CROMATOGRAFA DE

COMPUESTOS ORGNICOS















INDICE

I. INTRODUCCION .......................................................................... 3
II. MARCO TEORICO ........................................................................ 4
A. DEFINICION........................................................................ 4
B. CLASIFICACION DE LA CROMATOGRAFIA .............................. 5
C. PARTES DE UN SISTEMA CROMATOGRAFICO ......................... 7
D. RELACION DE FLUJO (Rf) ..................................................... 7
III. MATERIALES Y REACTIVOS ........................................................ 9
IV. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL ............................................ 10
V. RESULTADOS ............................................................................ 11
VI. DISCUSION ................................................................................ 12
VII. CONCLUSION ............................................................................ 12
VIII. CUESTIONARIO ......................................................................... 13
IX. BIBLIOGRAFIA ........................................................................... 19










INTRODUCCION

La cromatografa es un mtodo muy utilizado en todas las ramas de la ciencia y
los mtodos ms modernos y sofisticados que existen para separar mezclas de
productos tanto orgnicos como organometlicos con los que se cuentan
actualmente involucran sin excepcin la cromatografa: que permite la
identificacin y determinacin de los componentes qumicos en mezclas
complejas. Ningn otro mtodo de separacin es tan potente y de aplicacin
tan general como la cromatografa.
En todas las separaciones cromatogrficas, la muestra se desplaza con una
fase mvil, que puede ser un gas, un lquido o un fluido supercrtico. Esta fase
mvil se hace pasar a travs de una fase estacionaria con la que es inmiscible,
y que se fija a una columna o a una superficie slida. Las dos fases se eligen
de tal forma, que los componentes de la muestra se distribuyen de modo
distinto entre la fase mvil y la fase estacionaria. Aquellos componentes que
son fuertemente retenidos por la fase estacionaria se mueven lentamente con
el flujo de la fase mvil; por el contrario, los componentes que se unen
dbilmente a la fase estacionaria, se mueven con rapidez. Como consecuencia
de la distinta movilidad, los componentes de la muestra se separan en bandas
o zonas discretas que pueden analizarse cualitativa y/o cuantitativamente.
En la presente prctica realizaremos la cromatografa del cido acetil saliclico,
donde podremos determinar los posibles compuestos qumicos presentes en la
muestra y as observar su pureza, adems de la relacin de flujo (Rf) que es
caracterstico para cada compuesto.






MARCO TEORICO
A. DEFINICION
La cromatografa es un mtodo fsico o de separacin para la caracterizacin
de mezclas complejas, la cual tiene aplicacin en todas las ramas de la ciencia
y la fsica. Es un conjunto de tcnicas basadas en el principio de retencin
selectiva, cuyo objetivo es separar los distintos componentes de una mezcla,
permitiendo identificar y determinar las cantidades de dichos componentes.
Las tcnicas cromatogrficas son muy variadas, pero en todas ellas hay una
fase mvil que consiste en un fluido (gas, lquido o fluido supercrtico) que
arrastra a la muestra a travs de una fase estacionaria que se trata de un
slido o un lquido fijado en un slido. Los componentes de la mezcla
interaccionan en distinta forma con la fase estacionaria. De este modo, los
componentes atraviesan la fase estacionaria a distintas velocidades y se van
separando. Despus de que los componentes hayan pasado por la fase
estacionaria, separndose, pasan por un detector que genera una seal que
puede depender de la concentracin y del tipo de compuesto.
La cromatografa puede cumplir dos funciones bsicas que no se excluyen
mutuamente:
Separar los componentes de la mezcla, para obtenerlos ms puros y
que puedan ser usados posteriormente (etapa final de muchas sntesis).
Medir la proporcin de los componentes de la mezcla (finalidad
analtica). En este caso, las cantidades de material empleadas son
pequeas.






B. CLASIFICACION DE LA CROMATOGRAFIA
Tipos Fase mvil Fase estacionaria
Cromatografa en papel Lquido
Lquido (molculas de agua contenidas en la celulosa
del papel)
Cromatografa en capa
fina
Lquido Slido
Cromatografa de gases Gas Slido o lquido
Cromatografa lquida
en fase inversa
Lquido
(polar)
Slido o lquido
(menos polar)
Cromatografa lquida
en fase normal
Lquido
(menos
polar)
Slido o lquido
(polar)
Cromatografa lquida
de intercambio inico
Lquido
(polar)
Slido
Cromatografa lquida
de exclusin
Lquido Slido
Cromatografa lquida
de absorcin
Lquido Slido
Cromatografa de
fluidos supercrticos
Lquido Slido

