Integrantes: Claudia Ahumada Patricio Fernndez Juan Vidal Profesores: Patricio Carvajal Lena Glvez Ayudantes: Gabriel Lara Javiera Quezada Asignatura: Bioqumica de los alimentos II
Valparaso, 17 de Noviembre del 2011
1.0 Introduccin
Algunos azcares tienen la propiedad de oxidarse en presencia de agentes oxidantes suaves como el in Fe 3+ o Cu 2+ . Esta caracterstica radica en la presencia de un grupo carbonilo libre, el cual es oxidado y genera un grupo carboxilo. Por lo tanto, aquellos azcares con un grupo carbonilo libre son llamados azcares reductores y aquellos en los que el grupo carbonilo se encuentra combinado en unin glicosdica se conocen como azcares no reductores. Existen varias reacciones qumicas que permiten determinar si est en presencia de un azcar reductor o no. La prueba de Benedict es una de ellas y se basa precisamente en la reaccin o no de un azcar con el in Cu 2+ ( 1 ). El cobre II en solucin acuosa, de color azul, se reduce a cobre I, el cual precipita como oxido de cobre I, de color rojo (Herrera C, 2003).
La sacarosa (azcar comn azcar de caa) es un disacrido no reductor formado por una glucosa y una fructosa. Es soluble en agua y ligeramente soluble en alcohol y ter. Cristaliza en forma de agujas largas y delgadas siendo dextrgira. Por hidrlisis (separacin por medio de agua ya que se necesita una molcula de agua para que queden completos ambos monosacridos) rinde una mezcla de glucosa y fructosa, que resulta levgira, por lo que esta mezcla se conoce como "azcar invertido.
Los polisacridos son monosacridos unidos entre s por uniones glucosdicas en largas cadenas. Pueden o no tener el mismo tipo de monosacrido como eslabn en esas cadenas. Los principales son: almidn, celulosa y glucgeno ( 2 ). Para determinar la presencia de almidn en los alimentos se realiza la prueba de Lugol. El almidn reacciona qumicamente con yodo para producir un color azul oscuro. Si el almidn se rompe en maltosa y glucosa, no se desarrolla ningn color. Esta ausencia de color es asociada con la hidrlisis del almidn. Cuando el almidn es hidrolizado por la accin de exoenzimas amilasas, se degrada a maltosa y glucosa. (Alarcn.L, 2004).
2.0 Objetivos
2.1 Objetivo general:
Aplicar mtodos especficos para determinar ciertas propiedades en distintas muestras de carbohidratos y alimentos.
2.2 Objetivos especficos:
Determinar mediante la prueba de Benedict y la prueba del yodo, la presencia de azcares reductores y almidn respectivamente, en distintas muestras de monosacridos, disacridos, polisacridos y en alimentos en diferentes estados de madurez y de composicin.
Establecer la importancia de la hidrlisis en la tcnica de determinacin de azcares reductores.
Facilitar el estudio de los anlisis mediante el uso de tablas comparativas.
3.0 Materiales y mtodos
3.1 Materiales
Muestras
- Fructosa - Mermelada A - Bebida A - Lactosa - Mermelada B - Bebida B - Sucrosa - Limn A - Cerveza - Galactosa - Limn C - Chirimoya - Arabinosa - Kiwi A - Pltano A - Maltosa - Kiwi B - Pltano C - Almidn - Mandarina A - Maltodextrina A - Mandarina B - Maltodextrina B - Arroz - Glucosa - Harina
Reactivos
- Sulfato de Cobre Hidratado - Citrato Trisdico - Carbonato de Sodio - Hidrxido de Sodio 5 y 0.5 N - Solucin HCL 5 y 0.5 N - Solucin de Amilasa 1% - Solucin de Lugol
Equipos
- Plancha Calefactora - Balanza Analtica
Otros materiales
- Tubos de ensayo - Gradilla - Gotarios - Vaso precipitado - Cpsulas de Petri - Esptula Metlica - Lentes de seguridad
