FACTORES FISICOS Y QUIMICOS QUE AFECTAN EL CRECIMIENTO

MICROBIANO
Z. AMZQUITA
1
; F. BARRAZA
2
; L. BELTRN
2
; C. CUEVAS
2
; S. MENDOZA
2
.
UNIVERSIDAD DE CARTAGENA
FACULTAD DE INGENIERA
INGENIERA DE ALIMENTOS
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGA
CARTAGENA, 14 MAYO DEL 2012
1. Docente Unicartagena. 2. Estudiante de Ingeniera de Alimentos

RESUMEN

En la prctica se realizaron dos pruebas con el objetivo diferenciar entre la
accin de la temperatura y la accin de los desinfectantes al momento de
ser utilizados para la esterilizacin y desinfeccin de los microorganismos y
comparar la eficiencia de los diferentes desinfectantes.

Palabras claves: Staphylococcus aureus, fenol, hipoclorito, etanol,
esterilizacin, desinfeccin.

ABSTRACT

In practice, two tests were conducted in order to differentiate between
the effect of temperature and the action of disinfectants at the time of being
used for sterilization and disinfection of microorganisms and to compare
the efficiency of differentdisinfectants.

Keys words: Staphylococcus aureus, phenol, hypochlorite, ethanol,
sterilization, disinfection