Las distintas tcnicas cromatogrficas se pueden dividir segn cmo est
dispuesta la fase estacionaria:
Cromatografa plana. La fase estacionaria se sita sobre una placa plana
o sobre un papel. Las principales tcnicas son:
Cromatografa en papel
Cromatografa en capa fina
Cromatografa en columna. La fase estacionaria se sita dentro de una
columna. Segn el fluido empleado como fase mvil se distinguen:
Cromatografa de lquidos
Cromatografa de gases
Cromatografa de fluidos supercrticos

La cromatografa de gases es til para gases o para compuestos relativamente
voltiles, lo que incluye a numerosos compuestos orgnicos. En el caso de
compuestos no voltiles se recurre a procesos denominados de
"derivatizacin", a fin de convertirlos en otros compuestos que se volatilizen en
las condiciones de anlisis.
Dentro de la cromatografa lquida destaca la cromatografa lquida de alta
resolucin (HPLC, del ingls High Performance Liquid Chromatography), que
es la tcnica cromatogrfica ms empleada en la actualidad, normalmente en
su modalidad de fase reversa, en la que la fase estacionaria tiene carcter no
polar, y la fase mvil posee carcter polar (generalmente agua o mezclas con
elevada proporcin de la misma, o de otros disolvente polares, como por
ejemplo metanol). El nombre de "reversa" viene dado porque tradicionalmente
la fase estacionaria estaba compuesta de slice o almina, de carcter polar, y
por tanto la fase mvil era un disolvente orgnico poco polar.
La razn por la que es posible conseguir separaciones difciles de lograr por
otros mtodos se debe en que, pequeas diferencias en el coeficiente de
reparto o en la adsorcin-desorcin de cada uno de los componentes se va
multiplicando a lo largo del sistema.
Se pueden establecer dos mecanismos:
Reparto: es la distribucin de una sustancia o mezcla de sustancias
entre la fase mvil y la fase estacionaria soportada sobre un slido
adecuado.
Adsorcin: es un proceso donde un slido se utiliza para eliminar una
sustancia soluble del agua. En este proceso el carbn activo es el slido.
El carbn activo se produce especficamente para alcanzar una
superficie interna muy grande (entre 500 - 1500 m 2 /g). Esta superficie
interna grande hace que el carbn tenga una adsorcin ideal. El carbn
activo viene en dos variaciones: Carbn activado en polvo (PAC) y
carbn activado granular (GAC).

C. PARTES DE UN SISTEMA CROMATOGRAFICO
Fase mvil: Lo constituyen los solventes, que son sustancias fluidas de
diferente polaridad, metanol, cloroformo, etanol, etc. La polaridad de la
fase mvil esta relacionada con su capacidad de elucin o desorcin.
Los solventes deben tener grado de pureza.
Fase estacionaria o soporte: Lo constituyen las sustancias adsorbentes
que generalmente se depositan sobre la placa de vidrio, en el caso de la
C. en papel, el papel de Whatman. Debe ser insoluble en el disolvente
que se va utilizar para la separacin y no debe reaccionar con las
sustancias que se van a separar.
Cmara de saturacin: Que es un recipiente con una tapa que cierra
hermticamente donde se realiza el cromatograma.
Reveladores: Si todos los componentes son coloreados, bastar la
inspeccin ocular para distinguir las manchas, pero en la mayora de
casos, los compuestos son incoloros y por ello invisibles en el
cromatograma, siendo necesario utilizar mtodos fsicos (Luz UV) o
qumicos, como los vapores de Iodo, u otros reactivos especiales que
permitan hacer visible.
Aplicadores: Son micropipetas utilizadas en la aplicacin o sembrado
de las sustancias o cromatografiar.
Muestras: Son las sustancias a cromatografiar y pueden ser: la
sustancia patrn o estndar y la sustancia problema o muestra
problema.

D. RELACION DE FLUJO (Rf)
Es una constante, es caracterstica para cada compuesto, siempre que se
efecte la determinacin en las mismas condiciones.
Rf: Es la relacin que existe entre la distancia alcanzada por la muestra
problema (frente de soluto) y la distancia recorrida por el solvente (frente del
solvente).




Frente de soluto: es la distancia que alcanza o recorre una muestra
problema en una cromatografa.
Frente de solvente: es la distancia que alcanza o recorre la fase mvil en
una cromatografa.