3.2 Mtodos Prueba de Benedict: Utilizando el reactivo de Benedict, se procedi a determinar la presencia de azcares reductores de diferentes muestras. El reactivo de Benedict est compuesto de Sulfato de Cobre, Carbonato de Sodio y Citrato de Sodio (pH 10,5), ste se reduce en presencia de azcares reductores y estos ltimos se oxidan, si se aplica calor. Para realizar tal procedimiento se agreg en un tubo de ensayo 2.0 mL de solucin A con 0,5 mL de solucin B, aadiendo adems con gotario 0,5 mL de solucin de carbohidratos preparada al 1%, a continuacin se sumergi el tubo de ensayo en agua hirviendo por 5 minutos, para establecer finalmente un parmetro del tipo de azcar examinada, en relacin al color originado de la reaccin, siendo ladrillo si es alta concentracin de azcar reductor, verde medianamente y azul baja. Hidrlisis de los azcares: Se utiliz para hidrolizar 2 muestras de sacarosa y comprobar el poder reductor de los monosacridos que la componen, (glucosa, y fructuosa). Para llevar a cabo tal procedimiento, para la primera muestra, en un tubo de ensayo se aadi 0,5 mL de sacarosa y 10 gotas de cido clorhdrico (5N), luego se coloc la solucin a bao mara durante unos 5 minutos y luego se dej enfriar, a continuacin se aadi 10 gotas de NaOH (5N) para neutralizar el cido. Para la segunda muestra se realiz exactamente lo mismo, pero con cido clorhdrico y NaOH 0,5 N. Posteriormente, ambas muestras fueron analizadas con el test de Benedict, y se observa lo ocurrido. Hidrlisis del Almidn: Se utiliz para comprobar si el Almidn posee o no poder reductor, utilizando el test de Benedict. Primero, se aadi en un tubo de ensayo 0,5 mL de la solucin de Almidn, 2 mL de solucin A, y 0,5 mL de solucin B. luego se coloc a bao mara por 5 min.
Para hidrolizar el Almidn, se aadi 0,5 mL de solucin de almidn y 0,5 mL de solucin de alfa amilasa al 1% y se deja transcurrir la reaccin por 10 min, posteriormente se analiza con la prueba de Benedict. Anlisis del Almidn: Utilizando Lugol, (o prueba de Yodo), se le aadi a diferentes muestras en un tubo de ensayo 2 gotas, observando el cambio de color, el que puede ser caf oscuro o amarillo transparente, este parmetro finalmente permitir establecer la presencia o ausencia de Almidn en las muestras analizadas.
4.0 Resultados y discusiones
4.1 Resultados
En la tabla 1, se observan los resultados de las muestras examinadas, tanto con la prueba de Benedict como la del yodo.
Tabla1. Resultados para el test de Azucares reductores y Alimidn.
Test de Benedict
Test del yodo Tubo Muestra Desarrollo del color Color final despus del calentamiento Desarrollo del color
1 Control negativo para Benedict (agua) Azul Azul 2 Control positivo para Benedict (Glucosa) Azul verdoso Rojo ladrillo Con formacin de precipitado del mismo color
3 Control negativo para yodo (agua) Caf claro 4 Control positivo para yodo (almidn) Caf oscuro
Mono y Oligosacridos
5 Glucosa Caf claro
6 Fructosa Azul verdoso Rojo ladrillo intensidad +++ Con formacin de precipitado del mismo color Caf claro 7 Lactosa Azul verdoso Rojo ladrillo intensidad ++ Con formacin de precipitado del mismo color Caf claro 8 Sucrosa Azul Azul Caf claro 9 Sucrosa HCL 0,5N Rojo ladrillo intensidad ++ Con formacin de precipitado del mismo color
10 Sucrosa HCL 5N Rojo ladrillo intensidad +++ Con formacin de precipitado del mismo color
11 Galactosa prpura Rojo ladrillo intensidad ++ Con formacin de precipitado del mismo color Caf claro 12 Arabinosa prpura Rojo ladrillo intensidad ++ Con formacin de precipitado del mismo color Caf claro
Test de Benedict Test del yodo Tubo Muestra Desarrollo del color Color final despus del calentamiento Desarrollo del color Polisacridos
13 Maltosa prpura Rojo ladrillo intensidad ++ Con formacin de precipitado del mismo color Caf claro 14 Almidn Azul Azul 15 Almidn H Azul Amarillo turbio 16 Maltodextrina A (36DE) Azul verdoso Rojo ladrillo intensidad + Con formacin de precipitado del mismo color Burdeo intensidad + 17 Maltodextrina B (250DE) Azul verdoso Rojo ladrillo intensidad + Con formacin de precipitado del mismo color Burdeo intensidad ++ Muestras
18 Muestra 1 Bebida A Azul Rojo ladrillo intensidad + Con formacin de precipitado del mismo color Caf claro intensidad ++ 19 Muestra 2 Bebida B Azul Azul Caf claro intensidad + 20 Muestra 3 Cerveza Azul verdoso Amarillo verdoso
Caf turbio Alimentos
