Practica No.

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Uso y manejo del microscopio
Cuestionario Previo

1. Describe la funcin que desempea cada una de las partes del microscopio ptico.

PIE: Sirve como base del microscopio y tiene un peso suficiente para dar estabilidad al aparato.
En los microscopios antiguos tena forma de herradura o de trpode pero en la actualidad suele ser
una plataforma rectangular. En l se integra la fuente luminosa.
BRAZO: Es una columna perpendicular al pie. Puede ser arqueado o vertical y une al pie con el
tubo.
TUBO: Es una cmara oscura unida al brazo mediante una cremallera. Tiene el revolver con los
objetivos en su parte inferior y los oculares en el extremo superior.
PLATINA: Es una plataforma horizontal con un orificio central, sobre el que se coloca la
preparacin, que permite el paso de los rayos procedentes de la fuente de iluminacin situada por
debajo. Dos pinzas sirven para retener el portaobjetos sobre la platina y un sistema de cremallera
guiado por dos tornillos de desplazamiento permite mover la preparacin de delante hacia atrs o
de izquierda a derecha y viceversa. En la parte posterior de uno de los laterales se encuentra un
nonius que permite fijar las coordenadas de cualquier campo ptico; de esta forma se puede
acudir a el cuando interesa.
REVOLVER: Es un sistema que coge los objetivos, y que rueda para utilizar un objetivo u otro.
TORNILLOS MACRO Y MICROMTRICO: Son tornillos de enfoque, mueven la platina hacia
arriba y hacia abajo. El macromtrico lo hace de forma rpida y el micromtrico de forma lenta.
Llevan incorporado un mando de bloqueo que fija la platina a una determinada altura.
FUENTE DE ILUMINACIN: Se trata de una lmpara halgena de intensidad graduable. Esta
situada en el pie del microscopio. Se enciende y se apaga con un interruptor y en su superficie
externa puede tener una especie de anillo para colocar filtros que facilitan la visualizacin.
CONDENSADOR Y DIAFRAGMA: El condensador es un sistema de lentes situadas bajo la
platina su funcin es la de concentrar la luz generada por la fuente de iluminacin hacia la
preparacin. En el interior del condensador existe un diafragma (iris) cuya funcin es limitar el haz
de rayos que atraviesa el sistema de lentes eliminando los rayos demasiado desviados (regula la
cantidad de luz y ajusta la Apertura Numrica).
OCULARES: Estn colocados en la parte superior del tubo. Se denominan as, porque estn muy
cercanos al ojo. Su funcin es la de captar y ampliar la imagen formada en en los objetivos. En los
modernos microscopios hay dos oculares (microscopios binoculares) que estn unidos
mediante un mecanismo que permite ajustar la distancia interpupilar. En general los mas
utilizados son los de 10X ( producen un aumento de 10 veces ).
OBJETIVOS: Estn colocados en la parte inferior del tubo insertados en una pieza metlica,
denominada revolver, que permite cambiarlos fcilmente. Generan una imagen real, invertida y
aumentada. Los mas frecuentes son los de 4, 10, 40, y 100 aumentos. Este ltimo se llama de
inmersin ya que para su utilizacin se necesita utilizar aceite de cedro sobre la preparacin. En la
superficie de cada objetivo se indican sus caractersticas principales, aumento, apertura numrica,
y llevan dibujado un anillo coloreado que indica el nmero de aumentos (rojo 4X, amarillo 10X,
azul 40X y blanco 100X).

2. Describe Qu tipo de microscopios existen, en que se fundamenta cada uno de ellos y
cul es su utilidad?

Microscopios pticos Compuestos

Microscopio de campo claro: Es el microscopio ms comnmente usado, consiste en dos
sistemas de lentes, el objetivo y el ocular, montados en extremos opuestos de un tubo cerrado. El
objetivo est compuesto de varias lentes que crean una imagen real aumentada del objeto
examinado. Las lentes de los microscopios estn dispuestas de forma que el objetivo se encuentra
en el punto focal del ocular. El aumento total del microscopio depende de las longitudes focales de
los dos sistemas de lentes. La muestra que se va a observar debe ser teida con algn colorante
que permita hacerla destacar sobre el fondo claro o brillante que proviene de la fuente luminosa.

Utilidad: Su utilidad reside en su capacidad de magnificacin y de la capacidad de resolver detalles
estructurales

Microscopio de campo oscuro: requiere el empleo de un condensador especial que impide que
la luz llegue directamente al objetivo y hace llegar la luz a la preparacin en forma de un cono
concentrado. nicamente la luz reflejada y difractada por la muestra es la que penetra en el
objetivo permitiendo ver los contornos brillantes de la muestra sobre fondo oscuro. Con la llamada
iluminacin de Rheinberg es posible realizar observaciones con fondos de color.

Utilidad: La microscopa de campo oscuro es de gran utilidad para la observacin in vivo de
microorganismos o clulas aisladas sin emplear ningn tipo de tincin.