Para averiguar si dos compuestos son iguales, se colocan ambos sobre la
misma placa y se desarrolla con varios eluyentes. Una vez desarrollados se
calculan los RF y si son distintos, puede deducirse con toda seguridad que no
se trataba del mismo compuesto. Por el contrario si los RF son iguales los
compuestos pueden ser iguales o no serlo.










Distancia
recorrida por
la sustancia
x
Distancia recorrida
por el solvente
Frente del solvente
Origen o siembra
MATERIALES Y REACTIVOS

MATERIALES

Tubo de prueba
Beaker
Capilares
Mechero
Porta objeto
Papel filtro
Cmara de saturacin
Revelador (fsico, la luz UV)
Lpiz
Pinza

REACTIVOS

Soporte: Silicagel G. Activado
Sistema de solvente: Bz AcOEt (2:1)
Sustancias: cido acetil saliclico
Revelador: Vapores de Yodo metlico






PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
Realizacin de la cromatografa en capa fina:

Se vaciar el Silicagel G activado en la parte central de la lmina una cantidad
suficiente, luego se esparcir por toda la superficie de la lmina y se dejara
secar en la estufa.







Agregar 2 ml de alcohol al recipiente con la muestra de cido acetil saliclico.
A 1 cm del borde inferior del portaobjeto (cromatograma) se marcar dos
puntos equidistantes entre si con un lpiz y se aplicar con un capilar entre 5 a
8 pequeas cantidades de muestra estndar y muestra problema, uno en cada
punto; teniendo la precaucin de dejar secar despus de cada aplicacin.









Desarrollo de la cromatografa:
En la cmara de saturacin, que es el tanque de elusin, se pondr el sistema
de solventes: Bz AcOEt (2:1). Introducir el cromatograma y dejar que
ascienda el sistema de solvente, cuando el solvente llegue hasta el lugar
sealado como frente de solvente retirarla de la cmara y secar. Con el objetivo
de disolver la muestra.

Revelado:
a) revelador fsico: lmpara de luz UV
Exponer las placas cromatogrficas bajo la luz UV. Las
marcas que aparezcan se sealaran con lpiz.

b) revelador qumico: Vapores de Yodo metlico
Calentar el Yodo metlico, luego ingresar la placa con la ayuda de una pinza;
teniendo la precaucin de no respirar los vapores del Yodo debido a su
toxicidad.

Luego determinar la Relacin de flujo (Rf)


RESULTADOS






MUESTRA PROBLEMA MUESTRA PATRON O ESTANDAR

0.74

DISCUSION
La cromatografa en capa fina presenta una serie de ventajas frente a otros
mtodos cromatogrficos (en columna, en papel, en fase gaseosa, etc.) ya que
es precisa y es ms simple. El tiempo que se necesita para conseguir las
separaciones es mucho menor y la separacin es generalmente mejor. Pueden
usarse reveladores corrosivos, que sobre papel destruiran el cromatograma. El
mtodo es simple y los resultados son fcilmente reproducibles, lo que hace
que sea un mtodo adecuado para fines analticos.

CONCLUSION
El gel de slice, tambin conocido como Silicagel, es un producto absorbente,
catalogado como el de mayor capacidad de absorcin de los que se conocen
actualmente.
Se observ en esta prctica que por medio de la cromatografa es posible
identificar los componentes qumicos de una sustancia.
Como la polaridad del solventes utilizados para la cromatografa, determinan la
el resultado mostrndonos sus diferentes compuestos.
Se observ como las diferentes caractersticas de la muestra se vean en la
placa, representadas por manchas.
Las aplicaciones de la cromatografa son mltiples y la convierten en la tcnica
de anlisis ms poderosa que existe





