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Gentica y Biotecnologa Ambiental Gentica y Biotecnologa Ambiental

CC. Ambientales CC. Ambientales
Dr. Antonio Coloma J erez. Dr. Antonio Coloma J erez.
Despacho 009 Edificio Departamental I.
Campus de Ciencias de la Salud.
Avda. Atenas s/n C.P. 28922 (Alcorcn).
Telfono: 914888876
correo electrnico: antonio.coloma@urjc.es
Pg. web docente:
http://docentes.cs.urjc.es/~acoloma
Gentica y Biotecnologa Ambiental Gentica y Biotecnologa Ambiental
CC. Ambientales (Temas 5 a 8) CC. Ambientales (Temas 5 a 8)
Dr. Oscar de Luis J imnez Dr. Oscar de Luis J imnez
Despacho 019 Edificio Departamental I.
Campus de Ciencias de la Salud.
Avda. Atenas s/n C.P. 28922 (Alcorcn).
Telfono: 914888617
correo electrnico: oscar.deluis@urjc.es
Pg. web docente:
http://docentes.cs.urjc.es/~odeluis
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Gentica y Biotecnologa Ambiental Gentica y Biotecnologa Ambiental
Teora:
1. BIOLOGA MOLECULAR DEL MATERIAL GENTICO (Temas1a4).
2. LA TECNOLOGIA DEL DNA RECOMBINANTE (Temas5a9)
3. MODIFICACIN GENTICA DE ORGANISMOSY SUSAPLICACIONES
BIOTECNOLGICAS(Temas10a15).
Examen final:
-Preguntasdetipotest (opcinmltiple) =50%delanota
-Preguntascortas=50%delanota
Prcticas:
Gentica y Biotecnologa Ambiental Gentica y Biotecnologa Ambiental
1. Requisitosindispensables:
Asistenciaalasmismas.
Aprobar el examendeprcticas.
2. Consistenen:
-Transformacinbacterianamedianteunplsmidoyseleccinde
transformantesresistentesaunantibitico transformantesresistentesaunantibitico
-PurificacindeDNA del plsmidoyanlisismedianteelectroforesis.
-Mutagnesis. Estudiodelaaccindelaradiacinultravioletasobrecepasde
bacterias(olevaduras) normalesomutantesdeficientesensistemasde
reparacindel DNA.
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I BiologaMolecular del Material I BiologaMolecular del Material I. Biologa Molecular del Material I. Biologa Molecular del Material
Gentico Gentico
Tema 1: Introduccin a la tecnologa del ADN
recombinante y a la biotecnologa.
Biotecnologa
como disciplina
integrada
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I BiologaMolecular del Material I BiologaMolecular del Material I. Biologa Molecular del Material I. Biologa Molecular del Material
Gentico Gentico
Tema 2: Estructura, organizacin y reparacin del
ADN ADN.
Estructura de doble hlice para el DNA bicatenario
Difractograma
10 pb
Watson-Crick: Cadenas
antiparalelas y complementarias
unidas entre s por 2 PdeH entre
A y T y 3 entre G y C.
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Estructura de doble hlice para el DNA bicatenario
Polaridad 5-3 : sntesis del enlace fosfodister de 5-fosfato a 3-OH.
Estabilidad del polinucletido de ADN vs el de ARN
5 Fosfato.
3 OH.
Estructura de doble hlice para el DNA bicatenario
Ordenacin antiparalela, Enlaces
intercatenarios y Surcos.
Formas Z(lev), B(dex) y A(dex) del dsDNA
Regla de Chargaff: En el ADN de
doble hebra, [A]=[T] y [G]=[C]
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Bases moleculares de las reglas de Chargaff y Watson-Crick
1. Rigidez del enlace fosfodister (covalente): restriccin de rotacin
2. Favorecimiento de la conformacin anti del enlace glicosdico
3. Predominio de los tautmeros oxo y amino de las bases.
Tautomerismo sustituyentes Amino- y Oxo- Conformacin sin y anti Enlace fosfodister
Amino-Imino Oxi-Hidroxi
Ceto-Enol
sin anti
DNA levgiro DNA dextrgiro
Antiparalelismo: Hebras codificante y molde
Proporciona molde para la replicacin y para la transcripcin
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Los componentes bsicos y su papel en el proceso
de informacin (utilizacin y transmisin)
Dogma central
del flujo de
informacin
Genes procariticos
Genes
Gen eucaritico
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Secuencias repetitivas
en Eucariotas
Organizacin estructural
del genoma en eucariotas
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Organizacin estructural del
genoma en eucariotas
Nucleosoma
(Core: Octmero)
H2A
H2B
H3
H4
Nucleosoma con
ADN (Frontal)
1,75 vueltas
Nucleosoma con
ADN (Lateral)
Cromosomas metafsicos y Cariotipo
Brazo P
Brazo Q
Cromosoma metafsico: 2 Cromtidas
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Cromosomas metafsicos
y Cariotipo
Tipos de protenas implicadas en la replicacin:
-DNA polimerasas Polimerizado de desoxinucletidos.
-Helicasas Desenrrolladoprogresivo del dsDNA.
-Topoisomerasas Libera la tensin torsional generada por el
desenrrolladoinducido por las helicasas.
-DNA primasa Inician la sntesis de oligosRNA.
-Prots. Unin a ssDNA Impiden renaturalizadoprematuro del ddDNA.