21 Kiwi A Anaranjado intensidad ++ Con formacin de precipitado del mismo color Caf claro Con formacin de precipitado rojo 22 Kiwi B Anaranjado intensidad + Con formacin de precipitado del mismo color Amarillo turbio Con formacin de precipitado 23 Arroz Verde-amarillo intensidad + Con formacin de precipitado del mismo color negro transparente Con formacin de precipitado 24 Harina Azul negro intenso Con formacin de precipitado 25 Chirimoya Azul verdoso Con formacin de precipitado rojo Amarillo transparente Con formacin de precipitado negro 26 Mandarina A Amarillo intensidad +++ Con formacin de precipitado del mismo color Anaranjado intensidad ++ Con formacin de precipitado del mismo color 27 Mandarina B Amarillo intensidad + Con formacin de precipitado del mismo color Amarillo intensidad + Con formacin de precipitado del mismo color
Test de Benedict Test del yodo Tubo Muestra Desarrollo del color Color final despus del calentamiento Desarrollo del color 28 Mermelada A Rojo azulado Con formacin de precipitado rojo Anaranjado Con formacin de precipitado del mismo color 29 Mermelada B Rojo ladrillo ++ Con formacin de precipitado del mismo color Anaranjado oscuro Con formacin de precipitado del mismo color
30 Pltano A Azul verdoso Con formacin de precipitado rojo Amarillo claro 31 Pltano C Azul verdoso Con formacin de precipitado rojo Caf Con formacin de precipitado del mismo color 32 Limn A Verde limn Con formacin de precipitado anaranjado Anaranjado turbio intensidad + 32 Limn C Verde oscuro Con formacin de precipitado anaranjado Anaranjado oscuro turbio intensidad ++
En la tabla 2, se destaca el resultado del carcter observado en las diferentes muestras de carbohidratos y alimentos, evaluados por los test de Benedict .
Tabla 2. Carcter reductor y no reductor de distintas muestras analizadas.
Muestras Carcter reductor Carcter no reductor Mono- Disacridos Glucosa X Fructosa X Lactosa X Sucrosa X Galactosa X Arabinosa X Maltosa X Polisacridos Almidn X Almidn H X Maltodextrina A (36 DE) X Maltodextrina B (250 DE) X Alimentos Kiwi A X Kiwi B X Arroz X Harina X Chirimoya X Mandarina A X Mandarina B X Mermelada A X Mermelada B X Pltano A X Pltano C X Limn A X Limn C X Bebida A X Bebida B X Cerveza X
4.2 Discusiones.
4.2.1 Evaluacin de los tipos de azcares, reductores o no reductores de muestras de diferentes carbohidratos, (Test de Benedict): En el test de Benedict, los carbohidratos examinados tienen distintos tipos de reaccin frente a tal reactivo, ya sea reflejando el color al principio del calentamiento expuestos a pocos segundos, o bien reflejando el color despus del calentamiento, mediante precipitado. Esto se debe a que al ser sometidas las muestras a calentamiento a bao mara por 5 min, (aunque despus se deja enfriar a T ambiente), se favorece a que las cadenas de los carbohidratos examinados se abrieran, exponiendo an ms sus grupos OH y en consecuencia un test de Benedict ms notorio y eficiente en relacin al cambio de color reflejado. Utilizando el test de Benedict, todos los monosacridos utilizados reflejaron un color rojo ladrillo intenso con precipitado, esto se debe principalmente a que todos los monosacridos son reductores, ya que tienen expuesto el grupo hidroxilo del carbono anomrico. Se considera una prueba positiva de azcar reductor si se forma un precipitado de azcar de color rojo, caf o amarillo. Si no hay precipitado la prueba es negativa, aunque cambie de color (Anderson, 2004). En el caso de los oligosacridos, la lactosa y maltosa tambin reaccionaron positivamente al test de Benedict, aunque de una manera ms lenta al inicio del calentamiento y con menor intensidad, no obstante finalmente de igual forma se obtuvo un color rojo ladrillo con precipitado; esto tambin se debe a que poseen expuestos el grupo hidroxilo del carbono anomrico de uno de los 2 monosacridos que las componen, (en ambos casos glucosa). El efecto de ser una molcula ms grande influye en la intensidad de la reaccin, debido a que el poder reductor disminuye mientras ms larga es la cadena.