CUESTIONARIO
1.- Qu es una serie eluotrpica?
Una serie eluotrpica es un listado de varios compuestos ordenados segn su
poder de elucin para un adsorbente dado; es un rango de sustancias de
diferentes polaridades que actan como fase mvil y que permiten observar un
mejor desplazamiento sobre una fase estacionaria. Tales series son tiles para
determinar los disolventes necesarios en la cromatografa de
una mezcla de compuestos qumicos. Normalmente tales series comienzan con
disolventes no-polares, como el n-hexano, y finalizan en disolventes polares
como metanol o agua. El orden de disolventes en una serie eluotrpica
depende a la vez de la fase estacionaria as como del compuesto empleado
para determinar el orden. La fuerza de elucin, fuerza eluyente, o fuerza
elutrpica (), de un disolvente es una medida de la energa de adsorcin del
disolvente tomando como referencia el sistema pentano-slice pura al que se
asigna el valor 0. Dicha fuerza indica la facilidad del disolvente para
formar enlaces de hidrgeno con las molculas que queremos extraer, la cual
depende de su constante dielctrica o de su momento dipolar.
2.- Mencione las aplicaciones de la cromatografa por HPLC y la
cromatografa de gases.
La cromatografa lquida de alta presin (HPLC), a pesar de ser una tcnica
relativamente nueva, se cuenta que describe numerosas aplicaciones en la
qumica. En la mayora de los casos, stas consisten en determinaciones de
sustancias cuyo anlisis por otra tcnica cromatogrfica resulta muy difcil. Aqu
algunas aplicaciones:
Compuestos inicos: como aminocidos, sales inorgnicas, cidos
orgnicos, etc.
Compuestos de alto peso molecular: como polmeros, hidrocarburos
polinucleares, productos naturales, etc.
Compuestos termolbiles y no voltiles: como vitaminas, pesticidas,
esteroides, plastificantes, drogas y un producto muy grande de otros
productos farmacuticos.
En los problemas relacionados con la contaminacin ambiental, la HPLC se
utiliza para la contaminacin de algunos pesticidas (insecticidas, larvicidas,
herbicidas, etc.). Tambin es posible la determinacin de hidrocarburos
aromticos polinucleares que son contaminantes atmosfricos muy importantes
En cromatografa lquida el anlisis de compuestos vitamnicos es posible en
corto tiempo.
El anlisis de medicamentos es tambin una aplicacin muy interesante, la
determinacin de los componentes activos de una tableta analgsica. Tambin
el anlisis de barbitricos, anticonceptivos, etc.
Cromatografa de gases (GC)
La GC tiene dos importantes campos de aplicacin. Por una parte su capacidad
para separar mezclas orgnicas complejas, compuestos organometlicos y
sistemas bioqumicos. Su otra aplicacin es como mtodo para determinar
cuantitativa y cualitativamente los componentes de la muestra. Para el anlisis
cualitativo se suele emplear el tiempo de retencin, que es nico para cada
compuesto dadas unas determinadas condiciones (mismo gas portador, rampa
de temperatura y flujo), o el volumen de retencin. En aplicaciones
cuantitativas, integrando las reas de cada compuesto o midiendo su altura,
con los calibrados adecuados, se obtiene la concentracin o cantidad presente
de cada analito.
Aplicaciones al anlisis de alimentos
Caracterizacin de aceites esenciales: se basa en la deteccin de
sustancias terpnicas responsables de propiedades aromticas en los
alimentos.
Anlisis de nitrosaminas en agua potable: las nitrosaminas son
sustancias carcingenas potenciales, se debe controlar su presencia en
agua potable. Para esto se usa extraccin de la fase slida y GC con
columna capilar.
Controles de alcoholemia: la GC se puede usar para determinar el
volumen de alcohol en sangre.
Determinacin de trazas de pesticidas rgano-fosfricos (OPP) en aceite
de oliva: el GC en combinacin con los detectores de ionizacin de llama
permiten la deteccin de estos pesticidas, que a pesar de ser baratos y
de amplio espectro, son causantes de problemas irreversibles en la
actividad de los neurotransmisores.
Contaminacin por dioxinas: usando detectores de conductividad
electroltica, permite el anlisis de residuos de dioxinas muy perjudiciales
para la salud humana.
Deteccin de pesticidas en aves y peces: se usan columnas capilares
para la deteccin de pesticidas voltiles o sustancias de vertidos txicos.