-DNA ligasa Sella mellas en hebra sencilla entre la cadena
naciente y los fragmentos de Okazaki en la hebra
retardada.
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Esquema de la replicacin del ADN
Mutaciones en la secuencia del ADN
1. Replicacin/reparacin defectuosa o bien inducidos fisico-
qumicamente.
2. Mutaciones somticas (transmisin horizontal) vs germinales
Transmisin vertical).
3. Consecuencias informacionales de la mutacin:
1. Mutaciones de Sustitucin
1. Silenciosas
2. Prdida de funcin
3. Atenuado-incentivado
2. Mutaciones de cambio en el marco abierto de lectura (ORF)
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Mutacin por dao fisicoqumico al ADN
Consecuencias informacionales de la mutacin
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Mecanismos de reparacin
Errores
de copia
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Escisin de
Nucletidos
(Ej.: Dimerizacin de
timinas por luz UV)
FORMACIN DE DMEROS DE TIMINA
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ELIMINACION DE
DIMEROS
DE TIMINA
Escisin de Base
(Ej: Desaminacin por
hidrlisis de la citosina)
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REPARACIN DE ROTURAS EN EL ADN
-Sistemas de completa fidelidad
-Sistemas que provocan errores
REPARACIN DE ROTURA CON RESTAURACIN COMPLETA DE LA SECUENCIA
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REPARACION DE FRAGMENTOS SIN HOMOLOGIA TERMINAL
REPARACIN CON INTRODUCCIN DE DELECIONES
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REPARACIN CON
INTRODUCCIN DE
DELECIONES
Replicacin vrica:
Retrotranscripcin y Replicacin
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I BiologaMolecular del Material I BiologaMolecular del Material I. Biologa Molecular del Material I. Biologa Molecular del Material
Gentico Gentico
Tema 3: Transcripcin del ADN. Procesamiento y
t d i d l ARN traduccin del ARN.
Analogas y diferencias entre replicacin y transcripcin
Analogas:
1) Pasos generales de Iniciacin-Elongacin-Terminacin con polaridad 5-3.
2) Complejos multicomponentes de gran tamao en la iniciacin.
3) Observancia de las reglas de apareamiento de bases Watson-Crick.
Dif i Diferencias:
1) Uso de ribonucletidos (en lugar de desoxirribonucletidos) para la sntesis.
2) U reemplaza a T como base complementaria para las A.
3) Sntesis del RNA de novo (sin cebador).
4) Se transcribe slo una parte discreta del genoma, no el genoma completo.
5) No existe actividad correctora de pruebas en la sntesis del RNA.
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RNA mensajero
Procariotas Eucariotas
RNA mensajero eucariotico
Exon Exon Exon Exon Exon
Cap 5 (7-metilguanosina)
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Estructura del RNA transferente
Reconocimiento
Complejo
Ribosmico
Reconocimiento
aminoacil-tRNA
sintetasa
74-95 nts
D: Dihidroxiuridina; : Pseudouridina
RNA ribosomal
Estructura del 16s-rRNA
Procariotas
Eucariotas
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Hebras codificante y molde
+1
Unidades transcripcionales: Promotor, codificante y terminador
Upstream Downstream
Promotor Bacteriano
40-50 pb
-35: Frecuencia de
transcripcin
-10: Fidelidad de
transcripcin (copias se
Distancia
Conservada:
17 (+/- 1) pb
(N de copias por entrada
complejo RNA Pol)
inician siempre en el +1)
Complejo Cerrado Complejo Abierto
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Transcripcin en Procariotas
Complejo RNAP Complejo RNAP
Transcripcin en Procariotas
Complejo cerrado-abierto
Complejo RNAPol abierto
protege desde -40 a +3 (+/-3)
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Terminador Procaritico
Distancia
C
Procesos rho-independiente y rho-dependiente.
Conservada
(40 pb)
A B
A y B: repeticiones invertidas
RNAs y RNA polimerasas en eucariotes
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Complejo de Transcripcin en Eucariotas
Complejo eucaritico de transcripcin.
Elementos en:
-cis: secuencias ADN -cis: secuencias ADN
(elementos de respuesta)
-trans: protenas
(factores de transcripcin)
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Sntesis y procesado de hnRNAs
Variantes de Splicing
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Promotores alternativos (GK)
I BiologaMolecular del Material I BiologaMolecular del Material I. Biologa Molecular del Material I. Biologa Molecular del Material
Gentico Gentico
Tema 4: Control de la Expresin Gnica.
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DONDE SE INICIA Y TERMINA LA TRANSCRIPCION
Control de la transcripcin en Procariotas
Factores
alternativos
Opern lac p
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Factores generales de
transcripcin:
TFIID: 2 subunidades (TBP y
1complejo de 10 TAFs)
TFIIB: (1 protena) media la
interaccin entre TFIID y la
Polimerasa
TFIIF: (4 protenas) estabiliza el
complejo DNA-TBP-TFIIB.
TFIIE: (4 proteinas) regula TFIIH
y en conjunto promueven la
formacin la adicin del primer
nucleotido del RNA.
TFIIH: es el complejo de mayor
tamao (9 subunidades) actividad
helicasa y de reparacin de DNA
La RNA polimerasa (12
subunidades) requiere de estos
factores:
Posicionar correctamente la
enzima
Para regular su actividad
helicasa y de reparacin de DNA.
Dominio CTD
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