGRAFA

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