La sucrosa es el azcar no reductor ms comn. La unin que se da entre la fructosa y la glucosa para formar sucrosa incluye a los grupos aldehdos y cetnicos de forma que el azcar no puede actuar como donante de electrones y que, por tanto, no puede actuar como agente reductor. (Agustn, 2000) Por lo tanto y pese a estar sometida al igual a calentamiento, su reaccin fue negativa y el color que origina frente a la reaccin con el reactivo de Benedict es Azul. Para los Polisacridos, el almidn tambin reflej un color azul, respecto del test de Benedict, debido a que es un azcar no reductor, pese a poseer un OH libre del carbono anomrico de la ltima glucosa que lo compone, no obstante el gran nmero de monosacridos hace que ese efecto sea nulo o casi nulo sobre la molcula de Almidn. Para el caso de las Maltodextrinas, ambas presentaron una reaccin con el reactivo de benedict, siendo la A, la que present un color ms intenso, como rojo ladrillo, (pero menos intenso que los mono y oligosacridos), en desmedro de la B que present un color rojo ladrillo ms claro. Este efecto, se debe a que la maltodextrina A es de cadena ms corta, (DE mayor), por lo que el efecto reductor de la ltima glucosa es mayor, en desmedro de la B que posee una cadena ms larga, (DE menor); en consecuencia el efecto reductor de la ltima glucosa se ve disminuido y su vez el efecto reductor de la maltodextrina B. Las Maltodextrinas se clasifican por su Equivalente de Dextrosa (DE), que es una medida del poder reductor, 100 corresponde a la dextrosa. Cuanto mayor sea el DE mayor la capacidad de despolimerizar al almidn y menor el tamao del polmero. Las maltodextrinas son aquellos polmeros con DE de 6 a 19. ( 3 )
4.2.2 Evaluacin de los tipos de azcares, reductores o no reductores de muestras de Alimentos, (Test de Benedict): En el caso de las mermeladas ambas tuvieron una distinta reaccin cuando fueron sometidas al test de Benedict. Esto pudo deberse a que el contenido de azcares reductores era distinto, siendo mayor el contenido en la de tipo B, por lo que se asume que sta ltima podra ser una mermelada normal de X sabor. De esta misma manera, se puede decir tambin que la mermelada de tipo A podra ser Light, por lo que el contenido de azcares disponibles es menor y a su vez el de azucares reductores como fructuosa, glucosa, etc. Las bebidas analizadas fueron 3, A, B y C, (cerveza), las muestras A y B a simple vista eran exactamente idnticas, pero el resultado frente al test de Benedict fue distinto. Mientras que en la de tipo A la reaccin reflej un color rojo ladrillo con precipitado, la de tipo B dio un color azul. Este efecto se cree que es porque la muestra A era bebida normal fabricada a base de jarabe de fructuosa, por lo que su reaccin con el reactivo de Benedict sera alta, lo que se refleja en el color. Por su parte se puede deducir que la Muestra B, la bebida no contiene azcares reductores, pudiendo ser cero azcar. La cerveza por su parte, obtuvo un color verde con precipitado amarillo, lo que indica que en la muestra analizada la presencia de azcares reductores era medianamente escasa, a base principalmente de maltosa. La chirimoya, presento un color azul verdoso con precipitado, de lo que se deduce que el contenido de azcares reductores no era elevado en la muestra analizada, sin embargo la chirimoya posee normalmente un alto contenido de azcares reductores como fructuosa y glucosa. De esto se puede concluir que se podra haber debido a que no estaba la chirimoya lo suficientemente madura. Los carbohidratos de las frutas estn en forma de azcares de fruta llamados fructosa y glucosa, debido a estos azcares, la prueba del test es positiva. A