INTRODUCCIN

La destruccin de los
microorganismos y la inhibicin de su
crecimiento no son asuntos sencillos
porque la eficacia de un agente
antimicrobiano (agente que destruye
microorganismos o inhibe su
crecimiento) depende de 6 fcatores:
Tamao de la poblacin: En
cada intervalo de tiempo se
destruye una fraccin igual de
poblacin microbiana, por tanto,
una poblacin mayor se
necesitar ms tiempo para
morir que una ms pequea.
Composicin de la poblacin:
La eficacia de un agente varia
considerablemente con la
naturaleza de los organismos
que se van a tratar porque stos
difieren sustancialmente en
cuanto a susceptibilidad. Las
endosporas bacterianas son
mucho ms resistentes a la
mayora de los agentes
antimicrobianos que las formas
vegetativas, y las clulas ms
jvenes se destruyen
normalmente con ms facilidad
que los organismos maduros.
Por otra parte, algunas especies
son capaces de soportar mejor
que otras condiciones adversas.
Concentracin de un agente
antimicrobiano: A menudo,
pero no siempre, cuanto ms
concentrado est un agente
qumico o ms intenso sea uno
fsico, ms rpidamente se
destruyen los microorganismos.
No obstante, la eficacia de un
agente no est normalmente
relacionada directamente con la
concentracin o intensidad.
Duracin de la exposicin:
Cuanto ms tiempo se exponga
una poblacin a un agente
microbicida, ms organismos se
destruirn. Para conseguir una
esterilizacin, hay que realizar
una exposicin suficiente para
reducir la probabilidad de
supervivencia a 10
-6
o menos.
Temperatura: La actividad de
los agentes qumicos aumenta
con la temperatura. Con
frecuencia, concentraciones
bajas de un desinfectante
pueden ser eficaces a
temperaturas ms altas.
Ambiente local: La poblacin
microbiana que debe ser
controlada no est aislada, sino
en el contexto de una serie de
factores ambientales que
pueden ofrecerle proteccin o
facilitar su destruccin. [1]
Marco Terico
Control microbiano por agentes
fsicos.
El calor y otros agentes fsicos se
suelen utilizar para esterilizar objetos,
como lo demuestra el uso que
todava tiene el autoclave en todos
los laboratorios de microbiologa. Los
cuatro agentes empleados con ms
frecuencia como agentes fsicos son:
calor, bajas temperaturas, filtracin y
radiacin. En esta prctica se utiliz
el calor, por lo tanto slo se hablar
de l.
Calor: El fuego y el agua en
ebullicin se han utilizado para
esterilizar y desinfectar desde la
poca de los griegos, siendo el calor
an uno de los mtodos ms
comunes para destruir
microorganismo. Se puede aplicar
hmedo o seco.
El calor hmedo destruye
rpidamente los virus, las bacterias y
los hongos. Una exposicin a agua
en ebullicin durante 10 minutos es
suficiente para destruir clulas
vegetativas y esporas de eucariotas.
Lamentablemente, la temperatura de
ebullicin (100C) no es suficiente
para destruir endosporas bacterianas
que pueden sobrevivir durante horas
en ebullicin. Por lo tanto, se puede
utilizar para desinfectar agua potable
pero no esteriliza.
Muchos objetos se esterilizan mejor
en ausencia de agua mediante
esterilizacin por calor seco. Los
objetos que se van a esterilizar se
colocan en una estufa a una
temperatura de 160 a 170C durante
2 3 horas.
Control microbiano por agentes
qumicos.
Compuestos fenlicos: El fenol
fue el primer antisptico y
desinfectante de uso
generalizado. En 1867, Joseph
Lister lo emple para reducir el
riesgo de infeccin durante las
operaciones quirrgicas.
Actualmente el fenol y derivados
se emplean como desinfectantes
en laboratorios y hospitales.
Estos productos actan
desnaturalizando las protenas y
alterando las membranas
celulares.
Alcoholes: Los alcoholes se
encuentran entre los
desinfectantes y antispticos ms
utilizados. Son bactericidas y
fungicidas, pero no esporicidas:
destruyen tambin algunos virus
con envoltura lipdica. Los dos
alcoholes germicidas ms
comunes son el etanol y el
isopropanol, empleados
normalmente en una
concentracin del 70 80%.
Actan desnaturalizando las
protenas, y quizs, disolviendo
los lpidos de membrana. Se
requiere una inmersin en estos
alcoholes durante 10 15
minutos para desinfectar
termmetros y otros instrumentos.
Halgenos: El cloro es el
desinfectante habitual del agua
municipal y de las piscinas, y se
emplea tambin en las industrias
lcteas y alimentarias. Puede
aplicarse como locro gas,
hipoclorito, sdico o hipoclorito
clcico, todos ellos producen
acido hipocloroso (HCLO) y,
luego, oxigeno atmico. El
resultado es la oxidacin de
materiales celulares y la
destruccin de bacterias
vegetativas y hongos, aunque no
de esporas. La destruccin de
casi todos los microorganismos
se producen en 30 minutos. Las
soluciones de cloro son muy
eficaces para desinfectar
laboratorios y hogares. Una
combinacin excelente de
desinfectante y detergente puede
prepararse a partir de una
dilucin 1/100 de leja de uso
domestico (10mL de leja/L) y una
suficiente cantidad de detergente
no inico (7.8mL/L, para obtener
una concentracin de detergente
del 0.8%). Esta mezcla elimina
tanto la suciedad como las
bacterias. [1]
Cepa ATCC 25923 (Staphylococcus
aureus): Bacteria anaerobia
facultativa, grampositiva, productora
de coagulasa, catalasa, inmvil y no
esporulada que se encuentra
ampliamente distribuida por todo el
mundo, estimndose que una de
cada tres personas se hallan
colonizadas, que no infectadas, por
ella. El nombre binominal de esta
bacteria proviene de la
raz griega , que se
compone de staphyl, que significa
racimo y coccus, que significa grano,
baya o uva; y del latn aureus que
significa dorado. Este nombre
significa racimo de uvas dorado y lo
lleva en funcin de su morfologa
microscpica y su color dorado en el
cultivo de agar-sal-manitol. [2]

I. MATERIALES
Caja de agar nutritivo con
bacteria en estudio (Cepa
ATCC 25923 (S. aureus))
11 tubos de caldo nutritivo.
3 cajas de agar nutritivo.
Un tubo de 1 mL de hipoclorito.
Un tubo con 1 mL de etanol
70%.
Un tubo con 1 mL de fenol.
Pipetas de 1 mL.
Gradillas.
Mechero de Bunsen.
Estufa.
Termmetro.
Bao de mara.
Asas redondas y rectas.