Microscopio de contraste de fases: se basa en el retraso en la longitud de onda que pueden
producir diferentes estructuras con ndices de refraccin distintos. Mediante un sistema ptico,
estas diferencias de fase se traducen en diferencias de amplitud de onda que pueden ser
detectadas por el ojo humano como diferencias de intensidad luminosa.
El microscopio de contraste de fases requiere la utilzacin de objetivos especiales que han de
combinarse con la utilizacin de condensadores tambin especiales.

Utilidad: La utilizacin de la microscopa de contraste de fases es til para la observacin de
cultivos celulares y cortes histolgicos sin teir.

Microscopio de fluorescencia: se basa en la propiedad de algunas sustancias fluorescentes
(fluorocromos) que tienen la capacidad de absorber determinadas longitudes de onda corta y
emitir luminiscencia, es decir una radiacin luminosa de mayor longitud.
El microscopio de fluorescencia consta esencialmente de una fuente de iluminacin basada en una
lmpara de vapor; un filtro de excitacin que selecciona los rayos de luz de una franja de longitud
de onda determinada y un filtro barrera que retiene la luz de excitacin dispersada por la
preparacin y deja pasar nicamente la luz emitida por la muestra. En los microscopios de
epifluorescencia es tambin indispensable un espejo divisor dicromtico. La utilizacin de un
determinado fluorocromo exige la utilizacin de un determinado bloque constituido por un filtro de
excitacin, espejo divisor dicromtico y filtro barrera.

Utilidad: Permite detectar molculas que flourscen naturalmente. Es til en la deteccin de
anticuerpos o antgenos, tambin en procedimientos de coloracin de inmunocito qumica






Microscopios electrnicos

Microscopio electrnico de transmisin (TEM): se utiliza para ver secciones o cortes de
tejidos, dirige un haz de electrones hacia el objeto que se desea aumentar; una parte de los
electrones rebotan o son absorbidos por el objeto y otros lo atraviesan formando una imagen
aumentada de la muestra. Para utilizar un TEM debe cortarse la muestra en capas finas con un
grosor entre 50 a 200 nanmetros. Dicha muestra se coloca en una redecilla que se introduce en
el tubo con una pieza alargada que se introduce por un lateral.
Para el funcionamiento de este microscopio se utiliza un haz de electrones, obtenido desde una
lmpara especial de tungsteno. El tubo tiene vaco en su interior, para impedir que nada dificulte
el paso de los electrones. Un fallo en este vaco ocasiona la aparicin de cuerpos extraos en el
visor. Luego de ser enfocados por las lentes electromagnticas, los electrones inciden sobre la
muestra, formando la imagen que se obtiene en blanco y negro, la cual puede proyectarse sobre
una pantalla especial o pelcula fotogrfica. El TEM examina partes grandes de la muestra.

Utilidad: ste microscopio obtiene imgenes en dos dimensiones, que luego pueden ser plasmadas
en fotografas si interesa. ste es el tipo de microscopio electrnico ms utilizado en investigacin, ya
que obtiene muy buenos resultados y tiene gran potencia

Microscopio electrnico de barrido (SEM): Su funcionamiento se basa en recorrer la muestra
con un haz muy concentrado de electrones, de forma parecida al barrido de un haz de electrones
por la pantalla de una televisin. Los electrones del haz pueden dispersarse de la muestra o
provocar la aparicin de electrones secundarios, ambos son recogidos y contados por un
dispositivo electrnico situado a los lados de la muestra. Cada punto ledo de la muestra
corresponde a un pxel en un monitor de televisin. Cuanto mayor sea el numero de electrones
contados por el dispositivo, mayor ser el brillo del pxel en la pantalla. Como consecuencia del
barrido electrnico se genera una imagen con apariencia tridimensional, que permite estimar
parmetros celulares como tamao y forma, dndole ventajas en este sentido sobre el TEM. Las
desventajas del SEM es su menor capacidad de aumento ya que slo puede a unas 100000 veces
y tambin tiene una resolucin 1000 veces menor que el TEM. Eso y que slo permite ver el
exterior de la muestra.

Utilidad: Este permite la observacin de superficies sin la necesidad de realizar cortes
microscpicos, explorando la superficie de la imagen punto por punto.

3. Qu es el poder de resolucin?
El poder de resolucin de una lente es su capacidad para presentar distintos y separados dos
puntos que se encuentran adyacentes

4. Qu es apertura numrica?
En ptica, la apertura numrica (AN) de un sistema ptico es un nmero a dimensional que
caracteriza el rango de ngulos para los cuales el sistema acepta luz. Recprocamente, tambin
est relacionado con el ngulo de salida del sistema. La definicin exacta del trmino vara segn
diferentes reas de la ptica.
5. Por qu se usa aceite de inmersin y que tipo aceite se usa?
Se usa cuando se tienen aperturas numricas mayores a 1 y porque ayudan a disminuir el ndice
de refraccin de la luz.

6. Menciona los diferentes tipos de microscopios que existen


7. Menciona la diferencia entre refraccin y difraccin

Refraccin. Cambio de direccin de propagacin de la luz, que se produce cuando sta pasa de
un medio a otro de diferente densidad (o diferente ndice de refraccin).

Difraccin: Desviacin de las ondas producida por el borde de un obstculo o una apertura.