medida que las frutas maduran, la concentracin de azcar aumenta. (Ferrantelli, 2005) El kiwi, posee habitualmente escaso contenido de azcar, lo que se refleja en su moderado aporte calrico; sin embargo el resultado del test de benedict reflej un color ladrillo claro lo que indica una medianamente alta presencia de azcares reductores; de lo que se puede especular que los kiwis estaban altamente maduros. Para el limn, el color originado del test de Benedict, fue similar en el sentido de que ambos dieron un color verde con precipitado caf, pese a que uno fue ms turbio que el otro. El contenido de azcar reductor en el limn es mnimo y la diferencia leve que se reflej entre ambas muestras se podra haber debido a que un limn estaba ms maduro que el otro. Anlogamente, ocurre lo mismo con la mandarina, diferencindose solamente en la intensidad del color, por lo que la mandarina A estaba ms madura que la B. En el pltano, el test de Benedict, indic que su contenido de azcares reductores es medianamente escaso, no obstante la intensidad del color originado, nuevamente y como los casos de las anteriores frutas mencionadas, se debe a que un pltano, estaba ms maduro que el otro, por lo tanto en el color reflejado ms verde turbio, la muestra tena ms contenido de azcares reductores. La harina, se constituye principalmente a base del almidn y como se mencion anteriormente, ste ltimo no posee efecto reductor, reflejando un color azul, con un leve precipitado amarillo en la prueba de Benedict. El precipitado se debi exclusivamente al calor aplicado, el que podra haber liberado algunas subunidades de glucosa. Sin embargo el color azul mayoritario era de esperarse. El arroz, pese a que posee almidn como uno de sus componentes, el efecto del calor aplicado implica una hidrlisis de algunas molculas de glucosas y maltosas; de esta manera se explica que el color observado no fuera azul y si un color
amarillo verdoso con precipitado, asociado a la escasa presencia de azcares reductores. 4.2.3 Anlisis de Hidrlisis de Azcares (sacarosa).
La sacarosa es un disacrido que no posee carbonos anomricos libres por lo que carece de poder reductor y la reaccin en la prueba de Benedict es negativa, tal y como ha quedado demostrado en la figura 2. Sin embargo, en presencia de HCl y en caliente, la sacarosa se hidroliza, es decir, incorpora una molcula de agua y se descompone en los monosacridos que la forman, glucosa y fructosa, que s son reductores ( 4 ).
Es por ello que previo a la aplicacin del cido clorhdrico se observa que no hay presencia de azcares reductores, pero al agregar el cido, la sacarosa se hidroliza, formando el precipitado que indica la presencia de los azcares reductores, glucosa y fructosa, Como se puede observar en la Figura 1. Por lo tanto su respuesta frente al test de Benedict, es positiva.
Figura 1. Hidrlisis de la sacarosa. ( 5 )
4.2.4 Evaluacin de la hidrlisis del almidn:
Esta prctica tiene como objetivo demostrar que efectivamente los polisacridos como el almidn estn compuestos de monosacridos unidos por enlaces glicosdicos. El almidn est constituido de un solo monosacrido, la glucosa. Las propiedades del almidn son diferentes a las de la glucosa como se evidencia mediante la hidrlisis del almidn para generar glucosa.
Para el primer caso, el tubo que present coloracin azul sin cambio alguno muestra claramente que la reaccin es negativa por lo que el almidn no tiene carcter reductor. Sin embrago, para el segundo caso al agregar alfa-amilasa el cambio de color evidencia que existe el carcter reductor en esas condiciones.
Hoy en da la mayor parte de la hidrlisis de almidn se realiza usando enzimas, ya que esta tcnica presenta ventajas como: control de la formacin de productos no deseables y mayor flexibilidad del producto. La alfa-amilasa (Alfa 1,4-D- Glucan Glucano-hidrolasa) hidroliza los enlaces glucosdicos alfa-1,4 de los polisacridos que poseen 3 o ms unidades de D-glucosa en unin alfa-1,4. El ataque se hace en forma no selectiva (tipo endoenzima) sobre varios puntos de la cadena simultneamente, aunque los primeros productos de la hidrlisis son siempre oligosacridos de 5-7 unidades de glucosa ( 6 ). Por lo tanto la segunda prueba se puede decir que es positiva ya que se logr separar las unidades de glucosa de la muestra de almidn.