II. PROCEDIMIENTO
Efecto de la temperatura.
Se tom una asada de S. aureus y se
adicion en tres tubos con caldo
nutritivo, luego se marcaron como a,
b, y c.
Tubo Tratamiento
trmico
Tiempo de
tratamiento
A Agua
hirviendo
30 minutos
B Agua a 60C 45 minutos
C No se
somete

Nota: El tiempo de tratamiento del
tubo B no fue de 1 hora porque se
acab las horas requeridas para la
prctica y slo dur 45 minutos.
Luego se incubaron los tubos a 35C
durante 24 horas y despus se hizo
lectura por la aparicin de turbidez.
Accin de los desinfectantes.
Se tom de la caja de agar nutritivo
con S. aureus una asada y se
introdujo en caldo nutritivo hasta que
se obtuvo turbidez. Luego se
marcaron tres tubos y se adicion a
cada uno de ellos 3 tipos de
desinfectantes de esta manera:
Tubo 1 Hipoclorito 1 mL
Tubo 2 Etanol 1 mL
Tubo 3 Fenol 1 mL

De la suspensin bacteriana se
adicion 0.5 mL a cada tubo. Luego
se sembr una asada de cada tubo
con el respectivo desinfectante
(hipoclorito, fenol y etanol) en tres
cajas de petri con agar nutritivo
fraccionada en 4 y debidamente
rotulada.

Se realiz la siembra en cada caja
especficamente en cada cuadrante
segn el tiempo estipulado de
contacto de la bacteria con el agente
qumico respectivo. Luego se
incubaron las cajas a 35C durante
24 horas. Se observaron los
resultados y se registraron.
ANALISIS Y RESULTADOS
Efecto de la temperatura.
Tubo a.

La muestra de la temperatura a
100C/30 minuto, mostr poca
turbidez comparada con los dems
tubos, partculas o migas de pan,
suspensin color amarillo en la
solucin.
Tubo b.

En la muestra de la temperatura a
60C/45 minuto, se observ
sedimentos (precipitado), suspensin
de color amarillo, turbidez media.
Tubo c.

En el tubo donde no hubo tratamiento
trmico, se observ: Sedimentacin o
precipitado, partcula suspendidas en
forma de grumos y migas de pan,
suspensin de color amarillo, mayor
turbidez en la solucin, comparado
con los dems tubos.
Accin de los desinfectantes.
TUBO 1 (HIPOCLORITO)



Blanco
Si hubo
crecimiento
(abundante)

5 minutos
No hubo
crecimiento
(pocas colonias)

10 minutos
Si hubo
crecimiento
(abundante)

20 minutos
Si hubo
crecimiento
(abundante)

TUBO 2 (ETANOL)


Blanco
Si hubo
crecimiento
(abundante)

5 minutos
Si hubo
crecimiento
(pocas colonias)

10 minutos
Si hubo
crecimiento
(abundante)

20 minutos
Si hubo
crecimiento
(abundante)

TUBO 3 (FENOL)


Blanco
Si hubo
crecimiento
(abundante)

5 minutos
Si hubo
crecimiento
(abundante)

10 minutos
Si hubo
crecimiento
(abundante)

20 minutos
Si hubo
crecimiento
(abundante)

PREGUNTAS
1. Cul temperatura permiti
eliminar por completo el
microorganismo estudiado a al
menos se observ menos
turbidez? En caso que haya
podido eliminarse por completo,
qu otro mtodo fsico
recomienda utilizar?
La temperatura que permiti eliminar
el organismo estudiado fue 100C.
2. Cul de los desinfectantes
utilizados elimin mejor al
microorganismo utilizado?
El desinfectante que elimin mejor al
microorganismo fue el hipoclorito.
CONCLUSIONES
La temperatura alta logr eliminar un
poco al microorganismo en
comparacin con los dems tubos,
por lo que al momento de desinfectar
algn instrumento por medio fsico, se
haga a la temperaturas e 100C.
El desinfectante que ms tuvo
efectividad para eliminar al
microorganismo fue el desinfectante
hipoclorito, por lo que al momento de
desinfectar alguna superficie o
instrumento, es ms confiable usar
hipoclorito.

REFERENCIA BIBLIOGRAFICA
[1] Prescott, Microbiologa 5ta edicin