Diagrama de un cromatgrafo de gases
3.- Diga que es la electroforesis y cual es su fundamento.
La electroforesis es un mtodo de
laboratorio en el que se utiliza una
corriente elctrica controlada con la
finalidad de separar biomolculas
segn su tamao y carga elctrica
a travs de una matriz gelatinosa.
Fue empleado por primera vez por en el ao 1937, pero su importancia vino a
incrementarse cuando en los aos cincuenta E. L.Durrum y Arne W.K. Tiselius,
impulsaron la electroforesis de zona, nombre que se asign a la separacin de
materiales en un campo elctrico en presencia de algn tipo de soporte;
aunque este trmino se limit originalmente al anlisis de coloides y partculas
submicroscpicas, se ha convertido en estos ltimos aos en una metodologa
aplicada a sustancias de bajo peso molecular.
Fundamento.
Cuando una mezcla de molculas ionizadas y con carga neta son colocadas
en un campo elctrico, estas experimentan una fuerza de atraccin hacia el
polo que posee carga opuesta, dejando transcurrir cierto tiempo las molculas
cargadas positivamente se desplazaran hacia el ctodo (el polo negativo) y
aquellas cargadas positivamente se desplazaran hacia el nodo (el polo
positivo).
El movimiento de las molculas
esta gobernado tambin por dos
fuerzas adicionales; inicialmente la
friccin con el solvente dificultar
este movimiento originando una fuerza que se opone , por otro lado las
molculas tienen que moverse en forma aleatoria o movimiento browniano
debido a que poseen energa cintica
propia denominado difusin. La energa
cintica de las molculas aumenta con la
temperatura, por ello a mayor temperatura
mayor difusin.
La suma de todas estas fuerzas provoca que las molculas no migren de una
manera homognea, de tal manera que, si las molculas son colocadas en un
cierto lugar de solucin, los iones comenzaran a moverse formando un frente
cuya anchura aumentara con el tiempo.
Para reducir la anchura de este frente podemos reducir el movimiento de las
molculas empleando un medio que oponga mas resistencia a dicho
movimiento. Una forma comn de hacer esto es formar un gel. El gel consiste
de un polmero soluble de muy alto peso molecular que atrapa molculas de
agua y forma un tamiz que dificulta el movimiento de los solutos,
consecuentemente, la migracin electrofortica de las molculas ser ms
lenta, pero el ensanchamiento del frente se ver reducido tambin.

4.- Diga usted que mtodo cromatogrfico se podra aplicar en su carrera
profesional.
La tcnica ms usada es la cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC),
por su sensibilidad, fcil adaptacin a las determinaciones cuantitativas
exactas, su idoneidad para la separacin de especies no voltiles y su
aplicacin a sustancias de primordial inters en la industria, como son los
aminocidos, protenas, cidos nucleicos, hidrocarburos, carbohidratos, entre
otros.
Ahora veamos las aplicaciones de la cromatografa:
Cromatografa en papel: En la actualidad ha entrado en desuso debido a su
bajo poder de resolucin, pero en un principio, sirvi para separar compuestos
orgnicos contenidos en mezclas de extractos vegetales que les servan a los
antiguos farmacuticos.
Cromatografa en capa fina: Este tipo de cromatografa todava es muy usada
en investigacin para separar compuestos orgnicos como lpidos, colorantes
naturales, etc. Esta cromatografa es utilizada para separaciones gruesas y
solo es usada para fines de investigacin, ya que las industrias grandes han
perdido inters por lo artesanal y baja resolucin de esta tcnica.
Cromatografa en columna: Se usa para separar grandes cantidades de
compuestos orgnicos y tambin se usa para fines de investigacin
principalmente por lo caro de los materiales que se usan, como por ejemplo
unas variantes de cromatografa en columna son las llamadas cromatografas
de afinidad las cuales se utilizan para separar protenas de mezclas u
homogenados de tejidos vivo, y cada columna que solo se usa una vez cuesta
en promedio unos mil dlares americanos.
Cromatografa de lquidos: De hecho la variante ms de moda de esta tcnica
es la llamada cromatografa de lquidos de alta resolucin o HPLC por sus
siglas en ingles (High performance liquid cromatography). Es ampliamente
usada en la industria de alimentos, en la industria farmacutica, petroqumica, e
investigacin. Como es una tcnica con una resolucin muy buena, con ella se
detectan o se determinan las composiciones de mezclas complejas como los
aditivos de un alimento y qu contaminantes tiene, en la industria farmacutica
igual es para separar compuestos e identificar la pureza de los medicamentos
que se venden.
La cromatografa de gases: Esta cromatografa es ms usada en la industria
petroqumica ya que se necesita que los compuestos a analizar o las mezclas a
separar sean voltiles. Se usa tambin en investigacin.
En la actualidad se utilizan sistemas acoplados de HPLC-masas o
cromatografa de gases-masas para identificar completamente y dar la
estructura de cada compuesto en mezclas complejas como gasolinas.















BIBLIOGRAFIA

http://es.wikipedia.org/wiki/Serie_eluotr%C3%B3pica
http://es.wikipedia.org/wiki/Cromatograf%C3%ADa_de_gases#Aplicaciones
http://www.javeriana.edu.co/Facultades/Ciencias/neurobioquimica/libros/cel
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http://www.ugr.es/~quiored/lab/oper_bas/crom.htm
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SPRINGER VERLAG IBERICA, 2000.
Fischer, Robert B.- Peters, Dennis G. Compendio de anlisis qumico
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Noller, Carl R. Qumica orgnica, Tercera edicin, Editorial interamericana
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