4.2.5 Anlisis del almidn, (Test de Yodo o Lugol):
La prueba de yodo se usa para detectar almidn. Almidn no es realmente un polisacrido, sino la mezcla de dos, la amilosa y la amilopectina. Ambos estn formados por unidades de glucosa, en el caso de la amilosa unidas entre ellas por enlaces 1-4 lo que da lugar a una cadena lineal. En el caso de la amilopectina, aparecen ramificaciones debidas a El yodo
reacciona con la amilosa y genera un fuerte color azul caracterstico debido al complejo que se establece entre una molcula de ste con cada 7-8 glucosas; como para desarrollar perfectamente la coloracin se requiere un mnimo de 40 residuos de monosacridos. Las cadenas muy cortas de amilosa, en lugar de azul, producen un color rojo.
Aparentemente, el complejo amilosa-yodo se establece por la inclusin del I 2 en la hlice. Por otra parte, la amilopectina slo acompleja una pequea cantidad de I 2 y desarrolla una coloracin roja. (Badui, 1990). Como se observa en la tabla 1, el test del yodo da positivo para las muestras de maltodextrinas A y B, cerveza, arroz y harina, es decir, presentan almidn.
Para el caso de las maltodextrinas A y B, el color de las maltodextrina B es mucho ms oscuro e intenso que el de las A, debido a que la primera posee una cadena de almidn ms larga, por lo que el complejo que se forma en la hlice de la amilosa es ms estable e intenso, en desmedro de la maltodextrina A que posee una cadena de almidn ms corta. Por su parte, la cerveza present un color de menor intensidad, que se debi principalmente a la maltosa que sta posee, la cual presenta cadenas ms cortas.
En el caso del arroz, debido a su composicin en carbohidratos principalmente a base de almidn, el resultado en el test del yodo origin un color negro, que indica claramente que la prueba fue positiva. Del mismo modo, la harina tambin reaccion de manera positiva al test del yodo ya que tambin posee almidn en su composicin.
El resto de las muestras analizadas, reflejaron un anlisis negativo frente al test del yodo, debido a que no presentan almidn en su composicin. (Vase anexo 1).
5.0 Conclusiones
Mediante los mtodos especficos, fue posible determinar propiedades que poseen los carbohidratos, como lo es su capacidad de actuar como agente reductor. Del mismo modo, se logr determinar la presencia o ausencia de este tipo de azcar en distintas muestras de alimentos. Tambin se logr establecer si las distintas muestras analizadas estaban constituidas por almidn.
Cabe destacar que con los resultados de la prueba de Benedict y la prueba del Lugol, se puede conocer el contenido de azcares reductores con el primero y en contraste, conocer la presencia de almidones con el segundo.
La importancia de aplicar la hidrlisis, es que permiti la determinacin de azcares reductores en aquellas muestras que de manera natural no estn presentes como es el caso de la sacarosa y el almidn.
La informacin expresada de manera ordenada, permiti tener una nocin amplia acerca de los resultados de las pruebas realizadas, contribuyendo a una rpida comparacin entre las distintas muestras de carbohidratos y alimentos.
6.0 Bibliografa
6.1 Libros *Agustn D. 2000. Diccionario de Ciencias. Complutense, 1126 pg. *Alarcn L. 2004. Manual de prcticas de microbiologa bsica y microbiologa de alimentos. UACJ. Mxico.106 pg. *Anderson F. & P.N. Martinez. 2004. Experimentos de qumica orgnica. 1 edicin, *Badui, S. 1990. Qumica de los Alimentos. Editorial Alhambra Mexicana. 2 edicin. Mxico. 206 pg. Editorial Elizcom. Colombia.195 pg. *CIT, 1994. Informacin tecnolgica. Vol. 5. N1. Chile. *Ferrantelli, 2005. Enciclopedia prctica de las medicinas alternativas. LEA. Argentina. 399 pg. *Herrera C.H, N. Bolaos & G. Luts. 2003. Qumica de los alimentos, Manual de laboratorio. 1ra edicin. Editorial de la Universidad de Costa Rica Ciudad Universitaria. Costa Rica. 123 pg.
Figura 2. Prueba de Benedict para distintas muestras de carbohidratos. Figura 3. Prueba del Lugol para distintas muestras de carbohidratos. Figura 4. Prueba del Benedict para distintas muestras de Alimentos. Figura 5. Prueba del Lugol para distintas muestras de Alimentos.